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~a pr~sente invention a pour objet un procédé de
préparation d'un nouveau dérivé aminoglycosidique, à savoir la
4-0-~ 2',6'-diamino 2'~3'~6'-tridésoxy a,D-ribohexopyranosy ~ 6-0-
3"-méthylamino 3",4",6"-tridésoxy a,D-xylohexopyranosy~
2-désoxystreptamine de formule:
CH2NH2 NH2
NH2 CH3 0 (I~
~ H
<¦ 3~ _ ~ .
OH
.. .
ainsi que de ses sels d'addition avec les acides minéraux ou
organiques pharmaceutiquement acceptables.
De tels sels peuvent être par exemple un chlorhydrate~
un bromhydrate, un nitrate, un sulfate? un phosphate, un acétate,
u~ formiate, un benzoate, un mal~ate, un fumarate, un succinate~
un tartrate, un citrate, un oxalate, un benzylate, un glyoxylate,
un aspartate, un alcanesulfonate ou un arylsulfonate.
~ e produit de formule I et ses sels d'addition pharma-
ceutiquement acceptables, possèdent une très intéressante activité
antibiotique, dtune part sur les bactéries gram~ telles que les
Staphylocoques, les Streptocoques et not~mment les Staphylocoques
pénicillino-résistants, et d'autre part, sur les bactéries gram-
et notammènt sur les bactéries coliformesO
Ces propriétés rendent aptes le produit de formule I,
ainsi que ses sels thérapeutiquement compatibles, à être utilisés
à titre de médicaments notamment dans le traitement des Staphy-
lococcies telles que septicémies à staphylocoques, staphylococcies
- 1 - ~
1046Q58
malignes de la face~ staphylococcies cutanées, pyodernites, plaies
septiques et suppurantes, anthrax, phlegmons, érésypèles, sta-
phylococcies aigu~s primitives ou post-grippales, bronchopneu-
monies, suppurations pulmonaires et collibacilloses. Ces
produits peuvent être utilisés par voie parentérale~ buccale,
rectale ou par voie locale en application topique sur la peau
ou les muqueuses.
Ils peuvent être présentés par exemple sous forme de
solutions ou de suspensions injectables, de poudres stériles pour
préparations injectables extemporanées, de comprimés, de comprimés
enrobés, de capsules, de sirops, de suppositoires, de crèmes, de
pommades et de préparations en aérosols. Ces formes pharmaceuti-
ques sont préparées selon les procédés classiques. La dose usuel-
le, variable selon le produit utilisé, le sujet traité et l'affec-
tion en cause, peut être par exemple de 100 mg à 1 g par jour
chez l~homme par voie parentérale.
~ e produit de formule I, ainsi que ses sels thérapeu-
tiquement compatibles peuvent etre emplo~és pour préparer des
compositions pharmaceutiques renfermant, à titre de principe
actif, l~un au moins desdits produits.
~ e procédé de préparation du produit de formule I, telle
que définie ci-dessus, et de ses sels dladdition avec les acides
minérau~ ou org~niques, est caractérisé en ce que l~on fait
réagir le produit de formule:
NHC02CH3
CH2NHC0 2CH3 ¦
H0~ - ~ 0 ~ HC02CH3
~ECo2cx3 ~ (II)
1046~58
avec le chlorure de tosyle, en présence d'une base organique,
pour obtenir le produit de formule:
CH2NHC02CH3 NHC02CH3
~ O~H H ~ NHC02CH3
H ~ ~ (III)
NHC02CH3
que l~on traite par un ioduré alcalin pour obtenir le produit
de formule:
CH2NHC0 2CH3 NHC02CH3
H ~ ~ ~ HC02CH3
I ~HC02CH3 ~ (IY)
que l~on traite par l'hydrogène en présence d~un catalyseur
pour obtenir le produit de formule:
qH2~HC02CH3 ~HC02CH3
O~H- H ~ NHCO~CH3
~0 ~( ,.
\ ~ (V)
NHC02CH3 ~
~J .
1046058
que l'on traite par l'anhydride acétique en présence d'une
base organique pour obtenir le produit de formule:
CH2NHC02CH NHC02CH3
~ 3 H~HC02CH3
CH3C00~ \~ (VI)
~HCO 2CH3 J,~
que l'on fait réagir avec un agent acide pour obtenir le pro-
duit de formule:
CH2NHC0 2CH3 ~HCO 2CH3
/Lo H H~HCO 2CH3
CH3COJ~-- O J ~a~ (VII )
~HCO 2CH3 OH
que l'on fait réagir sur le produit de formule:
CH
~ (VIII)
OCH2C6H5
en présence d~un catalyseur pour obtenir le produit de con-
densation correspondant sous forme d'un mélange atanomères
a et ~ de formules:
~ 4 -
~ " 10460S8
CH2NHC02CH3 NHC02CH3
CH3C00 ~ ~ ~ NC02CN3
NHC02CH3 ~ o H o (IX)
~L I
OCH2C6H5
et
NHC02CH
~H2NHco2cH I 3
~o 3 ~HC02CH3
CH3COO `
HC02CH3 ~ O (IX~)
~11
CH2c 6H5
mélange que l'on traite par l~hydrogane en présence d!~un cataly-
seur et dont on libère les fonctions aminées et la fonction hydro-
xyle estérifiée par traitement en milieu alcalin pour obtenir le
mélange des produits de formules:
CH2NH2 NH2
NH2 CH3 ~I)
OH
- 5 -
`` 1046058
et ~H2NH2 NH2
~ O H H ~ H2
H~ 0 1~
~H2 CH3
~Lo,l (X)
H
OH
mélange dont on sépare le produit de formule I cherché, produit
de formule I que l'on salifie le ca~ échéant par action d'un t
acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable.
Dans la réalisation du procédé ci-dessus décrit, les
opérations dlhydrogénolyse et d'hydrolyse permettant de passer
des produits IX et IX' aux produits I et X, peuvent Aetre effec-
tuées en commençant soit par l'hydrogénolyse, soit par l'hydrolyse.
Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre
du procéd~ énoncé ci-des~us, on opère comme suit: la base orga-
nique en présence de laquelle on fait réagir le chlorure de
tosyle sur le produit de formule II est de préférence la pyri-
dine, mais on peut également employer par exemple une lutidine
ou la collidine; l'iodure alcalin que l'on utilise pour traiter
le produit de formule III eet choisi parmi les iodures de sodium
ou de potassium; le catalyseur que l'on utilise pour traiter
par l'hydrogène le produit de formule IV est de préf~rence le
nickel'de Raney, mais on peut également utiliser~ par exemple,
le palladium, des sels de palladium ou des dérivés du platine;
la base organique en présence de laquelle on fait réagir l'an-
hydride acétique sur le produit de formule V est de pré~érence
la pyridine, mai~ on peut également utiliser par exemple une
lutidine ou la collidine; l'agent acide que l'on utilise pour
traiter le produit de formule VI est de préférence l'acide
; - 6 -
--```' 10460S8
acétique aqueux, mais on peut également utiliser d'autres acides
organiques tels que par exemple l'acide formique ou l'acide
oxalique ou des acides minéraux aqueux tels que par exemple
l'acide chlorhydrique ou l'acide sulfurique.
~ a condensation entre les produits de formule VII et
VIII est une réaction du type habituellement désigné sous le nom
de réaction de EOENI~S-KNORR; elle est donc réalisée en présence
dlun catalyseur qui est avantageusement constitué par du
cyanure mercurique, mais on peut également utiliser un autre
sel de mercure, un sel d'argent ou de cadmium ou une ~m;ne
tertiaire telle que la collidine par exemple.
Comme catalyseur d'hydrogénation pour transformer le
mélange des produits de formules IX et IX', on utilise avanta-
geusement le palladium déposé sur charbon, mais on peut également
utiliser des sels de palladium ou bien du platine, des dérivés
du platine et d'autres catalyseurs usuels tels que le rhoaium~
le ruthénium ou le nickel; l'agent alcalin que l'on utilise
ensuite pour libérer les fonctions aminées et la fonction hydro-
xyle estérifiée est avantageusement de la baryte dissoute dans
une solution hydroalcoolique, mais on peut utiliser dtautres
bases aqueuses comme, par exemple, l'hydroxyde de sodium, de
potassium ou de lithium.
~ a séparation des produits de formules I et X peut
etre réalisée par les méthodes habituelles; on utilise avanta-
geusement la chromatographie sur silice, mais on peut également
utiliser la chromatographie sur alumine, sur cellulose, sur
silicate de magnésium ou encore la cristallisation fractionnée
ou la méthode dite de séparation ~ contre-courantO On utilise
pour mener à bien de telles séparations différents solvants ou
~0 mélanges de solvants organiques purs ou aqueux.
~ a salification du produit de formule I peut ~tre
r~alisée par les méthodes usuellesO Elle peut etre obtenue par
-- 7 --
~ 046058
action sur ce produit d'acides tels que par exemple les acides
chlorhydrique, bromhydrique~ nitrique, sulfurique, phosphorique,
acétique, formique~ benzoique, maléique, fumarique, succinique,
tartrique, citrique, oxalique, benzylique, glyoxylique, asparti-
que, alcane sulfoniques et arylsulfoniques. Cette sa~ification
est réalisée de préférence dans un solvant ou un mélange de
æolvants tels que l'eau~ ltéther éthylique~ le méthanol ou
l'acétone.
~ ~e produit de formule VIII utilisé dans le procédé de
l'invention peut être préparé selon un procédé décrit dans le
brevet belge n 814 724.
Ce procédé est caractérisé en ce que l'on fait réagir
le produit de formule: ~
O H
2 5
OCOC2H5
~vec un agent alcalin à température ordinaire pour obtenir le
produit de formule:
CIH3
H
(XII)
¦ OC2H5
OH
~ue l~on traite par un halogénl~e de benzyle en présence d'un
agent alcalin pour obtenir le produit de formule:
CH3
3 ~ O\ ~
(XIII)
¦ OC2H5
CH2C 6H5
8 --
" ~046058
que l'on txaite par l'anhydride ac~tique dans l'acide acétique,
en presence d'un acide fort, pour obtenir le produit de formule:
c~3
(XIV)
OC0~H3
O CH2C 6H5
que l'on traite par de l'acide chlorhydrique anhydre en présence
de chlorure d'acétyle au sein d'un solvant organique pour obtenir
le produit cherche de formule VIII.
Le trait ondule, qui relie les substituants de l'atome
de carbone en position 1 du cycle des produits de formules VIII,
XI, XII, XIII et XIV indique que ces substituants peuvent se
trouver en position a ou ~ de ce cycle. Ces produits existent
donc sous forme d'anomère a ou ~ ou sous forme d'un mélange de
ces anomeres.
Les exemples suivants illustrent l'invention sans
toutefois la limiter.
Exemple 1: 4-0-/ 2',6'-diamino 2',3',6'-tridesoxy a,D-ribohexo-
pyranosyl_7 6-0-~ 3"-methylamino 3",4",6"-tridesoxy a,D-xylohexo-
pyranosyl 7 2-desoxy streptamine
Stade A:_ 5,6-0-cycloh_x_l_dene 3'-0-t_syl_tetra-N-carbométhoxy
_éamine:_ _
On dissout 100 g de 5,6-0-cyclohexylidene tetra-N-
carbomethoxy neamine (preparee selon J. of Antibiotics, 1971,
p. 711) dans 2 litres de pyridine. On refroidit a 0C et on
A~
~ 04~QS8
ajoute par fractions en une heure 150 g de chlorure de tosyle.
On laisse revenir à température ambiante et on agite 18 heures à
24C. On ajoute alors en trois heures, 52,5 g de formiate de
sodium. On concentre sous pression réduite et on verse le
résidu dans l'eau. On extrait au chloroforme, lave la phase
organique à l'eau et sèche sur sulfate de sodium. Après évapo-
ration du solvant et séchage sous vide à 40C, on obtient 112 g
de 5,6-0-cyclohexylidène 3'-0-tosyl tétra-N-carbométhoxy néamine
cristallisée utilisable dans le stade suivant.
Ce produit peut être recristallis~ à l'aide d'un mélan-
ge acétate dtéthyle-éther.
Chromatographie en couche mince (silice, chloroforme-méthanol
g5-5): Rf = 0,3.
Stade ~:_ 5,6 O-_ycloh_x~lid_ne 3'-desox 3~=iOao tétra-N-carbo-
méthox~ né_mine:
On mélange 393 g d'iodure de sodium et 790 ml de
diméthylfo~mamideO On chauffe à 95C et on ajoute à la solution
obtenue 76 g du produit obtenu au stade précédent. On chauffe à
103C pendant 16 heures puis, après refroidissement, on ajoute
2,5 l de chlorure de méthylèneO On essore le solide présent
que l'on rince au chlorure de méthylène. On lave le filtrat à
l'eau et évapore à sec la phase organique. On reprend le résidu
cristallin obtenu par du chlorure de méthylane, lave deux fois
la solution chlorométhylènique à l~eau et la sèche sur sulfate
de magnésium. On évapore à sec le chlorure de méthylène et on
obtient 50~2 g de 5,6-0-cyclohexylidène 3'-désoxy 3'-iodo tétra-
N-carbométhoxy néamine que l'on utilise télle quelle pour le
stade suivant.
Chromatographie en couche mince (Silice, chloroforme-méthanol
95_5): Rf - 0,4.
Stade C: 5,6-0-cyclohex~lidène ~'-desox~ tétra-~-carbom_tho3y
néamine:
- 10 -
1046Q58
On m~lange 47,7 g du produit obtenu au stade précédent,
1,5 1 de méthanol~ 95 cm3 de triéthylamine et environ 300 cm3
d'une suspension aqueuse de nickel de Raney. On fait barboter
dans le mélange précédent agité, un lent courant d'hydrogène
pendant 4 heures. On purge alors le mélange en faisant barboter
de l'azote et filtre, en rincant le produit retenu sur le filtre
avec du méthanol. On évapore le filtrat à sec~ reprend le
résidu obtenu au chlorure de méthylène, sèche sur sulfate de
magnésium et évapore ~ sec. On obtient ainsi 50 g de 5,6-0-
cyclohexylidène 3'-désoxy tétra-~-carbométhoxy né~mine quton
peut utiliser telle ~uelle pour le stade suivant.
Un échantillon chromatographié sur silice en éluant avec un mé-
lange chloroforme-méthanol (95-5) a les caractéristiques suivan-
tes:
Anal~Se: (C26H42N4013)
Calculé: C % 50,5 H ~ 6,85 ~ % 9,06
Trouvé : 50,1 6,9 8,7
/a/D = + 3 (c = 0,85 ~, chloroforme).
Chromatographie en couche mince (silice, chloroforme-méthanol
95-5) Rf = 0~25.
Stade D:_ 5,6-0-~ycl_h_x~l_d_ne 4'-acé~yl ~'=desox~ tétra-~-
carbométhoxy néamine: ~
On dissout 50 g du produit obtenu au stade précédent
dans 500 cm3 de pyridine contenant 250 cm3 d~anhydride acétique.
Au bout de 5 heures à température ambiante, on évapore à sec en
éliminant totalement les liquides présents ~ i~aide de toluèneO
On obtient ainsi 55 g de 5,6-0-cyclohexylidène 4'-acétyl 3'-désoxy
tétra-~-carbométhoxy néamine que l'on utilise telle quelle dans
le stade suivant.
ahromatographie en couche mince (Silice, chloroforme-méthanol
95-5): Rf - 0,45.
llU46Q58
Stade E:_ 4'=acétyl 3'-dés_x té_ra-N-_arbométhoxy néamine:
On dissout 55 g du produit obtenu au stade précédent
dans 500 cm3 d'acide acétique contenant 20 ~ d'eau. On chauffe
pendant 3 heures à 60C puis, après refroidissement, évapore ~
sec sous vide. ~e résidu obtenu est chromatographié sur ~ilice
en éluant avec un mélange chloroforme-méthanol (96-4). On
obtient 2~ g de 4'-acétyl 3'-désoxy tetra-N-carbométhoxy néamine,
/a/D20 =--~ 605 (c = 0,55 ~, chloroforme).
Chromatographie en couche mince (Silice~ chloroforme-méthanol
95-5): Rf = 0,30.
tade ~:_ 4-0-C 2' 6'-di-N=carbomé_h_x~ami_o_4'-0-_cétyl_2',~',
6t-tridéso~y_D-rlb _h_xop2ranosY17 6-0-C 3"-(M-_a_bét_o~y ~-méthyl)
am_no 2"-0-b_nzyl 3"l4"~6"=tridéso~y_c D-x~l_h_x~p~ranos
1~3-_imé_h~l_x~c_rbo_yl 2-désoxy_s_rep_amine.
On dissout 3,1 g de 1-o-acétyl 2-0-benzyl 3-(~-carbé-
thoxy N-méthyl) amino 3,4,6-tridésoxy D-xylohexopyranose dans
33 cm3 de dioxane contenant 10 ~ d'acide chlorhydrique gazeux
et 6,6 cm3 de chlorure d'acétyle. On agite le mélange pendant
2 heures a température ambiante et évapore sous vide. On re-
prend le résidu obtenu dans 6,6 cm3 de dioxane et on verse lasolution obtenue dans une solution à 60C de 2~2 g de 4'-acétyl
3'-désoxy tétra-N-carbométhoxy néamine dans 77 cm3 de dioxane
contenant 3,3 g de cyanure mercurique. On maintient sous agita-
tion pendant 4 heures 30 à 600e, puis ajoute à nouveau ~,3 g de
cyanure mercurique et le dérivé chloré provenant de 3,1 g de
l-O-acétyl 2-0-benzyl 3-(N-carbéthoxy N-méthyl) amino,3,4,6,-
tridésoxy D-xylohexopyranose. On agite encore pendant 17 heures
à 60C, puis évapore le dioxane. On ajoute une solution aqueuse
de bicarbonate de sodium à 45 ~ l et extrait au chloroforme.
Apras séchage de la phase organique sur sulfate de magnésium et
évaporation ~ sec, on chromatographie le résidu sur silice en
éluant avec un mélange chloroforme-acétone (7-3). 0~ obtient
- 12 -
iO46058
2~8 g de 4-0 ~ 2'~6'-di-N-carbométhoxyamino 4.'-0-acétyl 2',3',
6'-tridésoxy D-ribohexopyranosy y 6-0-~ 3"-(N-carbéthoxy ~-
méthyl) amino 2"-0-benzyl 3"~4"~6"-tridésoxy a,D-xylohexopyra-
nosyy 1~3-diméthyloxycarbonyl 2-désoxy streptamine sous forme
d'un solide blanc, /a/D = ~ 52 (c = 0,55 %, chloroforme).
Chromatographie en couche mince (Silice, chloroforme-acétone 7-3):
Rf = 0,25.
Stade G:_ 4-_-~ 2'~6'-_i_min_ 2' 3',6'-t_idéso_y_a~D-r_b_h_xo-
~yranosyy _6_0-r 3"-mé_h~lamino ~nl4ll~6"-t_idéso~y_alD-x~lo-
hexo~yranosy~_2_désox~ stre~tamine:
On dissout 4,5 g du produit obtenu selon le mode opé-
ratoire précédent dans 80 cm3 dtéthanol contenant quelques gout-
tes de chlorure de méthylène~ 0,32 cm3 d'acide chlorhydrique con-
centré et 2,7 g de palladium sur charbon ~ 10%. On agite enatmosphère d'hydrogène pendant l heure 30. On filtre le cata-
lyseur et évapore i~ sec- On chromatographie le r~sidu sur
silice en éluant avec un mélange chloroformeméthanol (95-5).
l g de produit pur obtenu, ayant en chromatographie en couche
mince avec l'éluant précédent un Rf de 0,15, est dissous dans
un mélange contenant 4 cm3 d'éthanol, 8 cm3 d'eau et 7,87 g de
baryte hydratée. On agite pendant 4 heures ~ 90-94C~ puis
refroidit et filtre le mélange réactionnel. On amène le filtrat
à pX 3 à l'aide di'acide sulfurique normal, essore le sulfate de
baryum qui a précipité et neutralise le filtrat ainsi obtenu
l'aide d'une résine échangeuse d'ions mise sous forme basi~ue.
On sépare la résine et amène à sec le filtrat. ~e résidu obtenu
est purifié par passage sur une colonne de résine éch~ngeuse
d'ions de`type carboxyligue mise sous forme ammonium par ~lution
a l~'aide di'ammoniaque 0,15 ~, puis 0,5 ~. Le produit élué par
l'ammoniaque 0,5 N est chromatographié sur silice pour séparer
.les a~omères en position 1" en éluant avec un mélange chloroforme-
méthanol-ammoniaque (2-2-l). On obtient ainsi 58 mg d'anomère ~
~046i~)58
du produit attendu et 143 mg d'anomère a.
Anomère a: /a/D = ~ 124 (c = 0,5 %~ eau)
Rf= 0,5 (Silice, chloroforme-méthanol-ammonia~ue 2-2-l);
Anomère ~: /a/20 = + 52~5 (c = 0~2 %~ eau)
R~- 0,6 (Silice, chloroforme-méthanol-ammoniaque 2-2-l).
~ e l-O-acétyl 2-0-benzyl 3-(N-carbéthoxy N-méthyl)
amino 3,4,6-tridésoxy D-xylohexopyranose utilisé au départ du
stade ~ peut être obtenu de la façon suivante:
Stade 1: ethyl 3-(N-carbé_h_~ N-mé_h~ll _m_no ~4~6-tridésox~
D-xylohexo~yranoside.
On dissout 67 g d~'éthyl 3-(N-carbéthoxy ~-méthyl) amino
~4~6 tridésoxy 2-0-éthoxycarbonyl D-xylohexopyranoside ~préparé
selon J. Org. Chem., 1965, 30, 1287) dans 500 cm3 d'éthanol,
puis ajoute 200 cm3 de soude 2 N.
On agite une heure à température ambiante puis on
dilue à l'eau et extrait au chlorure de méthylène. On lave la
phase organique à l'eau et on l'évapore à sec sous vide. On
obtient 57 g de produit attendu sous forme d'une huile jaune
que l'on utilise tel quel dans le stade suivant.
Stade 2:_ éthyl _-0-be_z~l_3-(~-_arbéthoxy N-méthyl) amino
3,4,6 -tridésoxy_D_x l_h_xop~ranoside:
On met en suspension 12 g d'hydrure de sodium en
dispersion dans ~'huile minérale dans 300 cm3 de tétrahydrofu-
rane. On ajoute~ sous agitation, la solution de 57 g du produit
obtenu au stade précédent dans 100 cm3 de tétrahydrofurane. On
chauffe à l'ébullition au reflux pendant quinze minutes, puis
refroidit ~ 25Co On ajoute 29 cm3 de bromure de benzyle et
laisse pendant quinze heures ~ température ambiante. On dilue
à l'eau et extrait à l'acétate d'éthyle. Apras évaporation de
l'acétate dléthyle, on chromatographie l'huile obtenue sur
silice à l'aide d~un mélange benz~ène-acétate d'éthyle (8-2).
On obtient 60 g de produit attendu sous forme d'un solide
1(~46QS8
cristallisé blanc. ~ = 65C.
Stade 3: l-O-acét~l 2-0-ben~yl 3-~ -carbéthox N-méthyl~ amino
3,4,6-tridés_x~ D-~ylohexo~yranose.
On fait barboter de l'acide chlorhydrique gazeux
jusqu'à saturation, dans un mélange de 600 cm3 d'acide acétique
et 60 cm3 d'anhydride acétique à 25C. On ajoute 60 g du pro-
duit obtenu au stade précédent et on laisse seize heures à tem-
pérature ambiante en maintenant le barbotage di'acide chlorhydri-
que. On évapore alors à sec~ sous vide~ sans dépasser 40C.
On chromatographie l'huile obtenue sur silice à l'aide
d'un mélange chloroforme-acétone (9-l).
On obtient 60 g de produit attendu sous forme d'un
solide cristallisé blanc.
~'anomère a a été obtenu pur par recristallisation dans
l'éther isopropyliqué. ~ - 87C.
Anal~se: (C19H27~6)
Calculé: C % 62~45 H % 7~45 N ~ 3,83
~rouvé : 62~7 7,7 3~7
Exemple 2: Sulfate de 4-- C 2',6'-diamino 2',3',6'-tridésox~
a.D-ribohexoP~ranos~ ~ 6-0-r 3i'-méth~lamino 3"~4",6"-tridésox~
a D-xylohexop~ranos~l7 2-désox~ streptamine
On dissout 169 mg de ~'anomère a obtenu selon l'exemple
précédent dans 20 cm3 d'eau. On neutralise la solution obtenue
à l'aide d!'acide sulfurique décinormal en suivant la neutrali-
sation à l'aide d'un pH-mètre. On utilise ainsi 16,5 cm3 d'acide.
On filtre la solution obtenue~ concentre le filtrat sous vide
et ajoute du méthanol, ce qui fait précipiter le sulfate attendu.
On obtient 230 mg de sulfate de 4-0-~ 2',6'-diamino 2',3',6'-tIidéE~y
a,D-ribohexopyranosyy 6-0-C 3"-méthylamino 3"~4"~6"-tridésoxy
a~D-xylohexopyranosy y 2-désoxy streptamine sous forme d'un
solide blanc de formule C1gH3 ~ 507, 5/2 H2~04.
- 15 -
.
~ .C)4~1S8
/a/D = + 89 (c - 0,8 %, eau) Rf = 0,5 (Silice, chloroforme-
méthanol-ammoniaque 2-2-1).
Exemple 3
On a réalisé une préparation pour injection de for-
mule:
- Produit décrit ~ l'exemple 2 . ... . . . . . . . . 50 mg ;
- Excipient aqueux stérile . . . . . . . . . . . . . 1 cm3.
Etude ~harmacologique du produit décrit a 1~ eYemple 2:
a) Activité ant_bacté_ienne_i_ vitro:
~activité antibactérienne a été mesurée in vitro par
la méthode des dilutions en milieu liquide.
On prépare une série de tubes dans lesquels on répartit
une même quantité de milieu nutritif. On distribue des quantités
croissantes de l~antibiotique étudié puis chaque tube est ense-
mencé avec une souche bactérienne. Après une incubation de dix-
huit, vingt-quatre ou quarante-huit heures ~ l~étuve à 37C,
llinhibition de la croissance bactérienne est appréciée par
transillumination, ce qui permet de déterminer les concentrations
minimales inhibitrices (CMI) du produit, exprimées ici en
~ ~ cm3 de base.
046QS8
.. ._ . . ..
Souches
18 H24 H 48 H
_ .
Staphylococcus aureus 40 481..... 0,1 0~1 0,2
Staphylococcus aureus 40 511..... 0,2 0,6
Staphylococcus aureus 40 821..... 0~1 0,1 0,1
Staph~lococcus aureus 38 691..... ~0,05 0,1 0,1
Streptococcus pyogenes A 561..... ~0~05 ~0,05 ~ 0,05
Streptococcus faecalis 99 F 74... ~20 _
Bacillus subtilis................~ 0,05 ~0,05 ~0,05
Escherichia coli 9 911.. O.O.... D 0,6 0,6 0,2
Escherichia coli 9 9650.......... 0,6 1 2
Escherichia coli 1560~ o~ ~4 0,6
Salmonella anatum 23348~o~o~ 1 3 15
Salmonella typhi murium 420 ..... 2 5 20
Salmonella typhi murium 1 374 ... 1 5 10
Enterobacter aerogenes Co86...... 0,6 0,6 0,6
Enterobacter aerogenes Coll...... ~4 ~4
Serratia marcescens CoB3500O..... 10 40 4o
b) Acti_ité antibactérienne in vivo:
~ activité antibac~érienne a été mesurée in vivo sur
une infection expérimentale ~ Elebsiella pneumoniaeO 40 souris
m~les d'un poids moyen de 21 g sont réparties en 4 séries de
10 animaux. On pratique une infection intrapéritonéale avec
0,5 cm3 d'une culture de Klebsiella pneumoniae n 52 145 en
milieu nutritif, diluée au millième avec de l'eau distillée
stérile. On traite par administration sous-cutanée de produit
par trois fois, une heure, cinq heures et vingt-quatre heures
après l'infection; on note la mortalité à des temps diff~rents
après l~infection et le nombre de souris survivantes après huit
.
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1~46058
jours. ~es résultats sont résumés dans le tableau suivant:
Dose totale _ _ ~ _
administrée Mortalité à Survie a
(calculée
libre) 28 H 31 45 ~ 49 ~ 70 H 5 j8ème jour
0,03 mg 1 9
0,05 mg _ 10
10 0'075 mg _ _ _ _ 10
distillée 1 1 6 1 1 _ 0
~ es résultats précédents montrent la bonne activité an-
tibiotique du produit décrit à l'exemple 2.
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