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~0658S1
~ a pr~sente invention concerne~ au titre de produit
industxiel nouveau, le composé 17~-~thinyl (5a) 2-androst~ne
17~-ol (et son acétate 17 ~) correspondant à la structure sui-
vante:
OR
C CH
~ ~ R-H; R=Ac
H
llétat pur, ainsi qu'un procédé permettant dlobtenir ce pro-
duit ~ l'état pur, et les applicat1ons de ce produit en thé-
rapeutique ~umaine.
Certains suteurs~ et notamment Mo HUF~MAN (brevet US N~ 2.996
524 et P. 3084 M), J.S. EDWARDS & A. BOWERS (Chemistry and
Industry 1961, pp. 1962-63); G POMO~IS & al (Cancer Chemothera-
py Reports, 1962 (sept.) 31-32), ont décrit un procédé permet-
tant d'obtenir une substance ~ laquelle ils ont cru pouvoir
attribuer la structure et la dénomination cbimique de 17 a-
éthinyl (5 a) 2-androstène 17 ~-ol (et de so~ acétate) et qui
possèderait des propriétés-
-stimulantes sur le système réticulo-endoth~lial
-inhibitrices gonadiques, par suppression des gondanotrophines
hypophysaires
~a Demanderesse a ~ait la découverte, surpren&nte,
qu'en réalité cette ~ubstance, en raison mame de la natur~ du
procédé en questlo~, n'est pas le composé chimique 17a-éthinyl
(5a) 2-andro~tène 17~-ol, mais en ~ait un m~lange d'isomères
- d'activités biologiques très in~gales, mais de polarité iden-
tique, et de ce fait, impossibles à séparer par les méthodes
chromatographiques usuelles.
-1-
A r
~ 1065851
La pr~sente invention r~ide, en premier lieu, en
un mode de pr~paration qui permet r~ellement d'obtenir le com-
pos~ 17~-éthinyl (5~) 2-androstène~ 17~-ol non contamin~ d'iso-
mares.
Elle réside, en second lieu, en ce corps lui-mame9
en tant que produit industriel nouveau, obtenu ainsi pour la
première fois ~ l'état pur.
Il a été, au surplus, découvert que les propriétés
de ce corps sont di~férentes, voire m8me contradictoires, de
celles initialement attribuées au mélange pr~cit~0
Dans ce mélange, outre le 17~-~thinyl (5~) 2-an-
drost~ne, ~7~-ol, (qui sera désigné ci-après par l'abréviation
"IE~TA-2"), on trouve l'isomère 17 a-~thinyl (5~) 3-andro~tène,
17~-olp en proportions ~on négligeables (ce composé sera dési-
gné ci-après par l'abréviation "DE~A-3"): le mélange des 2
isomères tel que décrit par les auteurs précités, sera désign~
par l'abréviation "MIX"o
: ~'invention réside également dans la démonstratio~
. de la supériorité biologique de l'isomère ~2sur son analogue
et, par conséquent, dans l~intérêt supplémentaire qu'il y a à
obtenir le.produit.désigné, ~ tat pur.
- ~'invention concerne, enfin, l'utilisation théra-
peutique du corps, tel qu'obtenu selon l'invention dans les
domaines d~crits par llinvention.
~'invention va mainten~nt être décrite plus en
détail en se référant ~ chacun des ob;ets précitésO
~ ~ A. Pré~aration du composé selon l'invention
Ia polarité quasi identique des deux isomères delta_2 et del-
ta-3 rend impossible la séparation de ces corps par les méthodes
classiques de chromatographie et c'est pourquoi le mode de pré-
paration indiqué par exemple dans le brevet US 2.996.524 conduit
~ inévitablement ~ un mélange d'isomèresO
~ . -2-
'
1065851
~'invention repose ur la découverte de la grande
sensibilit~ de l'isomère delta-3 ~is ~ vis du r~acti~ de JonesS
- contrastant en cels avec l'inertie de l'isombre delta-2 à
l'égard du mame réacti~ (qui est une solution d'anhydride
- chromique dans l'acétone, en présence de H2S04; cf BODEN, K.,
B ILBRON? ~.N.JONES E~R~Ho ~ WEEDON, E.Journal-Chem. Soc.
1946:39).
~e procédé de préparation du corps delta-2 à l'état
pur~ aelon la pr~sente invention, consiste donc dans sa premi~-
re étape dans le traitement de la mati~re premi~re, qui est
elle même un mélange d~isomares~ par le réactif de Jones; l'iso-
- m~re delta-3 du 17 céto-(5-alpha) 2-androstène est o~ydé vrai-
semblablement en diacide ou en la dialdéhgde correspondants et
acquiert ainsi une polarité très differente de celle de l'iso-
m~re de1ta-2; ceci permet de recueillir ce der~ier ~ l'état
pratiquement pur, par chromatographie sur silice.
D~s lors, le delta-2, 17-céto (5 alpha)-2-androstè-
ne pur, soumis dans une seconde étape à la réaction décrite
l'exemple N~ 8 du brevet US 2.966.524 conduit au 17~-éthinyl
(5 alpha)-2-androstène 17-019 mais ~ tat pur, qui constitue
le produit selon l'inventionO
On donne ci-après un mode opératoire illustrant
dans une premi~re étape~ selon l'invention~ la mise en oeuvre
du processus de s~paration des isom~res 17-c~to (5 alpha)
sndrostène-2 et -3~ puis dans une ~econde étape la préparation
du prodult proprement dit et enfin, dans une 3ème étape, celle
de son acétate, qui a l'avantage d'~tre plus actif lorsqu'il
est utilis~ par ~oie orale
.
EXEMP~E
Etape t: Séparation d'un mélan~e d'isomère~s_17-ceto (5 alpha)-
androst~ne-2 et 3
-3-
"' 106585~
Dans un ballon de 1 litre muni d'une agitation magn~tique, on
introduit 20 g du stéroide en solution dans 400 cc d'acétone.
~e mil1eu est refroidi ~ -20~ et on y introduit 60 cc de
réacti~ de Jones, goutte à goutte. On laisse le ballon reve-
nir ~ temp~rature ordinaire en agitant pendant 1 h. 15 mn. On
ajoute ensuite 100 cc de méthanol et on agite pendant 15 mn.
~es sol~ants sont distillés et le résidu est repris par 700 cc
d'eau. ~e précipité est essor~ et lav~ avec de l'eau~ puis
dis~ous dans 500 cc de chlorure de méthyl~ne. ~a solution or-
ganique est séchée au sulfate de soude et distillée. ~e rési-
du (18,5 g) est purifié par chromatographie sur eolonne de si-
lice. ~'~lution par le benz~ne fournit 11 g de dérivé ~2pur.
~'examen du spectre RMN (CDCl~, tétraméthyls~lane) de ce d~ri-
montre les protons oléfinique~ en C2 et C3 sous ~orme d'un
singulet élargi à 334 Hz (largeur à mi-hauteur 5 Hz) alors que
dans le dérivé ~3 les protons oléfiniques apparaissent sous
forme de 4 massifs entre 312 et 348 Xz.
Etape 2: PréParation du 17-alPha éthinyl (5 alpha)-2-andros-
tène 17-bêta-ol exempt d'isomère delta-3
On dissout 1,2 g de potassium dans 30,5 ml d'alcool amyllque
anhydre. Qn ajoute une solution de 1,1g de 2-androstbne-17-one
pur, obtenue comme cela est indiqué à llétape 1 ci-dessu~, dans
40 ml de toluène anhydre et on fait passer de l'azote à travers
le mélange afin d'éliminer l'air. ~a solution qui en résulte
est agitée pendant 15 heures pendant qu'on fait passer de l'a-
zote à traver~ le mélange afin d'éliminer l'air. ~a solution
qui en r~sulte est agit~e pendant 15 heures tandis qu'on y fait
passer un flux lent d'acétylène anhydre purifié. A la fin de
ce laps de temps, on ajoute 300 ml d'eau glacéeO ~e pH est
a~usté à 1 avec une solution aqueuse à 50~ d'Qcide chlorhydri-
que. ~a solution qui en résulte est distillée afin d'éliminer
toutes les matières organiques volatiles. Elle est ensuite
~ -4-
'~ 1065851
re~rigérée ~ 0~c, extraite ~ l~éther et cet extrait est lavé
l'eau~ séch~ au sulfate de sodium et évaporé. Le résidu de
17 alpha-~thinyl (5 alpha)-2-androstène 17 bata ol est recris-
tallisé dans llhèxaneO
Etape ~ : éParatiOn du 17 ~ acétate du 17 a-éthinyl (5~)
2-androstène 17 ~-ol
Dans une solution de 600 mg de 17-éthinyl-2-androst~ne 17-~-ol,
dans 10 cm' d'anhydride acétique, on aJoute 600 mg d'acide p-
toluène sulfoniqueO Cn laisse reposer la solution ainsi obte-
nue ~ 20~C pendant 18 ~eure~ ~ l'abri de l'air. Elle est ver-
sée en~uite dans 200 cm3 d'eau glacée et le mélange e~t ré~ri-
géré pendant 3 heures. On recueille sur filtre le précipité
d'acétate de 17 ~-éthinyl (5~) 2-androstène 17 ~-ol. Il est
lavé à l'eau, puis aéché et recristallis~ dan~ du méthanol.
B, Caractéristiques du composé selon l'invention
~e produit obtenu à l'étape 2 ci-dessus se présente sous ~or-
me de cristaux blancs en plaquettes fondant ~ 160-162~ (Kofler).
Ces caractéristiques sont ~ con~ronter avec celles du mé-
lange obtenu au moyen du processus d~crit par les auteurs pré-
¢~tés: suiv&nt la proportion plus ou moins grande de-l'isomère
delta-3, le point de fusion mesuré dans les m~mes conditions
8~ élève~ variant entre 158~ et 168~~ se rapprochant ainsi du
point de ~usion de l'isomère delta-3 pur, qui est de 198~-
199~C (Kofler). De la même manière, l'acétate de l'isomère ~2
obtenu ~ l'étape 3 ci-des~us de présente sou~ forme de cristaux
blancs ~ondant à 130~-131~C (Eo~ler).
Il est bien entendu que, dan~ toutes la présente descrip-
tlon, on se réfère sous l'abréviation unique "D~A-2", indi~-
iéremment au 17 ~-éthinyl (5a) 2-androstène, 17 ~-ol et ~ ~on
- 30 17 ~ acétate.
. .
. . .
--5--
1~6585
aO ~
Sur le plan biologique et thérapeutique, 10 produit, selon
l~invention, doit 8tre considéré comme nouveau dans la mesure
où
a) la substance (ainsi ~ue son ester acétique),
décrite ~ous la même dénomination dans le brevet US préci-
t~, était en réalité un mélange pouvant contenir ~usqu'à
2~ do l'isom~re ~ , qui est de loin, le moins actif,
et où
b) le composé, selon l!invention, est utile dans des domaines
thérapeutiques inattendus, différents et même contrair~ de
ceux qui lui ont été attribués par les travaux antérieurs
précités~
- Ia demanderesse apporte iei une sélection dë travaux biolo-
giques sur lesquels sont ~ondée~ les propriét~s thérapeuti-
ques du composé selon l~invention.
I. ~e com~osé D~LqA-2, contrairement ~ ce qu'affirment les
publications ant~rieures (qui concernent~ en fait le
"NIX"), est un s imulant ~onadique possèdant donc dans
le8 conditions déterminées et quoique par des voies dif-
; férentes, un e~fet ciomiphène-like de stimulation de go-
nadotrophines pituitaires.
Cette découverte est utile pour le traitement des trou-
bl6s du fonctionnement ovarien ou testiculaire, y c~mpris
certainee ~ormes de stérilité.
- ~e clomiph~ne, stimulant gonadotrope classique, utilisé
dans le traitement des troubles hypophysogonadiques, dont
les ~térilit~s *éminines par anovulation, a été naturel-
lement utilisé comme standard de r~érence dans plusieurs
séries d'expérimentations destinées ~ rechercher l~acti-
vit~ clomiphène-like du 17 ~-éthinyl, (5 Q) 2-androst~ne
17 ~ acétateO
- 1065851
i/ Chez la ratte adulte une dose appropriée de clomiphène
injectée ~ un moment précis du cycle~ empache l'ovulation
de se produire chez 100 p. cent des animaux (DOCKE J. Re-
prod. ~ertility 1971~ 24 : 45-54).
~e tableau ci-après montre que le composé DE~TA-2 manifes-
te dans cette méthodologie~ des effets qualitati*s analo-
gues ~ ceux du clomiphène.
% d'animaux Nombre d~oeu~s
~AB~EAU I ~vulatoires ovaire o~aire total
~auche droit moyenne
. .. . ~ .,
4 animaux 100% 5 ~ 9 5 à 9 13,5
t~moin
l - .
clomiph~ne S-CO
3 mg/kg dose uni- O 0 O
que (4 animaux)
. . . I . . . . , .
D~TA-2: 1 ,8mg/ . .
kg/; x 3 voie 40% 7 ~ 8 6 à 8 14~5
S.CO (5 animaux)
. ~ .. . ,
~E~A-2 : 5, 4mg/
kg/~ x 3 voie S.C. 60% 6 à 10 5 à 8 14
~5 animaux)
Cette premiare expérience, réalisée en fait ini-
tialement dans un but de screenlng, a permis de
constater outre la réalité de l~eifet clomiphène-
like qualitatif, le fait que, du point de quanti-
tati~ la dose de 3 jours x 1,8 mg/kg produit d~-
j~ un effet maximal. ~a reprise de l~tude avec
des in~ections uniques de DELTA-2 de seulement
1,8 mg et 5,4 mg/kg administrée ~ des moments dif-
f~rents du cycles, a permis de constater que l~ ef-
iicacité du DEL~A-2 se rapproche encore plus de
celle du clomiph~ne, du double po1nt de vue qua-
--
~,~
i
--'' 1065851
litati~ et quantitati~, si le st~roide est adminis-
tré en metestrus et en proestus:
TAB~AU II ¦ % d.~ovulation 8i inject~:
en metestrus en proestrus
¦)J~TA-2 ~ ,e~/4~ ¦ 25 ~ ¦ 80 i
5,4mg/kg ¦ 40 ~ 20 i
.
i~/Chez la ratte imPubare, on peut déclencher llovulation
~ 10 chez 80 p. cent des animaux, en i~jectant une quantité
relativement faible (4 U. I.) de gonadotrophines (P~S)0
Dans cette méthodologie aus~i bien que le clomiph~ne,
. que le DEL~A-2 ~ faible dose, pro~oquent une réduction
. . du pourcentage des animaux ovulatoires:
~AB~EAU III
: .
~moins: 4 UI.2MS o.... 80% diovulatio
. .4 UI.PMS +Clomiphène (3mg/
kg) ... 30% d'orulatio
4 UI.P~S DELTA-2(o,6 mg/
. kg ) ... 20% d'ovulatior
4 UI.PMS IDELTA-2(1,8 mg/
. kg ) o~100% d'ovulatlon
.
~e mécanisme du phénom~ne est le suivant s le PMS pro-
. voque la sécrétion par l'ovaire d'une quantité adé-
quate d' estrogènes qui entra~nent la libération de la
~ gonadotrophine hypophysai~e ~H~ laquelle déclenche
l'ovulation.
~e clomiphane, anti-estrogène, empêche les estrogènes
secr~tés sous l'effet de la PMS, d'agir sur l~hypophy-
~e: il n'y a pas de décharge de IH, donc pas llovula-
tion.
. -8-
1~6585~
~e DEL~A-2 n'est pas un anti-estrogène. ~h~oriquement
donc9 l~effet anti-ovulatoire qu'il exerce ~ la ~ai-
ble dose (0~6 mg/kg) ns peut 8~expliquer que par
l~un des trois mécanismes suivants:
a) ~reinage-de la libération par l~hypophyse, de.la
. gonadotrophine ~H;
b) inhibition~ au niveau de l'ovaire, de la r~ponse.
sécrétoire, à la sollicitation PMS . --
¢) et/ou inhibition, toujours au niveau de l'ovaire,
~ 10 de la réponse ovulatoire, à l'~gard de la IH,
- éventuellement libér~e après stimulation estrogèni-
que.On notera qu'à la dose forte (1,8 mg/kg), le com-
posé DELI~.-2 maintient~ voire même favorise l'ovula-
tion~ ce en quoi il se comporte comme un libérateur de
~SH et de ~H, soit comme un libérateur de l'hormone
hypothalamique LH-RH.
Or, en clinique humaine, le composé DE~IA-2 se Compor-
te comme le ~H-RH, en majorant, de mani~re spectacu-
. laire, la libération de FSH et de ~H, mame 1~ où
elle est excessive (maladie dé Kline~elter) et m~me
la ou son excès est en rapport avec l'abRence généti-
que des gonades (maladie de ~urner),
. Une varlante de la m8me méthodoloeie, qui met en
~ oeuvre des doses plus forte~ de PMS (8 U.I.) permet
~ de con~irmer, dans le sens inverse, l~e~et clomi-
phène-like du DE~TA-2 et de retenir comme étant le
plus probable, le second des trois mécanismes théo-
riques ~voqués ci dessus, à savoir l~inhibition au
niYeau de l'ovaire, de la r~ponse sécr~toire à la
sollicitation par la PMSo
. ~e tableau ci-apr~s réun~t les résultats de 4 s~ries
: d'expérie~ces .
' ' _g_
.
,
- -'' 1065851
TABLEAU IV POURCENTAGE DE RATTES OVVLA-
TOIRES
Résul- Nom- No~-
njection SC lare 2ème 3ame 4ame tats bre bre
unique Série Série Série Série cumu- d'a- moyen
lés nimaux d'-
- _ _ _ . oeufs
TEMOINS
PMS 8 UI O O 25 14 9,5 21 # 1
0,75mg/kg _ 50 25 14 27 15 # 7
1,5 mg/kg _ 25 _ _ 25 4 3
10+CLOMI 3 mg/kg 20 O _ _ 11 3
6 mg/kg _ O _ _ O 4 O
...
~DEL- 0,6mg/kg O _ 75 43 37 16 5
. _ ___ _
1,8mg/kg 20 _ 50 _ 30 10 8
_.................... .
5,4mg/kg O _ 50 _ 50 4 1,5
_
L'analogie est parfaite entre les deux corps.
Quant au mode d'action.
- le clomiphène, en tant qu'anti-estrogène, réduit
l'effet inhibiteur des estrogènes à l'égard de
la libération de la gonadotrophine LH,
- le stéroide DELTA-2 empêche l'ovaire de sécréter
la quantité d'estrogènes sollicitée par l'impor-
tante stimulation FSH.
II. Le comPosé 17a-éthinYl (5~-2-androstène~ 17~-
ol (sous forme d'acétate) est un inhibiteur
qonadiaue direct, dans certaines circonstances,
et contrairement a ce à quoi on Pourrait s'atten-
dre selon les mécanismes physioloai~ues de
rétroaction~ fee _back)L_l'effet qonado-inhibi-
teur de DELTA-2 s'accompaane d'une inhibition
des qonadotrophines pituitaires.
-- 10 --
'~ 1065851 .
~'application pratique d~ ces ~ctivités concerne le
traitement de certains tumeurs endocrines~ non seule-
ment hypophyso-dépendantes (ce qui découlerait logique-
ment des publications antérieures) aussi non hypophyso-
dépendantes.
a. I~s effets ~onado-inhibiteurs directs de DE~A-2 co-
existent avec le freinage de la ~onctlon gonadotro~e
~'autogreffe, chez la ratte,d'un fra~ment d'ovaire
dans l'~piploon, sit8t après l'ovariectomiè bilatéra-
le, entra~ne la dérivation hépatique des hormones 8~-
nadiques et leur destruction dans cet organe. Il s'en-
~uit une augmentation réactionnelle, intense et perma-
nente, de la production des gonadotropines pituitaires
I qui provoquent la prolifération tumorale du gref~on
ovarien (les image~ hi~tologiques de l'hypophyse ainsi
~t~mulée sont caractéristiques)0
~'introductionj dans ce modèle exp~rimental, d'une
~ubstance spéci~iquement hypophyso freinatrice, comme
le méthallibure, a pour résultat l'arr~t du développe-
ment du greffon et la disparition des aspects micros-
copiques d'hyperstimulation au niveau de l'hypophyse
(BER,A.Endokrinologie~ 1968~ 53: 62; ibid.1958,53:
! 237; Acta Endoorinologica 1972,70 : 167)
; ~'adjonction d'une quantité appropriée de gonadotro-
phines hypophysaires exogènes (P.M.S.) entra~ne la
reprise du déYeloppement tumoral qui avait été arraté
par le méthaliibure.
~'introductionj dans ce modèle expérimental, d'une
substance "X" dont l'ef~et est gonado-inhibiteNr di-
~0 rect, provoque l'involution du gref~on tumoral et
empêche la reprise de son activité apr~s stimulation
par P~M~So
_ 1 1 -
1~5851
~e composé DELTA-2 a ét~ testé dans cette m~thodolo-
gie. ~es résultats ~igurent au tableau ei-après:
. AB3EAU V
. . I .
. ~raitement Dose/;our Poids du ¦ ioids de .
(mg/kg ou gre~fon/mg llutérus (mg)
U.I. animal) .
q~moins _ 217,4 + 16,4 58~6 + 8
~re~é B .
_ . ' ~ ... .. _, _, .
~m~thallibure 120 22,6 + 2,4~** 29 + 4,5**
tO . ~_ _ . . ~ .
+m~thallibure . 120 ~36~5 + 2~5* 77 + 9~7
r PoM~ So ;~0 .. .
~ . ~ . . . .
~' 3 .136~7 + 10~7** 11~,5 + 14,9**
.' . ' . _ _. . '
~2 6 62,4 1 9'9 139,4 + 10,4***
- .
m~thallibure 120 (1)
. _ _ ................... 20 3 153~7 + 35j2 128 + 23~8
. ~méthallibure 120 . *
20P.M.S. +~ 2 20 669,7 + 9,8 124,8 + 9,7
(1) ~a compara~son est faite par rapport au lot:
"méthallibure ~ PoM~S.ll
~es conclusions suivantes peuvent ~tre tirées:
1~. DEL~A-2~ seul entra~ne une involution du gre~fon ovarien,
statistiquement significative et proportionnelle aux
~ doses; .
20 DEL~A-2~ajouté au syst~me m~thallibure + P~M~So entraine
également l'lnvol~tion statistiquement significative d~
greffon.
-12-
-- 106S8Sl
Et ceci prouve que ce composé possède bien l'e~fet
gonado inhibiteur direct~ revendiqu~ comme une dé-
couverte inattendue, par la présente inve~tion.
Des con~irmations en sont dlailleurs fourDies par
l~examen histologique du greffon ovarien et des hypo-
physes des animaux de cette expérience.
Ce m~canisme antigonadique direct du composé DEL~A-?
¢oexiste de manière surprenante avec un ef~et d~inhi-
ljition gonadotrope h;ypophysaire.
Ceci est un autre ~lément, nou eau et inattendu, de
car c~est le contraire ce oe
qu~on aurait pu attendre: selon les lois physiologi-
~ues toute freination directe de la gonade déclenche
¦ automatiquement~ par ~eed-back positif~ la stimulation
de la production et/ou libération des gonadotrophines
h~rpoph;ysaire s O
b. R0cheroh9 d~aotl~it~s antitumorales directe~. par
aes techniques dloncog~nèse expérimentale non
~e composé D~TA-2 s'est avéré très acti~ contre cer-
taines tumeurs gonadiques expérimentales~ induites
par des techniques de stimulation gonadotrophe hypo-
physaire prolongés, analogues à celle d~crite ci-des-
~us.
Après 45 jours de traitement par voie orale, le poids
moyen de la tumeur testiculaire développée chez le
rat après 1 an de latence était de 45 + 18,9 mg con-
tré 2533,3 + 260S3 mg~ poids moyen de la tumeur ch~z
le t~moin (p < 0~001) et la disparition totale en
était constatee dan~ la moitié des cas traités, alors
que tous les témoins conservai~nt leur tu~eurO
- ' 1065851
Cette différence entre les tumeurs du témoin et de l'a-
nimal traité (poids et disparition) est si considéra-
ble qu'elle s'expliquerait difficilement par le seul
ef~et de freinage gonadotrope; elle suggère ~ortement
l'intervention complémentaire d'un mécanisme anti-
tumoral direct~ tel qu'il a été démontré lors des
essais rapportés ci-dessus.
~'exi~tence de cet effet direct a d'ailleurs ~té prou-
,~ .
~é sur des tumeurs transplantées ou inoculées~ ayant
un caractère malin certain, et dont le développement
n'exige pas l'intervention des gonadotrophines hypo-
physairesO
~'un de-ces modèles est l'adénocarcinome mammaire de
la souri~ (.A. RIVENZON & A,, MACRINEANU -Néoplasm~
1968 15 : 2) qui, sous l'action de DEL~A-2 a disparu
chez ~,3% des animaux (présent chez tous les témoins)
et a eu son poids moyen réduit à 436~66+ 147~23 mg
(contre 1?13,33 + 1~9,19 mg chez les témoins;
' p< 0,001).
Un autre modale est une tumeur ovarienne ascitique,
d'évolution suraigue qui~ chez la ratte~ tue générale-
ment la totalité des témoins dans les 16 ~ours qui
suivent l'inoculation intra-péritonéale (E. POGOSIAN~ &
al., Voprosi Onkologii~ 1962~ 8~ 11 29-26)o
SOU8 ll effet du composé DE~A-2, il y a, au 16~me
~our~ 93,3% de survivants (contre 20~6% parmi les
témoins) et après sacrifice des survivants traités au
27ème ~our, on a constaté la rareté des cellules tumo-
rales dans le péritoine et de l'épiploon et l'absence
de métastases ganglionnaires, de mame que la dispari-
tion de la ~luorescence qui~ i~tense chez les témoins,
at~este l'importance de l'acti~ité enzymatique liée à
l'oncogén.èse.
' ' , .
-14-
-' 10~5851
III. ~e composé 17~-éthinyl (5Q) 2-androstène, 17~-ol
(SOU8 forme d'acétate) ~roduit, au niveau de l'utérus,
des modi~ications morphologi~ues, qu~litatives et quan
titative8~ différentes de celles entra~nées par le~
~ hormones sexuelles; elles sont susceptibles d'être
~ utilis~es en pratiquement comme une méthode contracep-
tive d'un type nouveau. ~a dernière colonne du tableau
V ci-dessus, montre que "DEL~A-2" qui ne possède pas
des ~opriété~ estrogènes, entra~ne une augmentation
du poids de l'Ntérus, nette, proportionnelle aux doses,
; et hautement significatiYe, chez des animaux dont les
gre~ons ovariens, par ailleurs fortement inhib~s, ne
peuvent en tout état de cause, libérer des estrogènes
. qui n'échapperaient pas ~ l'inactivation hépatique.
I ~ette sti~ulation de l~utéru~ qui concerne à la ~ois~ . le muscle, le stroma et la muqueuse, n'e~t caractéris-
tique ni des aspects fournis par les estro~enes, ni
de ceux produits par les androg~es ou les progesta-
. tifs; elle s9associe à des modifications histo-enzy-
mologiques particulières. Il apparait donc A l'~viden-
. ce que le composé DE~TA-2 exerce sur l'utérus de cer-
tains animaux de laboratoire des e~ets qualitati~s
6usceptibles de modl~ier les conditions requises pour
une fertilité normale.
IVo ~es proPriét~s anti-Parat~y~oidiennes de l'acetate de
17~-éthinYl (5~)_?-androstène, 17~-ol ~e manifestent
aussi bien sur l'hyperplasie expérimentale des glande~
parathyroides qu9au niveau de l'osO
A ce dernier égard~ on sait que l'hormone parathyroi-
dienne (PTH) produit la destrùction de llos avec, com-
me conséquence, la libération d'une quantité propor-
tionnelle de calcium. ~'effet et son éventuelle inhi-
-~5-
~065851
bition peuvent ~tre mesurés dans un sys~me de cultu-
re de tiRsu osseuxO (h'~L~9 H.B. & ~O WEIS~ J~ Exp.
MedO 1965, 121 551-560).
Parmi les corps susceptibles de s'oppo~er à l'effet
de la PTH sur l'os, il y a certain~ estrog~nes
(D.A~KINS & al JO EndocrO 1972, 54 : 107-117), le
plus puissant d'entre eux ~ cet égard, l'éthinyl-
estradiol, est utilisé comme standard de préférence
.lor~qu'on ~eut évaluer l'activité anti-ostéolytique
d'une autre substance.
La libération du calcium, par la vo~te cr~nienne de
80uris, SOU8 l'effet de 0,6 U de PTH, dans le milieu
de culture de tis~u osseux e~t inhibée
- de 137 p. ~ent + 2 p. cent par 200 ~g d'éthinyl-
estradiol~ et
- de 96 p. cent + 6 p. cent par 200 ~g de "DE~IA-2"
.
~'apparente supériorité du standard dlsparait lorsque
l'on compare les posologies humaines usuelles des
deux stéroides confrontés ici~
- ~0 à 100 JUg par jour, pour l'éthinyl-estradiol
- 5 ~ 50 mg par ~our, pour DE~TA-2
En cli~ique humaine~ des dose~ quotidi ~nes de l'or-
dre de 10 mg de "DE~A-2" ont permis dlatténuer la
destruotion excessive de 1' 08, ce qui s'est traduit
par la r~ductlon de la valeur du rapport entre cal-
cium et créatinine urinaires à je~n (B. NORDIN & al)
. et par la diminution du taux sérique du calcium~ en
~essous de 100 mg/l.
-16-
.
1065851
; VO e corps "DE~TA_?" exerce des ef~ets ~nti-sébor-
rhéiques qui concernent essentiellement le~ paramè-
.
tres histologi~ues: le produit agit donc davantage
comme les anti-androgènes que comme les estrogenes.
Ceci est une autre propriété inattendue car "DE~TA-2"
est dépourvue de toute actiYité anti-androgène
(comme de toute activité estrogane).
~a recherche antis~borrhéique a été ~aite selon la
- méthode de D.J.E~ G (7.EmbryolO exp. Morph. 1957,
59 1 : 74 -82; chap. XIII, tome 4 pageB 200-219 in
"Hormonal control of sebaceous glands in experimen-
tal animals" , "Adva~ce~ in biology o~ the skin",
it~ par N.Monta~na, RoA~ Ellis, Ao~ Sil~er 1964,
j etc... ), dont le principe con8iste ~ provoquer~
chez le rat m~le adulte castré, un ap~ort androgéni-
que d'inten~ité connue qui stimule les di~férents
- paramètres cutanés, que la castration avait
e~ondré 8S
- a- production de lipides cutanés
b- proli~ération deR cellules dans les glandes sé-
bacées, se traduisant par le nombre des images de
mitose
c- nombre de cellules spumeuses qui composent le8
glandes sebacées, déterminé par le nombre des
noysux
d- nombre des mitoses dans l~épithélium épidermique
e- épaisseur de l'épithélium épidermique
- ~e tableau ci-après résume les résultats obtenus dans
l'une des expériences ef~ectuées.
1065851
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-- 18 --
1065~35~
C. Supériorité biologique du composé "DELTA-2" sur son
i80m~re "DE~TA-3" et~ par conséquent, sur le mélan-
- ge des deux isomères ("MIX"~ tel~ qu'obtenus Par
,
~'ovariectomie unilatérale produit, che~ la ratte
~eune, une hypertrophie compensatrice de l'ovaire
restant, conséquence du ieed-back positi~ déclench~
par l'interventionO
~e traitement par une substance exclusivement anti-
gonadotrope peut, au maximum, annuler la totalité
de l'hypertrophie réactionnelle: le poids de l'o-
vaire restant est alors ramené au poids d!un ovaire
de ratte témoin entière, ce qui revient ~ chifirer
à 100% la valeur de l'inhibitio~. Une ~ubstance qui
- abaisse le poids de l'ovaire restant, en dessous du
poid~ d'un ovaire témoin (inhibition lOO~o) agit ne-
ce~sairement, ne ~erait-ce qu'en partie, au niveau
de l'ovaire; c'est ainsi que se comporte le stéroide
DE~TA-2~ confirmant en cela que son activité s'exer-
20 - ce aux deux pôles de l'axe hypophyso-gonadique.
Cette méthodologie a été choisie pour l'évaluation
comparative des effets des isomères 2 et 3 car
elle fournib des résultats particuli~rement repro-
ductibles, homog~nes et quantifiablesO ~ors d'un
premier travail, il a été possible dlétablir que
"MIX", tel qu'il ré~lte de la méthode de prépara-
tion indiquée dans la littérature précitée, produit,
dès la dose 120 ,ug/animal/jour per os, une inhibi-
tion de 121% de l'ovaire restant, qui est hautement
~0 signi~icative (p <0,001) alors que l'isomère ~3 à
l'état pur n'entra~ne ~usqu'à la dose de 240 ~g que
des inhibit~ons inférieures ~ 50% et qui ne sont ~ ;
.~ ~
-19-
1065851
pas statistiquement significatives.
Un second travail a con~ronté, toujours per os, les
effets de "MIX" et ceux de chacun des deux iso~ères
2 et ~ 3 administrés à l'état pur.
Le tableau ci-après en donne les résultats:
TABLEAU VII
_
TRAITEMENT POIDS MOYEN %
(~ug/animal/ du corps des cornes de d'inhibi-
~our) tg) utérines l'ovaire tion
(mg) (mg)
- . .
Témoins 1/2
castrés 108,6 103,0 20,7
Té~oins
entiers106,8 81,3 12,4** 100
_
Estradiol
sous-cutané113,2 131,9 13,9* 81,9
,
Mélange 120104,1 113,5 12,5 99,1
240 104,4 114,3 9,4*** 136,5
~3 pur -110,0 122,1 16,2(ns) 54,9
240106,7 110,0 15,2(ns) 66,9
~
~2 pur -98,3** 103,2 _ _ 153,2
240101,6 116,9 9,7*** 132,8
_
La supériorité du composé /\2 pur ressort à
l évidence; elle est confirmée par la moindre
activité du mélange des isomères "MIX" et par
1'inactivité du composé ~3, aux doses utilisées.
- 20 -
1065851
D. A~plication de 17a-éthinYl (SQ! 2-andro~t~ne 17~_
ol (acétate) en th~raPeutique
~e 17~-éthinyl (5~) 2-androstène 17~-ol, particu-
lièrement sous forme de 17~-acétate, tel qu~il est-
décrit dans la présente invention est utile en théra-
peutique dans les indications suivantes, cette liste
n~étant pas limitatiYe:
a/troubles du ~onctionnement ovarien ou testiculaire ,
y compri6 certaine~ ~ormes de stérilité;
b/certaines tumeurs hormono-sensibles, de nature bé-
nigne (adénome prostatique, adénome ou fibro-adéno-
me mamm~ire) ou maligne (sein, o~aire~ utérus, tes-
ticule, prostate etc.00)
c/une modalité nouvelle de contraception médicamen-
teuse par ~oie orale
d/certains états de destruction osseuse (ostéoporose
par exemple) liés ~ une hyperparathyroidie primi-
tive ou ~econdaire;
e/l~hyperfonctionnement des glandes sébacées (sébor-
rhée~ acné)
~e compos~ selon l~invention est~ es~entiellement
mais non exclusivement~ destiné à l~administration
par voie orale, sous l~une ~es iormes usuelles:
comprim~s, dragées~ capsules, pilules ou encore en
un v~hicule liquide, sous forme de suspension ou
solution dans l~huila d~olive, SOU8 capsules de gé-
latine ou en sirop ou potion.
~es concentrations par unité de prise seront de pré-
~érence: 5 mg, 10 mg, 25 mg.
~e composé peut également, mais accessoirement, être
. ~1 .
. -' 10658Sl
administr~ sous forme de supp~sitoires contenant.
5 et 10 mg, à utilisation rectale ou vaginale ou
- sous forme de lotion ou spray contenant, dans un
. . véhicule adéquat (alcool, essences volatiles)
10 mg/ml; ces formes seront reservées de préféren-
ce au traitement de~ affectio~s de la peau. Ex-
¢eptionnellement enfin, le composé pourra être
~ utilisé sous une forme in;ectable, pour la voie
intramusculaire,-~ la concentration de 10 à 25 mg
par ampoule incorporés dans un solvant lipidique
~ convenable (huile d'olive', alcool benzylique, hui-
le de sésame etc...~
Quelle ~ue soit la voie d~administration choisie,
les doses quotidiennes nécessaires se situent
entre 10 et 50 mg, exceptionnellement plus, la
quantité adéquate et la durée des traitements
~tant fonction de lla~fection ~ traiterO
' Ainsi, par e~emple;
D~ns certains troubles fonctionnels ovariens~ ,
arec ou sans ~térilité~ les traitements dureront 3
de 5 ~ 10 jours par cycle et la dose quotidienne
moyenne sera de l'ordre de 40 mg~
- les traitements des tumeurs seront nécessaire-
~ ment prolongés, ou même de durées indéterminées
. dans les cas de tumeurs malignes, et les doses
. quotidiennes seront habituellement de llordre
' de 30 à 50 mg.
- pour la contrsception (traitements cycliques)
. et les hyperparathyro'idies (traitements très
prolongés~ ininterrompus), les doses ne dépas- .
seront paB 15 ou 20 mg par jour; :
. .
--22--
~06S8Sl
le traitement des manife~tations sébrorrhéiques
sera de longue dur~e et la posologie quotidien-
ne se situera entre 10 et 30 mg, sans distinc-
tion de la voie d'administration choisie: orale,
rectale ou percutanée,
~e composé 17a-éthinyl (5a) 2-androst~ne 17~-ol
(acétate) peut 8tre également utile en médecine
v~térinaire~ dans des indications~ sous des
~ormes pharmaeeutiques et ~ des posologies ana-
loguesaux utilisations décrites ci-des~us pour
la thérapeutiquè humaine.
-23-
