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~3~277
La présente invention concerne de nouveaux stéroides
de la série des estratétraènes substitués, leur procédé de
préparation et leur application à la synthèse de dérivé~ de la
série des estradiols marqués au tritium.
L'invention a pour objet les stéroides de formule
générale I
RO~
dans laquelle R représente de l'hydrogène ou R', R' étant un
radical acyle ayant de 1 à 5 atomes de carbone, le radical`
benzoyle substitué ou non, ou un radical tétrahydropyranyle,
trityle ou triméthylsilyle, et Rl xeprésente un radical acyle
ayant de l à 5 atomes de carbone, ;le radical benzoyle substitué
ou non ou un radical tétrahydropyrclnyle, trityle ou triméthyl-
silyle.
Lorsque R et/ou Rl représente un radical acyle
ayant de 1 à 5 atomes de carbone, il peut etre par exemple
le xeste d'acides formique, acétique, propionique, butyrique
ou valérique.
Lorsque R et/ou Rl représente un radical benzoyle
substitué, il peut etre substitué par exemple par un halogène
tel que le chlore ou le brome, par un radical alcoyle ayant
de 1 à 5 atomes de carbone, par le radical trifluorométhoxy,
ou par un radical alcoyloxy ayant de 1 à S atomes de carbone.
Parmi les produits de formule I, on citera notamment:
- l'acétate 17~ de méthoxy-ll~ estra-1,3,5(10),6-tetraen diol-3,
17
- le diacétate de méthoxy-ll~ estra-1,3,5(10),~-tetraen diol-3,
17~
~3~2~7'7
Les produits de formule générale I sont utiles en
tant que produits de départ pour la synthèse de dérivés
stéroides substitués marqués au tritium.
L'invention a également pour objet un procédé de
préparation des produits répondant à la formule générale I
ci-dessus.
Ce procédé est caractérisé en ce que l'on:
- bloque la fonction hydroxyle en position 17~ de la 11~-
méthoxy nor-testostérone au moyen d'un agent d'estérifica-
tion ou d'éthérification.
- soumet la ORl-17~ méthoxy-ll~ nor-testostérone obtenue, Rl
ayant ici et dans ce qui suit les significations précitées,
à l'action d'un agent d'halogénation,
- fait agir sur le ORl-17~ dihalogéno-2,6 méthoxy~ estren 4
one-3 résultant un agent de déshalohydratation pour obtenix le
ORl-17~ méthoxy~ estra-1,3,5(10),6-tetraen ol-3 cherché,
dont on bloque,le cas échéant,la fonction h~droxyle en 3 au
moyen d'un agent d'estérification ou d'éthérification pour
obtenir le OR'-3, ORl-17~ méthoxy-ll~ estra-1,3,5(10),6-
tetraene, R' ayant les significations précitées.
Dans les conditions préférentielles de mise en
oeuvre, le procédé de l'invention est caractérisé en ce que:
- l'agent d'estérification au moyen duquel on bloque la fonction
hydroxyle en position 17 ou en position 3 est un acide ou
un dérivé fonctionnel d'acide; ce dérivé fonctionnel peut
être l'anhydride acétique ou le chlorure de benzoyle, ~
- l'agent d'éthéri~ication au moyen duquel on bloque la fonction : :
hydroxyle en position 17 ou en position 3-est le dihydropyran,
le chlorure de trityle ou le chlorure de triméthylsilyle,
- l'agent d'halogénation à l'action duquel on soumet la ORl-
17~ méthoxy-ll~ nor-testérone est le brome dans l'acide
acétique,
-- 2 --
~36~2~77
- l'agent de déshalohydratation que l'on fait agir sur le
ORl-17~ dihalogéno-2,6 méthoxy-ll~estren-4-one-3 est le
chlorure de lithium dans le diméthyl formamide et on opère
sous atmosphère inerte.
L'invention a encore pour objet à titre de produits
industriels nouveaux et notamment à titre d'intermédiaires
nécessaires à l'exécution du procédé de l'invention, les
produits suivants:
- l'acétate:de méthoxy-ll~ nor-testostérone
- l'acétoxy-17~ dibromo-2,6 méthoxy-ll~ estren-4 one-3.
Comme déjà indiqué les produits de formule générale
1 sont les produits de départ pour la synthèse de dérivés
stéroides marqués au tritium. Leur application en tant que
tels est également un objet de la présente invention et est
caractérisée en ce que l'on:
- réduit un produit de formule générale I, dans laquelle R
et Rl ont les significations précitées, par action d'hydro-
gene tritié en présence d'un catalyseur,
- soumet le ~6,7 3~/ OR-3 ORl-17~ méthoxy-ll~ estra-1,3,5(10)-
triène à l'action d'une base forte, ou d'un acide faible en
milieu aqueux, ou d'un hydracide, pour obtenir le /6,7-3~/ mé-
méthoxy-ll~ estra-1,3,5(10)-trien diol-3,17~ que l'on oxyde,
selon la réaction d'Openauer, en ~6,7-3~J hydroxy-3 méthoxy-
11~ estra-1,3,5~10)-trien one-17, au moyen de cyclohéxanone
en présence d'isopropylate d'aluminium,
- soumet ce dernier à l'action d'un agent d'éthynylation, en
présence de ter-amylate de sodium dans le toluène et obtient
le /6,7 - 3~/ méthoxy-ll~ éthynyl-17~ estradiol.
Dans les conditions préférentielles de mise en oeuvre,
cette application est caractérisée en ce que :
- le catalyseur est l'hydroxyde de palladium,
- la base forte est la soude et on opère dans le méthanol,
~L~3~77
- l'acide aqueux faible est l'acide acétique,
- l'hydracide est l'acide chlorhydrique
- et l'agent d'éthynylation est l'acétylène.
L'invention a égalemen-t pour objet, à titre de
produits industriels nouveaux et notamment à titre d'intermé-
diaires nécessaires ~ l'exécution du procédé d'application
des produits de formule générale I, objet de l'invention, les
produits suivants :
- le /6,7-3~/ diacétate de méthoxy-ll~ estra-1,3,5(10)-trien
diol-3 17
- le /5,7-3~/ méthoxy-ll.~ estra-1,3,5(10)-trien diol-3,17~
- le ~6,7-3~) hydroxy-3 méthoxy 11~ estra 1,3,5(10)-trien one-17.
Parmi ces produits, le ~6,7-3~/ méthoxy-ll~ estra-1,3,
5(10)-trien diol-3, 17~ et le /6,7-3~) hydroxy-3 méthoxy-ll~ :
estra-1,3,5tlO)-trien one-17, présentent un intéret particulier~
Ces produits conduisent notamment au /6,7-3~/ méthoxy-
11~ éthynyl-17~ estradiol ~ui présente une activité spécifique
de l'ordre de 52 Ci/mM.
Ce dernier produit permet l'étude et le dosage du
20 . récepteur spécifique d'estrogène présent dans les cellules
des tissus ou organes cibles de l'action des estrogènes, comme
l'utérus, le vagin, l'hypophyse, l'hypotalamus et les tumeurs,
comme par exemple du sein, de la prostate ou de l'adénome,
aussi bien chez l'animal que chez l'homme. En effet ce produit
ne se fixe pas avec les protéines plasmatiques liant les
hormones telles que-la testostérone et l'estradiol, chez la
femme c'est un marqueur de choix du.récepteur tissulaire des
estrogènes avec lequel il forme un complexe de forte affinité :
et de grande stabilité, d'autant qu'il n'a aucune interaction
avec les récepteurs tissulaires des autres classes d'hormones
stéroidiennes (glucocorticoides, minéralocorticoides, androgènes
ou progestogènes).
- 4
1~3~t7t7
Enfin, il permet le dosage du méthoxy~ éthynyl-
17~ estradiol dans le plasma ou d'autres liquides biologiques
par radioimmuno essai.
L'utilisation du /6,7-3~/ méthoxy~ éthynyl-17~
estradiol a été décrite par J.P. RAY~AUD et coll., "Progesterone
receptors in normal and Neoplastic Tissues", ed. W.L. Mc GUIRE
et A1., Raveh Press, New York, 1977, p.p. 171-191.
Le produit de départ du procédé de préparation des
produits de formule générale I, le ll~-méthoxy nor-testostérone
a été décrit dans le brevet français 2 115 033.
- Les exemples suivants illustrent à titre non limitatif
la mise en oeuvre de l'invention.
Exemp~e I - Diacétate du métho~ estra-1,3,5(10),6-tétraene
diol-3-17~
Stade A : Méthoxy-ll~-acétoxy-17~ nor-testosterone
On dissout 15 g de méthoxy-ll~ nor-testostérone dans
75 cm3 de pyridine et 37,5 cm3 d'anhydride acétique. On agite
13 heures à température ambiante. Puis, on ajoute 350 cm3 d'eau
et de glace A Après 30 minutes d'agitation à 0 ~ 5C, on essore
et on lave avec de l'eau glacée. On sèche sous vide à tempéra-
ture ambiante et on obtient 16,7 g du produit désire fondant à
+ 140C. Ce produit est recristallisé dans l'éther isopropyli-
que.
Point de fusion : + 140C
Analyse : C21H30O4
Calculé : C% 72,80 ~/Q 8,73 O% 18,47
Trouvé : 72,9 8,5
/ ~-/D = + 5835 (C = 1,2 % dans 1'éthanol)
Stade B Acétoxy-17~ dibromo-2 6 méthoxy-ll~ estrène-4 one-3
_______ ' ______ ___ __________L________ ___ ________________
On dissout 11,7 g du produit obtenu au stade A dans
117 cm3 d t éther anhydre. En maintenant la température à 20C
on ajoute, en 30 minutes, 10,78 g de brome en solution dans
~3~;~77
58,5 cm3 d'acide acétique. On agite encore 15 minutes puis
on chasse l'éther sous vide à 30C L'extrait sec est repris
par 250 ml d'eau. On extrait la phase aqueuse par du chlorure
de méthylène, lave la phase organique avec une solution saturée
de bicarbonate et ensuite par de l'eau, la sèche sur sulfate
de sodium anhydre. Cette solution d'acétoxy-17~ dibromo-2,6
méthoxy~ estrène-4 one-3 dans le chlorure de méthylène est
utilisée telle quelle pour le stade suivant de la synthèse.
Stade C : Acétate-17~ méthoxy-ll~ estra-l 3 5(10) 6 tetraène
_______ __________._______ ___ .._______L_L_____L__________
diol-3L 17
- On mélange 10,53 g de chlorure de lithium et 117 cm3
de diméthyl formamide. On chauffe sous agitation et sous azote
jusqu'à 110-115C puis on ajoute la solution chlorométhyléni-
que obtenue au stade précédent. On chasse le chlorure de
méthylène par distillation puis on laisse 2 heures à 110-115C
sous agitation et sous azote. On re~roidit à ~ 20C et on
verse sur 500 cm3 d'eau et de glace. La gomme obtenue est
extraite par du chlorure de méthyl~ne~ On lave la phase
organique avec une solution saturée de bicarbonate de sodium
puis ~ l'eau. On sache sur sulfate de sodium. Après évapora-
- tion ~ sec sous vide à +30C, on obtient un résidu que l'on
purifie par chromatographie sur silice, (éluant benzène 9
acétate d'éthyle 1). Le produit obtenu est lavé au benzène
et séché.
On obtient 4,267 g de produit cherché.
F. = ~ 189C
Les eaux mères reprises par du benzène donnent un 2ème jet de
860 mg de produit fondant à ~ 189C.
Stade_D : Diacetate du méthox~ estra-1,3,5(10),6 tetraene
diol-3,17~ ~-
On dissout 4,1 g de produit obtenu au stade précédent
dans 20 cm3 de pyridine et 10 cm3 d'anhydride acétique. On
agite à 20C pendant 16 heures puis on ajoute 100 cm3 d'eau et
de glace. La gomme formée est extraite au chlorure de méthylène.
On lave la phase organique à l'acide chlorhydrique N puis par
une solution saturée de bicarbonate de sodium et enfin par de
l'eau. On sèche sur sulfate de sodium anhydre puis on évapore
à sec sous vide. On obtient 4,49 g d'une httile incolore.
~ .
Spectre W
1. dans l'éthanol
_ _ _ _ _ 1 %
max. 220 nm 1 cm 712 ~ = 27.400
infl. vers 225 nm 656
max. 263 nm 223 = 8.600
infl. vers 269-270 nm 145
infl. vers 289 nm 43
max. 300 nm 25 ~ = 960
2 dans la soude éthanoli~ue N/10
max. 241 nm Elcm 776 ~ = 29.800
infl. vers 267 nm 124
max. 328 nm 57 =- 2.200
Exemple II . /6,7-3H7 méthoxy-llb éthynyl-17~ estradiol
Stade A : Diacetate du ~6L7- HZ methoxy~ _stra-1~3L5(10)triène
diol 3,17~
_________
On refroidit par l'azote liquide le mélange réactionnel
constitué par 45,2 g de diacétate de méthoxy-ll~ estra-1,3,5
(10?,6 tétraène diol-3,17~, 10 mg de noir palladié et 0,6 cm3
d'acétate d'éthyle redistillé, puis introduit SOU5 vide 3,87 cm3
de tritium, mesurés à 0C et ~ pression normale d'une activité
totale de 10 Ci. Puis on laisse revenir le rnélange réactionnel
à température ambiante, maintient SOtlS agitation pendant 3
heures, récupère l'excès de tritium, filtre, distille sous
pression réduite le solvant et, après élimination du tritium
labile, obtient 46 mg de diacétate du /6,7-3~J méthoxy-ll~
~3~7~
.
estra-1,3,5~10)triène diol-3,17~ cherché d'une activité
spécifique de 54,03 Ci/mM.
Stade B : ~ ,7-3~ méthoxy-ll~ estra-1,3,5(10) triène diol-3,
_______ ___ _______ ___ _________________ ____~_______
17~
_ _
On agite sous courant d'azote 41 mg du produi-t obtenu
au stade précédent, 4 cm3 de méthanol redistillé, 0,5 cm3 d'eau
et 0,5 cm3 de lessive de soude 36Bé. On porte au reflux sous
agitation et sous azote pendant 2 heures~ ~près refroidissement
à 20C on ajoute 0,5 cm3 d'acide acétique et 1,5 cm3 d'eau.
Le produit cristallise. Qn glace 1 heure puis on essore et
lave à-l'eau glacée. On sèche sous vide en présence d'anhydride
phosphorique. On obtient 30,6 mg de produit cherché.
F. = + 245C
~ctivité spécifique 52 Ci/mM.
Stade C : /6,7 3~ hydroxy-3 methoxy-ll~ estra-1,3,5(10)
triène one-17
_____________
On amène à 50C, sous argon, 20,9 mg du produit
obtenu au stade précédent avec 5 cm3 de toluène et 2 cm3 de
cyclohexanone. On distille sous passage d'argon 1 cm3 de
toluène. Puis on introduit, en 30 minutes au total, ~ fois
1 cm3 d'une solution d'isopropylate d'aluminium dans 50 cm3
de toluène, en distillant au fur et ~ mesure, de fa~con ~ main-
tenir le volume constant. On laisse encore 15 minutes au
reflux sous argon. Ensuite on introduit, en distillant au
fur et à mesure, une solution de 1 g de tartrate de sodium ~
et de potassium dans 10 cm3 d'eau. On entraîne les solvants ~-
à la vapeur d'eau. On refroidit dans un bain de glace. Le
produit cristallise~ On agite 30 minutes à 0 avant d'essorer.
On lave à l'eau, on sèche sous vide en présence d'anhydride
phosphorique à température ambiante. On obtient 18,8 mg de
produit brut que l'on utilise tel quel pour le stade suivant
de la synthèse.
-- 8 --
3~2~7
Stade D : ~6,7-3~ methoxy-ll~ ethxn~1-17~ estrad~ol
Dans 10 cm3 d'une solution de ter-amylate de sodium
à 2,8 g de Na pour 100 cm3 on fait barboter de l'acétylène
pendant 2 heures. Puis on ajoute dans le produit obtenu au
stade précédent dissous dans 2,5 cm3 de tétrahydrofurane. On
maintient le barbotage d'acétylène pendant 5 heures sous
agitation et à température ambiante. On remplace le barbotage
d'acétylène par de l'argon et on acidifie immédiatement,
en refroidissant dans un bain de glace, par 2 cm3 d'acide -
acétique à 50 % d'eau. On extrait ~ l'éther et on lave à l'eau
jusqu'~ neutralité. On sèche sur sulfate de sodium. Cette
solution est concentrée sous vide. On obtient 25 mg de produit
que l'on dissout dans 1 cm3 de tétrahydrofurane pur, pour faire
une chromatographie sur plaque, avec, comme solvant de migration.
le système benzène 7 acétate d'éthyle 3. Le produit est isolé
par élution avec un mélange chlorure de méthylène 1 acétone 1.
On concentre sous vide et on obtient 11,1 mg de produit solvaté
26%, soit 8,17 mg en produit non solvaté.
~ctivité spécifique : 52 Ci/mM.
_ g _
. .~. . ,
