Note: Descriptions are shown in the official language in which they were submitted.
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Ceci est une division de la demande de brevet
canadien né 446 183 déposée le 27 janvier 1984.
La présente invention concerne des compositions
pharmaceutiques antiallergiques renfermant à titre de
principe actif une ou plusieurs acylglycoprotéines immuno-
stimulantes extraites de Klebsiella pneumonie.
La demande publiée de brevet français né 2 490
496, ainsi que la demande publiée de brevet européen né
0 049 182 décrivent notamment de nouvelles glycoprotéines
immunostimulantes extraites de Klebsiella pneumonie caraco
théoriser en ce qu'elles renferment 30% à 45% de protéines,
30~ à 40% d'oses neutres, moins de 4% d'acide glucuronique,
2% à 5% dos amines et ont un poids moléculaire d'environ
350 000 dations. Elles décrivent plus particulièrement les
protéines ci-dessus caractérisées en ce que la fraction pro-
trique est composée par environ 30% d'acides aminés acides,
en ce que la fraction polysaccharidique renferme approxima-
vivement une molécule de glucose pour quatre molécules de
galactose et est essentiellement composée de la répétition
de l'unité polysaccharidique dont la structure est la sui-
vante:
3galactose1) m galactosel glucose
dans laquelle m est un nombre entier égal à 3, 4 ou 5. Dans
cette structure n est un nombre entier égal ou peu différent
de 94 lorsque m est égal à 5.
Ces demandes décrivent aussi l'activite immunosti-
mutante lesdites glycoprotéines.
Les études effectuées par la Demanderesse depuis le dépôt de ces demandes publiées ont permis de préciser la
structure de ces glycoprotéines. Il s'agit bien de glyco-
protéines, mais plus précisément d'acylglycoprotéines, dont
-- 1 --
y,
12;~88~3
la chaîne polysaccharidique est reliée à un reste asparagine
de la chaîne protéique par un cure formé datasse et de
2-céto-3-déoxy-octulosonate, suivi d'une partie asile compare-
tant de l'acide ~7-hydroxymiristique, puis de la N-acétyl-
5 glucosamine. Ces études ont également permis de mettre en évidence l'activité antiallergique lesdites glycoprotéines.
Plus particulièrement lorsqu'elles sont formulées
à l'aide d'un excipient approprié, les glycoprotéines telles
que décrites dans la demande de brevet français né 2 490 496,
ainsi que dans la demande de brevet européen né 0 049 182, de même que
celles décrites dans le brevet français né 2 171 907, sont
douées de remarquables propriétés antiallergiques.
La présente demande a donc pour objet des compost-
lions pharmaceutiques destinées au traitement de maladies
allergiques, caractérisées en ce qu'elles sont constituées
d'une ou plusieurs acylglycoprotéines immunostimulantes
extraites de Klebsiella pneumonie et notamment telles que
décrites et revendiquées dans la demande de brevet français
né 2 490 496, ainsi que dans la demande de brevet européen
né 0 049 182, de même que celles décrites dans le brevet
français né 2 171 907, dans un excipient approprié pharmaceu-
tique ment acceptable.
Ces glycoprotéines sont caractérisées en ce qu'elles
renferment 30% à 45% de protéines, 30 à 40% d'oses neutres,
moins de 4% d'acide glucuronique, 2 à 5% dos amines et ont
un poids moléculaire d'environ 250 000 dations.
Plus particulièrement la fraction protéique est
composée par environ 30% d'acides aminés acides, la fraction
polysaccharidique renferme approximativement une molécule
de glucose pour quatre molécules de galactose et est haussent-
tellement composée de la répétition de l'unité polysacchari-
digue dont la structure est la suivante:
fi .
1;~28~13
3galactosel) 3galactosel glucose n
où m est un nombre entier égal à 3, 4, ou 5, et n un nombre
entier égal ou peu différent de 94 lorsque m est égale à 5.
Avantageusement, ces compositions pharmaceutiques
peuvent être solides ou liquides et se présenter sous les
formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine
humaine, pour le traitement des maladies allergiques, comme
par exemple les comprimés, simples ou dragéifiés, les gué-
fuies, les sirops, les aérosols, les suppositoires, les
préparations injectables, les crèmes, les pommades; elles
sont préparées selon les méthodes usuelles. Le ou les
principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients
habituellement employés dans ces compositions pharmaceuti-
que, tels que le talc, la gomme rabique, le lactose,
l'amidon, le strate de magnésium, le beurre de cacao, les
véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou
végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers
agents mouillant, dispersant ou émulsifiants, les corser-
valeurs, les colorants, les aromatisant.
Les compositions, objet de l'invention, trouvent
en particulier leur utilisation dans le traitement des
allergies respiratoires telles que les rhinites allergiques
ou les trachéites ou laryngites, des allergies cutanées
telles que l'eczéma ou l'urticaire, des allergies oculaires
ou des manifestations allergiques de diverses origines:
piqûres animales ou allergies alimentaires par exemple.
Les glycoprotéines utilisées pour la réalisation
des compositions objet de l'invention, peuvent notamment
être obtenus selon le procède de la demande principale.
Selon ce procédé, l'on prépare, par dia filtration d'un
extrait de lissa de cultures de Klebsiella pneumonie, une
solution de glycoproteines purifiées, traite ladite solution
à l'aide d'un halogénure d'un ammonium quaternaire, et isole
3 --
~28~
le surnageant par élimination du précipité ainsi obtenu,
ledit procède étant caractérisé en ce que l'on concentre le
surnageant par utilisation d'au moins un dispositif de
sélection de molécules, traite à froid le concentré à l'aide
d'au moins un alcanol de faible poids moléculaire, isole le
précipité ainsi obtenu, si désiré le lave à l'aide d'au
moins un alcanol de faible poids moléculaire, et le sèche.
Les produits de départ du procédé objet de la
demande principale, peuvent être prépares comme indiqué dans
le brevet français né 2 171 907, c'est-à-dire par exemple
par mise en culture des germes (Klebsiella pneumonie CLIP
52145) identique à la souche déposée par la demanderesse le
29 juin 1981 sous le n I-163 à l'Institut Pasteur à Paris,
lys des germes, séchage (lyophilisation par exemple)
extraction à l'aide de solvants des lipides, déprotidation
physique (centrifugation par exemple), puis ultra filtration
et séchage, par exemple par lyophilisation.
Les exemples qui suivent illustrent la présente
invention, sans toutefois la limiter.
Exemple 1 :
On met en solution aqueuse à 10 goitre à QUE
pendant 16 heures, 1 kg de produit tel qu'obtenu à l'exemple
1 du brevet français né 2 171 907, préparé à partir de la
souche de Klebsiella pneumonie 52145 ou I 163 de la colle-
lion de l'Institut Pasteur. On ajoute 0,8 volume de sou-
lion à 3% de bromure de cétyltriméthylammonium à raison de 1
litre minute environ, et agite modérément pendant l heure.
On élimine le précipité formé par centrifugation en continu
à débit de 5 litres heure environ, à 62 000 g.
Le surnageant est concentré par ultra filtration
sur fibres creuses à seuil de rétention fixé à 5 000 (Allo
Fiers Lobs commercialisées par Amidon et ~omicon) en 2
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cycles de traitement dans les proportions 5/1. On ajoute à
la vitesse de 3 litres par minute, 6 volumes d'éthanol à 96%
et agite modérément pendant 15 minutes. On laisse décanter,
essore et rince le précipité, sèche à moins de QUE en pré-
songe de déshydratant, homogénéise par broyage mécanique, et obtient 200 g de produit attendu possédant les caractérisai-
que du produit décrit dans la demande de brevet français né
2 490 496, ainsi que dans la demande de brevet européen né
0 049 182.
Exemple 2 :
On a préparé des comprimés répondant à la formule:
- produit de l'exemple 1 ........................... y mg
15 - Excipient ès pour un comprimé terminé à ......... 100 mg
(Détail de l'excipient : lactose, amidon, talc, strate
de magnésium).
Exemple 3 :
On a préparé des aérosols délivrant des doses
contenant chacune :
- Produit de l'exemple 1 ........................... 0,5 mg
- Emulsifiant ...................................... 0,15mg
25 - Propulseur ................... y.......... 50 mg.
Exemple 4 :
On a préparé une crème à la formule :
30 - Produit de l'exemple 1 ............................ 1 mg
- Excipient : 2-octyl-dodécanol, alcool cetostéarylique,
cétostéaryl sulfate de sodium, parahydroxybenzoate de
méthyle et de propyle, eau purifiée................ 10 g.
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Exemple 5 :
On a préparé des comprimés répondant à la formule:
- Produit de l'exemple 1 du brevet français né 2 171 907.... lmg
- Excipient ès pour un comprimé terminé à .............. 100mg
(Détail de l'excipient : lactose, amidon, talc, strate
de magnésium).
ACTIVITÉ ANTIALLERGIQUE
Principe :
_____ _
Les sujets allergiques synthétisent des anticorps
(Immunoglobulines E ou IRE) contre l'allergène auquel ils
sont sensibles. Ces anticorps sont capables de se fixer sur
les polynucléaires (ou granulocytes) basophiles de ces
sujets et entraînent une modification de la membrane des
polynucléaires qui provoque leur dé granulation.
Test :
_ _ _ _
La technique est inspirée de celle de Benveniste
Chié.- Allergie., 1981, 11, p. 1 à 11. On prépare par déca-
talion un plasma enrichi en polynucléaires basophiles d'un
sujet sensible à un allergène donné, à partir d'une partie
de sang et 9 parties de colorant (May-Gr~nwald-Giensa). La
suspension-témoin et la suspension additionnée du produit à
tester sont mises en contact avec le même allergène. On
évalue alors la dé granulation en pourcentage:
Nombre de basophiles de la Nombre de basophiles de la
y= suspension témoin - suspension traite
Nombre de basophiles de la suspension témoin
un agent antiallergique diminue le pourcentage de
dé granulation des polynucléaires basophiles.
Résultats :
1) Allergène : poils de chat.
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A la concentration de 100 Hugues de produit de
l'exemple 1 par ml, on n'observe aucune dé granulation dans
la suspension traitée, pour une dé granulation de 61% de la
suspension-témoin.
2) Allergène : corps entier de moustique.
ut concentrations de 2 Hugues de produit de l'exemple
1 ou de produit de départ de l'exemple 1 par ml, on
n'observe aucune dé granulation dans la suspension traitée,
pour une dé granulation de 60% de la suspension témoin.
