DIPEPTIDES, LEUR PREPARATION ET LES MEDICAMENTS QUI LES CONTIENNENT

DIPEPTIDES, PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF AND PHARCAMEUTICAL PREPARATIONS CONTAINING THEM

French Abstract

PRECIS DE LA DIVULGATION:
L'invention concerne de nouveaux dipeptides répondant
à la formule générale:
<IMG> (I)
dans laquelle R-CO représente un reste d'acide gras et les
symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical
hydroxy ou amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes
de carbone (substitué le cas échéant par un radical phényle
ou nitrophényle), étant entendu que l'alanine est sous forme L
et que l'acide glutamique et ses dérivés sont sous forme D, ainsi
que leurs sels métalliques pharmaceutiquement acceptableset leurs
sels d'addition avec les bases azotées pharmaceutiquement
acceptables. Ces nouveaux dipeptides sont des adjuvants im-
munologiques et des immunostimulants.

Claims

Les réalisations de l'invention, au sujet desquelles
un droit exclusif de propriété ou de privilège est revendiqué,
sont définies comme il suit:
1. Procédé de préparation des dipeptides répondant
à la formule générale:
<IMG> (I)
dans laquelle R-CO représente un reste d'acide gras et les
symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical
hydroxy ou amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes
de carbone (substitué le cas échéant par un radical phényle
ou nitrophényle), étant entendu que l'alanine est sous forme
L et que l'acide glutamique et. ses dérivés sont sous forme D,
ainsi que de leurs sels métalliques pharmaceutiquement accep-
tables et de leurs sels d'addition avec les bases azotées
pharmaceutiquement acceptables, caractérisé en ce que:
a) l'on fait réagir un acide de formule générale:
R - COOH (II)
dans laquelle R-CO est défini comme ci-dessus, ou un dérivé
activé de cet acide, sur un dipeptide de formule générale
<IMG> (III)
dans laquelle les symboles R1 sont définis comme précédemment,
puis remplace, le cas échéant, en fonction des significations de
R1, le ou les radicaux R1 par un radical hydroxy ou amino; ou
b) l'on fait réagir un dérivé de la L alanine de formule générale:
<IMG> (IV)
dans laquelle R-CO est défini comme précédemment, ou un dérivé
activé de cet acide, sur un dérivé de l'acide glutamique de
formule générale:
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<IMG> (V)
dans laquelle R1 est défini comme précédemment, puis remplace,
le cas échéant, en fonction des significations de R1, le ou les
radicaux R1 par un radical hydroxy ou amino; ou
c) pour préparer un dipeptide de formule générale (I) dans
laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent
un radical hydroxy ou amino, on traite un produit de formule
générale:
<IMG> (VI)
dans laquelle R-CO est défini comme précédemment et un des
symboles R1 représente un radical hydroxy ou amino ou alcoyloxy
et l'autre représente un radical hydroxy ou alcoyloxy, de façon à
transformer soit un groupement ester en groupement carboxy ou
carbamoyle soit un groupement carboxy préalablement activé en
groupement carbamoyle; ou
d) pour préparer un dipeptide de formule générale (I) dans
laquelle les symboles R1, identiques ou différents, représentent
un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant un radical
hydroxy,
- soit on fixe sur un support approprié le groupement
.alpha.- ou .gamma.- carboxylique de l'acide D glutamique dont la fonction
amine est protégée et dont la fonction .gamma.- ou .alpha.- carboxylique,
selon le cas, est protégée sous forme d'amide ou d'ester,
élimine le groupement protecteur de la fonction amine, condense
la L alanine dont la fonction amine est protégé sur l'acide D
glutamique-support, puis élimine le groupement protecteur de
la fonction amine du reste L alanyle, et condense un acide
gras de formule générale (II) définie précédemment sur le
dipeptide-support, coupe la liaison dipeptide-support et
élimine, le cas échéant, le groupement protecteur de la
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fonction acide de l'acide D glutamique,
- soit on fixe sur un support approprié le dipeptide
provenant de la condensation de la L alanine sur l'acide D
glutamique, la fonction amine du reste L alanyle et, le cas
échéant, la fonction .alpha.-acide de l'acide D glutamique étant
protégée, élimine le groupement protecteur de la fonction
amine, puis condense un acide gras de formule générale (II)
définie précédemment sur le dipeptide ainsi fixé, coupe la
liaison dipeptide-support et élimine, le cas échéant, le
groupement protecteur de la fonction acide de l'acide D-
glutamique,
- soit on fixe sur un support approprié le groupement
.alpha.- ou .gamma.- carboxylique de l'acide D glutamique dont la fonction
est protégée et dont la fonction .gamma.- ou .alpha.- carboxylique, selon
le cas, est protégée sous forme d'amide ou d'ester, élimine le
groupement protecteur de la fonction amine, puis condense un
dérivé de la L alanine de formule générale (IV) définie précé-
demment sur l'acide D glutamique-support, coupe la liaison
acide D glutamique-support et élimine, le cas échéant, le
groupement protecteur de la fonction acide de l'acide D glu-
tamique,
- puis sépare le dipeptide de formule (I) obtenu; et
e) le cas échéant, on transforme le dipeptide de formule générale
(I) ainsi obtenu en un sel métallique pharmaceutiquement accep-
table ou en un sel d'addition avec une base azotée pharmaceuti-
quement acceptable.
2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
en ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale
(II), (IV) ou (VI) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène
ou un radical alcoyle contenant 1 à 44 atomes de carbone,
substitué le cas échéant par un radical hydroxy, phényle ou
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cyclohexyle, alcényle contenant 2 à 29 atomes de carbone et
pouvant contenir plus d'une double liaison, ou un reste d'acide
mycolique.
3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
en ce que l'on fait réagir un acide de formule générale:
R - COOH (II)
dans laquelle R-CO est défini comme dans la revendication 1, ou un dérivé
activé de cet acide, sur un dipeptide de formule générale:
<IMG> (III)
dans laquelle les symboles R1 sont définis comme dans la revendication 1,
puis remplace, le cas échéant, en fonction des significations de
R1, le ou les radicaux R1 par un radical hydroxy ou amino.
4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé
en ce que l'on fait réagir un dérive de la L alanine de formule
générale:
<IMG> (IV)
dans laquelle R-CO est défini comme dans la revendication 1, ou un dérivé
activé de cet acide, sur un dérivé de l'acide glutamique de
formule générale:
<IMG> (V)
dans laquelle R1 est défini comme dans la revendication 1, puis remplace,
le cas échéant, en fonction des significations de R1, le ou les
radicaux R1 par un radical hydroxy ou amino.
5. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en
ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale
(III) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents,
représentent un radical hydroxy ou amino.
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6. Procédé selon la revendication 4, caractérisé
en ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale
(V) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents,
représentent un radical hydroxy ou amino.
7. Procédé selon la revendication 1, pour la prépa-
ration d'un dipeptide de formule générale (I) dans laquelle
les symboles R1, identiques ou différents, représentent un
radical hydroxy ou amino, caractérisé en ce que l'on traite
un produit de formule générale:
<IMG> (VI)
dans laquelle R-CO est défini comme dans la revendication 1 et un des
symboles R1 représente un radical hydroxy ou amino ou alcoyloxy
et l'autre représente un radical hydroxy ou alcoyloxy, de façon
à transformer soit un groupement ester en groupement carboxy
ou carbamoyle soit un groupement carboxy préalablement activé
en groupement carbmoyle.
8. Procédé selon la revendication 3, caractérisé
en ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale
(III) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents,
représentent un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant
un radical hydroxy.
9. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en
ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale
(V) dans laquelle les symboles R1, identiques ou différents,
représentent un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant
un radical hydroxy.
10. Procédé selon la revendication 1, pour la prépa-
ration d'un dipeptide de formule générale (I) dans laquelle

les symboles R1, identiques ou différents, représentent un
radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant un radical hydroxy,
caractérise en ce que:
- soit on fixe sur un support approprié le groupement
.alpha.- ou .gamma.- carboxylique de l'acide D glutamique dont la fonction
amine est protégée et dont la fonction .gamma.- ou .alpha.- carboxylique,
selon le cas, est protégée sous forme d'amide ou d'ester,
élimine le groupement protecteur de la fonction amine, condense
la L alanine dont la fonction amine est protégée sur l'acide D
glutamique-support, puis élimine le groupement protecteur de
la fonction amine du reste L alanyle, et condense un acide gras
de formule générale (II) telle que définie dans la revendication
1 sur le dipeptide-support, coupe la liaison dipeptide support
et élimine, le cas échéant, le groupement protecteur de la fonc-
tion acide de l'acide D glutamique,
- soit on fixe sur un support approprié le dipeptide
provenant de la condensation de la L alanine sur l'acide D
glutamique, la fonction amine du reste L alanyle et, le cas
échéant, la fonction .alpha.-acide de l'acide D glutamique étant
protégées, élimine le groupement protecteur dé la fonction amine,
puis condense un acide gras de formule générale (II) telle que
définie dans la revendication 1 sur le dipeptide ainsi fixé,
coupe la liaison dipeptide-support et élimine, le cas échéant,
le groupement protecteur de la fonction acide de l'acide D-
glutamique,
- soit on fixe sur un support approprié le groupement
.alpha.- ou .gamma.- carboxylique de l'acide D glutamique dont la fonction
est protégée et dont la fonction .gamma.- ou .alpha.-carboxylique, selon
le cas, est protégée sous forme d'amide ou d'ester, élimine le
groupement protecteur de la fonction amine, puis condense un
dérivé de la L alanine de formule générale (IV) telle que définie
dans la revendication 1 sur l'acide D-glutamique-support, coupe
la liaison acide D glutamique-support et élimine, le cas échéant, le
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groupement protecteur de la fonction acide de l'acide D glu-
tamique,
- puis sépare le dipeptide de formule (I) obtenu.
11. Procédé selon la revendication 5, caractérisé
en ce que l'on traite le dipeptide de formule générale (III)
par un acide de formule générale (II) dans laquelle R représente
un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de
carbone.
12. Procédé selon la revendication 6, caractérisé
en ce que l'on traite le dérivé de l'acide glutamique de formule
générale (V) par un dérivé de la L alanine de formule générale
(IV) dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle
contenant 8 à 20 atomes de carbone.
13. Procédé selon la revendication 7, caractérisé
en ce que l'on opère au départ d'un réactif de formule générale
(VI) dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle
contenant 8 à 20 atomes de carbone.
14. Procédé selon la revendication 10, caractérisé
en ce que l'on utilise un réactif de formule générale (II)
ou (IV) dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou
alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone.
15. Procédé selon la revendication 3, caractérisé
en ce que l'on fait réagir un acide de formule générale (II)
dans laquelle R représente un radical alcanoyle ou alcénoyle
contenant 8 à 20 atomes de carbone, sur un dipeptide de
formule générale (III) dans laquelle les symboles R1, identiques
ou différents, représentent un radical hydroxy, amino ou benzyl-
oxy.
42

16. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en
ce que l'on fait réagir un dérivé de la L alanine de formule
générale (IV) dans laquelle R représente un radical alcanoyle
ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone, sur un dérivé
de l'acide glutamique de formule générale (V) dans laquelle
les symboles R1, identiques ou différents, représentent un
radical hydroxy, amino ou benzyloxy.
17. Les dipeptides répondant à la formule générale:
<IMG> (I)
dans laquelle R-CO représente un reste d'acide gras et les
symboles R1, identiques ou différents, représentent un radical
hydroxy ou amino ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes
de carbone (substitué le cas échéant par un radical phényle
ou nitrophényle), étant entendu que l'alanine est sous forme
L et que l'acide glutamique et ses dérivés sont sous forme D,
ainsi que de leurs sels métalliques pharmaceutiquement accep-
tables et de leurs sels d'addition avec les bases azotées
pharmaceutiquement acceptables, chaque fois qu'ils sont obtenus
par un procédé selon la revendication 1 ou ses équivalents
chimiques manifestes.
18. Les dipeptides de formule générale (I) telle
que définie à la revendication 17, dans laquelle R représente
un atome d'hydrogène ou un radical alcoyle contenant 1 à 44
atomes de carbone, substitué le cas échéant par un radical
hydroxy, phényle ou cyclohexyle, alcényle contenant 2 à 29
atomes de carbone et pouvant contenir plus d'une double
liaison, ou un reste d'acide mycolique, chaque fois qu'ils
sont obtenus par un procédé selon la revendication 2 ou ses
équivalents chimiques manifestes.
43

19. Les dipeptides de formule générale (I) telle
que définie à la revendication 17, chaque fois qu'ils sont
obtenus par un procédé selon les revendicatications 3 ou 4, ou
leurs équivalents chimiques manifestes.
20. Les dipeptides de formule générale (I) telle que
définie à la revendication 17, dans laquelle les symboles
R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy
ou amino, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon
les revendications 5 ou 6, ou leurs équivalents chimiques
manifestes.
21. Les dipeptides de formule générale (I) telle
que définie à la revendication 17, dans laquelle les symboles
R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy
ou amino, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé selon
la revendication 7 ou ses équivalents chimiques manifestes.
22. Les dipeptides de formule générale (I) telle
que définie à la revendication 17, dans laquelle les symboles
R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy
ou amino, l'un au moins étant un radical hydroxy, chaque fois
qu'ils sont obtenus par un procédé selon les revendications 8
ou 9, ou leurs équivalents chimiques manifestes.
23. Les dipeptides de formule générale (I) telle
que définie à la revendication 17, dans laquelle les symboles
R1, identiques ou différents, représentent un radical hydroxy
ou amino, l'un au moins étant un radical hydroxy, chaque fois
qu'il sont obtenus par un procédé selon la revendication 10 ou
ses équivalents chimiques manifestes.
24. Les dipeptides de formule générale (I) telle que
définie à la revendication 17, dans laquelle R représente un
44

radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de
carbone et les symboles R1, identiques ou différents, repré-
sentent un radical hydroxy ou amino, chaque fois qu'ils sont
obtenus par un procédé selon les revendications 11 ou 12,
ou leurs équivalents chimiques manifestes.
25. Les dipeptides de formule générale (I) telle
que définie à la revendication 17, dans laquelle R représente
un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de
carbone et les symboles R1, identiques ou différents, repré-
sentent un radical hydroxy ou amino, chaque fois qu'ils sont
obtenus par un procédé selon la revendication 13 ou ses équi-
valents chimiques manifestes.
26. Les dipeptides de formule générale (I) telle
que définie à la revendication 17, dans laquelle R représente
un radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de
carbone et les symboles R1, identiques ou différents, repré-
sentent un radical hydroxy ou amino, l'un au moins étant un
radical hydroxy, chaque fois qu'ils sont obtenus par un procédé
selon la revendication 14 ou ses équivalents chimiques manifestes.
27. Les dipeptides de formule générale (I) telle que
définie à la revendication 17, dans laquelle R représente un
radical alcanoyle ou alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de car-
bone et les symboles R1, identiques ou différents, représentent
un radical hydroxy, amino ou benzyloxy, chaque fois qu'ils
sont obtenus par un procédé selon les revendications 15 ou 16 ou
leurs équivalents chimiques manifestes.
46

Description

.5~
La présente invention concerne de nouveaux d~peptides
et leurs sels pharmaceutiquement acceptables, ainsi qu'un
procédé pour leur préparation.
Les parois bactériennes, par exemple les parois
de mycobactéries, sont constituées essentiellement d'un pepti-
doglycane formé dlacide N-acétylmuramique sur lequel sont fixés
des peptides renfermant l'enchainement L Ala-D Glu-DAP. Par
ailleurs, les parois bactériennes sont très riches en lipic1es
dont certains sont libres et extractibles et d'autres sont
liés à la structure de la paroi et sont constitués par des
acides mycoliques (acides gras géants, ~-ramifiés et ~-hydroxylés).
L'ensemble des constituants de la paroi cellulaire forme une
structure covalente composée d'un peptidoglycane et d'un mycolate
d'arabinogalactane liés en~re eux par des liaisons phospho-
diesters. Ces parois bactériennes présentent la plupart des
propriétés bioLogiques des cellules entières lorsqu'elles sont
associées à une huile minérale ou végétale et administrees
après mise en suspension dans du solute physiologique.
Dans les brevets belges 821 385, 852 34a et 852 349
sont décrits des peptides, couplés avec l'acide N-acétylmura-
mique, qui contiennent l'enchaInement L Ala-D Glu ou L Ser-D
Glu et qui sont efficaces comme adjuvants immunologiques et
comme agents antiinfectieux.
Dans le brevet français 75~Z4440, publié sous le
numéro 2 320 107, sont décrits des produits de couplage entre
un acide gras et un saccharide heptapeptide isolé à partir
d'une mycobactérie contenant une cire "D" et qui peuvent etre
représentés par la formule suivante
NAG - NIM ------~ NAG - N~M
Ala Ala
Glu Glu (R COOH)n
DAP DAp
Ala m

dans laquelle, en particulier:
NAG = N-acétylglucosamine; NAM = acide N-acétyl-
muramique; et
R = radical alcoyle contenant 9 à 17 atomes de carbone.
Ces produits sont des adjuvants immunologiques de la
production d'anticorps et de l'hypersensibilité retardée capables
d'agir seuls,- c'est-à-dire sans qu'il soit nécessaire de les
- administrer en solution huileuse.
Tous ces produits se caractérisent par la présence
d'acide N-acétylmuramique clui, d'après KASUMOTO et al.,
Tetrahedron Letters, 49, 4899 (1978), est consideré comme lié
à l'activité immunologique.
Il a maintenant été trouvé que les peptides répondant
à la formule générale (I);
R - CO - NH - f~ co NH - CH - CO - Rl (I)
CH3 CH2CH2 - CO Rl
présentent, malgré l'absence~d'acide N-acétylmuramique, des
propriétés adjuvantes et immunostimulantes remarquables. Par
ailleurs ces composés, qui sont bien définis, peuvent être
obtenus aisément avec la pureté suEEisante requise pour l'emploi
en thérapeutique.
Dans la formule géné~rale (I), R-CO représente un reste
d'acide gras et les symboles R1, identiques ou di~férents,
représentent un radical hydroxy ou amino ou un radical alcoyloxy
contenant l à 4 atomes de carbone (substitué le cas échéant par
un radical phényle ou nitrophényle), étant entenclu que l'alanine
~NH2-CI-I(CH3)COOHJ est sous forme L et que l'acide glutamique
fNH2-CH(CH2CH2COOH)COOH~ ou ses dérlvés (amides, esters) sont
sous forme D.
Dans le reste d'acide gras R-CO, R représente cle pré-
férence un atome d'h~drogène ou un radical alcoyle contenant l

à 44 atomes de carbone (substitué le cas échéant par un radical
hydroxy, phényle ou cyclohexyle), un radical alcényle contenant
2 à 29 atomes de carbone et pouvant contenir plus d'une doub].e
liaison ou un reste dlacide mycolique tel que rencontré dans
la structure de la paroi bactérienne des mycobactéries, de
Nocardia ou de corynébactéries.
Selon la présente invention, les nouveaux dipeptides
de formule générale (I) peuventêtre obtenus selon les méthodes
gënéralement utilisées en chimie peptidique. Les différentes
réactions sont mises en jeu~après blocage par des groupements
protecteurs convenables des fonctions amine ou ac.ide qui ne
doivent pas participer à la réaction et sont suivies éventuel-
lement du déblocage de ces fonctions.
Généralement, les nouveaux dipeptides de formule
générale (I) peuvent être obtenus par action d'un acide de
formule générale:
R - COOH (II)
dans laquelle R est défini comme précédemment ou d'un dérivé
activé de cet acide, sur un dipeptide de formule genérale:
H2N - ~H - CO - NM - ~H - CO - Rl (III)
. CH3 ~H2CH2 - CO Rl
dans Iaquelle les symboles Rl, identiques ou différents, sont
définis comme précédemment, suivie le cas échéant, en fonction
des signifi.cations de Rl, du remplacement d'un ou des radicaux
Rl par un radical hydr-oxy ou amino.
Lorsque dans la Eormule générale (III), les radicaux
: Rl, identiques ou différents, représentent un radical amino
ou un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone éven-
tuellement substitué par un radical phényle ou nitrophényle,
la condensation de l'acide de formule générale (II) sur le
dipeptide de formule générale (III) peut être effectuée en

présence d'un agent de condensation tel que le dicyclohexyl-
carbodiimide en opérant dans un solvant organique tel que le
chl.orure de méthylène ou le diméthylormamide a une température
comprise entre -10 et ~30C.
Lorsque dans la formule genérale (III), les radicaux
Rl représentent chacun un radical hydroxy ou bi.en l'un des
radicaux Rl représente un radical hydroxy, l'autre représentant
un radical amino ou alcoyloxy défini comme précédemment, il
est nécessaire d'activer l'acide de formule générale (II) préa-
lablement à son action sur le dipeptide de formule générale ~III).
Comme acide activé, il est particulièrement avantageux
d'utiliser un halogénure d'acide ou un anhydride mixte qui est
généralement préparé in situ par action d'un halogénoformiate
d'alcoyle (de préférence, le chloroformiate d'isobutyle) sur
l'acide de formule générale (II) en présence d'une base.
- Lorsque l'on utilise l'acide de formule générale (II)
sous forme d'un halogénure, plus particulièrement le chlorure,
la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que l'éther
diéthylique ou le chlorure de méthylène, en présence d'une base
~minérale telle que la soude, ou organique, telle que la trié-
thylamine), à une tempé~rature comprise entre ~ et 30C. Géné-
ralement, le dipept.ide de formule générale (III) est utilisé
sous forme d'un sel tel que le chlorhydrate.
Lorsque l'on utilise l'acide de formule générale ~II)
sous forme d'un anhydride mi.xte, la réaction s'effectue dans
un solvant organique tel que le dioxanne, le tétrahydrofuranne,
le chloroEorme, le toluène ou le diméthylformamide ou dans un
milieu hydroorganique, en présence d'une base (minérale, telle
que la soude, ou organique, telle que la triéthylamine), à une
température comprise entre -10 et ~30C. Généralement, le
dipeptide de formule générale (III) est utilisé sous forme d'un
-4

sel tel que le chlorhydrate.
Les nouveaux dipeptides de formule générale (1), dans
laquelle les symboles Rl, identiques ou différents, représentent
un radical hydroxy ou amino, peuvent etre obtenus à partir d'un
dipeptide de formule générale (I) dans laquelle l'un des
symboles Rl représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy
défini comme précédemment et l'autre représen-te un radical hy-
droxy ou alcoyloxy défini comme précédemment, selon les méthodes
habituelles qui permettent de transformer soit un groupement
ester en groupement carboxyou carbamoyle soit un groupement
carboxy en groupement carbamoyle.
Généralement, la transformation d'un groupement ester
en groupement carboxy peut s'effectuer soit par saponification
dans des conditions douces soit par h~drogénolyse, en particulier
lorsque l'un au moins des symboles RI représente un radical
benzyloxy ou nitrobenzyloxy.
Lorsque l'on effectue une hydrogénolyse au moyen
de l'hydrogène, on opère généralement dans un solvant organique
approprié tel que l'acide acétique (éventuellement en mélange
ave~ un autre solvant organique ~el que le méthanol) ou dans
un milieu hydroorganique en présence d'un catalyseur, tel que
le palladium, par e~emple le palladium sur noir, en opérant
à une température voisine de 20C et sous une pression voisine
de 760 mm de mercure.
Généralement, la transformation d'un groupement ester
ou carboxy en groupement carbamoyle s'effectue au moyen de
l'ammoniac anhydre en solution dans un solvant organiqué. Lorsque
l'on fait réagir l'ammoniac sur un produit de formule générale
(I) dans laquelle l'un au moins des symboles Rl représente
un radical alcoyloxy défini comme précédemmentl la réaction
s'effectue avantageusement en opérant dans le méthanol. L,orsque
--5~

~ 2~9~0 ~ ~
l'on fait réagir l'ammoniac sur un produit de formule générale
(I) dans laquelle l'un au moins des symboles Rl représente un
radical hydroxy, il est nécessaire d'activer préalablement la
ou les fonctions acide, généralement sous forme d'un ar.hydride
mixte préparé in situ par action d'un halogénoformiate d'alcoyle
tel que le chloroformiate d'isobutyle~ puis d'opérer dans les
conditions décrites ci-dessus pour l'action d'un dérivé activé
d'un acide de formule générale (II), sous forme d'anhydride
mixte, sur le dipeptide de formule générale ~I.II).
Le dipeptide de formule générale (III) peut être
obtenu selon des méthodes connues par condensation de la L-
alanine dont la fonction amine est protégée sur l'acide D-
glutamlque dont les fonctions acides sont éventuellement pro-
tégées, puis élimination du groupement protecteur de fonction
amine~ .
- . Selon l'inventi.on, les nouveaux dipeptides de ~ormule
générale (I) peuvent être ég~alement obtenus par aation d'un
dérivé de la L-alanine de formule générale:
R - CO - NH - ~H - COOH (IV)
~1-13
dans laquelle R est défini comme précédemment, sur un dérivé
de l'acide D-glutamique de formule générale:
H N CH CO R (V)
CH2CH2 - CO Rl
dans laquelle les symboles Rl, ident:iques ou différents, sont
déflnis comme précédemment, suivie le cas échéant, selon les
significations de Rl, du remplacement d'un ou des radicaux
Rl par un radical hydroxy ou amino.
Il est particulièrement avantageux d'activer la fonction
acide du dérivé de la L-alanine de formule générale (IV),
généralement sous forme d'un anhydride mixte préparé in situ

~'~5~
préalablement à l'action sur le produit de form~lle ~énérale
(V), en particulier si l'un au moins des symboles ~1 représente
un radical hydroxy. Lorsque les fonctions acides de l'acide
D-glutamique sont protégées, c'est-à-dire si les symboles R1,
identiques ou différents, représentent un radical amino ou
alcoyloxy défini comme précédemment, la condensation de l'acide
de formule générale (IV~ sur le dérivé de l'acide D-glutamique
de formule générale (V~ peut etre effectuée en présence d'un
agent de condensation tel que le dicyclohexylcarbodiimide.
Généralement, la condensation du dérivé de la L-alanine
de formule générale (IV) sur le dérivé de l'acide D-glutamique
de formule générale (V) s'effectue dans les conditions décrites
ci-dessus pour la condensation de l'acide de formule générale
~II) sur l'aminoacide de formule générale (III).
Le dérivé de la L-alanine de formule générale (IV)
peut être obtenu par action d'un acide de formule générale ~II)
ou d'un dérivé activé de cet~acide sur la L-alanine don~ la
fonction acide est éventuellement protégée sous Eorme d'ester,
suivie le cas écheant de l'élimination du groupement protecteur
de la fonction acide.
~Lorsque la fonction acide de la L-alanine est protégée,
.~ .
la condensation de l'acide de formule générale (II) est géné-
ralement effectuée en présence d'un agent de condensation tel
que le dicyclohexylcarbodiimide en opérant dans un solvant
organique tel que le chlorure de méthylène ou le diméthylforma-
mide à une température comprise entre -10 et -~ 30C.
Lorsque la fonction acide de la L-alanine est libre,
il est nécessaire d'activer llacide de ormule générale (II)
préalablement à son action sur la L-alanine. Comme dérivé
activé de l'acide de formule yénérale (II), il est particulière-
ment avantageux d'utiliser un halogénure d'acide ou un anhydride

~æ~
mixte. On opère alors dans le~ conditions décrites précédem-
ment pour l'action d'un acide de formule générale (II) sur un
dipeptide de formule générale (III).
Selon l'invention, les nouveaux produits de ~ormule
générale (I) dans laquelle les symboles Rl, identiques ou
différents, représentent un radical hydroxy ou amino, l'un
au moins étantun radical hydroxy et R est.défini comme précé-
demment peuvent être obtenus par synthèse peptidique de Mer-
rifield en phase solide.
Selon l'invention, les produits de formule générale
(I) tels que définis ci-dessus peuvent être obtenus en réalisant
la succession des phases suivantes:
1) fixation du groupement a- ou ~- carboxylique de l'acide
D glutamique dont la fonction amine est protégée et dont la
fonction ~- ou ~- carboxylique, selon le cas, est protégée sous
forme d'amide ou d'ester, sur un support approprié,
2) élimination du groupement protecteur de la fonction am.ine
sans toucher à la liaison acide glutamique-support et, éven-
tuellement, à la fonction ester du deuxième groupement carboxy-
lique de l'acide D glutamique,
3) condensation de la L alanine dont la fonction amine est
protégée par un gro~pement protecteur convenabl.e sur l'acide
D glutamique fixé sur son support,
4) élimination du groupement protecteur de la fonction amine
du reste L alanine sans toucher à la liaison acide D glutamique-
support et, éventuellement, à la fonction ester du deuxième
groupement carboxylique de l'acide D glutamique,
5) condensation de l'acide gras sur le dipeptide-suppor~ obtenu,
6) coupure de la liaison acide D glutamique-support avec éven-
tuellement élimination du groupement protecteur de la fonction
~- ou ~- carbox~lique de l'acide glutamique, et
--8--

o~
7) séparation du dipeptide de formule générale (I) ainsi
obtenu.
Les supports qui conviennent particullèrement bien
sont les copolymères styrène-divinylbenzène chloromé-thylés ou
hydroxyméthylés. De préférence, les copolymères styrène-
divinylbenzène (98~2 ou 99~1) chlorométhylés sont utilisés.
La fixation de l'acide D glutamique convenablement
protégé sur le support chlorométhylé s'effectue selon les
méthodes habituelles en faisant réagir llaminoacide, en solution
dans un solvant organique tel que l'éthanol, sur la résine
en présence d'une base organique telle que la triéthylamine.
Il est particulièrement avantageux de chauffer le mélange réac-
tionnel jusqu'à une température voisine de la température
d'ébullition du solvant.
Les groupements protecteurs de la fonc-tion amine
et, éventuellement, d'une des fonctions acides de llacide D
glutamique doivent être choisis de telle manière que l'elimina-
tion du groupement protecteur cle la fonction amine s~efEectue
sans toucher ni à la liaison aminoacide-support ni au groupement
protecteur de la fonction acide.
Généralement, la fonction acide de l'acide D glutamique
qui doit être protégée, est sous la forme d'ester benzy~ique
qui s'élimine en milieu acide au moyen, par exemple, d'un mélange
acide bromhydrique-acide trifluoroacétique anhydre et le groupe-
ment protecteur de la fonction amine est le radical t.-butyloxy-
carbonyle qui s'élimine, par exemple, au moyen d'un mélange
acide trifluoroacétique-chlorure de méthylène.
~ La L alanine, dont la fonction amine est protégée,
de préférence par un groupement t.-butyloxycarbonyle, est
condensée sur l'acide D glutamique-support selon les méthodes
habituelles utilisées en chimie peptidique.

~.51~
,
Généralement, la réaction est effec-tuée en présence
d'un agent de condensation tel qwe le dicyclohexylcarbodiimide
dans un solvant organique tel que le chlorure de méthylène.
L'élimination du groupement protecteur de la fonction
amine du reste L alanyle ~'effectue dans les conditions indi-
quées précédemment pour~l'élimination du groupement protecteur
de la fonction amine de l'acide D glutamique.
L'acide gras est conde~nsé sur le dipeptide-support
ainsi obtenu selon les méthodes habituelles et en particulier
selon celle qui est indiquée précédemment pour la condensation
de la L-alanine sur l'acide D glutamique-support.
La coupure de la liaison acide D glutamique-support,
qui est de nature ester benzylique, et éventuelIement l'élimi-
nation du groupement protecteur de la fonction carboxylique
de l'acide D glutamique sont généralement effectuées simul-
tanément. De préférence, on utilise un mélange acide bromhy-
drique-acide trifluoroacétiqlie anhydre.
Le produit de formule générale (I) est séparé c1u
mélange réactionnel selon les méthodes habituelles. ~e support
est separé par filtration ek le dipeptide de forrnule générale
(I) est séparé du filtrat après concentration à sec et après
purification selon les méthodes physicochimiques.
Selon une variante du procédé décrit ci-dessus, il
est possible de condenser sur l'acide D glutamique-support la
L alanine dont la fonction amine est protégée par un reste
d'acide gras tel que défini précédemment. Dans ces conditions,
la condensation de la L alanine sur l'acide D glutamique-support
conduit directement au produit de formule genérale (I) qui est
séparé après coupure de la liaison acide D glutamique-support
et élimination éventuelle du groupement protecteur de la fonction
acide de l'acide D glutamique.
--10--

Selon une autre varianke du procédé décrit ci-dessus,
il est possible de fixer sur un support approprié le dipeptide
provenant de la condensation de la L alanine sur l'acide D
glutamique puis de condenser l'acide gras sur le dipeptide ainsi
fixé et enfin séparer le produit obtenu. Lors de la fixation
du dipeptide sur le support, il est nécessaire de protéger
la fonction amine du reste L alanyle et éventuellement la
fonction a-acide de l'acide ~ glutamique en utilisant de préfé-
rence les groupements protecteurs indiqués précédernment. Dans
ces conditions, la condensation de l'acide gras sur le dipeptide
fixé sur son support, dont le groupement protecteur de la fonc-
tion amine a été ~liminé, conduit directement au produit de
formule générale (I) qui est séparé après coupure de la liaison
acide D glutamique-support et élimination éventuelle du grou-
pement protecteur de la fonction acide de l'acide D glutamique.
Les nouveaux dipeptides de formule générale (I)
peuvent être éventuellement purifiés par des méthodes physiques
telles que la cristallisation ou la chromatographie.
Les nouveaux pro~uits selon l'invention peuvent etre
transformés en -sels métalliques ou en sels d'addition avec les
bases azotées selon la nature du substituant Rl~
Les~sels métalliques et les sels d'addition avec les
bases organiques peuvent être obtenus par action des nouveaux
composés sur des bases dans un solvant approprié. Généralement,
on solubllise le produitdans l'eau par addition de la quantité
théorique de base pUiS on lyophilise la solution obtenue.
Les nouveaux composés selon la présente invention sont
des adjuvants etdés stirnulants de l'imrnunité: ils augmentent
les réactions d'hypersensibilité et/ou la production d'anticorps
circulants vis-à-vis des antigènes avec lesquels ils sont
administrés et ils stimulent de maniere non spécifique des

o~
réactions de déense contre certaines inections (par exemple
l'infection de la souris par la bactérie intracellulaire
Listeria monocytogenes).
In vitro, ils sont actifs à des concentrations
molaires gén~ralement comprises entre 10-3 et 10 8, en parti-
culier dans les tests suivants:
- stimulation de la synthèse de llADN (pouvoir mitogène) selon
la technique de G. MARCHAL~ ~nn. Immunol. (Inst. Pasteur),
l2S C, 519 (1974j;
- stimulation de la réaction aLlogénique (réaction d'histo-
incompatibilité) selon la technique de R.W. DUTTON, J. çxp.
Med., 122; 759 (1966) et A.B. PECK et F.H. BACH, J. Immunol.
Methods, 3, 147 (1973);
- stimulation de la production d'anticorps selon la technique
de P.H. KE~ESIUS, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. (N~Y.), 135, 155
(1970) et H. VAN DIJK et N. BLOKSMA, J. Immunol. Methods, 14r
325 (1977);
- augmentation du nombre de macrophage~ phagocytaires ~elon
la technique de J. MICH~ et coll., J. exp. Med.~ ~4~, 1465
(1976);
- stimulation de l'activlté phosphatase acide et N-acétylylu-
cosamidinase (enzymes lysosomiales des macrophages) en l'absence
d'une augmentation de la déshydrogénase lactique selon la
technique de P. DAVIES et coll.l J. exp. Med., 139, 1262 (1974).
In vivo, chez la sourisr à des doses comprises entre
l et 30 mg/kg,-ils augmentent l'hypersensibilité retardée et
la production d'anticorps en particulier selon la technique
de T.E. MILLER et coll., J. Nath. Cancer Inst., 51, 1669
(1973).
Chez le cobaye, ils aug~entent la réaction d'hypersen-
sibilité et la production d'anticorps contre la gammaglobuline
-12-

~5~CI10
bovine couplée avec l'haptène ~initrophénol selon la technique
de F. FLOC'H et coll., Immunol. Communic., 7, 41 (1978).
Chez la souris, ils stimulent les réactions de
défense contre l'infection de la souris à Listeria monocytogenes
à des doses comprises entre 1 et 100 mg/kg selon la technique
de R.M. FA W E et B. HEVIN, C.R. Acad. Sci. (D), 285, 1589
(1977).
Chez la souris, ils stimulent le pouvoir d'élimination
du carbone co]lo~dal par le système réticulo-endothélial selon
la technique de B.N. HALPERN et coll., Ann. Institut Pasteur,
8~, 582 (1951).
Chez le lapin, à des doses généralement comprises
entre 0,1 et 3 mg/kg, ils stimulent~la formation d'anticorps
sériques anti-virus grippal selon la technique de G.H. WERNER
et coll., Biomedicine, 22~ 440 (1975).
D'un intérêt tout particulier sont les produits de
formule générale (I) dans laquelle les symboles R~, identiques
ou différents, représentent un radical hydroxy ou amino ou un
radical benzyloxy et R-CO représente un radical alcanoyle ou
alcénoyle contenant 8 à 20 atomes de carbone.
Les exemples suivants,donnés a titre non limitatif,
montrent comment l'invention peut être mise en pratique.
Les produits obtenus peuvent former des complexes
avec les métaux alcalins et alcalino-terreux; il en résulte
que les résultats de l'analyse élémentaire des produits peuvent
sensiblement s'écarter des valeurs théoriques. Cependant la
structure des produits est confirmée par le rapport C/N qui
est en accord avec la théorie, par la teneur en aminoacides et
par leur homogénéité en chromatographie sur couche mince de
silicagel~
Exemple 1 -
~, ~13-
.. . . .

~LZ~O~
A une solution de 12,75 g de chlorhydrate de L
alanyl-a-D glutamate de benzyle dans 75 cm3 de soude lN~ on
ajoute simultanément en 37 minutes f 8 g de chlorure de lauroyle
dissous dans 75 cm3 d'éther et 37,4 cm3 desoude lN de facon
à malntenir le pH du mélange réactionnel compris entre 8 et 9~
Le mélange est agité pendant l heure Z0 minutes. Après décan-
tation, la phase aqueuse est acidifiée à pH 2 par addition
d'acide chlorhydri~ue lN (~0 cm3) et extraite 3 fois par 300 cm3
au total d'acétate d'éthyle. Les extraits organiques réunis
sont lavés par 25 cm3 d'eau, séchés sur du sulfate de sodium
anhydre et concentrés à sec ~ous pression réduite (20 mm de
mercure) à 45C. On obtient ainsl 7,4 g d'un solide blanc
que l'on chromatographie sur 80 g de gel de silice neu-tre
contenus dans une colonne de 2 cm de diamètre. On élue suc-
cessivement par 100 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol
(8/2 en volumes) et 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-
méthanol (l/l en volumes), e~ recueillant des fractions de
50 cm3. La fraction 1 est concentrée à sec sous pre~sion
réduite (20 mm de mercure) à 45C. On obtient ainsi 2 g de
N-lauroyl L alanyl-~-D glutamate de benzyle Eondant à 130C.
Les fractions 2 à 4 sont de meme concentrées à sec et chroma-
tographiées sur 100 g de gel de silice neutre (0,063 0,20 mm)
contenus dans une colonne de 2 cm de diamètre. On élue par
250 cm3 d'acétone en recueillant des fractions de 25 cm3. Les
fractions l et 2 sont concentrées à sec sous pression reduite
(20 mm de mercure) à 45C. On obtient ainsi 4,07 g de N-
lauroyl L alanyl-a D glutamate de benzyle fondant à 130C dont
les caractéristiques sont les suivantes:
Rf = 0,9 ~silicagel; n-butanol~pyridine-acide
acétique-eau (50/20/6/24 en volumes)J
Analyse calc. % C = 66,10 H = 8,63 N = 5,71
tr. 66,3 8,8 5,6

~x~
Le chlo~hydrate de L alanyl-~-D glutamate de benzyJ.e
peut être préparé de la fa~on suivante:
On dissout 97,16 g de N-t.-butyloxycarbonyl L
alanyl-~-D glutamate de benzyle dans 970 cm3 d'une solution
anhydre d'acide chlorhydrique 1,7N dans l'acide acéti~ue. On
agite pendant 2 heures, puis on ajou~e rapidement 3,8 litres
d'éther anhydre et on laisse.reposer pendant 2 heures à 0C.
Le précipité huileux qui s'est formé, séparé du surnageant par
. décantation, est dissous dans 500 cm3 d'acétone; la solution
ainsi obtenue est concentrée à sec sous pression réduite (20 mm
de mercure) à 50C. On obtient ainsi 88,9 g de chlorhydrate
de L alanyl-a-D glutamate de benzyle.
Le N-t-.-butyloxycarbonyl ~ alanyl-a-D glutamate
de benzyle peut être préparé selon la méthode de E. BRICAS et
coll., Biochemistry 9, 823 (1970).
Exemple 2 -
. On.ajoute 31 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution, maintenue à une température voi~ine de 10C, de 47~7$ g
d'acide lau.rique dans 3 litres de dioxan.ne et 33,3 cm3 de
triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à 10C,
puis on ajoute en 10 minutes une solutlon, refroidie à 10C, de
88,95 g de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle,
dans un mélange de 1 litre de dioxanne, de 476 cm3 d'eau et de
476 cm3 de soude lN. Le mélange réactionnel est agité pendant
1 heure à loQC, puis pendant 18 heures a une température voisine
de 20C; il est ensuite dilué par addition de 4 litres d'eau,
acidifié à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique lN (environ
475 cm3) et conservé pendant 2 heures à 0C. Le précipite
obtenu est séparé par filtration, lavé successivement par 500 cm3
d'eau et 500 Gm3 dléther, puis séché sous pression réduite
~20 mm de mercure) à 20C~ Le produit e.st mis en suspension

~zr?~
dans 800 cm3 d'éther, agité pen~ant 1 heure, séparé par ~
tration et lavé 2 f~is par 200 cm3 a~ total d'éther. Après
séchage sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20C, on
obtient 71,79 g de N-lauroyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle
fondant à 130C.
Rf = 0,77 ~ilicagel; acetate d ' éthyle-méthanol'
(4/1 en volumes)~.
Exemple 3 -
On ajoute goutte à goutte en 30 minutes 5,49 g de
chlorure de la~royle dissous dans 150 cm3 de chlorure de
méthylène à un mélange, re,froid.i vers 5C, de 8,46 g de chlorhy-
drate de L alanyl-D glutaminate de benzyle dans 300 cm3 de
chlorure de méthylène et 4,3 cm3 de triéthylamine. On agite
le mélange réactionnel pendant 2 heures 1/4 à 20C environ,
puis on l'extrait 3 foi.s par 1500 cm3 au total d'eau. On
concentre la phase organique à 100 cm3 environ sous pression
réduite (20 m~ de mercure) à~40C. Le précipité formé dans
le concentrat est séparé par ~iltration et séché. On obt:ient
ainsi 5,3 g d'une poudre blanche à laquel}e on joint 0,8 g d'un
produit préparé.dans les memes conditions. Le mélange est
dissous dans 100 cm3 de méthanol bouillant et la solution ob-
tenue est laissée'au repos pendant 3 heures à 0C. Les cristaux
formés s.ont SépaLéS par filtration et séchés sous pression
réduite (0,2 mm de mercure) à 50C. On,obtient ainsi 4,64 g
de N-lauroyl L alanyl-D glutaminate de benzyle fondant à
182C,
Rf = 0,80 ~ ilicagel; acétate dléthyle-méthanol
(1/1 en volumes ~
Analyse: Calc. % = C 66,23 H 8,~5 N 8,58
. Tr. = 66,1 8,8 8,4
Le chlorhydrate de L alanyl-D glut,aminate de benzyle
-16-

~O~
peut être préparé de la façon suivante:
On dissout 5,2 g de N-t.-hutyloxyca~bonyl L alanyl-D
glutaminate de benzyle dans 60 cm3 d'une solution anhydre d'acide
chlorhydrique 1,7N dans l'acide acétique. On agite pendant
1 heure, puis on verse le mélange réactionnel dans 300 cm3
d'éther. On décante la phase éthérée. On ajoute 1 litre
d'éther sur la gomme restante que l'on triture, on décante de
nouveau la phase éthérée et on reprend le résidu par 200 cm3
de méthanol. I.a solution obtenue est concentrée à sec sous
pression réduite ~20 mm de mercure, puis 0,2 mm de mercure) à
50~. On obtient ainsi 4,3 g de chlorhydrate de L alanyl-D
glutaminate de benzyle sous forme de meringue.
Le N-t.-butyloxycarbonyl L alanyl-D glutaminate de
benzyle peut être préparé selon la méthode de S. KUSUMOTO
et coll., Bull. Chem. Soc. Japan, 49, 553 (1976).
- Exemple 4 -
On dissout 3,7 g de N-lauroyl L alanyl-D glutaminate
de benzyle dans un mélange de 1 litre de méthanol, de 400 ~m3
d'acide acétique et de 40 cm3 d'eau. On ajoute 3,7 g de pal-
ladium sur noir tà 3 ~ de palladlum) et on ~ait passer un lent
courant d'hydrogène pendant 2 heures. On filtre le mélange
réactionnel et le filtrat est diIué par addition de 3 litres
d'eau. On sépare I'insoluble par filtration et le sèche sous
pression réduite (20 mm de mercure) à 50C. On obtient ainsi
2,3 g de N-lauroyl L alanyl-D glutamine fondant à 170-172C.
Rf = 0,83 ~ ilicagel; méthano~
Analyse: Calc. % = C 60,12 H 9,33 N 10,52
Tr. = 60,1 -8,8 10,5
Exemple 5 -
On dissout 500 mg de N-lauroyl L alanyl-~-D glutamate
de benzyle dans 25 cm3 d'un mélange méthanol-acide acétique-eau

oo~
(25/l/l en volumes). On ajoute 500 mg de palladiu~ sur noir
(à 3 ~ de palladium) puis on fait passer un lent courant d'hy-
drogène pendant 2 heures. On filtre le mélange réactionnel
et le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm
de mercurej à 45C. On obtient ainsi 460 mg d'un solide blanc-
crème auquel on ajoute 690 mg de produit préparé dans les mêmes
conditions. ~e mélange est dissous dans 10 cm3 de méthanol
bouillant et, à la solution ainsi obtenue, on ajoute 5 cm3 d'eau.
Après 20 heures de repos à 20C environ, les cristaux blancs
apparus sont séparés par filtration, lavés par 5 cm3 d'un
mélange méthanol-eau (2/l en volumes) puis séchés sous pression
réduite (0,2 m~ de mercure) à 50C. On obtient ainsi 770 mg
d'acide N-lauroyl L alanyl~D glutamique fondant à 138-142C.
Rf = 0,61 ~silicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique-
eau (50/20/6/24 en volumes)~
Analyse: Calc. % = C 59,98 H 9,06 N 6,99 O 23,97
Tr. ~= 59,7 9,0 7,3 24,1
Exemple 6 -
On ajoute 2,54 cm3 de chloroformiate dlisobutyle dans
une solution, maintenue à 0C, de 3,9 g d'acide laurique dans
156 cm3 de toluène anhydre et 2,7 cm3 de triéthylamine. ~e
mélange est agité pendant 20 minutes à 0C, puis on ajoute
- une solution, refroidie à 0C, de 6,7 g de chlorhydrate
de L alanyl-D isoglutaminate de benzyle dans 52 cm3 d'eau et
2,7 cm3 de triéthylamine. Le mélan~e réactionnel est agité
pendant 65 heures à une température voisine de 20C. On obtient
unemasse réactionnelle d'aspect gélatineux à laquelle on ajoute
150 cm3 d'acétate d'éth~le. Le précipité est séparé par fil-
tration, lavé par 30 cm3 d'eau puis séché. On obtient 7,6 g
de N-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle sous forme
d'une poudre blanche. La phase aqueuse du filtrat précédent
-18-

aoo
est extraîte 2 fois par 100 cm3 au total d'acétate d'é~hyle,
cette phase acétate d'éthyle est réunie avec la phase organique
du filtrat, lavée par 125 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1N, 120
crn3 d'eau, séchée sur sul~ate de magnésium puis concentrée à
sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C. On obtient
à nouveau 1,5 g de N-lauroyl L aIanyl-D isoglutaminate de
benzyle. Le produit (7,6 g et 1,5 g) est recristallisé dans
120 cm3 de méthanol. On obtient ainsi 6,6 g de N-lauroyl
L alanyl-D isoglutaminate de benzyle fondant à 169C.
Rf = 0,13 ~silicagel; acétate d'éthyl~
Le chlorhydrate de L-alanyl-D-isoglutaminate de
benzyle peut être préparé selon le procédé de S. KUSUMOTO,
Bull. Chem. Soc. Japon 49, 533 (1976).
Exemple 7 -
On dissout 6,6 g de N-lauroyl I, alanyl-D isoglutaminate
de benzyle dans 330 cm3 d'acide acétique. On ajoute 6,6 g
de palladium sur noir (à 3 ~de palladium) puis on fai-t passer
un lent courant d'hydrogène pendant 2 heures. Après ~ tration
du mélange réactionnel, on verse le Eiltrat dans 3 litres d'eau.
Après 2 heures de repos à 0C, le précipité apparu est séparé
par filtration, lavé 2 fois par 80 cm3 au total d'eau, puis
séché. On obtient ainsi 5,16 g de produit auquel on ajoute
0,5 g d'un produit obtenu dans des conditions analogues. Ce
mélange est dissous dans 90 cm3 de méthanol bouillant et à
la solution obtenue on ajoute 45 cm3 d'eau. Apres 2 heures
de repos à une température voisine de 20C, les cristaux apparus
sont séparés par filtration, lavés 2 fois par 60 cm3 au total
d'eau et séchés sous pression réduite (20 mm de mercure). On
obtient ainsi 5,1 g de N-lauroyl L alanyl-D isoglutamine fonda~lt
à 163C.
Rf = 0,1~ ~ ilicagel; acétate d'éthyle-méthanol (4/1
-19-

en volumes)~
Analyse: Calc~ % = C 60,12 H 9,33 N 10,52
Tr. = 60,2 9,5 10,9
Exemple 8 -
On ajoute 0,53 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dansune solution, maintenue à -10C, de ~ g de N-laurOyl L alanyl-
~-D glutamate de benzyle dans 20 cm3 de chloroforme et 0,57 cm3
de triéthylamine. La solution est agitée pendant 15 minutes
entre -10C et -2C, puis on fait passer un courant d'ammoniac
dans le mélange réactionnel pendant environ 6 heures. On laisse
ensuite reposer pendant 68 heures à 20C environ. On concentre
à sec le mélange réactionnel sous pression réduite (20 mm de
mercure) à 50C. On reprend le résidu par 50 cm3 d'isopropanol
bouillant.- Un très léger insoluble est séparé par filtration.
Après refroidissement du filtrat pendant 2 heures à 0C, le
précipité appà~u est ~éparé par filtratlon puis séché. On
obtient 0,6g g de N-lauroyl L alanyl-D glutamamide fondant à
226-228C.
Rf = 0,75 ~silicagel; acétate d'éthyle-méthanol (1/1
en volumes)~7
Analyse: Calc~ ~ = C 60,27 H 9,61 N ]4,06
Tr. = 59,3 9,6 14,1
Exemple 9 -
On ajoute 0,79 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à
une solution, ~naintenue vers -5C, de 1,09 g d'acide phényl-5
valérique dans un mélange de 50 cm3 de tétrahydrofuranne et
0,86 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 35
minutes à une température voisine de -5C, puis on ajoute
une solution, re-froidie à 0C, de 2,1 g de chlorhydrate de L
alanyl-~-D glutamate de benzyle dans 50 cm3 de tétrahydrofuranne,
10 cm3 d'eau et 1,72 cm3 de triéthylamine. Le mélange réactionnel
-20-

est agité pendant 20 heures à 20C environ, puis concentré à
sec sous pression réduite (20 mm de merc~re) à 40C. Le résidu
obtenu est dissous dans 100 cm3 d'eau et la solution obtenue
est acidifiée à pH 2 par addition d'une solution d'acide
chlorhydrique lN. Le précipité apparu est séparé par filtra-
tion, lavé 2 fois par 50 cm3 au total d'eau et 2 fois par 50 cm3
au total d'éther. Après séchage, on obtient ainsi 1,98 g de
N-(phényl-5 valéryl) L alanyl-~-D glutamate de benzyle fondant
à 128~C.
Rf = O,72 f~silicagel; n-butanol-pyridine-acide
acétique-eau (50/20/6/24 en volumes~7
Exemple 10 -
On dissout 1,8 g de N-(phényl-5 valéryl) L alanyl-~-D
glutamate de benzyle dans 100 cm3 d'acide acétique. On ajoute
1,8 g de palladium sur noir (à 3 ~ de palladium) et on fait
passer un courant d'hydrogène pendant 4 heures. On filtre le
mélange réactionnel. Le filtrat est concentré à sec sous
pression réduite ~20 mm de mercure) à 60C. Le résidu est
repris par 100 cm3 d'acetate d'éthyle bouillant; l'insoluble
est éliminé par filtration. I,e filtrat obtenu est dilué par
addition de 400 cm3 d'oxyde d'isopropyle. Après 2 heures de
repos à 0C, les cristaux apparus sont séparés par filtration
et séchés. On obtient ainsi 0,66 g d'acide N-~phényl-5 valéryl)
L alanyl-D glutamlque fondant entre 135C et 140 C (fusion
pâteuse).
Rf = 0,55 ~silicagel; n-butanol-pyridine-acide
acétique-eau (50/20/6/24 en volumes~J
Analyse: Calc. % = C 60,31 H 6,93 N 7,40
Tr. - 60,3 7,1 7,4
Exemple.11 -
On ajoute 3,6 cm3 de chloroformiate dlisobutyle dans
.
-21-

av
une solution, maintenue à -1C, de 3,95 g d'acide octanoique
dans 140 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,8 cm3 de triéthylamine.
I,e mélange est agité pendant 20 minutes à~ -1 C, puis on ajoute
une solution, refroidie à 0C, de g,45 g de chlorhydrate de L
alanyl-~-D glutamate de benzyle dans un mélange de 54,8 cm3
de soude lN et 30 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité
pendant 1 heure à -1C puis pendant 20 heures à 20C environ.
Il est ensuite acidifié à pH l par addition d'acide chlorhy-
drique lN. Le té~rahydrofuranne est évaporé sous pression
réduite ~20 mm de mercure) à 45C, puis le concentrat est
extrait par 100 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique
ainsi obtenue est lavée 2 fois par 50 cm3 au total d'acide
chlorhydrique lN et par 25 cm3 d'une solution saturée de chlorure
de sodium et concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de
mercure) à 45C. On obtient ainsi 10 g d'une huile jaune pâle
qui est chromatographiée sur une colonne de 2,5 cm de diamètre
contenant 200 g de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On
élue avec de l'acétate d'éthyle en recueillant des fractiorls
de 100 cm3. Les fractions 7 à 9 réunies sont concentrées a
sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45C. Le résidu
obtenu est trituré dans 100 cm3 d'un mélange éther-éther de
pétrole (P.E. = 35-G0 C) (l/4 en volumes), séparé par filtration
et séché. On obtient ainsi 3,27 g de N-octanoyl L alanyl-~-D
glutamate de benzyle sous forme d'une poudre blanche.
Rf = 0,56 ~silicagel; acétate d'éthyle-méthanol
~8/2 en volumes
Exemple 12 -
On ajoute 3,6 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans
une solution, maintenue à 0C, de 7,03 g d'acide palmitique
dans 140 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,8 cm3 de triéthylamine.
Le mélange est agité pendant 20 minutes à 0 C, puis on ajoute
-22-

~la~o
une solution, refroidie à 0C, de 9,45 g de chlorhydrate de L
alanyl-~-D ~lu~amate de bel~zyle dans un mélange de 54/8 cm3 de
soude lN et de 30 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité
pendant 1 heure à 0C, puis pendant 18 heures à 20C environ;
il est ensuite acidifié à pH 1 par addition de 70 cm3 d'acide
chlorhydrique lN. Le précipité formé est séparé par filtration,
lavé 5 fois par 200 cm3 au total d'eau et séché On obtient
ainsi 12,11 g d'une poudre blanche qui est chromatographiée sur
une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 200 g de gel de
silice neutre (0,063-0,20 mm). On élue successivement par
200 cm3 d'acétate d'éthyle, 300 cm3 diun mélange acétate d'éthyIe-
méthanol (9/1 en volumes), 1,6 litre d'un mélange acétate
d'éthyle-méthanol (8/2 en volumes), 400 cm3 d'un mélange acétate
d'éthyle-méthanol (6/4 en volumes) en recueillant des fractions
de 100 cm3. Les Eractions 5 à 23 réunies sont concentrées à
sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45C~ On obtient
ainsi 5,18 g d'un solide que l'on triture dans 50 cm3 d'éther
bouillant pendant 1/2 heure. Après refroidissement à une
température voisine de 20C, l'insoluble est séparé par fil-
tration, lavé 3 fois par 75 cm3 au total d'éther puis séché.
On obtient ainsi 2,94 g de N-palmitoyl L alanyl-~-D glutamate
de benzyle.
Rf = 0,77 ~silicagel; acétate d'éthyle~
Exemple 13 --
On ajoute 0,48 cm3 de chloroformiate d'isobutyle àune solution, ~aintenue à -5C, de 1,12 g d'acide arachidonique
dans 40 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,5~ cm3 de triéthylamine.
Le mélange est agité pendant 35 minutes entre -5C et 8C,
puis on ajoute une solution, refroidie à 0C, de 0,93 g de
3a chlorhydrate d'acide L alanyl-D glutamique dans un mélange de
20 cm3 de tétrahydrofuranne, 15 cm3 d'eau et 1,55 cm3 de trié-
-23-

v
thylamine. Le mélange réactionnel est agité pendant l heure
à une température voisine de -3C, puis pendant 20 heures à
une température voisine de 20C; il est dilué ensuite par
addi-tion de 50 cm3 d'eau, acidifié à pH 2 par addition d'une
solution aqueuse d'acide chlorhydrique lN, et extrait 3 fois par
75 cm3 au total d'éther. Les phases éthérées réunies sont
concentrées à sec sous-pression réduite (20 mm de mercure~ à
30C. On obtient ainsi 2,5 g d'une huile jaune qui est chro-
matographiée sur une colonne de 2,4 cm de diamètre contenant
50 g de gel de silice neutre (0,04-0,06~mm). On élue avec
de l'acétate d'éthyle. On obtient ainsi 0,32 g d'acide N-
arachidonoyl L alanyl-D glutamique fondant vers 90C (fusion
pâteuse).
Rf = 0,70Csilicagel; n-butanol-pyridine-acide acétique-
eau (50/20/6/24 en volumes)~
Le chlorhydrate de l'acide L alanyl-D glutamique peut
être préparé selon la méthode de H. NGUYEN-HU~ et coll., ~ur.
J. Biochem., 66, 79 (1976).
Exemple 14 -
On ajoute 0,48 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à
une solution, maintenue à -10C, de 0,94 g d'acide palmitique
dans 40 cm3 de tétrahydrofuranne et 0,52 cm3 de triéthylamine.
- Le mélan~e est agité pendant 50 minutes entre -6 C et -8 C,
puis on ajoute une solution, refroidie à 0C, de 0,93 g de
chlorhydrate d'acide L alanyl-D glutamique dans un mélange
de 20 cm3 de tétrahydrofuranne, 15 cm3 d'eau et 1,55 cm3 de
triéthylamine. Le mélange réactionnel est agi-té pendant l heure
à une température voisine de -6~'C puis pendant 2a heures à une
température voisine cle 20 C; il-est acidifié ensuite à pH 2 par
adclition d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 4N et
dilué par addition de 300 cm3 d'eau. Le précipité forme est
séparé par filtration, lavé 3 fois par 150 cm3 du total
-2~-

d'éther et séché. On obtient ainsi 1,08 g d'une poudre blanche
que l'on dissout dans 120 cm3 d'acétate d'éthyle bouillant,
filtre à chaud. Après 20 heures de repos à 4C environ, on
sépare le précipité formé par filtration, le lave 2 fois par
20 cm3 au total d'acétate d'éthyle et le sèche à l'air. On
obtient ainsi 0,93 g d'une poudre blanche que l'on dissout
dans 15 cm3 d'acide acétique bouillant, filtre a chaud. Après
64 heures de repos à 4C environ, le précipité formé est séparé
par filtration, lavé 2 fois par 20 cm3 au total d'acétate d'éthyle
et séché sous pression réduite (0,2 mm de mercure) à 50C.
On obtient ainsi 0,5 9 d'acide N-palmitoyl L alanyl-D glutamique
~ondant à 155C.
Rf = 0,62 ~silicagel; n-butanol-pyridine-acide
acétique-eau (50/20/6/24 en volumes)7
Analyse: Calc. ~ = C 63,13 H 9,71 N 5,14
Tr. = 63,0 9,3 6,2
Exemple lS -
On ajoute 1,93 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à
une solution, maintenue à 25C, de 5,19 g d'acide docosanoique
dans un mélange de 150 cm3 de tétrahydrofuranne et de 2,1 crn3
de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à
25C, puis on ajoute une solution de 5,69 g de chlorhydrate de
L alanyl-~-D glutamate de benzyle dans un mélange de 33 cm3 de
soude lN et 17 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité
pendant 30 minutes vers 30C puis pendant 18 heures vers 20C
environ. Ensuite, on ajoute 100 cm3 d'eau et on acidifie à
pH l par addition de 35 cm3 d'acide chlorhydrique lN. On obtient
un précipité que l'on sépare par filtration, lave 3 fois par
75 cm3 au total d'eau et sèche sous pression réduite (0,3 mm de
mercure) à 20C. On obtient ainsi 6,53 g d'une poudre blanche.
On dissout 6 g de cette poudre dans 50 cm3 de tétrahydrofuranne
-25-

o~
contenant 20 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On
concentre à sec le mélange sous pression réduite (~0 mm de
mercure) à 50C et on charge l'ensemble sur une colonne de
3,5 cm de diamètre contenant 180 g de gel de silice neutre
(0,04-0,063 mm). On élue successivement par:
- 1300 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (1/1 en
volumes),
- 600 cm3 d'acéta~e d'éthyle,
- 500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne (95/5
en volumes),
- 900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne ~9/l
en volumes),
- 800 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne ~8/2
- en volumes),
- 1000 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne
(6/4 en volumes),
- 900 cm3 d'un mélange aCéta~e d'éthyle-tétrahyclrouranne (4/6
en volumes),
- 500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-tétrahydroEuranne (2/8
en volumes), et 600 cm3 de tétrahydroEuranne en recueillant
des fractions de 100 cm3. Les fractions 17 à 68 sont réunies
et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure)
à 50C. On obtient ainsi 3,31 g de N-docosanoyl L alanyl-~-D
glutamate de benzyle.
Rf = 0,54 Csilicagel; acétate d'éthyle-tétrahydrofuranne
(8/2 en volumes)~
~xemple 16 -
On ajoute 3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution, maintenue à -5C, de 3,605 g d'acide cyclohexyl-3
propionique dans un mélange de 100 cm3 de tétrahydrofuranne
et 3,23 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendan~ 20
-26-

~2S;~
minutes à -5C, pUi8 on ajoute une solution, refroidie à 5C,
de 7,96 g de chlorhydrate de L alanyl ~~D gl~tamte de benzyle
dans un mélange de 46,2 cm3 de soude lN et 13,8 cm3 d'eau.
Le mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes à 0 C,
puis pendant 2 jours à 20C environ. On évapore ensuite le~
tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de mercure) à
50C. Le concentrat est extrait 2 fois par 80 cm3 au total
d'éther, acidi~ié à pH 1 par addition de 50 cm3 d'acide chlor-
hydrique lN. L'huile qui décante du milieu réacti~nnel est
extraite4 fois par 200 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les
phases organiques réunies sont lavées par 25 cm3 d'une solution
saturée de chlorure de sodium et séchées sur sulfate de magné-
sium anhydre. Après concentration à sec sous pression réduite
~20 mm de mercure) à 50C, on obtient une huile qui cristallise
spontanément. Ces cristaux (7,3 g) sont dissous dans 40 cm3
d'acide acétique contenant 20 g de yel de silice neutre ~0,04-
0,063 mm). On concentre à s~c le mélange et on charge l'ensembl0
sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 50 g de yel de
~ silice neutre ~0,04-0,063 mm). On élue par de l'acétate d'éthyle
en recueillant des fractions de 100 cm3. La 4ème fraction est
concentrée à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à
45C. On obtient ainsi 1,86 g de N-lcyclohexyl-3 propionyl)
L-alanyl-a-D glutamate de benzyle fondant à 126-128C. Les
fractions 3 et 5 sont réunies et concentrées à sec. Le solide
amorphe est chromatographié sur une colonne de 2,5 cm de diamètre
contenant 68 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm). On
élue successivement par 520 cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate
d'éthyle (1/1 en volumes) et 520 cm3 d'acétate d'éthyle en
recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 11 à 28
réunies, sont concentrées à sec sous pression rédui-te (20 mm
de mercure) a 45C. On obtient ainsi ~,37 y de N-(cyclohexyl-3

OO
propionyl) L alany.l~~-D glutamate de benzyle fondant à 128-
130C
Rf = 0,14 ~silicagel; acétate d'éthyle~
Exemple 17 -
On ajoute 4,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle àune solution, maintenue à 6C, de 7,59 g de N-(triméthyl-3l5,5
hexanoyl) L alanine dans un mélange de 400 cm3 de tétrahydro-
furanne et 4,63 cm3 de triëthylamine. Le mélange est agité
pendant 20 minutes à -6C, puis on ajoute une solution refroidie
lo à 3C de 9,06 g de chlorhydrate de ~-D glutamate de benzyle
dans un mélange de 66,2 cm3 de soude lN et 14 cm3 d'eau. Le
mélange réactionnel est agité pendant 15 minutes vers -5C~ puis
penda.nt 66 heures vers 18C environ; il est ensuite acidifié a
pH l par addition de 75 cm3 d'acide chlorhydrique lN. On
évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite (20 mm de
mercure) à 50C~ Le concentrat est extrait 5 ~ois par 200 cm3
au total d'acétate d'éthyle.- Les phases acétate d'éthyle,
réunies, sont lavées par 40 cm3 d'acide chlorh~drique 0,1N et
séchées sur sulfate de magnésium. Après Eiltration et concen-
tration à sec ~ous pression réduite (20 mmd~ mercure) à 50C,
on obtient 14,8 9 d'huile que l'on dissout dans 50 cm3 d'acétate
d'éthyle contenant 30 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm).
On concentre à sec le mélange sous pression réduite (20 mm de
mercure) à 50C et on charge llensemble sur une colonne de 2~8 cm
de diamètre contenant 280 g de gel de silice neutre (0,04-0,063
mm). On élue successivement.par 2 1 de cyclohexane, 1 l d'un
mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (95/5 en volumes), 1,5 1
d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (90/10 en volumes) r
5 1 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (80/20 en volumes),
1,5 l d'un mélange cyclohexane~acétate d'éthyle (70/30 en
volumes) et 3,5 1 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (50/50
-28-

~5~0~
en volumes) en recueillant des fractions de 500 cm3. Les
fractions 23 à 29 sont réunies et concentrées à sec sous pression
réduite (20 mm.de mercure) à 50C. On obtient ains.i 10,86 g
de N-(triméthyl~3r5,S hexanoyl) L-alanyl-a-D glutamate de benzyle
sous forme d'huile qui cristailise.
Rf = 0,37 ~sillcagel; acétate d'éthyle~
La N-~triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanine peut être
préparée de la ~açon suivante.
On ajoute 6,5 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à
une solution, maintenue à -5C, de 7,912 ~ d'acide triméthyl-
.
3,5,5 hexano.~que dans un mélange de 125 cm3 de técrahydrofuranne
et de 7 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité pendant -
20 minutes à -5C, puis on ajoute une solution, refroidie à
5C, de 4,495 g de L alanine dans 50 cm3 de soude lN. Le
mélange réactionnel est agité pendant 10 minutes vers 0C, puis
pendant 18 heures à 25C environ. On évapore ensuite le tétra-
hydrofuranne sous pression r~duite (20 mm de mercure) a 50 C.
Le concentrat est extrai.t 2 foi.s par 40 cm3 au tota.l d'éther,
acidifié à p~l 1 par addition de 55 cm3 d'acide chlorhydrique
lN. Le précipité huileux qui se orme est extrait 5 fois
par 250 cm3 au tota.l d'acétate d'éthyle. Les phases acétate
d'éthyle sont réunies, lavées par 25 cm3 d'une solution saturée
de chlorure de sodium et séchées sur sulfate de magnésium.
Après filtration et concentration à sec sous pression réduite
(20 mm de mercure) à 50C, on obtient 11,79 g d'huile ~ue l'on
dissout dans 40 cm3 d'acétate d'éthyle contenant 20 g de gel
de silice neutre (0,063-0i20 mm~. On concentre à sec le mélange
sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C et on charge
l'ensemble sur une colonne de 3 cm de diamètre contenant 12~ g
de gel de silice neutre (0,063-0,20 mm). On élue successive-
ment par 600 cm3 de cyclohexane, 300 cm3 d'un mélange cyclohexane-
-29-

o
acétate d'éthyle (9S/5 en volumes), 300 cm3 d'un mélange
cyclohexane-acétate d:éthyle ~90/10 en volumes), 300 cm3 d'un
mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (80/20 en volumes), 700
cm3 d'un mélange cyclohexane-acétate d'éthyle (50/50 en volumes~,
300 cm3 d'acétate d'éthyle et 300 cm3 d'un mélange acétate
d'éthyle-méthanol (90/10 en volumes) en recueillant des fractions
de 100 cm3. Les fractions 17 à 28 ~éunies sont concentrées à
- sec sous pression réduite (20 mm de mercure~ à 4SC. On obtient
ainsi 10,16 g d'huile que l'on dissout dans 25 cm3 d'éther.
Par addition de 150 cm3 d'éther de pétrole, on obtient une
huile que l'on sépare par décantation. Après séchage sous
pression réduite (0,2 mm de mercure), on obtient 7,59 g de
N-(triméthyl-3,5,5 hexanoyl) L alanine.
Rf = 0,43 ~silicagel; acétate d'éthyle7
Exemple 18 -
On ajoute en 1 heure 10 minutes 27,5 g de n-pentyl~2
hydroxy-3 nonanoate de succinimide dissous dans 644 cm3 de
diméthoxy-1,2 éthane à une solution, maintenue à 7C, de 27,8 g
de chlorhydrate de L alanyl-a-D glutamate de benzyle dans un
mélange de 245 cm3 d'eau et 22,9 cm3 de triéthylamine. Le
mélange réactionnel est conservé à 20C pendant 20 heures puis
à 60C pendant 5 heures. On évapore ensuite le diméthoxy-1,2
éthane sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C; le
concentrat est acidifié à pH 1 par addition de 150 cm3 d'acide
chlorhydrique lN et extrait 5 fois par 1,5 1 au total dlacétate
d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées 3 fois
par 750 cm3 au total d'eau, séchées sur sulfate de sodium et
concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à
60C. On obtient ainsi 38,6 g d'huile que l'on dissout dans
200 cm3 d'acétate d'éthyle. On ajoute 13 g de dicyclohexylamine.
Après un repos de 20 heures à 4C, le solide b]anc formé est
30~

~ Zr 1000
séparé par filtration,.lavé 2 fois par 40 cm3 au total d'acétate
d'éthyle et 2 fois par 200 cm3 au total d'éther et séché sous
pression réduite (20 mm de mercure) à 20C. On obtient ainsi
22,4 g de poudre blanche auxquels on ajoute 1,9 g obtenus dans
une opération similaire. On dissout ce mélange dans 500 cm3
d'eau; on ajoute à la solution aqueuse 200 cm3 d'acétate dléthyle-
et 150 cm3 d'une solution saturée d'acide citrique. On sépare
la phase organique, extrait la phase aqueuse 2 fois par 4Q0 cm3
au total d'acétate d'éthyle. .Les phases acétate d'éthyle réunies
sont lavées 2 fois par 200 cm3 au total d'eau, séchées sur
sulfate de sodium et concentr~es à sec sous pression réduite
(20 mm de mercure) à 60C. On obtient ainsi 17,4 g de N-~n-
pentyl-2 hydroxy-3 nonanoyl) L alanyl-a-D glutamate de benzyle
sous forme de pate beige.
Rf = 0,25 ~silicagel; acétate d'éthyle~
Le n-p0ntyl-2 hydroxy-3 nonanoate de succinimide
peut être préparé de la façon suivante:
On ajoute erl 40 minutes, 27 g de dicyclohexylcarbodiimide
dissous dans 300 cm3 de diméthoxy-1,2 éthane à une solution,
maintenue à 0C, de 29,1 g d'acide n-pentyl-2 hydroxy~3 nona-
. noique et 14,1 g de N-hydroxysuccinimide dans 300 cm3 de
diméthoxy-1,2 éthane. Le mélange réactionne.l est agité à 0C
pendant 3 heures, puis conservé à 4C pendant 21 heures. Le.
précipité formé est séparé par filtration et lavé 2 fois par
100 cm3 au total de diméthoxy-1,2 éthane~ Le filtrat est
concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à
50C. Le concentrat est repris par un mélange de 300 cm3 d'oxyde
d'isopropyle et 3 cm3 d'acide acétique. Après 2 heures de
repos à 20C, le précipité formé est séparé par filtration et
lavé 2 fois par 40 cm3 au total d'oxyde dlisopropyleu Le
filtrat est concentré à sec sous pression réduite (20 mm de

,1~ 0~ ,
mercure) à 50C. On obtient ainsi 42r6 g de n-pentyl-2 hydroxy-3
nonanoate de succinimide sous forme d'huile Jaune~
L'acide n-pentyl-2 hydroxy-3 nonano~que peut etre
préparé selon la méthode de E. LEDERER et coll., Bull. Soc.
Chim~ 1952, 413.
Exemple 19 -
A une solution de 6,07 g de N-t-butyloxycarbonyl
a-D glutamate de benzyle dans 70 cm3 d'éthanol, on ajoute'12,5 g
de copolymere styrène-divinylbenzène (98-2) chlorométhylé con-
tenant 1,2 milliéquivalent de chlore par gramme. On agite le
mélange réactionnel pendant 1/4 heure à 28C. On aioute alors
2,25 cm3 de triéthylamine et on agite le mélange réactionnel
pendant 65 heures à 78C. Le polymère est filtré, lavé s'uc-
cessivement par 3 fois 300 cm3 au total dléthanol et 3 fois
300 cm3 au total de chlorure de méthylène, puis séché sous
pression réduite (20 mm de'mercure) à ~0C. On obtient ainsi
17 g de Ol-benzyl N-t.'-butyloxycarbonyl D glutamyl-polymere.
L'alanine est condensée sur le Ol-benzyl N t.-butyloxycarbonyl
D glutamyl-polymère en e~feckuant la suite d'opérations sulvantes
dans un réacteur muni d~un agitateur et, à sa base, d'un filtre
en verre fritt'é.
1) On e~fectue 3 lavages successifs du polymère par 100 cm3 de
chlorure de méthylène à chaque fois. Chaque addition de ~solvant
est suivie d'une agitation pendant 3 minutesj puis d'un essorage.
2) Le groupement protecteur t.-butyloxycarbonyle de l'acide
glutamique est ensuite éliminé par addition de 100 cm3 d'un
mélange acide trifluoroacétique-chlorure de méthylène (1/1 en
volumes), puis agitation pendant 20 minutes et enfin essorage.
3) La résine est alors lavée successivement par:
a) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène,
b) 3 fois 100 cm3 de méthanol,
-32

~3L25$~
c) 3 ~ois lO0 cm3 de chlorure de méthylene
en agitant pendant 3 minu~es après chaque addition de solvant
et en essorant à chaque fois.
4) On neutralise alors le polymère par addition de 100 cm3
d'un mélange chlorure de méthylène-N-méthylmorpholine (9/1 en
- volumes), agitation pendant 10 minutes puis essorage.
S) La résine est lavée ensuite par:
3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène
en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de solvant
et en essorant à chaque fois.
6) On a~oute alors successivement:
a) 3,78 g de N-t.-butyloxycarbonyl L alanine en
solution dans 50 cm3 de chlorure de méthylène et on agite pendant
10 minutes;
b) 4,13 g de dicyclohexylcarbodiimide en solution
dans 50 cm3 de chlorure de méthylène, on agite pendant 20
heures et essore. -
7) On lave la résine successivement par:
a) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène
b) 3 fois 100 cm3 d'acide acétique
c) 3 fois 100 cm3 de chlorure de méthylène
- en agitant pendant 3 minutes après chaque addition de solvant
et en essorant à chaque fois.
On obtient ainsi le Ol-benzyl N-(t.-butyloxycarbonyl
L-alanyl)-D-glutamyl-polymère.
L'acide heptadécanoique est condensé sur le dipeptide-
polymère en répétant les opérations 1, 2, 3, 4, 5, 6 et 7.
L'opération n6 est modifiée comme suit:
On ajoute successivement:
a) 5,4 g d'acide heptadécanoque en solution dans
50 cm3 de chlorure de méthylène et on agite pendant 10 minutes;

~ ~ 5 ~
b) 4,13 g de dicyclohexylcarbodiimide en solution
dans 50 cm3 de chloruré de méthylène,~ on agite pendant 20 heure~
et on essore.
On obtient ainsi le Ol-benzyl-N-(N-heptadécanoyl L
alanyl)-D glutamyl-polymère.~
Ce polymère est mis en suspension dans 100 cm3 d'acide
trifluoroacétique contenu dans un réacteur muni d'un agitateur
et, à sa base, d'un filtre en verre fritté. Dans cette ~us-
pension, on fait passer un courant d'acide bromhydrique pendant
90 minutes. Ensuiter on essore la résine et on la lave 3
fois par 300 cm3 au total d'aclde acétique en agitant pendant
3 minutes après chaque addîtion de l'acide acétique et en esso-
rant à chaque fois. Les filtrats sont réunis et concentrés
à sec sous pression réduite ~20 mm de mercure) à 50C.
Le résidu ainsi obtenu est mis en suspension dans
30 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par ~iltration, lavé 2 fois
par 60 cm3 au total d'éther et séché. On obtient ainsi 1,97 g de
solide que l'on chromatographie sur une col.onne de 2,2 cm
de diamètre contenant 40 g de yel de silice neutre (0,04-0,063
mm).
On élue successivement par 350 cm3 d'un ~élange
cyclohexane-acétate d'éthyle (1/l envolumes), 400 cm3 d'acétate
d'éthyle, 700 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique
(95/5 en volumes), 950 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide
acétique (90/10 en voIumes); 750 cm3 d'un mélange acétate
d'éthyle-acide acétique (80/20 en volumes) et 1,6 litre d'acide
acétique en recueillant des fractions de 50 cm3~ Les fractions
65 à 94 réunies, sont concentrées à sec sous pression réduite
(20 mm de mercure) à 50C.- On obtient ainsi 0,B8 g d'acide N-
heptadécanoyl-L alanyl-D glutamique
Rf = 0,61 ~ ilicagel;n-butanol-pyridine acide acétique-
-34-

~s~aoo
eau ~50/20/6/24 en volumes),;7
AnaIyse: calculé %: C 63,~0 H 9,85 N 5,95
I~r. g6: 60,1 9,3 5,8
Ccndres su _ur ~ques: 5, 6 % .
,
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--3S--