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-- 1 --
La présente invention a pour objet de nouveaux
esters rétinoiques d'antibiotiques plus précisément des
esters rétinoiques d'érythromycine A, de lincomycine et de
clindamycine, leur procédé de préparation et des
compositions pharmaceutiques et cosmétiques les contenant
dans le traitement de diverses dermatoses, notamment dans le
traitement de l'acné.
Par ailleurs, les études en cours ont également
montré que ces esters rétinoiques selon l'invention étaient
doués d'une activité antitumo~ale.
La présente invention a essentiellement pour objet
l'utilisation de nouveaux esters rétinoîques d'antibiotiques
dans le traitement des dermatoses infectieuses ou non dont
l'origine peut être bactérienne, mycobactérienne et/ou liées
à l'implantation de certaines levures a caractère pathogène.
L'invention vise plus particulièrement l'utili-
sation de nouveaux esters rétino~ques d'antibiotiques dans
le traitement de l'acné.
L'acné est un désordre cutané, polymorphe,
(plusieurs types de lésions existant chez un même individu),
survenant à la puberté et régressant spontanément, dans la
majorité des cas, vers 20-25 ans.
L'acné concerne, chez les individus touchés, les
zones riches en glandes sébacées telles que front, face,
ailes du nez, torse, dos, ce qui montre une certaine
dépendance de cette dermatose vis-à-vis du sébum, produit de
synthèse de la glande.
Il n'existe pas d'acné sans séborrhée.
Bien que la séborrhée soit une des traductions du
brusque flux hormonal survenant à la puberté, l'acné ne
semble pas être liée à un désordre hormonal quelconque.
L'étiopathogènie de l'acné, bien que mal définie,
prend son origine dans la formation d'une lésion
caractéristique, le comédon. ~elui-ci résulte de
~k
13~0~31
- la -
l'obstruction du canal pilosébacé, par suite d'une
diskératinisation de la zone de l'infundibilum du canal.
Cette obstruction a pour effet majeur de modifier
la viscosité du sébum et les caractéristiques physico-
chimiques du milieu (pH, tension de vapeur d'oxygène ...).
Cette modification permet l'hyperprolifération des
souches residentes cutanées, principalement le
propionibactérium acnes, souche anaerobie ou aero-tolérante.
t L'acné ne possède en aucun cas de caractéristique
infectieuse dans le sens où cette dermatose ne correspond
pas à l'implantation d'une souche pathogène particulière et
qu'elle n'est pas transmissible.
Enfin, l'hyperprofilération bactérienne a pour
conséquence de libérer dans le milieu certaines protéases ou
hyaluronidases, d'origine bactérienne qui provoquent une
lyse du sac folliculaire et ainsi la libéra-
~300131
.
tlon de composés inflammatoires au sein du derme et déclenchent la réac-
tion de type inflammatoire de l'organisme.
Si la nature des composés lnflammatoires est à l'heure actuelle
non déterminée, leur origine bactérienne semble faire peu de doute, expli-
quant, par là, le bon succès thérapeutique dans l'acné inflammatoire, de
composés antibiotiques tant par voie orale que par vole topique.
Parmi les antibiotiques, l'érythromycine et la clindamycine sont
très souvent préconisées mais nécessitent (notamment pour l'érythromycine)
des concentrations relativement élevées en vue d'obtenir une action satis-
faisante.
Par ailleurs, comme l'ont montré des études récentes, certaines
souches de propionibacterium acnes présentent une résistance progressive
à l'érythromycine, à la lincomycine et à la clindamycine, de telle sorte
que le traitement par ces antibiotiques peut s'avérer peu efficace.
L'application topique de clindamycine et plus particulièrement
d'érythromycine se heurte également à un problème de pénétratlon à travers
le stratum corneum limitant de ce fait leur efficacité.
Les nouveaux esters rétinoIques d'antibiotiques, plus particuliè-
rement d'érythromycine A, de clindamycine et de lincomycine, selon l'inven-
tion, apportent une solution satisfaisante aux problèmes rencontrés par
l'utilisation de ces antibiotiques, dans la mesure où les études réalisées
ont permis de mettre en évidence que ces nouveaux esters ont une action
sélective sur le principal germe responsable de l'inflammation, à savoir
propionibacterium acnes, tout en ayant une très faible activité vis-à-
vis des germes cutanés, comme le staphylococcus epidermidis, ce qui
permet de traiter les affections de la peau sans que son équilibre en soit
perturbé.
On doit aussi remarquer que ces nouveaux esters rétino~ques
d'antibiotiques, notamment les esters rétinoIques all trans et 13-cis
d'érythromycine A et de lincomycine se sont avérés être actifs vis-à-vis
de souches de propionibacterium acnes résistantes à l'antiblotique pa-
rent.
Les nouveaux esters rétinoIques d'antibiotiques selon l'inven-
tion, se sont avérés être actifs sans présenter les inconvénients de
l'acide rétinoIque.
Ainsi, les nouveaux esters sont mieux tolérés par la peau et se
sont révélés être beaucoup moins toxiques par voie orale que l'association
antibiotique / acide rétinoIque.
Les esters rétinoIques d'antibiotiques selon l'invention, par
rapport aux autres esters connus d'antibiotiques, présentent l'avantage de
posséder une activité kératolytique dans le cas des esters de l'acide
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rétino~que all trans et une activité anti-séborrhé~que potentielles dans
le cas de l'acide 13-cis rétino~que, ce qui confère à ces esters une i~age
de "prodrug1'.
Les nouveaux esters rétinoIques d'antibiotiques selon l'lnven-
tion sont plus lipophiles, ce qui permet d'améliorer la pénétration à
travers l'épiderme.
L'état de la technique relatif à l'association d'acide
rétino~que et d'érythromycine est constitué par le produit vendu par les
Laboratoires CILAG sous la dénomination d"'Antibio-Abere~".
L'état de la technique relatif aux esters d'érythromycine A est
représenté par le brevet U.S. 2.862.921 qui se rapporte à la préparation
d'esters gras saturés et mono-insaturés d'érythromycine A tels que le
monostéarate d'érythromycine A et le monooléate d'érythromycine A.
L'état de la technique relatif aux esters de clindamycine et de
lincomycine est représenté notamment par le brevet allemand 2.017.003 qui
décrit la préparation d'esters de lincomycine et de clindamycine dont la
cha~ne acyle est comprise entre 1 et 18 atomes de carbone.
La présente invention a pour ob~et des esters rétinolques d'anti-
biotiques et plus particulièrement des esters d'acide rétinoIque all trans
et 13-cis d'erythromycine A, de lincomycine et de clindamycine, et les
sels desdits esters.
Les esters rétino~ques d'antibiotiques selon l'invention, peu-
vent éventuellement se présenter sous forme de mélanges mais, de préfé-
rence, ceux-ci sont d'une part les esters rétinoIques en position 2'
d'érythromycine A et d'autre part les esters rétino;ques en position 3 de
lincomycine et de la clindamycine.
Les esters rétinolques en position 2' d'érythromycine A peuvent
être représentés par la formule suivante :
o
H3C~",CH3
H ~ OH ~ OH ",CH3
~ H3C~ ~ ` O ~ ~ CH3
CH3 ¦ CH3
o:~/ ~ .
CH3 1 OICH3
\O ~ OH
*(marque de commerce)
R BSB/JD/LP - BR.75012
I ~
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dans laquelle R représente le radical rétinoyle all trans ou le radical
rétinoyle 13 Cis, le radical rétinoyle a~ant pour formule :
1l3 ~ ~
~ ~ ~ ~C S
~ ~9U
Les esters rétino~ques en position 3 de lincomycine et de
clindamycine peuvent être représentés par les formules suivantes :
~H3 C~3
~O~ C1
~OU ~il
III IV
dans lesquelles R a la même signification que celle donnée ci-dessus.
La présente invention a également pour ob;et le procédé de prépa-
ration des esters rétino~ques all trans et 13-cis d'érythromycine A, de
lincomycine et de clindamycine.
Différents procédés d'estérification peuvent être utilisés mais
de préférence cette estérification est réalisée en milieu solvant organi-
que anhydre, de préférence dans le tétrahydrofuranne seul ou en mélange
avec un autre solvant organique comme la pyridine, en faisant réagir un
excès d'anhydride mixte des acides rétino~[ue all trans ou 13-
cis (préparé in situ, par exemple,à partir de chloroformiate d'éthyle et
d'acide all trans ou 13-cis) avec l'érythromycine A, la lincomycine ou la
clindamycine sous forme de base en présence d'une base organique ou miné-
rale comme la pyridine et/ou l'hydrogénocarbonate de sodium.
Cette méthode à l'anhydride mixte permet d'obtenir les esters
rétinoiques en position 2' de l'érythromycine A et en position 3 de la
lincomycine et de la clindamycine, sans lsomérisation du radical rétinoyle.
Les autres procédés d'estérification. notamment de lincomycine
et de clindamycine par la méthode utilisant les imidazolides des acides
rétinoiques dans un solvant anhydre comme Le N,N diméthylformamide, en
présence d'une base comme le tertiobutylate de sodium ou de potassium,
conduisent à un mélange d'esters rétino~ques de ces antibiotiques.
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.
.,
1300131
Ainsi, par cette dernière méthode, l'ester en 7 de
la lincomycine est obtenu majoritairement avec les esters en
2, 3 et 4.
De même, on obtient un mélange de monoesters en 2,
3 et 4 de la cli~damycine.
`Par ailleurs, c~tte dernière méthode provoque
parfois une isomérisation du radical rétinoyle.
La présente invention a pour objet des
compositions pharmaceutiques ou cosmétiques pour le
traitement de diverses dermatoses, notamment l'acné,
caractérisées par le fait qu'elles contiennent dans un
véhicule anhydre acceptable pour fins pharmaceutiques ou
cosmétiques, en tant que composé actif au moins un ester
d'acide rétinoique all trans ou 13-cis d'érythromycine A, de
lincomycine ou de clindamycine tel que définis précédemment.
La présente invention a de préférence pour objet
des compositions pharmaceutiques administrables par voie
topique, orale, parentérale ou rectale ainsi que des
compositions a caractère cosmétique pour le traitement de
diverses dermatoses, notamment l'acné, cette composition se
présentant sous forme anhydre et contenant au moins un ester
d'acide rétino~que all trans ou 13-cis d'érythromycine A, de
lincomycine ou de clindamycine selon l'invention, à une
concentration comprise entre 0,01 et 10% mais de préférence
entre 0,05 et 1~ en poids par rapport au poids total de la
composition.
Pour la préparation des compositions selon
l'invention contenant, comme constituant actif, au moins un
ester rétinoique all trans ou 13-cis d'érythromycine A, de
lincomycine ou de clindamycine, on peut faire appel ~ des
véhicules et adjuvants décrits dans la littérature pour la
pharmacie, la cosmétique et les domaines apparentés.
Pour la préparation des solutions, on peut
utiliser par exemple un (ou des) solvant~s) organique(s)
1300131
- 5a -
acceptable(s) d'un point de vue physiologique.
Les solvants organiques acceptables sont pris
notamment dans le groupe constitué par l'acetone, l'alcool
isopropylique, les triglycérides d'acides gras, les éthers
de glycol, les esters d'alkyle en Cl-C4 d'acides à courte
chaine et les éthers du polytétrahydrofuranne.
Les compositions seLon l'invention peuvent
également renfermer des épaississants tels que la cellulose
~ et/ou des dérivés de la cellulose à raison de 0,5 à 20% en
poids par rapport au poids total de la composition.
Les compositions selon l'invention peuvent en
outre contenir en association, avec au moins un ester
rétino~que d'antibiotique selon l'invention, au moins un
autre agent anti-acné~que connu.
On peut, si nécessaire, ajouter un adjuvant usuel
pris dans le groupe formé par les agents anti-oxydants, les
agents conservateurs, les parfums et les colorants.
Parmi les anti-oxydants utilisables, on citera par
exemple la t-butylhydroxyquinone, le butylhydroxyanisole,
le butylhydroxytoluène et l'a-tocophérol et ses derivés.
13~0131
-- 6
Les transformations pharmacologiques et galéniques
des composés selon l'invention s'effectuent de facon connue.
Les formes galéniques peuvent être pour la voie
topique, des crèmes, des laits, des gels, des lotions plus
ou moins épaissies, des lotions portées par des tampons, des
pommades, des sticks ou bien des formulations aérosols se
présentant sous forme de spray ou de mousses.
Les compositions par voie orale peuvent se
présenter sous forme de comprimés, de gélules, de dragées,
de sirops, de suspensions, d'émulsions, de poudres, de
granulés ou de solutions.
La posologie par voie orale est d'environ 0,1 mg à
5 mg/Kg/jour et de préférence de 1 mg à 2,5 mg/Kg/jour.
Les compositions peuvent également se présenter
sous forme de suppositoires.
Le traitement de l'acné à l'aide des compositions
topiques selon l'invention consiste à appliquer deux ou
trois fois par jour une quantité suffisante sur les zones de
la peau à traiter et ceci pendant une période de temps de 6
à 30 semaines et de préférence de 12 à 24 semaines.
Les compositions selon l'invention peuvent
également être utilisees à titre préventif, c'est-à-dire sur
les ~ones de peau susceptibles d'être atteintes d'acné.
ETUDE COMPARATIVE SUR L'ACTIVITE DES ESTERS RETINOIQUES
D'ANTI~IOTIQUES
L'activité des esters rétinoîques d'érythromycine
A, de lincomycine et de clindamycine a été étudiée par la
méthode de dilution en vue de déterminer la Concentration
Minimale Inhibitrice (CMI), méthode décrite et employée par
G.A. DENYS et al, Antimicrobial Agents and Chemotherapy
(1983) 23, 335-337 et J.J. LEYDEN et al, J. Am. Acad.
Dermatol. (1983) 8 (1) 41-5, en utilisant comme souche de
propionibacterium acnes, la souche P37 fournie par CUNLIFFE
13~0~31
- 6a -
et HOLLAND.
Cette souche P37 a fait l'objet des études
decrites dans les publications suivantes:
- J. GREENMAN, K.T. HOLLAND et W.J. CUNLIFFE,
Journal of General Microbiology (1983) 129, 1301-1307,
- E. INGHAM, K.T. HOLLAND, G. GOWLAND et W.J.
CUNLIFFE, ibid (1980) 118, 59-65 et
- K.T. HOLLAND, J. GREENMAN ET W.J. CUNLIFFE,
t Journal of Applied bacteriology (1979) 47, 383-394.
Sélection et isolement des populations sensibles
et résistantes
La souche P37 est sensible à l'érythromycine comme
le montre la Concentration minimale inhibitrice
(CMI = 0,78~g/ml).
En revanche, après 8 sous-cultures successives
dans le même milieu, (RCM*19/20, DMSO 19/20 en volume) en
vue d'obtenir une stabilisation progressive de cette souche
à ce milieu, une résistance progressive
* Reinforced Clostridium Medium (OXOID(ma
Ag~
` ` ~3~0131
_j_
l'érythromycine se manifeste sous la forme suivante :
- Après étalage d'un inoculum standardlsé (D0=1,8 à 450nm) sur
milieu gélosé (RCM + furazolidone), en bo~te de Petri, un dlsque de 9 mm
de diamètre est déposé au centre de celle-ci. Sur le disque, 50~g
d'érythromycine (en solution dans le DMS0) sont deposés.
- Après 6 jours à 36C en milieu anaérobie (système GAS-PAK*
B.B.L) une zone d'inhibition de la pousse de la souche est nettement visi-
ble (diamètre total = 42mm), l'immense majorité des colonies étant située
à la périphérie de la zone d'inhibition.
En revanche à l'intérieur de celle-ci quelques colonles apparais-
sent nettement.
Les deux types de colonies sont alors prélevés par arrachage du
milieu gélosé (Anse de platine seérilisé):
1) à l'intérieur de la zone d'inhibition on préiève les souches
dénommées P 37 E~ en raison de leur résistance apparente à
l'érythromycine.
2) à 1cm au-delà de la périphérie de la zone d'inhibitlon, on
prélève les souches dénommées P 37 E~.
Après isolement et culture, les souches P 37 E~ et P 37 E
montrent effectivement des sensibilités très differentes à l'érythromycine
illustrées par les valeurs suivantes des CMI respectives.
CMI (~g/ml)
P 37 0,78
P 37 E~ 0,78
P 37 E ~ 50
Ce phénomène est confirmé par l'étude de la CI 50 (Concentration
inhibitrice à 50%) qui représente la concentration d'érythromvcine où, à
un temps constant de culture, 502 de survivants parmi la population sont
retrouvés.
CI 50 (~g/ml)
P 37 50
P 37 E ~ 5
P 37 E e 100
La Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) exprimée en ~g/ml
*(marque de commerce)
~ -` .
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--8--
des esters rétino~ques d'érythromycine A, de lincomycine et de
clindamycine testés vis-à-vis des souches P 37~ et p 37e est reportée
dan~ le tableau suivant :
ESTERS RETINOIQUESP 37 E ~ P 37 E ~
D'ANTIBIOTIQUES(sensible)(résistante)
0-rétinoyl (all trans)-2'-
érythromycine A 14 13
0-rétinoyl(13-cis)-2'-
érythromycine A 20 34
0-rétinoyl(13-cis)-3-
lincomycine 17,5 25
0-rétinoyl(all-trans)-3-
clindamycine 18 50
0-rétinoyl(13-cis)-3-
clindamycine 1.5 35
TEMOINS :
0-oleoyl-2'-érythromycine A (Z-9) 50 100
0-oléoyl-3-lincomycine 19 42
0-oléolyl-3-clindamycine 54 >138
Erythromycine A l > 50
Lincomycine 13 66
Clindamycine 1 10
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~3QQ~31
Le tableau ci-dessous montre les concentrations minimales inhibi-
trices des esters rétinoiques d'antibiotiques vis-à-vis de deux souches de
Staphylococcus Epidermidis :
ESTERS RETINOIQUESStaph. Epi.3Staph. Epi.6
D'ANTIBIOTIQUES
0-rétinoyl(all trans)-2'-
érythromycine A 75 80
0-rétinoyl(13-cis)-2'-
érythromycine A 110 110
0-rétinoyl(13-cis)-3-
clindamycine 113 113
0-rétinoly(13-cis)-3-
lincomycine 100 100
TEMOINS :
lS érythromycine A 13 30
Clindamycine 7 8
lincomycine 14 20
La souche "Staph. Epi. 3" est isolée d'un patient acnéique alors
que la souche "Staph. Epi. 6" est isolée d'un patient non acnéIque. L'isole-
ment de ces souches est effectué selon la méthode de WILLIAMSON-KLIGMAN
("A new method for the quantitative investigation of cutaneous bacteria"
P. WILLIAMSON et A. KLIGMAN, J.I.D., Vol. 45, n6, 1965). Des dilutions
décimales du prélèvement sont réalisées et 0,1 ml de ces dilutions est
~5 ensemencé sur un milieu sélectif permettant l'isolement des staphylococcus.
Comme on peut le constater dans le premier tableau, les esters
rétinoIques d'érythromycine A et de lincomycine sont plus actifs sur les
souches de propionibacterium acnes résistantes que les antibiotiques
parents. De plus, l'ester olé~que en 2' de l'érythromycine A (brevet U.S.
2.862.921) ainsi que l'ester oléIque en 3 de la clindamycine (DOS
2.017.003), pris comme esters de comparaison, se sont révélés être nette-
ment moins actifs sur les souches sensibles (P 37 ~ et résistantes
(P 37 E~ que les esters de l'invention renforçant ainsi l'intérêt notam-
ment des esters rétinoIques d'érythromycine A et de clyndamycine. Le se-
cond tableau, lui, montre l'intérêt de tous ces esters rétinoiques d'anti-
biotiques vis-à-vis de "l'écologie cutanée" étant donné qu'ils sont beau-
coup moins actifs sur les souches de staphylococcus epidermidis que les
antibiotiques parents.
On va maintenant donner à titre d'illustration plusieurs exem-
ples de préparation des esters rétinoiques d'antibiotiques selon l'inven-
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1300~3~
- --10--
tion ainsi que plusieurs exemples de compositions pharmaceutiques ou cosmé-
tiques dans le traitement des dermatoses, notamment de l'acné.
EXEMPLE 1
5 Préparation du 0-rétinoyl(13 cis)-2' érythromycine A
Dans un ballon, sous atmosphère inerte, on dissout 5g
(16,6 mmoles) d'acide rétinoIque (13-cis) dans 35 ml de tetrahydrofuranne
anhydre ; le mélange réactionnel est refroidi à 0C puis on verse 3ml
(38 mmoles) de pyrldine anhydre et 1,6ml (16,6 mmoles) de chloroformiate
d'éthyle. La solution est agitée 5 minutes et on ajoute 2,5g (30 mmoles)
d'hydrogénocarbonate de sodium puis 4,9g (6,7 mmoles) d'érythromycine A
préalablement dissous dans 150ml de tetrahydrofuranne. Le mélange
réactionnel est alors laissé sous agitation pendant 10 heures en laissant
remonter à température ambiante (chromatographie sur couche mince de gel
de silice : chlorure de méthylène/méthanol 10%). La solution est versée
sur 60ml d'eau puis extraite à l'acétate d'éthyle. La phase organique est
sèchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée sous vide par-
tiel. Le produit brut ainsi obtenu est chromatographié sur colonne de gel
de silice (H.P.L.C) en utilisant l'éluant : acétate d'éthyle (7)/hexane
(3) pour aboutir à l'isolement de 4,4g (65~ de rendement) de 0-rétinoyl(13
cis)-2'-érythromycine A pur.
F ~ 82C (hexane I acétate d'éthyle)
[~¦22 ~ -17 (C = 6mg/ml dichlorométhane)
D
Microanalyse : C57Hg3NO14; M-1016.4
C H N
Cal. % : 67,36 9,22 1,38
Trouv. % : 67,48 9,32 1,38
Infra-rouge : bande à 1735 cm1 (ester)
R.M.N. du C (CDCl3, réf. interne T.M.S.)
Effets ~ négatifs en 1'(-2,2 ppm) et 3'(-2,1ppm) indiquent la position
de l'ester en 2'. Les carbones C"20 (20,94ppm), C 14 (117,28ppm) et
C"12 (131,9ppm) de la cha~ne rétinoique sont en accord avec la
stéréochimie 13 cis de la cha~ne rétinoique.
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13~0~13~
--ll--
EXEMPLE 2
Préparation du 0-rétinoyl(all trans)-2'-érythromycine A
Dans un ballon, sous atmosphère inerte on dissout 5g
(16,6 mmoles) d'acide rétinoIque (all trans) dans 35 ml de
tétrahydrofuranne anhydre le mélange réactionnel est refroidi à 0C puis
on verse 3ml (38 mmoles) de pyridine anhydre et 1,6 ml (16,6 mmoles) de
chloroformiate d'éthyle ; la solution est agitée 5 minutes et on ajoute
2,5g (30 mmoles) d'hydrogénocarbonate de sodium puis 4,9g (6,7 mmoles)
d'érythromycine A préalablement dissous dans 150 ml de tetrahydrofuranne.
Le mélange réactionnel est alors laissé sous agitation pendant 10 heures
en laissant remonter à température ambiante (chromatographie sur couche
mince de gel de silice : chlorure de méthylène/méthanol 10%)~ La solution
est versée sur 60 ml d'eau puis extraite à l'acétate d'éthyle. La phase
organique est sèchée sur sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée
sous vide partiel. Le produit brut ainsi obtenu est chromatographié sur
colonne de gel de silice (H.P.L.C.) en utilisant l'éluant : acétate
d'éthyle (7)/hexane (3) pour aboutir à l'isolement de 4,1g (60~ de rende-
ment) de 0-rétinoyl (all trans)-2'-érythromycine A pur.
F = 76C (acétate éthyle / hexane)
~ 65 (C=2 mg/ml dichlorométhane)
D
Microanalyse C57H93N14'4H2 ; M = 1088~5
C H N
Calc. % : 62,8~ 9,35 1,29
Trouv. ~ : 62,91 8,90 1,29
R.N.M. du C (CDCl3~ réf. interne T.M.S.)
effets ~ négatifs en 1'(-2ppm) et 3'(-1,9ppm) indiquent la position de
l'ester en 2'. Les carbones C"20 (14,1ppm), C"14 (119,36ppm) et C"12
(135,19ppm) sont en accord avec la stéréochimie all trans de la cha~ne
rétinoIque.
EXEMPLE 3
Préparation du 0-rétinoyl(all trans)-3-clindamycine
Dans un ballon, sous atmosphère inerte on dissout 5g
(16,6 mmoles) d'acide rétinoIque (all trans) dans 30ml de
tétrahydrofuranne anhydre ; le mélange réactionnel est refroidi à 0C puis
on-verse 6ml (76 mmoles) de pyridine anhydre et 1,6ml (16,6 mmoles) de
chloroformiate d'éthyle ; la soluticn est agitée 5 minutes et on ajoute
1.25g (15 mmoles) d'hydrogénocarbonate de sodium pUi8 2,35g (5,5 mmoles)
de clindamycine préalablement dissous dans 100 ml d'un mélange
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13~:)131
-12-
tétrahydrofuranne (8) / pyridine (2). Le mélange réactionnel est alors
laissé sous agitation pendant 10 heures en laissant remonter à température
ambiante (chromatographie sur couche mince de gel de silice : chlorure de
méthylène / méthanol 5%). La solution est versée sur 80ml d'eau puis ex-
traite à l'acétate d'éthyle. La phase organique est sèchée sur sulfate de
magnésium, filtrée puis concentrée sous vide partiel. Le produit brut
ainsi obtenu est chromatographié sur colonne de gel de silice (H.P.L.C) en
utilisant l'éluant : acétate d'éthyle (5) / hexane (5) pour aboutir à
l'isolement de 2.15g (55% de rendement) de 0-rétinoyl(all trans)-3
-clindamycine pur.
F = 62C
[~ 22 = +50o (C=100 mg/ml dichlorométhane)
Microanalyse C3~H59N2S06Cl, 2,5H20 ; M = 752,5
C H N
Calc. % : 60,44 8,08 3,23
Trouv. % : 60,66 8,57 3,72
R.M.N. du C (CDC13, réf. interne T.M.S.) : effets ~ négatifs en
position 4 (-2,8ppm) et en position 2 (-1,9ppm). Les déplacements chimi-
ques du C"14 (117,84ppm) et du C"20 (14,11ppm) confirment la
stéréochimie all trans de la cha~ne rétinoyle.
EXEMPLE 4
Préparation du 0-rétinoyl(13 cls)-3-clindamycine
Dans un ballon, sous atmosphère inerte on dissout 5g
(16,6 mmoles) d'acide rétinolque (13cis) dans 30ml de tétrahydrofuranne
anhydre ; le mélange réactionnel est refroidi à 0C puis l'on verse 6ml
(76 mmoles) de pyridlne anhydre et 1,6 ml (16,6 mmoles) de chloroformiate
d'éthyle ; la solution est agitée 5 minutes et on a~oute 1,25g (15 mmoles)
d'hydrogénocarbonate de sodium puis 2,35g (5,5 mmoles) de clindamycine
préalablement dissous dans lOOml d'un mélange tétrahydrofuranne (8) /
pyridine (2). I.e mélange réactionnel est alors laissé sous agitation pen-
dant 10 heures en laissant remonter à température ambiante
(chromatographie sur couche mince de gel de silice ; chlorure de méthy-
lène / méthanol 5%). I,a solution est versée sur 80ml d'eau puis extraite à
l'acétate d'éthyle. La phase organique est sèchée sur sulfate de magné-
sium, filtrée puis concentrée sous vide partiel. Le produit brut ainsi
obtenu est chromaeographié sur colonne de gel de silice (H.P.L.C) en utili-
sant l'éluant : acétate d'éthyle ~5) / hexane (5) pour aboutir à l'isole-
ment de 2g (51% de rendement) de 0-rétinoyl(13cls)-3-clindamycine pur.
BSB/JD/LP - BR.75012
13~ 31
-13-
F = 95C (Hexane / acétate d'éthyle)
[al 20 = +111 (C= 15 mg/ml dichlorométhane)
D
Microanaly9e C38H59ClN2S6 ; M - 707~4
C H
Calc. % :64,52 8,41
Trouv. % : 64,47 8,45
13
R.M.N. du C (CDC13, réf. interne T.M.S.)
La po~.ition de l'ester est indiquée par l'effet ~ positif en 3
(+1,77ppm) et les effets y négatifs en 2 ( 1,4ppm) et 4(-2,5ppm). La confi-
guration 13cis est confirmée par le C"20 (20,93ppm) et le C"14
(115,94ppm).
EXEMPLE 5
Préparation du 0-rétinoyl(13cis)-3-lincomycine
Dans un ballon, sous atmosphère inerte on dissout 5g
(16,6 mmoles) d'acide rétino~que (13cis) dans 30ml de ~étrahydrofuranne
anhydre ; le mélange réactionnel est refroidi à 0C puis l'on verse 6ml
(76 mmoles) de pyridine anhydre et 1,6ml (16,6 mmoles) de chloroformiate
d'éthyle ; la solution est agieée 5 minutes et on ajoute 1,25g (15 mmoles)
d'hydrogénocarbonate de sodium puis 2,2g (5,4 mmoles) de lincomycine préala-
blement dissous dans lOOml d'un mélange tétrahydrofuranne (7) / pyridine
(3). Le mélange réactionnel est alors laissé sous agitation pendant
10 heures en laissant remonter à température ambiante (chromatographie sur
couche mince de gel de silice : chlorure de méthylène / méthanol 10%). La
solution est versée sur lOOml d'eau puis extraite à l'acétate d'éthyle. La
phase organique est sèchée sur sulfate de ma~nésium, filtrée puis concen-
trée sous vide partiel. Le produit brut ainsi obtenu est chromatographié
sur colonne de gel de silice (H,P.L.C.) en utilisant l'éluant : acétate
d'éthyle (8) / hexane (2) pour aboutir à l'isolement de 1,85g (50~ de rende-
ment) de 0-rétinoyl(13cis)-3-lincomycine pur.
F ~ 95 ~hexane / acetate d'éthyle)
[~ 20 = +103 (C-7 mgjml dichlorométhane)
Microanalyse C38H60N2S7' 2,5 2
C
Calc. % : 62,18 9,03
Trouv. % : 62,33 8,64
R.M.N, du C (CDC13, réf. interne T.M~S.~
BSB/~D/LP - BR.75012
13~0131
-14-
La position de l'ester est indiquée par l'effet 3 positif en 3
(~1,6ppm) et les effets ~ négatifs en position 2 (-2,4ppm) et 4(-1,9ppm).
La configuration 13cis est conflrmée par le C"20 (20,98ppm) et le C"14
(115,83ppm).
EXEMPLE 6
Préparation du mélange de monoesters de 0-rétinoyl(all trans)-7-linco-
mycine, O-rétinoyl(all trans)-3 lincomycine et O-rétinoyl
(all trans)-2 lincomycine
Dans un ballon sous atmosphère inerte, on dissout 30g
(74 mmoles) de lincomycine dans 300ml de N,N-diméthylformamide anhydre
puis 830 mg (7,4 mmoles) de tertiobutylate de potassium sont a~outés et
l'on poursuit l'agitation à température ambian~e pendant 9O minutes. On
verse alors une solution de 13g (37 mmoles) de rétinoyl(all trans)-l
lS imida~ole dans 150 ml de N,N-diméthylformamide et le milieu résultant est
agité a température ambiante pendant 12 heures (chromatographie sur couche
mince de gel de silice : chlorure de méthylène/méthanol 7,5%). La solution
est versée sur 500 ml d'eau puis extraite à l'acétate d~éthyle. La phase
organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée pUi9 concentrée
sous vide partiel. Le produit brut ainsi obtenu est chromatographié sur
colonne de gel de silice (H.P.L.C.) en utilisant l'éluant : acétate
d'éthyle (7)/hexane (3) pour aboutir à l'isolement de 39g (77%) d'un mé-
lange de monoesters rétinoiques (all trans) de lincomycine en positions 2,
3 et 7.
R.M.~. du C (CDC13, ref. interne T.M,S,).
- Effets ~ négatifs en 8(-2,5 ppm) et en 6(-3,8 ppm) indiquent le lieu
d'estérification d'un monoester en position 7,
- Effet y négatif en position 1(-4 ppm) indique le monoester en position 2
et les effets y négatifs en 2(-2 ppm) et 4(-2,6 ppm) indiquent la position
du monoester en position 3. Les positions du Cl sont à 85,06 ppm pour le
monoester en 2, à 88,45 ppm pour le monoester en 7 et à 89,67 ppm pour le
monoester en position 3.
La configuration de la cha~ne rétinolque all trans est indiquée
pour le C"14 à 117,78 ppm et pour le C"20 à 14,08 ppm ; on note une
trace d'isomérisation par la présence d'un pic à 115,2 ppm (C"14) indi-
quant l'isomère 13 cis.
BSB/JD/LP - BR.75012
~.3~0131
-15-
EXEMPLE 7
Préparation du mélange des monoesters de O-rétinoyl(all trans)-2 cllnda-
mycine, O-rétinoyl(all trans)-3 clindamyc:Lne et O-rétinoyl(all trans)-4
clindamycine
Dans un ballon sous atmosphère Lnerte, on dissout 20g
(47 mmoles) de clindamycine dans 250 ml de N,N-diméthylformamide anhydre
puis 527mg (4,7 mmoles) de tertiobutylate de potassium sont a~outés au
milieu réactionnel qui est alors agité à température ambiante pendant 90
minutes. On verse alors une solution de 8,250g (23,5 mmoles~ de
rétinoyl(all trans)-1 imidazole dans 150 ml de N,N-diméthylformamide
anhydre et le milieu résultant est agité à température ambiante pendant 12
heures (chromatographie sur couche mince de gel de silice : chlorure de
méthylène/méthanol 5%). La solution est ensuite versée sur 500ml d'eau
puis extraite à l'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur
sulfate de magnésium, filtrée puis concentrée sous vide partiel. Le pro-
duie brut ainsi obtenu est chromatographié sur colonne de gel de silice
(H.P.L.C.) en utilisant l'éluant : acétate d'éthyle (5)/hexane (5) pour
aboutir à l'isolement de 28g (85~) d'un mélange de monoesters rétinoiques
(all trans) de clindamycine en positions 2, 3 et 4.
R.M~N. du 3C (CDCl3, ref. interne T.M.S.)
- Effet ~ négatif en position 1(-3 ppm) indique la position de l'ester
en 2.
- Effets Y négatifs en position 4(-2,8 ppm) et 2(-1,9 ppm) indiquent le
monoester en posltion 3 et effet ~ négatif faible en position 3 indique le
monoester en position 4.
Les positions du C1 sont à 84,63 ppm pour le monoester en 2, à
88,79 ppm pour le monoester en 3 et à 87,98 ppm pour le monoester en 4.
La configuration all trans de la cha~ne rétinoIque est majori-
taire (C"l4 à 117,5 ppm et C"20 à 14,08 ppm) mais des traces
d'isomérisation sont nettes, notamment en C"20 et en C"14.
COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES ET COSMETIQUES
A- GELS POUR LE TRAITEMENT TOPIQUE DE L'ACNE
1. Hydroxypropyl cellulose............................... lg
Butylhydroxytoluène............................... 0.05g
O-rétinoyl(13cis)-3-lincomycine................... 0.5g
Isopropanol q.s.p........ ..................... ~................ 100g
BSB/J~/LP - BR.75012
130~L3~
-16-
2. Hydroxypropyl cellulose.............................. .1.5g
Butylhydroxytoluène.. ,.,................................ 0.05g
O-retinoyl(all trans)-3-clindamycine............... Ø3g
Isopropanol q.s.p.................................. .100g
B- LOTIONS POUR LE TRAITEMENT TOPIOUE DE L'ACNE
1. Butylhydroxytoluène..................................... 0.05g
O-rétinoyl(all trans)-2'
érythromycine A.......................................... lg
Trlglycérides d'acides gras en
C 8 -C 12 q.s.p....................... .,..... ,.... 100g
Dans cet exemple, le composé actif peut être remplacé par
la même quantité de O-rétinoyl (13-cis)-2' érythromycine A.
2. Butylhydroxytoluène................................. ... . 0.05g
O-rétinoyl(13cis)-3-clindamycine.................. ... .. 0.7g
Dlméthyl éeher du polytétrahydrofuranne
(viscosité 22Cpo) de formule :
CH 3 0 ~(CH 2 ) 2 -CH 2 -CH 2 ~ C 3........ q.s.p..... .. lOOg
C - STICK POUR LE TRAITEMENT TOPIQUE DE L'ACNE
Vaseline blanche.................................. ... ... 52g
Huile de vaseline................................. ... ... 15g
Paraffine raffinée................................ ... ... 32g
O-rétinoyl(all trans)-2'
érythromycine A................................... ... .... lg
D - SUPPOSITOIRE (COMPOSITION POUR 1 UNITE)
O-rétinoyl(all trans)-2'-érythromycine A.............. 0.05g
Triglycérides d'acides gras C 8 -C 12 ................ 0.25g
Glycérides semi-synthétiques q.s.p....................... 2g
BSB/JD/LP - BR.75012
~3~33
- 16a -
E - CAPSULES DE 500 mg
Les parois des capsules sont constituées de glycérine, de
sorbitol et de gélatine.
1. Capsule à 50 mg de composé actif.
0-rétinoyl (13 cis)-2'-érythromycine A ................. 50 mg
Huile de vaseline fluide ............................... 200 mg
Huile de vaseline épaisse .............................. 250 mg
2. Capsule à 10 mg de composé actif.
0-rétinoyl (13 cis)-2'-érythromycine A ................. 10 mg
Butylhydroxyaminose .................................... 0,05 mg
Butylhydroxytoluène .................................... 0,05 mg
Tribéhéna~e de glycérol ................................ 100 mg
Triglycérides d'acides gras en
C - C q.s.p. ........................................... 500 mg
8 12
F - GELULES
Les parois des gélules sont constituées de gélatine et de
bioxyde de titane.
0-rétinoyl (all trans)-2'-érythromycine A .............. 20 mg
Silice colloidale ...................................... 2 mg
Stéarate de magnéslum .................................. 2 mg
Amidon de mais ......................................... 76 mg
Lactose q.s.p. ......................................... 250 mg
___ .______ ___
