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~ J V D J ~ r u x l ~ li U ~ r I U ~ U I U ~ J I ~ ~ * ;~ ' ~ n, * I
., ~f,~.`j5~ t~
I
;P~SIl'~ STAeILI~EI~ A ~/~5E ~E FACS~U~ : ~E CROIS~ANCE ~1~
LQ l;'/~MI LLE l:~F ~T kE ~EXTRANE ~ULF~Al'~, E 8E~; ~PPLICATI4t~J~.
L~ pré~ent~ inventlon se! roppe~ t~ ~ Un~
compo~ltlvn ~to~ b~e d' ~1 mo~n~ u~ f~e~eur d~
crols~nc~ dc 1~ femllle FGI~ et do d~xt:~ l~aa ~ul.fot~, ~ln~l
c~u~ ~u,~ ~ppllcc~tior,~ de cett0 compo~tlon z~to~ e d~n3 ~e~!s
domolne:3 de l~ m~decine, d~ l~ ch~rurlsio d~ 1~ co~méto-
lo~ le, d~ 1~ blc~technoloF~e et de l~ blo v~ c~llul~lr~r
et, plus partl~llLère:ment, clQns lo~ do~c .n~e ot~ les ~qCteL~rg
l~J de CfOl5 ~nce peuvent etre l~t~lls~ com~ ~ ~g~-nts~ th~rsp~u-
tlque~, not~ nt er~ clc~trla4tion et f~ 5~ r~t~on
ti~ul~ir~, ~in~i que comme ~ent8 cosm~ :lqu~-
~ 4 d~couv~rt~ d~ l~ f~m1 llo ~ B factaur i ~e
cr~ anç~ des flbroblsste3 ~courc~@nt ds~5n~ P~
l'~ l' ~br~Yiatlon (~FGF~ - Fibrobln~t Orowth 4ctor~ a ~t~ f~lt~
ulte des e~.ttld~ de~ ~tlvlt~ ble:~ ~glq~u~o f~cte~r3 d~
crol$snnc~ obtenues dons lea extr~lts d' n tr~ rond nomorq~
d~ tis~u:s ou ~' or~s~n~s ~c~veau. hypovhj s~, r~t~n~. hunn6!u
vitr~e, ehoroïd~, lrl~ ortil~e, re~n, ~oi~, pll~cents,
or~ ut~ m. pl"oste~t~ o~ n~ e, et ). L~ dlv~r~it~
m~m,~ dl~3 tlss~s ~tudi~3 4t d~s c~lul~ tlmul~-sJ p~r ~:~3:~
t'e-::tl~lJrs ~'n v~ro Ct ln ~iYC~, ~ln~l que l~ ~r~ d n~b
d' .~.~u1p~ ~ls rech~rche qu~ ont ~nd~pen~ mm~nt contsq~b~
c~rnc~ ti-on, b l' l:~o).~m~nt ~t ~ l' 1 ~n~ ti~n
2 compl~te to ce~ fsctcurs, expllq~2nt ll~ a~ultltu~e de;; non~
at de~ 51gle~ donn~ por ce~ ~il f ~ nlt~ ~utqur~ pour l~:~
d~31~ner. Il ~ppar6~t ~ln~ nten~lnt tl- f~on cl~lre qu~3 :
tou~s ce~ ~xtt~ait~ cont L~3nne!nt d~!~ faet~ r~ll d~ ~rol~snnce do
la f~mlll~ des FQF3 et que cott~a f~ ll p~ut ~tre
3~ r~pr~nt~e por d~u:c br4n~he~3 pr~nclpal~ ~:
L~ premi~r br~nch~ t~ d~C It- ~ousl l~fi noms de
F&F bQsiq~, de f~ct~ur de Cr~Oi~S~nCQ b oiqu~ Ou d- typ~ 2
a~ n po~r l~ h~p4rln~ ou ~ 3porln ~ind~ ~ O~c~th l~octoro
(~UCI: II ), dG! f~ctel~r d~ ~rol~ nc-3 çl~r v~ du ~rvotau ou
3.5 ~r~ln~ lv~sd Crowth ~actor II 5~F X~ , d~ ~nct~3ut~ de
crol~G~nce d~rlv~ de l' o~ll ou E;re-D~l ~ Ct~owth ~tor I
,,
. . . . . .. . . . . . . . .
Z~ S~ l
i'~T ' ~3
P ac t e~lr c~e c roi ~ nc~ d~3 ~ t r~Cyt o~ I X
A~F II, d~ fnctel~r de croiS~nCe d4rlv~ ~u co~ei1
t c ., D I o~ u~ l o deux~ a b 4r.che cl~ t om1 1 1
~0~ t~ d~crlt~ sou~ les nom$ tle FCF ~1'd~ ou f~ctc\Jr
'j af f ln po~lr l' hépar1ne do ~ype I Ha~;F I , f~ctour d~rlv~ du
cerve~u ou B~OF X, de fc~ctour de crolu~ nl;~ d~rive d~ 1' o~ll
ou E~)CI; II, ~e f~ctollr d~ crol~s:3rln~ lo I~$trocytc~ u
ACF I, de f~ct~ur de cro~ nco d~rlv~ u cart~lnEse
~CDCF I), etc. A tlt~ e r~r~nc~ b bllo~r~phiqu~
concerna~t le~ f~teur de crois~3~nce, n ~lt~r4
y R. L.obb, d~o~3 ~An~lytic~l Bloch~mLo .ry ~ a4
~Ig~>o, et J. Courty ~t coll, dc~n~ ~h~m~ Blophy~. Re~.
Comtnu~ 10~-10~ ~98G~.
Ces ~u~taur~ ort donc et~ norn ~o, soit solon le
~yp~ d~ cellule~ clble$ utili~s ~f~ct ur3 cl~ ~oio~nc:~
dc:s fiDrobl~3t~ trocyt~s ou ~llule endoth~ , eve~
lq3 ~lgll93 r~pe~tlvem~nt FCF, AC~, ECO ~, oo~t 5elon lo
.~OI,II~C~3 d' o~ ce fuct~ur ~:~t extrQit ~p~r e~compl~, f~ct~ur d~
croi~ ce d~r~v0 du cerv~u, t~ d~ 1~ r~ln~ s~u d~:3
) yeu~ o~l-til~3, d' h~p~tocyt~ en cu ture, ~ lc;
s1~1eo r~_:3p~ctlv6~ment B~..F, RClCF, Ft~P', C3GE~, HI~GF, ~:t~. ).
s~lt encor~ ~ulon un~ proprl~t~ b~o~him c~u~ ou b~ olo~;Lque
(facteur,~ ~ c~ol~u~ ce ~f~ p~ulr 1I h porl~ 0~ ~u
î nct~r tumor~l ~n~;lo~ nlq~R ~TI~ ~au;c prin~:lp~ r,
,:'i-~ br~ncl-e~ d~ l~ t~emllle l~tAllt ~lor~ nomn ~ lon co~ æl~lo~ :
pr~c~ s ou 3ulvls d~ l~ mentis~n ~4c1dl~ ou ~b~iquQ--, ou :lo
la m~ntlon l~typ~ - ou ntyps II~.
C' ~:3t ~n ~llv~nt l' ~t~ ~lt~ b o~oE~ u~ ~ur de~
C~llu~ n cultl.lre qu~ ee~ f~ct~ur~ on pll ~tr~a p~rlf~
L~ prem1~r~ cor~ct~rLot~qu~ phy~l~o- hlmique~ ~poldo
n~ol~eulolre et point l~o~lectr~qu~) orlt ~t~6 pub~ s p~r
Co~ipocl~rowlcz, ,r, Biol. Chem. ~EQ. 2~lY C147Y~ po~Jr ln ~orm~3
b~3Lqu,3,. ~t p~r ~i~rrlt~ult et coll., J. N~3uroscl. I9L 47~ 0
( 19~z> pour lcl form~ ~c1de.
;~ '. ,.
'~ . .
, .
'. , ~ ; ' ~ ' ' '~ "'' ` " ' ' " :
' ' ' ' ' ' ' ' j ' '.'.
~- Zil~ r~ 5~l
l~o purificntlon ~ homog~n~lt~ ~e~ d~UK fqrm~ u
r~l ~ permi~ ~' ét~bllr l~urs ~tructure0 prlmolre~; E.~ch r:,
~t .-oll., Pro~. Notl. f\c~d. Sc~. I.JS, ~ ~!!S07 ~15B~), p~u~
1~ ferln~n 4~1qu~a, e~ Oirnenez GÇ~ SO et C411., 5clonc~
l~85~ l'385), po~r la forme ~c1~3. L~ lsol~men~ di~ls d~x
forrn~ t~ ~r,~ndement felvorl~! por la dlSeouv~cte ~' un~
forte nfflnlt~ de C06~ fscteur~ pour 1'. h pel~ln~ ~t
1 ' ut 11 i~aS lon subsé~uent e d' un~ chrc~at ~r~phl~ d' ~ f lnl t
Gur h~parine lrnlmoblll~e (Shlng et coll , Scl~nc~, .~,
1b 1296~ 9 ~1984) ).
In v~ tro, le33 FOF~ ~ont cnp~b e~ ~e ~ ln
prol~ f~rntion ~t 1~ dlff~r~nci~tlon d' u gr4nd nonlbr~ ~e
celll~lo~3 prov~R~nt ds tl~sus ~t e~p~c~:~ dlff~rent~. ~n
c~ tcr4 les cellule~ flbrobl~.stlques, en oth~
15 ~plt~ la.~ s k~r~tlno~yte3, ehondr ~y~o, myo~l~
~stro~5~tq3, ~t~ n ~ n~lera ~g~ n 10 ~Ole d~ FGr::~
d,3n.s 1.~ survi~ neuron~le. In v~ ~rc?. 1~ propri~e~D
ncurotroph~ue3, anE5lo~énique:P ~t Si~ loonte~ dr~ FC;F.s ol~t
c~ n;qnt ~t~ d~montr~-~s d~r\s de nombr~ Ix ~yot~m~
XO L~ r~l~, dqn~ la Yttlmlll4tlon ~ 1~ cl~oL~9d~ d.
1'~pid~trms, d'un extrE~it ~qu~ux de r~tl ~ p4rtl~ m~nt
purifl,~ et contenont donc du FGF comm0 ~lnclpe nctlf, e-~t
indlqu~ d~n.s 1~ br~vqt fr~n~ 3 n~ 2 4~ , OO~. L~ r~ e C~ ~
m~me ~::tr~it 5U~ cicutrls~tion d' ~pl h~llum d~ c~l-n*~ ~t
~5 indl~ué à~n~ le brev~t ~m~ric~ln n' 4 ~ ~7 435. ~pul~ ic~
de no~rellx br~v~ts ont ~t~ d~llvr~ d~ norn~r~u~ce~ -
publlc~tiono s~lentl~lque~ ~3nt poru, ~u ~r~nt lo r~l~ d~:3
I~Crs purlflé~; t~n~3 la r ~nérc~lon ~t 1 ~l e~eh~rl3~ion de 1~ : .
p*~u, dl_$ V~iS~ x, de,s r,erF~, d2~4 09, d-~ muscls:~, ctc.
L~ plup~rt :1~ c~;3 trav~ux r~ult~nt d* 4 tron~pa~tlon de~
obsarvot ian:~ o~tenues t3ur ~s c~lluli~s~ n eulture ~u;~ m~m~4
1 U l ~ v~ ~c7,
/~ln~l, 1' ~ppl~ ~ation ~op~quo ~ ~3F ~ul ou
1' utlli.~atlon d~ polyln~r~, t'~pon~ , o ~1A OU ~e pl~mp~:~
,35 p~rmett~nt l~n r~larg~ t de3 FGF~, ~Ut lnduiro urla
n~oan~rl o$~n~se ~t url~ r~n4r~t lon n~ ~U~ ou cut~n~e.
,: . . . , :. : ~
'' ; , ' ~ ,,: ' ' ' ~ '
' ,' ' , . ' ' '' ' ' ' ' .. , ' . ' . ~: ' '
2~
'.
~ pendont, 1' nppllcot lon topl ~o de FGI: ocid~ o~
l)~ ,l~u~ olt :~o~ nt ~tr-~ lt~r~t'Lve pol obter~lr 1~ cffet~
mQ:clm~l.Jx. C~cl 6:3t prob~blement dC~ 4 u ~e ,ln~obll~ t~
ther~n~qll.~ de 1~ rnol~c~le, une protéolyr p~r dlæ3 en~ym~4.
!~ ~lnsl qul ~ IJn~ lnteract~n ~ntre le~ FO c et 1~ lyco4mlno-
zlycones, col~une 1' h~p~r~ae sulfate ou p ot~oh~ r~n~
sulf~t~, de9 meml~relne~ eellulslri~a ou ~ ~ mambr~ne~3 balcQle~,
e~r~fn~nt une lmmoblll~tlan de~a F~F~ c.uvant emp~cher leur
acc~ ~ux r~eepteur~ e~llul~ro~. A c~ propo8, un~ ~b4ence
~e 3tlm~Jlotlon de l~ cl~z~tri~tlon p~r ~ FGF d~ p2,~1e~
profon~-3 ~ ~t~ r~pport*e (J. D~rm~tol. 5urg. Oncol. t;, 6 l 7-
~25 ~19~6~ ) lor~que le Fap s~ul ~t elpp ~qu~ d' une m~nlbrq
toplqu~, ~lors qu' ur.e pr~l~ f~r~tton fl~ o~lu3t~q~ ~t
~yobl4s~, lqu6~ t obtenuR lor~qu~ de~ ep n~ eonst~tuée~
1!~ d' ~lc~ol polyvlnylique l~nbib~ ~e ~GF ~o t oppllqu~ sou~ 1
paau (J. ~ lol., 1~0, 12~9 C1985).
On ec~nst~te p~r ~llleure qu~ ~ FCF, ~u~ol b~n
sous ~ forme ~cl~ F~;F) ~u~ ~OU5~ 9~ orme bz~;lque ~
~ue 1' on conserv~3 h~bltuelle~m~nt ~ -80' , p~r~ d-~J~ ;on
ctivite lor~qu' 11 e3t ~m~né t. -20'~ co ~ ~ templ~r~tur-~
bi.3rlr, ~.
~1 ~pp~r~it donc 1~ c~31t~ d~ 3t~blll;~3r 1
f~cteul-~ ds cro~s~4nc~ F~3~ pour p~uvo~ ~nvls~ser r~ mont
leur;, ~pplle~tiorl:s. P-~ur le ~ppllent~ no ~n vf ~o
L'5 notllmtnent, 1 s~r~lt avt~nt~eu;; qu~ ~odG~ d~ ~t~ t lon
l~ulese permettrc~ un relc~r~ lant du P ;~, Cl3 d~rn~qr
~even~nt un aE~3nt mito~;~ne loco.l, r~ntr ~nt d4n~ le8
proces~o n~turq~l~ d~ r~ n~r~tion c~ll lult~.
t~ 1' hol~t e ~ctu~ , compte t~ ~u d~ 1' lmpc~rt~nc~
d~G fnct~urs de cro1 ~s~n~e dor~s lo~ do~ iln-~ pr~c~eé3, on
~lt q~c baAucoup d~ t~nt~lb~ve:~ ~ont ~f ~ctu~a pour
3t~blll~r l~ CFs, m~ eonn~l~ ~nc~ 3 la
D~ ent~3, il n'y ~ pQs ~ncoro eLI ~ c~ o~r dl3 propo~tion
concl ~t~ ~t 4~t1~fo1~nnt~ pour ~t~b1114 ~r l~o ~ pour
:3'j qu' 113 con~e~-v~nt l~ur ~ct1vitS r.on ~- L~ nt ~n ~ ro, mol~3
,s~ m,~nt l n vi vo.
.~ . : . . . .. . . .
. . . . , , : ~, . , :
:, ' . , '~ .' . : :
, . ,',
:. . . , ~ . : :
.,, . r r
,'Zi3~
L,~ pr ~sent ~ ~u~vent lon ~ppor~ , quant ~ , un~
t lon ~u pr.~b~ oY.~, cor~ t~nt ~ eoc~,on un ~ t r,:)n.
.,~ulr~J~.~ aux F~i~s, 1~ con~ itlc~n r~ ~r~t~ ~t~nt etclbla ~u
~to~ M~mæ ~ temp~r~tur~ nbl~nte.
L~ pr~nt~ lnventlon ~ ~onc d'abord pqu~ obJ~t
une ~o~npo~l t i~n co~npren~nt 1 ' ~3.~0clot ~L n d' ~u molns une
rOrme ~ctlv~ ~' un ~cteur d~ c~ol~4n~ d~ la ~ml~l~ FGF ~t
d' 31- moin.~ un ~extr~n~ eul r ate st~blll orlt 1' ~Ctlv~t~
blelo~;ique du FC;F.
1~) Le~ de:ct r~n~s 6ul f ~t es ut i l l ~ ~ont d~ 3xt r~n~e
.~ulfat~.P t,y:lr4~0lub~ , $n401uble!~ cn i~lou o~u~ux olJ r~-l3
In-'~ 3 IJ ~
L~ tr~r,~;t ;ulf~te4~ ~lub oer qu-t 1' oo peut
~It~llsal- p4ur 1~ mi:3~ en 02uvre ~e 1' ~ Yon~lon, ~nt do~
1~ p,r,~uits ~olJr~nt~, ou~ ~ont r~i-r4:;~nt~ p~r 1~ forrr,ul~:
1 C~l~ . ~
~ n
0~ '.
d~n~ u*lls u~ h trols ~roupe:~ hydro yl~ du n~Ot~r ~onom.~re
s~"lt ~ t 1 t U\~!~; p~r cle.,, ~roup~ -0-503 ~forme ~ld~) 0
.5 - C~-.;f~ (f~r~ ;le ~ . Le:; produl~s oo plu~ u~ .,ont
d~.~p~ lt.~l~$ sou~3 forn~a d~ :~el:s d~ ~odl ~
L~3:3 produits pr~f~r~ p~Uv~n ~tr~ o polyn~br~3
~e ~n~ ,tA M~ cul~lr~ cQmpr~se ~nt~^e 1~ 000 ~ ~00 I~ O,
nt.~ ntnt nt ,2r~tr~ .~ 000 et 5VO 00~, tol3 ql,l~ 1' on p~ut e.' ~n
.~) præc~ kr ~up~ d~ 1~ Socl~t~ ~ICMA ~R t` ~07~, Dl~39~,
~OC~ 7 l 40, ~3~06 du cPt e~ u~ l9~S~) .
L~3~ xtran~ ulfAto~ lnfi~c~l bla~ 40nt ~,e
d~:~tranæ~ l3cul~t0~ r~tl~ul~e selon 13i~ proc~d~!~ h4bltu~13 ~e
~t~ 3.,~t,i~n, cn portleull~r ~ ld~ '~pLchlol~hydrlnk, ;~r
~5 .
.. ,.. . ; ' ,. ,, . ' : ' ' , . ' , ' '. ' ' .'': .' ' '
~ . thp ~ , C ~ I IX ~;l C! r l~ r mu ~
Q
~1~ O ~ CH
OH ,~O
~H ~ O--j 2
; 1:! --O~
CH-OH ~)~1 ~-- o
OH
CH2
;:
1_1
HO ~1 \
O - C H ~ o > ~ 2 :
~2 ~ \-o 1
1~0 ~!~ C)~ ~ ........ 1
0~ 1
ow
~s l.~c~ un~ ~r~ on ~s group~:~ hydl-o~yl,2,~ ~ ,t
; . ub~t 1 t.l~S~ par d~ ,r~up~ 0-503H ou 0-50; 11~ p~ erlt
5~! pr~ ~nt~r ~ou~ form~ d~ poudr~ ou e ~el~.
Colr,me ex~pl~ cl-~ e~E: d~xtrnr~ ~ ~ulf~to3~ on p~l~t
clt~r c,~lui commercl~ p~r 1~ ScelA 6 51~ oU~ 1
r~r r.~r~ tal~u~ 19.''tt~ n p~Ut ~ 41~ nt o~e~
tf~l:a d~3;~tr~nH~ ~e1 on lf~ p~otc~colel d~r t p~ Mll~t ld.~ J. ~t
cctll, An~l. Blt.?ch8~n. .LQ.~- :304 ~ 0).
~ \u ~ln t~ eompa~iltlon ~ on 1' lnv~ntl~n, 1~.3
t r ct r\ t~ lJ l f 4 t es h y P r o~ o l u~ on t ~ n t s ~ un ~
~ollc~ntr~tlc?n dta ~ FO m,~ p~r m~ 1111tro d~ m~l4r"7,4
n~3l. L~ ~nc,¢rltrat1on ~o~ ~xtr4r~; t~ulf~tfa~3 ln~all bl.
:i~n~ ., m~lf~ t~ t~Rxtrant~s~tF~$ p~ut 11~ , ~ ~æ
,~ lJ:,;t-',l,~' a 50C~ m~ F~ m~ 1 l l l l t ro ou 2 r~ ~ de n~ n~ r l n~ l .
',.
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,,;, ,j ", , i ,.
'; ' ' ' , : '"~' " ' '
2~;~r~ 5~
, .
1.~ eompo~ltlon s~lon 1' ~nvent on contlenS p~r
aill~ur.~ ~vanto~eusernellt des qu~ntlt~a; ~fsct~vra ~ O, ~1 r g
3~0 Jl~ t' ~u nlolns une forrn~ ~ctlve do F~ p~r mlllllltre
~u gr~mme de mblan~;e final ~F~dextr~no ~ fAt~.
L~ d~xtr~no~ oul~e~te3 ut~ ~ pour 1~ ml5c en
o~uvro ~ prb~nt~ lnv~nt~on ~er~en~ d~ ~upport b 1~
ml~r~tlon ~t QU ropouplem~nt cel~ul~lr~ Ils pouv~nt ~tr~ :
lncorpor~s dan~ tout~s form~ do p~n~o~ nt~, ou ~ncorr sur
des fll~ de ~uture utilis~s en chlrurE~ , d~ me~nlbr~ que 1
1~ fact~ur ~56aoci~ ~ c~ dextrcn~ ~ulf4t~ o~ f~ct~ur tout
:seul pui~ lf ~u~r Yer~ los ti~ u~ ~l 1
L~3 ~cteur:s d~ c~olss~ncQ F~ utl~ d4n:; cett13
invention p~uv~nt etre d~ prodult4 n~ rolo, ~s prodult3
u:; d~ :;ynth~e~ chl~iqlle.~ ou dc3 pro ~Lt~ obt~nl~3 p4r ~e;:~
I!; techniq~es ds recombln~l~on ~ tlq~lo. Il~ p~uvent ~tr~
a' ol~lgine hum~lne ou prov~nir d' A~tre3 ~rn~lfere~ ~t non
n~m~l f ~re:~s. I l n' ~t ~én~r~ler~ent p~ ~e~aslr~ d' ut l l l: 13r
1~ t'~ct~ r ~utologu~. En ~f fet, 1~ hol~ ~~ de conse~
v~tlon de 1~ ~tructllrç de~3 F~F~; ~u C~UF de l'f~olutlon,
n!~1 q,~ Q~ ~t~lde~ ur le!~ prop~ t~a ~n ~lero et in ~
ln,~lqu~l~t qu' lL n' y ~ p~ d~e sp~clflclt cl' ~p~c~ pour le;.~ ~
dc~ fOr~lle3 blo~ctive~ da:3 ~ril~ E~ l~nt, orl utlll~a 1~3
~ ,t` ~oua ~ for~n~ purlfi~e ~el~e, ou ~o ~ 30~ ~orm.3 baalq~le,
ou encore un m~l4n~;e dQ:3 d~lux form~, c I ~2neoro un ~rl~5 ~U
;'~ un ~n~loé5u~ u mo~n~ 1' un61 do ~a~ fo~ ~ , L~ ropport
ent rc~ s PCF~ 4clde et ~n~l~uo d~n~ ~, form~ n~ p~l~t
Atr~ d~ n' lmporto quQlle v~laur ~ntt~ 1 ~ daux for~e~ pur~,
Dlff~ront~ proc~d~7 do purlf'l ~lon pau~nt ~tre
utll~s~s pour l~lar ce~ dcux f~rm~a~a d ~CJP ~ p~rtlr d~ . -
oour~ n~turell~fi Cr~tlno. c~rv~u, h~ ~elphy~, plqlc-3nt4,
r~in, ~tc. >, c~ proc~ t~nt eonn~4 t. 4y~nt 4t~ d~crit.
par dc r~ombrollx ~t0ur~. LQ m~thod~ pr ~r2~ t c~llo
déçrlto pe7r ~;ou~ty ~t ~oll. d~ns; (~Bloc1r ~G7. Blophyiil, R~3.
Commun., ,~, 102-lOB ~lg~ m C~tto r ~thod~ compr~l7d un~
~5 ~topc ~on~3l~t~nt 0. trc~lt~r, pen~4nt ~n nuit, do l' ~xtr~lt
t i61al.1~ ,7n ~ pr~:3t7nc~ d' ~elt~7~1 ~c~tL~ ~ ~ p~t 3, o~ccl~lan~
, !, ~' . ; ,; 1
Z~ 5 ~
~n~l tout rl-~qu~ d~ ~ontomlntlti~n vlral ~, ~t ~ ~ondulra IJne
p~o-iflc~tion p~l~ chrom~to~r~phie ~ur h~ 3rlne lmmob~ e
p~rlne ~eph~ro.~ HAR~1ACI~. Loo c ~ix f~rm~ oeLde ~t
b~slque d~ FCF pe~vent Qln~l etre 1~o7 ~q ~ ~t f~par~4s~ nvec
le.~ 4utres prott~lnl~8 OU lnd~vlduell~men , e3ve~ un ~b~r~ d~
plJ~et~ suffl!3~lnt pour atre d~b4rras3~e~ o ~u~ntlt~5*
~lgn-~lcatlv~.s d' autr~ mdt~rl~l~ con~ ~nelnt~.
~es ~nalo~ue~ ~ynth~tf que~ ~u ~0~ p~uvent att~e
obtenus pnr synth~ chlmiqu~ ou pnr ds t~chnlquo~
cll333~c3u¢:~ d' ~nz~nl2rle ~n~tlqu3, t~ll 1' oxpr2!4~0n :le
g~r,ea synth~tiq~es ou l' ~pr~slon ~ n~o mocl~fl~ pcr
t~ z3-3 diri;~ d~ lte~ ~p~ lq ~
To~lt~a 1~ formQ:~ de FGF obt- u~n d' ~xtr~lt a
tl~ul4irr~ p~r in~éni~rl~ nétlq~l~ ou p~r synth~
cnlrnlque, qul ell~:~ 41ent ou non ur~e ~tr cture modlflée,
~lr)sl qu~ le~ fr~gmenta en d~r~ t, p~ v~nt ~ro ut11s~e~
~ou- r~'~aerYe qu' elle3 4~o~ent ~ctlve;l~ bl log~uement - un
te.~t ln vi~ro cl~;nm~ celui pr~po~ cl-clp ~ p~w4nt etr~
utlli~,
2 ~ 3 as ~ t i on !i~ de FOFc t~ t 4 cl~x ~ r~ 3 ~s~.J l f ~ t
d~ nvellt~on p~u~nt ~tne ~ncorpor~e~ dsn~ d~ Uppvrt~
phy~1o1o;31~uem~nt ~c- ~ptab1e~ p~ur d~ ppllc~t~on~ ln v~v~,
pl1c~t1on ~st une elppl~catlon loc41 , p~ vo1a e;;tenno
~ur 1~ pa~u ou 1~ co~ e, not~mm~nt pO~I ~ ~cc~l~r~r 1
clcc~trl~s~t~on d' un~ pltlie ~t 4m~}110rsr ~ qu411t~ do cett-~
~lcatri.~tion, ou ~ncc~re p~r v01~2 lnt~r ~ l~ur 1~ t
or~n~3 du oorp6~, p~r ~x~mple d~no 1~ t ~ltem~nt d~ 1' uLc~ro
ds 1' ~stom~ç. S~lon l~s~ type~ l!t l~u d' c~ppl lc~tlon, l~a
coml~o~1tion3 Compr~n~nt 1' ~a~ocla~on ~ ~ F~F~ ~t d~
3(~ d~:;trnn~a oul~a~Q~ ~eront dlf f~r~nt~. . 1~ n~lt~ro ~ d~
3upport~ p-3ut ~trQ c~ctr~ ont v~rl~bl at d4~and ~onc du
typa at llcu d' uppl~ccltion, ~t prut pt~ ~Idr~ la forln~ Jn
lit~uldl~, d' un /i~,'9s4~ un~ cr~me, d' ~ ~ ~ol, ~ n tl~su
~II)p~ n~ comn~o un~ ~o~o, un tull~ ~oci~t~on:3 ~G~'3-
d~xtr~neo ~ulfnt~e ~ lnvention p~R~V~ ~ ~gal~ n~; ~tr~
lncorpor~e~ ~ un~ tln~ eon~tlSu~ ~r un collos~n~, qu~l
.,
- . . . ~ - ~ . :: ., , :
:.
z~ z~
qu' ~n solk le typ~, ou ~ncore, comme Is~ i~ t Ci-d@~ 3,
recou~n lr de~ rlls de ~utur~
~e3 forll~ulQtlons ~qu~u,soR d~ ' $nv~rltlon 1;eront
o~nt~eu:~erl~nt d~s conp~sitlon~ conten r.t. d~ t~mpons et
sels permettant de m~int~nlr 1~ m~l4ng~ ~u vol~ln~ 'du pl~
physlolog1 qu~ et ~u volslnc~ de 1~ for q~ lon~que~
phy31c>10s:1~ue ~olt pH de 6, ~ t~ 7, 4, ~t foree lonlq,ue ~ O, 1
~ O, 2 M) . On peut ~Jouter ~ compolsl ~OA dl~8 ~ddlt lf8,
comrn~ ~e~ nn~th~lqu~s loc~ux ~p~r ~x~ pl~ a lldoc~Ino)~
d~o 6ub~3t~nce b~ct4ric:~st~tique~ ~par e ~pl~, do~ 6el~s de
s~dlum, d' l~rsent, 1QU~S d~rlY~a~ o~ t~Ol~t u~f4~1e3~1n~ e~3
produl~ t ~epti~nts, ~comm~ B~tad~n ~, deJ ~n~lblotlq~t~;
~p~r c:;~m.ple, 1~ streptomyclne), ~e~ pr t~n~ ~t~que~ ~p~r
ex~ple, ln ~rum albumin~ ou l~ flbron ctin~, de m~me que
de t coll~n~ta hydr~solubl~.
Une tall~ cornposltion ~qu~us~ r~nf~rm~nt ~u mo~rls
un f~cteur ~CF ~ssocl~ 9 a~l moln~ un d~ tr~n~ 6ulfat~ . -
hy~ro~vluble ou insoluble, p~ut ~tr0 u~ ll~o dlr~oct~n~qnt 0n
solutl~n, 6tn 41~ro5tol, ell onction, en lo lon, ~n poud- ~ ou ~n
591, OU ~el~vlr d~ ~;olution pour ~tr~ ln lus~ don~ urt :;upp~rt
ph~r~nacel.~tlqu~ment ou co:~;rn~tl4u~3m3nt. ac e~ptoble, t~l ~tl' 4n~1
pomm~ds, un~ crbme, un ~el de re~ n o~ un ~1 d' un~ ~
aut r~ n~t ur~, ou de 1~ t lne ou 1~ ~regn~r un ~ e
~olla~n~, un ~ ' unq ~utr~ n~tUr~, R I d' ~utres ~ul~qt~n~
~5 fol34nt ~on~tion d' éponge, un pQna~e~m~nt un ~uppore d~
p~nsement d~ recouvrement ou un biom~at~ ~ cle~vtlnt fn~orlsor
dir~ct~m~nt ou ~ndlre~ement 1~ r~p~rA~ ~on tlo4iulalr2 tp~r
ax~mpl~, un fll de ~ut~ro chlrur~Slc~l) ou ~l;ro ~ppllqu~
~ur d0~ flbr~ na~ur~lleo oU rynth~tlq~ ~.
"~O Pour d6!s oppli~t~or~ r 1~ I~U, lo~ ba~ de
cr~m~ ou lotlon~ utilis~ trcldltSonnq Llo~r3t p~uvent ~tr~
utlli4i6~s, Comme 1~ l~nolina (Silv~d~n~ ~ M~arlon plu:~
par~t lcull~rl~mant pcur le!.5 bru~,~sJ Aquql ~or Puk~2
L~bor4tor1~0 ~;o~th Norw41k, C:onn~ctleu , l~qu~
~L' Or~l) ). Leo ~rbm~:j peuv~nt cont~n ~ 0 prot~1no~ ~p~r
~:~elnplc, ~oll~ n~ tins2, ~te. ).
, .
``` z~ 2S4
- .
L~ p~ns~m~nt. peuvent ~tre d e pono~mento cl~
toxtll~.i, tls~u~ .~ynth~tiques ou ~pong~ , o~l ~ttr~3 ~ 3
protluits n~t~rels s~rvant de r~couvrem8 t de pl~ Sp~r
e~ rnple, de3 ~els de coll~ ne, cleR del~ e4~. d' orl~lne
~ni7~1a), L~ compos~.tion FGP`-doxtr~n~ ulfot~ on ~olutlon
do~t pouvolr lmpr~n~r ces dlf~ n~ orma~ d~ pon)3~nts,
de monl~re que le fQ~t~Jr F~F pul~ t ~ on contaet ou
dlf f~lser s~ul ou e~3 o-;ie c~u d~xtt-~n~ 6u fat0 ~squ' nu:c
tls~u~ clbleo. L~ co7npo91tlon ~lon l~ n ~ ntlon ~3t
lo ~ppl~qu~e ~lem~nt de m~ni~ro ~ pouvol ~tr~ ~slnt4n~0 .~ur
le ~ite de 1~ bl~s~ure et :sur le~ b~e r~o o~l~art~ Y~
m~lntlen de 1' hyclr~tatlon ~lon lo~ ~ee ngq~os ~e 1~ ho~m~ du
m~tier, p~rt~u~l~rem~nt ~l~bo~ d~n~ le dom~ln~ d~s
greff~ ~c ~ pe,~u. I.e:; p~næ~ment~ ~ec u~lf~ peuvont ~tro
lr/~pr~n~ d~ 1A m-~me m~niere, ~dsorb~o u recouvrlr un
~upport n~t ul~el ou :3ynth~t lqu2.
Pou~ le~ ~ppllc~tlon~ sur 1~0 cvrn~o, 1~ v~h~cule
dvlt ~trR compo.tlbl~ av~ t.ol~ranc~ cul41re~ on c~t6~r~
co~nrne ~ mp~ d' un tel v~lllcul~ pro ult commc~-cl~
:;OU 3 l e nom de ~ L~er l bu l e ~J ), l e~ t on~ l l n~
solut iVI- lsotonlq~ue:3 ~p~l~ e:;~mpl~ 40c~dron ~1~1erc~
5h~rp-Dohm~) ou de~ quivalents), ou on oro ~ou~ form~
gel forrnant un ~cran p~t~ct~ur d~ 1A c rn~. C~3 v-~h~culo.s
p~uv~nt cont ~n~r ~3alomen~ dw ~e ont~ c n~orv~t*ur~ comn~,~
3 ;:hlorur~s ~ ben~yldim~thyl 41kyl ~ mol lu~ ou l' f~thyl~nQ
di~mine t~tr~ac~t~t~3 dl: sodium ~DTA).
Il peut é~ ra~nt ~r61 ~ouh~1 tlble d' lnclur~, ion~
de~ llposom~, une ~s~oclclt~on Ft;F-dox~ An~ 4Ulf~t~
hy~rosolubl~ dc 1' lnv~ntlon. C~3 llpo~ ,n~ pauve~t dtr~
qlorEs lncorpor~ d~ns le~ compo~ltlono ~:rita:~ cl~e~u,3,
p~r ~x~rnpl~, cr~m~:a, pc)mm~d~o, utll~3~ ,~ llo~ qu~ s ou
pour 1' iMp~ ;n~tion d~ ,~upport~, ~omm~ ~:~ pan~m~nt~.
n~ la c~i3 o~ l' on ut~ lloo d la d~ctr~neo ~ulf~te:;
lni~ol~ ~; les, '~eu~-cl p~uvont ~itro s1mpl~ ~nt a~o~ i3 a
ou bicr ~ talleo 4~0clatloao p~uvont ~ro lnelusoi3 ~qn~
deo i3upporti3, ~omme d~ cr~m~, de~ ~4J ~tln~o ou d~,3 gel:3 de
.~: , ' `''' ` '"'' ''' '' . .
,,
'' . :. . .. ~ : , ''
;. , ,:~
;Z'lJ ~;~q.'D2(5
collr.~z~ s, ~1~ etre ~ppltgu,'~,s fii~ fl~r~ ~ynth~tlqu~
ou rlatu~ e~ ~f~ls cl~ ture?, ou l~iF ~n~r ~ upp-~rts
habl.u~ls ~-~e p~n~e.~ent~ recouvr~m~n . L' lnclu~lcn de ~ s
de:~tranes sulfata3 ln.~ lubles peut ~iQ ~lro p~r l~blbltlon
~/ou ~dc~lti~n d~ un~: solutlon de coll~ e~n~ ~t ~llfl~ ~tLon.
On p;:ut notamm~nt ~!ti~l~er le ~ot~3 op~ e~t31re d~crlt 4~n~; le
tre-~t U5-A-4 0~0 0.~ ;u~v4nt lsquel n r~llse ~In~
co~nposltion ~,t~ lflé* ~omp~slt~ d~ns ~u~llo l~ p~rtl~ an
CC`t')tACt nvec la ble~ure a~t couvert~ ~ coll~n~ r~tlcul~
~0 ~\Vf~ n ~lyco~mln~gly~n~ SI~n~ 4tant o~teflu par
,~ d 1,11 t 1 on d ud 1 t g l yc oo~ ~1 no~ 1 ye anh ~ u c 1 1 Qs~n~ ~Oa ub
~nslhmbl~ ~tant pr~ Iplt~ ou r~t1cul~ p~t~ du
~lut~.~rolddhydt~. '
Par 0111~ , co~nme ~ndlqu~ ~-dos~ll3~ le:~
;!~ C~ !rlpO~ n~ :3~1~n 1' In~nt1on p~uv~nt ~;3ol~9e~t
p~ ,:s.~nt,:l ~4u~ un~ f~r~e appl$cable lc ~letn~nt p~r ~ol~
Interr*, por exemple c~.~m~ pl~tr~ ,n ~4tro-ont~rlqu~6 cu
pO~ b~; lyophll15~.e.a ~nclusas ~u nan d no das z~lule3.
LA pr~pdr~tlon de~ co~po~ltl ns de tr~lt~merlt ,~
ic,~trl.~4t~0n :3e10n Ll LnV~rlt10n ~:3t, d Un~ ~n~ g~n~r41~,
r ~ e ~elon de3 m~thodQra cla:3~.;lqu~ blan co~nu~3 ~n
nl4u~e. L~:~ dos~$ ~ ~d~nlnl~tre~ o l~ur fr~ql~ence .sont
or1~ 3 not~mtner~t :se10n 11ImpDrt~t.~ d~ l~ pl~lC.
Enflrll ~ COi~tpOi31t10lll~ 5~310 ~,' ln~/entLon kl~ou.~ent
lert~ent ,3pplic~t lot~t dah~ l~ dom~lno o~m~tl~ue, pour
~m~IIor~r~ t4t d~ l~ p~au. L' ln~ttnt on ~ nc
~o~ m~n~ s ~mpo3~tlon~ co~t~tn~nt, n~ un ~uppt~ t
cosm-~tlq~emerlt ~c~lpt~ , une a6~io~;14 lon pr~clt~ FCF--
tran~ ~ultat~:, c~tte c~poGlt~on s~ pr~s~rltAnt not~mrnent,
i~; form~ cl¢ l~tlor, ~al ou cr~t. .. ....
On d~crlr~ molnt~nortt l~;~ of ~t~ d~ d~tl-~tn~
6ulr~t~ UI~ la prot~ct~ot~ 3 1' ~itl~l ~t bLolo~l~ue d~3
r t~ ;.
L~ h,~ v~l u~ n ~1 Y~ t ~ c t l -~ t -~
h~ ue l~ 'CF3 s~2nt d4c~1te,3 d4n~ dc no~nbreuo~.
~IL>lic.~tlor~ t ~lle.3 ~ont tout~ ba- ~ olt ~r un
' , ,, ' , ' ", ' . i ' ' .1 , , , '
Z~
l~
m~.lsuro (.!e l' b~lgrrlent4t l4n ,lu n~br~ da C l~u1~3 ~nd~ p4
rl~:, d-~..e:, crol3is4nte~ C1~3 farteur6 4~10ut 4 ~u ~lieu de
cultl~r~ d~ llule~, ~olt ~ur un ~ 'nt~t~on do
1' lnl:orpo~ tlon de thymldine t~ltl~e d~ ~ DIl de~ cellul~J
3t Irnul~r:~3 p~r lr~ f~cte~r d~ crol6$~ne~. D~ns 1~ u:c
protocolc, ces ~u~ent~tl~n~ on~ d~p~ ,d~nt~ de 1~ d~ d~
f~ct~ur ~ jo-lté~, ~t 1' on peut ~onc et4t Lr de~ ef~ots d~e
~t cl~.~ cour~e,~ do~ r ~pon~e ~voc un 4f~ It ~xl~l dQ
~klrn~l~tl~n. P~r ~irnpllflc~tlon, on d~ lnlt IJr,e unlt~ de
1~ st in;ll~t lon conune 14 do~3e d~ f ~ct2~r d cro~3~ nc~ qui,
~,~ out ~ n ~ r~ d~ u do e~ t ur~ ~ur d~r~
cell~ cLble~, ~st cop~blo d' indulrs n~ nug~n~cSlor, du
no~,br~ df~ c~llule~ c~u d~ lnco~por~tlt I d~3 thymldln0
trlt11 ~ corre6por~ nt ~ molt1~ 0%) d~ ln v~l~ur
r; m~3 ~ lm~ 3 dl3 Cl5 !~ u~t.~ nt~t lon m~jur~ ~na; 1~ ~ourb~ d,~s,~
r~pOI-~;3~ C~3ttQ ,i;!~flnl~lon ~t lo r~pr~c l~tlblllt~ d~ c~:~
m~sur~s .sont expo~ 3 notan~m~nt p~ Plc l~t ~t ~oll., ~n3
~C~lIul~r ~nd Mole~ r Blology, ;~, p~ ,~ 5-I I0 (1994~)).
A1A~1~ plu3 1~ unl~ 3t m~ntenue ~ un v41~ur ~lbl~, plu3
f~c~eur con~r~ une ~c~iYlt~ blc>lo~ q~e lmport~nt,3.
A - ~ f~ k r~ ~ d ~ u
c t l ~. d,1~:3 EF.~ .d~ t ~ !~
S~ ~ e t P~ ,n s .
. . .j
l~n:~ c~: ~xp~rlence~, on utl 1~8 de~ Golutlonr~-
m,`-res da F:GFo, c4ntennnt 1~ FGF~ ~n :~ ILlt~on ~ un~
onr r~t~ ~ r~ t l ~n ~ ~S~ p~ r rnl l l l l l t r~, ~lno un t ~mp,~n
r!h~ p~l~ta lsotoniqu~ t~B~ t ~ont~n~ e ~u p~s ~u d~xtr~no
."l~l î dL ~ tDS) 1~. 63~;3 ~Ju cdtdlogu~ SI~ ~, Jl 400 J~ ml. 1.
dc1~ u ~a~lqu~ utlll ~ vr~t ~1'Q ~ n~ bovin6 et
tr~lts du c~r~ de bo~ut, aclorl 1~ p~lblIc~t~on d~ Court~
~t uol l. IiQnJ ~BlvchlM1~, 69, p~$~ '~$I I ~ 87)~.
10 ,ul ~1~ c~t t C ~iol u~ lon sont pr~ v~s ~t nl~l4n~
.3~it ~ 1 ml ~ te-~pon ~EiS ~pH 7), ~ lt ~ C~
;J~kti~ll* ~4u¢n ~Ju~t~ 4 pH ~ ~nrlron iN~, ~olt b I ~
:~o~lt~ ~N;~O~ 11ul~*, ~3u.st~e ~ pll ~), G'. C~s ~ch4ntll1t)l~ s(~nt
. j
;. ' ; ' ','' ~' ` ' ';
~"'' ''' ~ ,,' , ~ ;li, ~., :; ~;,;, ~ '~,",,",~"""
Z1, ~, ~,?~`.54
13
lncub~e ù 2~ 'C p~nd~nt 2 h~ure~ et un 1: ~ v~m~nt d~
e~t ~t'f~l-tu~ pour le dos~ge de l~actl~ ~ blolo~l~u~.
La f l~sure 1 pr~sel~te 1~ co~ b ~os~-r~pon ~ tu
~FI,~ s~r d~ flbrobl~te.Y d~ ~ertn~ hun7~ n .tA¢1523)
nde de 1~ f~ r~ I
Ab6cl~3~es: do~es ~e f~ct~ur de cr l~s~n~e (p~/ml~
~r~onn~ polJrcent4~e d~ 3tl~ulo lon
1~ : bFCP ~ DS ~ pH 7
~ : bFGF ~ p~ 7
V : bF 5F ~ ~S ~ p~ ~
A~. ; b~OF ~ pH 9
o : bFGF I ~5 ~ p~l 2
: bFGr: ~ pl 1 2 .
~5 L' ~ugment~t~on ~' incorpor~tlo d~ thym~tlr~e
tr~t~ r~pré~ent~ 1~ v~leur du nombre 9 eoupo p~r mlnute
~cprn~ obt~nue au plate~u de 1~ ceurbo d *~-r~pon~e ~u ~I:G~'
selll m~lns la v~ r en epln ds thymld~ trlt~ lncorporee
don6 le,3 cellule~ en ~b:~-an::e ~e FG~ et ~rmlné~ d~n3 l~
~) m~me eXp~riqnee~
Le T~ble~u l r~3ume 1~$ r~Ssull ~t8 obt~nlJ~ ~ve~
al:~t' ~t bt'GF, L' unlt~i de ~tlmulation ~ t ai~bltralr~ment
dorIn~ ~ L pour 1~ 4~GI: ou le bF~F ~o c~d p~rt ln~ub~ pendont
2 ~ur~3 ~ Z~ . . . .
Tqk~
_____ ~ _____._____~___ ____________~_ ~
~_____.___.___ ___
bl;'~F ~O'C) . 9
~1:0~ (2 ~ 0-~) S:~ 13
3~ b~qF ~ DS ~2 Ii, 20 ~) 1 ~, 5
~FCr~
o~'OI;' ~ ) ' C ) ~ G
cl'OI~ + C~S ~2 I~, 2~)'C) ~, 5 , ~ 2
~ _ ~
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',. , I,-i.,
, . , . .. : ~ , ' '. ' , . : , , ~. : '.' ,' ! . : ' ' . .
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{~ - Etf.~t !~ ;t~n/~ f~te !!~ ~
p. ,~ u r e ~.t~i~ ~ ~ h~ ,C~'
Dat)3 c~t t ~ p~rlenc6~, le ~0 pr~p~re Comm~ ~u
poi.nt A ci-~e~slls, pour la forrne ~cid~, at pÆr~ recctmb~ ;on
~r~tlque pour la form~ ba~iquçl d' orl~ In~ hu~ln~, ~chet~
~upr~ de 1~ 5~clét~ A~n,~rs~hsn~ ~u Cllnl ~c~nc~ ~ P,~rl~),
C'S4 Lncub~ b 4'C, ~) C, 37'C ou ~O'C p~ ~d~nt d~ érent~s
p~rloul~s, en 1' Qb~C~ ou en pr~:~enc0 c ~ ~,00 ,l~z; ~e d~xtr.~ns
u~. f ~ t ~, p~ d~ D~.
~L~
_~ _~__________-_____,_______________ ~
4'C 0- 37'CGO'C
___________.____________________ _ .__. ~
. 'j bFCF t ~ 4 .~nn 1
I~F~iF t = 3~ r.nn 1 1 3, 5~ ;:)O
b~'Of: ~ DS t - 30 Ir.n 1 ! I
aFGF t Y ~ ml~ l
,~FCl': k ~ 30 n~n I I ~ ~ l os~
,'O ~F~F 1- [~S t = 30 rR~ O. 4 O, ~ O, 4
bFGF t - ~4 h~Ilre:3 l I
bl;OF t DS ; ~ ~4 h@ures I 1
~CI: I 1
~:;F ~ , 4 t:), 4 O,
~S bFGF t ~ 7 ~ours Z !3 ~ lOO
bFCF ~ D~ t = 7 J our ~ I 1
aFGF t ~ 7 ,~ ouI~ , 5 ~ ~ lOO
~r:~F ~ ~s t - 7 ~our~ 0, 4 O, 4 3
. _ __ ~______________
Lo~ donn~ r~pport~$ d~n~e ~ tobl~oux I ~t ~
lllu.ctr~t1t l'~ff~t protectBur tr~ procur~ p~r le ~ sùr
le F~t:. Aln~;l, toutQ l~ octlYSt6 blolo Iqu~ du bFGF ~t
corl~e~rv~ ctpr~$ 7 Jours d' ln~uba~tlon ~ 37'C, ~l~rs~ qu' ~.n
1' ~b;s~ncr: de t)S, aucune ~ct~ t~ n~ ~t~iL d~t~ctobl~.
3~ ',
,
:. . . : :
. ... . .
?
.. . ... .
~, . ,
E~ EI~PLI~ r~' APPL~ TION IN VIVO:
p~l- l men t o l. ;
Les op~ro~lons aont réoll~e~ ~ur dt~:s r~ts W~:,t~r
m~le~3 de 300 t~ 400 ~r~mme.~. Ch~qu~ exp ri~nco t3~ f fect~e
sllr ~Jne st~rl~ d~ 5 ~nim~u~.
~e p~s;
On prstlq~e deux typo~ dt~ pll- e~ cut~ et~ ~ur 1
It:~ ft~ce d~rs~le, p~ol~blem~nt r4s~e, t~ r~lmt~u~.
1) I.e:~; pr~l~vements ~t~nt ef~ectu~3 p~a emportQ-p~4ce o-
~punch (0,6 crnl de di~m4tl~> 3usqu'~ plsncht r
rnu~culalr~.
2~ DQ3 ~C srlflc4tion.~ d~ 1 c m de long 00nt prt~tlqu~e~ eu
calpel. Elle.~ n' ~f fc~cte~t que~ 1~ rt~Slon dor ~o-
Spl~t rmiqu~. .
.j . . .
L~ t~t?l~et:
S~lon 1~ typ~ d~ pl41~s, le3 le~ur~3 .s~nt
tr~ltee~ p~r dlff~rent~ m~lan ~ dl3 pro ~lts en ~olutioll
~l~ns du :3lrum phy~iolo~ ue t~lnponn~ ~ 5 p~ 71 4~ ~t~rllls~.
Ce~ 301utioll~ 30nt d~p-~k~ p ur 1~9 pl~ a p~r
punch d~n~ un t~mpon d~ eoll~sèn~ n~; ~tc~t~ pr-~d~bcoup~ ~u:~.
"j rn~urc~ e:c~etes de 1' ~xcl~ion ~l~3ul~1r .
D~n6 le ca~ de~ ~c~rlflcation , ~ 8 pl-oduit~ ~ont
d~pos~l3 dlrrCte!mqnt ;i3CUei form@ llqulda ur la pl~
I..e~ effcto de ~ 9ocl~tlc;\n F ~ <b~lqua ou ~clcl~
au un m~l~n~ ~3n ~olutlon d~ I n~ ~ ~0 ~ml~ ~t ~
d-3xtrane4 ~ulf~t6~ n ~olutlon sl~ lO0 ~ ~ I m~/nil~ 30nt
~v~lu~ et eomparlSo ~ l' actlon te ch~cu I ds~s ~on~tltu~n~s,
ct)nsld~r~3 ccmn~ témoirl3 d~ r~ction ~C llh~ Olutlon de
d~o:301ul:~0~, FGF, dextr4ne r~ulfut-). L DS l~te~lt ~QlU
~i~ponlbl~ chc~ S~ÇMA ~0~5 1~ r~f~r~nc e~s~3.
.i?S
., '.'.
, .. ,.
., '', ', ' . , ' ' . ' ' ' ' ' .
~l
Z ~ r5 ~
, "
16
~ h~que s~rl~ expérlment~le d' s lm~ux ~3t ~1~c~l f L~-3
b lnt~rv~lles d~ t~mp~ d4flnls p~r p~rlo ~ de ~4 i-eurQs, ~t
1~ re~ions 1~6Se3 ~ont p~elev~e~ pour cl I~X t~p~3 d' ~tudes:
1~ un~ ~n~ly~e morphologlq~le ext~-n~ ~ ~e pl4r~ ri~ de
1~ pl~
2) ~no 6tude hlcto~oglque.
Résult~t~;
. ~1~ ~, vlyo Ç~. ~ ~ ~
bu F~F m~rqu~ rnt~o~ctlven~en~ l' ls~de I 125 ~st
dépo.s~ en p~ nce ou ~n ~' 4b~ence d~ Il;tr~na~ aulf~t~a
cl~ns ~n t~mpen d~ coll~ ne ~selon l~ p ~otoeol~ d~crl t par
l~o~nner 1~1. et coll, d~ns ~Proc. Natl. J~C ~d. Sc (US~
pOZ~-5 'jo~-502s ~ ~9B~> )~.
L4 v~ri~tlon de l~ rodlooctlvl :1~ d~n~a le coll~g~n~
`~ irnprlSy;n~ e~t ~ppr~cl~e ~n fonct~on tu te 3np~ <f~su~rs 2).
717~L~ d~ 1~ f~, J~e
Abc ls~ t emp:3 en h~3ur~
~rdonn~eY ~ 18 ra~oe~ct 1 ~t~ m~ uré~ p~
rapport ~ l~ r~dio~ctlvlt~ el' C ~lgln~
bFOF ~ DS
.,~5 coll~g~na
x--- x bFO~
bF~3F
2 cm ~o l~l plol~ {
bFOI~ ~ ~S
Ln r ~dlt~ctlvlt~ ~st me~ur~ ~n~ 1 cla
collt~ n~ e~ d~n6 de~ pr~l~v~DleAtl3 ~ff~ t~t41~ ~n p~ph~rle
do l~ pl~c, h ~ crn de ~cllc-el, p~r un pun~h Ibquivol~nt
celu~ d' c~rl~slne.
;~
2l~0~ 4
I I - E ~ ~ orp.~Qls~ SI ues ~ ~1 ~3n~ L5U~.
A) ~oie~. phr emp.~r~ pi~,; .
~) Etude morphologique t
L~ ob~ervl~tlor d~ volut~on ~ ~ pl~o~ ~ 1' oeil
nu perm~t de c~n~t~t~r une actlor t~ r att~ ~
1'~s~o~l~tion FG~ ~ cloxtr~n~ ~ulfQt~ ~u 14 vlt~ et la
qu~l~t~ de 1~ c~c~trls~tlon super~lc~el~ ~pldcro~ tl~n
lys~ du ~lllot ).
1~3 ,
1 ) Apras 24 heur~s, le~ tAmpono de co3 l~n~ ~rnpr~n~
p~r e~tte ~socl~tlon ont tot~lamær ~ ~dhkr~ aux p~rols
d~ 1~ pl~ie, et ne peuvent ~tr~ pr 1QV~ que p~r 1~310n
des tls~u~ r~ r~s. Le3 exp~r~e ~t~tlon3 t~oin~ n~
m~nlfe~t~rlt uno ~h~r2nc~ tot~le d ~ co~ n~ qu' ~u
bout d~ 3~ ~ 48 h~ur~.
2) Le~ r~plthéllo~tlon ~:~t vl~l'ole ~ ' o~ll nu ~u bout a
3~ml3 jour en pré ence de l'~ssocl~ lon FC~ ~ de:;tr~ne
:iulfate, ~lo~-~ q~' ur~e Im~a~e i~enti ~le Igu~ le~ m,~ln~
d~mand~ de:3 t~mp~ d' exp~^lment~tlo ~ 7 ~.~ur~.
3) /~n~ly~ pl~nl~n~trlg~ In4~lySl~t l~nim~trlqu~ ao 1~
~urf~cc extel-n~ de~ pl~ moil~rQ ' Qbsenc~ t~,gole de
r~tr~ction ~o~ t~su:~ ~n r~ n~r~l: on.
2~ L~ t~bl~aux 3 et 4 r~pp~r~on l~o moyen~e~ de
cinq e~pérlencasl ln~éporldant~ conc~rn~ t:
~: L.e r~appor~ ~xprlbnb ~n pou c~rlt~ge~, d~ la
3urfacc de 1~ clc~trlco t~l ~ln ~ de L~- surf~ce
de la cic~trlec tru~t~ p~a dlff~rent~
3v o~$~ci~t lons.
.Q~,: Le roppol-t du ptlrLmbtr~t ~ ~h~gu~ cic4trlc~
~ec la ~urf ace de c~3 m~m~ ~ ci~trlca~.
.,
~!j
'~.
.'
2i~ .54
1~
L' ~s~ocl~tlon FCF ~ dextr~n~ 8 lf~te d~n.~ le
3~pport coll~ ne ~T~ble~u 3) permee un0 clc~trl~tlon plus
h~rmo~leuse, pr~,3entnnt une fo~ble r~tr~ tl.on ~es t~6suo
~102, 58'~, ~u Jour B, c~ntre 49, 27 % ~V~I: 0~ ~-Yl).
~ï De plu~ ' a~p~act clrc~lolr~ ~ la pl~le ~e
eons~rv~ d' ~ut~nt ml~ux ,~u COUI~ de l~ c ~trl~otl4n que le
r~pport p~rlr~tre P t~ 1~ pl~le ~ ~urf4c ~ d~ plDle
exprl~ dQn~ læ T4b~e~u 4 ~ot plu~ f~Lbl . LA Y~ r dl3 C~
r~pport perm~t de cQr4ct~r~ser lel confor ~tlon ~e 1/~ pl~le
1~ en cour3 ~a cic~trl3l~t lon. L~:3 vQl6~uro o~ plU~ f~ ble~s
sont enre~l st r~:3 p~r 1 ' 4~socL~t lon F~P d~xt r~ ul ~t e
dan~ l¢q E;81~ de ooll~z~ne. ~in31, ~1~ J ur 8, le rCIpport
P/S ~t d~ 0, 22, ~lor~ que, pou~ le FG~ ~ul, la v~eu~ e.~t
de 0, 3!i~, ~en~l~lem~nt l~enti~ue ~ c~llo bt~r~u~ dor~- 193
l~ témolns sans colla~s~n~. Les ple~ t~m~ ,h~ clc~trl~en~ p~r
r~pprochement de~ re~ et prennoAt w ~p~ct ov~ î orme.
Ce~l est ~3;ule~ent lllu~l:r~ d~n~ 1~3 phC :o~r~phle~ de~ f~ce4
dora~l~3 ~ nln)~u~ t r~lt~
~O~q~ B le t~
5urf~c~ d~ la pl41e t~n~oin (- ~3olutlon F lyololoP:lqlle)
~ ___ ___ .__ _ ____
Produit~ ~oll~;~nq Col~ ~3~n~! Collu~ne
Col laé;~sne + I~S ~ ~ F~F ~ b~F ~ ~S
~ul 50~ g~ml I ~ sOm~ t
Jours 500 ~6~ml
~ - -
2 80, 7~ 1;1, 43 7 , C~ 0
3 ~0, 43 9'~, 54 1~ , 127 174, 42
g~, 79 77, 08 ~5 , I I 1 l 7, 24
3V 8 92, 409~, 14 ~ , a7:lO~, 51g
___ ________~________ _ _ .__~__ _ ~ ~ _ _ _____ _ __
3g
'..'
-~: ~
,~,
T~ ~.
R~ppGrt F~/~ du p~ tr~ ~e 1~ pl~le :~u 14 ~urf~c~ ~ c~,t~
pl a l ~ .
~rodult~ Gc~ g~n~ Coll~no c~ bn~
T~oln Col~ e~ b~O~ ~ ~S ~ FOF
~ns I t~i 000 ~5 5C10 ,~lg ~t
~v~r~; coll~nQ~ I ~g . -,
~ ~__ ____ _ _ _ _
O, 1~ O, Z2V,~5 C~,20 0, 19
2 ~ 0, ~10, ~5 0~ Z~ C~, t~
.~ 0, 22 0, 360, 16 0, ~'6 0, 1
4 0, 3~ 0, 20t~, t7 ~ Cl, t~
6 0, :~7 ~ 8 0, ~5 C~, 15
~,7~ ~,4~0,39 C~,4
I .5
b
L~s r~lonc~ tr-~lt~e:3 ~30nt pr l~v~o, flY~r~
lMr~rt!3n,$~ n p~f f l rl~. L' ~t ud~ hio olo~ st r~
'- ~u;~ Ollpii~ia d-~ 7 Jlm. Les; color~tlo s utL11~3
p~rM~tt~nt d~ tud~3.s topo~r~ph1qu~ hl~tochL~lque~.
l.e~ fig~ s ~, 4 7 sont d~ p oto~r~phle~ ~ro~.
d~ up~ h.~tolo~qu~3, obtenu~ ~ 4 o~r~i pour 1~
î i,~5ur~ 3, 4 5 ,Jour~ pour 1~ flsur~ 4 ~ ~ 3 Jour~ pour le,,
'5 f i~,u~5 ~ 7-
Flg. 3 ~ 0) r~prb~nt~ r oult~t~ ~bt~nu4 ~ rc
u c411~ n~ ul ~ t ~ol n ~ ~ t
~Pl~. 4 t.; 25~) r~pr~ r~t~ le~ r ~U1~4t~ $1m~1~1res
avec 1' ~ ocl~t ~or~ ~)S t PGP ~an 1~ ~o~ n~ t
~- ~F~S. 5 SX S003 repr~ nt~ un d~l 411 d~o ~ u;a ~n
r~n,~r~t lon col-r~l~pord~nt 3 14 ~l~ur~t 4.
Fl~$~ 6 et 7 ~7~ 2gO) reprbsentan cl-~ r~.~ul~4t~
~:lc,~t~ tlon.~ d~ pl~le:~ obt~n~J re,~p~:tlv~m~nt ovec
un~ ~Otl.Jt lon phy;ilûlozlqu~ t~o n ~t ~v~ un
oc l ~ t l c,n ~FCiF~ t r~n~ sul f ~ ~.
',.''
.. . . . . . . . . ............................ ..
: . . . ` ~ .
~CV aY'X~rox T~l~copl~r 702U ,10- 4-89; 11:49 ;33 1 874 51 37 ~ , ~, S & H;~ 1
. . .
" ' 2q~.. 3¢'~i5
CO
V~n3 1~, ~xp~rler~cec ropport~ ~ n r~f~r~anc~ au;;
s 3 ~ S, on a utllls~ ~es m~e~ o~pos~tlons qu~
c~lle~ lndl~u~ u t~ble~u 4.
L~ an~ly,~ h~stolc,gique d4D~on~ r~ q~e 1' ~sl~ocLatlon
~ + VS accélbre les ét~p~!a tr~dlt10n~ lleQ de 1
elcatrlsotion d,~rrn~-~plderD~ ue et eua: Dnte 1~ qu~ de.
t~:3us reconstl~u~-~ p~r rapport ~x o~ ~ nt~tlons
t,~ oin.s (~oll~3~ne sf~ul~. A~nsl, en pl S~-lnc6 du F~F +
~e:~trane, un~ colonl~t lon tr~s rapld~ ~I Jour~ de~a
c~t~gorleO c~ lalre~ ~n~lronnante$ ~ 1l~obl4s~eo,
sru~cul~LrC3 lls~ ;) e:,~ o~s~rv~e ~ por Sr d~s t ~ssUs ~ ln3
;.~Lns, et, ~n partlcull~r, ~ p~rt~r du con,~onet1~ ~u
pl anc h e r mus,: u l o 1 r e~ s t r ~ 3~ c ~nt .
~ an~ m~ k~mps ~f l~ure 5 , une n~o4n~iea~en~sQ
1~ perMet ~u tLss~- en f~r.~atlen d' ~tre co on~ p~r une d~.nslt~
t~ for.,~ de capill~ire;; ~an~sulns ~d~ l~n~ p~r le ~hlffre
ct~ r~fbrence 10 ~ur cett~ fl~re), d~ll 1~; t~s.su:~ en
r.~ n~r~Slon dk~ign~s par le ehlffr~l d r~fkrenc~ 11. /~u
L~ou~ dc ~ ~our:~ ~contr~ 5 h ~ pour le~ t~oin~
.0 r~plth~l ~6~t ~on cngagke ~ partlr t~ 1 ~pldeeme d~ re~
J~ 1~ pl~lc arrive ~ affronte~ent. L' p~der~n~ est
S,;,~t,31em~nt réor~an~s~ ~3t il pr~entQ u ~ d~nslt~ norm~l~
~f.3u~-e ~, 4~1ne J~r~ cor~.p~otlveo~ent ~,IX tg3toln~t 4 1
d~n~lt~ c~llul~ b,~uco~p plu~ f~l ~ re 3
~,5 5~.ne ~our~. Ce~ meme3 l~lu~tr~tlor~ts r ~ nt 1' ~b~nce d~
r~tr~t~on d~s bor~s dQ 1~ plzL~ powr ~t8 punchs ~t-~lt~:7 p~r
l'assocl4tlon F~F ~ D5, contr~lrem~ne ux t~olns qul
C~th~ 3nt pat- r~tr~ctlon le.~ tls~u3 exc 8~.
La clc~tr~sation d~ plala~ b~onue~ p~r
scarlflcatlon ~t ~valu~e p~r u~e ~tud hlotclo~lqu~
.3ffe~tu~ 5 Jour3 ~pr~s ~'op0ratlon. ct traltQmer,tt con~l3te
2n un~ ~eule ~ppllc~t ion top~ue ~tJ nl ~o~t d~ 1~ le~lon l~a
- m~m~ de l'opkt~~tlon. L~s r~sult~ .o ~ont pr~ent~r~ ~u~
1~5 tl3ur~.~ 6 et 7 c~u$ mont~nt le:a tl ~iiu~ de 1~ p~ y~nt
;~5 recu un~ s-~lutlon phyJ.lolo~lqu~ t~mo~ ~ r~ t
1~ aJo~ t Ivn d~ b~GF re,:om~1n~nt ~ de~ ;r~n~ ~ulf~e <~ n,~
, .
R~V ~r:x~rox -lel~copler ~lu~u ilU~ 51 ;33 1 ~74 51 37 ~ q, S & H:#
Xl
.r:ri~ ~t 5~ e cle:~tr~n~ ,ulf~te pD ~ ) pour 1
r L ~r u ~ ~l '.' .
' 1 e ~ t ~ n-~t er .~ ue l a présenc de 1 ' a~scc S ~ t l Gn
lndui~ 1 ' er.clench~ment de:a mkcarilsme3 c cntrlciel~ qui
~etnblent totnlem~nt t~rminé3 au 3~n~e Jo r ~uiv~nt 14
bl~:3sur~ ure ~). L.' ~plder~e p4r~P:i ~aent recoR~t ltu~
~,urn~ont e un ~erme ~ns~, prS~nt~n~ W~l~ orgMnl~t lon
1r~dl:,cerna~1e des tlssu3 envlronnDnt . ~n r~v~nch~
cl-~atri~tlor~ ~u té~l~oln Cflgur~ 6~ t ~r3 las o~s t~ 6
'a de t~mp~ n~chevee. L' ~pld~r~ plu3 1~ ~ ot p~r~tlell~-
ment r~con~tltu~ t le denP~ s~u~;-Joc~ t pr~ente un~
.,lt~ ~r~3 ldche et un~ ~r~nl ~t~or no~hlclu~ c de.,
c e11~ n~c l~os~s.
L' ~ocidtton ~SF + dextrun~ ulf~t~ pr~nt~
: t ca~.r,rn~r un pui.;~ t a~,r~nt c~ trls~nt In I ~ cc;~l~r~n- .~' une
~,3r; ~ r,~r~sus nutllr~l~ rt~ r~tlf , ~t per.~-3~t4nt
~' outr~ p~rt une qur31Lt~ accru~ d~ 1~ C cotrl~otlon p~r
,s~n- a ;3-~ tout F,h~n~m~n~ de r~trac~l I~ b unq
It~obili:~atlon r~pld~ -J~, dlffér~nte3 c~t ~orl~s c~liull~lr~:,
n~-c;~ .;,1r~ ~ la r~st~ur~t'on ti~sul~lr ~.
P.~ur mie~ 1 l l ust r~r 1 ' obJ~2t o prb~ent o
irr~nt, ~ n, ,~n ~ en ~cl~lr~ m~l~t~n4nt u,21q~ n)pl~ e : .
l:r~ tL;~.rl~ Ji r:e siont en ~uc~no f4~; i~ de$tlnS3 ~ ~n
llrnltsr 1~ p~r;~.
;~.'i
G, '.~"r~ i p l~ r ~ p~ r a ~on p '~ c r em~
~n pr~por~ la composit~on su v-nte:
F~F ., ., ................ , ..... .. ,, .. ,, .. , 10 )I~,
~O !::ax~r4ne ~ul~t~ ~n' P5660 .~u c~4 42~u~ 51~ns) . ~O m~
C~rl~oxy~,~th)~l c~ lo~ .. ............. '`. 5 ~,~
ED U PUr 1fi~ :st~r11* ~t ~pyr~ n~a ...... 1~ ml
~n ot~tlent .~insl un~ ~r~ma q e 1' on ~ppllqu~ rT~rl~lt)
,. ct ~iolr ~,ur ur~3 pl~l~ dq Syp~: sci~r~Lc tLon, our un r4t. ~n
t ;~ ur.e~ trl~ ,3tlc.~n ~pr~3 3 ~OUI~ c~ traltornl~nt.
`: . , ', , ' ~ ,,.' ,;,. , ', ' ,. .,. ,, ' :~, .
RCV B':Xerox T~l~copi~r 7~20 ;10- 4-as, 11:52 .33 1 ~74 51 37 ~ C., S ~ H:# 3
r
2;1;
6.~
r,,~!~r~ r. ?. P~ ~.p.~ ,r~ Jr~ n~m.~
~ ~ s~pp~rt ue~ c,t un fll ~ coll~ne ~:~.~ti.: te
rlU~ S (i~ S.~cl~t~ "F~ t~C~ L~n) t;~ rllm ~t,
i:n~rC3rl~ par ~dsorptlerl pa~s~v~3 du m~ll ~se FGF-d~xtr;~ne
!i 3ulf~t~w dPwn~ prepol tlons s~lv~n~
Fr,F .... ~ ,,,,, ....................... , .. 10 ,u,
~e,;tran~ ~ulfat~ ~n- ~5~50 ~u catal 3aSu~ 51zm~ O
~al~2. 1~ J.~l de s~ru~ physlologlqu~ ~t~ lo ~t ~pyr~g~
r~ fblt lr~cuber p~n~nt 3~ ~lnute.a ~ 4~C. I.e p~n~ nt obtenu,
d~,eupabl~ ~ ' a forn~e ~ l a pl~ t nsu1,t~a sc~ eu~
v~ d.~ empaqu~e.
Il p~t ~Sr~ elppl1q~ a.~ ce:~ ' yl~r4~ion~
L,rOlur~3s, d* c~upure.~ et de plal~, prol ~nd~.
F.~ t,~l ,r. ~~ r~ n f ll ~ ~
L~ rr.~ e pr~par~t lon qu~ cl-~ s$u~, 41n~: oua le
tnr5;n~ me:!~ op~ratoire, p~u~nt servir ~ impr~gner un
utur~ c~lrur31ce~1 ~t~;F~ ~ehlcon - V1cl yl E~VZ). L~ fll .
~7 iutrul-L ot~tenu e:jt utilis~bl~ ~n chtru~ ~o.
15l~l.E ,4: Fl ~ r~tl~n, ,~' un .411~r~
On pr~p~r~e 13 compos' ~ I~n su vunte;
Y~.~` .. , .,,,,, .,,,,,,,,,,,, .............. ~ 0 r.3
D~:~tran~ 6ulfi~t~ ~n' D5650 cu C~ltA c13ue S~.sm~) . 150
L~rrn~3 ~rtlfici~ oe .......... ............. 3 ml
011 ~ff~ctu~ In rn~l~nge p~ r~ lyophlll~tiorl,
pu~ n 4Jol~tr: 3 ml d' e~u purl~i~e :~t~ llo apyr~ ou
cnt d~ I'em7p1ci.
Le coll.~ri3 a.;.t 4ppliqu~ ~nx lcts c~$ d' ul~ær,~L ion
~-7 1~l .orn~e, 4 rals,~n de ~euY. ln~tlll tl~n$ p~r ~our.
'~5
