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FRAGMENTS Tbp2 DU RECEPTEUR TRANSFERRINE DE NEISSERIA MENINGITIDIS
La présente invention a pour objet des polypeptides dérives de la sous-unité Tbp2
du recepteur transferrine de Neisser~a me)~ gitidis leur utilisation a titre thérapeutique
notarnment vaccinal, ainsi que les fragments d'ADN codant pour ces polypeptides.
D'une manière generale, les rneninPiteS sont soit d'orinine virale~ soit d'orieine
bactérienne. Les bacteries principalement responsables sont: ,~. me~ 7gitidis etHaemophilus i~ e~7:ae respectivement impliquées dans environ 40 et 50 % des cas de
méningites bactériennes.
On denombre en France, environ 600 à 800 cas par an de méningites à N
me~Jt~7gitidis Aux Etats-Unis, le nombre de cas s'elève à environ 2 500 à 3 000 par an.
L'espèce N me~7i~rgitidis est subdivisée en sérogroupes selon la nature des
15 polysaccharides capsulaires. Bien qu'il existe une douzaine de serogroupes, 90 % des cas de
m-oningi~eS sont attribuables à 3 sérogroupes: A, B et C.
Il existe des vaccins effic~ces à base de polysaccharides r~ps~ es pour prevenir les
m~ningit~c à N meni~7gitidis serogroupes A et C. Ces polysaccharides tels quels ne sont que
20 peu ou pas immunogéniques chez les enfants de moins de 2 ans et n'in~ icent pas de
mémoire imm~mit~ire Toutefois. ces inconvenients peuvent etre surmontés en conjuguant
ces polysaccharides à une protéine porteuse.
Par contre, le polysaccharide de N me~ 7giti~is groupe B n'est pas ou peu
~S immunogène chez l'homme, qu'il soit sous forme conjuguee ou non. Ainsi. il apparait
h~-ltement sollh~it~hle de rechercher un vaccin à l'encontre des m~ningitP~ induites par N.
me~7i~7gi~idis not~mment du serogroupe B autre qu'un vaccin a base de polysaccharide.
A cette fin, différentes proteines de la membrane externe de N me-7i~7gi~idis ont déjà
30 été proposées. Il s'agit en particulier du recepteur membranaire de la transferrine humaine.
D'une maniere generale, la ~rande majorité des bactéries ont besoin de fer pour leur
croissance et elles ont développe des svstèmes specifiques d'acquisition de ce metal. En ce
qui concerne notamment N. me~71~7gitidis qui est un patho_ene strict de l'homme, le fer ne
3j peut etre préleve qu'a partir de protéines h--m~inPs de transport du fer telles que la
transferrine et la lactoferrine puisque la quantité de fer sous forme libre est négligeable chez
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26?
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I'homme (de l'ordre de 10-18 M), en tout cas in~l~ffi~nte pour permettre la croissance
bactérienne.
Ainsi, N. meningifidis possède un récepteur de la transferrine humaine et un
5 récepteur de la lactoferrine hllm~ine qui lui permettent de fixer ces protéines chélatrices du
fer et de capter par la suite le fer nécloss~ire a sa croissance.
Le récepteur de la transferrine de la souche N. meningitidis B16B6 a été purifié par
Schryvers et al (WO 90/12591) à partir d'un extrait membranaire. Cette protéine telle que
10 purifiée apparait essentiellement constituée de 2 types de polypeptides: un polypeptide d'un
poids moléculaire apparent elevé de 100 kD et un polypeptide d'un poids moléculaire
appalt:nt moindre d'environ 70 kD, telles que révélés après électrophorèse sur gel de de
polyacrylamide en présence de SDS.
Le produit de la purification not~mment mise en oeuvre par Schryvers est par
définition all,ill~ile et pour les besoins de la présente d~m~nt~e de brevet, appelé récepte~lr
de la transferrine et les polypeptides le conctitu~nt, des sous-unités. Dans la suite du texte,
les sous-unités de poids moléculaire élevé et de poids moléculaire moindre sont
respectivement appelées Tbp I et Tbp2.
D'autre part, depuis les travaux pionniers de Schryvers et al, on a découvert qu'il
existait en fait au moins 2 types de souches qui diffèrent par la constitution de leurs
récepteurs de la transferrine respectifs. Ceci a été mis en evidence en étudiant des extraits
membranaires de plusieurs dizaines de souches de N. meningitidis d'origines variées. Ces
extraits membranaires ont tout d'abord été soumis à une électrophorèse sur gel de
polyacrylamide en présence de SDS, puis électrotransférés sur feuilles de nitroc~ llose. Ces
feuilles de nitrocellulose ont été incubées:
a) en présence d'un antisérum de lapin dirigé contre le récepteur de la transferrine
purifié à partir de la souche N. meningitidis B 16B6, aussi appelée IM2394;
b) en présence d'un antisérum de lapin dirigé contre le récepteur de la transferrine
purifié à partir de la souche N. meningitidis M982, aussi appelée IM2169; ou
35 c) en plesellce de la transferrine h--m~inf~ conjuguée à la peroxydase.
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En ce qui concerne a) et b), la reConn~iss~nre des sous-unités du récepteur de la
transferrine est révélée par addition d'un anticorps anti-immunoglobulines de lapin couplé à
la peroxydase, puis par addition du substrat de cette enzyme.
Les tableaux I et II ci-dessous indiquent le profil de certaines souches
représentatives tel qu'il apparait sur gel de polyacrylamide à 7,5 % après électrophorèse en
présence de SDS; les bandes sont caractérisées par leur poids moléculaires appa.e,.ls
exprimés en kilodaltons (kD):
Souches
2394 (B; 2a; Pl.2:L2,3) 2234 (Y; nd)
Tableau I 2228 (B; nd) 2154 (C; nd) 550 (C; 2a:)
2170 (B; 2a:Pl.l:L3~ 2448 (B; nd) 179 (C; 2a:P1.2)
Détectionavec 93 93 99
l'antisérum
anti-recepteur 2394 68 69 69
Détection avec
l'antisérum 93 93 99
anti-récepteur 2169
Détection avec la
transferrine 68 69 69
peroxvdase
N.B.: Entre par~theces sont indiqués dans l'ordre le sérogroupe, le sérotype, le sous-type
et l'immunotype.
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Les résultats répertoriés dans les 2 premières lignes des tableaux montrent qu'il
existe 2 types de souches:
Le premier type (Tableau I) correspond à des souches qui possèdent un récepteur
dont les 2 sous-unités dans les conditions expélimellLales utiiicée~, sont reconnues par
l'antisérum anti-récepteur IM2394 tandis que seule la sous-unité de haut poids moléculaire
est reconnue par l'antisérum anti-récepteur IM2169.
Le second type (Tableau II) correspond à des souches qui possèdent un récepteur
dont les 2 sous-unités dans les conditions expérimentales utilicé~s~ sont reconnues par
l'antisérum anti-récepteur IM2169 tandis que seule la sous-unité de haut poids moléculaire
est reconnue par l'antisérum anti-récepteur IM2394.
En conséquence, il existe une diversité ~ntig~nique au niveau de la sous-unité de
lS moindre poids moléculaire. Cette diversité est toutefois re~lleinLe puisqu'elle se résout en 2
grands types, col,l,~ilt;",ent à ce qui est suggéré par Griffiths et al, FEMS Microbiol. Lett.
(1990) 69: 31.
Conformément à cela, il sera fait référence dans la suite du texte à des souches de
type IM2169 ou de type IM2394.
Outre les souches cites dans le tableau II, des souches de type IM2169 sont par
exemples les souches S3032 (12, P 1.12.16), 6940 (19, P 1.6), M978 (8, P 1.1, 7), 2223 (B
: nd), 1610 (B: nd), C708 (A: 4, P 1.7), M981 (B: 4), aussi appelée 891, et 2996 (B: 2b,
P 1.2). Le déposant a reçu, par envoi gracieux, les souches S3032, M978 et M981 du Dr. J.
Poolman (RIVM, Bilthoven7 Pays-Bas), et la souche C708 du Dr. Achtman (Max PlankTnctitnte, Berlin, Allemagne).
La souche IM2154 (sérogroupe C) est citée a titre d'exemple comme étant de type
IM2394.
En vertu des précédetltes conct~t~tions, on pouvait supposer qu'un vaccin efficace à
l'enco"L,t; de toutes les infections à N. meningi~idis pourrait être constitué de manière
suffic~ntç, de la sous-unité de haut poids moléculaire, quelle que soit la souche d'origine du
récepteur, puisque cette dernière est reconnue par les 2 types d'antiserums. Toutefois, il
semble que cela ne puisse être le cas dans la mesure où la sous-unité de haut poids
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moléculaire ne serait pas capable d'induire la production d'anticorps de type neutralisant.
Seule la plus petite des 2 sous-unités du récepteur (Tbp2) serait capable de remplir cette
fonction.
S Les séquences en acides aminés des sous-unités Tbp2 des souches IM2169 et
IM2394 ont été divulguées dans la dPm~nde de brevet EPA 586 266 (publiée le 9 Mars
1994) ainsi que les fr~gm~ntc d'ADN correspondants. Ces séquences sont reprises dans les
SEQ ID NO 1 à 4 de la présente dPm~n~e
Dans les SEQ ID NO 5 à 10 sont prPsentées les séquences des sous-unités Tbp2 dessouches de type IM2169, soient les souches M978, 6940 et S3032.
On indique de plus que la séquence de la sous-unité Tbp2 IM2154 (type IM2394)
différe par deux acides aminés de la séquence de la sous-unité Tbp2 IM2394, en positions
306etS10.
On a m~inten~nt trouve qu'une sous-unité Tbp2 quelque soit la souche d'origine,
p.t;sen~ail en temmes de structures, trois dom~in~s p.;"c;~ ccociés pour au moins l'un
d'entre eux à des propriétés particulières. Par définition, les domaines de Tbp2 IM2169 et
Tbp2 IM2394 ont été fixés comme le montre le tableau ci-après, en indiquant la position des
acides aminés, bomes incluses des differents domaines, et par lt:rt~ nce à la numérotation
apparaissant dans les SEQ ID NO 1 et 3.
Tbp2 IM2169 Tbp2 IM2394
Domaine N-temminal
ou premier domaine 1-345 1-325
Domaine chamière
ou deuxième domaine 346-543 326-442
Domaine C-terminal
ou troisième domaine 544-691 443-579
Cette définition s'applique de même à toutes les Tbp2 de type IM2169 ou IM2394,
après ~ l d'une séquence type IM2169 ou IM2394 sur la séquence de re~ ce, au
m~imllm d'homologie. Ainsi, à titre d'exemple et par référence à la Figure 1, on indique la
position des dom~ines de la sous-unité Tbp2 de M978 comme suit: premier domaine (I -
346), deuxième dom~ine (347 - 557) et troisième domaine (558 - 705).
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D'autre part, on a aussi trouvé que le domaine N-terrninal ou premier dorn~ine et/ou
le domaine charnière ou deuxième domaine pourrait être necesc~ire et sl-ffi~nt, en vue
d'induire un effet vaccinal chez les humains; en conséquence de quoi, il ne serait pas
indispensable d'utiliser une Tbp2 sous une forme complète. On a en particulier trouvé que le
5 premier domaine contenait dans sa quasi intégralité le site de liaison à la transferrine, se
trouvait donc très vraisemblablement exposé vers l'extérieur et par conséquent constituait
un élément de choix à des fins vaccin~
Enfin, on a trouvé que certaines régions du deuxième dom~ine des Tbp2 de type
10 IM2169 étaient assez généralement variables et immunodomin~ntes Deux approches sont
donc possibles, en vue d'un vaccin: soit on considère que les épitopes immunodo,l,;nd"Ls
peuvent masquer d'autres épitopes d'intérêt vaccinal et par conséquent, on les délète, soit on
se sert de cette variabilité, pour ne conserver que ces régions dans un vaccin.
C'est pourquoi l'invention fournit un polypeptide ayant une séquenre en acides
aminés qui dérive de celle d'une sous-unité Tbp2 du récept~,.r transferrine dlune souche de
N. meningilidis de type IM2169 ou IM2394 dont le premier, de~xieme et troisième
domaines sont definis par ali~n~ au m~ximum d'homologie, sur la séquence de la sous-
unité Tbp2 de la souche de reférence respective, IM2169 ou IM2394; not~.. l par20 délétion totale ou partielle d'au moins un domaine de ladite sous-unité Tbp2 de type
IM2169 ou IM2394 a condition que le premier et de~lxi~m~o domaines ne soient pas~irmllt~nement et totalement délétés.
Par "séquence qui dérive d'une autre séquence" on entend bien évid~mment une
25 séqu~nce issue par processus intellectuel de cette autre séquence.
De manière plus particulière, un polypeptide selon l'invention possède une séquence
d'acides amines qui dérive d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394:
(i) not~mm~nt par délétion totale ou partielle d'au moins un dom~ine de ladite
sous-unité Tbp2 sélectionné parmi les deuxieme et troisième dom~inlos; de
préré,e,lce par délétion totale ou partielle du troisième domaine ou des
deuxième et troisième domaines,
(ii) notamment par délétion totale des premier et troisième domaines, ou
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(iii) not~mmPnf par délétion intégrale du troisième domaine et par délétion
partielle du premier dom~in~o, optionellement par délétion partielle du
deuxième domaine.
S D'une maniere avantageuse, un polypeptide selon l'invention prése,lLe une délétion
partielle, quasi totale ou totale du troisième domaine, de ,t"~:rélence totale. Dans ce cas là, le
premier ainsi que le deuxieme domaine peuvent être IllA;~ c dans leur intégralité,
partiellement ou totalement delété; ceci indépan~lemmPnt l'un de l'autre.
Sont possibles les combinaisons suivantes (sachant que les premier, deuxième et
troisième domaines dans leur intégralité sont respectivement leplese,-tés par 1, 2 et 3, et
que 0 et ~ signifient de manière respective, partiellement et totalement délété):
1,2,~3; 1, 02,~3; 1,~2, A3;
ol, 2, ~3 ; o 1, 02, ~3 ; ol, 1~2, ~3 ;
~1,2,~3 ;~l, 02,~3;
l, 2, 03; l, 02, 03; 1, ~2, 03;
01,2,03;01,02,03;01,~2,03;
~1,2, 03;~1, 02, 03;
Est aussi d'intérêt, un polypeptide selon l'invention dérivé d'une sous-unité Tbp2 de
type IM2169 par délétion partielle du deuxième domaine, qui comporte dans leur intégralité
ou quasi intégralité le premier et troisième domaines; soit la co-,lbh~aison 1, 02, 3. (Par
25 "dom~in-o rn~inten~l dans sa quasi-intégralité" on entend ici et dans la suite du texte, un
dom~ine modifié en un très faible nombre de positions, environ 5 m~ximl-m ) Un
polypeptide selon l'invention peut aussi répondre à la combinaison ol, 02, 3, la délétion
partielle du premier domaine portant av~nt~g~o~lc~m~nt sur la région homologue de celle de
Tbp2 IM2169 allant de l'acide aminé en position 1 à l'acide aminé applu~hud~ ement en
30 position 40.
Lorsqu'un polypeptide selon l'invention dérive not~mm~nt par délétion partielle du
de~-YiPme domaine d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169, cette délétion partielle porte
av~nt~gçucem~nt sur une ou des régions du deuxième domaine qui est (sont) I'(les)
35 homologue(s) des régions de la séquence IM2 169 allant:
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g
(i) de l'acide aminé en position 362 à l'acide aminé en position 379;
(ii) de l'acide amine en position 418 à l'acide aminé en position 444;
(iii) de l'acide aminé en position 46S à l'acide aminé en position 481; et
(iv) de l'acide aminé en position 500 à l'acide aminé en position S20.
De préférence, la délétion partielle porte simultanément sur les quatre régions (i) à
10 (iv) sus-décrites.
Lorsqu'un polypeptide selon l'invention dérive not~.. ,~.. l par délétion intégrale du
troisième domaine et délétion quasi intégrale du deuxième domaine d'une sous-unité Tbp2
de type IM2169 et comporte l'intégralité du premier domaine ou dérive en outre par
délétion de la partie N-terminale du premier dom~in~-, la délétion quasi intégrale du
deuxième domaine s'étend sur la région qui:
- dans le cas d'un polypeptide dérivé d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169,
est l'homologue de la région du deuxième dom~in~ de la sous-unité Tbp2
IM2169 allant de l'acide aminé dans l'une des positions 346 à 361 à l'acide
aminé en position 543;
- dans le cas d'un polypeptide dérivé d'une sous-unité Tbp2 de type IM2394,
est l'homologue de la région du deuxième domaine de la sous-unité Tbp2
IM2394 allant de l'acide aminé dans l'une des positions 326 à 341 à l'acide
aminé en position 442.
Lorsqu'un polypeptide selon l'invention dérive notamment par délétion partielle du
premier domaine d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394, cette délétion partielle
porte avantage~cement sur tout ou partie de la région:
(i) qui est l'homologue de la région du premier domaine de ladite sous-unité
Tbp2 de type IM2169 allant de l'acide aminé en position I à l'acide aminé en
position 281; ou
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2 1 ~
~o
(ii) qui est l'homologue de la région du premier dom~ine de ladite sous-unité
Tbp2 de type IM2394 allant de l'acide aminé en position I à l'acide aminé en
position 266.
5A titre d'exemple de ce qui précède, on cite une délétion d'intérêt portant sur la
région:
(i) qui est l'homologue de la région du premier dom~into de ladite sous-unité
Tbp2 de type IM2169 allant de l'acide amine en position 1 à l'acide aminé
10approximativement en position 40; ou
(ii) qui est l'homologue de la région du premier domaine de ladite sous-unite
Tbp2 de type IM2394 allant de l'acide aminé en position 1 à l'acide aminé
apploxi.l.ativement en position 45.
La séqu~nce de type IM2169 ou IM2394 à partir de laquelle est dérivée celle d'unpolypeptide selon l'invention p-cse~ un degré d'homologie avec la séquence de refe,~ncc
respective, IM2169 ou IM2394, av~nt~gPl-cemPnt d'au moins 70-75%, de p,~:Çelence d'au
moins 80%, de manière plus particulièrement preférée d'au moins 90%.
Selon un mode de réalisation tout particulièrement préféré, un polypeptide selonl'invention possède une séquence dérivée de celle de la sous-unité Tbp2 IM2169 ou
IM2394.
Le degré d'homologie peut être ~i~pment calculé en alignant les séquences de
manière à obtenir le degré maximal d'homologie; pour ce faire, il peut être n~cessA;~e
d'introduire artificiellement des empl~cemcnt~ vacants, comme cela est illustré dans les
Figures 1 à 4 et 8 à 10. Une fois que l'~lignemçnt optimal est réalisé, le degré d'homologie
est établi en comptabilisant toutes les positions dans lesquelles les acides aminés des deux
séquences se retrouvent à l'identique, par rapport au nombre total de positions.
Il serait fastidieux de décrire des séquences homologues autrement que de manière
générique, en raison du trop grand nombre de co..lb;..~icon~ L'homme du métier connâît
toutefois les règles génerales qui pc~llltl~ellL de remplacer un acide aminé par un autre sans
35 abolir la fonction biologique ou immunologique d'une protéine.
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A titre d'exemple préféré, on cite un polypeptide selon l'invention dont la séquPnce
possède au moins 70-75%, de manière aV~nt~euce au moins 80%, de préférence au moins
90%, de manière tout à fait préférée 100% d'homologie avec:
(i) la séquence telle que montrée dans l'ID SEQ NO 1, de l'acide aminé en
position I à l'acide aminé en position 345;
(ii) la séquence telle que n,o,ll,ee dans l'ID SEQ NO 3, de l'acide aminé en
position 1 à l'acide aminé en position 325 ou 442;
(iii) la séquence telle que montrée dans l'ID SEQ NO 1, de l'acide aminé en
position I à l'acide aminé en position 691 ou 543, délétée des régions 362-
379, 418-444, 465-481 et 500-520;
(iv) la sequence telle que montrée dans l'ID SEQ NO 1, de l'acide aminé en
position 346 à l'acide aminé en position 543.
Des polypeptides répondant à la définition donnée au paragraphe précédent sont
illustres comme suit:
(i) Un polypeptide selon l'invention dont la séquence est subst~ntiPIlPmPnt telle
que montrée dans l'ID SEQ NO 1, 5, 7, 9, 36 ou 38, de l'acide aminé en
position I à l'acide aminé en position 350, 351, 354, 358, 322 ou 346
respectivement;
(ii) Un polypeptide selon l'invention dont la séquence est sul st~ntipllenlpnt telle
que montrée dans l'ID SEQ NO 3 de l'acide aminé en position 1 à l'acide
aminé en position 330;
(iii) Un polypeptide selon l'invention dont la séquence est subst~ntieliempnt telle
que montrée dans:
- I'ID SEQ NO 1, de l'acide aminé en position 1 à l'acide aminé en position
691, délétée des régions 362-379, 418-444, 465-481 et 500-520;
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- I'ID SEQ NO 5, de l'acide amine en position 1 à l'acide aminé en position
705, délétée des régions 365-382, 421-453, 474-495 et 514-534;
- I'ID SEQ NO 7, de l'acide aminé en position 1 à l'acide aminé en position
693, délétée des régions 366-383, 422-448, 469-485 et 504-524;
- I'ID SEQ NO 9, de l'acide aminé en position 1 à l'acide aminé en position
699, délétée des régions 372-389, 428-454, 475-491 et 510-529;
- I'ID SEQ NO 36, de l'acide amine en position 1 à l'acide aminé en position
699, délétée des régions 339-356, 395-421, 443~58 et 477-497; ou
- I'~D SEQ NO 38, de l'acide aminé en position 1 à l'acide amine en position
699, délétée des régions 363-380, 419-445, 467-482 et 501-521; et
(iv) Un polypeptide selon l'invention dont la séquence est subst~ntiellPrnf~nt telle
que montrée dans:
- I'ID SEQ NO 1, de l'acide aminé en position 346 à l'acide aminé en
position 543,
- I'ID SEQ NO 5, de l'acide aminé en position 347 à l'acide aminé en
position 557,
- I'ID SEQ NO 7, de l'acide aminé en position 350 à l'acide aminé en
position 557,
- I'ID SEQ NO 9, de l'acide aminé en position 354 à l'acide aminé en
position 55 1,
- I'ID SEQ NO 36, de l'acide aminé en position 323 à l'acide aminé en
position 521, ou
- I'ID SEQ NO 38, de l'acide aminé en position 345 à l'acide aminé en
position 544.
21~793~
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Des polypeptides particuliers répondant aux définitions données aux points (i) à (iv)
sont décrits dans les exemples qui suivent.
Un polypeptide selon l'invention possède une séquence d'acide aminés qui co,n~ d5 au moins 10, avantageusPmPnt au moins 20, de préférence au moins S0, de manière tout à
fait préférée au moins 100 acides aminés.
Bien évidemment, un polypeptide selon l'invention peut aussi CGIn~Jl e.ldre de
manière additionnelle, une séquence d'acides aminés qui ne présente pas d'homologie avec
les séquences des sous-unités Tbp2 des souches IM2169 et IM2394; séquences qui sont
montrées dans les ID SEQ NO 1 et 3 de l'acide aminé en position 1 à l'acide aminé en
position C-terminale.
D'une manière générale, une séquence additionnelle peut être celle de tout autre15 polypeptide à l'exclusion de Tbp2.
Par exemple, une séquence additionnelle peut être celle d'un peptide signal loc~ ée
en position N-terminale d'un polypeptide selon l'invention. Des eYemrlPc de séquence signal
sont montrés dans les ID SEQ NO 1 à 4. D'autre part, on indique qu'une séquence signal
20 hétérologue appl opriée peut être une séquence signal d'un gène codant pour une
lipoprotéine.
L'invention a aussi pour objet:
(i) un fragment d'ADN isolé codant pour un polypeptide selon l'invention;
(ii) une cassette d'expression qui col,lprend au moins un fragment d'ADN selon
l'invention, placé sous le contrôle d'éléments capables d'assurer son
expression dans une cellule-hôte appropriée; et
(iii) un procédé de production d'un polypeptide selon l'invention, selon lequel on
cultive une cellule-hote comportant une cassette d'expression selon
l'invention.
Par "fragment d'ADN isolé", on signifie qu'un fragment d'A`DN selon l'invention n'est
pas intégré dans un fragment d'ADN codant pour une sous-unité Tbp2 complète
WO 95/33049 2 ~ 3 6 PCT/FR95/00701
- 14 -
Dans la cassette d'expression, le fragment d'ADN selon l'invention peut être ou non
associé a un bloc d'ADN codant pour un peptide signal hétérologue ou non, au polypeptide
codé par ledit fragment d'ADN, selon que l'on recherche ou non la sécrétion du polypeptide.
De préférence, cette sécrétion sera recherchée.
Des éléments tels qu'un bloc d'ADN codant pour un peptide signal hétérologue
(région signal) ou un promoteur existent déjà en assez grand nombre et sont connus de
l'homme du métier. Ses competences générales lui permettront de choisir une région signal
ou un promoteur particulier qui seront adaptés à la cellule-hôte dans laquelle il envisage
I'expression.
Aux fins du procédé selon l'invention, la cellule-hôte peut être une cellule de
m~mmif~re, une bactérie ou une levure; ces deux dernières étant prt:f~.~es. Là aussi, le
choix d'une lignée particulière est à la portée de l'homme du métier.
L'invention concerne ég~l~m~nt un anticorps monoclonal:
(i) capable de reconn~ître un épitope présent dans le premier domaine d'une
sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394; ledit épitope ayant une
séquence homologue à celle présente dans le premier domaine de la sous-
unité Tbp2 de la souche IM2394 et selectionnée parmi YKGTW (SEQ ID
NO 32), EFEVDFSDKTIKGTL (ID SEQ NO 33), EGGFYGPKGEEL (ID
SEQ NO 34) et AVFGAK (ID SEQ NO 35); et de manière optionnelle,
(ii) incapable de reco~ aî~e I'épitope présent dans le troisième domaine de ladite
sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394, dont la séquence est
homologue à celle de l'épitope du premier domaine qui est reconnu.
Afin d'illustrer le point (ii) précédent, on indique à titre d'exemple que les séquences
du troisième domaine de la sous-unité Tbp2 IM2394 homologues deux à deux à celles du
premier domaine se trouvent respectivement en position 443 - 447, 472 - 485, 537 - 548 et
568 - 573;
De pré.férence, un monoclonal selon l'invention est:
~ = : =
WO 9~/33049 ~ ~ ~ 7 ~ ~ ~ PCT/FR95/00701
- 15 -
(i) capable de reconnaître la région prése.l~e dans le premier domaine d'une
sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394 dont la séquence est
homologue à la séquence EG&FYGPKGEEL présente dans le premier
domaine de la sous-unité Tbp2 de la souche IM2394 ; et de manière
optionnelle,
(ii) incapable de .econ~ .e I'épitope présent dans le troisième dom~ine de ladite
sous-unité Tbp2 de type IM2169 ou IM2394, épitope équivalent de celui qui
est reconnu, dont la séquence est homologue à la séqu.once
SGGFYGKNAIEM présente dans le troisième domaine de la sous-unité
Tbp2 de la souche IM2394.
Un monoclonal préféré est:
(i) capable de reconnaître l'épitope GF~GPK, présent dans le premier domaine
d'une sous-unité Tbp2 de la souche IM2394; et
(ii) inc,.r,.ble de , ~co..nâ.l. e I'épitope équivalent présent dans le Ll oi~.;e.nc
domaine de ladite sous-unité Tbp2 IM2394.
En effet, un tel monoclonal a été reconnu comme bactéricide et par concéquent onpeut envisager de l'utiliser comme principe actif dans une composition pharm~ceutique, en
immunothérapie passive pour col,lba~. e une infection à N. meningitidis.
Enfin, I'invention concerne également une composition pharm~ceutique cor-pl~;nal-l
à titre de principe actif, au moins un polypeptide selon l'invention.
Une composition pharm, re~ltique selon l'invention est no~;i.l...,e.~l utile pour induire
une réponse immllnit,.ire chez les hllm,.in~ à l'encontre de N. meningitidis, entre autre un
eftet vaccinal de manière à protéger les hllm~in~ contre des infections à N. meningitid~is, en
prévention ou en thérapie.
Une composition selon l'invention comprend avantage~f~mf~nt, à titre de plillCIlJC
actif, au moins deux polypeptides selon l'invention; soit au moins un premier polypeptide
dont la séqu~nre dérive de celle d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169 et au moins un
deuxième polypeptide dont la séquence dérive de celle d'une sous-unité Tbp2 de type
,
W0 95/33049 2 ~ 6 PCT/FR95/00701
- 16-
IM2394. De manière alternative, une composition selon l'invention peut aussi contenir au
moins un polypeptide dont la séquence dérive de celle d'une sous-unité Tbp2 de type
IM2169 et au moins une sous-unité Tbp2 de type IM2394.
Pour ce qui concerne le polypeptide de type IM2394, élément de la composition
pharm~ceutique, il est très préférable que celui-ci comporte tout ou partie de la séquence
qui est homologue à celle du premier domaine de la sous-unite Tbp2 IM2394 dont il est
dérivé. La partie de la séquence qui doit de préférence, être m~int~nlle est l'homologue de la
région de la sous-unité Tbp2 IM2394 allant de l'acide aminé en position 267 à l'acide aminé
en position 325. La séquence d'un tel polypeptide peut dériver de celle d'une sous-unité
Tbp2 de type IM2394 nc~l~"""e~ll par délétion totale ou partielle de la région du dellxiemp
ou troisième domaine de la sous-unité Tbp2 de type IM2394.
Ainsi, en vue d'une composition pharm~seutique à deux types d'~lPm~ontc (type
IM2394 et type IM2169), sont plus particulierement préférés les polypeptides de type
IM2394 suivants:
1,2,03; 1,2,~3; 1,02,~3; 1,~2,~3
01, 2, 03; 01, 2, ~3; 01, 02, ~3; 01, ~2, /~3.
Pour ce qui concerne le polypeptide de type IM2169, élément de la composition
pharm~seutique, deux approches p-~férees sont possibles:
(A) - Soit associer au polypeptide de type IM2394, un polypeptide qui co.-.,uo,Le
tout ou partie de la séquence qui est homologue à celle du premier dom~ine de la sous-unité
Tbp2 IM2169 dont il est dérivé. Dans ce cas là, la partie de la séquence qui doit de
~ ré[ence, être m~intenue est l'homologue de la region de la sous-unité Tbp2 IM2169
allant de l'acide aminé en position 282 à l'acide aminé en position 345. La séquence d'un tel
polypeptide peut dériver de celle d'une sous-unité Tbp2 de type IM2169 nol;l~.""~~ ,l par
délétion totale ou partielle de la région du deuxième ou troisième dom~ine de la sous-unité
Tbp2 de type IM2169.
Ainsi, selon cette alternative et en vue d'une composition pharm~euti-lue à deuxtypes d'éléments (type IM2394 et type IM2169), sont plus particulierement préférés les
polypeptides de type IM2169 suivants:
Wo 9S/33049 21 ~ 7 9 3 ~ PCT/FRg5/00701
~ .
- 17 --
1,2, 03; 1,2,~3; 1, 02,~3; 1,~2,~3
0l,2,03;0l,2,~3;0l,02,a3;0l,~2,~3.
1, 02, 3; Ol, O2, 3
Pour ce qui concerne les deux dernières possibilités (1, 02, 3; Ol, 02, 3), la
délétion partielle du deuxième domaine peut très avantageuc~ment porter sur une ou des
régions du deuxième domaine qui est (sont) I'(les) homologue(s) des régions de la séquence
IM2169 allant .
(i) de l'acide aminé en position 362 a l'acide aminé en position 379;
(ii) de l'acide aminé en position 418 à l'acide aminé en position 444;
(iii) de l'acide aminé en position 465 à l'acide aminé en position 481; et
(iv) de l'acide amine en position 500 à l'acide aminé en position 520.
De préférence, la délétion partielle porte cim~llt~n~ment sur les quatre régions (i) à
20 (iv) sus-décrites.
(B) - Soit associer au polypeptide de type IM2394, un polypeptide dont la séquence
dérive par délétion partielle du deuxième domaine et par délétion totale ou quasi totale du
premier ou troisième domaine de la sous-unité Tbp2 de type IM2169 et comporte le25 deuxième domaine dans son intégralite (~1, 2, ~3). Dans cette alternative, la composition
pharm~ceutique à deux types d'~lém~nt~ (type IM2394 et type IM2169), peut
av~nt~ge-lcem~ont contenir plusieurs polypeptides (~1, 2, ~3) de type IM2169; par exemple
deux ou plus des polypeptides selectionnés parmi (~1, 2, ~3) IM2169, M978, 6940 et
S3032
Une composition pharmaceutique selon l'invention peut être fabriquée de manière
conventionnelle. En particulier on associe le ou les polypeptide(s) selon l'invention avec un
adjuvant, un diluant ou un support acceptable d'un point de vue pharm~ceutitlue. Une
composition selon l'invention peut être ~ e par n'importe quelle voie
35 conventionnelle en usage dans le domaine des vaccins, en particulier par voie soUS-Cut~n.oP,
par voie intra-m~sc~ ire ou par voie intra-veineuse, par exemple sous forme de suspension
WO 95/33049 ~ ~ ~ 7 9 3 ~ PCT/FR95/00701 ~
injectable. L'adminictration peut avoir lieu en dose unique ou répétée une ou plusieurs fois
après un certain délai d'intervalle. Le dosage app, upl ié varie en fonction de divers
paramètres, par exemple, de l'individu traité ou du mode d'~minictration.
Afin de déterminer l'objet de la présente invention, on précise que les souches de N.
meni~tgitidis IM2394 et IM2169 sont publiquçmPnt disponibles auprès de la Collection
Nationale de Culture des Microolg~ ,.,es (CNCM), Institut Pasteur, 25 rue du Dr Roux
75015 Paris sous les numéros d'enregistrement respectifs LNP N 1511 et LNP N 1520.
L'invention est décrite plus en détails dans les exemples ci-apres et par référence aux
Figures 1 à 10.
Les Figures 1 à 3, 8 et 9 présentent respectivement les ~lignPmentC des séquences
Tbp2, M978, 6940, S3032, BZ83 et BZ163 avec la séquence Tbp2 IM2169, au maximum
d'homologie. Les degrés d'homologies respectifs sont de 78.9, 81.2, 79.6, 71.3 et 81.8%.
La Figure 4 présente les ~ "....~ c au m~ximllm d'homologie des séquences des
dom~inPs charnières (deuxième dnm~inP) de Tbp2 IM2169 (1), 6940 (2), 2223 (3), C708
(4), M978 (5), 1610 (6), 867 (7), S3032 (8) et 891 (9). En it~7liques est donnée la
nu",~ LaLion de IM2169, telle qu'elle appara;t dans ID SEQ NO 2. En gras apparaissent les
sequences que l'on peut déleter selon un mode préféré. (C) indique la séquence concPnc-lc
Les Figures 5 à 7 illustrent respectivement la construction des p!~cmidPs pTG5782,
pTG5755 et pTG5783.
La Figure 10 présente les ~lignPmPntc au maximum d'homologie des séquences des
domaines charnières (deuxième domaine) de Tbp2 IM2169 (1), 2223 (2), 708 (3), M528
(4), 6940 (5), M978 (6), 1610 (7), S3032 (8), 867 (9), BZ83 (10) et BZ163 (11). En
italiques est donnée la numérotation de IM2169, telle qu'elle apparâît dans ID SEQ NO 2.
En gras apparaissent les séquences que l'on peut déléter selon un mode préféré. (C) indique
la sequ~nce concencnc
W0 95/33049 216 ~ 6 PCT/FRg5/00701
19
EXEMPLE 1: Polypeptide T/2169 (1, O2, ~3; 1-350) dont la séquence telle que
montrée dans l'lD SEQ NO 1 (IM2169), de l'acide aminé en position 1 à
l'acide aminé en position 350.
lA- Preparation du fragment d'ADN codant pour T/2169 (1-350):
Construction du vecteur pTG 5782.
A partir du plasmide pTG3721 decrit dans la d~m~n~le EPA 586 266, on
introduit, par mutagénèse dirigee, un site de restriction Hi~dIII en aval de la séquence
codant pour Tbp2, pour générer le plasmide pTG4704.
A partir du plasmide pTG3721, on amplifie par PCR, à l'aide des amorces
OTG4915 et OTG4651, un fragment comportant la séquence codant pour le signal de
sécrétion de RlpB et du début de la séquence codant pour Tbp2 mature jusqu'au site
HaeII interne.
OTG4915 : AAACCCGGATCCGTTGCCAGCGCTGCCGT
HaeII
OTG4651 :
BspHI
TTTTTTCATG AGA TAT CTG GCA ACA TTG TTG TTA TCT CTG
Met Arg Tyr Leu Ala Thr Leu Leu Leu Ser Leu
GCG GTG TTA ATC ACC GCC GGG TGC CTG GGT GGC
Ala Val Leu Ile Thr Ala Gly Cys Leu Gly ...
_clivage du peptide signal
GGC GGC AGT TTC
Le fragment PCR est ensuite digéré par BspHI et HaeII et inséré ~im~ n~."~
avec le fragment HaeII-HindIII de pTG4704 qui comporte la partie 3' de la régioncodant pour Tbp2, dans le pl~mide pTG3704 décrit dans la dem~nrle EPA 586 266,
digéré par NcoI et HindIII, pour générer le pl~cmirie pTG5768.
wo 95/33049 ~ - PCT/FR95/00701
2~ ~79~ --
- 20 -
A partir de plasmide pTG3721, on amplifie par PCR, à l'aide des amorces
OTG4928 et OTG5011, un fragment comportant la séquence codant pour la partie N-
terminale de Tbp2.
SphI
OTG4928 : GTG TTT TTG TTG AGT GCA TGC CTG GGT GGC
Val Phe Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly
_Clivage du peptide
signal
OTG5011 : TGCGCAAGCTTACAGTTTGTCTTTGGTTTTCGCGCTGCCG
HindIII
Ce fragment PCR est digéré par SphI et HindIII, puis cloné dans le pl~cmide
pTG4710 décrit dans la d~orn~nde EPA 586 266; on génère ainsi le pl~cmide
pTG5740.
Le fragment HaeII-HindIII de pTGS740 comportant la partie 3' de la séqu~n~e
codant pour le domaine de liaison à la transferrine hnm,.ine (hTf) ( 3' de la région
codant pour le premier domaine) est inséré dans le plasmide pTG3704 digéré par
BamHI et HindIII, .~imlllt~n~m~nt avec le fragment BamHI-HaeII de pTG5768
comportant le promoteur araB, la sequence signal rlpB et le début de la séquencecodante de Tbp2; on génère ainsi le pl,.~mide pTG5782. Ce vecteur comporte le
promoteur araB, la séquence codant pour le signal de sécrétion de RlpB filcinnn~e à
la séquence codant pour le domaine N-terrninal de Tbp2 (1 - 350).
lB - Production et purification de T/2169 (1-350)
Une souche d'~ coli (Xac-I) est transformée par pTG5782. Les t~ sro--~-a--Ls
sont mis en culture à 37C en milieu M9 + succinate 0,5% + arginine 5011g/ml +
ampicillinelO0 llg/ml. En phase exponentielle, on ajoute 0,2% d'arabinose (inrlu(te~r)
Après une heure d'ind~lction, on prélève des cellules et des extraits sont plc;~arcs. Une
analyse en Western Blot suivie d'une révélation par la hTF-peroxidase permet de
détecter une bande majoritaire dont le P.M. correspond à celui attendu pour cette
forrne tronquée de Tbp2.
WO 95/33049 2 ~ ~ 7 ~ 3 ~ PCTIFR95/00701
- 21 -
Dans un test tel décrit dans l'exemple 4 de WO93/6861 (publié: 15. 04. 93)
T/2169 purifié se révèle capable d'induire des anticorps bactéricides et par conséquent
devrait être utile à des fins vaccinales.
EXE~IPLE 2: Polypeptide T/2394 (1, 02, ~3; 1-340) dont la séquence telle que
montrée dans l'ID SEQ NO 2 (IM2394), de l'acide aminé en position 1 à
l'acide aminé en position 340.
2A- Prép~ration du fragment d'ADN codant pour T/2394 (1-340):
Construction du vecteur pTG S755
A partir du plasmide pTG4710 décrit dans la dpm~nrlp EPA 586 266, on
amplifie par PCR, à l'aide des amorces OTG4873 et OTG4877, un fragment
comportant la région codant pour la partie C-terrninale du dom~ine de liaison à la hT
Ce fragment est ensuite digéré par MIuI et HindIII.
OTG4873 : AAAAAGCATGCATAAAAACTACGCGTTACACCATTCAAGC
Ml uI
OTG4877 :TATATAAGCTTACGTTGCAGGCCCTGCCGCGTTTTCCCC
HindIII
Le plasmide pTG4710 est digéré par MIuI et HindIII. Le fragment MIuI-
HindIII comportant la partie 3' de la séquenre codant pour Tbp2 est rempl~cé par le
fragment PCR codant pour la partie C-terminale du dom~inp~ de liaison à la hT On
génère ainsi le plasmide pTG5707. On remplace ensuite dans le plasmide pTG5707,
un fragment BamHI-MluI comportant le promoteur araB et le début de la séquenre
codant pour Tbp2, par un fragment BamHI-MluI de pTG4764 décrit dans la dpm~nr1e
EPA 586 266 qui comporte le promoteur araB, la séquence codant pour le signal desécrétion RlpB fusionnée à la séquPnce codant pour le domaine N-terminal de Tbp2.
On génère ainsi le plasmide pTG5755. Ce vecteur comporte le promoteur araB, la
séquence codant pour le signal de sécrétion de RlpB fusionnée à la séqupnce codant
pour le domaine N-terminal de Tbp2 (1 - 340).
WO 95/33049 2 ~ ~ ~ 9 3 S PCT/FR95/00701
2B - Production et purification de T/2394 (1-340)
T/2394 (1-340) est produit et purifié tel que décrit dans l'Exemple lB.
Dans un test tel décrit dans l'exemple 4 de W093/6861 (publié: 15. 04. 93)
T/2394 purifié se révèle capable d'induire des anticorps bactéricides et par conséquent
devrait être utile à des fins vacrin~l~s
EXEMPLE 3: Polypeptide D4t2169 (1, 02, 3) dont la sequence est identique à celletelle que montrée dans l'ID SEQ NO 1, de l'acide aminé en position 1 à
l'acide amine en position 691, délétée des régions 362-379, 418-444, 465-
481 et 500-520.
3A - Préparation du frag0ent d'ADN codant pour D4/2169
I .1. Clonage du fragment d'ADN.
Le fragment d'ADN codant pour la sous-unité Tbp2 de la souche de N.
meningitidis IM2169 est amplifié par PCR (Polymerase chain reaction) à l'aide
d'amorces spécifiques complPm~nt~ires des régions 5' et 3', (respectivement A5'
et A3') sur 10 ng d'ADN génomique extrait d'une culture de bactéries de la
souche IM2169.
A5' : 5' CCCGAATTCTGCCGTCTGAAGCCTTATTC 3'
A3' : 5' CCCGAATTCTGCTATGGTGCTGCCTGTG 3'
Un fragment d'ADN est ainsi obtenu et après digestion par EcoRI, il
compte 2150 nt. Ce fragment EcoRI est ensuite ligué aux extrémités EcoRI
déphosphorylées du phagemide pBluescriptSK(-) (Stratagene) pour donner le
phagemide recombinant pSK/2169tbp2.
WO 9St33049 2 ~ ~ 7 ~ 3 ~ PCT/FR95tO0701
- 23 -
1.2. Mise en oeuvre des délétions.
Le clone pSK/2169tbp2 contenant les séquences ~bp2 de la souche M982
est déléte par la technique de Kunkel, PNAS (1985) 82: 448.
En bref, la forme phagique du phagemide recombinant pSK/2169tbp2 est
obtenue après sauvetage par le phage "helper" VCS M13 selon la technique
décrite par Stratagene, fournisseur du vecteur de base, et utilisée pour infecter
la souche bactérienne CJ236. Les mutations dut et ung portées par la souche
CJ236 ont pour conséquence la synthèse de molécules d'ADN ayant incorporé
le précurseur nucléotidique dUTP.
Les phages sont récoltés et l'ADN simple brin est extrait par un mi~l~nge
phénol/chloroforme. Cet ADN est hybridé dans les conditions classiques, aux
oligonucléotides suivants:
2169dl : 5' CGCATCCAAAACCGTACCTGTGCTGCCTGA 3'
2169d2 : 5' TTTATCACTTTCCGGGGGCAGGAGCGGA~T 3'
2169d3 : 5' GTTGGAACAGCAGACAGCGGTTTGCGCCCC 3'
2169d4 : 5' GAACATACTTTGTTCG;lLlllGCGCGTCAA 3'
La réaction d'hybridation est poursuivie 30 min, en température
décroissante a partir de 70C jusqu'à 30C.
Le second brin compl.-ment~ire est ensuite achevé par synthèse complète
en plést;nce des quatre desoxynucléotides, de la T4 DNA polymérase et de la
T4 DNA ligase, selon les conditions classiques.
La souche E. coli SURE (Stratagene) est transformée par l'ADN ainsi
obtenu. Dans cette souche, les molécules porteuses de dUTP, c'est-à-dire non-
mutées, sont détruites.
Les phages obtenus sont analysés par les techniques classiques de
préparation rapide d'ADN plasmidique et de digestion par les el~ynles de
restriction appropriées. La pli;senCe de la mutation l~cl~elcl~ée est ensuite
vérifiée par séquençage nucléotidique.
WO 95/33049 2 1~ 7 ~ 3 6 PCT/FR95/00701
- 24 -
Le clone pSK2169#7, porteur des quatre mutations a 1203-1256,
1371-1451, a 1512-1562, et ~ 1617-1679 est sélectionné.
3B - Construction du vecteur d'expression pTG5783
Le plasmide pTG5768 décrit précédemment est digéré par HpaI et Xcm~. On
insère ~iml~lt~n~-ment dans ce vecteur un fragment XcmI-XcmI de pTG5768 et le
fragment HpaI-XcmI du plasmide pSK/2169ed#7, pour générer le plasmide pTG5783.
Ce vecteur comporte le promoteur araB, la séquence codant pour le signal de
sécrétion de RlpB fusionnée à la séquence tbp2 modifiée (délétions dl à d4).
3C - Préparation et purification de D4/2169.
D4/2169 est produit et purifié selon l'Exemple IB.
Dans un test tel decrit dans l'e~ .,ple 4 de W093/6861 (publié: 15. 04. 93)
D4/2169 purifié s'est révélé capable d'induire des anticorps bactéricides et parconséquent devrait être utile à des fins vaccin~l~os
EXEMPLES 4 à 8: Polypeptides 4) C/2223, 5) CIM981, 6) C/1610, 7) C/M978 et 8)
C/C708 correspondants au de~ èmp domaine (région Cl~a~ t;) de
Tbp2s de diverses sou~h~s
Les fragm~ntc d'ADN codant pour les Tbp2 des souches de N. meningitidis
2223, M981, 1610, M978 et C708 ont été clonés par amplification PCR comme décritdans l'exemple 3A~ en utilisant les deux même al,lo,~;es. De même, ces fr~gm~nt~ ont
été insérés aux sites EcoF'I ou EcoRI/BamHI du ph~gemide pBluescriptSK(-). Le
séquençage de la région codant pour le deuxième domaine a été effectué et la
séquence en acides aminés déduite telle chacune d'elle apparait à la Figure 4.
Sur la base de chacune des séquences nucléotitliqu~, des a"lor~.es spécifiques
de chacuns des deuxièmes domaines sont créées en introduisant des sites de clivage
appropriés en vue d'un futur clonage en phase avec séquence signal rlpB, sous lecontrôle du promoteur araB. ces amorces sont utilisées en PCR pour amplifiPr la
region codant pour le de--xi~me domaine de chacune des Tbp2. Ces régions sont
WO95/33049 21 ~ 7 ~ ~ ~ PCT/FR95/00701
- 25 -
clonées comme indiqué ci-dessus dans un plasmide comportant la séquence signal
rlpB, sous le contrôle du promoteur c~raB.
L'expression des peptides est conduite comme décrit a l'Exemple lB.
EXEMPLE 9: Composition vaccinale (T/2169 - T/2394) destinée a prévenir des
infections à N. n~e~lingitidis
Des solutions stériles de T/2169 et T/2394 tels que purifiés dans les exemples IB et
2B sont décongelées. Afin de plépaler un litre de vaccin renfermant 100 llg/ml de chacun
des principes actifs, on mélange stérilement les solutions suivantes:
- Solution de T/2394 à I mg/ml dans du tampon C
(tampon phosphate 500 mM, pH8, Sarkosyl 0,05 %) 100 m1
- Solution de T/2169 à Img/ml dans du tampon C 100 ml
- Eau physiologique tamponnée (PBS) ) pH 6.0 300 ml
- Hydroxyde d'aluminium à 10 mg Al+++/ml 50 ml
- Merthiolate à I % (p/v) dans du PBS l0 ml
- PBS qsp 1.000 rnl
EXEMPLE 10: Composition vaccinale (D4/2169 - Tbp2/2394) destinée à prévenir des
infections à N. ~,. ni~ilidis
Une solution stérile de D4/2169 tel que purifié dans l'exemple 3C est décongelée. On
fait de même avec une solution stérile de Tbp2/2394 tel que préparé et purifié dans
l'exemple 3 de EPA 586 266. Afin de p,~,aler un litre de vaccin ~ -re-ma,-L 100 ~lg/ml de
chacun des principes actifs, on mélange stérilement les solutions suivantes:
- Solution de Tbp2/2394 à I mg/ml dans du tampon C 100 ml
WO 95t33049 PCTtFR9S/00701
2~ ~793~ ~
- 26 -
- Solution de D4/2169 Img/ml dans du tampon C 100 ml
- Eau physiologique tamponnée (PBS) ) pH 6.0300 ml
- Hydroxyde d~ minillrn à 10 mg Al+++/ml 50 ml
- Merthiolate à 1 % (p/v) dans du PBS 10 ml
- PBS qsp 1.000 ml
EXEMPLE I 1: Obtention d'un anticorps capable de reconnaître l'épitope GFYGPKGE du
premier domaine de Tbp2 IM2394.
11A-Immunisation des souris et production des hybridomes
Des souris MRL/Lpr-Lpr connues pour produire plus d'IgG2a, IgG2b et IgG3
que les souris Balb/C (J. Immunol. Methods (1991) 144: 165) reçoivent une p.~;.niè.e
injection intrapéritonéale de 50 ~lg de la fraction me.. b.~Lnaile IM2394 en présence
d'adjuvant complet de Freund. La fraction m~...br~nai~e que l'on utilise est préparée
comme suit:
La souche IM2394 conservée sous forme Iyophilisée est reprise et cultivée sur
gélose Mueller - Hinton pendant une nuit à 37C dans une atmosphère contenant 20%
de CO2 La nappe est reprise et sert à encpmpnc~r un erlen-meyer contenant du
bouillon Mueller - Hinton additionné de 30 IlM EDDA (ethylene diamine di ortho-
hydroxy acetic acid - Sigma). Après 5 heures d'in~ub~tinn à 37C sous ~git~tion
rotative, la culture est centrifugée. Le culot est repris par du tampon Tris-HCl pH 8 et
la suspension est Iysée dans un appareil à ultrasons fonctionnant a haute pression
(Rannie, modèle 8.30H). La suspension obtenue est centrifugee à basse vitesse pour
éliminer les débris cellulaires et les Ill~:lllblanes sont recueillies par ultracentrifil~tion
(140 000 xg, 75 min, 4C). La fraction me...b.~,nailt; est fin~lemPnt reprise en tampon
Tris-HCI 50 mM pH 8 et sa concentration protéique déterminée.
WO 95/33049 2 1 ~ 7 ~ 3 6 PCT/~95/00701
- 27 -
Cette première injection est suivie de deux injections de rappel 21 et 49 jours
plus tard. Les doses de rappel contiennent 25 ~lg de la protéine Tbp2 telle que purifiée
dans l'Exemple 3 de EPA 586 266, sous la forme d'une émulsion dans l'adjuvant
incomplet de Freund.
56 jours après, la souris ayant développé le titre en anticorps le plus élevé
(contrôle des immuncérums par ELISA) est sélectionnée pour la production
d'anticorps monoclonaux spécifiques. Celle-ci reçoit une dernière injection de rappel
(78 jours après l'injection initiale) en inoculant 25 ',Ig de la protéine Tbp2 telle que
purifiée dans l'Exemple 3 de EPA 586 266 à la fois par voie intraveineuse et par voie
intrapéritonéale. 3 jours après, la rate de l'animal est prélevée et les splénocytes sont
fusionnés avec les cellules myélom~tences murines P3 x 63 Ag 8653 dans un rapport
d'une cellule myélom~te~lce pour 4 cellules spléniques. Le protocole de fusion utilisé
est dérivé de celui décrit initialement par G. Kohler et C. Milstein, Nature (1975) 256
: 495. Après fusion, les cellules sont disposées dans des micropuits stériles (Nunc)
recouverts d'un "feeder" nourricier à raison de 100 000 cellules par puits dans un
volume de 200 ~I de milieu sélectif [milieu D.M.E.M contenant 20% de SVF et un
mélange hypo~rlll"lle - azaserine - thyrnidine à 2% (V/V) (Gibco. Réf 043-01060H)].
Le milieu sélectif est remplacé 6 jours après, par un milieu non sélectif ~milieu
D.M.E.M contenant 20% de SVF et un mélange hypoxanthine - thymidine à 2%
(V/V) (Gibco. Réf 043-01065H)].
11B -Criblage des hybridomes
Les surn~ge~nt~ de culture des hybridomes sont testés par ELISA selon la
méthode suivante:
Dans des micropuits de plaque ELISA "sensibilisés" pendant une nuit à +4C
par 100 ,ul d'une solution à 5 llg/ml de RT 2394 en tampon carbonate (50 mM pH
9,6), puis saturés pendant 1 heure à 37C avec 200 ,ul d'un tampon phosphate 0,1 M
conten~nt 1% de sérum albumine bovine (poids/volume) (PBS-AB), sont déposés 100
~11 de surnageant de culture d'hybridomes (ou les dilutions d'imm-ln~érums çffectll~s
en tampon PBS-AB contenant 0,05% de Tween 20) (PBS-T-AB). Après une nouvelle
jncukation de lh30 à 37C suivie de 5 lavages en PBS-Tween, les puits sont
recouverts par 100 ,ul d'une solution mixte d'anticorps conjugués à la phosph~t~e
alcaline (PA) spécifiques des isotypes IgG2a, IgG2b et IgG3 murins de façon à ne
WO 95/33049 PCT/FR9S/00701
3 ~ --
selectionner que les hybridomes sécrétant des anticorps spécifiques et fonctionnels
dans le test de bactericidie. La solution mixte d'anticorps conjugués est prépa~e en
diluant les 3 imml~nc.-rums de chèvre suivants: chèvre anti IgG2a - PA (Caltag),chèvre anti IgG2b -PA (Caltag), chèvre anti IgG3-PA (Caltag) au l/lSOOè en tampon
PBS-T-AB. Après incubation de la solution d'anticorps conjugués lh30 à 37C, suivie
de 5 lavages, la réaction enzymatique est révélée par 100 Ill d'une solution de
pa,~niL~ophényl phosphate à S mg/ml en tampon diéthanolamine 0,1 M, pH 9,8. Le
développement de la réaction est arrêté au bout de 30 min. en rajoutant 50 ~11 de
soude lN avant analyse au spectrophotomètre à 405 nm.
Les clones positifs après ce premier criblage sont analysés pour leur capacité àreconnaître la sous-unité Tbp2 par Western blot.
Pour ce faire, les récepteurs transferrine IM2394 (0,863 mg/ml) et IM2169
(0,782 mg/ml) tels que pr~;pa.t;s dans les PYemrles 1 et 2 de W093/6861, sont dilués
au 1/10 dans un tampon Tris 1 M pH 6,8, puis dénaturés en ajoutant 10% (V/V) d'une
solution de SDS à 25% dans un tampon TE (Tris/HCI 100 mM, EDTA 10 mM) pH
8,0 et 5% (V/V) de ~--..elc~ éth~nol Après un tr~itçment de 15 min à 56C, un
aliquot de 110 ~ll contenant le récepteur ~lan~'relli..e dénaturé IM2394 ou IM2169, est
deposé sur un gel de polyacrylamide à 7,5%. Après migration (I heure sous 200 volts
dans une cuve Biorad), les proteines sont électrotransférées sur une ,..GI.II,l~ne de
nitrocelllllose (100 volts pendant 50 min.). La membrane est saturée pendant 1 nuit à
température ambiante dans un tampon Tris 20 mM, NaCI 137 mM pH 7,6 (TBS)
contenant 5% (P/V) de poudre de lait écrémé puis montée sur miniblotter. Les
anticorps que l'on teste sont ajustés à la concentration de 25 ~lg/ml en tampon TBS
contenant 1% (P/V) de poudre de lait avant d'être déposés à raison de 50 ~11 par canal.
Après 45 min. d'in~nlbati-~n, suivies de rinçages en tampon TBS/lait 1%, 50 ~1
d'un immlmc~rum de lapin anti IgG.A.M de souris (Zymed) conjugué à la pho~yh~lase
alcaline préalablement dilué 1000 fois en tampon TBS/lait 1% sont déposés dans
chaque canal.
Après une nouvelle incub~tion de 45 min. suivie de rinçages, la réaction
enzymatique est révélée à l'aide d'un substrat chromogénique (B.C.I.P/NBT (SigmaFast R). La réaction est arrêtée au bout de 15 min. par trempage dans l'eau distillée.
Les clones positifs sont caractérisés par leur capacité à révéler une bande
WO 9S/33049 21 ~ 7 ~ 3 6 PCT/FR95/00701
- 29 -
correspondant à une protéine d'environ 69 kD (sous-unité Tbp2) après
électrotransfert du récepteur transferrine IM2394 sur membrane de nitroce~ lose.
A l'issue de ce second criblage par Western blot, les clones sont analysés pour
leur capacité à produire une immunoglobuline ré~gicc~nt avec la séquence peptidique
GFYGPKGE dans un système ELISA; la méthodologie est identique à celle décrite
ci-dessus à l'exception de la sensibilisation des plaques qui est réalisée par addition
dans chaque puits de 100 ~11 d'une solution de peptide GFYGPKE à 2 ,ug/ml.
Parmi les hybridomes que l'on teste, on en sélectionne un qui se révèle capable
de reagir avec le peptide; puis on le stabilise par clonage succeccifc (au moins 2) à
raison de 5 cellules/puits lors du premier clonage, de une cellule/puits lors des
suivants.
11C -Production et purification de l'anticorps monoclonal
L'anticorps monoclonal est produit en ascite de souris Nude swiss males.
15 jours après injection de 500 1ll de pristane par voie intrapéritonéale, les
souris nudes reçoivent une deuxième injection i~ pé~ ilonéale de 7 millions de
cellules provenant de l'hybridome.
Les liquides d'ascites sont prélevés stérilement puis purifiés par
chromatographie d'affnité sur une colonne de proteine G. L'ascite diluée au 1/Sè dans
un tampon phosphate 0, IM pH 7,4 et filtrée sur filtre millipore 0,22 11 est passée au
travers d'une colonne de protéine G préalablement équilibrée dans le même tamponphosphate, à raison de 40 ml/heure.
Les anticorps fixés sur la colonne sont élués à l'aide d'un tampon glycine 0,lM
pH 2,7. Les fractions éluées sont immedi~tement neutralisées à l'aide d'un tampon Tris
1 M pH 8,0 (à raison de 1 volume de Tris pour 10 volumes d'éluat).
L'éluat est ensuite dialysé une nuit à +4C dans un tampon phosphate 0, lM pH
7,4, aliquoté et conservé congelé.
Wo 95/33049 PCT~95/00701
~g~36
- 30 -
La pureté de l'anticorps est controlée par électrophorèse sur gel de
polyacrylamide à 7,5% et par chromatographie de perméation sur Superose 12. Le
taux de pureté généralement est supérieur à 95%.
En appliquant le protocole décrit ci-dessus et en criblant environ 800
hybridomes, on a not~mment sélectionné un monoclonal capable de réagir avec
l'épitope GFYGPKGE du premier domaine de Tbp2 IM23g4 et incapable de réagir
avec l'épitope correspondant situé dans le troisieme domaine (soit GFYGKNAI).
Ce monoclonal (appelé 475E7) est une IgG2b, de point isoélectrique compris
entre 7,8 et 8,1, et possède un titre bactéricide de 512.
Ce titre a été déterminé comme suit:
A partir d'une solution de Mab 475 E7, des dilutions de raison deux sont
réalisées et incubées en présence de 50 ~I d'une suspension de méningocoques à 1.104
CFU/ml et de 50 1ll de complément de lapereau tla s--crPncion bactérienne est obtenue
par culture de la souche N. meningi~idis B16B6 à 37C pendant 5 heures dans le
bouillon Mueller-Hinton-Difco contenant 30 ~M d'EDDA (éthylène diamine di ortho
hydroxyphenyl acetic acid - Sigma)].
Après une heure d'incubation à 37C, 25 111 de mélange sont prélevés et cultivéssur gélose Mueller-Hinton supplémentee. Les boAltes de gélose sont incubées une nuit
à 37C sous une atmosphère contenant 10 % de CO2. Les colonies sont numérées et
le titre bactéricide est exprimé comme l'inverse de la dernière dilution en p,c:sencc de
laquelle on observe 50% ou plus de Iyse des bactéries par rapport au contrôle.
Dans ces conditions, il a été déterrniné que le Mab 475 E7 possédait un titre
bactericide de 512.
WO 95/330~19 2 1 ~ ~ ~ 3 ~ PCT/ER95/00701
- 31 -
EXEMPLE 12: Mise en évidence de l'activité bactéricide des immunoglobulines
spécifiques de la protéine T/2169 (1-350) vis-à-vis de diverses souches de
1~ me~lingi~idis.
12A -Production et purification de T/2169 (1-350)
Une souche d'E. coli B est transformée par le pl~cmide pTG5782 décrit dans
l'Exemple I . Le l, ~nsro, nldnl sélectionné est amplifié pour donner des lots de
s~merlce. A partir d'un tube d'E. coli B transformée par pTG 5782,on procède a une
amplification de la culture dans le milieu M9 + succérate 0,5 %. La culture est réalisée
dans un fermenteur de 201.
En phase expone~tielle, on ajoute l'arabinose (indl-cte-lr d'expression). Après
une heure d'induction, les cellules sont récoltées, cassées dans un appareil
fonctionnant à haute pression (Rannie) et la fraction membranaire est récoltée par
centrifugation.
Une analyse en Western blot suivie d'une révélation par la Ll~n~r~;"ine-
peroxidase permet de détecter une bande majoritaire dont le poids moléculaire
correspond à celui attendu pour cette forme tronquée. La protéine est purifiée par
SDS-Page préparatif à partir de gel d'acrylamide à 10 %.
12B -Production des immunoglobulines spécifiques de T/2169 (1-350)
La fraction protéique ainsi obtenue sert à jmml~nic~or des lapins. Brièvement, des
lapins (New-Zealand White) sont imm~nicés (i) à J/0 avec 50 llg de protéine T/2169
} ,epal~e comme decrit en 12A, en présence d'adjuvant complet de Freund et (ii) à
J/21 et J/42 avec 50 llg de protéine T/2169 en présence d'adjuvant de Freund
incomplet. A J/56, les lapins sont sacrifiés et le sérum est récolté. A partir de ce
sérum, les immunoglobulines sont purifiées par chromatographie d'affinité sur une
résine de protéine A-Sépharose (Pharmacia). La purification est réalisée selon les
,ecor..,..~lld~tions du fournisseur. La fraction d'IgG purifiée est Iyophilisée et le
Iyophilisat est repris par un certain volume de façon à ce que la conc~ ion
protéique finale de la solution soit voisine de 25 mg/ml.
WO 95/33049 . ~ ; PCT/FR95/00701
9 3 6 ~
- 32 -
12C-Test de bactéricidie
En parallèle à la purification de T/2169, on procède à une purification par SDS-Page préparatif d'une fraction d'E. coli B obtenue après transforrnation avec leS plasmide pTG3704 (ce vecteur est identique au plasmide pTG5782 mais ne co~ ,rei~d
aucune séquence de Tbp2). La fraction protéique obtenue par SDS-Page plep~r~Llifsert à imm~lni.~r des lapins corrune cela est décrit précéd~mm~nt, et les IgG sont
purifiées à partir du sérum récolté.
On dispose donc de deux fractions sériques dénommées IgG T/2169 et IgG
Temoin. Elles sont analysées pour leur capacité à Iyser différentes souches de N.
meningi~idis dans le test de bactéricidie, tel que décrit dans l'Exemple 4 de
W093/6861 (publié le 15.04.1993).
Les résultats obtenus sur dirrérelll~ isolats sont résumés dans le tableau ci-après
et démontrent que la protéine T/2169 purifiée se révèle capable d'induire des anticorps
bactéricides vis-à-vis de plusieurs souches du groupe de type IM2169. Ces résultats
de bactéricidie croisée dell,ol~L.t:"l que T/2169 devrait être utile à des fins v~ClAin; les
Détermina~ion de l activi~é bactéricide des immunoglobulines spécifiques de la
pro~éine T/2169 en comparaison avec les immunoglobulines témoin
vis-à-vis de six souches de N. meningilidis
Titrcs ba.l~. ;.;dcs~
Souche S~
S~.ut~.~,~ tvpe I~G TémoinI~G T/2169
2169 B:9;Pl.9 < 4 128
RH 873 B;8;Pl.1.7 < 4 16
RH 876 B;19,P1.6 < 4 64
351 B:NT;PI.7 < 4 256
NG G40 B;1:- < 4 512
EG 328 B~ - < 4 64
* Les tiLrcs bacl~li,,idcs sont e~;primés en inverse de la dilution pour laquelle on obscrve 50 % de Iyse
25dcs colonics inilialcs
PCT/FR95/0070 1
WO 95/33049 2 ~ ~ 7 ~ 3 ~
. .
- 3~ -
EXEMPLE 13: Mise en évidence de l'activité bactéricide des immunoglobulines
spécifiques de la protéine D4/2169 vis-à-vis de diverses souches de N.
meningitidis.
13A -Production et purification de D4/2169
D4/2169 est produit et pwifié selon l'Exemple 12A.
13B -Production des immunoglobulines spécifiques de D4/2169
Cette production est ef~ectuée de manière similaire a cell décrite dans l'Exemple
12B.
13C-Test de b~ctéricidie
On dispose de deux fractions d'immunoglobulines dénommées IgG D4/2169 et
IgG Témoin. Elles sont analysées pour leur c~ra~ité à Iyser dif~érentes souches de ~
meningitidis dans le test de bactéricidie tel que décrit dans l'FY~mrle 4 de WO
93/6~61 (publié le 15.04.93).
Les résultats obtenus sur différents isolats sont résumés dans le tableau ci-après
et démontrent que D4/2169 punfié se révèle capable d'induire des antico~ps
bactéricides vis-à-vis de plusieurs souches et par conséquent devrait être utile à des
fins vaccinales.
Détermination de l activi~é bactéricide des immunoglobulines spécif ques de la
protéine D~/2I 69 en comparaison avec les immunoglobulines témoin
vis-à-vis de six souches de N. meningitidis
Titrcs bact;. ;~;dc
SoucheSC. .,~. . .
Sc. ~ ,c/ tvl)e IgG Tcmoin T~G D~/2169
2169 B:9;PI.9 < 4 32
~H 873B;8;Pl.1.7 < 4 8
RH 876 B;19,Pl.6 < 4 16
351 B:NT;Pl.7 < 4 128
NG G40 B;l:- < 4 64
EG 328 B:NT:- < 4 16
~ Les titrcs ba-t~ ;d-:s sont exprimcs en inverse de la dilution pour laquelle on observe so % de Iyse
dcs colonics ini~ialcs.
PCT/FR95/00701
WO 95/33049 . ~ ~, . ;
2~67~36i ~
- 34 -
SEQ ID NO Nom du projet Sequence
1, 2 IM2169-2 Tbp2 IM2169 complète
3, 4 IM2394-2 Tbp2 IM2394 complète
5, 6 M978 Tbp2M978 complète
7, 8 6940 Tbp2 6940 complète
9, 10 S3032 Tbp2 S3032 complète
11 2D IM2169 2ième domaine de Tbp2 IM2169
12 2D 6940 2ième domaine de Tbp2 6940
13 2D 2223 2ième domaine de Tbp2 2223
14 2D C708 2ième domaine de Tbp2 C708
2D M978 2ième domaine de Tbp2 M978
16 2D 1610 2ième domaine de Tbp2 1610
17 2D 867 2ième domaine de Tbp2 867
18 2D S3032 2ième domaine de Tbp2 S3032
19 2D 891 2ième domaine de Tbp2 M981
OTG 4915 OTG 4915
21 OTG 4651 OTG 4651
22 OTG 4928 OTG 4928
23 OTG5011 OTG5011
24 OTG 4873 OTG 4873
OTG 4877 OTG 4877
26 A 5' A 5'
27 A 3' A 3'
28 2169 Dl 2169DI
29 2169 D2 2169D2
2169 D3 2169D3
31 2169 D4 2169D4
32 MABI lère boîte du ler dom~in~ de Tbp2
IM 2169
33 MAB2 2ième boîte du ler dom~ine de Tbp2
IM 2169
34 MAB3 3ième boîte du ler domaine de Tbp2
IM 2169
MAB4 4ième boîte du ler domaine de Tbp2
IM 2169
36, 37 BZ83 Tbp2 BZ83 complète
38, 39 BZ163 Tbp2 BZ163 complète
WO 9S/33049 21 ~ ~ 9 3 6 PCT/FR95/00701
~ ' .
- 35 -
2D BZ83 2ième domaine de Tbp2 BZ83
41 2D BZ163 2ième domaine de Tbp2 BZ163
42 2D M528 2ième domaine de Tbp2 M528
2 ~ 6 7 ~ 3 6 ` PCT/FR95/00701
- 36 -
LISTE DE SEQUENCES
(1) INFORMATION GENERALE:
(i) DEPOSANT:
(A) NOM: Pasteur Merieux serums et vaccins
(B) RUE: 58, avenue leclerc
(C) VILLE: Lyon
(E) PAYS: France
(F) CODE POSTAL: 69007
(A) NOM: Transgene
(B) RUE: 11, rue de Molsheim
(C) VILLE: Strasbourg
(E) PAYS: France
(F) CODE POSTAL: 67000
(ii) TITRE DE L' INVENTION: Fragments Tbp2 de N. meningitidis
(iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 35
(iv) FORME LISIBLE PAR ORDINATEUR:
(A) TYPE DE SUPPORT: Tape
(B) ORDINATEUR: IBM PC compatible
(C) SYSTEME D' EXPLOITATION: PC-DOS/MS-DOS
(D) LOGICIEL: PatentIn Release #1.0, Version #1.25 (OEB)
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 1:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 2230 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: Neisseria meningitidis
(B) SOUCHE: IM2169
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: sig_peptide
(B) EMPLACEMENT: 60..119
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: mat_peptide
(B) EMPLACEMENT: 120..2192
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 60..2192
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: misc_feature
(B) EMPLACEMENT: 120..1154
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: misc_feature
(B) EMPLACEMENT: 1155..1748
W O 95/33049 ~ ~ ~ 7 g 3 ~ PCTtFR95tO0701
.
-37-
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A~ NOM/CLE: misc_feature
(B) EMPLACEMENT: 1749..2192
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: misc binding
(B) EMPLACEMENT: 237..1169
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1:
ATTTGTTAAA AATAAATAAA ATAATAATCC TTATCATTCT TTAATTGAAT TGGGTTTAT 59
ATG AAC AAT CCA TTG GTA AAT CAG GCT GCT ATG GTG CTG CCT GTG TTT 107
Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe
-20 -15 -10 -5
TTG TTG AGT GCC TGT CTG GGC GGC GGC GGC AGT TTC GAT CTT GAT TCT 155
Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser
1 5 10
GTC GAT ACC GAA GCC CCG CGT CCC GCG CCA AAG TAT CAA GAT GTT TCT 203
Val Asp Thr Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser
15 20 25
TCC GAA AAA CCG CAA GCC CAA AAA GAC CAA GGC GGA TAC GGT TTT GCG 251
Ser Glu Lys Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala
30 35 40
ATG AGG TTG AAA CGG AGG AAT TGG TAT CCG GGG GCA GAA GAA AGC GAG 299
Met Arg Leu Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Gly Ala Glu Glu Ser Glu
45 50 55 60
GTT AAA CTG AAC GAG AGT GAT TGG GAG GCG ACG GGA TTG CCG ACA AAA 347
Val Lys Leu Asn Glu Ser Asp Trp Glu Ala Thr Gly Leu Pro Thr Lys
65 70 75
CCC AAG GAA CTT CCT AAA CGG CAA AAA TCG GTT ATT GAA AAA GTA GAA 395
Pro Lys Glu Leu Pro Lys Arg Gln Lys Ser Val Ile Glu Lys Val Glu
80 85 90
ACA GAC GGC GAC AGC GAT ATT TAT TCT TCC CCC TAT CTC ACA CCA TCA 443
Thr Asp Gly Asp Ser Asp Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Pro Ser
95 100 105
AAC CAT CAA AAC GGC AGC GCT GGC AAC GGT GTA AAT CAA CCT AAA AAT 491
Asn His Gln Asn Gly Ser Ala Gly Asn Gly Val Asn Gln Pro Lys Asn
110 115 120
CAG GCA ACA GGT CAC GAA AAT TTC CAA TAT GTT TAT TCC GGT TGG TTT 539
Gln Ala Thr Gly His Glu Asn Phe Gln Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe
125 130 135 140
TAT AAA CAT GCA GCG AGT GAA AAA GAT TTC AGT AAC AAA AAA ATT AAG 587
Tyr Lys His Ala Ala Ser Glu Lys Asp Phe Ser Asn Lys Lys Ile Lys
145 150 155
TCA GGC GAC GAT GGT TAT ATC TTC TAT CAC GGT GAA AAA CCT TCC CGA 635
Ser Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Glu Lys Pro Ser Arg
160 165 170
CAA CTT CCT GCT TCT GGA AAA GTT ATC TAC AAA GGT GTG TGG CAT TTT 683
Gln Leu Pro Ala Ser Gly Lys Val Ile Tyr Lys Gly Val Trp His Phe
175 180 185
WO 95/33049 2 1 6 7 ~ 3 6 PCT/liR95/00701
- 38 -
GTA ACC GAT ACA AAA AAG GGT CAA GAT TTT CGT GAA ATT ATC CAG CCT 731
Val Thr Asp Thr Lys Lys Gly Gln Asp Phe Arg Glu Ile Ile Gln Pro
190 195. 200
TCA AAA AAA CAA GGC GAC AGG TAT AGC GGA TTT TCT GGT GAT GGC AGC 779
Ser Lys Lys Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Ser Gly Asp Gly Ser
205 210 215 220
GAA GAA TAT TCC AAC AAA AAC GAA TCC ACG CTG AAA GAT GAT CAC GAG 827
Glu Glu Tyr Ser Asn Lys Asn Glu Ser Thr Leu Lys Asp Asp His Glu
225 230 235
GGT TAT GGT TTT ACC TCG AAT TTA GAA GTG GAT TTC GGC AAT AAG AAA 875
Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Gly Asn Lys Lys
240 245 250
TTG ACG GGT AAA TTA ATA CGC AAT AAT GCG AGC CTA AAT AAT AAT ACT 923
Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Ala Ser Leu Asn Asn Asn Thr
255 260 265
AAT AAT GAC AAA CAT ACC ACC CAA TAC TAC AGC CTT GAT GCA CAA ATA 971
Asn Asn Asp Lys His Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Asp Ala Gln Ile
270 275 280
ACA GGC AAC CGC TTC AAC GGC ACG GCA ACG GCA ACT GAC AAA AAA GAG 1019
Thr Gly Asn Arg ehe Asn Gly Thr Ala Thr Ala Thr Asp Lys Lys Glu
285 290 295 300
AAT GAA ACC AAA CTA CAT CCC TTT GTT TCC GAC TCG TCT TCT TTG AGC 1067
Asn Glu Thr Lys Leu His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser
305 310 315
GGC GGC TTT TTC GGC CCG CAG GGT GAG GAA TTG GGT TTC CGC TTT TTG 1115
Gly Gly Phe Phe Gly Pro Gln Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu
320 325 330
AGC GAC GAT CAA AAA GTT GCC GTT GTC GGC AGC GCG AAA ACC AAA GAC 1163
Ser Asp Asp Gln Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Lys Asp
335 340 345
AAA CTG GAA AAT GGC GCG GCG GCT TCA GGC AGC ACA GGT GCG GCA GCA 1211
Lys Leu Glu Asn Gly Ala Ala Ala Ser Gly Ser Thr Gly Ala Ala Ala
350 355 360
TCG GGC GGT GCG GCA GGC ACG TCG TCT GAA AAC AGT AAG CTG ACC ACG 1259
Ser Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr
365 370 375 380
GTT TTG GAT GCG GTT GAA TTG ACA CTA AAC GAC AAG AAA ATC AAA AAT 1307
Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys Ile Lys Asn
385 390 395
CTC GAC AAC TTC AGC AAT GCC GCC CAA CTG GTT GTC GAC GGC ATT ATG 1355
Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met
400 405 410
ATT CCG CTC CTG CCC AAG GAT TCC GAA AGC GGG AAC ACT CAG GCA GAT 1403
Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asp Ser Glu Ser Gly Asn Thr Gln Ala Asp
415 420 425
AAA GGT AAA AAC GGC GGA ACA GAA TTT ACC CGC AAA TTT GAA CAC ACG 1451
Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr Glu Phe Thr Arg Lys Phe Glu His Thr
430 435 440
W O 9St33049 216 7 9 3 ~ PCTtFR95/00701
-39-
CCG GAA AGT GAT AAA AAA GAC GCC CAA GCA GGT ACG CAG ACG AAT GGG 1499
Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln Thr Asn Gly
445 450 455 460
GCG CAA ACC GCT TCA AAT ACG GCA GGT GAT ACC AAT GGC AAA ACA AAA 1547
Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys
465 470 475
ACC TAT GAA GTC GAA GTC TGC TGT TCC AAC CTC AAT TAT CTG AAA TAC 1595
Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr
480 485 490
GGA ATG TTG ACG CGC AAA AAC AGC AAG TCC GCG ATG CAG GCA GGA GGA 1643
Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Gly
495 500 505
AAC AGT AGT CAA GCT GAT GCT AAA ACG GAA CAA GTT GAA CAA AGT ATG 1691
Asn Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met
510 515 520
TTC CTC CAA GGC GAG CGT ACC GAT GAA AAA GAG ATT CCA ACC GAC CAA 1739
Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Thr Asp Gln
525 530 535 540
AAC GTC GTT TAT CGG GGG TCT TGG TAC GGG CAT ATT GCC AAC GGC ACA 1787
Asn Val Val Tyr Arg Gly Ser Trp Tyr Gly His Ile Ala Asn Gly Thr
545 550 555
AGC TGG AGC GGC AAT GCT TCT GAT AAA GAG GGC GGC AAC AGG GCG GAA 1835
Ser Trp Ser Gly Asn Ala Ser Asp Lys Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu
560 565 570
TTT ACT GTG AAT TTT GCC GAT AAA AAA ATT ACC GGC AAG TTA ACC GCT 1883
Phe Thr Val Asn Phe Ala Asp Lys Lys Ile Thr Gly Lys Leu Thr Ala
575 580 585
GAA AAC AGG CAG GCG CAA ACC TTT ACC ATT GAG GGA ATG ATT CAG GGC 1931
Glu Asn Arg Gln Ala Gln Thr Phe Thr Ile Glu Gly Met Ile Gln Gly
590 595 600
AAC GGC TTT GAA GGT ACG GCG AAA ACT GCT GAG TCA GGT TTT GAT CTC 1979
Asn Gly Phe Glu Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Ser Gly Phe Asp Leu
605 610 615 620
GAT CAA AAA AAT ACC ACC CGC ACG CCT AAG GCA TAT ATC ACA GAT GCC 2027
Asp Gln Lys Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala
625 630 635
AAG GTA AAG GGC GGT TTT TAC GGG CCT AAA GCC GAA GAG TTG GGC GGA 2075
Lys Val Lys Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly
640 645 650
TGG TTT GCC TAT CCG GGC GAT AAA CAA ACG GAA AAG GCA ACA GCT ACA 2123
Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp Lys Gln Thr Glu Lys Ala Thr Ala Thr
655 660 665
TCC AGC GAT GGA AAT TCA GCA AGC AGC GCG ACC GTG GTA TTC GGT GCG 2171
Ser Ser Asp Gly Asn Ser Ala Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala
670 675 680
AAA CGC CAA CAG CCT GTG CAA TAAGCACGGT TGCCGAACAA TCAAGAATAA 2222
Lys Arg Gln Gln Pro Val Gln
685 690
WO 9S/33049 2 ~ 6 7 ~ 3 ~ PCT/FR95/00701
- 40 -
GGCTTCAG 2230
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 2:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 711 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
lxi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2:
Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe
-20 -15 -10 -5
eu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser
1 5 10
Val Asp Thr Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser
Ser Glu Lys Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala
Met Arg Leu Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Gly Ala Glu Glu Ser Glu
al Lys Leu Asn Glu Ser Asp Trp Glu Ala Thr Gly Leu Pro Thr Lys
ro Lys Glu Leu Pro Lys Arg Gln Lys Ser Val Ile Glu Lys Val Glu
Thr Asp Gly Asp Ser Asp Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Pro Ser
100 105
Asn His Gln Asn Gly Ser Ala Gly Asn Gly Val Asn Gln Pro Lys Asn
110 115 120
Gln Ala Thr Gly His Glu Asn Phe Gln Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe
125 130 135 140
yr Lys His Ala Ala Ser Glu Lys Asp Phe Ser Asn Lys Lys Ile Lys
145 150 155
er Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Glu Lys Pro Ser Arg
160 165 170
Gln Leu Pro Ala Ser Gly Lys Val Ile Tyr Lys Gly Val Trp His Phe
175 180 185
Val Thr Asp Thr Lys Lys Gly Gln Asp Phe Arg Glu Ile Ile Gln Pro
190 195 200
Ser Lys Lys Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Ser Gly Asp Gly Ser
205 210 215 220
Glu Glu Tyr Ser Asn Lys Asn Glu Ser Thr Leu Lys Asp Asp His Glu
225 230 235
WO 95/33049 2 1~ ~ 9 ~ 6 PCT/FR95/00701
- 41 -
Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Gly Asn Lys Lys
240 245 250
Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Ala Ser Leu Asn Asn Asn Thr
255 260 265
Asn Asn Asp Lys His Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Asp Ala Gln Ile
270 275 280
Thr Gly Asn Arg Phe Asn Gly Thr Ala Thr Ala Thr Asp Lys Lys Glu
285 290 295 300
sn Glu Thr Lys Leu His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser
305 310 315
ly Gly Phe Phe Gly Pro Gln Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu
320 325 330
Ser Asp Asp Gln Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Lys Asp
335 340 345
Lys Leu Glu Asn Gly Ala Ala Ala Ser Gly Ser Thr Gly Ala Ala Ala
350 355 360
Ser Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr
365 370 375 380
Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys Ile Lys Asn
. 385 390 395
eu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met
400 405 410
Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asp Ser Glu Ser Gly Asn Thr Gln Ala Asp
415 420 425
Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr Glu Phe Thr Arg Lys Phe Glu His Thr
430 435 440
Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln Thr Asn Gly
445 450 455 460
la Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys
465 470 475
hr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr
480 485 490
Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Gly
495 500 505
Asn Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met
510 515 520
Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Thr Asp Gln
525 530 535 540
sn Val Val Tyr Arg Gly Ser Trp Tyr Gly His Ile Ala Asn Gly Thr
545 550 555
er Trp Ser Gly Asn Ala Ser Asp Lys Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu
560 565 570
W O 95/33049 ~ ~ ~ 7 9 3 ~ PCT~R95/00701
-42-
Phe Thr Val Asn Phe Ala Asp Lys Lys Ile Thr Gly Lys Leu Thr Ala
575 580 585
Glu Asn Arg Gln Ala Gln Thr Phe Thr Ile Glu Gly Met Ile Gln Gly
590 595 600
Asn Gly Phe Glu Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Ser Gly Phe Asp Leu
605 610 615 620
Asp Gln Lys Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala
625 630 635
Lys Val Lys Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly
640 645 650
Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp Lys Gln Thr Glu Lys Ala Thr Ala Thr
655 660 665
Ser Ser Asp Gly Asn Ser Ala Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala
670 675 680
Lys Arg Gln Gln Pro Val Gln
685 690
t2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 3:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 1808 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: lineaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: IM2394
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: sig_peptide
(B) EMPLACEMENT: 1..60
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: mat peptide
(B) EMPLACEMENT: 61..1797
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 1..1797
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: misc_feature
(B~ EMPLACEMENT: 61..1035
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: misc_feature
(B) EMPLACEMENT: 1036..1386
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: misc_feature
(B) EMPLACEMENT: 1387..1797
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
W0 95/33049 ~ 1 6 7 9 3 ~ PCT/FR95/00701
~ .
-
-43-
(A) NOM/CLE: misc_bindlng
(B) EMPLACEMENT: 46..1050
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 3:
ATG AAC AAT CCA TTG GTA AAT CAG GCT GCT ATG GTG CTG CCT GTG TTT 48
Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe
-20 -15 -10 -5
TTG TTG AGT GCT TGT CTG GGT GGC GGC GGC AGT TTC GAT TTG GAC AGC 96
Leu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser
1 5 10
GTG GAA ACC GTG CAA GAT ATG CAC TCC AAA CCT AAG TAT GAG GAT GAA 144
Val Glu Thr Val Gln Asp Met His Ser Lys Pro Lys Tyr Glu Asp Glu
15 20 25
AAA AGC CAG CCT GAA AGC CAA CAG GAT GTA TCG GAA AAC AGC GGC GCG 192
Lys Ser Gln Pro Glu Ser Gln Gln Asp Val Ser Glu Asn Ser Gly Ala
30 35 40
GCT TAT GGC TTT GCA GTA AAA CTA CCT CGC CGG AAT GCA CAT TTT AAT 240
Ala Tyr Gly Phe Ala Val Lys Leu Pr~ Arg Arg Asn Ala His Phe Asn
45 50 55 60
CCT AAA TAT AAG GAA AAG CAC AAA CCA TTG GGT TCA ATG GAT TGG AAA 288
Pro Lys Tyr Lys Glu Lys His Lys Pro Leu Gly Ser Met Asp Trp Lys
65 70 75
AAA CTG CAA AGA GGA GAA CCA AAT AGT TTT AGT GAG AGG GAT GAA TTG 336
Lys Leu Gln Arg Gly Glu Pro Asn Ser Phe Ser Glu Arg Asp Glu Leu
80 85 90
GAA AAA AAA CGG GGT AGT TCT GAA CTT ATT GAA TCA AAA TGG GAA GAT 384
Glu Lys Lys Arg Gly Ser Ser Glu Leu Ile Glu Ser Lys Trp Glu Asp
95 100 105
GGG CAA AGT CGT GTA GTT GGT TAT ACA AAT TTC ACT TAT GTC CGT TCG 432
Gly Gln Ser Arg Val Val Gly Tyr Thr Asn Phe Thr Tyr Val Arg Ser
110 115 120
GGA TAT GTT TAC CTT AAT AAA AAT AAT ATT GAT ATT AAG AAT AAT ATA 480
Gly Tyr Val Tyr Leu Asn Lys Asn Asn Ile Asp Ile Lys Asn Asn Ile
125 130 135 140
GTT CTT TTT GGA CCT GAC GGA TAT CTT TAC TAT AAA GGG AAA GAA CCT 528
Val Leu Phe Gly Pro Asp Gly Tyr Leu Tyr Tyr Lys Gly Lys Glu Pro
145 150 155
TCC AAG GAG CTG CCA TCG GAA AAG ATA ACT TAT AAA GGT ACT TGG GAT 576
Ser Lys Glu Leu Pro Ser Glu Lys Ile Thr Tyr Lys Gly Thr Trp Asp
160 165 170
TAT GTT ACT GAT GCT ATG GAA AAA CAA AGG TTT GAA GGA TTG GGT AGT 624
Tyr Val Thr Asp Ala Met Glu Lys Gln Arg Phe Glu Gly Leu Gly Ser
175 180 185
GCA GCA GGA GGA GAT AAA TCG GGG GCG TTG TCT GCA TTA GAA GAA GGG 672
Ala Ala Gly Gly Asp Lys Ser Gly Ala Leu Ser Ala Leu Glu Glu Gly
190 195 200
GTA TTG CGT AAT CAG GCA GAG GCA TCA TCC GGT CAT ACC GAT TTT GGT 720
Val Leu Arg Asn Gln Ala Glu Ala Ser Ser Gly His Thr Asp Phe Gly
205 210 215 220
WO 95/33049 ~ 7 ~ '` ` ` PCT/FR95/00701
- 44 -
ATG ACT AGT GAG TTT GAG GTT GAT TTT TCT GAT AAA ACA ATA AAG GGC 768
Met Thr Ser Glu Phe Glu Val Asp Phe Ser Asp Lys Thr Ile Lys Gly
225 230 235
ACA CTT TAT CGT AAC AAC CGT ATT ACT CAA AAT AAT AGT GAA AAC AAA 816
Thr Leu Tyr Arg Asn Asn Arg Ile Thr Gln Asn Asn Ser Glu Asn Lys
240 245 250
CAA ATA AAA ACT ACG CGT TAC ACC ATT CAA GCA ACT CTT CAC GGC AAC 864
Gln Ile Lys Thr Thr Arg Tyr Thr Ile Gln Ala Thr Leu His Gly Asn
255 260 265
CGT TTC AAA GGT AAG GCG TTG GCG GCA GAT AAA GGT GCA ACA AAT GGA 912
Arg Phe Lys Gly Lys Ala Leu Ala Ala Asp Lys Gly Ala Thr Asn Gly
270 275 280
AGT CAT CCC TTT ATT TCC GAC TCC GAC AGT TTG GAA GGC GGA TTT TAC 960
Ser His Pro Phe Ile Ser Asp Ser Asp Ser Leu Glu Gly Gly Phe Tyr
285 290 295 300
GGG CCG AAA GGC GAG GAA CTT GCC GGT AAA TTC TTG AGC AAC GAC AAC 1008
Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Ala Gly Lys Phe Leu Ser Asn Asp Asn
305 310 315
AAA GTT GCA GCG GTG TTT GGT GCG AAG CAG AAA GAT AAG AAG GAT GGG 1056
Lys Val Ala Ala Val Phe Gly Ala Lys Gln Lys Asp Lys Lys Asp Gly
320 325 330
GAA AAC GCG GCA GGG CCT GCA ACG GAA ACC GTG ATA GAT GCA TAC CGT 1104
Glu Asn Ala Ala Gly Pro Ala Thr Glu Thr Val Ile Asp Ala Tyr Arg
335 340 345
ATT ACC GGC GAG GAG TTT AAG AAA GAG CAA ATA GAC AGT TTT GGA GAT 1152
Ile Thr Gly Glu Glu Phe Lys Lys Glu Gln Ile Asp Ser Phe Gly Asp
350 355 360
GTG AAA AAG CTG CTG GTT GAC GGA GTG GAG CTT TCA CTG CTG CCG TCT 1200
Val Lys Lys Leu Leu Val Asp Gly Val Glu Leu Ser Leu Leu Pro Ser
365 370 375 380
GAG GGC AAT AAG GCG G Q TTT CAG CAC GAG ATT GAG CAA AAC GGC GTG 1248
Glu Gly Asn Lys Ala Ala Phe Gln His Glu Ile Glu Gln Asn Gly Val
385 390 395
AAG GCA ACG GTG TGT TGT TCC AAC TTG GAT TAC ATG AGT TTT GGG AAG 1296
Lys Ala Thr Val Cys Cys Ser Asn Leu Asp Tyr Met Ser Phe Gly Lys
400 405 410
CTG TCA AAA GAA AAT AAA GAC GAT ATG TTC CTG CAA GGT GTC CGC ACT 1344
Leu Ser Lys Glu Asn Lys Asp Asp Met Phe Leu Gln Gly Val Arg Thr
415 420 425
CCA GTA TCC GAT GTG GCG GCA AGG ACG GAG GCA AAC GCC AAA TAT CGC 1392
Pro Val Ser Asp Val Ala Ala Arg Thr Glu Ala Asn Ala Lys Tyr Arg
430 435 440
GGT ACT TGG TAC GGA TAT ATT GCC AAC GGC ACA AGC TGG AGC GGC GAA 1440
Gly Thr Trp Tyr Gly Tyr Ile Ala Asn Gly Thr Ser Trp Ser Gly Glu
445 450 455 460
GCC TCC AAT CAG GAA GGT GGT AAT AGG GCA GAG TTT GAC GTG GAT TTT 1488
Ala Ser Asn Gln Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu Phe Asp Val Asp Phe
465 470 475
WO 95/33049 2 ~ G 7 ~ 3 ~ PCT/FR95/00701
- 45 -
TCC ACT AAA AAA ATC AGT GGC ACA CTG ACG GCA AAA GAC CGT ACG TCT 1536Ser Thr Lys Lys Ile Ser Gly Thr Leu Thr Ala Lys Asp Arg Thr Ser
480 485 490
CCT GCG TTT ACT ATT ACT GCC ATG ATT AAG GAC AAC GGT TTT T Q GGT 1584
Pro Ala Phe Thr Ile Thr Ala Met Ile Lys Asp Asn Gly Phe Ser Gly
495 500 505
GTG GCG AAA ACC GGT GAA AAC GGC TTT GCG CTG GAT CCG CAA AAT ACC 1632
Val Ala Lys Thr Gly Glu Asn Gly Phe Ala Leu Asp Pro Gln Asn Thr
510 515 520
GGA AAT TCC CAC TAT ACG CAT ATT GAA GCC ACT GTA TCC GGC GGT TTC 1680
Gly Asn Ser His Tyr Thr His Ile Glu Ala Thr Val Ser Gly Gly Phe
525 530 535 540
TAC GGC AAA AAC GCC ATC GAG ATG GGC GGA TCG TTC TCA TTT CCG GGA 1728
Tyr Gly Lys Asn Ala Ile Glu Met Gly Gly Ser Phe Ser Phe Pro Gly
545 550 555
AAT GCA CCA GAG GGA AAA CAA GAA AAA G Q TCG GTG GTA TTC GGT GCG 1776
Asn Ala Pro Glu Gly Lys Gln Glu Lys Ala Ser Val Val Phe Gly Ala
560 565 570
AAA CGC CAA CAG CTT GTG CAA TAAGCACGGC T 1808
Lys Arg Gln Gln Leu Val Gln
575
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 4:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 599 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 4:
Met Asn Asn Pro Leu Val Asn Gln Ala Ala Met Val Leu Pro Val Phe
-20 -15 -10 -5
eu Leu Ser Ala Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser
1 5 10
Val Glu Thr Val Gln Asp Met His Ser Lys Pro Lys Tyr Glu Asp Glu
Lys Ser Gln Pro Glu Ser Gln Gln Asp Val Ser Glu Asn Ser Gly Ala
Ala Tyr Gly Phe Ala Val Lys Leu Pro Arg Arg Asn Ala His Phe Asn
ro Lys Tyr Lys Glu Lys His Lys Pro Leu Gly Ser Met Asp Trp Lys
ys Leu Gln Arg Gly Glu Pro Asn Ser Phe Ser Glu Arg Asp Glu Leu
lu Lys Lys Arg Gly Ser Ser Glu Leu Ile Glu Ser Lys Trp Glu Asp
100 105
WO 95/33049 . PCT/FR95/00701
2~ 67~
-46-
Gly Gln Ser Arg Val Val Gly Tyr Thr Asn Phe Thr Tyr Val Arg Ser
110 115 120
Gly Tyr Val Tyr Leu Asn Lys Asn Asn Ile Asp Ile Lys Asn Asn Ile
125 130 135 140
Val Leu Phe Gly Pro Asp Gly Tyr Leu Tyr Tyr Lys Gly Lys Glu Pro
145 150 155
Ser Lys Glu Leu Pro Ser Glu Lys Ile Thr Tyr Lys Gly Thr Trp Asp
160 165 170
Tyr Val Thr Asp Ala Met Glu Lys Gln Arg Phe Glu Gly Leu Gly Ser
175 180 185
Ala Ala Gly Gly Asp Lys Ser Gly Ala Leu Ser Ala Leu Glu Glu Gly
190 195 200
Val Leu Arg Asn Gln Ala Glu Ala Ser Ser Gly His Thr Asp Phe Gly
205 210 215 220
Met Thr Ser Glu Phe Glu Val Asp Phe Ser Asp Lys Thr Ile Lys Gly
225 230 235
Thr Leu Tyr Arg Asn Asn Arg Ile Thr Gln Asn Asn Ser Glu Asn Lys
240 245 250
Gln Ile Lys Thr Thr Arg Tyr Thr Ile Gln Ala Thr Leu His Gly Asn
255 260 265
Arg Phe Lys Gly Lys Ala Leu Ala Ala Asp Lys Gly Ala Thr Asn Gly
270 275 280
Ser His Pro Phe Ile Ser Asp Ser Asp Ser Leu Glu Gly Gly Phe Tyr
285 290 295 300
Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Ala Gly Lys Phe Leu Ser Asn Asp Asn
305 310 315
Lys Val Ala Ala Val Phe Gly Ala Lys Gln Lys Asp Lys Lys Asp Gly
320 325 330
Glu Asn Ala Ala Gly Pro Ala Thr Glu Thr Val Ile Asp Ala Tyr Arg
335 340 345
Ile Thr Gly Glu Glu Phe Lys Lys Glu Gln Ile Asp Ser Phe Gly Asp
350 355 360
Val Lys Lys Leu Leu Val Asp Gly Val Glu Leu Ser Leu Leu Pro Ser
365 370 375 380
Glu Gly Asn Lys Ala Ala Phe Gln His Glu Ile Glu Gln Asn Gly Val
385 390 395
Lys Ala Thr Val Cys Cys Ser Asn Leu Asp Tyr Met Ser Phe Gly Lys
400 405 410
Leu Ser Lys Glu Asn Lys Asp Asp Met Phe Leu Gln Gly Val Arq Thr
415 420 425
Pro Val Ser Asp Val Ala Ala Arg Thr Glu Ala Asn Ala Lys Tyr Arg
430 435 440
WO 95/33049 216 ~ 9 3 ~ PCT/FR95/00701
- 47 -
Gly Thr Trp Tyr Gly Tyr Ile Ala Asn Gly Thr Ser Trp Ser Gly Glu
445 450 455 460
Ala Ser Asn Gln Glu Gly Gly Asn Arg Ala Glu Phe Asp Val Asp Phe
465 470 475
Ser Thr Lys Lys Ile Ser Gly Thr Leu Thr Ala Lys Asp Arg Thr Ser
480 485 490
Pro Ala Phe Thr Ile Thr Ala Met Ile Lys Asp Asn Gly Phe Ser Gly
495 500 505
Val Ala Lys Thr Gly Glu Asn Gly Phe Ala Leu Asp Pro Gln Asn Thr
510 515 520
Gly Asn Ser His Tyr Thr His Ile Glu Ala Thr Val Ser Gly Gly Phe
525 530 535 540
Tyr Gly Lys Asn Ala Ile Glu Met Gly Gly Ser Phe Ser Phe Pro Gly
545 550 555
Asn Ala Pro Glu Gly Lys Gln Glu Lys Ala Ser Val Val Phe Gly Ala
560 565 570
Lys Arg Gln Gln Leu Val Gln
575
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 5:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 2255 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: M978
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: mat_peptide
(B) EMPLACEMENT: 1..2115
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 1..2115
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 5:
TGT CTG GGT GGC GGC GGC ACG TTC GAT CTT GAT TCT GTC GAT ACC GAA 48
Cys Leu Gly Gly Gly Gly Thr Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr Glu
1 5 10 15
GCC CCG CGT CCC GCC CCA AAA TAT CAA GAT GTT TCT TCC GAA AAA CCG 96
Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser Ser Glu Lys Pro
20 25 30
CAA GCC CAA AAA GAC CAA GGC GGA TAC GGT TTT GCA ATG CGC CTC AAG 144
Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu Lys
WO95/33049 2 ~ PCT/FR95/00701
- 48 -
CGG CGG AAT TGG CAT CCG CAG GCA AAT CCT AAA GAA GAT GAG ATA AAA 192
Arg Arg Asn Trp His Pro Gln Ala Asn Pro Lys Glu Asp Glu Ile Lys
50 55 60
CTT TCT GAA AAT GAT TGG GAG GCG ACA GGA TTG CCA GGC AAT CCC AAA 240
Leu Ser Glu Asn Asp Trp Glu Ala Thr Gly Leu Pro Gly Asn Pro Lys
65 70 75 80
AAC TTA CCT GAG CGA CAG AAA TCG GTT ATT GAA AAA GTA AAA ACA GGC 288
Asn Leu Pro Glu Arg Gln Lys Ser Val Ile Glu Lys Val Lys Thr Gly
85 90 95
AGC GAC AGC AAT ATT TAT TCT TCC CCC TAT CTC ACG CAA TCA AAC CAT 336
Ser Asp Ser Asn Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Gln Ser Asn His
100 105 110
CAA AAC GGC AGT GCA AAC CAA CCA AAA AAT GAA GTA AAA GAT TAT AAA 384
Gln Asn Gly Ser Ala Asn Gln Pro Lys Asn Glu Val Lys Asp Tyr Lys
115 120 125
GAG TTC AAA TAT GTT TAT TCC GGT TGG TTT TAC AAA CAC GCT AAA CTC 432
Glu Phe Lys Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe Tyr Lys His Ala Lys Leu
130 135 140
GAA ATC ATA AAA GAA AAC AAC TTA ATT AAG GGT GCA AAG AGC GGC GAC 480
Glu Ile Ile Lys Glu Asn Asn Leu Ile Lys Gly Ala Lys Ser Gly Asp
145 150 155 160
GAC GGT TAT ATC TTT TAT CAC GGT GAA AAA CCT TCC CGA CAA CTT CCC 528
Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Glu Lys Pro Ser Arg Gln Leu Pro
165 170 175
GTT TCT GGA GAA GTT ACC TAC AAA GGC GTA TGG CAT TTT GTA ACC GAT 576
Val Ser Gly Glu Val Thr Tyr Lys Gly Val Trp His Phe Val Thr Asp
180 185 190
ACG AAA CAG GGA CAA AAA TTT AAC GAT ATT CTT GGA ACC TCA AAA AAA 624
Thr Lys Gln Gly Gln Lys Phe Asn Asp Ile Leu Gly Thr Ser Lys Lys
195 200 205
CAA GGC GAC AGG TAT AGC GGA TTT CCG GGT GAT GAC GGC GAA GAA TAT 672
Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Pro Gly Asp Asp Gly Glu Glu Tyr
210 215 220
TCC AAT AAA AAT GAA GCG ACT TTA CAA GGC AGT CAA GAG GGT TAT GGT 720
Ser Asn Lys Asn Glu Ala Thr Leu Gln Gly Ser Gln Glu Gly Tyr Gly
225 230 235 240
TTT ACC TCA AAT TTA AAA GTG GAT TTC AAT AAG AAA AAA TTG ACG GGT 768
Phe Thr Ser Asn Leu Lys Val Asp Phe Asn Lys Lys Lys Leu Thr Gly
245 250 255
GAA TTG ATA CGC AAT AAT AGA GTT ACA AAC GCT ACT GCT AAC GAT AAA 816
Glu Leu Ile Arg Asn Asn Arg Val Thr Asn Ala Thr Ala Asn Asp Lys
260 265 270
TAC ACC ACC CAA TAT TAC AGC CTT GAG GCT CAA GTA ACA GGC AAC CGC 864
Tyr Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Glu Ala Gln Val Thr Gly Asn Arg
275 280 285
TTC AAC GGC AAG GCA ACG GCA ACC GAC AAA CCT GGC ACT GGA GAA ACC 912
Phe Asn Gly Lys Ala Thr Ala Thr Asp Lys Pro Gly Thr Gly Glu Thr
290 295 300
WO 9S/33049 2 ~ 6 7 ~ 3 ~ PCT/FR9S/00701
- 49 -
AAA CAA CAT CCC TTT GTT TCC GAC TCG TCT TCT TTG AGC GGC GGC TTT 960Lys Gln His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser Gly Gly Phe
305 310 315 320
TTC GGC CCG AAG GGT GAG GAA TTG GGT TTC CGC TTT TTG AGC AAC GAT 1008
Phe Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu Ser Asn Asp
325 330 335
CAA AAA GTT GCC GTT GTC GGC AGC GCG AAA ACC CAA GAC AAA GCC GCA 1056
Gln Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Gln Asp Lys Ala Ala
340 345 350
AAT GGC AAT ACT GCG GCG GCT TCA GGC GGC ACA GAT GCG GCA GCA TCA 1104
Asn Gly Asn Thr Ala Ala Ala Ser Gly Gly Thr Asp Ala Ala Ala Ser
355 360 365
AAC GGT GCG GCA GGC ACG TCG TCT GAA AAC AGT AAG CTG ACC ACG GTT 1152
Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr Val
370 375 380
TTG GAT GCG GTT GAA TTG ACA CTA AAC GAC AAG AAA ATC AAA AAT CTC 1200
Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys Ile Lys Asn Leu
385 390 395 400
GAC AAC TTC AGC AAT GCC GCC CAA CTG GTT GTC GAC GGC ATT ATG ATT 1248
Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met Ile
405 410 415
CCG CTC CTG CCC GAG ACT TCC GAA AGT GGG AGC AAT CAG GCA GAT AAA 1296
Pro Leu Leu Pro Glu Thr Ser Glu Ser Gly Ser Asn Gln Ala Asp Lys
420 425 430
GGT AAA AAA GGT AAA AAC GGT AAA AAC GGC GGA ACA GAC TTT ACC TAC 1344
Gly Lys Lys Gly Lys Asn Gly Lys Asn Gly Gly Thr Asp Phe Thr Tyr
435 440 445
AAA ACA ACC TAC ACG CCG AAA AAC GAT GAC AAA GAT ACC AAA GCC CAA 1392
Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp Lys Asp Thr Lys Ala Gln
450 455 460
ACA GGT GCG GCA GGC TCT AGC GGC GCA CAA ACC GAT TTG GGT AAG GCG 1440
Thr Gly Ala Ala Gly Ser Ser Gly Ala Gln Thr Asp Leu Gly Lys Ala
465 470 475 480
GAC GTT AAC GGC GGT AAG GCA GAA ACA AAA ACC TAT GAA GTC GAA GTC 1488
Asp Val Asn Gly Gly Lys Ala Glu Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val
485 490 495
TGC TGT TCC AAC CTC AAT TAT CTG AAA TAC GGA ATG TTG ACG CGT AAA 1536
Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Me~ Leu Thr Arg Lys
500 505 510
AAC AGC AAG TCC GCG ATG CAG GCA GGA GGA AAC AGT AGT CAA GCT GAT 1584
Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Gly Asn Ser Ser Gln Ala Asp
515 520 525
GCT AAA ACG GAA CAA GTT GAA CAA AGT ATG TTC CTC CAA GGC GAG CGT 1632
Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg
530 535 540
ACC GAT GAA AAA GAG ATT CCA AAC GAC CAA AAC GTC GTT TAT CGG GGG 1680
Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Asn Asp Gln Asn Val Val Tyr Arg Gly
545 550 555 560
WO 95/33049 2 ~ ~ 7 9 3 ~ PCT/1i~95100701
- 50 -
TCT TGG TAC GGG CAT ATT GCC AGC AGC ACA AGC TGG AGC GGC AAT GCT 1728
Ser Trp Tyr Gly His Ile Ala Ser Ser Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala
565 570 575
TCC AAT GCA ACG AGT GGC AAC AGG GCG GAA TTT ACT GTG AAT TTC GAT 1776
Ser Asn Ala Thr Ser Gly Asn Arg Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Asp
580 585 590
ACG AAA AAA ATT AAC GGC ACG TTA ACC GCT GAA AAC AGG CAG GAG GCA 1824
Thr Lys Lys Ile Asn Gly Thr Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gln Glu Ala
595 600 605
ACC TTT ACC ATT GAT GGT AAG ATT GAG GGC AAC GGT TTT TCC GGT ACG 1872
Thr Phe Thr Ile Asp Gly Lys Ile Glu Gly Asn Gly Phe Ser Gly Thr
610 615 620
GCA AAA ACT GCT GAC TTA GGT TTT GAT CTC GAT CAA AGC AAT ACC ACC 1920
Ala Lys Thr Ala Asp Leu Gly Phe Asp Leu Asp Gln Ser Asn Thr Thr
625 630 635 640
GGC ACG CCT AAG GCA TAT ATC ACA GAT GCC AAG GTG CAG GGC GGT TTT 1968
Gly Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala Lys Val Gln Gly Gly Phe
645 650 655
TAC GGG CCT AAA GCC GAA GAG TTG GGC GGA TGG TTT GCC TAT CCG GGC 2016
Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly
660 665 670
GAT AAA CAA ACG GAA AAG GCA ACG GTT GCA TCC GGC GAT GGA AAT TCA 2064
Asp Lys Gln Thr Glu Lys Ala Thr Val Ala Ser Gly Asp Gly Asn Ser
675 680 685
GCA AGC AGC GCG ACC GTG GTA TTC GGT GCG AAA CGC CAA CAG CCT GTG 2112
Ala Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Gln Pro Val
690 695 700
CAA TAACTAAATG AA~ ~rG GGTGGCGGCG GCACGTTCGA TCTTGATTCT 2165
Gln
705
GTCGATACCG AAGCCCCGCG TCCCGCCCCA AAATATCAAG AT~~ L~C CGAAAAACCG 2225
CAAGCCCAAA AAGACCAAGG CGGATACGGT 2255
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 6:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 705 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 6:
Cys Leu Gly Gly Gly Gly Thr Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr Glu
1 5 10 15
Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser Ser Glu Lys Pro
Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu Lys
~l~7~3rj
WO 95/33049 PCT/~95100701
-51-
Arg Arg Asn Trp His Pro Gln Ala Asn Pro Lys Glu Asp Glu Ile Lys
Leu Ser Glu Asn Asp Trp Glu Ala Thr Gly Leu Pro Gly Asn Pro Lys
Asn Leu Pro Glu Arg Gln Lys Ser Val Ile Glu Lys Val Lys Thr Gly
Ser Asp Ser Asn Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Gln Ser Asn His
100 105 110
Gln Asn Gly Ser Ala Asn Gln Pro Lys Asn Glu Val Lys Asp Tyr Lys
115 120 125
Glu Phe Lys Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe Tyr Lys His Ala Lys Leu
130 135 140
Glu Ile Ile Lys Glu Asn Asn Leu Ile Lys Gly Ala Lys Ser Gly Asp
145 150 155 160
Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Glu Lys Pro Ser Arg Gln Leu Pro
165 170 175
Val Ser Gly Glu Val Thr Tyr Lys Gly Val Trp His Phe Val Thr Asp
180 185 190
Thr Lys Gln Gly Gln Lys Phe Asn Asp Ile Leu Gly Thr Ser Lys Lys
l9S 200 205
Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Pro Gly Asp Asp Gly Glu Glu Tyr
210 215 220
Ser Asn Lys Asn Glu Ala Thr Leu Gln Gly Ser Gln Glu Gly Tyr Gly
225 230 235 240
Phe Thr Ser Asn Leu Lys Val Asp Phe Asn Lys Lys Lys Leu Thr Gly
245 250 255
Glu Leu Ile Arg Asn Asn Arg Val Thr Asn Ala Thr Ala Asn Asp Lys
260 265 270
Tyr Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Glu Ala Gln Val Thr Gly Asn Arg
275 280 285
Phe Asn Gly Lys Ala Thr Ala Thr Asp Lys Pro Gly Thr Gly Glu Thr
290 295 300
Lys Gln His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser Gly Gly Phe
305 310 315 320
Phe Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu Ser Asn Asp
325 330 335
Gln Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Gln Asp Lys Ala Ala
340 345 350
Asn Gly Asn Thr Ala Ala Ala Ser Gly Gly Thr Asp Ala Ala Ala Ser
355 360 365
Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr Val
370 375 380
~ ~7~36
W O 95/33049 ; -52- PCTA~R95/0070
Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys Ile Lys Asn Leu
385 390 395 400
Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met Ile
405 410 415
ro Leu Leu Pro Glu Thr Ser Glu Ser Gly Ser Asn Gln Ala Asp Lys
420 425 430
ly Lys Lys Gly Lys Asn Gly Lys Asn Gly Gly Thr Asp Phe Thr Tyr
435 440 445
Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp Lys Asp Thr Lys Ala Gln
450 455 460
Thr Gly Ala Ala Gly Ser Ser Gly Ala Gln Thr Asp Leu Gly Lys Ala
465 470 475 480
sp Val Asn Gly Gly Lys Ala Glu Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val
485 490 495
ys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys
500 505 510
sn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Gly Asn Ser Ser Gln Ala Asp
515 520 525
Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg
530 535 540
Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Asn Asp Gln Asn Val Val Tyr Arg Gly
545 550 555 560
er Trp Tyr Gly His Ile Ala Ser Ser Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala
565 570 575
er Asn Ala Thr Ser Gly Asn Arg Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Asp
580 585 590
hr Lys Lys Ile Asn Gly Thr Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gln Glu Ala
595 600 605
Thr Phe Thr Ile Asp Gly Lys Ile Glu Gly Asn Gly Phe Ser Gly Thr
610 615 620
Ala Lys Thr Ala Asp Leu Gly Phe Asp Leu Asp Gln Ser Asn Thr Thr
625 630 635 640
ly Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr Asp Ala Lys Val Gln Gly Gly Phe
645 650 655
yr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly
660 665 670
sp Lys Gln Thr Glu Lys Ala Thr Val Ala Ser Gly Asp Gly Asn Ser
675 680 685
Ala Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Gln Pro Val
690 695 700
Gln
705
WO 95/33049 21~ ~ ~ 3 ~ PCT/FR~5/00701
- 53 -
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 7:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 2114 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: 6940
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: mat_peptide
(B) EMPLACEMENT: 1..2079
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 1..2079
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 7:
TGT TTG GGT GGC GGC GGC ACG TTC GAT CTT GAT TCT GTC GAT ACC GAA 48
Cys Leu Gly Gly Gly Gly Thr Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr Glu
1 5 10 15
GCC CCG CGT CCC GAC CCA AAG TAT CAA GAT GTT TCT TCC GAA AAA CCG 96
Ala Pro Arg Pro Asp Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser Ser Glu Lys Pro
20 25 30
CAA GCC CAA AAA GAC CAA GGC GGA TAC GGT TTT GCG ATG AGG TTG AAA 144
Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu Lys
35 40 45
CGG AGG AAT TGG TAT TCC GCA GCA AAA GAA GAC GAG GTT AAA CTG AAC 192
Arg Arg Asn Trp Tyr Ser Ala Ala Lys Glu Asp Glu Val Lys Leu Asn
50 55 60
GAG AGT GAT TGG GAG ACG ACA GGA TTG CCG ACA GAA CCC AAG AAA CTG 240
Glu Ser Asp Trp Glu Thr Thr Gly Leu Pro Thr Glu Pro Lys Lys Leu
65 70 75 80
CCA TTA AAA CAA GAA TCC GTC ATT TCA AAA GTA CAA GCA AAC AAT GGC 288
Pro Leu Lys Gln Glu Ser Val Ile Ser Lys Val Gln Ala Asn Asn Gly
85 90 95
GAC AAC AAT ATT TAC ACT TCC CCC TAT CTC ACG CAA TCA AAC CAT CAA 336
Asp Asn Asn Ile Tyr Thr Ser Pro Tyr Leu Thr Gln Ser Asn His Gln
100 105 110
AAT AGC AGC ATT AAT GGC GGT GCA AAC CTG CCA AAA AAC GAA GTA ACA 384
Asn Ser Ser Ile Asn Gly Gly Ala Asn Leu Pro Lys Asn Glu Val Thr
115 120 125
AAT TAT AAA GAT TTC AAA TAT GTT TAT TCC GGC TGG TTT TAT AAA CAT 432
Asn Tyr Lys Asp Phe Lys Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe Tyr Lys His
130 135 140
GCT AAA AAC GAA ATC ATA AGA GAA AAC AGC TCA ATT AAG GGT GCA AAG 480
Ala Lys Asn Glu Ile Ile Arg Glu Asn Ser Ser Ile Lys Gly Ala Lys
145 150 155 160
WO 9S/33049 2 1~ 7 ~ 3 ~ PCT/FR95/00701
- 54-
AAC GGC GAC GAC GGC TAT ATC TTT TAT CAC GGC AAA GAA CCT TCC CGA 528
Asn Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Lys Glu Pro Ser Arg
165 170 175
CAA CTT CCC GCT TCT GGA ACA GTT ACC TAT AAA GGT GTG TGG CAT TTT 576
Gln Leu Pro Ala Ser Gly Thr Val Thr Tyr Lys Gly Val Trp His Phe
180 185 190
GCG ACC GAT GTC AAA AAA TCC CAA AAT TTT CGC GAT ATT ATC CAG CCT 624
Ala Thr Asp Val Lys Lys Ser Gln Asn Phe Arg Asp Ile Ile Gln Pro
195 200 205
TCG AAA AAA CAA GGC GAC AGG TAT AGC GGA TTT TCG GGC GAT GAT GAT 672
Ser Lys Lys Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Ser Gly Asp Asp Asp
210 215 220
GAA CAA TAT TCT AAT AAA AAC GAA TCC ATG CTG AAA GAT GGT CAA GAG 720
Glu Gln Tyr Ser Asn Lys Asn Glu Ser Met Leu Lys Asp Gly Gln Glu
225 230 235 240
GGT TAT GGT TTT ACC TCG AAT TTA GAA GTG GAT TTC GGC AGT AAA AAA 768
Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Gly Ser Lys Lys
245 250 255
TTG ACG GGT AAA TTA ATA CGC AAT AAT AGA GTT ACA AAC GCT CCT ACT 816
Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Arg Val Thr Asn Ala Pro Thr
260 265 270
AAC GAT AAA TAC ACC ACC CAA TAC TAC AGC CTT GAT GCC CAA ATA ACA 864
Asn Asp Lys Tyr Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Asp Ala Gln Ile Thr
275 280 285
GGC AAC CGC TTC AAC GGT AAG GCG ATA CGG ACC GAC AAA CCC GAC ACT 912
Gly Asn Arg Phe Asn Gly Lys Ala Ile Arg Thr Asp Lys Pro Asp Thr
290 295 300
GGA GGA ACC AAA CTA CAT CCC TTT GTT TCC GAC TCG TCT TCT TTG AGC 960
Gly Gly Thr Lys Leu His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser
305 310 315 320
GGC GGC TTT TTC GGT CCG AAG GGT GAG GAA TTG GGT TTC CGC TTT TTG 1008
Gly Gly Phe Phe Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu
325 330 335
AGC GAC GAT AAA AAA GTT GCG GTT GTC GGC AGC GCG AAA ACC AAA GAC 1056
Ser Asp Asp Lys Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Lys Asp
340 345 350
AAA ACG GAA AAT GGC GCG GTG GCT TCA GGC GGC ACA GAT GCG GCA GCA 1104
Lys Thr Glu Asn Gly Ala Val Ala Ser Gly Gly Thr Asp Ala Ala Ala
355 360 365
TCA AAC GGT GCG GCA GGC ACG TCG TCT GAA AAC AGT AAG CTG ACC ACG 1152
Ser Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr
370 375 380
GTT TTG GAT GCG GTC GAG CTG AAA TTG GGC GAT AAG GAA GTC CAA AAG 1200
Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Leu Gly Asp Lys Glu Val Gln Lys
385 390 395 400
CTC GAC AAC TTC AGC AAC GCC GCC CAA CTG GTT GTC GAC GGC ATT ATG 1248
Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met
405 410 41S
2~793 Y~
WO 95/33049 PCT/FR95100701
.
-55-
ATT CCG CTC TTG CCC GAG GCT TCC GAA AGT GGG AAC AAT CAA GCC AAT 1296
Ile Pro Leu Leu Pro Glu Ala Ser Glu Ser Gly Asn Asn Gln Ala Asn
420 425 430
CAA GGT ACA AAT GGC GGA ACA GCC TTT ACC CGC AAA TTT GAC CAC ACG 1344
Gln Gly Thr Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe Asp His Thr
435 440 445
CCG GAA AGT GAT AAA AAA GAC GCC CAA GCA GGT ACG CAG ACG AAT GGG 1392
Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln Thr Asn Gly
450 455 460
GCG CAA ACC GCT TCA AAT ACG GCA GGT GAT ACC AAT GGC AAA ACA AAA 1440
Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys
465 470 475 480
ACC TAT GAA GTC GAA GTC TGC TGT TCC AAC CTC AAT TAT CTG AAA TAC 1488
Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr
485 490 495
GGA ATG TTG ACG CGC AAA AAC AGC AAG TCC GCG ATG CAG GCA GGA GAA 1536
Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Glu
500 505 510
AGC AGT AGT CAA GCT GAT GCT AAA ACG GAA CAA GTT GAA CAA AGT ATG 1584
Ser Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met
515 520 525
TTC CTC CAA GGC GAG CGC ACC GAT GAA AAA GAG ATT CCA AGC GAG CAA 1632
Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Ser Glu Gln
530 535 540
AAC ATC GTT TAT CGG GGG TCT TGG TAC GGA TAT ATT GCC AAC GAC AAA 1680
Asn Ile Val Tyr Arg Gly Ser Trp Tyr Gly Tyr Ile Ala Asn Asp Lys
545 550 555 560
AGC ACA AGC TGG AGC GGC AAT GCT TCC AAT GCA ACG AGT GGC AAC AGG 1728
Ser Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala Ser Asn Ala Thr Ser Gly Asn Arg
565 570 575
GCG GAA TTT ACT GTG AAT TTT GCC GAT AAA AAA ATT ACT GGT ACG TTA 1776
Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Ala Asp Lys Lys Ile Thr Gly Thr Leu
580 585 590
ACC GCT GAC AAC AGG CAG GAG GCA ACC TTT ACC ATT GAT GGT AAT ATT 1824
Thr Ala Asp Asn Arg Gln Glu Ala Thr Phe Thr Ile Asp Gly Asn Ile
595 600 605
AAG GAC AAC GGC TTT GAA GGT ACG GCG AAA ACT GCT GAG TCA GGT TTT 1872
Lys Asp Asn Gly Phe Glu Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Ser Gly Phe
610 615 620
GAT CTC GAT CAA AGC AAT ACC ACC CGC ACG CCT AAG GCA TAT ATC ACA 1920
Asp Leu Asp Gln Ser Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr
625 630 635 640
GAT GCC AAG GTG CAG GGC GGT TTT TAC GGG CCC AAA GCC GAA GAG TTG 1968
Asp Ala Lys Val Gln Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu
645 650 655
GGC GGA TGG TTT GCC TAT CCG GGC GAT AAA CAA ACG AAA AAT GCA ACA 2016
Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp Lys Gln Thr Lys Asn Ala Thr
660 665 670
WO 95/33049 2 ~ ~ 7 ~ ~ g - - PCT/FR95/00701
- 56 -
AAT GCA TCC GGC AAT AGC AGT GCA ACT GTC GTA TTC GGT GCG AAA CGC 2064Asn Ala Ser Gly Asn Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg
675 680 685
CAA CAG CCT GTG CGA TAACGCAAGC CCAAAAAGAC CAAGGCGGAT ACGGT 2114
Gln Gln Pro Val Arg
690
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 8:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 693 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 8:
Cys Leu Gly Gly Gly Gly Thr Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr Glu
1 5 10 15
Ala Pro Arg Pro Asp Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser Ser Glu Lys Pro
20 25 30
Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu Lys
35 40 45
Arg Arg Asn Trp Tyr Ser Ala Ala Lys Glu Asp Glu Val Lys Leu Asn
50 55 60
Glu Ser Asp Trp Glu Thr Thr Gly Leu Pro Thr Glu Pro Lys Lys Leu
65 70 75 80
Pro Leu Lys Gln Glu Ser Val Ile Ser Lys Val Gln Ala Asn Asn Gly
85 90 95
Asp Asn Asn Ile Tyr Thr Ser Pro Tyr Leu Thr Gln Ser Asn His Gln
100 105 110
Asn Ser Ser Ile Asn Gly Gly Ala Asn Leu Pro Lys Asn Glu Val Thr
115 120 125
Asn Tyr Lys Asp Phe Lys Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe Tyr Lys His
130 135 140
Ala Lys Asn Glu Ile Ile Arg Glu Asn Ser Ser lle Lys Gly Ala Lys
145 150 155 160
Asn Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Lys Glu Pro Ser Arg
165 170 175
Gln Leu Pro Ala Ser Gly Thr Val Thr Tyr Lys Gly Val Trp His Phe
180 185 190
Ala Thr Asp Val Lys Lys Ser Gln Asn Phe Arg Asp Ile Ile Gln Pro
195 200 205
Ser Lys Lys Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Ser Gly Asp Asp Asp
210 215 220
Glu Gln Tyr Ser Asn Lys Asn Glu Ser Met Leu Lys Asp Gly Gln Glu
225 230 235 240
W 095/33049 PCTAFR95/00701
2167~
Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Gly Ser Lys Lys
245 250 255
Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Arg Val Thr Asn Ala Pro Thr
260 265 270
Asn Asp Lys Tyr Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Asp Ala Gln Ile Thr
275 280 285
Gly Asn Arg Phe Asn Gly Lys Ala Ile Arg Thr Asp Lys Pro Asp Thr
290 295 300
Gly Gly Thr Lys Leu His Pro Phe Val Ser Asp Ser Ser Ser Leu Ser
305 310 315 320
Gly Gly Phe Phe Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu
325 330 335
Ser Asp Asp Lys Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala Lys Thr Lys Asp
340 345 350
Lys Thr Glu Asn Gly Ala Val Ala Ser Gly Gly Thr Asp Ala Ala Ala
355 360 365
Ser Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr
370 375 380
Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Leu Gly Asp Lys Glu Val Gln Lys
385 390 395 400
Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly Ile Met
405 410 415
Ile Pro Leu Leu Pro Glu Ala Ser Glu Ser Gly Asn Asn Gln Ala Asn
420 425 430
Gln Gly Thr Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe Asp His Thr
435 440 445
Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln Thr Asn Gly
450 455 460
Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys Thr Lys
465 470 475 480
Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr
485 490 495
Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Glu
500 505 510
Ser Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met
515 520 525
Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Ser Glu Gln
530 535 540
Asn Ile Val Tyr Arg Gly Ser Trp Tyr Gly Tyr Ile Ala Asn Asp Lys
545 550 555 560
Ser Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala Ser Asn Ala Thr Ser Gly Asn Arg
565 570 575
W O 95/33049 21 6 ~ ~ 3 ~ PCT/FR95/00701
,t ~- ~
-58-
Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Ala Asp Lys Lys Ile Thr Gly Thr Leu
580 585 590
Thr Ala Asp Asn Arg Gln Glu Ala Thr Phe Thr Ile Asp Gly Asn Ile
595 600 605
Lys Asp Asn Gly Phe Glu Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Ser Gly Phe
610 615 620
Asp Leu Asp Gln Ser Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr Ile Thr
625 630 635 640
Asp Ala Lys Val Gln Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu Glu Leu
645 650 655
Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Pro Gly Asp Lys Gln Thr Lys Asn Ala Thr
660 665 670
Asn Ala Ser Gly Asn Ser Ser Ala Thr Val Val Phe Gly Ala Lys Arg
675 680 685
Gln Gln Pro Val Arg
690
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 9:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 2114 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: S3032
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: mat_peptide
(B) EMPLACEMENT: 1..2097
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 1..2097
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 9:
TGT TTG GGC GGA GGC GGC GGC AGT TTC GAT CTT GAT TCT GTC GAT ACC 48
Cys Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr
1 5 10 15
GAA GCC CCG CGT CCC GCG CCA AAG TAT CAA GAT GTT TCT TCC GAA AAA 96
Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser Ser Glu Lys
20 25 30
CCG CAA GCC CAA AAA GAC CAA GGC GGA TAC GGT TTT GCG ATG AGG TTG 144
Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu
35 40 45
AAA CGG AGG AAT TGG TAT CCG TCG GCA AAA GAA AAC GAG GTT AAA CTG 192
Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Ser Ala Lys Glu Asn Glu Val Lys Leu
WO 95/33049 2 ~ ~ 7 9 3 ~ PCT/FR95/00701
- 59-
AAT GAG AGT GAT TGG GAG ACG ACA GGA TTG CCA AGC AAT CCC AAA AAC 240
Asn Glu Ser Asp Trp Glu Thr Thr Gly Leu Pro Ser Asn Pro Lys Asn
65 70 75 80
TTA CCT GAG CGA CAG AAA TCG GTT ATT GAT CAA GTA GAA ACA GAT GGC 288
Leu Pro Glu Arg Gln Lys Ser Val Ile Asp Gln Val Glu Thr Asp Gly
85 90 95
GAC AGC AAT AAC AGC AAT ATT TAT TCT TCC CCC TAT CTC ACG CAA TCA 336
Asp Ser Asn Asn Ser Asn Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Gln Ser
100 105 110
AAC CAT CAA AAC GGC AAC ACT GGC AAC GGT GTA AAC CAA CCA AAA AAC 384
Asn His Gln Asn Gly Asn Thr Gly Asn Gly Val Asn Gln Pro Lys Asn
115 120 125
GAA GTA ACA GAT TAC AAA AAT TTT AAA TAT GTT TAT TCC GGC TGG TTT 432
Glu Val Thr Asp Tyr Lys Asn Phe Lys Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe
130 135 140
TAC AAA CAC GCC AAA CGA GAG GTT AAC TTA GCG GTG GAA CCT AAA ATT 480
Tyr Lys His Ala Lys Arg Glu Val Asn Leu Ala Val Glu Pro Lys Ile
145 150 155 160
GCA AAA AAC GGC GAC GAC GGT TAT ATC TTC TAT CAC GGT AAA GAC CCT 528
Ala Lys Asn Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Lys Asp Pro
165 170 175
TCC CGA CAA CTT CCC GCT TCT GGA AAA ATT ACC TAT AAA GGT GTG TGG 576
Ser Arg Gln Leu Pro Ala Ser Gly Lys Ile Thr Tyr Lys Gly Val Trp
180 185 190
QT TTT GCG ACC GAT ACA AAA AGG GGT CAA AAA TTT CGT GAA ATT ATC 624
His Phe Ala Thr Asp Thr Ly~ Arg Gly Gln Lys Phe Arg Glu Ile Ile
195 200 205
CAA CCT TCA AAA AAT CAA GGC GAC AGA TAT AGC GGA TTT TCG GGT GAT 672
Gln Pro Ser Lys Asn Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Ser Gly Asp
210 215 220
GAT GAT GAA CAA TAT TCT AAT AAA AAC GAA TCC ATG CTG AAA GAT GGT 720
Asp Asp Glu Gln Tyr Ser Asn Lys Asn Glu Ser Met Leu Lys Asp Gly
225 230 235 240
CAT GAA GGT TAT GGT TTT GCC TCG AAT TTA GAA GTG GAT TTC GAC AAT 768
His Glu Gly Tyr Gly Phe Ala Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Asp Asn
245 250 255
AAA AAA TTG ACG GGT AAA TTA ATA CGC AAT AAT GCG AAC CAA AAT AAT 816
Lys Lys Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Ala Asn Gln Asn Asn
260 265 270
AAT ACT AAT AAT GAC AAA CAC ACC ACC CAA TAC TAC AGC CTT GAT GCG 864
Asn Thr Asn Asn Asp Lys His Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Asp Ala
275 280 285
ACG CTT AAG GGA AAC CGC TTC AGC GGA AAA GCG GAA GCA ACC GAC AAA 912
Thr Leu Lys Gly Asn Arg Phe Ser Gly Lys Ala Glu Ala Thr Asp Lys
290 295 300
CCC AAA AAC GAC GGC GAA ACC AAG GAA CAT CCC TTT GTT TCC GAC TCG 960
Pro Lys Asn Asp Gly Glu Thr Lys Glu His Pro Phe Val Ser Asp Ser
305 310 315 320
WO 9S/33049 ~ t ~ ~ ~ 3 ~ PCT/FR95100701
- 60 -
TCT TCT TTG AGC GGC GGC TTT TTC GGC CCG CAG GGT GAG GAA TTG GGT 1008
Ser Ser Leu Ser Gly Gly Phc Phe Gly Pro Gln Gly Glu Glu Leu Gly
325 330 335
TTC CGC TTT TTG AGC AAC GAT CAA AAA GTT GCC GTT GTC GGC AGC GCG 1056
Phe Arg Phe Leu Ser Asn Asp Gln Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala
390 345 350
AAA ACC AAA GAC AAA CCC GCA AAT GGC AAT ACT GCG GAG GCT T Q GGC 1104
Lys Thr Lys Asp Lys Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ala Glu Ala Ser Gly
355 360 365
GGC ACA GAT GCG G Q GCA TCG GGC GGT GCG GCA GGC ACG TCG TCT GAA 1152
Gly Thr Asp Ala Ala Ala Ser Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu
370 375 380
AAC AGT AAG CTG ACC ACG GTT TTG GAT GCG GTC GAG CTG ACG Q C GGC 1200
Asn Ser Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr His Gly
385 390 395 400
GGC ACA GCA ATC AAA AAT CTC GAC AAC TTC AGC AAT GCC GCC QA CTG 1248
Gly Thr Ala Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu
405 410 415
GTT GTC GAC GGC ATT ATG ATT CCG CTC CTG CCT Q A AAT T Q ACA GGC 1296
Val Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Gln Asn Ser Thr Gly
420 425 430
AAA AAT AAT CAG CCC GAT Q A GGT AAA AAC GGC GGA ACA GCC TTT ATC 1344
Lys Asn Asn Gln Pro Asp Gln Gly Lys Asn Gly Gly Thr Ala Phe Ile
435 440 445
TAT AAA ACG ACC TAC ACG CCG AAA AAC GAT GAC AAA GAT ACC AAA GCC 1392
Tyr Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp Lys Asp Thr Lys Ala
450 455 460
CAA ACA GTC ACG GGC GGC ACG CAA ACC GCT T Q AAT ACG G Q GGT GAT 1440
Gln Thr.Val Thr Gly Gly Thr Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp
465 470 475 480
GCC AAT GGC AAA ACA AAA ACC TAT GAA GTC GAA GTC TGC TGT TCC AAC 1488
Ala Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn
485 490 495
CTC AAT TAT CTG AAA TAC GGG TTG CTG ACG CGC AAA ACT GCC GGC AAC 1536
Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Gly Asn
500 505 510
ACG GTG GGA AGC GGC AAC AGC AGC C Q ACC GCC GCC GCC Q A ACG GAC 1584
Thr Val Gly Ser Gly Asn Ser Ser Pro Thr Ala Ala Ala Gln Thr Asp
515 520 525
GCG Q G AGT ATG TTC CTC Q A GGC GAG CGC ACC GAT GAA AAC AAG ATT 1632
Ala Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Asn Lys Ile
530 535 540
C Q AGC GAG Q A AAC GTC GTT TAT CGG GGG TCT TGG TAC GGG CAT ATT 1680
Pro Ser Glu Gln Asn Val Val Tyr Arg Gly Ser Trp Tyr Gly His Ile
545 550 555 560
GCC AGC AGC ACA AGC TGG AGC GGC AAT GCT TCT GAT AAA GAG GGC GGC 1728
Ala Ser Ser Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala Ser Asp Lys Glu Gly Gly
565 570 575
W O 95/33049 2 ~ ~ 7 9 3 ~ PCT~FR95/00701
-
-61-
AAC AGG GCG GAA TTT ACT GTG AAT TTT GGC GAG AAA AAA ATT ACC GGC 1776
Asn Arg Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Gly Glu Lys Lys Ile Thr Gly
580 585 590
ACG TTA ACC GCT GAA AAC AGG CAG GAG GCA ACC TTT ACC ATT GAT GGT 1824
Thr Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gln Glu Ala Thr Phe Thr Ile Asp Gly
595 600 605
AAG ATT GAG GGC AAC GGT TTT TCC GGT ACG GCA AAA ACT GCT GAA TTA 1872
Lys Ile Glu Gly Asn Gly Phe Ser Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Leu
610 615 620
GGT TTT GAT CTC GAT CAA AAA AAT ACC ACC CGC ACG CCT AAG GCA TAT 1920
Gly Phe Asp Leu Asp Gln Lys Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr
625 630 635 640
ATC ACA GAT GCC AAG GTA AAG GGC GGT TTT TAC GGG CCC AAA GCC GAA 1968
Ile Thr Asp Ala Lys Val Lys Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu
645 650 655
GAG TTG GGC GGA TGG TTT GCC TAT TCG GAC GAT AAA CAA ACG AAA AAT 2016
Glu Leu Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Ser Asp Asp Lys Gln Thr Lys Asn
660 665 670
GCA ACA GAT GCA TCC GGC AAT GGA AAT TCA GCA AGC AGT GCA ACT GTC 2064
Ala Thr Asp Ala Ser Gly Asn Gly Asn Ser Ala Ser Ser Ala Thr Val
675 680 685
GTA TTC GGT GCG AAA CGC CAA CAG CCT GTG CAA TAAACCAAGG CGGATAC 2114
Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Gln Pro Val Gln
690 695
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 10:
(i) CA~ACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 699 acides amun~s
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 10:
Cys Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu Asp Ser Val Asp Thr
1 5 10 15
Glu Ala Pro Arg Pro Ala Pro Lys Tyr Gln Asp Val Ser Ser Glu Lys
20 25 30
Pro Gln Ala Gln Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Gly Phe Ala Met Arg Leu
35 40 45
Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Ser Ala Lys Glu Asn Glu Val Lys Leu
50 55 60
Asn Glu Ser Asp Trp Glu Thr Thr Gly Leu Pro Ser Asn Pro Lys Asn
65 70 75 80
Leu Pro Glu Arg Gln Lys Ser Val Ile Asp Gln Val Glu Thr Asp Gly
WO 9S/330~9 ~ 9 3 ~ PCT/FR95/00701
7 ~
-62-
Asp Ser Asn Asn Ser Asn Ile Tyr Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Gln Ser
100 105 110
Asn His Gln Asn Gly Asn Thr Gly Asn Gly Val Asn Gln Pro Lys Asn
115 120 125
Glu Val Thr Asp Tyr Lys Asn Phe Lys Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe
130 135 140
Tyr Lys His Ala Lys Arg Glu Val Asn Leu Ala Val Glu Pro Lys Ile
145 150 155 160
Ala Lys Asn Gly Asp Asp Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Lys Asp Pro
165 170 175
Ser Arg Gln Leu Pro Ala Ser Gly Lys Ile Thr Tyr Lys Gly Val Trp
180 185 190
His Phe Ala Thr Asp Thr Lys Arg Gly Gln Lys Phe Arg Glu Ile Ile
195 200 205
Gln Pro Ser Lys Asn Gln Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Ser Gly Asp
210 215 220
Asp Asp Glu Gln Tyr Ser Asn Lys Asn Glu Ser Met Leu Lys Asp Gly
225 230 235 240
His Glu Gly Tyr Gly Phe Ala Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Asp Asn
245 250 255
Lys Lys Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Ala Asn Gln Asn Asn
260 265 270
Asn Thr Asn Asn Asp Lys His Thr Thr Gln Tyr Tyr Ser Leu Asp Ala
275 280 285
Thr Leu Lys Gly Asn Arg Phe Ser Gly Lys Ala Glu Ala Thr Asp Lys
290 295 300
Pro Lys Asn Asp Gly Glu Thr Lys Glu His Pro Phe Val Ser Asp Ser
305 310 315 320
Ser Ser Leu Ser Gly Gly Phe Phe Gly Pro Gln Gly Glu Glu Leu Gly
325 330 335
Phe Arg Phe Leu Ser Asn Asp Gln Lys Val Ala Val Val Gly Ser Ala
340 345 350
Lys Thr Lys Asp Lys Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ala Glu Ala Ser Gly
355 360 365
Gly Thr Asp Ala Ala Ala Ser Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu
370 375 380
Asn Ser Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr His Gly
385 390 395 400
Gly Thr Ala Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu
405 410 415
Val Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Gln Asn Ser Thr Gly
420 425 430
WO 95/33049 21 6 7 9 3 ~ PCT/FR95/00701
-63-
Lys Asn Asn Gln Pro Asp Gln Gly Lys Asn Gly Gly Thr Ala Phe Ile
435 440 445
Tyr Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp Lys Asp Thr Lys Ala
450 455 460
Gln Thr Val Thr Gly Gly Thr Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp
465 470 475 480
Ala Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn
485 490 495
Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Gly Asn
500 505 510
Thr Val Gly Ser Gly Asn Ser Ser Pro Thr Ala Ala Ala Gln Thr Asp
515 520 525
Ala Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Asn Lys Ile
530 535 540
Pro Ser Glu Gln Asn Val Val Tyr Arg Gly Ser Trp Tyr Gly His Ile
545 550 555 560
Ala Ser Ser Thr Ser Trp Ser Gly Asn Ala Ser Asp Lys Glu Gly Gly
565 570 575
Asn Arg Ala Glu Phe Thr Val Asn Phe Gly Glu Lys Lys Ile Thr Gly
580 585 590
Thr Leu Thr Ala Glu Asn Arg Gln Glu Ala Thr Phe Thr Ile Asp Gly
595 600 605
Lys Ile Glu Gly Asn Gly Phe Ser Gly Thr Ala Lys Thr Ala Glu Leu
610 615 620
Gly Phe Asp Leu Asp Gln Lys Asn Thr Thr Arg Thr Pro Lys Ala Tyr
625 630 635 640
Ile Thr Asp Ala Lys Val Lys Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Ala Glu
645 650 655
Glu Leu Gly Gly Trp Phe Ala Tyr Ser Asp Asp Lys Gln Thr Lys Asn
660 665 670
Ala Thr Asp Ala Ser Gly Asn Gly Asn Ser Ala Ser Ser Ala Thr Val
675 680 685
Val Phe Gly Ala Lys Arg Gln Gln Pro Val Gln
690 695
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 11:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 198 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: IM2169
~7~36
WO 95/33049 PCT/FR95/00701
- 64 -
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 11:
Thr Lys Asp Lys Leu Glu Asn Gly Ala Ala Ala Ser Gly Ser Thr Gly
1 5 10 15
Ala Ala Ala Ser Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys
Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys
Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp
Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asp Ser Glu Ser Gly Asn Thr
Gln Ala Asp Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr Glu Phe Thr Arg Lys Phe
Glu His Thr Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln
100 105 110
Thr Asn Gly Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly
115 120 125
Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr
130 135 140
Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln
145 150 155 160
Ala Gly Gly Asn Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu
165 170 175
Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro
180 185 190
Thr Asp Gln Asn Val Val
195
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 12:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 198 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: 6940
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 12:
Thr Lys Asp Lys Thr Glu Asn Gly Ala Val Ala Ser Gly Gly Thr Asp
1 5 10 15
Ala Ala Ala Ser Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys
WO 95/33049 ~ ~ ~ 7 ~ 3 6 PCT/FR95/00701
-65-
Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Leu Gly Asp Lys Glu
Val Gln Lys Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp
Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Glu Ala Ser Glu Ser Gly Asn Asn
Gln Ala Asn Gln Gly Thr Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe
Asp His Thr Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln
100 105 110
Thr Asn Gly Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly
115 120 125
Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr
130 135 140
Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln
145 150 155 160
Ala Gly Glu Ser Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu
165 170 175
Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro
180 185 190
Ser Glu Gln Asn Ile Val
195
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 13:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 198 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: lineaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: 2223
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 13:
Thr Lys Asp Lys Thr Glu Asn Gly Ala Val Ala Ser Gly Gly Thr Asp
1 5 10 15
Ala Ala Ala Ser Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys
Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Leu Gly Asp Lys Glu
Val Gln Lys Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp
Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Glu Ala Ser Glu Ser Gly Asn Asn
WO 95/33049 . , . PCT/F1~95/00701
-66-
ln Ala Asn Gln Gly Thr Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe
8S 90 95
Asp His Thr Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Gln
100 105 110
Ala Asn Gly Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly
115 120 125
Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr
130 135 140
Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln
145 150 155 160
Ala Gly Glu Ser Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Gly
165 170 175
Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro
180 185 190
Ser Glu Gln Asn Ile Val
195
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 14:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 198 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: C708
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 14:
Thr Gln Asp Lys Pro Arg Asn Gly Ala Val Ala Ser Gly Gly Thr Gly
1 5 10 15
Ala Ala Arg Ser Asn Gly Ala Ala Gly Gln Ser Ser Glu Asn Ser Lys
Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Ly~
Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp
Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Glu Ala Ser Glu Ser Gly Lys Asn
Gln Ala Asn Gln Gly Thr Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe
Asn His Thr Pro Lys Ser Asp Glu Lys Asp Thr Gln Ala Gly Thr Ala
100 105 110
Glu Asn Gly Asn Pro Ala Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Ala Asn Gly
115 120 125
WO 95/33049 2 ~ 6 7 9 ~ $ ~ PCT/F1~95/00701
-67-
Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr
130 135 140
Leu Lys Tyr Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln
145 150 155 160
Ala Gly Glu Ser Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Gly
165 170 175
Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro
180 185 190
Asn Asp Gln Asn Val Val
195
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 15:
ti) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
tA) LONGUEUR: 211 acides aminés
tB) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
tii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
tA) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: M978
(xi~ DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 15:
Thr Gln Asp Lys Ala Ala Asn Gly Asn Thr Ala Ala Ala Ser Gly Gly
1 5 10 15
Thr Asp Ala Ala Ala Ser Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn
Ser Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp
g0 g5
Lys Lys Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val
Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Glu Thr Ser Glu Ser Gly
Ser Asn Gln Ala Asp Lys Gly Lys Lys Gly Lys Asn Gly Lys Asn Gly
Gly Thr Asp Phe Thr Tyr Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp
100 105 110
Lys Asp Thr Lys Ala Gln Thr Gly Ala Ala Gly Ser Ser Gly Ala Gln
115 120 125
Thr Asp Leu Gly Lys Ala Asp Val Asn Gly Gly Lys Ala Glu Thr Lys
130 135 140
Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys Tyr
145 150 155 160
Gly Met Leu Thr Arg Lys Asn Ser Lys Ser Ala Met Gln Ala Gly Gly
165 170 175
WO 95/33049 2 16 7 9 3 ~ PCT/FR95/00701
.
-68-
sn Ser Ser Gln Ala Asp Ala Lys Thr Glu Gln Val Glu Gln Ser Met
180 185 190
Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Asn Asp Gln
195 200 205
Asn Val Val
210
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 16:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 200 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
tB) SOUCHE: 1610
txi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 16:
Lys Arg Asp Lys Ala Glu Ser Gly Gly Gly Asn Gly Ala Ser Gly Gly
1 5 10 15
Thr Asp Ala Ala Ala Ser Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn
Ser Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Ser Gly Gly
Lys Glu Val Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val
Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asp Ser Glu Ser Gly
Asn Thr Gln Ala Asp Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr Lys Phe Thr Arg
Lys Phe Glu His Thr Pro Glu Ser Asp Lys Lys Asp Ala Gln Ala Gly
100 105 110
Thr Gln Thr Asn Gly Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr
115 120 125
Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu
130 135 140
Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Gly Asn Thr
145 150 155 160
Gly Glu Gly Gly Asn Gly Ser Gln Thr Ala Ala Ala Gln Thr Ala Gln
165 170 175
Gly Ala Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu
180 185 190
Ile Pro Ser Glu Gln Asn Val Val
195 200
WO 95/33049 2 ~ 3 ~ PCT/FR95/00701
-69-
(2) INFOR~ATION POUR LA SEQ ID NO: 17:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 200 acides amines
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B~ SOUCHE: 867
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 17:
Thr Lys Asp Lys Pro Arg Asn Gly Ala Val Ala Ser Gly Gly Thr Asp
1 5 10 15
Ala Ala Ala Ser Asn Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn Gly Lys
Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys
Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Ser
Gly Ile Met Ile Pro Leu Met Pro Glu Thr Ser Glu Ser Gly Asn Asn
Gln Ala Asp Lys Gly Lys Asn Gly Gly Thr Ala Phe Thr Arg Lys Phe
Asp His Thr Pro Lys Ser Asp Glu Lys Asp Thr Gln Ala Gly Thr Pro
100 105 110
Thr Asn Gly Ala Gln Thr Ala Ser Gly Thr Ala Gly Val Thr Gly Gly
115 120 125
Gln Ala Gly Lys Thr Tyr Ala Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu Asn
130 135 140
Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Asp Asn Thr Val
145 150 155 160
Gly Ser Gly Asn Gly Ser Ser Thr Ala Ala Ala Gln Thr Ala Gln Gly
165 170 175
Ala Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile
180 185 190
Pro Lys Glu Gln Gln Asp Ile Val
195 200
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 18:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 198 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
WO 95/33049 PCT/FR95/00701
2~ 6~93~
-70-
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: S3032
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 18:
Thr Lys Asp Lys Pro Ala Asn Gly Asn Thr Ala Glu Ala Ser Gly Gly
1 5 10 15
Thr Asp Ala Ala Ala Ser Gly Gly Ala Ala Gly Thr Ser Ser Glu Asn
Ser Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Thr His Gly Gly
Thr Ala Ile Lys Asn Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val
Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Gln Asn Ser Thr Gly Lys
Asn Asn Gln Pro Asp Gln Gly Lys Asn Gly Gly Thr Ala Phe Ile Tyr
Lys Thr Thr Tyr Thr Pro Lys Asn Asp Asp Lys Asp Thr Lys Ala Gln
100 105 110
Thr Val Thr Gly Gly Thr Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Ala
115 120 125
Asn Gly Lys Thr Lys Thr Tyr Glu Val Glu Val Cys Cys Ser Asn Leu
130 135 140
Asn Tyr Leu Lys Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Gly Asn Thr
145 150 155 160
Val Gly Ser Gly Asn Ser Ser Pro Thr Ala Ala Ala Gln Thr Asp Ala
165 170 175
Gln Ser Met Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Asn Lys Ile Pro
180 185 190
Ser Glu Gln Asn Val Val
195
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 19:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 195 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: 891
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: l9:
Thr Lys Asp Lys Pro Gly Asn Gly Ala Arg Leu Gln Ala Ala Arg Cys
l 5 10 15
WO 95/33049 2 l 6 ~ 9 3 6 PCT/FR95/00701
. ~ ~
-71-
Gly Thr Ser Asn Gly Ala Ala Gly Gln Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu
Thr Thr Val Leu Asp Ala Val Glu Leu Lys Leu Gly Asp Lys Glu Val
Gln Lys Leu Asp Asn Phe Ser Asn Ala Ala Gln Leu Val Val Asp Gly
Ile Met Ile Pro Leu Leu Pro Lys Asp Ser Glu Ser Gly Lys Asn Gln
Ala Asp Lys Gly Lys Asn Gly Glu Thr Glu Phe Thr Arg Lys Phe Glu
His Thr Pro Glu Ser Asp Glu Lys Asp Ala Gln Ala Gly Thr Pro Ser
100 105 110
Asn Gly Ala Gln Thr Ala Ser Asn Thr Ala Gly Asp Thr Asn Gly Lys
115 120 125
Thr Lys Thr Tyr Glu Val Asn Leu Cys Ser Asn Leu Asn Tyr Leu Lys
130 135 140
Tyr Gly Leu Leu Thr Arg Lys Thr Ala Gly Asn Thr Gly Glu Gly Gly
145 150 155 160
Asn Ser Ser Pro Thr Ala Ala Gln Thr Ala Gln Gly Ala Gln Ser Met
165 170 175
Phe Leu Gln Gly Glu Arg Thr Asp Glu Lys Glu Ile Pro Asn Asp Gln
180 185 190
Asn Val Val
195
t2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 20:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 29 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 20:
AAACCCGGAT CCGTTGCCAG CGCTGCCGT 29
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 21:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 85 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 21:
WO 95/33049 PCT/17R95/00701
2~7~3~ --
-72-
TTTTTTCATG AGATATCTGG CAACATTGTT GTTATCTCTG GCGGTGTTAA TCACCGCCGG 60
GTGCCTGGGT GGCGGCGGCA GTTTC 85
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 22:
(iJ CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 30 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (genomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 22:
GTGTTTTTGT TGAGTGCATG CCTGGGTGGC 30
(2~ INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 23:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 40 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
tC) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 23:
TGCGCAAGCT TACAGTTTGT ~ll.G~llll CGCG~lGCCG 40
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 24:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 40 paires de ba-~es
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 24:
AAAAAGCATG CATAAAAACT ACGCGTTACA CCATTCAAGC 40
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 25:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 39 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 25:
TATATAAGCT TACGTTGCAG GCCCTGCCGC ~llllCCCC 39
WO 95/33049 216 ~ ~ 3 ~ PCT/FR95100701
1 .
-73-
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 26:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 29 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: slmple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 26:
CCCGAATTCT GCCGTCTGAA GCCTTATTC 29
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 27:
(i) CA~ACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 28 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 27:
CCCGAATTCT GCTATGGTGC TGCCTGTG 28
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 28:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 30 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: lineaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 28:
CGCATCCAAA ACCGTACCTG TGCTGCCTGA 30
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 29:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 30 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 29:
TTTATCACTT TCCGGGGGCA GGAGCGGAAT 30
(2) INFORMATION eOUR LA SEQ ID NO: 30:
216 7 9 3 6 PCT/liR95/00701
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 30 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 30:
GTTGGAACAG CAGACAGCGG TTTGCGCCCC 30
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 31:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 30 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: simple
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 31:
GAACATACTT TGTTCGTTTT TGCGCGTCAA 30
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 32:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 5 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: IM2394
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 32:
Tyr Lys Gly Thr Trp
l 5
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 33:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 15 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: IM2394
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 33:
Glu Phe Glu Val Asp Phe Ser Asp Lys Thr Ile Lys Gly Thr Leu
l 5 10 15
WO 95/33049 21~ 7 ~ 3 ~ PCT/FR9~i/00701
- 75 -
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 34:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 12 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: IM2394
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 34:
Glu Gly Gly Phe Tyr Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 35:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 6 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(vi) ORIGINE:
(A~ ORGANISME: N. meningitidis
(B) SOUCHE: IM2394
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 35:
Ala Val Phe Gly Ala Lys
1 5
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 36:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 2070 paires de bases
(B) TYPE: acide nucleique
(C) NOMBRE DE BRINS: double
(D) CONFIGURATION: lineaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: Neisseria meningitidis
(B) SOUCHE: BZ83
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: sig_peptide
(B) EMPLACEMENT: 1..60
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: mat peptide
(B) EMPLACEMENT: 61..2067
(ix) CARACTERISTIQUE ADD~TIONELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 1..2067
PCT/FR95/0070 1
WO 95/33049
2~67~3~ 76
~
ATGAACAATCC~TTGvTA~TCAGGCTGC-ATGv L GCTG.~l~~ Lll~llGAG L GCT
-- -- -- -- , -- -- -- ------ -- -- -- . -- -- -- --T-- -- -- -- , -- -- -- ------ -- -- -- . ---- -- --+-- -- -- -- . -- -- -- + -- -- -- -- . -- -- -- --
+ 60
TACTTGTTAGGTAAC-~LT?.--TCCG'C-'T CCACC-ACGGACACAAAAACAACTC~CGA
MetAsnAsnProLeuValAs-Gl~`la'laMetVaiLeu?roValPheLeuLeuSerAla
____ _________ _________ _________ _________ ________ ____+
'l'~'l'~'l'~GGCGVAGGCGGC~G~ T L CG-r - CT - -A'~ ~AT'CCGAAGCCCCGCGTCCC
___ _________ ____ --- ----_--_- ---+- + . + 120
ACAGACCCGCCTCCGCCGTC--~AGCTAG~_TArGACAGCTATGGCTTCGGGGCGCAGGG
CysLeuGlyGlyGlyGlySerPneAsp1eu~spSerValAspThrGluAlaProAryPro
____ ________ ____ ____ ______ __ ____+ ___ _________ ____+
GCGCCAAAGTATCr~GAl~-ll ~ CCG AACACCGC~ GCCCAAAAAGACCAAGGCGGA
. + . + + . + . + . + 180
CGCGGTTTCATAGTTCTAC~AAG~AGG~illvlvGCGTTCGG~lllll~l'GGTTCCGCCT
AlaProLysTyrGlnAspValSerSerGluThrProGlnAlaGlnLysAspGlnGlyGly
__ ____+____ ____+_ __ ____+____ ____+__ _ ____+____ ____+
TACG~~ GCAATGCGCTTCAAGCGGCGGAATTGGTACCCAAAAAATGAAGAAGATCAT
___ ____+____,____+__-- _---+-- _ - --+-- , + . + _40
ATGCCAAAACGTTACGCGAAGTTCGCCGCCTTAACCATGG~lllll l'A~'l'l~l 1'~ lAGTA
TyrGlyPheAlaMetArgPheLysArgArgAsnTrpTyr?roLysAsnGluGluAspHis
-- -- -- -- -- -- -- --+ -- -- -- -- . -- -- -- -- +-- -- -- -- . -- -- -- -- T-- -- -- -- . t -- -- -- -- , -- -- -- -- ' -- -- -- -- _ _ _ -- +
AAGGCATTATCAGAAGCGGATTGGGAGAAGTTAGGTGCGGGTAAGCCAGATGAGTTTCCC
___ ____+____ ____ ____ ____ -_-- ---- -- + . + 300
TTCCGTAATAGTCTTCGCCTr~CCCTCTTCAATCCACGCCCATTCGGTCTACTCAAAGGG
LvsAlaLeuSerGluAlaAspTrpGluLysLeuGlyAlaGlyLysProAspGluPhePro
_ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ -- -- + -- -- -- -- -- -- -- -- t -- -- -- -- -- -- -- -- + -- -- -- -- -- -- -- -- + -- -- -- -- -- -- -- -- +
C`AAGGAATGA~TATTGAATr.TGACTG`.CGGr;)~TTCTGAGTGA(~101~1lCAGCTGGGT
__ ____+_ _ ____+__ -.----+_-_- ----+--- - + . + 360
GTTTCCTTACTTTATA~CTTATACTGACTGCCTT~GACTCACTCAGAGAAGTCGACCCA
GlnArgAsnGlulleLeu~sn.M~eThrAsDGly~leLeuSerGluSerLeuGlnLeuGly
_ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ + _ _ -- -- , _ _ _ _ ' -- -- -- -- , -- -- -- -- -- -- -- -- -- , -- -- -- -- T -- -- -- -- . -- -- -- +
WO 95/33049 1~ 1 ~ 7 ~ 3 6 PCT/FR95/00701
77
GAGGGCGGCA~'GCCGiG-~AG~5GvATAC.~iGG~TT-Ci'~-ATGTCCGCTCGGGCTAT
____ _________ _______ - --_-_----.----+----.------- .- + ~20
CTCCCGCCGTTTTCGGCGCATCTTCCTATGTGCCTAAAGGTTATACAGGCGAGCCCGATA
GluGlyGlyLysSerArsValGluGlyTy-Th-AspPheGlnTyrValArsSerGlyTyr
____ _________ ____+____ _____ ___ _________ ____+____ ____+
ATCTACCGC~.CGGT-i-C-'~T.~_~lCG`.--TCCA~A~`_~TCGCCCmTTCCGGTCCG
. . . - . . . + 180
TAGATGGCGTTGCCACGG-TATTTTAGCT~G~~ lllAGCGGG~AAGGCCAGGC
IleTyrArsAsnGly,laAsnL~fsIleAs?DheGlnLysLvsI~eAlaLeuSe-GlyPro
____ ____+____ ____+__ _ ____ ___ ____ ____ ____+____ ____+
GACGGCTACCTTTTCTACAAAGGCAGChAlCill~C~AAGCTCTGCCGATGGGTAAGGTA
_ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _, _ _ _ _ _ _ _ _ -- , -- -- -- -- I -- -- -- , + . t 540
CTGCCGATGG~`~G.~l~ l! iC~- l ~ i l~.GGA;GGGTTCGAGACGGCTACCCATTCCAT
AspGlyTyrLeuPheTyrLysGlySerAsnproSerGlnAlaLeuProMetGly,LysVal
____ ____+____ ____+____ ____+____ ___+____ ____+____ ____+
GGTTATAAAGGTACTTGGGATTATGTA.CCGATGCCAAGATGGGACAAAAATTTTCCCAG
____ ____+_ __ ____+__-- -_-_+_--- -- + - . + . + 600
CCAATATTTCCATGAACCCTAATACATTGGCTACGGTTCTACC~ AAAAGGGTC
GlyTyrLysGlyThrTrpAspTyrValThrAspAlaLysMetGlyGlnLysPheSerGln
____ ____+____ ____+ ___ ____+____ ____+__ _ ____+____ ____+
TTGGCTGGTTTTCCAGCGGGGGhTAGGTATGGGG~lll~lelGCCGAGGAAGCGGATGTG
. + . + . . + + 660
AACCGACCA~AAGGTCGCCCCCTATCCATACCCCG~AACAGACGGCTCCTTCGCCTACAC
LeuAlaGlyPheProAlaGlyAspArgTyrGlyAla1euSerAlaGluGluAlaAspVal
____ ____~____ ____+____ ____ ____ ___+____ ____+____ ____+
TTGCGCAACAAAAGCGAGGCACAGCAAGGTCAGACCGATTTCGGGCTGACCAGCGAGTTT
____ ____+____ ____+____ ____+___ _---_--- + . + 720
AACGC~ll~llllCGCTCCGTGlCGTTCC~GTCTGGCTAA~GCCCGACTGGTCGCTCAAA
LeuArgAsnLysSerGluAlaGlnGlnGlyGlnThrAspPheGlyLeuThrSerGluPhe
___ ____+____ ____.____ _________ _________ ____+____ ____+
GAGGTGGAT-TC5CCGCC~G'CCATGACCGGCGCGCTCL~CCGC~TAACCGGATTACT
___ ____ ____ ____+ _ _ ____,__-- ---- -- + . + 780
CTCCACCTA~GCGGCG~ll~lGGTACTGG,_CGCGCGAGATGGCGTTATTGGCCTAATGA
GluValAspPheAlaAlaLysThr,~etThrGlyAlaLeuTyrArsAsnAsnArsIleThr
-
.
W O 95/33049 78 PCTAFR95/0070
~6~g~6 ,
AATAACGAAACCG~`~T~'~GCCAAAC ~TT ~_GT TACGACATTCAGGCTGACCTG
____ _________ ____+____ _________,---- -- + + 840
TTATTGCTTTGGCTTTTATTTC&~~ vlll _~TTTGCAATGCTGTAAGTCCGACTGGAC
AsnAsnGluTh-GluAsnLysAlaLysGlnIleLvs~-gTyrAsplleGlnAlaAspLeu
____ ____+____ ___,______ ____.____ ____ ____ ____+____ ____+
CACGGTAACCGCTTCAGCGGC~AGGC~ACGGCAACCGAC~ACCCAAAAACGACGAAACC
___ ____+____ _________,____+____,--------+--------,---- . + 90O
GTGCCATTGC-CC-.~G--CGCCv--TCCGTTGCCGTTGG~ G~V~l111lGCTGCTTTGG
HisGlvAsnArgPheSe-GlyLysAlaTh-AlaThr~s?LysProLysAsnAspGluThr
____ ____+____ ____+____ ____+____ ____+____ ____+____ ____+
AAGGAACAl~ lCCGA~TC~~ ~-.GCGvCGGL llllCG~lCCGAAG
____ _________, ____ ___ -_--_-_ -,---- - --,-- + 960
llC~ll~lAGGG~C~AAGGCTGAGCAG.~G ~ ~_TCGCCGCCG~AAAAGCCAGGCTTC
LysGluHisProPheValSerAs?SerSerSerLeuSe-GlyGlyPhePheGlyProLys
____ ____+____ ____+ __ ____+____ ____+____ ____+__ _ ____+
GGTGAGGAATTGGGTTTCCG~ llGAGCGACGATCAAAAAGTTGCC~ll~lCGGCAGC
. 1020
CCA~lC~llAACCCAAAGGCGAAAAACTCGCTGCTA~ll~llCAACGGCAACAGCCGTCG
GlyGluGluLeuGlyPheArgPheLeuSerAspAspGlnLysValAlaValValGlySer
____ ____+ ___ __,__+_ __ ____+____ ___+__ ___+____ ____+
GCGAAAACC~AAGACAAACTGGAP~TGGCGCGGCGGClTCAGGCAGCACAGGTGCGGCA
. + 1080
CG~llllG~ll~elvll L ~ACCTTTTACCGCGCCGCCGAA~lCC~lC~l~lCCACGCCGT
AlaLysThrLys~spLysLeuGluAsnGlyAlaAlaAlaSerGlySerThrGlyAlaAla
__ ____+____ ____+____ ____+____ ____+_ _ ____+____ ____+
GCATCGGGCGGTGCGGCAGATATGCCGTCTGAAA.~CGGThAGCTGACCACG~vlillGGAT
+ + + + + 1140
CGTAGcccGccAcGccGTcTATAcGGcAGAcTTTTGccATTcGAcTGGTGccAAAAccTA
AlaSerGlyGlvAlaAlaAsp~letProSerGlu~snGivLvsLeuThrThrValLeuAsp
____ ____, __ __ _+ _ ____.____ __ __ ___ +____ ____+
GcGGTTGAGcTG ~ ATcTGGcGGTi!~GGAAGTc ~:~ATcTcGAc~ cTTcAGcAATGcc
+ + ~ + + + 1200
CGCCAACTCGAC?TTAGACCG_CATTCCTTCAGTTTTTAGAGCTGTTGAAGTCGTTACGG
AlaValGluLeuLysSerGl`,GlvLysGluValLysAsnLeu~s?~snPheSerAsnAla
WO 9St33049 2 ~ ~ ~ 9 3 ~ PCTtF~95/0~701
5CCCAACTGGTTGTCGACGG-ATTATG'T---GCTC-TvCCC~GAATTCCGAAAGCGAG
____ ____+____,____ --__,----_----, + . + 1250
CGvGTTGACCr~Cr~GCTGCCGTr~TACTr~GGCGAGGrCGG~ llrAGGCTTTCGCTC
AlaGlnLeuvalvalAspGlyTler~letIleproLeuLeu2ro~ysAsnserGluserGlu
____ ____+ __ _________ ____ ____ _________ _________ ____+
AGCA~TCAGGC~.GATAA~vGT.~CGvCGvr`~Cr.vCCTT L ACCCGCArATTTGAACAC
t + 1320
TCGTTAGTCCGTCTAl'T'rCC~LLT'r--TGCCGC~.:llvlCGG~L~ATGGGCG--TTAAACTTGTG
SerAsnGlnAlaAspLysGlvLysAsnGlYGlvTh-AlaPheThrArgLvsPheGluHls
____ ____+____,____+____ ____+____,____+____ ____+____ ____+
ACGCCGGAAAGTGATAAAAAAGAC.'CCCAAGCAGGTACGGCGGAGAATGGCAATCCAGCC
+ 1380
TGCGGCCTTTCACTATT L TTTCTGTGvvll_~CCATGCCG-CTCTTACCGTTAGGTCGG
ThrProGluSerAspLysL,vsAspThrGlnAlaGlyTh-AlaGluAsnGl,vAsnProAla
____ ____+____ ____+ ___ ____+____ ____+____ ____+____ ____+
GCTTC~A~TACGGCAGGTGATACCA~TGGCAAAACAAAA~CCTATGAAGTCGAAGTCTGC
____ ____+____,___-+_-__ _---+----,- - + , + + 1440
CGAAGTTTATGCCGTCCACTATGGTTACCvlllI~lllllGGATACTTCAGCTTCAGACG
AlaSerAsnThrAlaGlvAspThrAsnGlyLysThrLysThrTyrGluValGluValCys
t . t . + . +
-GTTCCAACCTC~ATTATCTGAAATACGGAATGTTGACGCGTA~A~ACAGCAAGTCCGCG
____ ____+____ ____,____ -_-+_--- --- ; - . + + 1500
ACAAGGTTGGAGTT~TAGACTTTATGCCTTACAACTGCGCAllll Lv lCCllCAGGCGC
CysSerAsnLeuAsnTyrLeuLysTyrGlyMetLeuThrArgLysAsnSerLysSerAla
____ ____+____ ____+____ ____+____ __ ___ ____+____ ____+
ATGCAGGCAGGCGAA~CGGTAGTCTAGCTGACGCTAAAACGGAACAAGTTGAACAAAGT
+ 1560
TACvlC~vlCCGCTTTTGCCATCAGATCGACTGCGATTTTGC~'llvllCrA~llvlllCA
MetGlnL~laGlvGluAsnGlySe-Le~L~laAsprlaL~,sThrGluGlnValGluGlnSer
____ ____+__ _ _____ __ _______ ____+ _ ____+____ ____+
ATGTTCCTCCAAGGCGAGCGCrCCGATGAAAAAGAGrTTCCAAAAGAGCAACAAGACATC
- - + - ~ + + . + 1620
TACAAGGAGGTTCCGCTCGCGTGGCTA~lllll~r~lAAGvl-~l~l~vllvll~lvlAG
MetPheLeuGlnGlyGluA~ThrAspGluLysGluIleProLysGluGlnGlnAspIle
PCT/FR95/0070 1
WO 95/33049 80
2 ~
GTTTATCGGGGGTCTTGGTACGG-GCATAm~TGCCAACGACAC~AGCTGGAGCGGCAATGCT
~ -- ----T-- -- -- -- . -- -- -- --+ -- -- ---- -- -- -- --+ -- -- -- -- -- -- -- -- +-- -- -- -- -- -- -- -- + 1 680
CAAATAGCCCCC~GAACC-.TGCCC~TATAACGGTTG~~ lCGACCTCGCCGTTACGA
ValTyr~rgGlySer~-?TirGly:-~sIleAlaAs.~spThrSerTrpSerGlvAsnAla
TCAGATAGAGAGGGCGGC~C'GGGCGGACTTTACCGTGAATTTTGGTACGAAP~AAATT
____ ____+____ _-___---- ----+---- - + . + 17~0
AGTCTATCTCTCCCGCC~ll~lCCCGCCTGAAATGGCACTTAAAACCATGelllllllAA
SerAspArgGluGlyGlyAs~rgAlaAspPheThrValAsnPheGlyThrLysLysIle
-- -- -- -- , -- -- -- I ---- -- -- , -- -- -- -- T-- -- -- -- , -- -- -- -- +-- -- -- -- . -- ---- --t-- -- -- -- . -- -- -- -------- -- -- , -- -- -- -- +
AACGGAACGTTAACCGCTGAA~CAGGCAGG`GGCAACCTTTACCATTGTGGGCGATATT
+ + + + 1800
TTGCCTTGCAATTGGCGA~llll~l~C~l~lC~llGGAAATGGTAACACCCGCTATAA
AsnGlyThrLeuThrAlaGluAsnArgGlnGluAlaThrPheThrIleValGlyAspIle
____ ____+____ ____+__ _ ____+____ ___ +____ ____+____ ____+
AAGGACAACGGCTTTGAAGGTACGGCGAAAACTGCTGACTCAGGllllGATCTCGATCAA
+ 1860
llC~l~llGCCGAAACTTCCATGCCGCTTTTGACGACTGAGTCCAAAACTAGAGCTAGTT
LysAspAsnGlyPheGluGlyThrAlaLysThrAlaAs?SerGlyPheAspLeuAspGln
t . -- -- -- + -- -- -- -- , -- -- -- -- _ _ -- _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ +
AGCAATACCACCCGCACGCCTAAGGCATATATCACAGATGCCAAGGTGAAGGGCGGTTTT
____ ____ ____ ____+_--- -_ -+---- + + . + 1920
TCGTTATGGTGGGCGTGCGG TTCCGTATATAGTGTCTACGGTTCCA~llCC~CCAAAA
SerAsnThrThrArgThrProLysAlaTyrIleThrAspAlaLysValLysGlyGlyPhe
____ ____+____ ____+ ___ ____+____ ____+____ ____+___ ____+
TACGGGCCTA~GCCGAAGAGTTGGGCGGAlGvlLlGCCTATCCGGGCGATAAACAAACG
_ -- -- -- , -- -- _ _ +-- _ -- -- , -- -- -- --+ -- -- -- -- , -- -- -- -- + -- -- -- -- . -- -- -- -- T-- -- -- -- . -- -- -- -- + -- -- -- -- . -- -- -- -- + 1 980
ATGCCCGGA--TCGGCTTCTC.~CCCGCCTACCAAACGGATAGGCCCGCTAlll~lllGC
TyrGlyProLysAlaGluGluL-uGlyGlyTrpPheAlaTyrProGlyAspLysGlnThr
t , -- -- + -- -- -- -- -- -- -- -- _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ +
WO 95/33049 81 2 :L t~ 7 9 3 6 PCT/FR95/00701
GAAAAGGC~ACGGTTACATC-GGCGATGG.~ TTCAGCAAGCAGTGCAA~!~lC~'l~TTC
____ ____ _ __ ____;___- --_-_---- + + . + 2040
CTTTTCCGTTGCCAATG,-AGGCCGCTACCTTT~GTCGTTCGTCACGTTGACAGCATAAG
GluLysAlaThrValThrSerGlvAspGlvAsnSerAlaSerSerAlaThrValValPhe
____ ____+____ _________ ____.f____ _________ ____+____ ____+
GGTGCGAAACGCC~GCCLGTGCAATr~
____ ____+____ ------ - + 2070
CCACGCTTTGCG~ill~C~G'CACGTTATT
GlvAlaLysAraGl~LysProValGlnTe-
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 37:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 669 acides aminés
(B~ TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii~ TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 37:
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 38:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 2136 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: double
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADN (génomique)
(vi) ORIGINE:
(A) ORGANISME: Neisseria meningitidis
(B) SOUC~E: BZ163
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOMJCLE: sig_pep~ide
(B) EMPLACEMENT: 1..60
(ix~ CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/ CLE: mat_peptide
(B) EMPLACEMENT: 61..2133
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 1..2133
PCT/FR9510070 1
WO 95/33049 - . 82
2~7~3~ _
ATGAACAATCCATTGGT~ L C~GGCTGCTATGC-TGClG~v vllllivll~:AGTGCT
____ ____+____ _________,____ ---- - - , + + 60
TA~_11v1lAGGT~-ccATTTAGTccGAcGATAccAcGAcGGAc~cAAAAAc~7`LcTcAcGA
MetAsnAsnProLeuValAsnGl~laAlaMe~ValLeuP oValPheLeuLeuSerAla
____ ____+____ ________ _________ ____ ___ ____ ___ ____+
TGTTTGGGCGGAGGCGGC~.GTTTCG.''LTCTTG.' ~_'vl'~v~L--ACCG~AGCCCCGCGTCCC
. + , + + 120
ACAAACCCGCCTC-GCCGTCA~GCTAGAAC.~AGACAGCTATGGCTmCGGGGCGCAGGG
CysLeuGlyGlyGlyGlySerPheAspLeuAspSerValAspThrGluAlaProArgPro
____ ____+____ ____ ____ ____+____ ____+___ ____+____ ____+
GCGCCAAAATATCAAGA'lv L ' l~lL~CCGAAA~CCGC~GCCC~AAGACC~AGGCGGA
____ ____+____ _________,____ ----,----+-- , + + 180
CGCGGTTTTATAGTTCTACA~GA.GG~lllllGGCGTTCGvvlllll~lGGTTCCGCCT
AlaProLysTyrGlnAspValSerSerGluLysProGlnAlaGlnLysAspGlnGlyGly
____ ____+____ ____+____ ____+____ ____+____ ____+____ ____+
TACG~llll~CGATGAGGTTGAAACGGAGGAATCGGCATCCGCAGGCAAAAGAAGACAAA
____ ____+____ ____+____,___-+___-,__--+-- -, + . + 240
ATGCCAAAACGCTACTCCAACTTTGCCTCCTTAGCCGTAGG~l~C~
TyrGlyPheAlaMetArgLeuLysArgArgAsnArgHisProGlnAlaLysGluAspLys
___ ____+ ___ ____I _ ____+____ ____+____ ____+____ ____+
GTTGAACTAAACCCAAATGATTGGGAGGAGACAGGA L TGCCGAGCAAGCCCCAAAACTTA
____ ____+____ ____ ____, ___+_ --,----+ -- , + + 300
CAACTTGATTTGGGTTTACTAACCCTC~l~l~lC~i~ACGG~lC~llCGGGGTTTTGAAT
ValGluLeuAsnProAsnAspTrpGluGluThrGlyLeuProSerLysProGlnAsnLeu
____ ____+____ ____+__ _ ____+__ ____+_ _ ____+____ ____+
CCCGAGCGACAGCAATCGGTTATTGATA~AGTAA~CAGACGATGGCAGCAATATTTAC
___ ____+____ ____+__-_,---_+----,---- + . + 360
GGGCTCG~lvlCvllAGCC~AT'ACTATTTCL~ lvl~lvCTACCvlC~vllATAAATG
ProGluArgGlnGlnSerValIleAspLysValLvslhrAspAspGlySerAsnIleTyr
____ ____+ _ ____ . _ ___ ____ ____, __ ____+____ ____+
-
1~ 7 ~ 3 6 PCT/FR95/00701
WO 95/330~9 83 h
.
ACTTCCCC--TA------C-~-G-~L- ~CCATC~LCGGC`GC-~C~~TrLvC>GCAArLC
__ _______- --___--- ----_-- - - . . ~2
TGAAGvGv~-AvAGTv_GTT.`LGTTTGGT.`GTT-TGCC--TCG-v.,TTATCGCCACGTTTG
ThrSerProTyrLeuTh-GlnSerAsnHisGlnAsnGlySe-Th-'snSerGlvAlaAsn
____ _________ _________ _________ _________ _________ ____+
CAACCAAAA~-.CG~G-~ ~G'--A~~A~AL--CAr~,TA L GTTTATTCCGGCTGGTTT
____ _______ _ _________ __-_+__ - - - . + . + ~80
GTTG~11111 -C,-CATTTT-T,~~ A~GTTTATAC~ATAAGGCCGACCAAA
GlnProLysAs..Glu-JalLysAsDTy-Ly,s~snPheLysTyrValTy~SerGlyTrpPhe
+ -- . -- -- -- -- T -- -- -- -- , -- -- -- --_ -- -- -- -- _ -- -- _ + _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ +
TATAAACATGCAGAGAGTGA~GAGAATTCAGT~AAATCAAATTTAAGTCAGGCGACGAC
_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _, _ -- -- -- -- -- -- -- , -- -- -- -- T-- -- -- -- , -- -- -- -- ---- -- -- -- . -- -- -- -- -- -- -- -- . -- -- -- -- + 5~0
ATATTTGTACGlCTCT_A~ ~AGTCAT-TTAGTTl~TTC~GTCCGCTGCTG
TyrLysHisAlaGluSerGluArgGluPheSerLysIleLysPheLysSerGlyAspAsp
____ ____+____ ____+ ___ ____+____ ____+____ ____+____ ____+
GGCTATATTT-TTATCACGGTAAAGACCCTTCCCGACAACTTCCCACTTCTGAAAAAGTT
_ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _, _ _ _ _ f _ _ -- -- , -- -- _ _ + -- _ -- -- , -- -- -- -- + . + . + 600
CCGATATAAAAAATAGTGCCAlll~lGGGAAGGGCTGTTGAAGGGTGAAGA~lllll~AA
GlyTyrIlePheTyrHisGlyLysAspProserArgGlnLeuProThrSerGluLysVal
____ ____+__ ____ ____ ____+____ ____+____ ____+____,____+
ATCTACAAAGGCGTATGGCAllll~l~ACCGATACTGAAAAGGGACAAAAATTTAACGAT
. + . . + . . + . + 660
TAGAl~lllCCGCATACCG L~AAAc`LTTGGclATGAcTT.Tcc~l~lllllAAATTGcTA
IleTyrLysGlyValTr~HisPheValThrAspThrGluLysGlyGlnLysPheAsnAsp
____ ____+____ ____+___ ____+____ ____+____ ____+____ ____+
ATTCTTGAAACCTCAAAAGGGCAAGGCGACAGATACAGCGGATTTTCGGGCGATGACGGC
____ ____+____ ____+____ ___+-_-- --_-+- - - + . + 7~0
TAAGAACTTTGGAvllllCCC~llCCG~lvl~lATGTCGCCTAAAAGCCCGCTACTGCCG
IleLeuGluTh-SerLysGlyGlnGlyAspArgTyrSerGlyPheSerGlvAspAspGly
____ ____+_ _ ____+_ __ __+ __ ____+____ ____+_ ____+
GAAACAACTTC_~ATAGAACTG-,TTCCAACCT--AATGAT~GCACGAGGGTTAlGvllll
,___ + ,_ _ _ --, _ + -.---- ----.----+----.----+ 7ao
~lll~llGAAGG-T~,TCTTGACTAAGGTT~GAATTACTATTCGTGCTCCC~ATACCAAAA
GluThrThrSerAsnArgThrAspSerAsnLeuAsnAspLysHisGluGlyTyrGlyPhe
PCT/FR9S/0070 1
WO 95/33049 84
2~7~3~
.CCTCG.~-T'_A^-~`.G-lGG..------G-_~GTA~`~.- A_GGGl~.lT~ATACGCAAT
____ _________ _________ ______--_ ------- - 840
.GGAGCT.~`.T_--C~CC-~G._^-TC~----T-'~C-G-_-ATT-~iTlA-GCGTTA
Th-Se-AsnLeuC-luv~al~sp?he~lvSerLvsLvsleuT~-Glv~ysLeuIieArgAsn
___ _____~___ _________._ _______ _________ _________ _____
~TAGAGTTAC''ACGCT.~_.'CT.'~CGA LA~ -A.A_.ACCC~TA.-ACAGC-TTGAT
____ _________,_________,____ __----,-------- ---- --, -- . -- . 900
TTATCTCAATGTT-GCG.`TGATC-`..---CT...~-.~.~ L G '~ l~GGTTATG.TGTCGGAACTA
AsnArgValTh-As~AlaTh-Th-As~.sDLvsTv-Th-Th-GlnTvrTvrSerLeuAs~
GCCC~AT'`.C'GG.~CCGCTTC`~CGGT.`AGGCG.-.`-.GCC`.C.G.`.C~`.CCCGACACT
____ ____+____ _______-_ -_-____-- ----_-- + 960
CGGGTTT,.TTGTCCGT_GG.G.`_`GT-GCC.`TTC_GCT`TCGCTGG~ !'~L''l l~GGCTGTGA
AlaGlnIleTh-Glv~s~.rgPhe~snGlvLysAlaIleAlaThrAspLysProAspThr
____ ____+____ ____+____ ____+ ___ ____ ____ ____+____ ____+
GGAGGAACCA~ACTACATCC~ CCGA~l~lollC ! '1 lGAGCGGCGGLlllllC
. + 1020
C~l~llG~lllGATGTAGGG~AAC~AGGCTGAGCAG~GA~ACTCGCCGCCGAAAAAG
GlyGlyThrLysLeu:ilsP-oPheValSe-~spserSerSerLeuSerGlvGlyPhePhe
____+____ _______ _ _________ ____ ____ _________,___--
GGTCCGAAGGGTGAGG~TTGGG L T-CCG~ l: L lGAGCGACGAT~AAAAGTTGCGGTT
+ + + + 1080
CCAGGCTTCCCACTCCTT.~.CC_~GGCGA~.CTCGCTGCTAl~!lll~AACGCCAA
GlyProLysGlvGluGluLeuGlyPheArgDheLeuSe~AspAspLysLysValAlaVal
_ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ ~ -- _ _ -- -- -- -- -- + -- -- -- -- , t
GTCGGCAGCGCG.:~ 'LCC.`~G,.C ~ -~CGG~AATGGCGCGGTGGCTTCAGGCGGCACA
____ ____+____ ____ __-- ---- --_- --- + 1140
CAGCCGTCGCG.TlTTG~ ! '1 GCCTTT-.ACCGCGCCACCG~AGTCCGCCGTGT
ValGlySer..lar;s.hrL~.~s.'.a?~s~hrvlu.s..G~.-.-la'a ..laSer51~GlvTh-
____ ____+_ __ _________ . ________ _________ ____,____ ____+
2 ~ ~ 7 ~ ~ 6 PCT~95/00701
W O95/33049 85
GATGCGGC'GCATCA~ACGG--CGG-AGG_A~ _L- ~ G-A-sACsGT~AGCTGACCACG
1200
CTACGCCGTCGTAGTT-GCCsCGCCGTCC~ GC..GC~GAol ll~lCATTCGsCTGGTGC
AspAlaAlaAlaSe-AsrGlvAlaAlaGl-;ThrSe_S2rGluAsnSe~LysLeuTh~Thr
____ _________ _________ ___ __ _ _________ _________ ____+
GTTTTGG.-G-C----CG--.G^--:--~l-GG-GC--..:-GG~GTCCAA~GCTCG CAACTTC
_ _, _ _ _ _ _ _ _ _, _ _ _ _ _ _ _ _ _, _ -- -- -- ---- -- ---- , -- -- -- --T -- -- -- -- . -- -- -- -- + -- _ _, _ _ _ _ + ' 260
U~ CCTAC----C-~5C--C~s~~~~s--CCC -C.L~TTCCTTCsGG~~r~XGsGCTGTTGAAG
ValLeuss?sla~;alGluLeu~-~s~euGl~s~LysGluValGlnLysLeuAsDAsnPhe
___ ____ ____ _________ _ ____ __ _________ _________ ____+
AGCAACGCCGCCC~'CTGGTTC- L C5ACGGC;TTsTGATTCCGCTCTTGCCCGAGACTTCC
___ ____ _ __ __ _- - ----_- -- --- - + 1320
-_GTTGCGGCGGGlTG-ACC~sC~.GC GCCGTAsTsC L ~sGGCGAG~sCGGGCTCTGAAGG
SerAs~AlaAlaGlnL2uValValAs?G~ eMetIleProLeuLeuProGluThrSer
t . + -- , -- -- -- + -- -- -- -- , _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ +
GAAAGTGGGA~sC~ATC~AGCCAATCAAGGTACAA~TGGCGGAACAGCCTTTACCCGCAAA
. + + + + + + 1380
CTTTCACCell~llAGTTCGGTTAGTTCC.'TGTTTACCGC~ ! 1~ lCGGAAATGGGCGTTT
GluSerGlvAsnAsnGlnAlaAsnGlnGlyThrAsnGlyGlyThrAlaPheThrAr~Lys
_ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ + _ -- -- _, _ _ -- -- + -- -- -- , -- t
-TTGACCACACGCCGGA~GTGAT~AAA~AGsCGCCC~AGCsGGTACGCAGACGA~sTGGG
___ _ _ +____ _____ _ _________,____ -- -- , -- + . + 1 --.O
~AA~l~i~l~CGGCC--TCACTsl ~ ~CGG~ii~lCCATGCGTCTGCTTACCC
pheAspHisTh-plro&luse--ss?LvsLvsAsp'laGlnAlaGlyThrGlnThrAsnGly
___ ____+_ ____ ___ _ _ __ ___+____ ____+ _ _ ____+
GCGCAAACCGClTC~;TsCGGCAGGTGATACCAATGGCA~A~CA~sAACCTATGAAGTC
. + . t . . . + . + 1500
CGC~!llGGCG~AGTTTslGC_-GlCCACTATGGTlsCC~! ii~lllllGGATACTTCAG
aGlnThrAlaserAsnThrAlaGlyAspThrAsnGlyLysTh-LysThrTvrGluval
__ ____ ___ _ _ _ ____ __ _ __ __1_ ----.--------~
GAAGTCTGCT5TTCC~sCC~C~A~l.'.TCTG~sTACGG~sTGTTG.sCGCGCA~AACAGC
__ _____ ___ ________ ~_------~_--------------_-- + . + 15~O
CTTCAGACGAC~sGGTTGG`sG.T.sATAG;rTTTATGCCTTACAsCTGCG~lllll~lCG
GluValCysCysS-rAs..L~l.sr.T~ Leu~ysTyrGlv,~!etLeuThrArgLysAsnSer
WO 95/33049 ~ . PCT/FR95/00701
3 ~ 86
A~GTCCGCG.TGC`--GC~GGAG~C-CAGTAGTC~AGCTG`TGCT~ACGG~ACA.~GTT
. . . . . . + 1620
TTCAGGCGCTACGTC-G~CCTC- Y -GTCATCAGTT_GAC-~CG~.TTTTGCL~ CAA
LysSerAlaMetGlr.laGlyGlu5e-serSe-Gl _`.la~soAlaL~sThrGluGlnVal
GGACA~GTATGTTC_-CC~GGCG'GCGC.-CCG..C-`~ G.`G.~TTCC~AGCGAGCAA
. 1680
C~l~rllCAT~C`_~GGAGG-~_~GCTCGCGTC~C.~ r~1Ll~GGTTCGCTCGTT
GlyGlnSer~letPheLeuGlnGlyGluArgThrAs?Glu_ysGluIleProSerGluGln
_ _ _ _ _ _ _ _ f _ _ _ _ _ _ _ _ _ -- -- -- -- -- -- + -- _ -- -- , -- t . +
.-.CATCGTTT-.-CGG-GGG-C---GTACGGGC~.TA-TGCCAGCAGCAC'AGCTGGAGCGGC
__ ____+__ _ _________ _________.._- -_ - . + _7 0
TTGTAGCAAATAGCC--CAG~CC.~TGCCCGTATf~,C~lC~1~l1CGACCTCGCCG
AsnIleValTy-.~.~ GlySe~T-?TyrG1yHisIleAlaSe-SerThrSerTroSerGly
_ _ _ _ _ _ _ _ f _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ + _ _ _ _ _ _ _ _ +
r AlG~ll~lGAT~AGAGGGCGGC~.CAGGGCGGA~TTTACTGTGAATTTTGGCGAGAAA
. . + . + . t . + . + 1800
L TACGAAGACTAT L TCTCCCGC~ ~ lGlCCCGCCTT~AATGACACTTAAAACCGCTCTTT
AsnAlaSerAs?LysGluGlvGlyAsnArgAlaGluPheThrValAsnPheGlyGluLys
__ ____+__ _ ____,_ _.____ _________ ____+___ ____+
~AATTACCGGCACG. L AACCGCTG~AACAGGCAGGAGGCAACCTTTACCATTGATGGT
. 1860
TTTTA~TGGCCGTGC.~T,GGCC-'.~1111~1C~lC~.~CGTTGGAA~TGGTAACTACCA
LysIleThrGlyThrLeuTh.rAlaGluAsra.-gGlrGluAlaThrPheThrIleAspGly
__ ____+____ _________ ____+____ ____+___ ____+____ ____+
~GATTGAGGGC~CG~lll~ ACGGCAA~'~CTGC~GA TTA~llll~ATCTC
__ ____+___ ____+ __~ __+ ___~__--_+_------,--------+------ + 19.. O
TTCTAACTCCCGT-GCC.~`GGCCATGCC'~ lG~CG-.CTTAATCCAAAACTAGAG
T ysIleGluG~ .s-Gl ~PheSo-GlvTh_AlaL~, sThrAlaGluLeu-~lyPheA5pLeu
_ _ _ _ _ _ _ _ f _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
_ _ _ +
WO 95/33049 87 ~ ~ 6 7 9 3 6 PCT/FR95/00701
G.~TC~.T--CACCCG-~sCGCCT.~GGC.;TALA~C~C~G`~ -~`~GGTGCAGGGC
_ ____ ________ __ _l____ ---- - - + 1980
CTA~i~ llATGGTGGvC^TGCGG~TTCCGTATATAGTG~C-AC5C-TTCCACGTCCCG
.s?GlnLysAsnTh-Th-ArsTh~?roLys.'.12TyrTleThr~.s?`.~aLysValGlnGly
____ ____+____ _________ ____+____ ____+____,____1____,____+
G~ll~ l~CGGGCCC-`~ GCC-~GAGT-GG-GCGGATGGLTTGCCT.`.lC.`-.GGGCG.TA~A
____ ____ _ _ ______-- ---- ---- ---+-- + 20~0
CC~AAAATGCCC^-GG-TTC5--CTTC-C~ACCCGCCT.CCA~CGG.`T~GTCCCGCTATTT
GlyPheTyrGlv?roLvsAlaGluGluLeuGlYGlv~-pPheAla~vrGlnGly~spLvs
-- -- -- -- , -- -- -- --T -- -- -- -- . -- -- -- -- T-- -- -- -- . -- -- -- --+-- -- -- . -- -- -- -- + -- -- -- -- . -- -- -- ------ -- -- -- . -- -- -- +
C`.~CGC-~A~`~TAC~ACAGT-GCA-CC-G-C~-GG~TTC-GC:~GC`.GT~CAACTGTC
. + . t . + . . . 2_00
GTTTGC~lil lA ! v i 1~1 ~A~CGTAC-GCCGTTACCTTTAA~'lCGilC~lCACGTTGACAG
GlrlThrGluAsnThrThrValAlaSerGlyAsnGlyAsnSerAlaSerSerAlaThrVal
____ ____+_ __ ____+____ ___ 1_ __ ____+__ _ ___+____ ____+
GTATTCGGTGCG.L~CGCC.~AGCCTGTGCA~TAA
2136
CATAAGCCACG~ L L 1 GCG~ 1' 1 1 1 CGGACACGTTATT
ValPheGlvAlaLys~rsGlnLysProValGlnTer
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO: 39:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 692 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: lineaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: protéine
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 39:
