Note: Descriptions are shown in the official language in which they were submitted.
CA 02231~61 1998-04-03
W O 97/13505 PCTIFR96/01568
UTILISATION D'UN LIGAND AGONISTE SPECIFIQUE RAR-y
POUR AUGMENTER LE TAUX D'APOPTOSE
La presente invention concerne l'utilisation de retinoïdes particuliers dans la préparation
5 d'une composition pharmaceutique en vue d'augmenter le taux d'apoptose. Ces
rétinoïdes peuvent également être utilisés dans des compositions cosmétiques en vue
notamment de prévenir eVou de lutter contre le vieillissement photoinduit ou
chronologique de la peau.
10 ll existe deux types de mécanisme impliqués dans la mort des cellules. Le premier de
type classique est appelé la nécrose. Morphologiquement, la necrose est caractérisée
par un gonflement des mitochondries et du cytoplasme et par une altération nucléaire,
suivi de la destruction de la cellule et son autolyse, ceci étant accompagné par un
phénomène d'inflammation. La necrose survient de manière passive et incidente. La
15 necrose tissulaire est genéralement due à un trauma physique des cellules ou un poison
chimique, par exemple.
L'autre forme de mort cellulaire est appelée l'apoptose [Kerr, J.F.R. and Wyllie, A.H., Br.
J. Cancer, 265, 239 (1972)], mais contrairement à la nécrose l'apoptose n'entraîne pas
20 un phénomène d'inflammation. Il est décrit que l'apoptose peut se réaliser sous
différentes conditions physiologiques. C'est une forme hautement sélective du suicide
cellulaire qui se caractérise par des phenomènes morphologiques et biochimiques
aisément observables. Ainsi, on observe notamment une condensation de la chromatine
associée ou non a une activité endonucléasique, la formation de corps apoptiques et une
25 fragmentation de l'acide désoxyribonucléique (A.D.N.) par l'activation d'endonucléases
en des fragments d'A.D.N. de 180-200 paires de bases (ces fragments peuvent êtreobservés par électrophorèse sur gel d'agarose).
L'apoptose peut être considérée comme une mort programmee des cellules impliquée30 dans le développement, la différenciation et le renouvellement tissulaire. Il est egalement
consideré que la differenciation, la croissance et la maturation des cellules sont
étroitement liées a l'apoptose et que les substances capables de jouer un rôle sur la
différenciation, la croissance et la maturation des cellules sont aussi liées au phénomène
de l'apoptose.
Dans le domaine médical, un certain nombre de situations pathologiques présente un
mécanisme d'apoptose modifié, voire déréglé. Ainsi, il est décrit qu'une modulation
volontaire de l'apoptose en l'induisant ou en la réprimant peut permettre de traiter de
nombreuses maladies, plus particulièrement les maladies liées à une hypel~urulir~r~Lion
CA 02231~61 1998-04-03
W O 97/13505 PCT~FR~6/OlS68
cellulaire, telles que dans le cas du cancer, des m~l~dies auto-immunes ou des allergies,
ou au contraire les maladies liees à une disparition cellulaire, telle que dans les cas du
syndrome d'immunodeficience du virus d'immunodeficience humain (H.l.V.), des
m~ es neuro-dégenératives (maladie d'Alzheimer) ou des dommages excessifs induits
5 lors de l'infarctus du myocarde.
De manière concrète, il a été constaté en oncologie que de nombreuses drogues
anticancéreuses, telles que la dexamethasone, la cyclophosphamide et le cisplatin, sont
capables d'induire l'apoptose.
Dans le domaine cosmétique, les signes du vieillissement cutané resultent
essentiellement d'un dysfonctionnement des principaux mécanismes biologiques de la
peau faisant notamment intervenir le mécanisme de l'apoptose. On peut donc penser
que tout produit venant induire le mécanisme de l'apoptose est un produit apte a prévenir
15 eVou lutter contre l'apparition du vieillissement et les signes de vieillissement existants,
comme les rides et les ridules.
Dans le domaine des rétinoïdes, on sait que l'acide retino7que tout-trans est un puissant
modulateur (i.e. un inhibiteur ou, au contraire, un stimulateur, selon la nature des cellules
20 traitées) de la différenciation et de la proliferation de nombreux types cellulaires normaux
ou transformés. Par exemple, il inhibe la differenciation des cellules epithéliales, tels que
les kératinocytes de l'epi~derme. Il inhibe aussi la prolifération de nombreuses cellules
transformées telles que les cellules de mélanomes. Ces effets sur la prolifération et la
differenciation peuvent affecter simultanément un même type cellulaire, comme cela est
25 par exemple le cas pour les cellules promyélocytaires humaines, référencées HL-60;
ainsi, il est connu que la prolifération de ces cellules est inhibée par l'acide rétino7que
tout-trans et, dans le même temps, que leur différenciation en granulocytes et leur
apoptose sont induites.
30 On sait, d'une manière générale, que l'acide retinorque tout-trans (all-trans retinoic acid)
agit sur la différenciation et la prolifération des cellules en interagissant avec des
récepteurs nucléaires appeles RARs (Retinoic Acid Receptors) contenus dans le noyau
cellulaire. Il existe, à ce jour, trois sous-types identifiés de récepteurs RAR appelés
respectivement RAR-a, RAR-,B et RAR-y. Ces recepteurs, aprés fixation du ligand (i.e. de
35 I'acide rétinorque tout-trans), interagissent avec la région promotrice de gènes régulés
par l'acide rétinoïque au niveau d'éléments de réponses spécifiques (RAR~). Pour se
fixer sur les éléments de réponse, les RARs s'hetérodimèrisent avec un autre type de
récepteurs connus sous le nom de RXRs. Le ligand rlaturel des RXRs est l'acide 9-cis-
CA 02231~61 1998-04-03
wo 97/13505 PCT/FR96/01568
rétinolque. Les RXRs sont considéres comme des "master regulatory proteins" car ils
interagissent avec d'autres membres de la superfamille des récepteurs
stéroïdiens/thyroïdiens pour former des hétérodimères, comme avec les RARs, tels que
le récepteur de la vitamine D3 (VDR), le récepteur de la triiodothyroxine (TR) et les
5 PPARs (Peroxisome Proliferator Activated Receptors). De plus, les RXRs peuventinteragir avec des éléments de réponse specifiques (RXRE) sous forme d'homodimères.
Ces in~e~lions complexes et l'existence de multiples récepteurs RARs et RXRs
exprimés de manière differente en fonction du tissus et du type cellulaire expliquent les
effets pléiotropiques des rétinoïdes dans pratiquement toutes les cellules.
De nombreux analogues structuraux synthétiques de l'acide rétinoïque tout-trans ou de
l'acide 9-cis-rétinolque, couramment dénommés "rétinoïdes", ont été décrits à ce jour
dans la littérature. Certaines de ces molécules sont capables de se fixer et d'activer
specifiquement les RARs ou, au contraire, les RXRs. De plus, certains analogues
15 peuvent se fixer et activer un sous-type de récepteur RAR (a, ~ ou y) particulier. D'autres
analogues, enfin, ne présentent aucune activité sélective particulière vis-a-vis de ces
différents récepteurs. A cet égard, et par exemple, I'acide 9-cis rétinoïque active à la fois
les RARs et les RXRs, sans selectivite notable pour l'un ou l'autre de ces recepteurs
(ligand agoniste non spécifique), alors que l'acide rétinolque tout-trans active, quant à lui,
20 sélectivement les RARs (ligand agoniste spécifique RARs), tous sous-types confondus.
D'une manière générale et qualitativement, une substance donnée (ou ligand) est dite
spécifique d'une famille de récepteurs donnee (respectivement vis-à-vis d'un récepteur
particulier de cette famille) lorsque ladite substance présente une affinité pour l'ensemble
des recepteurs de cette ~amille (respectivement pour le récepteur particulier de cette
25 famille) plus forte que celle qu'elle presente par ailleurs pour tous les recepteurs de toute
autre famille (respectivement pour tous les autres récepteurs, de cette même famille ou
pas).
Il est décrit que l'acide 9-cis rétinoïque et l'acide rétinoïque tout-trans sont des
30 modulateurs de l'apoptose (activateur ou inhibiteur de l'apoptose notamment en fonction
du type cellulaire) et que l'acide 9-cis rétinoïque est le plus actif de ces deux
modulateurs, ceci pouvant s'expliquer par le fait qu'il active à la fois les RARs et les
RXRs contrairement a l'acide rétinoïque tout-trans qui n'active que les RARs.
35 Compte-tenu de qui a été dit précédemment il apparaît intéressant de trouver de
nouveaux modulateurs de l'apoptose.
CA 0223l~6l l998-04-03
W O 97tl3505 PCT~FR96/01568
Dans ce sens, la Demanderesse vient de découvrir que les ligands agonistes spécihques
aux récepteurs de type RAR-y sont d'excellents inducteurs de l'apoptose dans differents
types cellulaires, et plus particulièrement dans les thymocytes.
5 Ainsi, la présente invention a pour objet l'utilisation d'au moins un ligand agoniste
spécifique aux récepteurs de type RAR-y dans la préparation d'une composition
pharmaceutique destinée à augmenter le taux d'apoptose dans au moins une population
cellulaire pour laquelle l'apoptose peut être induite par activation des récepteurs de type
RAR-y.
Elle a également pour objet l'utilisation d'au moins un ligand agoniste spécifique aux
récepteurs de type RAR-y dans une composition cosmetique en tant qu'inducteur
d'apoptose d'au moins une population cellulaire de la peau pour laquelle l'apoptose peut
être induite par activation des récepteurs de type RAR-y.
Ainsi, cette composition peut permettre de prévenir eVou de lutter contre le vieillissement
photoinduit ou chronologique de la peau, notamment par élimination par apoptose des
cellules de la peau qui présentent une déficience de leur fonction reparatrice et qui
s'accumulent dans le temps.
Elle a donc enfin pour objet un procédé cosmétique pour prévenir eVou lutter contre le
vieillissement photoinduit ou chronologique de la peau, caracterise en ce que l'on
applique sur la peau une composition cosmétique induisant l'apoptose telle que decrite
precedem ment.
La composition pharmaceutique ou cosmetique selon l'invention comprend un milieuphysiologiquement acceptable.
Par ligand agoniste specifique aux récepteurs de type RAR-y, on entend selon l'invention
30 tout ligand agoniste présentant un rapport R de la constante de dissociation de ce ligand
pour les récepteurs de type RAR-a sur la constante de dissociation de ce ligand pour les
récepteurs de type RAR-y superieur ou égal à 10 et induisant la différenciation des
cellules F9.
35 On sait en effet que l'acide rétinoïque tout-trans et certains de ses analogues sont
capables d'induire la différenciation des cellules (F9) de tératocarcinome embryonnaire
de souris, on les considère alors comme des agonistes aux récepteurs RARs. La
sécrétion de l'activateur plasminogène qui accompagne cette différenciation est un indice
CA 02231561 1998-04-03
W O 97/13505 PCTrFR96/01568
de la réponse biologique des cellules F9 aux rétinoïdes (Skin pharmacol. 1990; 3 :
pp.256-267).
Les constantes de dissociation sont déterminées au moyen de tests cl~s.siques pour
I'homme de l'art. Ces tests sont notamment décrits dans les références suivantes: (1)
"Selective Synthetic Ligands for Nuclear Retinoic Acid Receptor Subtypes" in
RETINOIDS~ F'rogress in Research and Clinical Applications, Chapitre 19 (pp 261-267),
Marcel Dekker Inc, édité par Maria A. Livrea et Lester Packer; (2) "Synthetic Retinoids:
Receptor Selectivity and Biological Activity" in Pharmacol Skin, Basel, Karger, 1993,
Volume. 5, pp 117-127; (3) "Selective Synthetic Ligands for Human Nuclear Retinoic
Acid Receptors" in Skin Pharmacology, 1992, Vo1. 5, pp 57-65; (4) "Identification of
Synthetic Retinoids with Selectivity for Human Nuclear Retinoic Acid Receptor-~" in
Biochemical and Biophysical Research Communications, Vol. 186, N~ 2, Juillet 1992, pp
977-983; (5) "Selective High Affinity RAR-a or R~R-,~ Retinoic Acid Receptor Ligands" in
Mol. Pharmacol., Vol 40, pp 556-562.
D'autres caractéristiques, aspects, objets et avantages de l'invention apparaîtront encore
plus clairement à la lecture de la description qui va suivre, ainsi que des divers exemples
concrets, mais nullement limitatifs, destinés à l'illustrer.
Parmi les ligands agonistes spécifiques aux récepteurs de type RAR-y, on peut
notamment citer l'acide 6-3-(1-Adamantyl)4-hydroxyphényl)-2-naphtano7que, I'acide (E)-
4-(1 -hydroxy-1 -(5,6,7,8-tétrahydro-5,5,8,8-tetramethyl-2naphtyl)-2-propenyl)benzoïque,
I'acide 4-[(E)-2-(3-(1-adamantyl)4-hydroxyphenyl)-1-propenyl]benzoique, I'acide
5',5',8',8'-tetramethyl-5',6',7',8'-tetrahydro-[2,2']binaphtalenyl-6-carboxylique, I'acide 2-
(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-benzo[b]thiophene-6-
carboxylique, I'acide 4-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphto[2,3-b]thiophen-2-
yl)-benzoique, I'acide 6-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalene-2-carbonyl)-
naphtalene-2-carboxylique, I'acide 3,7-dimethyl-7-(1,2,3,4-tetrahydro-1,4a,9b-trimethyl-
1,4-methano-dibenzofuran-8-yl)-2,4,6-heptatrienoique, I'acide 6-(1,2,3,4-tetrahydro-
1,4a,9b-trimethyi-1,4-methano-dibenzofuran-8-yl)-naphtalene-2-carboxylique, I'acide 6-
[hydroxyimino-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-methyl]-
naphtalene-2-carboxylique, I'acide 4-[(6-hydroxy-7-(1-adamantyl)-2-naphtyli-benzoique,
J l'acide 5-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-anthracen-2-yl)-thiophene-2-
carboxylique, I'acide (-)-6-lhydroxy-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-
yl)-methyl3-naphtalene-2-carboxylique, I'acide 6-(3-adamantan-1-yl4-prop-2-ynyloxy-
phenyl)-naphtalene-2-carboxylique, I'acide 4-[2-oxo-2-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-
tetrahydro-naphtalen-2-yl)-ethoXY]-benZoiqUe, I'acide 4-[2-oxo-2-(5,5,8,8-tetramethyl-
CA 02231~61 1998-04-03
W O 97/13505 PCT/FR96/01568
5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-acetylamino]-benzoique, I'acide 4-[2-fluoro-2-(5,5,8,8-
tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-acetylamino]-benzoique, I'acide 6-[3-(1-
adamantyl-4-(2-hydroxypropyl) phenyl]-2-naphtoique, I'acide 5-[3-oxo-3-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-propenyl~-thiophene-2-carboxylique,
I'acide 6-[3-(1-adamantyl4-(2,3-di-hydroxypropyl) phenyl]-2-naphtoique, I'acide 4-[3- .,
hydroxy-(5,6,7,8-tetrahydro-5,5,8,8,-tetramethyl-2-naphtyl)-1-propynyl]-benzoique, I'acide
4-[3-oxo-3-(5l5l8l8-tetramethyl-5l6~7~8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-prop-1 -ynyl]-
benzoique, I'acide 4-[(3-(1-methylcyclohexyl)-4-hydroxyphenyl) ethenyl]-benzoique,
I'acide 4-[(E)2-(3-(1-adamantyl)-4-hydroxyphenyl)-ethenyl]-benzoique, I'acide 4-[3-(1-
adamantyl)~-hydroxyphenylethynyl]-benzoique, I'acide 5-[3-(1-adamantyl)-4-
hydroxyphenylethynyl]-2-thiophene carboxylique, I'acide 5-[3-(1-adamantyl)-4-
methoxyphenylethynyl]-2-thiophene carboxylique, I'acide 4-[2-(3-tert-butyl-4-
methoxyphenyl)-propenyl] benzoique, I'acide 4-{2-[4-methoxy-3-(1-methyl-cyclohexyl)-
phenyl]-propenyl}-benzoique, I'acide 6-[3-(1-adamantyl)-4-(3-methoxy-2-hydroxypropyl)
phenyl]-2-naphtoique, I'acide 2-hydroxy-4-[3-hydroxy-3-(5,6,7,8-tetrahydro-5,5,8,8,-
tetramethyl-2-naphtyl)-1-propynyl]-benzoique, I'acide 6-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-
tetrahydro-naphtalen-2-yloxy)-naphtalene-2-carboxylique, I'acide 6-(5,5,8,8-tetramethyl-
5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-ylsulfanyl)-naphtalene-2-carboxylique, I'acide 4-[2-
propoxyimino-2-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-acetylamino]-
benzoique, I'acide 6-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-ylamino)-
naphtalene-2-carboxylique, I'acide 1-methyl-4-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-
anthracen-2-yl)-1 H-pyrrole-2-carboxylique, I'acide 2-methoxy-4-(5,5,8,8-tetramethyl-
5,6,7,8-tetrahydro-anthracen-2-yl)-benzoique, I'acide 4-[2-nonyloxyimino-2-(5,5,8,8-
tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-acetylamino]-benzoique, I'acide (-)-2-
hydroxy-4-[3-hydroxy-3-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-prop-1-
ynyl]-benzoique, I'acide (~)-2-hydroxy-4-[3-hydroxy-3-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-
tetrahydro-naphtalen-2-yl)-prop-1-ynyl]-benzoique, I'acide 2-hydroxy-4-[3-hydroxy-3-
(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-but-1-ynyl]-benzoique, I'acide 6-
(3-bromo-5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yloxy)-naphtalene-2-carboxylique, I'acide 3-[(5,6,7,8-tetrahydro-5,5,8,8-tetramethyl-2-naphtyl~-2H-1-
benzopyran]-7-carboxylique, I'acide 4-[3-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl)-prop-1-ynyl]-
benzoique, I'acide 4-[3-(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-prop-1-
ynyl]-benzoique, I'acide 4-[3-(5,6,7,8-tetrahydro-5,5,8,8-tetramethyl-2-naphtyl)-1-
propynyl]-salicylique, I'acide 4-[{3-(1-adamantyl)-4-(2-hydroxyethyl) phenyl} ethynyl]-
benzoique et l'acide 4-[{3-(1-adamantyl)~-(3-hydroxypropyl) phenyl} ethynyl]-benzoique.
De préférence, on utilise dans la pr~isenle invention les ligands agonistes spécifiques aux
récepteurs de type RAR-y qui présentent un rapport R superieur ou égal à 50. A ce titre,
-
CA 02231~61 1998-04-03
W O 97/13505 PCT~FR96/01568
on préfère utiliser l'acide 6-3-(1-Adamantyl)4-hydroxyphényl)-2-naphtanoïque, I'acide 6-
(5,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalene-2-carbonyl)-naphtalene-2-
carboxylique, I'acide 6-(1~2~3~4-tetrahydro-1~4a~9b-trimethyl-1~4-methano-dibenzofuran-8
yl)-naphtalene-2-carboxylique, I'acide 6-[hydroxyimino-(~,5,8,8-tetramethyl-~,6,7,8-
tetrahydro-naphtalen-2-yl)-methyl]-naphtalene-2-carboxylique, I'acide ~-(5,5,8,8-
tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-anthracen-2-yl)-thioPhene-2-carboxylique~ l'acide (-)-6-
[hydroxy-(~,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-methyl]-naphtalene-2-
carboxylique, I'acide 6-[3-(1-adamantyl~-(2-hydroxypropyl) phenyl3-2-naphtoique, I'acide
6-[3-(1-adamantyl 1-(2,3-di-hydroxypropyl) phenylj-2-naphtoique, I'acide 4-[3-(1-
adamantyl)4-hydroxyphenylethynylj-benzoique, I'acide ~-[3-(1-adamantyl)~-
hydroxyphenylethynyl]-2-thiophene carboxylique, I'acide 5-[3-(1-adamantyl)4-
methoxyphenylethynyl3-2-thiophene carboxylique, I'acide 6-[3-(1-adamantyl)4-(3-
methoxy-2-hydroxypropyl) phenyl]-2-naphtoique, I'acide 1-methyl4-(5,5,8,8-tetramethyl-
5,6,7,8-tetrahydro-anthracen-2-yl)-1 H-pyrrole-2-carboxylique, I'acide (-)-2-hydroxy4-[3-
1 5 hydroxy-3-(~,5,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-yl)-prop-1-ynyl]-benzoique
et l'acide 2-hydroxy4-[3-hydroxy-3-(5,~,8,8-tetramethyl-5,6,7,8-tetrahydro-naphtalen-2-
yl)-but-1 -ynyl]-benzoique."
L'acide 6-3-(1-Adamantyl)4-hydroxyphenyl)-2-naphtanoïque est particulierement
préferé.
Ainsi, la composition pharmaceutique comprenant le ligand agoniste spécifique aux
récepteurs de type RAR-y va pouvoir être utilisée lorsqu'une augmentation du taux
d'apoptose est nécessaire. Bien entendu, cet effet ne sera obtenu que dans des
2~ populations cellulaires pour lesquelles l'apoptose peut être induite par l'activation des
récepteurs de type RAR-y et donc notamment où des récepteurs de type RAR-y sont
présents, tels que plus particulièrement dans les cellules venant du thymus.
Une augmentation du taux d'apoptose peut s'avérer nécessaire dans principalementdeux cas. Le premier concerne les maladies ou les désordres liés a une insuffisance du
taux d'apoptose. Le second concerne les traitements necess~ires lors d'une
transplantation pour diminuer les effets de rejet de l'organe transplanté. En effet, on peut
penser que l'immunotolerance à l'organe transplanté peut être augmentée en diminuant
la réponse immunitaire des cellules T par induction de leur taux d'apoptose.
3~
Parmi les maiadies ou les désordres liés à une insuffisance du taux d'apoptose, on peut
citer plus particulièrement les desordres dus à des conditions précancéreuses ou les
cancers qui peuvent être la consequence d'une prolifération de certaines populations
CA 0223l~6l l998-04-03
W O 97/13S05 PCT~FR96/01~68
cellulaires, les maladies auto-immunes, les allergies ou les réactions inflammatoires,
dans lesquelles on observe un nombre trop élevé de cellules causant des dommages, ou
encore dans certaines infections virales dans lesquelles des proteines du virus ont un
effet anti-apoptotique. Ainsi, dans les maladies auto-immunes, on peut citer plus
particulièrement le diabete insulino-dépendant, I'hépatite chronique active, I'arthrite
rhumatoïde, le pemphigus, la sclérose en plaques, la myasthénie, I'érythème lupus
systémique, la maladie de Crohn et le psoriasis. Dans les conditions pre-cancereuses,
on peut citer la kératose actinique. Dans le cas du cancer, on peut plus particulièrement
citer les Iymphomes, les carcinomes, tels que le cancer de la sphère O.R.L., et les
10 tumeurs hormone-dépendante, telles que les cancers des ovaires. Parmi les infections
virales mentionnées ci-dessus, on peut notamment citer les virus de l'herpès, les
adénovirus et les virus de la variole (pox viruses). Parmi les allergies ou les réactions
inflammatoires, on peut citer l'eczéma de contact, I'eczéma atopique, I'asthme et les
urticaires
L'administration de la composition selon l'invention peut être effectuée par voie enterale,
parenterale, topique ou oculaire. De préference, la composition pharmaceutique est
conditionnée sous une forme convenant à une application par voie systémique (pour
injection ou perfusion).
Par voie entérale, la composition, plus particulièrement la composition pharmaceutique,
peut se présenter sous formes de comprimés, de gélules, de dragées, de sirops, de
suspensions, de solutions, de poudres, de granulés, d'emulsions, de microsphères ou
nanosphères ou vesicules lipidiques ou polymériques permettant une libération
25 contrôlee. Par voie parenterale, la composition peut se présenter sous forme de solutions
ou suspensions pour perfusion ou pour injection.
Les ligands agonistes spéciflques aux récepteurs de type RAR-y utilisés selon l'invention
sont generalement administrés à une dose journalière d'environ 0,01 mg/kg à 100 mg/kg
30 en poids corporel en 1 à 3 prises.
Par voie topique, la composition pharmaceutique ou cosmétique selon l'invention est plus
particulièrement destinée au traitement de la peau et des muqueuses et peut se
présenter sous forme d'onguents, de crèmes, de laits, de pommades, de poudres, de
35 tampons imbibés, de solutions, de gels, de sprays, de lotions ou de suspensions. Elle
peut éga!ement se présenter sous forme de ~icrusphères ou nanosphères ou vésicules
lipidiques ou polymériques ou de patches polymériques et d'hydrogels permettant une
CA 02231~61 1998-04-03
W O 97/13505 PCTAFR96/01568
libération controlée. Cette composition par voie topique peut se présenter soit sous forme
anhydre, soit sous forme aqueuse.
Par voie oculaire, ce sont principalement des collyres.
Les ligands agonistes spécifiques aux récepteurs de type RAR~y sont utilises par voie
topique ou oculaire à une concentration généralement comprise entre 0,001 % et 10 %
en poids, de préférence entre 0,1 et 1 % en poids, par rapport au poids total de la
composition .
La présente invention a enfin pour objet un procédé pour prévenir et/ou lutter contre le
vieillissement photoinduit ou chronologique de la peau, caractérisé en ce que l'on
applique sur la peau une composition cosmétique induisant l'apoptose telle que décrite
précédemment, c'est à dire comprenant dans un milieu cosmétiquement acceptable au
15 moins un ligand agoniste spécifique aux récepteurs de type RAR-y.
Les compositions telles que décrites précédemment peuvent bien entendu en outre
contenir des additifs inertes ou même pharmacodynamiquement actifs ou des
combinaisons de ces additifs, et notamment: des agents mouillants; des agents
20 dépigmentants tels que l'hydroquinone, I'acide azélaïque, I'acide caféique ou l'acide
kojique; des émollients; des agents hydratants comme le glycerol, le P~G 400, lathiamorpholinone, et ses dérivés ou bien encore l'urée; des agents antiséborrhéiques ou
antiacneiques, tels que la S-carboxyméthylcysteine, la S-benzyl-cysteamine, leurs sels
ou leurs dérivés, ou le péroxyde de benzoyle; des agents antifongiques tels que le
25 kétoconazole ou les polyméthylène~,5 isothiazolidones-3; des antibactériens, des
carotenoïdes et, notamment, le ~carotène; des agents anti-psoriatiques tels que
l'anthraline et ses dérivés; et enfin les acides eicosa-5,8,11,14-tétraynoïque et eicosa-
5,8,11-trynoïque, leurs esters et amides.
30 Ces compositions peuvent également contenir des agents d'amélioration de la saveur,
des agents conservateurs tels que les esters de l'acide parahydroxybenzoïque, les
agents stabilisants, des agents régulateurs d'humidité, des agents régulateurs de pH,
des agents modificateurs de pression osmotique, des agents emulsionnants, des filtres
UV-A et UV-B, des antioxydants, tels que l'a-tocopherol, le butylhydroxyanisole ou le
35 butylhydroxytoluène.
Bien entendu, I'homme du métier veillera à choisir le ou les éventuels composes à
ajouter à ces compositions de telle manière que les propriétés avant~ge~lses attachées
CA 0223l~6l l998-04-03
W O 97/13505 PCT~FR96/01568
intrinsèquement a la présente invention ne soient pas ou substantiellement pas altérees
par l'addition envisagee~
On va maintenant donner, à titre nullement limitatif, plusieurs exemples destinés à
illustrer la présente invention.
FXEMPI F 1
Cette expérience montre l'effficacité in vivo de ligand agoniste spécifique de RAR~ en tant
qu'inducteur d'apoptose.
Des souris mâles NMRI de 4 semaines (vendus par la société LATI, Godollo, Hongrie)
15 ont été utilisées. Pour l'induction de l'apoptose dans le thymus, ces souris mâles ont été
traitées par injection unique avec soit 0,5 mg de dexamethasone, soit avec 0,5 mg de
l'acide 6-3~ Adamantyl)4-hydroxyphényl)-2-naphtanoïque, dissout dans un mélange de
0,8 ml de sérum physiologique et 0,2 ml d'ethanol.
20 La dexamethasone est un inducteur bien connu de l'apoptose. Ainsi, on observe une
involution du thymus: diminution du poids du thymus d'environ 75%, 48 heures après le
traitement indiqué ci-dessus. Il en est de même avec l'acide 6-3-(1-Adamantyl)4-hydroxyphényl)-2-naphtanoïque pour lequel on observe une diminution du poids du
thymus d'environ 60%, 48 heures apres le traitement.
De plus, de manière parallele a ce test, des prelèvements de thymus ont été effectués à
partir d'animaux non traités ou traités à différents temps après le traitement. Après
lavage et homogénéisation, I'activite transglutaminase a eté déterminée en détectant
l'incorporation de [ H]putrescine dans du N,N'-diméthylcaseine. L'activité de la30 transglutaminase est calculée en nmoles de [ H]putrescine incorporé dans la protéïne
par heure.
La transglutaminase tissulaire est décrite comme un des éléments effecteurs de
l'apoptose [Piacentini, M. et al. (1994) Apoptosis: The Molecular Basis of Apoptosis in
Disease. Curr. Comm. in Cell & Mol. Biol8. (Tomei L.D. and Cope, F.O ed.) PP. 143-
35 1 65]
Ainsi, on observe que l'involution du thymus décrite ci-dessus résultant du traitement de
la souris avec un ligand agoniste spécifique de R~Ry est un évènement concormmitant et
proportionnel à l'activité de la transgluLar"il-ase tissulaire.
CA 02231561 1998-04-03
W O 97/13505 PCT~FR96/01568 11
De plus~ cette involution du thymus est corrélée avec l'apparition de fragments d'ADN
après analyse par électrophorèse sur gel d'agarose de l'ADN récupéré de ce thymus
traité (détails du mode opératoire dans l'exemple 2).
J
FXFl\Apl F ~
Cet exemple met en évidence l'efficacité in vitro en tant qu'inducteur d'apoptose de
ligand agoniste spécifique de RARy comparé à d'autres types de rétinoïdes.
Culture et préparation des cellules
Des suspensions de thymocytes sont préparées à partir des glandes de thymus des
souris mâles NMRI de 4 semaines (vendus par la société LATI, Godollo, Hongrie) non
traités. Le milieu utilisé est le milieu RPMI 1640 de Sigma supplémenté en sérum de
veau fétal de Gibco, 2mM de glutamine, 100UI de pénicilline et 100 ,ug de
streptomycine/ml. Les thymocytes sont ensuite lavees et diluées pour obtenir uneconcentration finale de 10 cellules/ml, avant incubation à 37~C dans un incllh~tellr
humidifié sous un atmosphere de 5% de C02 et 95% d'air. La mort des cellules estmesurée par la prise de bleu de trypan.
Analyse qualitative et quantitative de l'ADN
Les thymocytes sont incubees dans 24 puits avec divers composés à tester à différentes
concentrations. Après 6 heures d'incubation, 0,8ml de suspensions cellulaires ont été
Iysées par addition de 0,7 ml de tampon de Iyse contenant 0,5% (v/v) de Triton X-100,
10mM Tris, 20mM EDTA, pH 8,0, avant centrifugation pendant 15 minutes à 130009.
- Analyse quantitative de l'ADN: La teneur en ADN dans le surnageant (les fragments) et
le culot (chromatine intacte) a été précipitée avec une quantité équivalente de 10%
d'acide trichloroacétique, resuspendue dans 5% d'acide trichloroacétique, puis quantifiée
en utilisant le réactif diphénylamine (Burton, K. (1956) Biochem. J.. 62, 315-322).
,.
- Analyse qualitative de l'ADN: En parallele, le surnageant a été précipité pendant une
nuit dans de l'éthanol contenant 0,15mM de NaCI. Les culots sont rerlEcsout~ dans un
35 tampon contenant 1 OmM Tris, 1 mM d'EDTA, pH 8,0, traités à la RNase,
séquentiellement extraits à volume égal de phénol, chloroforrne/isoamylalcool (24/1) et
précipités dans de l'éthanol avant électrophorèse pendant 3 heures a 60V dans 1,8% de
gel d'agarose. Les fragments d'ADN ont ensuite été visualisés par UV après avoir coloré
CA 0223l~6l l998-04-03
W O 97/13505 PCT~FR96/01568
12
Ie gel avec du bromure d'éthidium. Les gels obtenus présentent l'image d'une échelle de
fragments d'ADN multiples de 180 a 200 paires de bases typiques d'une induction
d'apoptose. Le degre de fragmentation est corrélé avec le nombre de cellules mortes
positives selon le test au bleu de trypan tout le long des expériences.
Les resultats de l'analyse quantitative sont rassemblés dans le tableau 1 suivant.
quantités de% de
composés Kd RARa Kd RARy R composesfragments
(nM) d'ADN
ATRA 15,5 3 5,16 10 2
10-6 4
9-cisRA 7 17 0,41 10 8 4
10-6 1~
CD437 6500 77 84,42 10 12
1 o~6 22
CD666 2240 68 32,94 10 10
1 o~6 20
CD2325 1144 53 21,58 10 8 5
10-6 20
CD2019 1100 160 6,87 10 0
10-6 15
Tableau 1
ATRA est l'acide rétinoïque tout-trans
9-cisRA est l'acide 9-cis rétinoïque
CD437 est l'acide 6-3-(1-Adamantyl)-4-hydroxyphényl)-2-naphtanoïque,
CD666 est l'acide (E)-4-(1-hydroxy-1-(5,6,7,8-tétrahydro-5,5,8,8-tetramethyl-2naphtyl)-2-
propenyl)benzoïque,
CD2325 est l'acide 4-~(E)-2-(3-(1-adamantyl)-4-hydroxyphenyl)-1-propenyl]benzoïque,
CD2019 est l'acide 6-(3-(1-methylcyclohexyl)4-methoxyphenyl)-2-naphtanoïque
Le pourcentage de fragment d'ADN dans ce tableau correspond à la différence de
pourcentage de fragment d'ADN obtenu dans des thymocytes traitées et du pourcentage
CA 02231561 1998-04-03
W O 97/13505 PCT/FR96/01568
13
de fragment d'ADN obtenu dans des thymocytes non traitées (taux basal d'apoptose de
ces thymocytes).
~ Ces résultats montrent que plus R augmente, plus le pourcentage d'apparition de
5 fragments d'ADN augmente. Ainsi, pius le ligand est spécifique de RAR~, plus l'effet
d'inducteur dSapoptose est grand.
