Note: Descriptions are shown in the official language in which they were submitted.
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-1-
NUIIYEAL~ DÉRIVES 1.1'HYDRU~YALHYLE INIIOLOGARBAZC~LE~
LEUR PRQGED~E DE PREPARATTON
ET LES GOl!<TPf~~~TTt.~NS~ PHAR1~IAGEUTI(~~,tES ~U~ LES G(7~NT~ENNENT
La présente invention concerne de nouveaux dérivés d'hydroxyalkyle
indolocarbazole, leur
procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les
contiennent.
Les composés de la présente invention constituent des dérivés de la
rebeccamycine, ce
produit présentant une activité inhibitrice de la topoisomérase I la rendant
particulièrement
utile dans le traitement des tumeurs. De nombreuses modifications chimiques de
la
rebeccamycine ont été réalisées, tant au niveau des groupes fonctionnels
présents sur la
lo molécule (WO 98/07433) que de leurs positions sur le squelette hexacyclique
(WO
00/64917), en vue d'en améliorer les propriétés thérapeutiques.
Les composés décrits par la Demanderesse présentent de façon surprenante une
activité
inhibitrice sélective sur une famille de kinase et plus spécifiquement sur la
kinase GSK-3
(glycogène synthase kinase).
La Glycogène Synthase Kinase 3 est présente dans la plupart des tissus chez
l'homme
(muscle, foie, pancréas, ceeur, intestin, ...). Cette enzyme est impliquée
dans la voie de
signalisation de l'insuline. Ainsi, l'insuline par la voie de la PI 3-kinase
inhibe la GSK-3
conduisant alors à une augmentation de la synthèse de réserves sous forme de
glycogène.
La GSK-3 phosphoryle également les protéines substrats de l'insuline
entraînant une
2o désensibilisation des voies de stimulation de l'insuline. Des expériences
conduites chez le
rat Zucker (obèse et diabétique) ont montré que l'inhibition de la GSK-3
conduit à une
stimulation du transport du glucose. Il a également été constaté que
l'activité de la GSK-3
était augmentée dans des modèles ou dans des situations pathologiques chez
l'animal
comme chez l'homme (diabète de type II). De plus des éléments permettent de
démontrer
que l'inhibition de l'activité de la GSK-3 permet de prévenir la mort
neuronale chez des
sujets atteints de pathologies neurodégératives, ainsi que de prévenir la mort
des cellules
saines chez un sujet atteint d'affection tumorale et traiter par des agents
cytotoxiques.
FEUILLE DE REMPLACEMENT (RÉGLÉ 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
Les composés capables d'inhiber la synthèse de la GSK-3 sont donc
particulièrement utiles
pour le traitement du diabète de type II, de l'obésité, des pathologies du
système nerveux
central, de la maladie d'Alzheimer, de la maladie de Parkinson, et pour
prévenir l'apoptose
des cellules normales induite par les médicaments anticancéreux.
Ainsi les composés décrits par la Demanderesse, outre le fait qu'ils soient
nouveaux,
présentent de façon inattendue une activité inhibitrice sélective vis-à-vis de
la Glycogène
Synthase Kinase 3, les rendant particulièrement utiles pour leur utilisation
en tant que
médicament, dans le traitement des pathologies mentionnées précédemment.
Plus particulièrement, la présente invention concerne les composés de formule
(I)
R1
HO-Rb -OH
''4 l'3
dans laquelle
~ Ri et RZ, identiques ou différents, indépendamment fun de l'autre,
représentent chacun
un groupement choisi parmi hydrogène, alkyle (C1-Cg) linéaire ou ramifié,
arylalkyle
(Cl-C6) linéaire ou ramifié, hydroxy, hydroxyalkyle (Cl-C6) linéaire ou
ramifié,
dihydroxyalkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié, alkoxy (C1-C6) linéaire ou
ramifié,
alkoxy(C1-C6)alkyle(C1-C6) linéaire ou ramifié, amino et aminoalkyle (C1-C6)
linéaire
ou ramifié, la partie amino dans chacun des groupements étant éventuellement
substituée par un ou deux groupements, identiques ou différents, choisi parmi
alkyle
(Cl-C6) linéaire ou ramifié, aryle et arylalkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié,
~ Ra et Rb, identiques ou différents, indépendamment fun de l'autre,
représentent
chacun une chaîne alkylène (C1-C6) linéaire ou ramifié,
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-3-
~ X1, XZ et X~, identiques ou différents, indépendarmnent fun de l'autre,
représentent
chacun un groupement choisi parmi hydroxy, alkoxy (Cl-C~) linéaire ou ramifié,
aryloxy, arylalkoxy (C1-C~) linéaire ou ramifié, alkyle (C1-C6) linéaire ou
ramifié,
amino (éventuellement substitué par un ou deux groupements, identiques ou
différents,
alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié), halogène, alkylcarbonyloxy (Cl-C6)
linéaire ou
ramifié, et azido,
représente un groupement méthylidène ou un groupement de formule -Rc-Xl dans
laquelle Rc représente une liaison simple ou un groupement méthylène, et Xl
est tel que
défini précédemment,
lo leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base
pharmaceutiquement
acceptable,
étant entendu que par groupement aryle on comprend un groupement phényle ou
naphtyle,
et par isomères on comprend les isomères optiques (racémates, énantiomères et
diastéréoisomères).
Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non
limitatif les
acides chlorhydrique, brornhydrique, sulfurique, phosphonique, acétique,
trifluoroacétique,
lactique, pyruvique, malonique, succinique, glutarique, fumarique, tartrique,
maléïque,
citrique, ascorbique, oxalique, méthane sulfonique, camphorique, etc.....
Parmi les bases phannaceutiquement acceptables, on peut citer à titre
indicatif (hydroxyde
2o de sodium, l'hydroxyde de potassium, la triéthylamine, la tertbutylamine,
etc.. .........
Les groupements Rl préférés des composés de l'invention sont l'atome
d'hydrogène, le
groupement alkyle (C1-C6) linéaire ou ramifié ou hydroxyalkyle (Cl-C6)
linéaire ou
ramifié.
Le groupement RZ préféré des composés de (invention est (atome d'hydrogène.
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-4-
Selon une variante avantageuse de l'invention, les composés préférés sont les
composés de
formule (I) dans lesquelles Ra et Rb, identiques, représentent une chaîne
alkylène (C1-C3)
linéaire.
Les groupements Xl, X2 et X3 préférés, des composés de (invention sont choisis
parmi les
groupements hydroxy, alkoxy (C1-C6) linéaire ou ramifié et alkylcarbonyloxy
(C1-C6)
linéaire ou ramifié.
Les groupements X4 préférés, des composés de (invention sont choisis parmi les
groupements -Rc-Xl dans lesquels Rc représente un groupement méthylène et Xl
représente un groupement choisi parmi hydroxy, halogène, alkoxy (Cl-C6)
linéaire ou
l0 ramifié et alkylcarbonyloxy (C1-C6).
Selon une variante avantageuse de l'invention, les composés préférés sont les
composés de
formule (IA)
Ri
HO-Rb Ra-OH
(IA)
dans laquelle Rl, R~, Ra, Rb, Xl, XZ , X3 et X4 sont tels que définis dans la
formule (I).
Le composé préféré de (invention est le 3,9-bis(hydroxyméthyl)-12-(4-O-méthyl-
(3-D-
glucopyranosyl)-12,13-dihydro-SH indolo[2,3-a]pyrrolo[3,4-c]carbazole-5,7(6I~-
dione
Les isomères ainsi que les sels d'addition à un acide ou à une base
pharmaceutiquement
acceptable des composés préférés font partie intégrante de l'invention.
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
"4 '~3
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-5-
La présente invention concerne aussi le procédé de préparation des composés de
formule
(I), caractérisé en ce qu'on utilise comme produit de départ un composé de
formule (II)
H
I
O
(II)
~4
dans laquelle X1, Xz, X3 et X4 sont tels que définis dans la formule (I),
composé de formule (II), qui est soumis à des conditions d'hydrogénolyse en
présence de
nickel de Raney et de soude, pour conduire au composé de formule (III)
(III)
1V 1V
~11
H
X2
X4 X3
dans laquelle X1, Xz, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (III) qui est soumis à l'action d'un composé de formule
(IV)
lo Rl-NH2 (IV)
dans laquelle Rl est tel que défini dans la formule (I),
pour conduire au composé de formule (V)
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-6-
R1
O_~ .N.
'~4
dans laquelle Rl, Xl, Xz, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (V) qui est mis à réagir avec du a,a-
dichlorométhylméthyléther en
présence d'un acide de Lewis pour conduire au composé de formule (VI)
H
dans laquelle Rl, Xl, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (VI) dont les fonctions aldéhydes sont réduites par action
d'un agent
réducteur couramment utilisé en synthèse organique, pour conduire au composé
de formule
(I/a), cas particulier des composés de formule (I)
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
R~
ll 1~T l1
(I/a)
OH
dans laquelle Rl, Xl, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (I/a) qui est transformé en son dérivé dihalogéné
correspondant selon
des conditions usuelles de la chimie organique, puis mis à réagir avec un
cyanure alcalin en
présence de diméthylsulfoxyde, pour conduire au composé de formule (VII)
~i
n ~T n
(VII)
CN
dans laquelle R1, X1, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (VII) qui est transformé en ester selon des conditions
classiques puis
soumis à un agent réducteur pour conduire au composé de formule (I/b), cas
particulier des
l0 composés de formule (I)
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
~4 '~3
'14 '~3
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
_g_
(I/b)
HO OH
~4 "3
dans laquelle R1, X1, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment,
composé de formule (I/b) qui peut être soumis de nouveau, et de façon
répétitive, à la
même série de réactions ayant conduit aux composés de formules (VII) et (I/b)
à partir des
composés de formule (I/a), pour conduire au composé de formule (I/c), cas
particulier des
composés de formule (I)
Ri
n N n
(I/C)
HO- Ra-OH
dans laquelle R1, X1, X2, X3 et X4 sont tels que définis précédemment, et Ra
et Rb sont tels
que définis dans la formule (I),
lo composé de formule (I/c) qui peut être soumis à faction d'un composé de
formule (VIII)
RZâ Hal (VIII)
dans laquelle RZa a la même définition que RZ dans la formule (I) à (exception
de la
définition atome d'hydrogène,
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
~4 "3
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-9-
pour conduire au composé de formule (I/d), cas particulier des composés de
formule (I)
Ri
(I/d)
HO- -OH
dans laquelle Rl, Ra, Rb, Xl, Xa, X3, X4 et R2a sont tels que définis
précédemment,
les composés de formule (I/a) à (I/d) formant (ensemble des composés de
formule (I), que
l'on purifie, le cas échéant, selon des techniques classiques de purification,
qui peuvent, si
on le désire, être séparés en leurs différents isomères, selon une technique
classique de
séparation, dont on module les substituants Xi, X2, X3 et X4 selon les
méthodes classiques
de la synthèse organique utilisées dans le domaine de la chimie des sucres, et
que l'on
transforme, si on le souhaite, en leurs sels d'addition à un acide ou à une
base
1o pharmaceutiquement acceptable.
Les composés de formule (II), (IV), et (VIII) sont soit des composés
commerciaux, soit
obtenus selon des méthodes classiques de la synthèse organique facilement
accessibles à
l'homme du métier.
Les composés de formule (1~ possèdent une activité inhibitrice sélective GSK-3
(glycogène
Synthase Kinase-3) tout à fait surprenante. Cette propriété caractéristique
permet leur
utilisation dans le traitement du diabète de type II, de l'obésité, des
pathologies du système
nerveux central, de la maladie d'Alzheimer, de la maladie de Parkinson, et
pour l'apoptose.
La présente invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques
renfermant comme principe actif au moins un composé de formule (I), un de ses
isomères,
ou un de ses sels d'addition à un acide ou à une base pharnaceutiquement
acceptable, seul
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
~4 '~3
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-10-
ou en combinaison avec un ou plusieurs excipients ou véhicules inertes, non
toxiques,
pharmaceutiquement acceptables.
Parmi les compositions pharmaceutiques selon (invention, il sera cité plus
particulièrement
celles qui conviennent pour (administration orale, parentérale (intraveineuse,
intramusculaire, ou sous-cutanée), per ou trans-cutanée, intravaginale,
rectale, nasale,
perlinguale, buccale, oculaire ou respiratoire.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention pour les injections
parentérales
comprennent notamment les solutions stériles aqueuses et non aqueuses, les
dispersions,
les suspensions ou émulsions ainsi que les poudres stériles pour la
reconstitution des
lo solutions ou des dispersions injectables.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention, pour les administrations
orales
solides, comprennent notamment les comprimés simples ou dragéifiés, les
comprimés
sublinguaux, les sachets, les gélules, les granules, et pour les
administrations liquides
orales, nasales, buccales ou oculaires, comprennent notamment les émulsions,
les
solutions, les suspensions, les gouttes, les sirops et les aérosols.
Les compositions pharmaceutiques pour fadministration rectale ou vaginale sont
préférentiellement des suppositoires, et celles pour l'administration per ou
trans-cutanée
comprennent notamment les poudres, les aérosols, les crëmes, les pommades, les
gels et les
patchs.
2o Les compositions pharmaceutiques citées précédemment illustrent (invention
mais ne la
limitent en aucune façon.
Parmi les excipients ou véhicules inertes, non toxiques, pharmaceutiquement
acceptables,
on peut citer à titre indicatif et non limitatif les diluants, les solvants,
les conservateurs, les
agents mouillants, les émulsifiants, les agents dispersants, les liants, les
agents gonflants,
les agents désintégrants, les retardants, les lubrifiants, les absorbants, les
agents de
suspension, les colorants, les aromatisants, etc...
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-11-
La posologie utile varie selon (âge et le poids du patient, la voie
d'achninistration, la
composition pharmaceutique utilisée, la nature et la sévérité de (affection,
et la prise de
traitements associés éventuels. La posologie s'échelonne de 0,5 mg à 500 mg en
une ou
plusieurs prises par jour.
Les exemples suivants illustrent (invention mais ne la limitent en aucune
façon.
Les produits de départ utilisés sont des produits connus ou préparés selon des
modes
opératoires connus. Les différents stades de préparation conduisent à des
intermédiaires de
synthèse utiles pour la préparation des composés de (invention.
Les structures des composés décrits dans les exemples et dans les préparations
ont été
déterminées selon les techniques spectrophotométriques usuelles (infrarouge,
résonance
magnétique nucléaire, spectrométrie de masse, ...).
Exemple 1 3,~-lais(hydroxymëth~l)-12-(4-p-.méth~l-~i..D-glucap~ranos~l)-12,13-
dih~dro-â.FI indala[~,3-ajpxrz~aip[3~4-c]carbazaie-S,T(~~-digne,
,~'tcz~~ A : 12-(~,3,C-tri-(1-acétyl-4-A-méth~l-~-I)-glucopyranasyl)-12,13-
dihydra-S
indolo[2,â-ac]pyrralo[3,4-c]carbazole-S,~l(6~-digne,
A 0,136 mmol de rebeccamycine déchlorée sont additionnés successivement, à
0°C,
1,37 mmol d'anhydride acétique et 3 mmol de pyridine. Après 19 heures
d'agitation à
température ambiante, le milieu réactionnel est jeté sur de la glace et
extrait à (acétate
d'éthyle. La phase organique est lavée par une solution de Na2C03, puis par
une solution
saturée en NaCI, séchée sur sulfate de magnésium et concentrée. Une
chromatographie sur
gel de silice du résidu (acétate d'éthyle) permet d'isoler le produit attendu.
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-12-
Stade B ; 3,9-Diiorm~I-12-(2~3,6-tri-Q-acetyl-4-Q-méthyl-~i-D-glucopyxanasyl)_
12,1.3-dihydro-S.~ ïnd~Io[~,3-a]py~rolo~[3~4-~]~arl~a~~Ie-S~'~(61~-dianc,
A une solution de 0,12 nunol du composé obtenu au stade A dans 2 ml de
dichlorométhane
sont additionnés 2,4 mmol de a,a-dichlorométhyl méthyl éther. Le mélange est
refroidi à
0°C et 2,4 mmol d'une solution 1M de TiCl4 dans le dichlorométhane sont
ajoutés, puis le
milieu est agité à température ambiante pendant 24 heures. Après hydrolyse, et
extraction
au dichlorométhane, la phase organique est lavée par une solution saturée en
NaCI, séchée
sur sulfate de magnésium et concentrée permettant d'obtenir le produit
attendu.
Stac~~ ~' ; 3,9-Ili~armyl-1~-(4-Q-m.~thyl-~i-D~-~Incopyranasyl)-1~~13-dïhydra-
âT'l-
i o indalar [2,3-~] gyrralo [~,4-~] cary a~vlc-âx'ï(6H~-dionc,
Le composé obtenu au stade B est dissous dans 13 ml de méthanol, puis 6 ml
d'une
solution aqueuse à 30% de NH40H sont ajoutés. Après 24 heures d'agitation à
température
ambiante, le milieu réactionnel est évaporé à sec. Le résidu est dissous dans
un mélange
acétate d'éthyle/tétrahydrofurane, acidifié par une solution 1N d'acide
chlorhydrique puis
extrait à (acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur sulfate de
magnésium et
évaporée sous pression réduite. Une chromatographie sur gel de silice du
résidu
(cyclohexane/acétone : 20/80) permet d'isoler le produit attendu.
Point de fusiofa : > 300°C
Stad~.l,~ : 3,~-bïs(hydroxyméthyl)-12-(4-Gl-mëthyl-~-I~-gIucopy~anosyl)-12~1~-
2o dïhydro-S.~-indoLa[2,â-a]Pyr~rolA[~,4-~]ca~rbazole-5,7(6F.~-dïone,
A une solution de 0,09 mmol du composé obtenu au stade C dans 28 ml de
méthanol sont
additionnés 20 mg de nickel de Raney (1/1 en poids dans (eau). Le mélange est
agité
3 jours à température ambiante sous une pression d'hydrogène de 1 bar. Après
filtration sur
célite et lavages successifs du solide par du méthanol, du tétrahydrofurane et
de l'acétone,
les solvants sont évaporés. Une chromatographie sur gel de silice du résidu
(cyclohexane/acétone : 1/1) permet d'isoler le produit attendu.
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-13-
Point de fusion : > 300°C
Ira aYOU e (KBr) : v~o = 1720, 1740 cm-1; vNHOH = 3100-3600 cfri 1
~xemnle 2 : 3,9-bïs(hydraxym~thyl)-G-m~th~l 12-(4-O-méxh~l ~3-D-
glucop~ranosyl)-12,13-dïhxdro-~H;indarlo[2,3-~]pyrrolo
s [3x4-c] carbazoIc-5,7-dione,
Stade ~I : l~-(4-O-mëthyl-~i-.D-glucop~ranos~l~-12~I~-dih~drofuro[3,4-~~
indalo [2,3-a] carb~~ole-~,'7-dionc,
Une solution de 0,40 mmol de 12-(4-O-méthyl-(3-D-glucopyranosyl)-12,13-dihydro-
5H
indolo[2,3-a]pyrrolo[3,4-c]carbazole-5,7-dione, 420 mg de soude et 70 ml d'eau
est portée
lo à reflux pendant 3 heures, puis diluée, acidifiée par une solution aqueuse
d'acide
chlorhydrique 1N et extraite à (acétate d'éthyle. La phase organique est
lavée, séchée,
filtrée puis concentrée sous pression réduite. Une chromatographie sur gel de
silice (acétate
d'éthyle/cyclohexane : 80/20) permet d'isoler le produit attendu.
Stade 13 : 6-mélhyl-12-(4-Q-mê~hyl-[3-I11-glucop~ranosyl)_12,13-dihydro-SH
15 ïndolo[2,3-a]pyrrolo[3,4-c]carba~olc-5,?-dîonc.
0,12 mmol du composé obtenu au stade A et une solution 2M de méthylamine dans
14 ml
de tétrahydrofurane sont agités à 70°C pendant 16 heures. Après
refroidissement, le
mélange réactionnel est hydrolysé entraînant la formation d'un précipité. Ce
dernier est
purifié par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane :
80/20)
2o permettant d'isoler le produit attendu.
Siade G' : 3,9-bis(hydroxyméthyl)-â-méihyl-12-(4-Q-mé~hyl-~i-D-
glucopyranasyl)_
12x13-dihydro-SH ïndola[2,~-a~]pyrrolo[3,4-c~]carba2ole-~,7-diono,
Le produit est obtenu selon le procédé de l'exemple 1, des stades A à D, en
utilisant comme
substrat le composé obtenu au stade B précédent.
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-14-
Exemple ~ : â-(2-h~droxyéthyl)-3,~-his(hydroxyméth~l)-12-(4..()-méthyl-~i-.Ta-
glucopyranosyl)-.12,1-dihydro-aH ïndolo[2,3-a~pyrrolo[3,4-.e~
carlaazale-S,'1-diane,
Stade A : 6-(2-hydroxyêthyl)-12-(4-Q-méthyl-~i-D-glueopyranosyl)-12,13-dih~dr4-
s SIS indolo[2,3-~]p~rrolo[3,4-clearbazale-5,'~-diane.
Une solution de 0,30 mmol du composé obtenu au stade A de l'exemple 2 et 1,3
ml
d'éthanolamine est agitée 1 heure à température ambiante, puis jetée sur de la
glace et
extraite à l'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée, filtrée puis
concentrée sous
pression réduite. Une chromatographie sur gel de silice (acétate
d'éthyle/cyclohexane)
l0 permet d'isoler le produit attendu.
~t~â~ ~' a ~-(2-h~drc~x~éthyl)-3,~-l~xs(hyd~ox~mëth~l)-1 ~-(4-Q-méth~l-~-Ll-
glueopyrana~s~l)-12,13-dihydro-SH i~ndala[2,3-c~]p~rrc~la[3,4-cjear~ra~ole-
5,7-diane,
Le produit est obtenu selon le procédé de l'exemple 1, des stades A à D, en
utilisant comme
15 substrat le composé obtenu au stade A précédent.
Exemple 4 : 6-diéthylaminoéthyl-~3,9-bis(hydroxyméthyl)-12-(4-Q-~néthyl-~r-D-
glucopyranosyl)-12,13-dihydro-SH indolo[2,3-c~]pyrrolo[3,4..~~
earba~ole-5,7-diane.
~Stac~~ A : G-diéthylaminoëthyl-12-(4-f~-méthyl-(3-D-glucopyranosyl)-
12,13..dïhydro-
2o â:~l indolo[2,3-ç~j~yrrolo[3,4-clcarbazole-S,T-diane,
A une solution de 60 mg du composé obtenu au stade A de l'exemple 2 dissous
dans 7 ml
de tétrahydrofurane sec, sont ajoutés goutte à goutte 26 ~,1 de N,N-
diéthyléthylènediamine.
Le mélange réactionnel est porté à 6s°C pendant 4 jours à l'abri de la
lumière puis refroidi
et repris par un mélange (solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1N/acétate
d'éthyle).
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-15-
Après extraction à l'acétate d'éthyle, la phase organique est séchée, filtrée
puis concentrée
sous pression réduite. Une chromatographie sur gel de silice permet d'isoler
le produit
attendu.
StadeB: ~-dîéthylamïnQ~~hyl-~,~-lais(hydraxym~~h~l~-1~-(4-Q-méthyl-[3-Ia-
s glucapxranosyl)-12,13-dîhydra-5H-indala[2,~-a~p~rrala[3,4-c~carbazale-.
a,7-dîane.
Le produit est obtenu selon le procédé de l'exemple 1, des stades A à D, en
utilisant comme
substrat le composé obtenu au stade A précédent.
em 1 : 3,~-l~ls(h~d~roxyméthyl)-l~-(~,â,6-~rï-A-acé~l-4-G-mêthyl-(3-la-
~luGapyranasyl~-l~,l.~-dîhydra-aI~ indala[2,~-a~]pyrrala[~,4-~]
carba~ale-~,'~(ô~-dïane.
Le produit est obtenu selon le procédé du stade D de l'exemple 1, en utilisant
comme
substrat le composé obtenu au stade B de l'exemple 1.
Exemple 6 : â,9-bîs(hydraxyméthyl~-12-(f-chlara-h-déaxy-4. (l..méxhyl-(3-D-
ts glucapyranasyl)-~.2;,a.~-dihydra-â~I îndala[~,3-~~pyrrala[~,4-cj
carbazale-S,7(6~-diane.
StadeA: ~2-(h-ehlara-6-déaxy-4-(1-méihyl-(3-D-glucapyranasyl~-1~,~.3-dihydra-
â~I
îndala[2,~-a]py~rrala[3,4-~jcarba2ale-5,,?(f.,-diane.
A une solution de 0,45 nnnol de rebeccamycine déchlorée dans 2 ml de pyridine
sont
2o ajoutés 4 équivalents de PPh3 et 2 équivalent de CC14. Après 3 heures
d'agitation à
température ambiante, le mélange réactionnel est hydrolysé par une solution
aqueuse
d'acide chlorhydrique 1N puis extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique
est lavée,
séchée, filtrée puis concentrée sous pression réduite.
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-16-
Stade E. 3,9-bis(hydroxymëth~l~-1~-(6-chlora-6-déaxy-~-D-méth~l-~i-D-
~luaap~ranas~l~-12x3-dihydra-~.T~;indala[2,3-~jp~~rrala[3,4-c]aa~bazale-
5,7(6H)-diane.
Le produit est obtenu selon le procédé de l'exemple 1, des stades A à D, en
utilisant comme
substrat le composé obtenu au stade A précédent.
ETLtDE PHARhTAGOLQGT UE SES CpIVTPUSE~ I~E II~INVENTT4N
Exe~ . Activité inhibitrice gis-~-vis de GS~ 3
Pratocalc Expérimental
La glycogène synthase kinase 3 a été purifiée à partir de cellules Sf~
transfectées comme
lo décrit dans Eur. J. Biochena., 1992, 305-311. Le mélange réactionnel
comprend, dans un
volume final de 30 ~,1: 1 mg/ml de BSA, 10 mM de DTT, 6,7 p.M de peptide GS-1
comme
substrat, 15 p.M [y-32P]ATP (3000 Ci/mmol, 1 mCi/ml), 10 mM de MgCl2, 1 mM de
EGTA, 25mM de Tris-HCl pH=7,5, 50 ~.g/ml d'héparine, et l'inhibiteur à une
concentration donnée. Après 30 minutes à 30°C, 25 ~,l du mélange sont
déposés sur des
filtres en papier phosphocellulose Whatman~ P81, qui sont ensuite lavés 5 fois
par 10 ml
d'acide phosphorique (10 ml/L). La radioactivité des filtres est ensuite
comptée en
présence de 1 ml de liquide de scintillation. Les valeurs d'ICSO sont estimées
à partir des
courbes dose-réponse.
Lors de ce test, le composé de l'exemple 1 présente un ICSO de 0,03 p.M. Il
est donc actif
2o vis-à-vis de GSK-3 et cette activité est sélective comme le prouve les
résultats exposés au
sein des exemples 8 et 9 décrits ci-dessous.
Excmnlc 8 ~ Activité inhïbitricc gis-à-vïs dc CD~ 1
Pratocale Ext~érimental
L'enzyme a été purifiée à partir d'un homogénat d'oocytes d'étoile de mer
(MaYthasterias
glacialis) en phase M comme décrit dans Eur. J. Biochem, 1997, 243, 527-536 et
J. Biol.
Claem.,1999, 274, 11977-11986. Le mélange réactionnel comprend, dans un volume
de 30
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
CA 02463923 2004-04-22
WO 03/035663 PCT/FR02/03592
-17-
~,1 : 1 mg/ml d'histone Hl comme substrat, 15 ~.M [y-32P]ATP (3000 Ci/mmol, 1
mCi/ml),
15 mM de MgCl2, 60 mM de (3-glycérophosphate, 15 mM de p-nitrophénylphosphate,
25 mM de MOPS pH=7,2, 5 mM de EGTA, 1 mM de DTT, 1 mM de sodium vanadate , et
l'inhibiteur à une concentration donnée. Après 10 minutes d'incubation à
30°C, 25 pl du
mélange réactionnel sont prélevés et traités comme décrit précédemment dans le
protocole
GSK-3. Les valeurs d'ICSo sont estimées à partir des courbes dose-réponse.
Lors de ce test, le composé de (exemple 1 présente un ICSO supérieur à 5 pM
démontrant
ainsi sa faible capacité à inhiber cette protéine kinase cycline dépendante.
Exe~ ; Activité inhibitrice vis-à-vls de CI)K
to I"rotocole Exuërimental
La CDKS a été exprimée dans E. coli sous forme d'une protéine de fusion GST
(Glutathion-S-transférase) et purifiée sur une colonne d'affinité de
glutathion-agarose. La
CDKS est ensuite activée par p25 (mélange 1/1), préparée de la même façon.
L'activité
enzymatique du complexe CDKS/p25 est mesurée comme décrit ci-dessus pour la
CDKl/cyclin B. Les valeurs d'ICSO sont estimées à partir des courbes dose-
réponse.
Lors de ce test, le composé de l'exemple 1 présente un ICSO supérieur à 5 ~M
démontrant
ainsi sa faible capacité à inhiber cette protéine kinase cycline dépendante.
Exe~m Ie,~,2Q ; Gc~mupsitian pharmaceutigue pour 1Q00 comprimés do~é~ à 10 m~
Composé de 1 exemple
1..............................................................................
........10 g
2o
Hydroxypropylméthylcellulose...................................................
........................10 g
Amidon de blé
...............................................................................
......................15 g
Lactose
...............................................................................
.................................90 g
Stéarate de magnésium....... .......... ...
......................................... . ......2 g
FEUILLE DE REMPLACEMENT (REGLE 26)
