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DERIVES CHIMIQUES SE LIANT DE MANIERE TRES SPECIFIQUE AUX
STRUCTURES D'ADN EN G-QUADRUPLEXE ET LEUR APPLICATION
COMME AGENT ANTICANCEREUX SPECIFIQUE
La présente invention est relative à la thérapie du cancer et concerne
de nouveaux agents anticancéreux ayant un mécanisme d'action spécifique.
Elle concerne aussi une sélection de composés chimiques ainsi que leur
application thérapeutique chez l'homme.
La présente invention concerne l'utilisation de nouveaux composés chimiques
non nucléotidiques qui interagissent avec des structures spécifiques de
l'acide désoxyribonucléique (ADN) ou de l'acide ribonucléique (ARN). Ces
nouveaux composés sont constitués d'un agent répartiteur lié à deux groupes
hétéroaromatiques azotés dont l'un au moins des atomes d'azote est sous
forme quaternarisé. Ils sont particulièrement utiles pour stabiliser de
manière
très sélective l'ADN replié en structure G-quadruplexe (tétrades de guanines),
aussi bien lorsque le G-quadruplexe est formé par un, deux ou quatre brins
d'ADN. Ces nouveaux composés sont utiles dans le traitement des cancers et
agissent en particulier en tant qu'agents inhibiteurs de la télomérase.
L'application thérapeutique de l'inhibition de la télomérase via la
stabilisation
de ces G-quadruplexes peut être soit l'arrêt de la mitose cellulaire et la
mort
des cellules à division rapide dans un délai de une à quelques semaines par
un mécanisme de déprotection de l'ADN télomérique, soit l'induction de la
sénescence des cellules cancéreuses, ~ par suite du raccourcissement
progressif de l'ADN télomérique (Oncogene 2002, 21, 553-63 ; Oncogene
2002, 21, 592-97).
Une autre application thérapeutique, dans le traitement du cancer, de la
stabilisation de structures d'ADN en G-quadruplexe peut se faire par
l'inactivation des régions promotrices, riches en répétitions de guanines,
d'oncogènes tels que c-myc (J. Biol. Chem. 2001, 276, 4640-46 ; Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 2002, 99, 11593-98), H ras ou h-TERT.
Une autre application thérapeutique, dans le traitement du cancer, de la
stabilisation de structures d'ADN en G-quadruplexes peut être l'inhibition des
hélicases spécifiques des structures d'ADN en G-quadruplexes, impliquées
lors de la mitose. Ces hélicases sont également directement impliquées dans
diverses maladies génétiques telles pue les syndromes de Bloom (Cell 1995,
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2.
83, 655-66), de Werner (Science 1996, 272, 258-62), de Rothmund-Thomson
(Nature Genetics 1999, 22, 82-4) ou d'ataxie télangiectaxie.
Les composés de la présente invention présentent en particulier l'avantage
du point de vue thérapeutique de bloquer la télomérase. Du point de vue
biologique, la télomérase permet l'ajout de séquences d'ADN répétées du
type T T A G G G, dites séquences télomériques, à l'extrémité du télomère,
lors de la division cellulaire. Par cette action la télomérase rend la cellule
immortelle. En effet, en l'absence de cette activité enzymatique, la cellule
perd à chaque division 100 à 150 bases, ce qui la rend rapidement
sénescente. Lors de l'apparition de cellules cancéreuses à division rapide, il
est apparu que ces cellules présentaient des télomères maintenus à une
longueur stable au cours de la division cellulaire. Dans ces cellules
cancéreuses il est apparu que la télomérase était fortement activée et qu'elle
permettait l'addition de motifs répétés de séquences télomériques à la fin du
télomère et permettait donc la conservation dé la longueur du télomère. II est
apparu depuis quelques temps que plus de 85 % des cellules cancéreuses
présenfient des tests positifs à la présence de télomérase alors que les
cellules somatiques ne présentent pas cette caractéristique.
La télomérase est ainsi une cible trés convoitée pour traiter les cellules
cancéreuses. La première approche évidente pour bloquer la télomérase a
été l'utilisation de structures nucléotidiques (froc. Natl. Acad. Sci. USA
1996,
93, 2635-39). Depuis des approches diverses ont été développées pour
inhiber la télomérase (Curr. Pharm. Des. 2002, 8, 2491-504). Parmi ces
approches, le développement de ligands d'ADN en G-quadruplexe suscite un
intérêt croissant (blini Rev, Med. Chem.2003, 3, 11-21 ).
On peut noter la mise en évidence dela téloméstatine, molécule capable de
se fixer à une structure d'ADN en G-quadruplexe, de manière très sélective
par rapport à un ADN double brin (J. Amer. Chem. Soc. 2001, 123, 1262-63).
Une molécule hautement sélective de l'ADN en G-quadruplexe présentera le
double avantage de cibler les structures d'ADN en G-quadruplexe tout en
évitant des mécanismes de toxicité indésirables liés à une fixation non
sélective sur le génome.
Le brevet WO 0296903 décrit la préparation de diamides hétérocycliques de
formule générale (I) suivante, comme ligands d'ADN en G-quadruplexe et
leur l'utilisation comme inhibiteurs de télomérase
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(1)
cycle aromatique azoté - (NR3)p - (CO)n- répartiteur - (CO)m - (NR'3)q -
cycle aromatique ou non aromatique
avec n, m, p et q identiques ou différents représentent l'entier 0 ou 1,
dans laquelle
~ le cycle aromatique azoté, représente
0 une quinoléine éventuellement substituée par au moins
- un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb,
identiques ou différents représentent l'hydrogène
ou un radical alkyle en C1-C4 ou
- un groupe alkyle ou alkoxy à chaîne courte en C1-
C4 ou
0 une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme
quaternaire ou
0 une benzamidine ou
0 une pyridine
~ le, cycle aromatique ou non aromatique représente
0 une quinoléine éventuellement substituée par au moins
- un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb,
identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un
radical alkyle en C1-C4 ou
- un groupe alkyle ou alkoxy à chaîne courte en C1-C4
ou
0 une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme
quaternaire ou
0 ûne benzamidine ou
0 une pyridine ou
0 un noyau phényle éventuellement substitué par un
groupement halogène, alkoxy en C1-C4, cyano,
carbonylamino éventuellement substitué par un ou
plusieurs groupes alkyle en C1-C4, guanyl, alkylthio en
C1-C4, amino, alkylamino en C1-C4, dialkylamino en C1-
C4 pour chaque groupe alkyle, nitro, alkylèneamino en
C1-C4 ou alkénylèneamino en C2-C4 ou
0 un noyau hétérocyclique aromatique ou non aromatique
mono ou bi ou tricyclique comportant 0 à 2 hétéroatome
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par cycle à la condition qu'au moins un hétéroatome soit
présent dans au moins un cycle éventuellement substitué
par un ou plusieurs groupes alkyle en C1-C4 ou par des
groupes alkylène en C1-C4 ou alkénylène en C2-C4
~ R3 et R'3, identiques ou différents, représentent
indépendamment l'un de l'autre l'hydrogène ou un radical alkyle
en C1-C4
~ le répartiteur représente
0 un groupe triazine éventuellement substitué par un ou
plusieurs radicaux choisis parmi les atomes d'halogène,
les radicaux alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone et les
radicaux thio, oxy ou amino eux mêmes éventuellement
substitués par une ou plusieurs chaînes alkyle à chaîine
courte contenant 1 à 4 atomes de carbone ou
0 un radical hétérocyclique renfermant 5 à 6 chaînons
renfermant un atome de soufre, d'oxygène ou d'azote
0 un radical phényle, -NH-phényle-NH-, -NH-phényle-CH2-
NH-, -NH-CH2-phényle-CH2-NH-, -NH-CH2-phényle-NH-, -CH2-
phényle-CH2-, -CH2-phényle, -phényle-CH2-, -CH2-thiényle-,
-thiényle-CH2-, le radical -CH=CH-, ou
0 un groupe diazine,
les radicaux hétérocycliques, phényle, -NH-phényle-NH-, -NH-
phényle-CH2-NH-, -NH-CH2-phényle-CH2-NH-, -NH-CH2-phényle-
NH-, -CH2-phényle-CH2-, -CH2-phényle, -phényle-CH2-, -CH2-
thiényle-, -thiényle-CH2-, le radical -CH=CH-, et diazine étant
éventuellement substitués par les mêmes groupes que la triazine
étant entendu que lorsque le répartiteur représente phényle éventuellement
substitué par NH2, que n, m, p et q représentent 1 et R3 et R3' représentent
hydrogène alors le cycle aromatique azoté et le cycle aromatique ne
représentent pas tous deux une quinoléine non substituée ou substituée sur
son atome d'azote par un radical alkyle renfermant 1 à 6 atomes de carbone,
ou un de ses sels et lorsque le répartiteur représente une triazine et p et q
représentent tous deux l'entier 1 alors n et m ne représentent pas tous deux
l'entier 0.
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La présente invention décrit la préparation de diamides hétérocycliques de
formule générale (IB) suivante, comme ligands hautement spécifiques d'ADN
en G-quadruplexe et leur l'utilisation comme inhibiteurs de télomérase
(IB)
5 cycle aromatique azoté possédant un atome d'azote sous forme
quaternaire - (NR3)p - CO- répartiteur - (CO)m - (NR'3)q X- cycle
aromatique ou non aromatique
avec m, p et q identiques ou différents représentent l'entier 0 ou 1,
dans laquelle
~ le cycle aromatique azoté possédant un atome quaternaire,
représente
0 une quinoléine éventuellement substituée par au moins
- un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb,
identiques ou différents représentent l'hydrogène
ou un radical alkyle en C1-C4 ou
- un groupe alkyle ou alkoxy à chaîne courte en C1-
C4 ou
0 et dont l'atome d'azote est quaternarisé par une chaîne
alkyle en C1-C4, éventuellement substituée par un radical hydroxy,
carboxy; alkoxy en C1-C4, alkylthio en C1-C4, amino, alkylamino en
C1-C4, dialkylamino en C1-C4 pour chaque groupe alkyle,
~ le cycle aromatique ou non aromatique représente
0 une quinoléine éventuellement substituée par au moins
- un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb,
identiques ou différents représentent l'hydrogène ou un
radical alkyle en C1-C4 ou
- un groupe alkyle ou alkoxy à chaîne courte en C1-C4
ou
0 une quinoléine possédant un atome d'azote sous forme
quaternaire ou
0 une benzamidine ou
0 une pyridine ou
0 un noyau phényle éventuellement substitué par un
groupement halogène, alkoxy en C1-C4, cyano,
carbonylamino éventuellement substitué par un ou
plusieurs groupes alkyle en C1-C4, guanyl, alkylthio en
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C1-C4, amino, alkylamino en C1-C4, dialkylamino en C1-
C4 pour chaque groupe alkyle, nitro, alkylèneamino en
C1-C4 ou alkénylèneamino en C2-C4 ou
0 un noyau hétérocyclique aromatique ou non aromatique
mono ou bi ou tricyclique comportant 0 à 2 hétéroatome
par cycle à la condition qu'au moins un hétéroatome soit
présent dans au moins un cycle éventuellement substitué
par un ou plusieurs groupes alkyle en C1-C4 ou par des
groupes alkylène en C1-C4 ou alkénylène en C2-C4, et
dont l'hétéroatome, lorsqu'il représente un atome d'azote,
peut être éventuellement sous forme quaternaire.
~ R3 et R'3, identiques ou différents, représentent
indépendamment l'un de l'autre l'hydrogène ou un radical alkyle
en C1-C4 ou aralkyle, dont la partie alkyle est en C1-C4.
~ X représente une simple liaison, ou un radical alkyle droit ou
ramifié en C1-C4, un radical alkényle en C2-C4, un radical
alkynyle en C2-C4 ou un radical phényle.
~ le répartiteur représente
0 un radical hétérocyclique renfermant 5 à 6 chaînons
renfermant un atome de soufre, d'oxygène ou d'azote
0 un radical phényle, ou
0 un groupe diazine ou triazine,
les radicaux hétérocycliques, phényle, diazine ou triazine étant
éventuellement substitués par un ou plusieurs radicaux choisis parmi les
atomes d'halogène, les radicaux alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone et les
radicaux thio, oxy ou amino eux mêmes éventuellement substitués par une
ou plusieurs chaînes alkyle à chaîne courte contenant 1 à 4 atomes de
carbone.
Lesdits produits de formule (IB) peuvent sous toutes les formes isomères
possibles racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels
d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases
minérales et organiques desdits produits de formule (IB).
Dans les composés décrits dans la présente invention
- le terme radical alkyle ou alk désigne un radical linéaire ou ramifié
renfermant au plus 12 atomes de carbone choisi parmi les radicaux méthyle,
éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle, tert-butyle,
pentyle,
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isopentyle, sec-pentyle, tert-pentyle, néo-pentyle, hexyle, isohexyle, sec-
hexyle, tert-hexyle et également heptyle, octyle, nonyle, décyle, undécyle et
dodécyle, ainsi que leurs isomères de position linéaires ou ramifiés,
On cite plus particulièrement les radicaux alkyle ayant au plus 6 atomes de
carbone et notamment les radicaux méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, n
butyle, isobutyle, terbutyle, pentyle linéaire ou ramifié, hexyle linéaires ou
ramifiés.
- le terme radical alkényle désigne un radical linéaire ou ramifié
renfermant au plus 12 atomes de carbone et préférentiellement 4 atomes de
carbone choisi par exemple parmi les valèurs suivantes: éthényle ou vinyle,
propényl ou allyle! 1-propényle, n-butényle, i-butényle, 3-méthylbut-2-ényle,
n-pentényle, hexényle, heptényle, octényle, cyclohexylbutényle et décényle
ainsi que leurs isomères de position linéaires ou ramifiés.
Parmi les valeurs alkényle, on cite plus particulièrement les valeurs allyle
ou
butényle.
- le terme radical alkynyle désigne un radical linéaire ou ramifié
renfermant au plus 12 atomes de carbone et préférentiellement 4 atomes de
carbone choisi par exemple parmi les valeurs suivantes: éthynyle, propynyle
ou propargyle, butynyle, n-butynyle, i-butynyle, 3-méthylbut-2-ynyle,
pentynyle ou hexynyle ainsi que leurs isomères de position linéaires ou
ramifiés.
Parmi les valeurs alkynyle, on cite plus particulièrement la valeur
propargyle.
- le terme radical aryle désigne les radicaux insaturés, monocycliques
ou constitués de cycles condensés, carbocycliques. Comme exemples de tel
radical aryle, on peut citer lès radicaux phényle ou naphtyle,
On cite plus particulièremènt le radical phényle.
- par arylalkyle on entend les radicaux résultant de la combinaison des
radicaux alkyle cités précédemment éventuellement substitués et les radicaux
aryles également cités ci-dessus, éventuellement substitués : on cite par
exemple les radicaux benzyle, phényléthyle, 2-phénéthyle, triphénylméthyle
ou naphthlèneméthyle.
- le terme radical hétérocyclique désigne un radical carbocylique saturé
(hétérocycloalkyle) ou insaturé (hétéroaryle) constitué au plus de 6 chaînons
interrompus par un ou plusieurs hétéroatomes, identiques ou différents,
choisis parmi les atomes d'oxygène, d'azote ou de soufre.
Comme radicaux hétérocycloalkyles, on peut citer notamment les radicaux
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dioxolane, dioxane, dithiolane, thiooxolane, thiooxane, oxirannyle,
oxolannyle,
dioxolannyle, pipérazinyle, pipéridinyle, pyrrolidinyle, imidazolidinyle,
pyrazolidinyle, morpholinyle ou encore tétrahydrofuryle, tétrahydrothiényle,
chromanyle, dihydrobenzofuranyle, indolinyle, pipéridinyle, perhydropyranyle,
pyrindolinyle, tétrahydroquinoléinyle, tétrahydroisoquinoléinyle ou
thioazolidinyle, tous ces radicaux étant éventuellement substitués.
Parmi les radicaux hétérocycloalkyles, on peut citer notamment les radicaux
pipérazinyle éventuellement substitué, pipéridinyle éventuellement substitué,
pyrrolidinyle éventuellement substitué, imidazolidinyle, pyrazolidinyle,
morpholinyle ou thioazolidinyle.
Par radical hétérocycloalkylalkyle, on entend les radicaux dans lesquels les
restes hétérocycloalkyle et alkyle ont les significations précédentes
Parmi les radicaux hétéroaryles à 5 chaînons on peut citer les radicaux furyle
tel que 2-furyle, thiényle tel que 2-thiényle et 3-thiényle, pyrrolyle,
diazolyle,
thiazolyle, thiadiazolyle, thiatriazolyle, isothiazolyle, oxazolyle
oxadiazolyle, S
ou 4-isoxazolyle, imidazolyle, pyrazolyle, isoxazolyle.
Parmi les radicaux hétéroaryles à 6 chaînons on peut citer notamment les
radicaux pyridyle tel que 2-pyridyle, 3-pyridyle et 4-pyridyle, pyrimidyle,
pyrimidinyle, pyridazinyle, pyrazinyle et tétrazolyle.
Comme radicaux hétéroaryles condensés contenant au moins un
hétéroatome choisi parmi le soufre, l'azote et l'oxygène, on peut citer par
exemple benzothiényle tel que 3-benzothiényle, benzofuryle, benzofurannyle,
benzopyrrolyle, benzimidazolyle, benzoxazolyle, thionaphtyle, indolyle,
purinyle, quinoléinyle, isoquinoléinyle et naphtyridinyle.
Parmi les radicaux hétéroaryles condensés, on peut citer plus
particulièrement les radicaux benzothiényle, benzofurannyle, indolyle ou
quinoléinyle, benzimidazolyle, benzothiazolyle, furyle, imidazolyle,
indolizinyle, isoxazolyle, isoquinolinyle, isothiazolyle, oxadiazolyle,
pyrazinyle,
pyridazinyle, pyrazolyle, pyridyle, pyrimidinyle, pyrrolyle, quinazolinyle,
1,3,4-
thiadiazolyle, thiazolyle, thiényle et groupes triazolyle, ces radicaux étant
éventuellement substitués comme indiqué pour les radicaux hétéroaryles.
Dans les produits de formule (IB) tels que définis ci-dessus, on cite plus
particulièrement ceux pour lesquels R3 et R'3, identiques ou difFérents,
représentent indépendamment l'un de l'autre l'hydrogène ou un radical alkyle
en C1-C4 ou aralkyle dans lequel le radical alkyle est C1-C4, X représente
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une simple liaison, un radical alkyle en C1-C4, un radical alkényle ou
alkynyle
en C2-C4 ou un radical phényle, les autres substituants étant choisis parmi
les valeurs indiquées ci-dessus.
On entend au sens de la formule ci-dessus par cycle aromatique azoté un
hétérocycle comportant au moins un atome d'azote ou un groupe aromatique
ne comportant pas d'hétéroatome dans le cycle mais contenant au moins un
atome d'azote dans une chaïne hydrocarbonée liée au cycle comme par
exemple une chaîne guanidino ou guanyl.
II est évident que les motifs quinoléines peuvent étre substitués par tout
autre
groupe n'intervenant pas dans l'application visée, ainsi des groupes acridines
ou isoquinoléines ou quinazolines ou quinoxalines ou phtalazines ou
benzothiazines ou benzoxazines ou phénoxazines ou phénothiazines sont
inclus dans la définition des groupes quinoléines.
On préfère parmi l'ensemble des composés ci-dessus ceux comportant un
répartiteur choisi parmi les groupes hétérocycliques tels que par exemple
pyridyle, ou thiényle, un radical phényle, une diazine ou une triazine,: Parmi
les groupes diazines on préfère utiliser les pyridazines.
On préfère particulièrement parmi l'ensemble des composés ci-dessus ceux
comportant un répartiteur méta-disubstitué par les groupements « cycle
aromatique azoté possédant un atome d'azote sous forme quaternaire
(NR3)p - CO » et « (CO)m - (NR'3)q - cycle aromatique ou non
aromatique » tels que définis ~ci-dessus et dans lesquels le répartiteur est
de
plus éventuellement substitué par un atome d'halogène.
On préfère parmi l'ensemble des composés ci-dessus ceux comportant un
répartiteur méta-disubstitué par les groupements « cycle aromatique azoté
possédant un atome d'azote sous forme quaternaire - (NR3)p - CO » et
(CO)m - (NR'3)q - cycle aromatique ou non aromatique » tels que définis ci-
dessus.
Parmi les composés de la présente invention, on préfère notamment les
composés dont l'hétérocycle sous forme quaternaire est une quinoléine.
Parmi les composés de la présente invention, on préfère notamment les
composés définis ci-dessus caractérisés en ce que m, p et q représentent
l'entier 1.
Parmi les composés de la présente invention, on préfère tout particulièrement
les composés dont le répartiteur représente une pyridine-2,6-disubstituée ou
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une pyridazine-2-6-disubstituée par les groupements « cycle aromatique
azoté possédant un atome d'azote quaternaire sous forme quaternaire
-(NR3)p - CO » et « (CO)m - (NR'3)q - cycle aromatique ou non
aromatique » et dont l'hétérocycle quaternarisé est un N-méthyl-quinolinium,
5 et dans lesquels le répartiteur est de plus éventuellement substitué par un
atome d'halogène.
Parmi les composés de la présente invention, on préfère tout spécialement
les composés dont le répartiteur représente une pyridine-2,6-disubstituée ou
une pyridazine-2-6-disubstituée par les groupements c cycle aromatique
10 azoté possédant un atome d'azote quaternaire sous forme quaternaire
-(NR3)p - CO » et « (CO)m - (NR'3)q - cycle aromatique ou non
aromatique » et dont l'hétérocycle quaternarisé est un N-méthyl-quinolinium.
La présente invention a particulièrement notamment pour objet les produits
de formule (IB) tels que définis ci-dessus caractérisés en ce qu'ils répondent
à la formule (la) ci-dessous
O A O
m
~NR3)P ~NR3 )q ira)
Are X
Ar2
avec m, p et q identiques ou différents représentent l'entier 0 ou 1
~ A représente:
0 un radical hétérocyclique renfermant 5 à 6 chainons
renfermant un atome de soufre, d'oxygène ou d'azote
0 un radical phényle, ou
0 un groupe diazine ou triazine,
les radicaux hétérocycliques, phényle, diazine ou triazine étant
éventuellement substitués par un ou plusieurs radicaux choisis parmi les
atomes d'halogène, les radicaux alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone et les
radicaux thio, oxy ou amino eux mëmes éventuellement substitués par une
ou plusieurs chaines alkyle à chaine courte contenant 1 à 4 atomes de
carbone,
- Are et Ar2 identiques ou différents représentent
quand Are et Ar2 sont identiques, ils représentent un cycle aromatique azoté
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possédant un atome quaternaire représenté par une quinoléine
éventuellement substituée par au moins
- un groupe N(Ra)(Rb) dans lequel Ra et Rb,
identiques ou différents représentent l'hydrogène
ou un radical alkyle en C1-C4 ou
- un groupe alkyle ou alkoxy à chaîne courte en C1-
C4 ou
0 et dont l'atome d'azote est quaternarisé par une chaine
alkyle en C1-C4, éventuellement substituée par un radical hydroxy,
carboxy, alkoxy en C1-C4, alkylthio en C1-C4, amino, alkylamino en
C1-C4, dialkylamino en C1-C4 pour chaque groupe alkyle,
quand Are et Ar2 sont différents
Are représente l'une des possibilités ci-dessus et Ar2 représente
un noyau phényle éventuellement substitué par un groupement halogène,
alkoxy en C1-C4, cyano, carbonylamino éventuellement substitué par un ou
plusieurs groupes alkyle en C1-C4, guanyl, alkylthio en C1-C4, amino,
alkylamino en C1-C4, dialkylamino en C1-C4 pour chaque groupe alkyle,
nitro, alkylèneamino en C1-C4 ou alkénylèneamino en C2-C4
une benzamidine
~ un noyau pyridyle
un noyau hétérocyclique aromatique ou non aromatique mono ou bi ou
tricyclique comportant 0 à 2 hétéroatome par cycle à la condition qu'au moins
un hétéroatome soit présent dans au moins un cycle éventuellement
substitué par un ou plusieurs groupes alkyle en C1-C4 ou par des groupes
alkylène en C1-C4 ou alkénylène en C2-C4,
~ R3 et R'3, identiques ou différents, représentent
indépendamment l'un de l'autre l'hydrogène ou un radical alkyle
en C1-C4 ou aralkyle dans lequel le radical alkyle est C1-C4,
~ X représente une simple liaison, un radical alkyle en C1-C4, un
radical alkényle ou alkynyle en C2-C4 ou un radical phényle,
lesdits produits de formule (la) étant sous toutes les formes isomères
possibles racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels
d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases
minérales et organiques desdits produits de formule (la).
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La présente invention a ainsi pour objet les produits de formule (la) tels que
définis ci-dessus dans laquelle X représente un radical alkyle en C1-C4, les
autres substituants des produits de formule (la) étant choisis parmi les
valeurs indiquées ci-dessus,
lesdits produits de formule (la) étant sous toutes les formes isomères
possibles racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels
d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases
minérales et organiques desdits produits de formule (la).
La présente invention a ainsi pour objet les produits de formule (la) tels que
définis ci-dessus dans laquelle caractérisés en ce que A est choisi parmi les
groupes hétérocycliques, tels que par exemple pyridyle ou thiényle, un radical
phényle, une diazine ou une triazine tels que définis ci-dessus.
La présente invention a ainsi pour objet les produits de formule (la) tels que
définis ci-dessus caractérisés en ce que les groupes diazines que peut
représenter A sont des pyrazines.
La présente invention a ainsi particulièrement pour objet les produits de
formule (la) tels que définis ci-dessus caractérisés en ce que A est méta-
disubstitué par les groupements « cycle aromatique azoté possédant un
atome d'azote sous forme quaternaire - (NR3)p - CO » et « (CO)m -(NR'3)q -
cycle aromatique ou non aromatique » tels que définis ci-dessus et dans
lesquels A est de plus éventuellement substitué par un atome d'halogène.
La présente invention a ainsi pour objet les produits de formule (la) tels que
définis ci-dessus caractérisés en ce que A est méta-disubstitué par les
groupements « cycle aromatique azoté possédant un atome d'azote sous
forme quaternaire = (NR3)p - CO » et « (CO)m - (NR'3)q - cycle aromatique
ou non aromatique » tels que définis ci-dessus.
La présente invention a ainsi pour objet les produits de formule (la) tels que
définis ci-dessus caractérisés en ce que l'hétérocycle sous forme quaternaire
est une quinoléine.
La présente invention a ainsi particulièrement pour objet les produits de
formule (la) tels que définis ci-dessus caractérisés en ce que A représente
une pyridine-2,6-disubstituée ou une pyridazine-2-6-disubstituée par les
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groupements « cycle aromatique azoté possédant un atome d'azote
quaternaire sous forme quaternaire - (NR3)p - CO » et « (CO)m - (NR'3)q
cycle aromatique ou non aromatique » et dont l'hétérocycle quaternarisé est
un N-méthyl-quinolinium, et dans lesquels A est de plus éventuellement
substitué par un atome d'halogène.
La présente invention a ainsi pour objet les produits de formule (la) tels que
définis ci-dessus caractérisés en ce pue A représente une pyridine-2,6-
disubstituée ou une pyridazine-2-6-disubstituée par les groupements « cycle
aromatique azoté possédant un atome d'azote quaternaire sous forme
quaternaire - (NR3)p - CO » et « (CO)m - (NR'3)q - cycle aromatique ou
non aromatique » et dont l'hétérocycle quaternarisé est un N-méthyl-
quinolinium.
La présente invention a ainsi pour objet les produits de formule (la) tels que
définis ci-dessus caractérisés en ce que p et q représentent l'entier 1.
La présente invention a ainsi pour objet les produits de formule (la) tels que
définis ci-dessûs caractérisés en ce que m, p et q représentent l'entier 1.
La présente invention a notamment pour objet les produits de formule (la) tels
que définis ci-dessus caractérisés en ce que Ar2 représentent un groupe
choisi parmi les groupes suivants : 4-amino- ou 4-méthylamino-,
4-diméthylamino- ou 4-alcoxy- quinolyl ou quinolinium dont le noyau
quinolinium est éventuellement substitué par un ou deux groupes) méthyle.
La présente invention a notamment pour objet les produits de formule (la) tels
que définis ci-dessus caractérisés en ce que R3 et R3' représentent
l'hydrogène.
La présente invention a particulièrement pour objet les produits de formule
(IB) tels que définis ci-dessus dont les noms suivent:
- le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-
6-
yl)amide]
- le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]-6-[(4-diméthylamino-1-méthyl-quinaldinio-6-yl)amide].
- le diodure de l'acide 2,6-pyrazine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-
6-
yl)amide]
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- le diodure de l'acide 1,3-benzène-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]
- le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinaldinio-
6-
yl)amide]
- l'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]-6-[(4-amino-quinaldinio-6-yl)amide], isolé sous sa forme tautomère
imino ci-dessous
- le diodure de l'acide 2,6-benzène-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinaldinio-
6-yl)amide]
- le diodure de l'acide 2,4-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolin- 6-
yl)amide]
- l'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]-6-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide],
- l'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]-6-[(1-méthyl-quinolinio-5-yl)amide]
- le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-
3-
yl)amide]
- le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]-6-[2(-1-méthyl-pipéridinio-1-yl)éthylamide] - l'iodure de l'acide
2,6-
pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide]-6-[quinolin-3-
yl)amide]
- le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-3-
yl)amide]-6-[1-(2-hydroxyéthyl)quinolinio-3-yl)amide]
- le diodure de l'acide 4-bromo-2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-
quinolinio-3-yl)amide]
lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes isomères
possibles
racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels d'addition
avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et
organiques desdits produits de formule (I).
La présente invention a ainsi particulièrement pour objet les produits de
formule (IB) tels que définis ci-dessus dont les noms suivent
- le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-
6-
yl)amide]
- le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]-6-[(4-diméthylamino-1-méthyl-quinaldinio-6-yl)amide].
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- le diodure de l'acide 2,6-pyrazine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-
6-
yl)amide]
- le diodure de l'acide 1,3-benzène-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]
5 - le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-
quinaldinio-6-
yl)amide]
- l'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]-6-[(4-amino-quinaldinio-6-yl)amide], isolé sous sa forme tautomère
imino ci-dessous
10 - le diodure de l'acide 2,6-benzène-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-
quinaldinio-
6-yl)amide]
- le diodure de l'acide 2,4-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolin-6-
yl)amide]
- l'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
15 yl)amide]-6-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide]
- l'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]-6-[(1-méthyl-quinolinio-5-yl)amide]
- le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-
3-
yl)amide] - l'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-
quinolinio-3-yl)amide]-6-[quinolin-3-yl)amide]
- le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-3-
yl)amide]-6-[1-(2-hydroxyéthyl)quinolinio-3-yl)amide]
- le diodure de l'acide 4-bromo-2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-
quinolinio-3-yl)amide]
ou les sels ou d'autres sels de ces composés
lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes isomères
possibles racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels
d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases
minérales et organiques desdits produits de formule (I).
La présente invention a ainsi pour objet le produit de formule (IB) suivant
le diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]-6-[2(-1-méthyl-pipéridinio-1-yl)éthylamide]
ce produit de formule (I) étant sous toutes les formes isomères possibles
racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels d'addition
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avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et
organiques
La présente invention a également pour objet un procédé de préparation des
produits de formule (IB) selon la présente invention : on décrit ainsi une
méthode générale de synthèse comme suit.
La présente invention a également pour objet un procédé de préparation des
produits de formule (IB) selon la présente invention : on décrit ainsi une
méthode générale de synthèse comme suit 2St Un N-méthyl-quinolinium.
Méthode Générale de synthèse
Une méthode particulièrement intéressante dans le cadre de l'invention
consiste à alkyler en fin de synthèse un produit de formule générale (IA) en
produit de formule générale (IB) à l'aide d'un halogénure d'alkyle, ou
éventuellement d'un sulfate d'alkyle selon le schéma général ci-dessous
(IA)
cycle aromatique azoté -(NR3)p-CO-répartiteur-(COM)m-(NR'3)q-X- cycle
aromatique
ou non aromatique
alk-I
(IB)
cycle aromatique azoté possédant un atome d'azote sous forme quaternaire
(NR3)p-CO- répartiteur-(CO)m-(NR'3)q-X-cycle aromatique ou non aromatique
Les produits de formule générale (IA) dans lesquels X représente une simple
liaison peuvent être préparés selon l'une quelconque des méthodes
générales de synthèse décrites dans le brevet WO 0296903.
Les produits de formule générale (IA) dans lesquels X est différent d'une
simple liaison peuvent avantageusement étre préparés selon le schéma
général ci-dessous
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HOOC-répartiteur-COOH
HOOC-répartiteur-(CO)m-(NR'3)q-X-cycle aromatique ou non aromatique
cycle aromatique azoté (NR3)p-CO-répartiteur-COOH
cycle aromatique azoté -(NR3)p-CO-répartiteur-(CO)m-(NR'3)q-X-
cycle aromatique ou non aromatique
La présente invention a ainsi pour objet les produits de formule (IB) tels que
définis ci-dessus caractérisés en ce qu'ils ont une activité inhibitrice des
télomérases.
La présente invention a ainsi pour objet les produits de formule (IB) tels que
définis ci-dessus caractérisés en ce qu'ils ont une activité anticancéreuse.
La présente invention a également pour objet à titre de médicaments, les
produits de formule (IB) tels que définis ci-dessus, ainsi que leurs prodrugs,
lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes isomères
possibles
racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels d'addition
avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et
organiques pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I).
La présente invention a ainsi pour objet à titre de médicaments, les produits
de formule (la) telle que définie aux revendications précédentes ainsi que
leurs prodrugs, lesdits produits de formule (la) étant sous toutes les formes
isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi
que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les
bases minérales et organiques pharmaceutiquement acceptables desdits
produits de formule (la).
La présente invention a particulièrement pour objet à titre de médicaments,
les produits décrits ci-après dans la partie expérimentale, ainsi que leurs
prodrugs,
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ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec
les bases minérales et organiques pharmaceutiquement acceptables de ces
produits.
Le terme patient désigne les êtres humains mais aussi les autres
mammifères.
Le terme "Prodrug" désigne un produit qui peut être transformé in vivo par
des mécanismes métaboliques (tel que l'hydrolyse) en un produit de formule
(I). Par exemple, un ester d'un produit de formule (I) contenant un groupe
hydroxyle peut être converti par hydrolyse in vivo en sa molécule mère. Ou
encore un ester d'un produit de formule (I) contenant un groupe carboxy peut
être converti par hydrolyse in vivo en sa molécule mère.
Les produits peuvent être administrés par voie parentérale, buccale,
perlinguale, rectale ou topique.
L'invenfiion a aussi pour objet les compositions pharmaceutiques,
caractérisées en ce qu'elles renferment, à titre de principe actif, un au
moins
des médicaments de formule générale (IB) telle que définie ci-dessus et
notamment les produits décrits ci-après dans la partie expérimentale.
Ces compositions peuvent être présentées sous forme de solutions ou
de suspensions injectables, de comprimés, de comprimés enrobés, de
capsules, de sirops, de suppositoires, de crèmes, de pommades et de lotions.
Ces formes pharmaceutiques sont préparées selon les méthodes usuelles.
Le principe actif peut être incorporé à des excipients habituellement employés
dans ces compositions, tels que les véhicules aqueux ou non, le talc, la
gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre
de cacao, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés
paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou
émulsifiants, les conservateurs.
La dose usuelle, variable selon le sujet traité et l'affection en cause,
peut être, par exemple, de 10 mg à 500 mg par jour chez l'homme, par voie
orale.
La présente invention a également pour objet les compositions
pharmaceutiques telles que définies ci-dessus contenant en plus, des
principes actifs d'autres médicaments de chimiothérapie contre le cancer.
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La présente invention a également pour objet les compositions
pharmaceutiques telles que définies ci-dessus caractérisées en ce qu'elles
sont utilisées comme médicaments, en particulier pour la chimiothérapie de
cancers.
La présente invention a ainsi pour objet l'utilisation des composés définis
ci-dessus comme produit pharmaceutique à usage humain.
La présente invention concerne également les associations thérapeutiques
constituées d'un composé de formule (IB) telle que définie ci-dessus et d'un
autre composé anticancéreux.
La présente invention concerne ainsi les associations thérapeutiques telles
que définies ci-dessus caractérisées en ce que le composé anticancéreux
est choisi parmi les agents alkylants, les dérivés du platine, les agents
antibiotiques, les agents antimicrotubules, les anthracyclines, les
topoisomérases des groupes I et II, les fluoropyrimidines, les analogues de
cytidine, les analogues d'adénosine, les enzymes et composés divers tels
que la L-asparaginase, l'hydroxyurée, l'acide trans-rétinoique, la suramine,
l'irinotecan, le topotecan, la dexrazoxane, l'amifostine, l'herceptin ainsi
que
les hormones oetrogéniques, androgéniques, les agents antivasculaires.
La présente invention concerne également une association thérapeutique
constituée d'un composé de formule (IB) telle que définie ci-dessus et de
radiations.
La présente invention concerne ainsi les associations telles que définies ci-
dessus caractérisées en ce que chacun des composés ou des traitements est
administré simultanément, séparément ou séquentiellement.
La présente invention concerne ainsi l'utilisation de produits de formule (IB)
tels que définis ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables
desdits produits de formule (IB) pour la préparation de médicaments destinés
à traiter des cancers , des maladies génétiques ou les anomalies de pilosité.
La présente invention concerne ainsi l'utilisation de produits de formule (IB)
tels que définis ci -dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables
desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à
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traiter des cancers.
La présente invention concerne ainsi l'utilisation de produits de formule (IB)
tels que définis ci -dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables
desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à
5 traiter des maladies génétiques telles que les syndromes de Bloom, de
Werner, de Rothmund-Thomson ou d'ataxie télangiectaxie.
La présente invention concerne ainsi l'utilisation de produits de formule (IB)
tels que définis ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables
desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à
10 traiter des anomalies de pilosité telle que l'hyperpilosité.
La présente invention concerne particulièrement l'utilisation de produits de
formule (IB) tels que définis ci -dessus ou de sels pharmaceutiquement
acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un
médicament destiné à traiter des cancers du sein, de l'estomac, du colon, des
15 poumons, des ovaires, de l'utérus! du cerveau, du rein, du larynx, du
système
lymphatique, de la thyroïde, du tractus uro-génital, du tractus incluant
vésicule et prostate, du cancer des os, du pancréas, les mélanomes et plus
particulièrement des cancers du sein, du colon ou des poumons.
La présente invention concerne particulièrement l'utilisation de produits de
20 formule (IB) tels que définis ci -dessus ou de sels pharmaceutiquement
acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un
médicament destiné à la chimiothérapie de cancers et notamment destinés à
la chimiothérapie de cancers utilisés seuls ou en association.
La présente invention concerne ainsi l'utilisation de produits de formule (IB)
telle que définie à l'une quelconque des revendications précédentes ou de
sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (IB) pour
la préparation de médicaments destinés à être utilisés seuls ou en
association avec chimiothérapie ou radiothérapie ou alternativement en
association avec d'autres agents thérapeutiques et en particulier une telle
utilisation dans laquelle les agents thérapeutiques peuvent être des agents
anti-tumoraux utilisés communément.
Les produits de formule (I) selon la présente invention peuvent ainsi
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également être avantageusement utilisés en combinaison avec des agents
anti-prolifératifs : à titre d'exemples de tels agents anti-prolifératifs mais
sans
toutefois se limiter à cette liste, on peut citer les inhibiteurs d'aromatase,
les
antiestrogènes, les inhibiteurs de topoisomérase I, les inhibiteurs de
topoisomérase II, les agents actifs sur les microtubules, les agents
d'alkylation, les inhibiteurs d'histone désacétylase, les inhibiteurs de
farnésyl
transférase, les inhibiteurs de COX-2, les inhibiteurs de MMP, les inhibiteurs
de mTOR, les antimétabolites antinéoplastique, les composés du platine, les
composés faisant décroitre l'activité des protéines kinases et également les
composés anti-angiogéniques, les agonistes de la gonadoréline, les anti-
androgènes, les bengamides, les biphophonates et le trastuzumab.
On peut citer ainsi à titre d'exemples, des agents anti-microtubules comme
les taxoides, vinka-alkaloides, des agents d'alkylation tels que
cyclophosphamide, des agents DNA-intercalant comme le cis-platinum, des
agents interactifs sur topoisomérase comme la camptothécine et dérivés, les
anthrac~clines comme fadriamycine, des antimétabolites comme le
5-fluorouracile et dérivés et analogues.
L'affinité et la sélectivité des produits de formule générale (IB) selon la
présente invention pour des structures d'ADN en G-quadruplexe peut être
déterminée par une ou plusieurs des méthodes suivantes
Test d'affinité n°1 : Mesure de l'inhibition d'appariement d'un
oliaonucléotide
susceptible. de former une structure G-auadruplexe avec son brin
complémentaire mesurée sous forme de concentration inhibitrice 50 % C150
exprimée en uM, par une méthode de luminescence selon le protocole
expérimental est décrit ci-après
Le principe de ce test utilise l'activation de billes « accepteurs » par un
singlet
d'oxygène émis par des billes « donneurs » excitées par un laser lorsque les
billes « accepteurs » et « donneurs » sont à proximité. Ce test a été
développé par Packard Bioscience sous le nom Amplified Luminescent
Proximity Homogeneous Assay ou ALPHA screen.
Les billes « donneurs » sont conjuguées à la streptavidine et les billes
accepteurs à un anticorps anti-digoxigénine (référence catalogue 6760604).
Un brin d'ADN, dans ce cas le brin télomérique est couplé à son extrémité 5'
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à la biotine de façon à pouvoir se lier aux billes « donneurs », tandis que le
brin complémentaire est couplé à la digoxigénine pour pouvoir se lier aux
billes « accepteurs ». Lors de l'appariement du brin télomérique à son brin
complémentaire, les billes sont mises à proximité et un signal de
luminescence est alors émis à une longueur d'onde de 520-620 nm.
Les oligonucléotides utilisés dans les expériences ont été synthétisés par
Perkin Elmer Life Sciences (Finlande). Le brin riche en G correspondant aux
motifs répétitifs de l'ADN télomérique humain possède la séquence G-GTT-
TAA-AAT-AAT-TGA-GGG-TTA-GGG-TTA-GGG-TTA-GGG. Le brin
complémentaire a la séquence GGT-TTA-AAA-AAT-TTG-CCC-TAA-CCC-
TAA-CCC-TAA-CCC -T. La biotine ou la digoxigénine sont ajoutés à
l'extrémité 5' des oligonucléotides.
Les expériences sont réalisées dans un tampon TRIS-HCI 50 mM pH 7:4
contenant 100 mM de KCI et 0.1 % de BSA.
Les mesures sont effectuées avec un Alphaquest microplate analyser (Fusion
a) de chez Packard Biosciences.
Les expériences sont réalisées en plaques 96 puits (112 puits)
Une solution stock d'oligonucléotide à la concentration de 25 nM dans le
tampon décrit ci-dessus est préparée. 10 pl de cette solution sont distribués
dans les puits. 10 pl du produit à tester à différentes concentrations
préparées dans le même tampon contenant 0.6 % de DMSO sont alors
ajoutés. 10 pl de tampon + 0.6 % DMSO sont distribués dans les puits
contrôles. Les échantillons sont laissés à incuber 15 minutes à température
ambiante. Après ce temps d'incubation 10 pl du brin complémentaire à la
concentration de 25 nM et 20 pl d'une solution contenant les 2 types de billes
préalablement diluées à 50 mglml sont ajoutés dans les puits. Les plaques
sont incubées à température ambiante pendant 2 heures avant lecture. Dans
ces conditions le brin télomérique peut adopter une conformation secondaire
du type G-quadruplexe que le produit en fonction de son affinité pour cette
structure stabilise, en empêchant l'appariement au brin complémentaire. Le
signal émis est alors minimal. En absence de produit dans les puits contrôles,
le brin télomérique s'apparie au brin complémentaire ce qui se traduit par un
signal maximal.
Test de sélectivité n°7: Mesure de l'inhibition d'appariement d'un
oliaonucléotide, guelcongue, avec son brin complémentaire mesurée sous
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forme de concentration inhibitrice 50 % C150 exprimée en ,uM aar une
méthode de luminescence selon le protocole expérimental est décrit ci après
Le test utilisé est le même que celui décrit ci-dessus. Seuls les
oligonucléotides sont différents, le brin télomérique étant remplacé par un
oligonucléotide possédant la séquence suivante : G-GTT-TAA-AAT-AAT-
TGA-GGC-TTA-CCG-TTA-CCG-TTA-CGG biotinylé à l'extrémité 5'. Le brin
complémentaire possède la séquence : 5'-GGT-TTA-AAA-AAT-TTG -CGG-
TAA-CGG-TAA-CGG-TAA-GCC-T marqué à la digoxigénine à fextrémite 5'.
Si le produit à tester possède une affinité pour la séquence d'ADN biotinylée,
l'appariement au brin complémentaire sera empêché et le signal obtenu
minimal. En absence de produit ou si, ce dernier n'a pas d'affinité pour cet
ADN, l'appariement se fera et le signal sera maximal.
Test d'affinité n°2 : Mesure de la constante de dissociation exprimée
en uM,
du complexe entre un produit de l'invention et un oliaonucléotide susceptible
de former une structure G-auadruplexe monomériaue; par une méthode de
fluorescence selon le protocole expérimental est décrit ci-après.
Les titrations sont effectuées à 20°C dans une cuve en quartz de 3
ml de
volume utile et de section carrée 10x10 mm placée dans le compartiment
thermostaté du fluorimètre Spex Fluorolog 3 (Jobin-Yvon). Le tampon utilisé
dans toutes les epériences est un cacolylate de sodium pH 7.2 (10 mM)
contenant 100 mM en chlorure de potassium. A une solution en composé de
0.1 NM sont ajoutées des concentrations croissantes en acide nucléique.
Après un temps d'équilibration de 3 minutes, un spectre d'émission de
fluorescence est enregistré pour chaque point, en utilisant des fentes de 5 nm
et une longueur d'onde d'excitation de 340 nm. Chaque aliquote représente
un volume additionnel de 3 microlitres. Les effets de dilution sont corrigés à
la
fin de l'expérience après intégration du signal d'émission. Les courbes
représentant l'intensité d'émission en fonction de la concentration en acide
nucléique sont ensuites analysées et fittées avec le logiciel Kaleidagaph 3.52
pour Macintosh.
Test de sélectivité n°2 : Mesure de la constante de dissociation
exprimée en
,uM, du complexe entre un produit de l'invention et un oliaonucléotide double
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brin auelconaue par une méthode de fluorescence selon le ,protocole
exvérimental est décrit ci-agrès
Les titrations sont effectuées selon un protocole identique à celui employé
pour les titrations du test précédent.
Test d'affinité n°3 : Mesure de la stabilisation des G-
guadruplexes ~ Tm
exprimée en °C par une méthode utilisant la formation d'un complexe
avec
la fluoresceine dont le protocole expérimental est décrit ci après
Oliaonucléotides
Tous les olignucléotides, modifiés ou non, ont été synthétisés par
Eurogentec SA, Seraing, Belgique. L'oligoncléotide FAM + DABCYL porte la
référence catalogue, OL-0371-0802. II possède la séquence:
GGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG correspondant à 3.5 répétitions du motif
télomérique humain (brin riche en G). La fluorésceine est attaché à
l'extrémité
5', le DABCYL à l'extrémité 3', par les bras chimiques décrit par Eurogentec.
Un oligonucléotide FAM + TAMRA peut également être employé. La
concentration des échantillons est vérifiée par spectrophotométrie, en
enregistrant le spectre d'absorbance entre 220 et 700 nm et en utilisant le
coefficient d'extinction molaire fourni par le fournisseur.
Tampons
Toutes les expériences ont été réalisées dans un tampon cacodylate
de sodium 10 mM pH 7.6 contenant 0.1 M de Chlorure de Lithium (ou de
Chlorure de Sodium). L'absence de contamination fluorescente dans le
tampon a été préalablement vérifiée. L'oligonucléotide fluorescent est ajouté
à la concentration finale de 0.2 pM.
Etude de Fluorescence
Toutes les mesures de fluorescence ont été effectuées sur un
appareil Spex Fluorolog DM1 B ou Fluoromax 3, en utilisant une largeur de
raie d'excitation de 1.8 nm et une largeur de raie d'émission de 4.5 ou 5 nm.
Les échantillons sont placés dans une cuvette en quartz micro de 0.2 x 1 cm.
La température de l'échantillon est contrôlée par un bain-marie extérieur.
L'oligonucléotide seul a été analysé à 20, 30, 40, 50, 60, 70 et
80°C. Les
spectres d'émission sont enregistrés en utilisant une longueur d'onde
d'excitation de 470 nm. Les spectres d'excitation sont enregistrés en
utilisant
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soit 515 nm soit 588 nm comme longueur d'onde d'émission. Les spectres
sont corrigés de la réponse de l'instrument par des courbes de référence.
Une extinction importante (80-90 %) de la fluorescence de la fluoresceine à
température ambiante est observée, en accord avec un repli intramoléculaire
5 de l'oligonucléotide à 20°C sous forme d'un G-quadruplex, ce qui
induit une
juxtaposition de ses extrémités 5' et 3', respectivement liées à la
fluoresceine
et au DABCYL. Cette juxtaposition entraîne un phénomène déjà décrit
d'extinction de fluorescence, utilisé pour les "Molecular Beacons".
Tm en fluorescence
10 Une solution stock d'oligonucléotide à la concentration en brin de
0.2 pM dans un tampon 0.1 M LiCI 10 mM cacodylate pH 7.6 est
préalablement préparée, chauffée brièvement à 90°C et refroidie
lentement à
20°C, puis distribuée par aliquots de 600 NI dans les cuves de
fluorescence.
3 pl d'eau (pour le contrôle) ou 3 NI du produit à tester (stock à 200 pM,
15 concentration finale 1 pM) sont alors ajoutés et mélangés. Les échantillons
sont alors laissés à incuber pendant au moins 1 heure à 20°C avant
chaque
mesure. L'utilisation de temps d'incubation plus longs (jusqu'à 24 heurés) n'a
pas d'influence sur le résultat obtenu.
Chaque expérience permet la mesure de 1 à 4 échantillons. Celui ci est
20 d'abord incubé à une température initiale de 20°C et porté à
80°C en 38
minutes. Durant ce temps, la fluorescence est mesurée simultanément à une
(515 nm) ou à deux longueurs d'onde d'émission (515 nm et 588 nm) en
utilisant 470 nm Gommé longueur d'onde d'excitation. Une mesure est
effectuée toutes les 30 secondes ou tous les degrés. La température du bain
25 marie est enregistrée en parallèle, et le profil de fluorescence en
fonction de
la température est reconstitué à partir de ces valeurs. Les profils de
fluorescence sont ensuite normalisés entre 20°C et 80°C, et la
température
pour laquelle l'intensité d'émission à 515 nm est la moyenne de celles à haute
et basse température est appelée Tm. Dans ces conditions, le Tm de
l'échantillon de référence sans addition de produit est d'environ 44°C
dans un
tampon Chlorure de Lithium. Cette température est portée à plus de 55°C
dans un tampon Chlorure de Sodium. L'addition d'un composé stabilisant le
G-quadruplex induit une augmentation du Tm. Cette augmentation est jugée
significative si elle est supérieure à 3°.
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Test de sélectivité n °3 : Estimation de la répartition à l'éguilibre
d'un produit
de l'invention entre divers oliaonucléotides ou structures d'ADN par une
méthode de dialyse selon le protocole expérimental est décrit ci après.
Tous les polynucleotides proviennent d'Amersham-Pharmacia. Les
Oligonucleotides ont été synthétisés par Eurogentec, Belgique a l'echelle
1 pmole et utilisés sans purification supplémentaire. 19 structures sont
testées en parallèle (échantillon numérotés de 1-19, voir table ci-dessous).
Les triplexes TC, GA et GT résultent de l'association de deux brins de
différentes longueurs (13 and 30 bases)
5' GAAAGAGAGGAGG et 5' CCTCCTCTCTTTCCCTTCTTTCTCTCCTCC
(TC triplexe, échantillon #1 );
5' CCTCCTCTCTTTC et 5' GAAAGAGAGGAGGCCTTGGAGGAGAGAAAG
(GA triplexe, échantillon #2);
5' CCTCCTCTCTTTC et 5' GAAAGAGAGGAGGCCTTGGTGGTGTGTTTG
(GT triplexe, échantillon #3).
Le " duplexe " GA (échantillon #5) résulte de fautoappariement de
l'oligonucleotide (5' GAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGAGA). Le duplexe
parallèle (échantillon #6) résulte de l'association de
5'AAAAAAAAAATAATTTTAAATATT avec 5
T'lTl'TTTTTTATTAAAATTTATAA. 24 CTG (échantillon #7) mime 8
répétitions de trinucléotide: 5' CTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTG. ds26
(échantillon #11 ) est un duplexe autocomplémentaire de 26 bases 5'
CAATCGGATCGAATTCGATCCGATTG. 22CT (échantillon #13) est un
oligonucleotide qui mime le brin riche en C des télomères humains: 5'
CCCTAACCCTAACCCTAACCCT, tandis que 22AG (échantillon #14) est un
oligonucleotide qui mime le brin riche en G des télomères humains: 5'
AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG. 24620 (T2G~oT2, sample #15) peut
former un quadruplexe intermoléculaire 5'
(TTGGGGGGGGGGGGGGGGGGGGTT)4.
Table des Structures des acides nucléigues utilisés en dialaise
Numéro Nom Typea (longueur) Structure Tm (°C)
1 triplexe TC oligos (30+13) Triplexe 38
2 triplexe GA oligos (30+13) Triplexe 53
3 GT triplex oligos (30+13) Triplexe 53
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4 poly dA.2polydT poly Triplexe 71
duplexe GA oligo(24) " Duplexe 37
"b
duplexe parallele oligos ". Duplexe 39
(30+30) "b
7 24CTG oligo(24) " Duplexe 64
"b
5 8 poly d(A-T) pol
y Duplexe 66
9 poly d(G-C) poly Duplexe >90
CT DNA poly Duplexe 86
11 ds 26 oligo(26) Duplexe 75
12 poly dC poly i-DNA 51
10 13 22CT oligo(22) ss/i-DNA 13
14 22AG , oligo(22) G4 62
24620 oligo(24) G4 >90
16 poly dT poly simple-brin -
17 poly dA poly simple-brin
15 1,8 poly rU poly simple-brin -
19 poly rA poly simple-brin -
a: poly = polynucleotide; oligo = oligonucleotide; oligos = structure formée
par
association de deux oligonucleotides différents, Les longueurs sont indiquées
entre parenthèses. Les polynucleotides font plus de 700 bases de long.
b: Ces duplexes impliqûent la formation de paires de bases non canoniques.
L'activité antitélomérase des produits de l'invention dépendant
spécifiauement de la stabilisation de structure G-auadruplexe, mesurée par la
concentration inhibitrice 50 % C150 exprimée en pM, peut être évaluée selon
le protocole ci-dessous
Préparation de l'extrait enrichi en activité télomérase humaine
La lignée de carcinome pulmonaire A549 est obtenue auprès de l'ATCC
(American Type Culture Collection, Rockville USA). Les cellules sont
cultivées en couche, en flacon de culture dans du milieu DMEM, additionné
de glutamax à 2 mM, Penicilline 200 Ulml streptomycine 200 pglml et de
10 % de sérum foetal de veau inactivé par la chaleur. Les cellules en phase
exponentielles de croissances sont trypsinées, lavées dans du PBS 1X et une
aliquote de 106 cellules est centrifugée à 3000x6 et le surnageant écarté. Le
culot de cellules est resuspendu par plusieurs pipettages successifs dans
200 girl de tampon de lyse contenant CHAPS 0.5 %, Tris-HCI pH 7,5 10 mM,
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MgCl2 1 mM, EGTA 1 mM, (i-mercaptoéthanol 5 mM, PMSF 0.1 mM et
glycérol 10 % et est conservé dans la glace pendant 30 minutes. Le lysat est
centrifugé à 160000xG pendant 20 minutes à 4°C et 160 pl du surnageant
est
récupéré. Le dosage des proteines de l'extrait est effectué par la méthode de
Bradford. L'extrait est conservé à -80°C.
Dosage de l'activité télomérase par l'essai TRAP-G4
L'inhibition de l'activité télomérase est déterminée par un protocole TRAP
modifié qui permet de mesurer l'extension de la télomérase à partir d'un
oligonucléotide TSG4 (S~GGGATTGGGATTGGGATTGGGTT3~) pouvant
former une structure G-quadruplexe intramoléculaire, en présence d'un extrait
cellulaire enrichi en activité télomérase et des composés qui sont ajoutés à
différentes concentrations (30, 10, 1, 0.1 et 0,01 pM). La réaction
d'extension
est suivie d'une amplification PCR des produits d'extension à l'aide de
l'oligonucléotide CXext (S~GTGCCCTTACCCTTACCCTTACCCTAA3~). La
sélectivité de l'inhibition est mesurée par l'amplification d'un
oligonucléotide
contrôle TSNT (S~ATTCCGTCGAGCAGAGTTAAAAGGCCGAGAAGCGAT3~)
par l'oligonucléotide TS (5~AATCGTTCGAGCAGAGTT3~) et l'oligonucléotide
NT (S~ATCGCTTCTCGGCCTTTT3~).
Le milieu ractionnel est prpardans un volume final de 50 pL
selon la
composition suivante
Tris HCI pH 8,0 20 mM
MgCl2 1,5 mM
KCI 63 mM
Tween 20 0,005 % (P/V)
EGTA 1 mM
dATP 50 pM
dGTP 50 pM
dCTP 50 pM
dTTP 50 pM
Oligonuclotide TSG4 3,5 picomoles
Oligonuclotide CXext 22,5 picomoles
Oligonuclotide TSNT 0,01 attomoles
Oligonuclotide NT 7.5 picomoles
Oligonuclotide TS 18 picomoles
Srum Albumine bovine 20 pg/ml
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Taq DNA polymérase 50 U/ml
Extrait télomérase 100 ng sous un volume de 1 pl
Produit à tester ou solvant sous un volume de 5 pl
Eau bi-distillée QS 50 pl
Les oligonucléotides sont obtenus auprès d'Eurogentec Belgique) et sont
conservés à -20°C à une concentration stock de 100 pM dans de l'eau
distillée stérile sans ribonucléases et désoxyribonucléases.
Les échantillons réactionnels sont assemblés dans la glace dans des tubes à
PCR de 0.2 ml.
Les échantillons réactionnels sont ensuite incubés dans un appareil à PCR
de Eppendorf Mastercycler selon les conditions de températures suivantes
minutes à 30°C,
1 minute à 90°C,
suivis de 30 cycles de,
15 30 secondes à 92°C,
30 secondes à 52°C,
30 secondes à 72°C,
suivis d'un cycle final de 2 minutes à 72°C.
Après l'amplification, 8NL d'un tampon de dépôt de la composition suivante,
sont ajoutés aux échantillons
TBE 5X
sucrose 20 % (P/V)
Bleu de bromophénol 0.2
Xylène cyanol 0.2
Les échantillons sont ensuite analysés par électrophorèse en gel
d'acrylamide/bisacrylamide (19 :1) à 12 % dans un tampon TBE 1X pendant
45 minutes sous une tension de 200 volts, à l'aide d'un système
d'électrophorèse Novex.
Les gels sont colorés pendant 15 minutes dans une solution 1 X de SYBR
Green (Roche) et la fluorescence des produits de PCR est numérisée par une
caméra digitale (Bioprint system).
La disparition de la bande formée par la dimérisation des oligonucléotides
TSG4 et Cxext correspond à une stabilisation de la forme G-quadruplexe de
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l'oligonucléotide TSG4 et correspond à une inhibition de l'extension des
répétitions télomériques à partir de l'oligonucléotide TSG4.
La disparition de la bande formée par l'amplification de l'oligonucléotide
contrôle TSNT correspond à une inhibition non spécifique de l'activité de la
5 Taq polymérase.
Pour chaque composé, les résultats sont exprimés par le calcul de la
concentration (pM) inhibant 50% de la formation de la bande TSG4-Cxext
(CI50 TRAP-G4) et par le calcul de la concentration inhibant 50% de la
formation de la bande contrôle TSNT (CI50 Taq), par rapport à la valeur de
10 l'échantillon enzymatique sans composé.
Le rapport C150 Taq / C150 TRAP-G4 indique le facteur de sélectivité de
l'inhibition de l'extension de la télomérase par stabilisation de G-
quadruplexe
par rapport à l'inhibition de la Taq polymérase.
On considère qu'un composé est actif en tant qu'agent antitélomérase
15 stabilisant l'ADN G-quadruplexe lorsque la CI50 TRAP-G4 est notamment
inférieure à 5 pM.
On considère que le composé est sélectif en tant qu'agent antitélomérase
stabilisant le G-quadruplexe lorsque le rapport CI50 TRAP-G4/CI50 Taq est
supérieur à 3.
20 Les exemples suivants et non limitatifs sont donnés pour illustrer
l'invention
EXEMPLE 1 : Préparation du diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-
bis-[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide]
. N+ I i p p I N+.
1.
i
Etape 7 : Dans un tricot de 50 mL sous agitation magnétique, on dissous 1 g
25 d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique et 1.81 g de 6-aminoquinoléine dans
30 mL de dichlorométhane et 5 mL de diméthylformamide (DMF), puis on
ajoute 2,4 g de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-carbodümide
(EDCI) et 162 mg de 1-hydroxybenzotriazole (HOBT). Un précipité jaune
transitoire se forme qui se redissout lentement. Après 1 à 2 heures
d'agitation
30 à température ambiante, un précipité blanc abondant apparait. Après une
nuit
d'agitation à température ambiante, la réaction est terminée (contrôle par
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chromatographie liquide couplée à de la spectroscopie de masse LC/MS). Le
précipité formé est essoré, lavé successivement par du dichlorométhane et
de l'eau, puis séché sous pression réduite en présence d'anhydride
phosphorique. On obtient ainsi 2,41 g d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-
[(quinolin-6-yl)amide], sous forme d'une poudre blanche utilisée telle quelle
à
l'étape suivante.
Étape 2 : Dans un ballon de 25 mL, on dissout 200 mg d'acide 2,6-pyridine-
dicarboxylique-bis-[(quinolin-6-yl)amide], obtenu à l'étape précédente, dans
2 mL de méthanol, 4 mL de DMF et 10 mL d'iodométhane, puis on chauffe à
50° pendant 72 heures pendant lesquelles un précipité orange se forme
progressivement. Après refroidissement, ce précipité est essoré et lavé au
méthanol. Après recristallisation dans un mélange d'éthanol et de DMF
(50/50 en volumes), on obtient 288 mg de diodure de l'acide 2,6-pyridine-
dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide], sous forme de cristaux
jaune-orangés, dont les caractéristiques sont les suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
- Spectre de RMN 1 H (300 MHz, (CD3)2S0 d6, b en ppm) : 4,70 (s
large : 6H) ; de 8,15 à 8,30 (mt : 2H) ; de 8,40 à 8,80 (mt : 7H) ; 9,25 (d, J
= 2
Hz : 2H) ; 9,37 (d large, J = 8,5 Hz : 2H) ; 9,45 (d large, J = 5,5 Hz : 2H) ;
11,64 (s large : 2H).
EXEMPLE 2 : Préparation du diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-
2-[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide]-6-[(4-diméthylamino-1-méthyl-quinaldinio-
6-yl)amide].
~N I
+I~ o o I , +.
N / \N I N
I
Étape 7: Dans un tricot de 50 mL, on dissout, dans 35 mL de
dichlorométhane, 1,3 g de monoester n.butylique de l'acide 2,6-pyridine-
dicarboxylique, qui peut être obtenu selon Khim. Geterosikl. Soedin 7976(2),
233-7, et 1,17 g de 6-amino-4-diméthylamino-quinaldine, qui peut être
obtenue selon WO 0140218, puis on ajoute 1,35 g d'EDCI et 90 mg d'HOBT.
Après 2 à 3 heures, un précipité jaune apparaît ; l'agitation est maintenue
pendant 36 heures à température ambiante, jusqu'à complétion de la réaction
(LC/MS). Le milieu réactionnel est dilué à l'eau, la phase organique est
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décantéé et la phase aqueuse est extraite au dichlorométhane. Les phases
organiques jointes sont concentrées à sec sous pression réduite. Le résidu
pâteux obtenu est repris sous agitation dans 20 mL d'oxyde de düsopropyle,
pour former un solide beige clair qui est essoré et séché à l'air. On obtient
ainsi 820 mg d'ester n.butylique de.l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-6-[(4-
. diméthylamino-quinaldin-6-yl)amide], utilisé tel quel à l'étape suivante.
Étape 2: Dans un ballon de 50 mL, une solution de 820 mg d'ester
n.butylique de l'acide , 2,6-pyridine-dicarboxylique-6-[(4-diméthylamino-
quinaldin-6-yl)amide], obtenu ci-dessus, dans 30 mL de n.butanol est agité 16
heures avec 2 mL d'une solution aqueuse 1 M d'hydroxyde potassium. Après
concentration sous pression réduite, le résidu est repris dans 10 mL d'eau et
neutralisé à pH = 6 par addition d'une solution aqueuse 0.1 M d'acide
chlorhydrique. Le précipité formé est essoré, lavé à l'eau et séché sous
pression réduite à 60°C en présence d'anhydride phosphorique. On
obtient
ainsi 760 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-6-[(4-diméthylamino-
quinaldin-6-yl)amide], sous forme d'un solide blanc utilisé tel quel à l'étape
suivante.
Étape 3 : Dans un ballon de 50 mL, on dissout 760 mg d'acide 2,6-pyridine-
dicarboxylique-6-[(4-diméthylamino-quinaldin-6-yl)amide], obtenu ci-dessus,
et 360 mg de 6-aminoquinoléine dans 15 mL de DMF, puis on ajoute 458 mg
d'EDCI et 30 mg d'HOBT. Après 72 heures d'agitation à température
ambiante, le solvant est éliminé sous pression réduite. Le résidu est repris à
l'eau, et le précipité ainsi formé est lavé à l'eau puis par une solution
saturée
d'hydrogénocarbonate de sodium. Après séchage sous pression réduite en
présence d'anhydride phosphorique, on obtient 852 mg d'acide 2,6-pyridine-
dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide]-6-[(4-diméthylamino-quinaldin-6-yl)
amide], sous forme d'une poudre beige, utilisée telle quelle à l'étape
suivante.
Étape 4 : On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 1, mais à partir de
400 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide]-6-[(4-
diméthylamino-quinaldin-6-yl)amide], obtenu ci-dessus dans 6 mL de
méthanol et 15 mL d'iodométhane. On obtient alors après recristallisation
dans l'éthanol, 382 mg de diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-
[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide]-6-[(4-diméthylamino-1-méthyl-quinaldinio-6-
yl)amide], sous forme d'un solide vert-pâle dont les caractéristiques sont les
suivantes
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- Point de fusion (Kofler) > 260°C
- Spectre de RMN 1 H (300 MHz, (CD3)2S0 d6, â en ppm) : 2,85 (s
large : 3H) ; 3,56 (s : 6H) ; 4,11 (s large : 3H) ; 4,71 (s large : 3H) ; 7,12
(s
large : 1 H) ; 8,20 (dd large, J = 8,5 et 5,5 Hz : 1 H) ; de 8,30 à 8,80 (mt :
7H) ;
9,03 et 9,05 (2 s larges : 2H en totalité) ; 9,36 (d large, J = 8,5 Hz: 1 H) ;
9,45
(d large, J = 5,5 Hz : 1 H) ; 11,50 (s large : 1 H) ;11,64 (s large : 1 H).
EXEMPLE 3 : Préparation du diodure de l'acide 2,6-pyrazine-dicarboxylique-
bis-[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide] .
_ ,N
I + I ~ N~N~N I ~ I
i O O +.
N~ l N
Étape 7 : On opère comme à l'étape 1 de l'exemple 1, mais à partir de
450 mg d'acide 2,6-pyrazine-dicarboxylique, qui peut être préparé selon
J. Med. Chem. (1996), 29, 1452-57, de 450 mg de 6-aminoquinoléine, de
600 mg d'EDCI et de 40 mg d'HOBT dans 15 mL de dichlorométhane et
10 mL de DMF sous agitation pendant 1 nuit à température ambiante. Après
purification par LC/MS préparative, on obtient 170 mg d'acide 2,6-pyrazine-
dicarboxylique-bis-[(quinolin-6-yl)amide], sous forme d'une poudre blanche
utilisée telle quelle à l'étape suivante.
Étape 2 : On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 1, mais à partir de 50 mg
d'acide 2,6-pyrazine-dicarboxylique-bis-[(quinolin-6-yl)amide], obtenu
ci-dessus dans 1 mL de DMF et 5 mL d'iodométhane. On obtient alors après
recristallisation dans I'éthanol, 51 mg de diodure de l'acide 2,6-pyrazine-
dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide], sous forme d'un solide
jaune-pâle dont les caractéristiques sont les suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
- Spectre de RMN 1 H (300 MHz, (CD3)ZSO d6, 8 en ppm) : 4,70 (s
6H) ; 8,22 (dd, J = 8,5 et 6 Hz : 2H) ; 8,70 (s : 4H) ; 9,21 (s large : 2H) ;
9,39
(d, J = 8,5 Hz : 2H) ; 9,46 (d, J = 6 Hz : 2H) ; 9,71 (s : 2H) ; 11,62 (s
large
2H).
EXEMPLE 4 : Préparation du diodure de l'acide 1,3-benzène-dicarboxylique-
bis-[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide]
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+I~ o o I +.
N / I N
Étape 1 : On opère comme à l'étape 1 de l'exemple 1, mais à partir de
300 mg d'acide isophtalique, de 521 mg de 6-aminoquinoléine, de 727 mg
d'EDCI et de 50 mg d'HOBT dans 10 mL de DMF sous agitation pendant
1 nuit à température ambiante. On obtient 593 mg d'acide 1,3-benzène-
dicarboxylique-bis-[(quinolin-6-yl)amide], sous forme d'une poudre blanche,
utilisée telle quelle à l'étape suivante.
Étape 2 : On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 1, mais à partir de
100 mg d'acide 1,3-benzèné-dicarboxylique-bis-[(quinolin-6-yl)amide], obtenu
ci-dessus dans 1 mL de DMF et 6 mL d'iodométhane. On obtient alors après
recristallisation dans l'éthanol, 72 mg de diodure de l'acide 1,3-benzène-
dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide], sous forme d'un solide
jaune-pâle dont les caractéristiques sont les suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
- Spectre de RMN 1 H (300 MHz, (CD3)~SO d6, â en ppm) : 4,63 (s
6H) ; 7,77 (t, J = 7,5 Hz : 1 H) ; 8,07 (dd, J = 8,5 et 6 Hz : 2H) ; 8,29 (d
large,
J = 7,5 Hz : 2H) ; 8,49 (mt : 4H) ; 8,84 (s large : 1 H) ; 8,99 (s large : 2H)
;
9,16 (d, J = 8,5 Hz : 2H) ; 9,28 (d, J = 6 Hz : 2H).
EXEMPLE 5 : Préparation du diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-
bis-[(1-méthyl-quinaldinio-6-yl)amide]
'N I N \
+ I i O O I ~ +.
N / I N
Étape 1 : On opère comme à l'étape 1 de l'exemple 1, mais à partir de
500 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique, de 945 mg de 6-aminoquinaldine,
qui peut être préparée selon EP 286277, de 1,2 g d'EDCI et de 100 mg
d'HOBT dans 15 mL de dichlorométhane et 3 mL de DMF sous agitation
pendant 24 heures à température ambiante. On obtient 1,47 g d'acide
2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(quinaldin-6-yl)amide], sous forme d'une
poudre blanche utilisée telle quelle à l'étape suivante.
CA 02514105 2005-07-22
WO 2004/072027 PCT/FR2004/000260
Étape 2 : On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 1, mais à partir de
150 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(quinaldin-6-yl)amide], obtenu
ci-dessus dans 1,5 mL de DMF et 6 mL d'iodométhane. On obtient alors
après recristallisation dans féthanol, 161 mg de diodure de l'acide
5 2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinaldinio-6-yl)amide], sous
forme
d'un solide jaune dont les caractéristiques sont les suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
EXEMPLE 6 : Préparation de l'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-
[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide]-6-[(4-amino-quinaldinio-6-yl)amide], isolé
10 sous sa forme tautomère imino ci-dessous
'_ \ N N
~N
'N+ ~ ~ O O ~ ~ NH
i
~ NH2 i
Étape 7 : On opère comme à l'étape 1 de l'exemple 2, mais à partir de
500 mg de monoester n.butylique de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique, de
388 mg de 4,6-diaminoquinaldine, qui peut être obtenue selon WO 0140218,
15 de 472 mg d'EDCI et de 30 mg d'HOBT dans 10 mL de dichlorométhane et
5 mL de DMF pendant 20 heures à température ambiante. On obtient, après
purification par flash-chromatographie sur alumine, en éluant par un mélangé
de dichlorométhane et de méthanol (95/5 en volumes), 450 mg d'ester
n.butylique de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-6-[(4-amino-quinaldin-6-
20 yl)amide], utilisé tel quel à l'étape suivante.
Étape 2: On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 2, mais à partir de
450 mg d'ester n.butylique de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-6-[(4-amino-
quinaldin-6-yl)amide], obtenu ci-dessus, dans 20 mL et 1,19 mL d'une
solution aqueuse 1 M d'hydroxyde potassium. On obtient ainsi 243 mg d'acide
25 2,6-pyridine-dicarboxylique-6-[(4-amino-quinaldin-6-yl)amide], sous forme
d'un solide beige utilisé tél quel à l'étape suivante.
Étape 3 : On opère comme à l'étape 3 de l'exemple 2, mais à partir de 93 mg
d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-6-[(4-amino-quinaldin-6-yl)amide], obtenu
ci-dessus, de 41,6 mg de 6-aminoquinoléine, de 61 mg d'EDCI et de 14 mg
30 d'HOBT dans 5 mL de dichlorométhane et 5 mL de DMF pendant 48 heures à
température ambiante. On obtient ainsi 101 mg d'acide 2,6-pyridine-
CA 02514105 2005-07-22
WO 2004/072027 PCT/FR2004/000260
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dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide]-6-[(4-amino-quinaldin-6-yl)amide],
sous forme d'une poudre beige, utilisée telle quelle à l'étape suivante.
Étape 4 : On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 1, mais à partir de 65 mg
d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide]-6-[(4-amino-
quinaldin-6-yl)-amide], obtenu ci-dessus, dans 1 mL de DMF et 5 mL
d'iodométhane. On obtient alors après recristallisation dans l'éthanol, 58 mg
d'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6
yl)amide]-6-[(4-amino-quinaldin-6-yl)amide], isolé sous sa forme tautomère
imino, sous forme d'un solide jaune dont les caractéristiques sont les
suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
- Spectre de RMN 1 H (400. MHz, (CD3)ZSO d6, à une température de
373K, 5 en ppm) : 2,64 (s : 3H) ; 4,70 (s : 3H) ; 6,71 (s : 1 H) ; 7,95 (d, J
= 9
Fiz : 1 H) ; 8,16 (dd large, J = 8,5 et 5,5 Hz : 1 H) ; de 8,20 à 8,40 (mf
étalé
1 H) ; 8,29 (d, J = 8,5 Hz : 1 H) ; 8,43 (t, J = 7,5 Hz : 1 H) ; 8,53 (mt :
2H) ; 8,63
(d, J = 9,5 Hz : 1 H) ; 8,76 (d large, J = 9,5 Hz : 1 H) ; 8,86 (s large : 1
H) ; 9,11
(s large : 1 H) ; 9,30 (d, J = 8,5 Hz : 1 H) ; 9,41 (d, J = 5,5 Hz : 1 H) ;
11,18 (s
large : 1 H) ; 11,44 (s large : 1 H) ; de 13,00 à 13,50 (mf étalé : 1 H).
EXEMPLE 7 : Préparation du diodure de l'acide 2,6-benzène-dicarboxylique-
bis-[(1-méthyl-quinaldinio-6-yl)amide]
+I i ~0~1'~O I ~ +.
I N
Étape 7 : On opère comme à l'étape 1 de l'exemple 1, mais à partir de
100 mg d'acide isophtalique, de 190,5 mg de 6-aminoquinaldine, de 242 mg
d'EDCI et de 20 mg d'HOBT dans 5 mL de DMF sous agitation pendant
20 heures à température ambiante. On obtient 265 mg d'acide 2,6-benzène-
dicarboxylique-bis-[(quinaldin-6-yl)amide], sous forme d'une poudre beige
utilisée telle quelle à l'étape suivante.
Étape 2 : On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 1, mais à partir de 95 mg
d'acide 2,6-benzène-dicarboxylique-bis-[(quinaldin-6-yl)amide], obtenu
ci-dessus, dans 1 mL de DMF et 5 mL d'iodométhane. On obtient alors après
recristallisation dans l'éthanol, 83 mg de diodure de l'acide 2,6-benzène-
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dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinaldinio-6-yl)amide], sous forme d'un solide
jaune dont les caractéristiques sont les suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
- Spectre de RMN 1 H (300 MHz, (CD3)2S0 d6, 8 en ppm) : 3,08 (s
6H) ; 4,47 (s : 6H) ; 7,86 (t, J = 8 Hz : 1 H) ; 8,10 (d, J = 8,5 Hz : 2H) ;
8,33 et
8,34 (2d, J = 8 Hz : 2H en totalité) ; 8,48 (dd, J = 9,5 et 2,5 Hz : 2H) ;
8,66 (d,
J = 9,5 Hz : 2H) ; 8,70 (s large : 1 H) ; 8,96 (d, J = 2,5 Hz : 2H) ; 9,13 (d,
J =
8,5 Hz : 2H) ; 11.13 (s large : 2H).
EXEMPLE 8 : Préparation du diodure de l'acide 2,4-pyridine-dicarboxylique-
bis-[(1-méthyl-quinolin-6-yl)amide]
N~
- ~ N l~~~l if N ~
. + I ~ O O I . +.
N / I N
Étape 1 : On opère comme à l'étape 1 de l'exemple 1, mais à partir de
100 mg d'acide 2,4-pyridine-dicarboxylique, de 181 mg de 6-aminoquinaldine,
de 241 mg d'EDCI et de 16 mg d'HOBT dans 5 mL de DMF sous agitation
pendant 20 heures à température ambiante. On obtient 325 mg d'acide
2,4-pyridine-dicarboxylique-bis-[(quinolin-6-yl)amide], sous forme d'une
poudre beige utilisée telle quelle à l'étape suivante.
Étape 2 : On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 1, mais à partir de
300 mg d'acide 2,4-pyridine-dicarboxylique-bis-[(quinolin-6-yl)amide], obtenu
ci-dessus, dans 3 mL de DMF et 10 mL d'iodométhane. On obtient alors
après recristallisation dans l'éthanol, 372 mg de diodure de l'acide
2,4-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolin-6-yl)amide], sous forme
d'un solide jaune dont les caractéristiques sont les suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
- Spectre de RMN 1 H (400 MHz, (CD3)2SO d6, à une température de
373 K, â en ppm) : 4,61 (s : 3H) ; 4,68 (s : 3H) ; 7,93 (dd, J = 8,5 et 5,5 Hz
1 H) ; 8,11 (dd, J = 8,5 et 5,5 Hz : 1 H) ; 8,33 (mt : 2H) ; 8,43 (d large, J
= 9,5
Hz : 1 H) ; 8,56 (d large, J = 9,5 Hz : 1 H) ; 8,75 (dd large, J = 9,5 et 1,5
Hz
1 H) ; 8,79 (d, J = 1,5 Hz : 1 H) ; 8,89 (s : 1 H) ; 8,90 (mt : 1 H) ; 8,99 (d
large,
J = 8,5 Hz : 1 H) ; 9,10 (mt : 1 H) ; 9,10 (s : 1 H) ; 9,23 (d, J = 8,5 Hz : 1
H) ;
9,35 (d, J = 5,5 Hz : 1 H).
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EXEMPLE 9 : Préparation de l'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-
[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide]-6-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide],
I_
~ N ~N N W ~
wN+~i0 O~N+i
I_
Etape 7 : Dans un tricot de 25 mL, on dissout 1,74 g d'acide 2,6-pyridine-
dicarboxylique, 500 mg de 4-aminoquinoléine, 543 pL de chlorhydrate de
N-(2-chloroéthyl)düsopropylamine (DIC) et 469 mg d'HOBT dans 15 mL de
DMF. Dès la disparition en CCM (plaque de silice 60F254, éluant
dichlorométhane/méthanol 90/10), le milieu réactionnel est déposé sur une
cartouche de 5 g de résine sulfonique (40pM de modèle Varian Mega Bond
Elut SCX). La fraction, éluée par une solution 0,1 M de méthanol
ammoniacal, est concentrée sous pression réduite. Le résidu est repris par
5 mL de dichlorométhane, et le précipité formé est essoré puis lavé par une
solution aqueuse 1 M ,d'acide chlorhydrique. On obtient ainsi 510 mg d'acide
2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide], utilisé tel quel à
l'étape
suivante.
Etape 2: On opère comme à l'étape 3 de l'exemple 2, mais à partir de
150 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide], obtenu
ci-dessus, de 74 mg de 3-aminoquinoléine, qui peut être préparée selon
Tetrahedron. Lett. 2001, 42, 3251-54, de 109 mg d'EDCI et de 7 mg d'HOBT
dans 5 mL de dichlorométhane et 5 mL de DMF pendant 48 heures à
température ambiante. On obtient ainsi 180 mg d'acide 2,6-pyridine-
dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide]-6-[(quinolin-3-yl)amide], sous forme
d'une poudre beige rosée, utilisée telle quelle à l'étape suivante.
Etape 3 : On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 1, mais à partir de
150 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide]-6-
[(quinolin-3-yl)-amide], obtenu ci-dessus, dans 1 mL de DMF et 5 mL
d'iodométhane. On obtient alors après recristallisation dans l'éthanol, 162 mg
d'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)
amide]-6-[(1-méthyl-quinolin-3-yl)amide], sous forme d'un solide jaune dont
les caractéristiques sont les suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
CA 02514105 2005-07-22
WO 2004/072027 PCT/FR2004/000260
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- Spectre de RMN 1 H (300 MHz, (CD3)2S0 d6, 8 en ppm) : 4,68 (s
large : 3H) ; 4,78 (s large : 3H) ; 8,07 (t large, J = 7,5 Hz : 1 H) ; de 8,15
à 8,30
(mt : 1 H) ; 8,20 (dd, J = 8,5 et 5,5 Hz : 1 H) ; de 8,40 à 8,65 (mt : 5H) ;
8,65 (d
large, J = 9,5 Hz : 1 H) ; 8,75 (dd large, J = 9,5 et 2 Hz : 1 H) ; 9,22 (d
large,
J = 2 Hz : 1 H) ; 9,35 (d large, J = 8,5 Hz : 1 H) ; 9,43 (d large, J = 5,5 Hz
1 H) ; 9,64 (s large : 1 H) ; 10,10 (mf : 1 H) ;de 11,10 à 12,50 (mf étalé :
2H).
EXEMPLE 10 : Préparation de l'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-
2-[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide]-6-[(1-méthyl-quinolinio-5-yl)amide]
N \N~ N /
~N+~ i O O ,
11+
I .~ w N~ I_
Efape 7 : On opère comme à l'étape 3 de l'exemple 2, mais à partir de
150 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide], obtenu à
l'étape 1 de l'exemple 9, de 74 mg de 5-aminoquinoléine, de 109 mg d'EDCI
et de 7 mg d'HOBT dans 5 mL de dichlorométhane et 5 mL de DMF pendant
48 heures à température ambiante. On obtient ainsi 201 mg d'acide
2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide]-6-[(quinolin-5-yl)amide],
sous forme d'une poudre beige, utilisée telle quelle à l'étape suivante.
Étape 2 : On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 1, mais à partir de
180 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide]-6-
[(quinolin-5-yl)-amide], obtenu ci-dessus, dans 1,5 mL de DMF et 5 mL
d'iodométhane. On obtient alors après recristallisation dans l'éthanol, 203 mg
d'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]-6-[(1-méthyl-quinolin-5-yl)amide], sous forme d'un solide jaune dont
les caractéristiques sont les suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
- Spectre de RMN 1 H (400 MHz, (CD3)2S0 d6, à une température de
373 K, s en ppm) : 4,69 (s large : 6H) ; 8,08 (dd très large, J = 8,5 et 5 Hz
1 H) ; 8,14 (dd, J = 8,5 et 5 Hz : 1 H) ; 8,23 (mf : 1 H) ; de 8,30 à 8,45 (mt
: 2H) ;
8,49 (mt : 2H) ; 8,54 (dd, J = 8 et 0,5 Hz : 1 H) ; 8,61 (d, J = 9,5 Hz : 1 H)
; 8,70
(dd, J = 9,5 et 2,5 Hz : 1 H) ; 9,07 (d, J = 2,5 Hz : 1 H) ; 9,26 (d, J = 8,5
Hz
1 H) ; 9,38 (d, J = 5 Hz : 1 H) ; 9,45 (d large, J = 5 Hz : 1 H) ; 9,60 (d
large, J =
8,5 Hz : 1 H).
CA 02514105 2005-07-22
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EXEMPLE 11 : Préparation du diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-
bis-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide]
H~r~H
N 'N N
I ~ N~' O
I- I I
I
Étape 7 : On opère comme à l'étape 1 de l'exemple 1, mais à partir de
5 150 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique, de 945 mg de 3-aminoquinoléine,
qui peut être préparée selon Tetrahedron. Lett. 2001, 42, 3251-54, de 361 mg
d'EDCI et de 24 mg d'HOBT dans 10 mL de DMF sous agitation pendant
18 heures à température ambiante. On obtient 495 mg d'acide 2,6-pyridine
dicarboxylique-bis-[(quinolin-3-yl)amide], sous forme d'une poudre blanche,
10 utilisée telle quelle à l'étape suivante.
Étape 2 : On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 1, mais à partir de
200 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(quinolin-3-yl)amide], obtenu
ci-dessus dans 3 mL de DMF et 10 mL d'iodométhane. On obtient alors après
recristallisation dans l'éthanol, 231 mg de diodure de l'acide 2,6-pyridine-
15 dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide], sous forme d'un
solide
jaune dont les caractéristiques sont les suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
- Spectre de RMN 1 H (300 MHz, (CD3)2S0 d6, â en ppm) : 4,82 (s
large : 6H) ; 8,12 (t large, J = 8 Hz : 2H) ; 8,27 (t large, J = 8 Hz : 2H) ;
de
20 8,45 à 8,65 (mt : 7H) ; 9,68 (s large : 2H) ; 10,14 (s large : 2H) ; 11,93
(mf
2H).
EXEMPLE 12 : Préparation du diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-
2-[(1-méthyl-quinolinio-6-yl)amide]-6-[2(-1-méthyl-pipéridinio-1-
yl)éthylamide]
w w N 'N I N ~/~ N+
I N~' i O O
I- I
I_
25 Étape 7 : On opère comme à l'étape 3 de l'exemple 2, mais à partir de
140 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide], obtenu à
l'étape 1 de l'exemple 9, de 73 pL de 1-(2-aminoéthyl)pipéridine, de 100 mg
d'EDCI et de 7 mg d'HOBT dans 5 mL de dichlorométhane et 5 mL de DMF
pendant 48 heures à température ambiante. On obtient ainsi, après
CA 02514105 2005-07-22
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purification par flash-chromatographie sur gel de silice, en éluant par un
mélange de dichlorométhane et de méthanol (80/20 en volumes), 200 mg
d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide]-6-[2-(pipéridin-1
yl)éthylamide], sous forme d'une huile jaune, utilisée telle quelle à l'étape
suivante.
Étape 2: On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 1, mais à partir de
200 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(quinolin-6-yl)amide]-6-[2-
(pipéridin-1-yl)-éthylamide], obtenu ci-dessus, dans 2 mL de DMF et 6 mL
d'iodométhane. On obtient alors après recristallisation dans l'éthanol, 73 mg
d'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-6-
yl)amide]-6-[2-(1-méthyl-pipéridin-1-yl)éthylamide], sous forme d'un solide
jaune dont les caractéristiques sont les suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
EXEMPLE 13 : Préparation de l'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-
2-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide]-6-[quinolin-3-yl)amide]
l ~ ~ N ~N N ~ w
Hlli ~H ,
i N* p p .N
p ~
106 mg d'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(quinolin-3-yl)amide], obtenus
à l'étape 1 de l'exemple 11, sont dissous dans 3 mL de DMF, on ajoute alors
36,6 mg d'iodure de méthyle puis on chauffe dans un tube scellé de 10 mL,
pendant 5 heures à 80°. Après refroidissement, on ajoute 10 mL d'oxyde
de
diéthyle. Le précipité obtenu est essoré, lavé à l'oxyde de diéthyle, puis
puis
purifié par chromatographie LC/MS en utilisant une colonne de silice C18
Waters Xterra 3.5 pM, de diamètre 3 mm et de longueur 50 mm, en éluant
par un gradient linéaire d'élution constitué au temps initial (t0 = 0 mn) par
de
l'eau additionnée de 0,05 % de TFA et au temps final (tf = 4 mn) par de
l'acétonitrile contenant 0,05 % de TFA. En recueillant la fraction éluée à
2,63 tl1n, on obtient 98 mg d'iodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-2-
[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide]-6-[quinolin-3-yl)amide], sous forme d'un
solide jaune dont les caractéristiques sont les suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
EXEMPLE 14 : Préparation du diodure de l'acide 2,6-pyridine-dicarboxylique-
2-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide]-6-[1-(2-hydroxyéthyl)quinolinio-3-
yl)amide]
CA 02514105 2005-07-22
WO 2004/072027 PCT/FR2004/000260
42
H~~~H
w w N ~N N i w
I i N~ O O ~N+I i
I_
~- I
OH
Dans un tricot de 25 mL, on met en suspension 112,3 mg d'iodure de l'acide
2,6-pyridine-dicarboxylique-2-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide]-6-[quinolin-3-
yl)amide], obtenus comme à l'exemple 13, dans 5 mL d'acétonitrile, on ajoute
1 mL de 2-iodoéthanol, puis on chauffe au reflux pendant 72 heures.
L'insoluble rouge obtenu est essoré, lavé à l'acétonitrile, puis par un
mélange
d'acétonitrile et d'éthanol (50-50 en volumes), puis purifié par
chromatographie LC/MS en utilisant une colonne de silice C18 Waters Xterra
3.5 pM, de diamètre 3 mm et de longueur 50 mm, en éluant par un gradient
linéaire d'élution constitué au temps initial (t0 - 0 mn) par de l'eau
additionnée de 0,05 % de TFA et au temps final (tf = 4 mn) par de
l'acétonitrile contenant 0,05 % de TFA. En recueillant la fraction éluée à
2,20 mn, on obtient 30 mg de diodure de l'acide 2,6=pyridine-dicarboxylique-
2-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide]-6-[1-(2-hydroxyéthyl)quinolinio-3-yl)
amide], sous forme d'un solide beige dont les caractéristiques sont les
suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
Exemple 15 : Préparation du diodure de l'acide 4-bromo-2,6-pyridine-
dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)amide]
gr
I
I w w N ~N N ~ \
N* ~ ~ ~N+I i
I I I I
Étape 7 : On opère comme à l'étape 1 de l'exemple 1, mais à partir de
502 mg d'acide 4-bromo-2,6-pyridine-dicarboxylique, qui peut être préparé
selon Tetrahedron lett. 2001, 42, 4849-51, et de 588 mg de
3-aminoquinoléine, qui peut être préparée selon Tetrahedron. Lett. 2001, 42,
3251-54, de 821 mg d'EDCI et de 55 mg d'HOBT dans 23 mL de DMF sous
agitation pendant 20 heures à température ambiante. On obtient 935 mg
d'acide 4-bromo-2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(quinolin-3-yl)amide], sous
forme d'une poudre gris-vert, utilisée telle quelle à l'étape suivante.
CA 02514105 2005-07-22
WO 2004/072027 PCT/FR2004/000260
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Etape 2 : On opère comme à l'étape 2 de l'exempté 1, mais à partir de
300 mg d'acide 4-bromo-2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(quinolin-3-
yl)amide], obtenu ci-dessus dans 8 mL de DMF et 12,63 mL d'iodométhane.
On obtient alors après recristallisation dans l'éthanol, 296 mg de diodure de
l'acide 4-bromo-2,6-pyridine-dicarboxylique-bis-[(1-méthyl-quinolinio-3-yl)
amide], sous forme d'un solide jaune dont les caractéristiques 'sont les
suivantes
- Point de fusion (Kofler) > 260°C
EXEMPLE 16 : COMPOSITION PHARMACEUTIQUE
On a préparé des comprimés répondant à la formule suivante:
Produit de l'exemple 1 .... .:.................. 0,2 g
Excipient pour un comprimé terminé à .......... 1 g
(détail dé l'excipient : lactose, talc, amidon,
stéarate de magnésium).
EXEMPLE 17 : ,COMPOSITION PHARMACEUTIQUE
On a préparé des comprimés répondant à la formule suivante
Produit de l'exemple 12........................ 0,2 g
Excipient pour un comprimé terminé à .......... 1 g
(détail de l'excipient : lactose, talc, amidon,
stéarate de magnésium).
