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Utilisation d'au moins un derive oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane
comme antioxydants
La presente invention concerne l'utilisation d'au moins un derive oxime du
3,5-seco-4-nor-cholestane pour leur propriete antioxydante. Plus
particulierement,
Ia presente invention concerne l'utilisation d'au moins un derive oxime du 3,5-
seco-
4-nor-cholestane comme antioxydants dans les domaines cosmetiques et
alimentaires, et comme conservateurs antioxydant utilisables notamment dans
des
produits cosmetiques, alimentaires, et pharmaceutiques.
Le stress oxydant est l'une des consequences biologiques de l'utilisation de
I'oxygene par l'organisme. II se traduit par Ia formation de radicaux libres
dans
les cellules. Les radicaux libres, si non controles, peuvent rapidement reagir
avec
des molecules dans leur entourage, donnant naissance a des composes toxiques
qui peuvent interferer avec les processus physiologiques normaux. Ces
substances peuvent conduire a des dommages cellulaires si les defenses
antiradicalaires ne sont pas suffisantes. De plus en plus de travaux montrent
que
les especes reactives de I'oxygene jouent un role important dans de multiples
processus biologiques et notamment dans le developpement de multiples
pathologies humaines, et dans le vieillissement.
Les effets cumules de ces reactions peuvent submerger les mecanismes
normaux de reparation cellulaire.
Le role de l'oxydation cellulaire sur le vieillissement et particulierement le
vieillissement cutane, qu'il soit intrinseque ou extrinseque, notamment- photo-
induit, est connu. Le vieillissement cutane se traduit par differents signes
cliniques notamment I'apparition de ridules et de rides profondes, en
augmentation avec I'age. Par ailleurs, I'apparence de Ia peau ou du scalp se
deteriore. Le teint de Ia peau est generalement modifie et il peut exister sur
certaines zones de Ia peau des irritations diffuses et parfois des
telangiectasies.
Un autre signe clinique du vieillissement est I'aspect sec et reche de Ia
peau qui est`du essentiellement a une desquamation plus importante. On
constate enfin une perte de fermete et de tonicite de Ia peau qui, comme pour
les
rides et les ridules, s'explique du moins en partie par une atrophie dermique
et
epidermique ainsi qu'un aplatissement de Ia formation. On constate donc que
les
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signes cliniques du vieillissement cutane resultent essentiellement d'un
dysfonctionnement des principaux mecanismes biologiques intervenant au
niveau de Ia peau.
Prevenir ou traiter le vieillissement cutane, qu'iI soit intrinseque ou
extrinseque, et..Ies signes cliniques decrits ci-dessus, revient a maintenir
ou
ameliorer I'apparence de Ia peau ou du scalp.
Differents antioxydants susceptibles de prevenir ou traiter le vieillissement
cutane sont decrits dans 1'etat de Ia technique.
Les antioxydants sont des substances qui neutralisent les radicaux libres ou
lo leurs actions. Ainsi, ils aident dans Ia protection des cellules contre les
dommages
des radicaux libres.
Parmi les molecules antioxydantes naturelles, on trouve par exemple les
vitamines (A, E et C notamment), les carotenoides (comme le beta-carotene),
les
polyphenols, et les oligo-elements (comme le selenium, le cuivre et le zinc).
L'effet benefique d'un apport exogene d'antioxydant pour limiter le stress
oxydatif et renforcer Ia defense antioxydante, par ingestion, est connu. Des
donnees scientifiques recentes ont montre que, chez certaines especes
animales, I'administration d'antioxydants freinait efficacement le processus
du
vieillissement et augmentait Ia longevite de I'animal.
II est ainsi parfois benefique, pour permettre a I'organisme de fonctionner
normalement, d'ingerer des composants possedant une action antioxydante en
quantite suffisante.
Des antioxydants ont aussi un effet benefique quand ils sont appliques sur Ia
peau, ils sont en effet utilises en cosmetique.
L'utilisation des antioxydants comme conservateurs, dans divers types de
produits sensibles a I'oxydation, est aussi connue.
Cependant, les composes utilises comme antioxydants sont parfois
inadequats ou ont une action insuffisante. On sait par exemple que le
tocopherol
qui est dans ce domaine un produit de reference est sensible a Ia Iumiere et
3 o necessite des moyens de conservation particuliers.
II persiste~' donc un besoin reel en composes antioxydants, et il serait
interessant de disposer de nouveaux antioxydants ayant une puissante activite
antioxydante et qui auraient un effet benefique dans le domaine cosmetique,
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dans le domaine alimentaire, et aussi un effet sur Ia conservation de
produits.
La presente invention repond a cette demande de puissants composes
antioxydants puisqu'elie concerne I'utilisation d'au moins un derive oxime du
3,5-
seco-4-nor-cholestane comme antioxydant, qui sont des antioxydants puissants.
En effet les inventeurs ont maintenant montre le puissant role antioxydant
d'au moins un derive oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane, et notamment l'oxime
du 3,5-seco-4-nor-cholestane vis a vis de Ia peroxydation de lipides et
egalement
vis-a-vis des substances susceptibles de subir des reactions d'oxydation
thermo-
ou photo-induites (telles que les proteines, des sucres, des pigments, des
1 o vitamines, des polymeres).
C'est pourquoi Ia presente invention a pour objet I'utilisation d'au moins un
derive oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane comme antioxydant.
Selon I'invention le terme antioxydant fait reference a Ia capacite d'un
compose a reduire les dommages causes par les radicaux libres :
- dans I'organisme, 'comme principe actif dans le domaine cosmetique et
dans le domaine alimentaire, et
- dans tout type de produit le necessitant afin d'etre mieux conserve,
comme conservateur.
Toute utilisation des composes comme principe actif pour une application
therapeutique est exclue.
En plus de leurs excellentes proprietes antioxydantes, ces composes
presentent les avantages suivants :
- leur synthese est realisable a I'echelle de plusieurs kilogrammes sans
probleme industriel.
- du fait qu'ils sont de puissants antioxydants, Ia dose necessaire est tres
faible ;
- ces composes n'absorbent pas dans I'UV/visible, ils n'interferent donc pas
avec les produits solaires classiques qui absorbent les rayons UV et ne
presentent
pas de risque d'instabilite chimique dans ce domaine de longueurs d'onde ;
- ces composes se presentent sous forme de poudre cristalline et se
conservent tres bien a temperature ambiante, sans aucune degradation pendant
au
moins 12 mois ;
- ils possedent-une bonne solubilite dans les corps gras ;
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- ils sont incolores, insipides et inodores, ce qui est un avantage pour une
utilisation dans les domaines alimentaires et cosmetiques notamment ;
- ils sont biodisponibles, ce qui en fait des composes dont on peut attendre
qu'ils presentent une activite systemique par voie orale ;
Les proprietes antioxydantes des composes de I'invention recommandent leur
utilisation dans le domaine cosmetique.
Ainsi, un premier aspect de l'invention est l'utilisation d'au moins un derive
oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane pour proteger Ia peau.
La peau est notamment le lieu d'agression de facteurs toxiques extrinseques
1 o et intrinseques. Les facteurs extrinseques incluent par exemple les
radiations
ultraviolettes, le vent, Ia faible humidite, les abrasifs et les agents
tensioactifs forts.
Les facteurs intrinseques incluent le vieillissement chronologique et les
modifications biochimiques de Ia peau.
II existe une relation de cause a effet entre une exposition repetee aux UV et
le vieillissement premature de Ia peau. Une exposition excessive au soleil
contribue
a une diminution prematuree de Ia qualite et quantite d'elastine et de
collagene
dans Ia peau, et a une hypertrophie de I'epiderme. Ces changements se
manifestent par des signes typiques du vieillissement, tels que les rides, une
perte
d'elasticite, une secheresse de Ia peau et une frequence plus importante de
taches,
2 o et des neoplasies benignes ou malignes.
Les composes de Ia presente invention sont capables de fournir une
protection efficace contre les facteurs qui provoquent I'apparition de rides
et autres
changements histologiques associes au vieillissement de Ia peau.
C'est donc aussi I'un des objets de l'invention d'utiliser les proprietes
antioxydantes des composes selon I'invention sur les symptomes du
vieillissement
du aux UV, c'est-a-dire sur les dommages sur Ia peau qui apparaissent comme le
resultat d'une exposition repetee au soleil pour prevenir, effacer et traiter
les rides,
les ridules de Ia peau, et/ou lutter contre le relachement cutane et/ou sous
cutane ;
et/ou ameliorer Ia texture de Ia peau et raviver I'eclat de Ia peau ; et/ou
diminuer les
tailles des pores de Ia peau.
Les proprietes interessantes des composes de l'invention, leur absorption
nulle dans le spectre des UVA et des UVB, justifient aussi leur utilisation
dans
une creme de protection contre les rayonnements solaires, sans aucun risque de
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perturber I'action des composants specialement choisis pour leur absorption
des
UV. Les composes de I'invention sont capables de capter Ia forme activee de
I'oxygene par le rayonnement solaire. Cette forme activee de I'oxygene,
appelee
oxygene singulet, est I'entite reactive a I'origine des perturbations
cellulaires.
Un autre aspect de I'invention consiste en I'utilisation des composes de
I'invention dans des produits de nettoyage et/ou de demaquillage, ainsi que
dans
des produits de protection de Ia peau et/ou des cheveux contre les effets
secondaires des UV.
Les proprietes antioxydantes d'au moins un derive oxime du 3,5-seco-4-nor-
lo cholestane recommandent aussi leur utilisation dans le domaine alimentaire
sous
forme de complement alimentaire. II est donc dans Ia portee de I'invention
d'utiliser les composes de I'invention comme antioxydants dans le domaine
alimentaire.
Par antioxydant dans le domaine alimentaire on entend dans Ia presente
invention, un compose qui, sous forme pure ou en melange avec divers supports
et/ou autres additifs alimentaires admissibles, peut se presenter sous forme
pulverulente, sous forme de gelules, de comprime ou autre forme solide pouvant
eventuellement comporter une phase -lipidique, aqueuse ou etre en solution ou
suspension buvable.
Avantageusement, le compose peut etre consomme seul, entre les repas, ou
lors des repas.
De fagon avantageuse, il peut etre consomme lors des repas, comme
complement alimentaire, associe a d'autres aliments. De fagon preferentielle
il sera
incorpore ou saupoudre sur un aliment. Dans Ia pratique les aliments peuvent
etre
des aliments simples ou composes, et peuvent etre presentes sous toutes les
formes habituelles connues en alimentation humaine. Par aliment, on entend au
sens de Ia presente invention, tout aliment pouvant etre ingere, seul ou
accompagne, cru ou cuit, prepare ou non, de quelque fagon que ce soit, comme
par exemple les viandes et produits a base de viande, les produits de Ia mer
et
3 o d'eau douce, le lait et les produits laitiers, y compris les laits
maternises, les oeufs
et les ovoproduits, les fruits et legumes, les cereales et les produits a base
de
cereales, les feculents comme les pates et le riz, les huiles, les vinaigres
et
condiments, les sauces et graisses comestibles, les produits sucres, les
confitures,
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les gelees, les compotes, Ia pate a tartiner, les confiseries, les conserves
et semi-
conserves, les soupes, le cafe, le the, les boissons, Ia patisserie, le cacao,
le
chocolat, les glaces, les substituts de repas, les plats cuisines et traiteurs
frais,
surgeles ou sterilises, le pain et les produits de Ia panification.
Ainsi, le compose peut accompagner tout aliment sans en perturber le gout et
ne constitue pas une contrainte pour le consommateur. Sa prise est assimilee a
un
geste culinaire. II ne rappelle pas Ia prise de medicaments ou de substituts
de
repas. Les composes selon I'invention peuvent etre congeles ou au contraire
chauffes sans perdre leurs proprietes.
L'invention porte egalement sur I'utilisation des composes selon I'invention
comme conservateurs antioxydants dans differents produits, notamment des
produits cosmetiques, alimentaires, et pharmaceutiques.
Par conservateur on entend un compose qui preserve un produit de toute
alteration physico-chimique.
II est connu que les corps gras et certaines substances actives utilises dans
les compositions notamment cosmetiques, dermatologiques, pharmaceutiques, ou
detergentes ont tendance a s'oxyder, meme a temperature ambiante, et que cette
oxydation leur fait acquerir de nouvelles proprietes, notamment olfactives,
qui sont
indesirables. On sait par exemple que certains savons developpent des odeurs
2 o rances, piquantes et fruitees apres seulement quelques semaines de
stockage a
I'air. Or ces mauvaises odeurs peuvent etre empechees ou du moins evitees
pendant une periode de stockage beaucoup plus longue, si on leur ajoute un des
composes de I'invention. Des effets similaires ont ete observes avec des
shampoings ou encore des gels de douche ou bain, les cremes et laits
cosmetiques, des produits cosmetiques ou de nettoyage de Ia peau ou des
cheveux contenant des matieres pouvant s'oxyder a I'air et/ou a Ia Iumiere. II
est
dans Ia portee de I'invention d'utiliser Ies composes de I'invention en tant
qu'agents
antioxydants pour Ia conservation des produits cosmetiques, dermatologiques,
pharmaceutiques, detergents et parfumants.
De meme, les produits alimentaires se degradent sous I'action de I'oxydation
a I'air, ce qui provoque des modifications de texture, de couleur et de gout,
et
peuvent rendre un aliment impropre a Ia consommation.
La demanderesse a decouvert que Ies composes de I'invention permettaient
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d'assurer une meilleure conservation des compositions cosmetiques ou
dermatologiques comportant une phase grasse en evitant le rancissement de
lipides insatures qui y sont contenus, qu'ils pouvaient egalement permettre
d'eviter
Ia degradation oxydative de composes actifs contenus dans ces compositions,
telles que Ia vitamine A ou les carotenoides.
II est donc dans Ia portee de cette invention d'utiliser les composes de
I'invention en tant qu'agents conservateurs, particulierement pour Ia
conservation
des proprietes.organoleptiques et nutritionnelles des aliments et des
boissons,
notamment les jus de fruits.
Les composes selon I'invention ayant de fortes capacites antioxydantes, ils
peuvent etre utilises comme conservateurs antioxydants de toute preparation a
base de lipides, dont les produits alimentaires, cosmetiques, dermatblogiques,
parfumants, detergents ou de produits pharmaceutiques.
La presente invention a donc pour objet I'utilisation de composes selon
I'invention comme agents conservateurs dans des produits notamment
cosmetiques ou dermatologiques, et alimentaires.
C'est pourquoi Ia presente invention a pour objet I'utilisation d'au moins un
derive oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane ou l'un de ses sels d'addition avec
les
acides acceptables, ou I'un de ses esters ou I'un des sels d'addition desdits
esters
2 o avec les acides acceptables, comme antioxydants.
Avantageu`sement on utilise selon I'invention au moins un compose repondant
a Ia formule I
R
B
H
C = _
D H H
Y (I)
dans laquelle
- X et Y pris ensemble representent un groupement oxime (=N-OH),
- B represente un radical hydroxyle et C et D, identiques ou differents,
representent un atome d'hydrogene, ou un radical alkyle, Iineaire ou ramifie,
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comprenant de 1 a 4 atomes de carbone,
ou B et C pris ensemble representent une fonction ceto et D un radical
methyle, hydroxyle, ou methylamine,
ou B et C representent un atome d'hydrogene et D un radical methylamine,
ou B et C pris ensemble representent un groupement oxime et D un radical
methyle,
et R represente un radical alkyle, lineaire ou ramifie, comprenant de 1 a 10
atomes de carbone,
ou l'un de ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement
lo acceptables, o.u I'un de ses esters ou l'un des sels d'addition avec les
acides
pharmaceutiquement acceptables desdits esters,
comme antioxydant.
Les composes de formule I tels que definis ci-dessus sont decrits dans Ia
demande internationale publiee le 16 mars 2006 sous le numero WO 2006/027454.
Comme le comprend I'homme du metier, un certain nombre de composes de
formule I qui comprennent un ou plusieurs groupements hydroxyles, peuvent etre
esterifies. Ces esters ainsi que leurs sels d'addition avec les acides
pharmaceutiquement acceptables ne sont generalement pas directement actifs en
eux-memes mais constituent des prodrogues pour les analogues hydroxyles
correspondants. Ces esters, qui sont metabolises dans l'organisme humain,
conduisent aux composes actifs. Ces esters sont egalement I'objet de Ia
presente
invention. On peut citer les esters introduisant des fonctionnalites chimiques
comme les sulfates, les phosphates, les acides et les chaines basiques qui
augmentent Ia solubilite aqueuse et Ia biodisponibilite. On prefere les esters
de
composes portant une fonction basique comme les analogues de dialkylglycine
avec des alkyles de 1 a 4 atomes de carbone et tout particulierement Ia
dimethylglycine et Ia diethylglycine et aussi de Ia methylpiperazine. On peut
citer
les esters d'acide gras ou les esters de chaine polyethyleneglycol qui
augmentent
I'affinite pour les phases lipophiles. On prefere les chaines d'acide gras
satures de
3 o 3 a 18 carbones.
Dans Ia presente demande et dans ce qui suit, le temie radical alkyle
lineaire ou ramifie de 1 a 4 atomes de carbone designe par exemple un radical
methyle, ethyle, propyle, isopropyle de preference un radical methyle ou
ethyle et
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particulierement un radical methyle.
Le terme radical alkyle lineaire ou ramifie de 1 a 10 atomes de carbone
designe par exemple un radical 2-methyle-3-ethyle heptane, 3-ethyle heptane, 3-
methyle heptane, de preference un radical 2-ethyle heptane et particulierement
le
radical 2-methyle heptane du cholestane, ci-dessous represente
(II)
On retient donc plus particulierement les composes de formule
'-,
B
C
D
X
Y
dans laquelle B, C, D, X et Y ont Ia signification deja indiquee.
Parmi les composes de formule I ci-dessus decrits, on retient notamment les
composes de formule I pour lesquels X represente ensemble avec Y une fonction
oxime ainsi que leurs esters et leurs sels d'addition avec les acides
pharmaceutiquement acceptables.
On retient plus particulierement les composes ci-dessus pour lesquels
- B represente un radical hydroxyle et C et D representent un atome
d'hydrogene, ou C et D representant 2 radicaux alkyles lineaires ou ramifies
de 1 a
4 atomes de carbone,
- B represente ensemble avec C une fonction ceto et D represente un
radical methyle, hydroxyle, methyl amine,
- B represente un groupement hydroxyle, et C et D representent un atome
d'hydrogene, ou C et D representent 2 radicaux alkyles lineaires ou ramifies
de 1
a 4 atomes de carbone, ou C represente un atome d'hydrogene et D un radical
alkyle lineaire ou ramifie de 1 a 4 atomes de carbone,
- B et C representent un atome d'hydrogene et D un groupement methyle
amine.
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- B ensemble avec C representent un groupement oxime, et D represente
un radical methyle,
ainsi que leurs esters et leurs sels d'addition avec les acides
pharmaceutiquement acceptables.
On retient tout particulierement
- le 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime- 3-ol,
- le 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime-3-methyl alcool,
- le 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime-3-dimethyl alcool,
ou I'un de ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement
lo acceptables, ou l'un de ses esters ou l'un des sels d'addition avec les
acides
pharmaceutiquement acceptables desdits esters.
Selon l'invention, les sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement
acceptables peuvent etre par exemple des sels formes avec les acides
chlorhydrique, bromhydrique, nitrique, sulfurique, phosphorique acetique,
formique,
propionique, benzoique, maleique, fumarique, succinique, tartrique, citrique,
oxalique, glyoxylique, aspartique, alcane sulfoniques tels que les acides
methane
ou ethane sulfoniques, arylsulfoniques, tels que les acides benzene ou
paratoluene
sulfoniques, ou carboxyliques.
II est entendu selon I'invention que le groupement oxime represente les deux
isomeres syn et anti en melange ou isole.
Bien entendu selon l'invention ii est possible d'utiliser le derive oxime du
3,5-seco-4-nor-cholestane seul ou en melange avec au moins un autre derive
oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane.
II est egalement possible d'utiliser les derives oxime du 3,5-seco-4-nor-
cholestane seul ou en melange tel que precedemment decrit en association avec
un ou plusieurs autres composes connus pour leurs proprietes antioxydantes.
On peut citer a titre d'exemples comme autres composes connus pour leurs
proprietes antioxydantes, les composes issus des familles des thiols et des
phenols et polyphenols comme par exemple les flavonoides (tres repandus dans
les vegetaux), les acides phenoliques (dans les cereales, les fruits et les
legumes), les tanins (dans le cacao, le cafe, le the, le raisin, etc.), les
anthocyanes (notamment dans les fruits rouges ; le f3-carotene (provitamines
A) ;
les tocopherols (vitamine E) ou ses esters comme I'alpha-tocopherol, le gamma-
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tocopherol, le delta-tocopherol ; certains chelatants de metaux ou I'acide
ascorbique et ses esters comme I'ascorbate de sodium ou de calcium ; I'acide
diacetyl 5-6-1-ascorbique, I'acide palmityl 6-1-ascorbique, I'acide citrique
et les
citrates comme ceux de sodium, de potassium et de calcium ; I'acide tartrique
et
les tartrates comme ceux de sodium, potassium ; le butylhydroxyanisol et
butylhydroxytoluol ; les gallates d'octyle ou de dodecyle; les lactates de
sodium,
de potassium ou de calcium ; les Iecithines ; le glutathion, ou des enzymes
comme Ia catalase, les superoxydes dismutases et certaines peroxydases.
Les antiox,ydants utilisables dans Ia composition de l'invention peuvent etre
lo naturels ou de synthese.
Ainsi, un des aspects de l'invention est donc de proposer une composition
cosmetique antioxydante comprenant au moins dans un milieu cosmetiquement
acceptable une quantite efficace d'au moins un derive oxime du 3,5-seco-4-nor-
cholestane.
ls L'invention a egalement pour objet une composition cosmetique destinee a
lutter contre le vieillissement chronobiologique et/ou photoinduit comprenant
dans un milieu cosmetiquement acceptable une quantite efficace d'au moins un
derive oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane.
Par milieu cosmetiquement acceptable, on entend compatible avec Ia peau,
20 le cuir chevelu, les muqueuses, les ongles et les cheveux.
La quantite de derive oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane ou de I'un de ses
derives utilisabl.e selon I'invention depend bien evidemment de 1'effet
recherche
et doit etre en une quantite efficace pour produire 1'effet antioxydant
recherche.
A titre d'exemple Ia quantite d'au moins un derive oxime du 3,5-seco-4-nor-
25 cholestane ou de ses derives utilisable selon I'invention peut aller par
exemple
de 0.01% a 30% et de preference de 0.1. % a 10% du poids total de Ia
composition.
La composition selon I'invention comprend bien evidemment un support
cosmetiquement acceptable et peut se presenter sous toutes les formes
30 galeniques normalement utilisees, particulierement pour une application
topique.
Ainsi Ia composition peut se presenter notamment sous Ia forme d'une solution
aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une emulsion huile-dans-eau ou eau-
dans-huile ou multiple, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit anhydre
liquide,
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pateux ou solide, d'une dispersion d'huile dans une phase aqueuse a I'aide de
spherules, ces spherules pouvant etre des nanoparticules polymeriques telles
que les nanospheres et les nanocapsules ou mieux des vesicules lipidiques de
type ionique et/ou non-ionique.
Cette composition peut etre plus ou moins fluide et avoir I'aspect d'une
creme blanche ou coloree, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un serum,
d'une pate, d'une mousse. Elle peut eventuellement etre appliquee sur Ia peau
sous forme d'aerosol. Elle peut egalement se presenter sous forme solide, et
par
exemple sous forme de stick.
La composition de I'invention peut etre utilisee comme produit de soin,
comme produit de nettoyage, comme produit de maquillage ou encore comme
simple produit deodorant.
De faron connue, Ia composition de I'invention peut contenir egalement les
adjuvants habituels dans les domaines cosmetiques et dermatologiques, tels que
les gelifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou
lipophiles, les
conservateurs, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les
pigments, les
agents chelateurs, les absorbeurs d'odeur et les matieres colorantes. Les
quantites de ces differents adjuvants sont celles classiquement utilisees dans
les
domaines consideres, et par exemple de 0,01% a 20 % du poids total de Ia
composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent etre introduits dans Ia
phase grasse, dans Ia phase aqueuse, dans les vesicules lipidiques et/ou dans
les nanoparticules.
Lorsque Ia composition de l'invention est une emulsion, Ia proportion de la
phase grasse peut aller de 5 %a 80 % en poids, et de preference de 5 % a 50 %
du poids total' de Ia composition. Les huiles, les emulsionnants et les
coemulsionnants utilises dans la composition sous forme d'emulsion sont
choisis
parmi ceux classiquement utilises dans le domaine considere. L'emulsionnant et
le coemulsionnant sont presents, dans Ia composition, en une proportion allant
de 0,3 % a 30 % en poids, et de preference de 0,5 % a 20 % du poids total de
Ia
composition.
Comme huiles utilisables dans I'invention, on peut citer les huiles minerales,
les huiles d'origine vegetale (huile d'abricot, huile de tournesol, beurre de
karite),
les huiles d'origine animale, les huiles de synthese, les huiles siliconees et
les
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huiles fluorees (perfluoropolyethers). On peut aussi utiliser comme matieres
grasses des alcools gras (alcool cetylique), des acides gras, des cires (cire
d'abeilles).
/j.
Comme emulsionnants et coemulsionnants utilisables dans l'invention, on
peut citer par exemple les esters d'acide gras et de polyethylene glycol tels
que
le stearate de PEG-40, le stearate de PEG-100, les esters d'acide gras et de
polyol tels que le stearate de glyceryle et le tristearate de sorbitane.
Comme gelifiants hydrophiles, on peut citer en particulier les polymeres
carboxyvinyliques (carbomer), les copolymeres acryliques tels que les
lo copolymeres d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les
polysaccharides,
les gommes naturelles et les argiles, et, comme gelifiants lipophiles, on peut
citer
les argiles modifiees comme les bentones, les sels metalliques d'acides gras,
Ia
silice hydrophobe et les polyethylenes.
La composition peut contenir d'autres actifs hydrophiles comme les
proteines ou les hydrolysats de proteine, les acides amines, les polyols,
I'uree,
I'allantoine, les sucres et les derives de sucre, les vitamines hydrosolubles,
les
extraits vegetaux et les hydroxyacides.
Comme actifs lipophiles, on peut utiliser le retinol (vitamine A) et ses
derives, le tocopherol (vitamine E) et ses derives, les acides gras
essentiels, les
ceramides, les huiles essentielles, I'acide salicylique et ses derives.
II est egalement possible d'utiliser selon I'invention en association avec au
moins un derive oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane ou de I'un de ses derives,
des composes choisis parmi :
- les hormones vegetales (auxines) ;
- les agents antibacteriens tels que les macrolides, les pyranosides et les
tetracyclines, et notamment I'erythromycine ;
- les agents antagonistes de calcium, comme le verapamil et le diltiazem ;
- des capteurs de radicaux OH, tels que le dimethylsulfoxyde ;
- des extraits -de vegetaux tels que ceux d'Iridaces ou de soja, extraits
pouvant alors contenir ou non des isoflavones ;
- des extraits de micro-organismes dont en particulier des extraits
bacteriens comme ceux de bacteries filamenteuses non photosynthetiques.
A Ia liste ci-dessus, d'autres composes peuvent egalement etre ajoutes, a
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savoir par exemple les ouvreurs de canaux potassiques tels que le diazoxyde et
le minoxidil, Ia spiroxazone, des phospholipides comme Ia lecithine, les
acides
Iinoleique et linolenique, I'acide salicylique et ses derives decrits dans le
brevet
frangais FR 2 581 542, comme les derives de I'acide salicylique porteurs d'un
groupement alcanoyle ayant de 2 a 12 atomes de carbone en position 5 du cycle
benzenique, des acides hydroxycarboxyliques ou cetocarboxyliques et ses
esters, les lactones et ses sels correspondants, I'anthraline, des
carotenoides,
les acides eicosatetraenoique et eicosatrienoique ou ses esters et amides, Ia
vitamine D et ses derives.
Selon l'invention, on peut, entre autres, associer le derive oxime du 3,5-
seco-4-nor-cholestane ou l'un de ses derives a d'autres agents actifs destines
notamment a Ia prevention et/ou au traitement des affections cutanees. Parmi
ces agents actifs, on peut citer a titre d'exemple :
- les agents modulant Ia differenciation et/ou Ia proliferation et/ou Ia
pigmentation cutanee tels que I'acide retinoique et ses isomeres, le retinol
et ses
esters, Ia vitamine D et ses derives, les oestrogenes tels que I'oestradiol,
I'acide
kojique ou I'hydroquinone ;
- les agents modulant I'adhesion bacterienne sur Ia peau et /ou les
muqueuses tels que le miel, notamment le miel d'acacias et certains derives de
sucres ;
- les antiparasitaires, en particulier le metronidazole, le crotamiton ou les
pyrethrinoides ;
- les antifongiques, en particulier les composes appartenant a Ia classe
des imidazoles tels que I'econazole, le ketoconazole ou Ie miconazole ou ses
sels, les composes polyenes, tels que I'amphotericine B, les composes de Ia
famille des allylamines, tels que Ia terbinafine, ou encore I'octopirox
- les agents antiviraux tels que I'acyclovir ;
- les agents anti-inflammatoires steroidiens, tels que I'hydrocortisone, le
valerate de betamethasone ou le propionate de clobetasol, ou les agents anti-
inflammatoires non-steroidiens tels que I'ibuprofene et ses sels, le
diclofenac et
ses sels, I'acide.acetylsalicylique, I'acetaminophene ou I'acide
glycyrrhetinique ;
- les agents anesthesiques tels que le chlorhydrate de lidocaine et ses
derives ;
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- les agents antiprurigineux comme Ia thenaldine, Ia trimeprazine ou Ia
cyproheptadine ;
- les agents keratolytiques tels que les acides alpha- et beta-
hydroxycarboxyliques ou beta-cetocarboxyliques, ses sels, amides ou esters et
plus particulierement les hydroxyacides tels que I'acide glycolique, I'acide
lactique, I'acide salicylique, I'acide citrique et de maniere generale les
acides de
fruits, et I'acide n-octanoyl-5-salicylique ;
- les antiseborrheiques tels que Ia progesterone ;
- les antipelliculaires comme I'octopirox ou Ia pyrithione de zinc;
- les antiacneiques comme I'acide retinoique ou le peroxyde de benzoyle.
- des substances telles que les antagonistes de substance P, de CGRP
ou de bradykinine ou les inhibiteurs de NO synthase, composes decrits comme
etant actifs dans le traitement des peaux sensibles et comme presentant des
effets anti-irritants, en particulier vis-a-vis de composes irritants
eventuellement
presents dans les compositions.
Ainsi, un autre objet de I'invention concerne une composition comprenant
une quantite efficace d'au moins un oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane et au
moins un agent choisi parmi les agents antibacteriens, antiparasitaires,
antifongiques, antiviraux, anti-inflammatoires, antiprurigineux,
anesthesiques,
2o keratolytiques, anti-seborrheiques, antipelliculaires, antiacneiques, les
agents
modulant Ia differenciation et/ou Ia proliferation et/ou Ia pigmentation
cutanee, les
antagonistes de substance P, de CGRP ou de bradykinine ou les inhibiteurs de
NO synthase.
Comme actifs, on peut utiliser notamment les hydratants tels que les
polyols (par exemple Ia glycerine), les vitamines (par exemple le D-
panthenol),
les agents anti-inflammatoires, les agents apaisants (allantoine, eau de
bleuet),
les filtres UVA et UVB, les agents matifiants (par exemple les
polydimethylorganosiloxanes partiellement reticules vendus sous le nom KSGO
par Shin Etsu), et leurs melanges.
On peut aussi ajouter des actifs antirides, et notamment des produits
tenseurs tels que les proteines vegetales et leurs hydrolysats, en particulier
1'extrait de proteines de soja vendue sous le nom d'EleserylO par Ia societe
LSN
ou le derive d'avoine vendu sous Ia denomination Reductine par Ia societe
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Silab.
D'autres caracteristiques et avantages de l'invention ressortiront mieux des
exemples et de Ia figure 1 annexee qui suivent, donnes a titre illustratif et
non
limitatif. Dans ce qui suit ou ce qui precede, les proportions sont donnees en
s pourcentage ponderal, sauf indications contraires.
La Figure 1 montre Ia quantification des adduits de piegeage DMPO-OH du
radical hydroxyle sur Ia nitrone DMPO (50 mM) detectes dans les effluents
coronaires de cceurs ischemies apres 3 minutes de reperfusion
Les exemples qui suivent illustrent Ia presente demande sans toutefois Ia
lo limiter.
Exemple 1: Competition du 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime- 3-ol avec
Ia 5,5-dimethyl-l-pyrroline-1-oxide en presence de radicaux libres.
Les proprietes antiradicalaires des produits revendiques sont demontrees en
effectuant une etude de competition avec un produit de reference appartenant a
Ia
15 famille des nitrones. Les nitrones telle Ia DMPO (5,5-dimethyl-1-pyrroline-
1-oxide)
sont largement decrites comme etant des composes presentant une tres grande
reactivite vis-a-vis des radicaux libres (Novelli G.P. and al. Free Radical
Res.
Commun. 1986,1, 321). Les nitrones piegent les especes radicalaires (R*; RO')
et
permettent leur observation en resonnance paramagnetique electronique (RPE)
20 (Degray J. and al. Electron-Spin Resonance, Ed N.M. Atherton, Atheaeum
Press
Ltd ;Cambridge,1994,14,246).
L'incubation de Ia DMPO (Interchim-U2469) (20mM) dans le toluene
desoxygene (Sigma-Aldrich) en presence du radical tBuO (tertio-butoxyle),
genere
par photolyse, permet d'identifier et de quantifier par RPE le signal du
radical
25 DMPO-tBuO. Ce signal est inhibe en presence d'une quantite equimolaire d'
oxime
du 3,5-seco-4iior-cholestane.
Le signal en RPE permet une integration sous forme d'une aire du signal de
I'adduit DMPO-tBuO et donc une quantification relative de cette entite
radicalaire.
Toutes les experiences ont ete realisees sur un appareil Bruker ESP300 en
3 o bande X (9,5GHz) a temperature ambiante. Les solutions ont ete etudiees en
tube
RPE en quartz.
Les donnees chiffrees sont presentees dans le tableau ci-dessous.
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t-BuO. :(t-BuO)2 20 mM Aire du signal DMPO- Aire du signal DMPO-
photolyse.a 350 nm tBuO a 200 s en unite tBuO a 400 s en unite
relative relative
DMPO (20mM) seule 6.0 9
DMPO (20mM)+ 3,5-seco-
4-nor-cholestan-5-one 3 4
oxime- 3-ol 20mM
% inhibition du radical 50% 66%
DMPO-tBuO
Conclusion
Le 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime-3-ol inhibe de l'ordre de 60% le
niveau du radical signal DMPO-tBuO et ceci avec un cinetique rapide,
inferieure a
minutes. L'intensite du piegeage du radical tBuO et sa cinetique demontrent Ia
5 propriete anti radicalaire et donc antioxydante des composes revendiques.
Exemple 2: Effet antioxydant du 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime- 3-ol
dans le modele d'oxydation du cumene par I'oxygene active.
Pour demontrer. la relevance de 1'effet antioxydant du 3,5-seco-4-nor-
cholestan-5-one oxime- 3-ol, l'inhibition de l'oxydation du cumene en
lo hydroperoxycumene a ete etudiee. Ce test presente I'interet de faire
intervenir
l'oxydant biologiquement le plus relevant, c'est-a-dire I'oxygene gaz.
L'oxydation du
cumene a pression atmospherique et a 37 C par I'oxygene est connue et decrite
en presence d'un initiateur de radicaux comme I'AIBN (azobisisobutyronitrile)
(Blanchard H. S., J. Am. Chem. Soc.1959, 81, 4548). Une publication recente a
utilise cette reaction pour classer le potentiel antioxydant de produits
connus
comme Ia vitamine E- (qui est Ia reference universelle), le BHT
(butylatedhydroxytoluene) et d'autres produits.
Dans I'experience suivante nous avons reproduit les memes conditions
experimentales que celles decrites dans Ia publication de Becker D.A. et
collaborateur (J. Am. Chem. Soc. 2002, 124, 4678-4684). Une methode de
chromatographie liquide haute pression couplee a un detecteur UV a ete
utilisee
pour detecter I'hydroperoxyde de cumene. La colonne utilisee est une colonne
Agilent Zorbax Eclipse XDB RPC8 (150x4.6 mm) couplee a un detecteur UV fixe a
254 nm. Le gradient utilise est detaille dans le tableau suivant :
Temps min % eau % Acetonitrile Debit mI/min
0 35 65 1.5
5 35 65 1.5
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5.5 0 100 1.5
0 100 1.5
Conditions experimentales :
2 ml de cumene (AcrosOrganic) et 0,5 ml de methanol sont melanges, I'
azobisisobutyroriitrile (AcrosOrganic) est rajoute (2 equivalents) et Ia
solution mise
a 45 C afin d'accelerer Ia reaction chimique. L'hydroperoxyde de cumene
apparalt
5 au cours du temps et est dose par Ia methode HPLC Une droite de regression
lineaire est etablie afin de demontrer que Ia quantification de I'apparition
de
I'hydroperoxyde de cumene est possible. Les resultats sont presentes dans le
tableau suivant :
Concentration en hydroperoxyde de
Temps (min)
cumene mM
0,25 0
1 15
1,5 30
2,2 45
3 60
3,7 75
La droite de regression Iineaire obtenue repond a Ia formule suivante :
i o y=0.0444x + 0.2694 avec R2=0.994
La technique utilisee a permis de comparer I'apparition de I'hydroperoxyde de
cumene en presence d'agent antioxydant comme les produits revendiques et Ia
vitamine E utilisee comme produit de reference.
Les donnees experimentales et les resultats en pourcentages de l'oxydation
du cumene sont presentes dans le tableau ci-dessous.
Aire du signal, en % de
Conditions experimentales Incubation unite relative, de reduction de
I hydroperoxyde de I oxydation du
cumene cumene
Cumene - Methanol + 50
M de 3,5-seco-4-nor- 2 heures
cholestan-5-one oxime- 3- 45 C 300 25 %
ol et 2 e uivalents d'AIBN
Cumene - Methanol + 200
M de 3,5-seco-4-nor- 2 heures
cholestan-5-one oxime- 3- 45 C 200 50 %
ol et 2 e uivalents d'AIBN
Cumene - Methanol + 100 2 heures
M de vitamine E et 2 45 C 245 39%
e uivalents d'AIBN
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Cumene - Methanol et 2 2 heures 400 0%(contr6le
e uivalents d'AIBN 45 C ositi
En conclusion le 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime- 3-ol reduit d'environ
40% l'oxydation du cumene par I'oxygene et presente une activite du meme ordre
de grandeur a Ia vitamine E dans ces conditions aux memes concentrations.
Exemple 3: Etude de pharmacocinetique chez le rat avec le 3,5-seco-4-nor-
cholestan-5-one oxime- 3-ol
Une etude de pharmacocinetique avec une administration par voie orale en
suspension dans I'huile de mais et par voie intra-veineuse en solution dans le
cremophor/ethanol/eau (5%, 10%, 85%) a permis de calculer Ia biodisponibilite
du produit. Le dosage du produit dans le plasma est effectue par une methode
lo de chromatographie liquide haute pression couplee a Ia spectrometrie de
masse.
Ainsi a une dose de 500mg/kg administree par voie orale, Ia biodisponibilite
a ete calculee a 6%. Le taux circulant d'oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-
one
oxime- 3-ol est donc quantifiable et demontre une reelle absorption du
produit.
Exemple 4: Stabilite chimique du 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime-3-ol
Une etude de stabilite chimique dans les conditions de stockage decrites
dans les normes ICH (International Conference on Harmonization of Technical
Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use) du produit
conserve a I'etat de poudre a demontre une tres grande stabilite chimique. Ces
analyses ont ete effectuees en utilisant une methode de chromatographie gaz
couplee a un detecteur'FID. Cette methode permet de quantifier les impuretes a
un taux de 0.2 %. Les resultats (Sommes des impuretes a chaque temps) sont
presentes dans le tableau suivant.
Conditions de stockage TO T6 mois T12 mois
C sous 60% humidite relative 0,2% - 0.2 %
40 C sous 75"% humidite relative 0,2% 0.2% -
Aucune evolution de Ia qualite du produit n'est demontree apres 6 mois de
stockage a 40 C et apres 1 ans de stockage a 25 C.
25 Exemple 5: activite antioxydante du 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime-
3-ol (A) sur un modele experimental de coeur de rat isole perfuse.
Les animaux utilises sont des rats males de souche Sprague Dawley
(Harlan et CERJ, France) de 250-300 g) nourris ad libitum. Les rats sont
anesthesies par une injection intraperitoneale de pentobarbital sodique (50
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mg/kg de poids corporel). La cavite thoracique est alors ouverte et le coeur
rapidement preleve et immerge dans du liquide de perfusion (Krebs-Henseleit) a
4 C afin d'arreter toute contraction.
Le coeur debarrasse des tissus graisseux est ensuite perfuse selon Ia
technique de Langendorff par voie retrograde aortique a une pression constante
de 90 cm H20. Une petite incision dans I'artere pulmonaire permet I'ecoulement
et Ia mesure de 1'effluent coronaire en fonction du temps (debit coronaire).
Le
temps requis pour que I'operation entiere soit achevee est de deux a trois
minutes. Apres ablation de I'oreillette gauche, un ballonnet en latex est
insere
lo dans le ventricule gauche et rempli d'un volume d'eau distillee (50-60 l)
qui
reste constant au cours-du protocole experimental, relie a un capteur de
pression
(GOULD) et a un enregistreur differentiateur permettant Ia mesure des
parametres hemodynamiques suivants :
- pression diastolique intraventriculaire (Pdia)
- pression developpee du ventricule gauche Pdev= Psystolique - Pdia
- dP/dt (derivee premiere de Ia pression developpee, index de Ia
contractilite cardiaque dans ce modele)
- frequence cardiaque (F)
- travail cardiaque calcule d'apres Ia relation W = Pdev x F
Le debit coronaire ainsi que 1'ensemble des parametres hemodynamiques
sont mesures toutes les 5 minutes.
Le milieu de perfusion est une solution ionique de Krebs-Henseleit de pH
7.35 tamponnee et saturee avec un melange gazeux (95% 02/5% CO2),
contenant NaCl (119,r-nM), NaHCO3 (25 mM), KCI (5,9 mM), MgSO4 (1,2 mM)
EDTA (0,5 mM), glucose (11 mM, substrat du coeur) et CaCI2 (2,5 mM). Le
compose 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime- 3-ol (A) est dilue dans ce
tampon
Krebs a 1 pM de 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime- 3-ol (A) a partir d'une
solution 1000X en hydroxylpropyl beta cyclodextrine 30% en PBS. Le milieu
Krebs controle est prepare a partir d'une solution 1000X en hydroxylpropyl
beta
cyclodextrine 30% en PBS sans le compose 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one
oxime- 3-ol (A) (CD 0.03%).
Les corurs perfuses des rats ont suivi le protocole suivant :
- une periode initiale d'equilibration de 30 min (CTR)
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- une ischemie a debit reduit (30% du debit coronaire de contr6le) de 10
min (IDR)
- une ischemie totale de 30 min (IT) a 37 C.
- une reperfusion de 60 min (REP).
Tous les composes ou melanges testes ont ete perfuses a partir de Ia
vingtieme minute de CTR, Ia totalite de I'IDR. Ils ont ete maintenus en IT a
37 C,
constituant ainsi un liquide d'incubation pour le myocarde ischemique, et
ont
ensuite a nouveau ete perfuses pendant toute Ia reperfusion.
Pour les experiences de RPE par piegeage de radicaux libres, les coeurs
lo ont ete perfuses selon le meme protocole que les coeurs precedemment
decrits
pendant les periodes de contr6le et d'ischemie.
La nitrone DMPO (50 mM) est perfusee des le debut de Ia reperfusion au
niveau de I'entree de I'aorte de maniere a pieger les radicaux libres produits
dans
les effluents coronaires.
Ces effluents ont ete collectes par prelevement direct dans sinus coronaire
a 3 minutes de reperfusion puis conserves dans I'azote liquide avant analyse
par
RPE des adduits formes sur cette nitrone.
Spin trapping sur Ia DMPO dans les effluents coronaires
Les signaux de RPE caracteristiques de I'adduit DMPO-OH sont detectes
2 o dans les effluents a Ia troisieme minute de reperfusion en presence de
DMPO
(50 mM).
Avec Ia perfusion du compose 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime-3-ol
(A), on note une diminution importante et significative (p<0.05) de Ia
production
extracellulaire des adduits de piegeage des radicaux libres formes dans le
myocarde et pieges sur Ia DMPO. Ces adduits sont suffisamment persistants
pour etre detectes par,RPE.
L'analyse. statistique des resultats obtenus sur deux groupes de 6 corurs
montre que Ia perfusion avec le compose 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime-
3-ol (A) 1 M apporte une protection significative par rapport au vehicule
(Figure
1).
En conclusion, le compose 3,5-seco-4-nor-cholestan-5-one oxime-3-ol (A)
reduit le relargage des especes radicalaires oxygenees..
