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Nouveaux dérivés d'oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane, compositions
pharmaceutiques les renfermant, et procédé de préparation
La présente invention concerne de nouveaux composés chimiques,
particulièrement
des dérivés d'oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane, leur application à titre de
médicaments,
notamment comme médicaments cytoprotecteurs, particulièrement comme
médicaments neuroprotecteurs, cardioprotecteurs et/ou. hépatoprotecteurs.
Lesdits médicaments sont particulièrement adaptés aux pathologies et aux
traumatismes liés à la dégénérescence ou à la mort cellulaire,
particulièrement celles
des motoneurones et/ou des cardiomyocytes et/ou des hépatocytes.
L'invention concerne également les compositions pharmaceutiques renfermant
lesdits composés, et leur procédé de préparation.
Les processus dégénératifs cellulaires sont caractérisés par le
dysfonctionnement des cellules entraînant souvent des activités cellulaires
indésirables et la mort cellulaire.
Les cellules ont développé des mécanismes d'adaptation, en. réponse au stress,
qui allongent leur durée de vie ou retardent ou empêchent la mort cellulaire
(mécanismes cytoprotecteurs).
Cependant, ces mécanismes cytoprotecteurs sont parfois insuffisants,
inadéquats, ou induits trop tard pour être efficaces et les cellules meurent.
Il peut
donc s'avérer intéressant de disposer de nouveaux médicaments,
cytoprotecteurs, qui
favoriseraient la cytoprotection.
Parmi les mécanismes principaux de mort-cellulaire, on distingue
essentiellement la
nécrose,.l'apoptose et la nécroptose.
La nécrose est une mort cellulaire. dite "accidentelle" qui survient lors d'un
dommage tissulaire. C'est la -membrane plasmique de la cellule qui est la-
plus
touchée, entraînant une modification de l'homéostasie de la cellule. Les
cellules vont
se gorger d'eau au point que cela va entraîner la lyse de leur membrane
plasmique.
Cette lyse cellulaire conduit au largage dans le milieu environnant du contenu
cytoplasmique. La nécrose est à l'origine du processus inflammatoire.
La nécrose peut toucher un ensemble de cellules ou un tissu alors que les
autres parties de voisinage restent vivantes. La transformation qui en résulte
est une
mortification des cellules ou des tissus.
Autrement dit, la nécrose se définit par des modifications morphologiques
survenant lorsqu'une cellule arrive en fin de vie à la suite d'événements tels
qu'un
traumatisme important comme un arrêt ou une diminution de la circulation
sanguine
au niveau d'un organe, l'hyperthermie (élévation importante de la
température), une
intoxication par un produit chimique, un choc physique, etc.
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Une des nécroses les plus connues est celle du myocarde lors de l'infarctus
(arrêt d'apport circulatoire au niveau du muscle cardiaque) due à une
oblitération
(obstruction) d'une artère coronaire.
L'apoptose fait partie intégrante de la physiologie normale d'un organisme.
C'est
une forme physiologique de mort cellulaire hautement régulée et elle est
nécessaire à
la survie des organismes multicellulaires. L'apoptose est un processus qui
joue un rôle
primordial au cours de l'embryogenèse.
Les cellules en apoptose ou apoptotiques vont s'isoler des autres cellules.
L'apoptose implique habituellement des cellules individuelles dans un tissu et
ne
provoque pas l'inflammation. L'un des points morphologiques caractéristiques
de
l'apoptose est l'importante condensation à la fois du noyau et du cytoplasme
ce qui
induit une diminution significative du volume cellulaire. Le noyau se
fragmente ensuite,
chaque fragment est entouré d'une double enveloppe. Des corps apoptotiques
(éléments cytoplasmiques et nucléaires) sont ensuite libérés et vont être
absorbés par
phagocytose par les cellules voisines.
L'apoptose peut être induite de différentes façons. Par exemple, une
radiation, la
présence d'un composé chimique ou d'une hormone sont des stimuli susceptibles
d'induire une cascade d'événements apoptotiques dans la cellule. Des signaux
intracellulaires comme une mitose incomplète ou un dommage à l'ADN peuvent
aussi
induire l'apoptose.
L'apoptose intervient aussi après l'action d'un génotoxique ou au cours d'une
maladie. Certaines pathologies sont caractérisées par une apoptose anormale,
entraînant la perte de certaines populations cellulaires, comme par exemple
l'hépatotoxicité, les rétinopathies, la cardiotoxicité.
On distingue donc l'apoptose physiologique et l'apoptose pathologique.
L'invention s'adresse avantageusement, à l'apoptose pathologique.
Il existe d'autres mécanismes de mort cellulaire, comme par exemple la
nécroptose, qui présente des caractéristiques de la nécrose et de l'apoptose.
Une
cellule mourant par nécroptose présente des caractéristiques similaires à
celles d'une
cellule mourant par nécrose, mais les étapes biochimiques de ce mécanisme
s'assimilent plus à celles de l'apoptose. Ce mécanisme de mort cellulaire
intervient par
exemple dans l'ischémie.
C'est donc aussi un des buts de la présente invention que de disposer de
nouveaux médicaments qui pourraient permettre de prévenir et/ou traiter la
nécrose
et/ou l'apoptose pathologique et/ou la nécroptose (médicaments antinécrotiques
et/ou
antiapoptotiques et/ou antinécroptotiques).
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Les processus dégénératifs cellulaires peuvent résulter, entre autres, de
situations pathologiques regroupées sous le terme de maladies ou affections
dégénératives, de traumatismes, ou d'exposition à divers facteurs.
Ces traumatismes et facteurs peuvent inclure, par exemple, l'exposition aux
radiations (UV, gamma), l'hypoxie ou la privation d'oxygène, la privation de
nutriments,
la privation de facteurs de croissance, des poisons, des toxines cellulaires,
des
déchets, des toxines environnementales; des radicaux libres, des oxygènes
réactifs.
On peut citer également des agents chimiques ou biologiques utilisés comme
agents
thérapeutiques dans le contexte de traitements médicaux comme par exemple des
agents cytostatiques ou des agents anti-inflammatoires. On peut citer
également les
phénomènes d'ischémie-reperfusion,
Parmi les situations pathologiques caractérisées par un processus dégénératif
les plus importantes, on trouve :
^ les maladies des os, des articulations, du tissu conjonctif et du cartilage,
telles
que l'ostéoporose, l'ostéomyélite, les arthrites dont par exemple
l'ostéoarthrite,
l'arthrite rhumatoïde et l'arthrite psoriasique, la nécrose avasculaire, la
fibrodysplasie
ossifiante progressive, le rachitisme, le syndrome de Cushing ;
^ les maladies musculaires telles que la dystrophie musculaire, comme par
exemple la dystrophie musculaire de Duchenne, les dystrophies myotoniques, les
myopathies et les myasthénies ;
^ les maladies de la peau, telles que les dermatites, l'eczéma, le psoriasis,
le
vieillissement, ou encore les altérations de la cicatrisation ;
^ les maladies cardiovasculaires telles que l'ischémie cardiaque et/ou
vasculaire, l'infarctus du myocarde, la cardiopathie ischémique,
l'insuffisance
cardiaque chronique ou algue, la dysrythmie cardiaque, la fibrillation
auriculaire, la
fibrillation ventriculaire, la tachycardie paroxystique, l'insuffisance
cardiaque, la
cardiomyopathie hypertrophique, l'anoxie, l'hypoxie, les effets secondaires
dus à des
thérapies avec des agents anticancéreux, les lésions cardiaques associées à la
reperfusion suite à une ischémie accidentelle ou provoquée (acte chirurgical);
^ les maladies circulatoires telles que l'athérosclérose, les scléroses
artérielles,
les maladies vasculaires périphériques, les accidents vasculaires cérébraux,
les
anévrismes ;
^ les maladies hématologiques et vasculaires telles que : l'anémie,
l'amyloïdose
vasculaire, les hémorragies, la drépanocytose, le syndrome de la fragmentation
des
globules rouges, la neutropénie, la leucopénie, l'aplasie médullaire, la
pancytopénie, la
thrombocytopénie, l'hémophilie ;
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^ les maladies du poumon incluant la pneumonie, l'asthme ; les maladies
chroniques obstructives des poumons comme par exemple les bronchites
chroniques
et l'emphysème ;
^ les maladies du tractus gastro-intestinal, telles que les ulcères ; les
maladies
du foie comme par exemple les hépatites particulièrement les hépatites
d'origine virale
ou ayant pour agent causal d'autres agents infectieux, les hépatites
alcooliques, les
hépatites auto-immunes, les hépatites fulminantes, certains désordres
métaboliques
héréditaires, la maladie de Wilson, les cirrhoses, la maladie hépatique
alcoolique
(ALD), les maladies du foie dues à des toxines ou des médicaments ; les
stéatoses
comme par exemple :
- les stéatose hépatiques non alcooliques (NASH), ou accompagnant
l'intoxication exogène à l'alcool, aux médicaments, les hépatites virales ou
toxiques,
les complications de procédures chirurgicales, les maladies métaboliques
(telles que
diabète, syndrome d'intolérance au glucose, obésité, hyperlipidémies,
dysfonctions de
l'axe hypothalamo-hypophysaire, abétalipoproteinémie, galactosémies, maladies
du
glycogène, maladie de Wilson, maladie de Weber-Christian, le syndrome de
Refsum,
déficit en carnitine),
- les complications hépatiques des maladies inflammatoires du tube digestif,
- les hépatites auto-immunes.
Par le biais d'une action sur la stéatose ou d'une action sur l'apoptose
hépatique
quelle qu'en soit la cause les composés pourraient avoir une action préventive
sur le
développement de la fibrose hépatique et la prévention de la survenue de
cirrhoses.
^ les maladies du pancréas comme par exemple les pancréatites aigues ou
chroniques ;
^ les maladies métaboliques telles que les diabètes mellitus et insipide, les
thyroïdites ;
^ les maladies des reins telles que par exemple les désordres rénaux aigus ou
la. glomérulonéphrite ;
^ les infections virales et bactériennes telle que la septicémie ;
^ les intoxications sévères par des agents chimiques, des toxines ou des
médicaments ;
^ les affections dégénératives associées au Syndrome Immuno Déficitaire
Acquis (SIDA) ;
^ les désordres associés au vieillissement, tel que le syndrome du
vieillissement
accéléré
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^ les maladies inflammatoires, telles que la maladie de Crohn, la polyarthrite
rhumatoïde ;
^ les maladies auto-immunes telles que le lupus érythémateux ;
^ les désordres dentaires tels que ceux aboutissant à la dégradation des
tissus
comme par exemple les périodontites ;
^ les maladies ou désordres ophtalmiques incluant les rétinopathies
diabétiques, le glaucome, les dégénérescences maculaires, la dégénérescence
rétinienne, la rétinite pigmentaire, les trous ou déchirures rétiniennes, le
décollement
rétinien, l'ischémie rétinienne, les rétinopathies aigues associées à un
traumatisme, les
dégénérescences inflammatoires, les complications post chirurgicales, les
rétinopathies médicamenteuses, la cataracte ;
^ les désordres des voies auditives, tels que l'otosclérose et la surdité
induite
par des antibiotiques ;
^ les maladies associées aux mitochondries (pathologies mitochondriales),
telles que l'ataxie de Friedrich, la dystrophie musculaire congénitale avec
anomalie
mitochondriale structurelle, certaines myopathies (syndrome des MELAS,
syndrome
de MERFF, syndrome de Pearson), le syndrome de MIDD (diabètes mitochondriaux
et
surdité), le syndrome de Wolfram, la dystonie.
Par ailleurs, les processus neurodégénératifs sont caractérisés par le
dysfonctionnement et la mort des neurones entraînant la perte des fonctions
neurologiques médiées par le cerveau (système nerveux central, SNC), la moelle
épinière et le système nerveux périphérique (SNP). Ils peuvent résulter, entre
autres,
de situations pathologiques regroupées sous le terme de maladies ou affections
neurodégénératives, de traumatisme, ou d'exposition à des toxines.
Les pathologies les plus importantes qui sont caractérisées par un processus
neurodégénératif sont :
- les maladies chroniques neurodégénératives, notamment les maladies
chroniques démyélinisantes , héréditaires ou sporadiques, avantageusement la
maladie d'Alzheimer, la maladie de Huntington, la maladie de Parkinson, la
sclérose
latérale amyotrophique, les amyotrophies spinales, particulièrement
infantiles, la
maladie de Creutzfeldt-Jakob, la sclérose en plaque, les scléroses latérales
amyotrophiques, les leucodystrophies dont l'adrénoleucodystrophie,
l'épilepsie, les
démences, la schizophrénie, et les syndromes neurologiques associés au SIDA;
- les lésions neuronales liées au vieillissement ;
- les neuropathies périphériques héréditaires ou lésionnelles, comme les
maladies de Fabry, de Charcot-Marie-Tooth, de Krabbe, les leucodystrophies,
les
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neuropathies diabétiques et celles induites par les traitements anti-cancéreux
;
- les traumatismes du cerveau, des nerfs périphériques ou de la moelle
épinière;
- les ischémies du cerveau ou de la moelle épinière suite à un accident
cérébro-vasculaire, ou induites par un manque d'irrigation sanguine ;
- les dégénérescences, héréditaires, lésionnelles ou liées au vieillissement
des
neurones sensoriels de la vision, comme les dégénérescences maculaires, les
rétinites
pigmentaires, ou les dégénérescences du nerf optique induites par les
glaucomes ;
- les dégénérescences, héréditaires, traumatiques ou liées au vieillissement
des neurones sensoriels de l'ouïe entraînant une diminution ou une perte de
l'audition.
Une partie des voies de signalisation affectées dans ces pathologies sont
communes à un grand nombre de maladies neurodégénératives. La maladie
d'Alzheimer est la démence la plus fréquente. Elle fait apparaître une
atrophie du
cerveau, une perte neuronale prédominante dans la corne d'Ammon et elle touche
aussi les neurones cholinergiques. D'autres pathologies, comme les atrophies
lobaires
(maladie de Pick, la maladie de Creutzfeld-Jakob), la démence avec corps de
Lewy,
les démences vasculaires, la maladie de Parkinson sont associées à une mort
neuronale importante à l'origine des symptômes de ces démences.
Une approche thérapeutique pour protéger les neurones de la mort est l'apport
de protéines neurotrophiques.
Ces protéines, telles que BDNF (brain-derived neurotrophic factor), CNTF
(ciliary
neurotrophic factor), NGF (nerve growth factor), GDNF (glia-derived
neurotrophic
factor) sont synthétisées au cours du développement embryonnaire ou après
lésion
chez l'adulte. Ces facteurs de croissance favorisent la survie, la maturation
et la
différentiation des cellules neuronales. De plus, ils inhibent les mécanismes
apoptotiques, activent de multiples voies de survie et protègent un grand
nombre de
populations neuronales. Leur utilisation est proposée dans la plupart des
dégénérescences neuronales.
Des composés qui activeraient l'expression de facteurs neurotrophiques ou qui
mimeraient l'action de ces facteurs ont un potentiel thérapeutique pour le
traitement
des syndromes neurodégénératifs.
En particulier, l'apport de molécules neurotrophiques pour le traitement des
dégénérescences neuronales vise trois objectifs :
- compenser une carence potentielle en facteurs neurotrophiques liée à un
défaut d'apport par les cibles périphériques ou centrales des neurones et/ou
un trouble
du transport rétrograde de ces facteurs ;
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- intervenir de façon non spécifique sur des voies biochimiques impliquées
dans
la cascade dégénérative;
- favoriser les phénomènes compensateurs naturels de croissance dendritique
et d'arborisation des terminaisons nerveuses.
Ces composés présenteraient donc un effet bénéfique dans un grand nombre de
pathologies en particulier dans les pathologies touchant les systèmes nerveux
périphérique et central.
Par ailleurs, les motoneurones sont des neurones notamment présents dans la
moelle épinière et le tronc cérébral. Leur dégénérescence ou leur mort peut
conduire à
une faiblesse progressive des muscles des membres, puis à une atrophie et
éventuellement à une spasticité (c'est à dire une contraction permanente) du
muscle.
Les pathologies les plus importantes qui résultent de la dégénérescence et de
la
mort des motoneurones spinaux et/ou bulbaires sont la sclérose latérale
amyotrophique, également connue sous le nom de maladie de Charcot ou encore
maladie de Lou Gehrig, et les amyotrophies spinales, particulièrement
infantiles,
également connues sous les noms de maladie de Werdnig-Hoffmann ou maladie de
Kugelberg-Welander.
En outre, on observe une dégénérescence des motoneurones dans les cas de
traumatismes avec écrasement et/ou section de la moelle épinière ou des nerfs
moteurs périphériques.
Plus généralement, on parle d'amyotrophies spinales pour les maladies où est
impliquée la dégénérescence ou la mort des motoneurones de la moelle épinière.
La sclérose latérale amyotrophique (SLA ou ALS pour Amyotrophic Lateral
Sclerosis) est une maladie neurodégénérative associée à différents types
d'inclusions
tels les corps de Lewis et caractérisée par une dégénérescence des
motoneurones
spinaux et corticaux dont l'issue fatale est parfois associée à une démence
frontale.
Au cours du développement de PALS, les phénomènes dégénératifs se produisent
non
seulement dans le cerveau mais également dans la moelle épinière et en
conséquence dans le muscle, par défaut d'innervation.
Sur le plan des structures chimiques, la littérature fournit quelques exemples
de
dérivés d'oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane. Ces dérivés sont en général
décrits en
tant qu'intermédiaires de synthèse, en particulier pour la synthèse
d'azastéroides. Des
dérivés d'oxime du 3,5-seco-4-nor-cholestane possédant des propriétés
neuroprotectrices ou cytoprotectrices sont décrits dans les demandes de brevet
W02006/027454 (Al) et W02007/101925 (Al) respectivement.
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Sans toutefois dénigrer les traitements connus actuellement, il n'existe pas à
ce
jour de traitement pharmacologique réellement efficace pour traiter les
maladies cyto-
dégénératives qui sont caractérisées par le dysfonctionnement et la mort des
cellules,
en particulier pour traiter les maladies neurodégénératives. Ainsi, il existe
toujours un
réel besoin de nouveaux produits permettant de protéger efficacement les
cellules
contre les phénomènes de dégénérescence.
Les composés de la présente invention, outre le fait qu'ils soient nouveaux,
présentent des propriétés pharmacologiques très intéressantes.
Ils se révèlent avantageusement cytoprotecteurs, particulièrement
neuroprotecteurs et/ou cardioprotecteurs et/ou hépatoprotecteurs.
En plus de leur activité biologique, certains de ces nouveaux composés peuvent
également présenter des propriétés avantageuses en relation avec leur activité
pharmacologique, telle que leur pharmacocinétique, leur biodisponibilité, leur
solubilité,
leur stabilité, leur toxicité, leur absorption et/ou leur métabolisme. Ceci
les rend très
utiles pour la préparation d'un médicament, particulièrement pour la
préparation d'un
médicament cytoprotecteur, très particulièrement neuroprotecteur et/ou
cardioprotecteur
et/ou hépatoprotecteur.
Plus spécifiquement, la présente invention a pour objet les composés nouveaux
répondant à la formule (I) :
R
R1
R2
HO-N 6
R5
R3 R4 (l)
dans laquelle,
R, peut représenter un atome d'hydrogène ou un groupe -CH3, -CH2-CN, -
CH2-ORa, -CH2-SRa, -CH2-SeRa, -C(O)ORa , -O-C(O)NRaRb, -C(O)NRaRb dans lequel,
(i) Ra et Rb, simultanément ou indépendamment l'un de l'autre, peuvent être
choisis parmi un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6, cycloalkyle
en C3-
C6, aryle, hétéroaryle ou
(ii) Ra et Rb pris ensemble avec l'azote sur lequel ils sont attachés peuvent
former
un hétérocyle non aromatique en C3-C6., ledit hétérocycle pouvant comporter
une ou
plusieurs doubles liaisons et/ou un ou plusieurs atome(s) d'oxygène, de soufre
ou
d'azote ;
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= R2 peut représenter un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C8,
alcényle en C2-C8, alcynyle en C2-C8, ou un atome d'halogène ou encore un
groupement répondant à la formule (A) :
R -Q-(CH2)n (A)
dans laquelle
(i) n peut représenter un entier pouvant prendre l'une quelconque des valeurs
de1à8;et
(ii) Q peut représenter un atome d'oxygène ou un groupe -NRa dans lequel Ra
est tel que défini précédemment et Rc peut représenter un atome d'hydrogène ou
un
groupe alkyle en C1-C6, aryle, hétéroaryle, un hétérocycle, alkyle en C1-C6-
C(O)-,
aryle-C(O)-, hétéroaryle-C(O)-, hétérocycle-C(O)-, en particulier un
groupement
représenté par l'une des formules (C) ou (D)
0
HN NH
H .... ..,. H N o
N
0 S N02
(C) (D)
ou
(iii) Q peut représenter un groupe -O-C(O)- ou un groupe -NRa-C(O)- dans
lequel Ra est tel que défini précédemment et Rc peut représenter un atome
d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6, aryle, hétéroaryle, un hétérocycle,
= R3 peut représenter un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Ci-C6,
cycloalkyle en C3-C6, alcényle en C2-C6, alcynyle en C2-C6, aryle, un
héterocycle, ou un
atome d'halogène ou un groupe -CN, -CF3, -NO2, -ORa, -SRa, -SO2Ra, -NRaRb, -
OC(O)Ra, -OC(O)NRaRb, -C(O)ORa, -CONRaRb, Ra et Rb pouvant être tels que
définis
précédemment ;
= R4 peut représenter un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6, ou
R3 et R4 pris ensemble avec le carbone sur lequel ils sont attachés, peuvent
former un
groupe (C3-C6)-cycloakyle ;
= R5 peut représenter un, atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6,
préférentiellement un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxyamino (-NH2-OH) ou
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= R4 et R5 pris ensemble peuvent former une liaison carbone-carbone
additionnelle
entre les atomes de carbone sur lesquels ils sont attachés, ou un groupe
cycloalkyle en
C3-C6
= R6 peut représenter un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C6,
5 cycloalkyle en C3-C6, alcényle en C2-C6, alcynyle en C2-C6, aryle, ou un
groupe -CN, -
ORa, -SRa, -SO2Ra, -NRaRb, -OC(O)Ra, -OC(O)NRaRb , Ra et Rb pouvant être tels
que
définis précédemment, ou un groupe hydroxyamino (-NH2-OH) ;
= R7 peut représenter un groupe alkyle en C4-C12, alcényle en C4-C12 ou un
groupe
alcynyle en C4-C12 en particulier un groupe choisi parmi
Gi G2 G3
10 G4 G5 G6
ainsi que:
- ses isomères SYN, ANTI, lorsqu'ils existent,
- ses isomères optiques (énantiomères, diastéréoisomères), lorsqu'ils
existent,
- ses sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement
acceptable,
- ses hydrates et ses solvates,
- ses prodrogues,
à l'exception des composés suivants :
- l'ester de 4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime-3-N, N-diméthylglycine ;
- le chlorhydrate de l'ester de 4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime-3-N,N-
diméthylglycine ;
- le 4-nor-3,5-secocholestan-3-ol-5-one oxime ;
- le 4-nor-3,5-secocholestan-3,5-dione dioxime ;
- l'ester de 4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime-3-(4-méthyl-1-pipérazine)-
2 5 propanoique ;
- le 3-aminométhyl-4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime ;
- le 4,5-secocholestan-3-ol-5-one oxime ;
- le 3-méthyl-4,5-secocholestan-3-ol-5-one oxime ;
- le 3-N-méthylcarboxamide-4-nor-3,5-secocholestân-5-one oxime ;
- l'acide 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secocholestan-3-oïque ;
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- le 3,4-nor-2,5-secocholestan-5-one oxime ;
- le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secostigmastan-3-oate de méthyle ;
- le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secocholestan-3-oate de méthyle ;
- le 4,5-secocholestan-3,5-dione dioxime ;
- le 4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime ;
- le 24-méthyl-A-nor-1,5-secocholest-21-èn-5-one oxime ;
- le 3-(O-méthyloxime)-4,5-secocholestan-3,5-dione 5-oxime ;
- le 4-méthylidyne-4,5-secocholestan-5-one oxime ;
- le 4-méthyl-4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime ;
- le 5-hydroxyimino-4,5-secocholestan-4-oate de méthyle ;
- l'acide 5-hydroxyimino 4,5-secocholestan-4-oïque ;
- le 3-oxo-4,5-secocholestan-5-one oxime ;
- le 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime ;
- le 4,5-secocholestan-4-ol-5-one oxime ;
- le 3-hydroxyméthyl-4,5-secocholestan-4-ol-5-one oxime;
- l'acide 24-N,N-diéthylcarbamoyl-3,5-seco-4-nor-cholan-5-hydroxyimino-3-
oique.
Selon le présent texte,
> le terme "alkyle en CX C,," fait référence à un radical hydrocarboné
linéaire ou
ramifié, comprenant de x à y atomes de carbone. Ainsi à titre d'exemple,
l'invention
selon les cas énumérés couvre des radicaux hydrocarbonés linéaires ou
ramifiés, tels
que méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, tert-butyle,
pentyle,
néopentyle, n-hexyle, n-heptyle, n-octyle, n-nonyle, n-décyle, n-undécyle, n-
dodécyle.
Les groupes alkyles en C1-C6 sont préférés. Les groupes alkyles peuvent
éventuellement être substitués par un groupe aryle tel que défini ci-après,
auquel cas
on parle de groupe arylalkyle. Des exemples de groupes arylalkyle sont
notamment le
benzyle et le phénéthyle. Optionnellement, les groupes alkyles peuvent être
substitués
une ou plusieurs fois par un des substituants choisis indépendamment parmi un
atome
d'halogène ou un groupe -CN, -CF3, -COORa, -CONRaRb, -O-CONRaRb, -NRaRb, -
ORa330 -SRb, les groupes Ra et Rb pouvant être tels que décrits précédemment.
- Le terme "alcényle en CX Cy " fait référence à 'un radical hydrocarboné
linéaire
ou ramifié ou cyclique, comprenant une ou plusieurs double-liaisons, ayant de
x à y
atomes de carbone. On peut citer, par exemple, le radical éthényle, 1-
propényle, 2-
propényle, 1-butényle, 2-butényle, 1-pentényle, 2-pentényle, 3-méthyl-3-
butényle, 1-
hexényle, 1-heptényle, 1-octényle. Optionnellement, les groupes alcényles
peuvent
être substitués une ou plusieurs fois par un des substituants choisis
indépendamment
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parmi un atome d'halogène ou un groupe -CN, -CF3, -COORa, -C(O)NRaRb, -O-
C(O)NRaRb, -NRa Rb, -ORa, -SRb, les groupes Ra, Rb pouvant être tels que
décrits
précédemment ;
> le terme "cycloalkyle en C. ,-C. " fait référence à un radical hydrocarboné
cyclique saturé ou partiellement insaturé, ayant de x à y atomes de carbone.
Les
groupes cycloalkyles incluent notamment les substituants cyclopropyle,
cyclobutyle,
cyclopentyle, cyclopentényle, cyclohexyle, cyclohéxényle. Optionnellement, les
groupes cycloalkyles peuvent être substitués une ou plusieurs fois par un des
substituants choisis indépendamment parmi un atome d'halogène ou un groupe -
CN, -
CF3, -COORa, -C(O)NRaRb, -O-C(O)NRaRb, -NRaRb, -ORa, -SRa, le groupe Ra, Rb
pouvant être tel que décrit précédemment ;
> le terme "alcynyle en CX C, " fait référence à un radical hydrocarboné
linéaire,
ramifié comprenant au moins une triple liaison, ayant de x à y atomes de
carbone. Les
groupes alcynyles incluent notamment les susbtituants éthynyle, 1-propynyle, 2-
propynyle, 1-butynyle, 2-butynyle, 1-pentynyle, 2-pentynyle, 1-heptynyle, 2-
heptynyle,
1-octynyle, 2-octynyle. Optionnellement, les groupes alcynyles peuvent être
substitués
une ou plusieurs fois par un des substituants choisis indépendamment parmi un
atome
d'halogène ou un groupe -CN, -CF3, -COORa, -C(O)NRaRb, -O-C(O)NRaRb, -NRaRb, -
ORa, -SRa, les groupes Ra, Rb pouvant être tels que décrits précédemment ;
> le terme "aryle en C,-Cy " fait référence à un radical hydrocarboné
aromatique,
ayant x à y atomes de carbone. Préférentiellement selon l'invention on préfère
les
radicaux hydrocarbonés aromatiques ayant 6 atomes de carbone. Les groupes
aryles
incluent notamment les radicaux phényle, naphtyle et bi-phényle.
Optionnellement, les
groupes aryles peuvent être substitués une ou plusieurs fois par un des
substituants
choisis indépendamment parmi un atome d'halogène ou un groupe alkyle, -CN, -
CF3, -
N3, -NO2, -COOR3, -C(O)NRaRb, -O-C(O)NRaRb, -NRaRb, -ORa, -SRa, les groupes
Ra,
Rb pouvant être tels que décrits précédemment ;
le terme "hétérocycle en C-Cy" fait référence à un radical mono- ou poly-
cyclique, saturé, insaturé ou aromatique, éventuellement substitué, pouvant
comporter
de x à y atomes de carbone et comprenant un ou plusieurs hétéroatomes. De
préférence, les hétéroatomes sont choisis parmi l'oxygène, le soufre et
l'azote. Des
exemples d'hétérocycle sont les radicaux furyle, thiényle, pyrrole, imidazole,
isothiazole, thiazole, isoxazole, oxazole, pyridine, pyrazine, pyrimidine,
pyridazine,
indole, isoindole, indazole, quinoléine, isoquinoléine, phthalazine,
quinazoline,
pyrrolidine, imidazolidine, pyrrazolidine, pipéridine, pipérazine, morpholine,
thiazolidine
ou phthalimide. benzimidazole. Optionnellement, les groupes hétérocyles
peuvent être
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substitués une ou plusieurs fois par un des substituants choisis
indépendamment
parmi un atome d'halogène ou un groupe alkyle, -CN, -CF3, -N3, -NO2, -COORa, -
C(O)NRaRb, -O-C(O)NRaRb, -NRaRb, -ORa, -SRa, les groupes Ra, Rb pouvant être
tels
que décrits précédemment ;
- le terme "halogène" fait référence à un atome de chlore, de brome, de fluor
et
d'iode. Préférentiellement selon l'invention, l'halogène sera un atome de
fluor ;
le terme "traitement" désigne le traitement préventif, curatif, palliatif,
ainsi que
la prise en charge des patients (réduction de la souffrance, amélioration de
la durée de
vie, ralentissement de la progression de la maladie), etc. Le traitement peut
en outre
être réalisé en combinaison avec d'autres ingrédients ou traitements, tels que
notamment d'autres composés actifs pour traiter les pathologies ou
traumatismes
spécifiés dans la présente demande ;
> le terme "cytoprotecteur" fait référence à la capacité d'agents, par exemple
des composés chimiques, naturels ou non, à maintenir les interactions des
cellules
entre elles ou avec les autres tissus, à protéger les cellules contre les
phénomènes de
dégénérescence conduisant à une perte de fonction cellulaire ou à des
activités
cellulaires indésirables, avec ou sans mort cellulaire, et/ou contre les
dysfonctionnements cellulaires et/ou contre les maladies ou affections
dégénératives
conduisant à ces dysfonctionnements cellulaires, lesdits dysfonctionnements ou
lesdites maladies ou affections conduisant ou non à la mort cellulaire ;
> les termes "neuroprotecteur" ou "cardioprotecteur" ou "hépatoprotecteur"
font
référence aux mêmes propriétés desdits agents mais spécifiquement pour les
cellules
du système nerveux ("neuroprotecteur") soit spécifiquement pour les cellules
du
système cardiaque ("cardioprotecteur"), soit spécifiquement pour les cellules
du
système hépatique ("hépatoprotecteur"). On comprend donc qu'un composé
cytoprotecteur ou neuroprotecteur ou cardioprotecteur ou hépatoprotecteur est
un
composé qui présente les propriétés précédemment décrites.
Des composés de formule (I) particulièrement préférés sont ceux dans lesquels,
individuellement ou en combinaison :
- le substituant R, peut être choisi parmi un groupe -CH3 et un groupe
-CH2-OH ; préférentiellement, le substituant R, peut représenter un groupe -
CH3;
- le substituant R2 peut être choisi parmi un groupe alkyle en C1-C8,
optionnellement un alkyle en C1-C4, -CH2-CH2-CH3, -CH2-CH2-CF2-CH3, -CH2-CH2-
CH(OH)-CF3, CH2-CH(OH)-CF3 et -CH2-CH2-OH. Avantageusement, le substituant R2
peut être choisi parmi un groupe -CH2-CH2-CH3 et -CH2-CH2-OH ;
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- le substituant R3 peut être choisi parmi un atome d'hydrogène, un groupe
alkyle ou un atome de fluor. Avantageusement, le substituant R3 peut être
choisi parmi
un atome d'hydrogène ou un atome de fluor ;
- les substituants R4, R5 et R6 peuvent être des atomes d'hydrogène ;
- lorsque R4 et R5 pris ensemble forment une liaison carbone-carbone
additionnelle entre les atomes de carbone sur lesquels ils sont attachés,
alors le
groupe R3 représente un atome d'halogène, préférentiellement un atome de
fluor.
Selon un autre aspect de l'invention, le substituant R2 préféré peut
représenter
un groupement répondant à la formule (A) suivante :
R -Q-(CH2)n- (A)
dans laquelle
- n=3
- Q peut représenter un groupe -NRa dans lequel Ra peut représenter un
groupe CH3 et
- R` peut représenter le groupement répondant à la formule (C)
O
HNÅNH
H- H
O S
(C)
Selon encore un autre aspect de l'invention, d'autres composés préférés sont
ceux pour lesquels le substituant R2 peut représenter un groupement répondant
à la
formule (A) suivante :
R -Q-(CH2)n- (A)
dans laquelle
n=3
Q peut représenter un groupe NRa, dans lequel Ra peut représenter un groupe
CH3, et
- Rc peut représenter un groupement choisi parmi aryle, hétéroaryle,
hétérocycle, en particulier le groupement répondant à la formule (D) suivante
:
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N
O
N
NO2
(D)
Selon un autre aspect de l'invention, les composés pour lesquels R4 ensemble
avec R5, forme une liaison C-C additionnelle entre les atomes de carbone sur
lesquels
R4 et R5 sont attachés, sont également préférés.
5 De même, les composés correspondant à la formule (I) dans laquelle R6 peut
représenter un groupe alkyle, en particulier un groupe méthyle ou éthyle sont
également des composés préférés.
Le substituant R7 particulièrement préféré selon l'invention est choisi parmi
les
groupes G1, G2 et G5 suivants :
10 G, G2 G5
De façon particulièrement avantageuse, les composés préférés selon la présente
invention sont :
- le 4-nor-3,5-seco-3-(trifluorométhyl)cholestan-3-ol-5-one oxime ;
- le 3-[(N-(+)-biotinoyl-N-méthyl)amino]-4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime ;
15 - le 3-[méthyl(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]-4-nor-3,5-
secocholestan-
5-one oxime ;
- le 25-fluoro-4-nor-3,5-secocholestan-3-ol-5-one oxime ;
- le 4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime ;
- le 3,4-dinor-2,5-secocholestan-2-ol-5-one oxime ;
- le 4-nor-3,5-secocholest-24-èn-3-ol-5-one oxime,
- le 24p-éthyl-4-nor-3,5-secocholest-22-èn-3-ol-5-one oxime
ainsi que:
leurs isomères SYN, ANTI, lorsqu'ils existent,
leurs isomères optiques (énantiomères, diastéréoisomères), lorsqu'ils
25. existent,
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- leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement
acceptable,
- leurs hydrates et leurs solvates,
- leurs prodrogues
Les sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables peuvent
être
par exemple des sels formés avec les acides chlorhydrique, bromhydrique,
nitrique,
sulfurique, phosphorique acétique, formique, propionique, benzoïque, maléique,
fumarique, succinique, tartrique, citrique, oxalique, glyoxylique, aspartique,
alcane
sulfoniques tels que les acides méthane ou éthane sulfoniques,
arylsulfoniques, tels que
les acides benzène ou paratoluène sulfoniques, ou carboxyliques.
Certains composés préférés de la présente invention possèdent un ou plusieurs
atomes de fluor. A titre d'exemple, l'oxime de 3,3-difluoro-3-méthyl-4,5-
secocholestan-
5-one et l'oxime de 4-nor-3,5-seco-3-(trifluorométhyl)cholestan-3-ol-5-one
sont
particulièrement préférés.
II est à noter que dans le présent texte, l'atome que peut représenter le
terme
général "halogène", peut aussi être un isotope, naturel ou synthétique,
radioactif
comme par exemple pour le fluor, le fluor-18 (18F). Les composés de formules
(I)
radiomarqués, particulièrement ceux marqués par l'isotope 18F, peuvent être
très utiles
pour l'imagerie médicale, en particulier pour le Positron Emission Tomography
(PET)
qui est une technique d'imagerie in vivo développée pour le diagnostic de
maladies,
par exemple dans le domaine de l'oncologie, neurologie et cardiologie. Dans le
même
ordre d'idée on citera pour le brome ou l'iode les isotopes radioamarqués
brome-75
(75Br) et iode-124 (1241) respectivement.
Le terme général "halogène" peut également couvrir selon le présent texte les
isotopes, naturels ou synthétiques, non radioactifs comme par exemple un
isotope non
radioactif fluor-19 ('9F), utile pour la recherche biomédicale, et notamment
en
neurosciences cognitives et en particulier pour la technique d'Imagerie de
Résonance
Magnétique (IRM).
Les composés objet de la présente invention possèdent de très intéressantes
propriétés pharmacologiques. Ils sont doués notamment de remarquables
propriétés
cytoprotectrices, particulièrement neuroprotectrices, très particulièrement
vis à vis des
motoneurones, et cardioprotectrices et hépatoprotectrices.
Ces propriétés sont illustrées ci-après dans la partie expérimentale. Elles
justifient
l'utilisation des composés ci-dessus décrits ainsi que celle de leurs esters
et/ou de leurs
sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables, à titre de
médicament
cytoprotecteurs, particulièrement de médicaments neuroprotecteurs et/ou
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cardioprotecteurs et/ou hépatoprotecteurs.
Très particulièrement, les composés selon l'invention présentent une activité
remarquable vis à vis des motoneurones, des neurones du système nerveux
central,
des nerfs moteurs et périphériques.
Ainsi, l'invention a aussi pour objet l'utilisation à titre de médicament de
composés
de formule (I), y compris du 3,4-nor-2,5-secocholestan-5-one oxime, du 5-
hydroxyimino-4-nor-3,5-secostigmastan-3-oate de méthyle, du 5-hydroxyimino-4-
nor-
3,5-secocholestan-3-oate de méthyle, du 4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, du
24-
méthyl-A-nor-1,5-secocholest-22-èn-5-one oxime, du 4-méthylidyne-4,5-
secocholestan-5-one oxime, du 4-méthyl-4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, du
5-
hydroxyimino-4,5-secocholestan-4-oate de méthyle, du 3-acétyloxy-4-nor-3,5-
secocholestan-5-one oxime et/ou de l'acide 24-N,N-diéthylcarbamoyl-3,5-seco-4-
nor-
cholan-5-hydroxyimino-3-oique ainsi que leurs esters, et/ou leurs sels
d'addition avec les
acides pharmaceutiquement acceptables.
L'invention a donc encore pour objet l'utilisation d'un composé de formule
(I), y
compris du 3,4-nor-2,5-secocholestan-5-one oxime, du 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-
secostigmastan-3-oate de méthyle, du 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secocholestan-3-
oate
de méthyle, du 4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, du 24-méthyl-A-nor-1,5-
secocholest-22-èn-5-one oxime, du 4-méthylidyne-4,5-secocholestan-5-one oxime,
du
4-méthyl-4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, du 5-hydroxyimino-4,5-
secocholestan-
4-oate de méthyle, du 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime et/ou de
l'acide 24-N,N-diéthylcarbamoyl-3,5-seco-4-nor-cholan-5-hydroxyimino-3-oique
ainsi
que leurs esters, et/ou leurs sels d'addition avec les acides
pharmaceutiquement
acceptables, pour la préparation d'un médicament cytoprotecteur.
Les composés selon la présente invention, en raison de leurs propriétés
cytoprotectrices, peuvent être utilisés pour la préparation d'un médicament
destiné au
traitement ou à la prévention de la nécrose et/ou de l'apoptose pathologique
et/ou de
la nécroptose (médicaments antinécrotiques et/ou antiapoptotiques et/ou
antinécroptotique) ou encore au traitement ou à la prévention des affections
comme :
^ les maladies des os, des articulations, du tissu conjonctif et du cartilage,
telles
que l'ostéoporose, l'ostéomyélite, les arthrites dont par exemple
l'ostéoarthrite,
l'arthrite rhumatoïde et l'arthrite psoriasique, la nécrose avasculaire, la
fibrodysplasie
ossifiante progressive, le rachitisme, le syndrome de Cushing ;
^ les maladies musculaires telles que la dystrophie musculaire, comme par
exemple la - dystrophie musculaire de Duchenne, les dystrophies myotoniques,
les
myopathies et les myasthénies ;
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^ les maladies de la peau, telles que les dermatites, l'eczéma, le psoriasis,
le
vieillissement, ou encore les altérations de la cicatrisation ;
^ les maladies cardiovasculaires telles que l'ischémie cardiaque et/ou
vasculaire, l'infarctus du myocarde, la cardiopathie ischémique,
l'insuffisance
cardiaque chronique ou aigue, la dysrythmie cardiaque, la fibrillation
auriculaire, la
fibrillation ventriculaire, la tachycardie paroxystique, l'insuffisance
cardiaque, la
cardiomyopathie hypertrophique, l'anoxie, l'hypoxie, les effets secondaires
dus à des
thérapies avec des agents anticancéreux, les lésions cardiaques associées à la
reperfusion suite à une ischémie accidentelle ou provoquée (acte chirurgical)
;
^ les maladies circulatoires telles que l'athérosclérose, les scléroses
artérielles,
les maladies vasculaires périphériques, les accidents vasculaires cérébraux,
les
anévrismes ;
^ les maladies hématologiques et vasculaires telles que : l'anémie,
l'amyloïdose
vasculaire, les hémorragies, la drépanocytose, le syndrome de la fragmentation
des
globules rouges, la neutropénie, la leucopénie, l'aplasie médullaire, la
pancytopénie, la
thrombocytopénie, l'hémophilie ;
^ les maladies du poumon incluant la pneumonie, l'asthme; les maladies
chroniques obstructives des poumons comme par exemple les bronchites
chroniques
et l'emphysème ;
^ les maladies du tractus gastro-intestinal, telles que les ulcères ;
^ les maladies du foie comme par exemple les hépatites particulièrement les
hépatites d'origine virale ou ayant pour agent causal d'autres agents
infectieux, les
hépatites alcooliques, les hépatites auto-immunes, les hépatites fulminantes,
certains
désordres métaboliques héréditaires, la maladie de Wilson, les cirrhoses, la
maladie
hépatique alcoolique (ALD), les maladies du foie dues à des toxines ou des
médicaments ; les stéatoses comme par exemple :
- les stéatose hépatiques non alcooliques (NASH), ou accompagnant
l'intoxication exogène à l'alcool, aux médicaments, les hépatites virales ou
toxiques,
les complications de procédures chirurgicales, les maladies métaboliques
(telles que
diabète, syndrome d'intolérance au glucose, obésité, hyperlipidémies,
dysfonctions de
l'axe hypothalamo-hypophysaire, abétalipoproteinémie, galactosémies, maladies
du
glycogène, maladie de Wilson, maladie de Weber-Christian, le syndrome de
Refsum,
déficit en carnitine),
- les complications hépatiques des maladies inflammatoires du tube digestif,
- les hépatites auto-immunes.
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^ Par le biais d'une action sur la stéatose ou d'une action sur l'apoptose
hépatique quelle qu'en soit la cause les composés pourraient avoir une action
préventive sur le développement de la fibrose hépatique et la prévention de la
survenue de cirrhoses.les maladies du pancréas comme par exemple les
pancréatites
aigues ou chroniques ;
^ les maladies métaboliques telles que les diabètes mellitus et insipide, les
thyroïdites ;
^ les maladies des reins telles que par exemple les désordres rénaux aigus ou
la glomérulonéphrite ;
^ les infections virales et bactériennes telle que la septicémie ;
^ les intoxications sévères par des agents chimiques, des toxines ou des
médicaments ;
^ les affections dégénératives associées au Syndrome Immuno Déficitaire
Acquis (SIDA) ;
^ les désordres associés au vieillissement, tel que le syndrome du
vieillissement
accéléré ;
^ les maladies inflammatoires, telles que la maladie de Crohn, la polyarthrite
rhumatoïde ;
= les maladies auto-immunes telles que le lupus érythémateux ;
^ les désordres dentaires tels que ceux aboutissant à la dégradation des
tissus
comme par exemple les périodontites ;
^ les maladies ou désordres ophtalmiques incluant les rétinopathies
diabétiques, le glaucome, les dégénérescences maculaires, la dégénérescence
rétinienne, la rétinite pigmentaire, les trous ou déchirures rétiniennes, le
décollement
rétinien, l'ischémie rétinienne, les rétinopathies aigues associées à un
traumatisme, les
dégénérescences inflammatoires, les complications post chirurgicales, les
rétinopathies médicamenteuses, la cataracte ;
^ les désordres des voies auditives, tels que l'otosclérose et la surdité
induite
par des antibiotiques ;
^ les maladies associées aux mitochondries (pathologies mitochondriales),
telles que l'ataxie de Friedrich, la dystrophie musculaire congénitale avec
anomalie
mitochondriale structurelle, certaines myopathies (syndrome des MELAS,
syndrome
de MERFF, syndrome de Pearson), le syndrome de MIDD (diabètes mitochondriaux
et
surdité), le syndrome de Wolfram, la dystonie.
Très particulièrement, les médicaments selon la présente invention trouvent
leur
emploi en raison de leurs propriétés neuroprotectrices dans le traitement ou à
la
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prévention des affections neurodégénératives, comme par exemple la maladie de
Huntington, les maladies chroniques neurodégénératives, avantageusement les
maladies neurodégénératives chroniques démyélinisantes, héréditaires ou
sporadiques, les lésions neuronales liées au vieillissement, les neuropathies
5 périphériques, héréditaires ou lésionnelles, les neuropathies diabétiques ou
induites
par les traitements anticancéreux, les traumatismes du cerveau, des nerfs
périphériques ou de la moelle épinière, les ischémies du cerveau ou de la
moelle
épinière, les épilepsies, les dégénérescences héréditaires, lésionnelles ou
liées au
vieillissement des neurones sensoriels de la vision ou les dégénérescences du
nerf
10 optique, les dégénérescences héréditaires, traumatiques ou liées au
vieillissement des
neurones sensoriels de l'ouïe, les atrophies lobaires et les démences
vasculaires, et
notamment les amyotrophies spinales, la sclérose latérale amyotrophique et les
pathologies dues aux traumatismes de la moelle épinière ou des nerfs moteurs
périphériques.
15 Ils trouvent notamment en raison de leurs propriétés neuroprotectrices vis
à vis
des motoneurones, leur emploi particulièrement dans le traitement des
amyotrophies
spinales, notamment de la sclérose latérale amyotrophique ou des amyotrophies
spinales infantiles, et dans le traitement des traumatismes de la moelle
épinière ou des
nerfs moteurs périphériques comme évoqué ci-dessus.
20 En général la dose journalière du composé sera la dose minimum pour obtenir
l'effet thérapeutique. Cette dose dépendra des différents facteurs cités
auparavant.
Les doses des composés ci-dessus décrits y compris le 3,4-nor-2,5-
secocholestan-5-
one oxime, le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secostigmastan-3-oate de méthyle, le 5-
hydroxyimino-4-nor-3,5-secocholestan-3-oate de méthyle, le 4,5-secocholestan-3-
yn-
5-one oxime, le 24-méthyl-A-nor-1,5-secocholest-22-èn-5-one oxime, le 4-
méthylidyne-
4,5-secocholestan-5-one oxime, le 4-méthyl-4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime,
le 5-
hydroxyimino-4,5-secocholestan-4-oate de méthyle, le 3-acétyloxy-4-nor-3,5-
secocholestan-5-one oxime et/ou l'acide 24-N,N-diéthylcarbamoyl-3,5-seco-4-nor-
cholan-5-hydroxyimino-3-oique pourront être en général comprises entre 0,001 à
100
mg par kilo par jour pour l'homme.
Si nécessaire, la dose journalière peut être administrée en deux, trois,
quatre,
cinq, six ou plus, prises par jour ou par sous-doses multiples administrées
par
intervalles appropriés pendant la journée.
La quantité choisie dépendra de multiples facteurs, en particulier de la voie
d'administration, de la durée d'administration, du moment de l'administration,
de la
vitesse d'élimination du composé, du ou des différents produits utilisés en
combinaison
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avec le composé, de l'âge, du poids et de la condition physique du patient,
ainsi que
de son histoire médicale, et de toutes autres informations connues en
médecine.
La prescription du médecin traitant pourra commencer à des doses inférieures à
celles généralement utilisées, puis ces doses seront progressivement
augmentées afin
de mieux maîtriser l'apparition d'éventuels effets secondaires.
L'invention a aussi pour objet les compositions pharmaceutiques qui
comprennent
au moins un composé de formule (I), y compris le 3,4-nor-2,5-secocholestan-5-
one
oxime, le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secostigmastan-3-oate de méthyle, le 5-
hydroxyim ino-4-nor-3,5-secocholestan-3-oate de méthyle, le 4,5-secocholestan-
3-yn-
5-one oxime, le 24-méthyl-A-nor-1,5-secocholest-22-èn-5-one oxime, le 4-
méthylidyne-
4,5-secocholestan-5-one oxime, le 4-méthyl-4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime,
le 5-
hydroxyimino-4,5-secocholestan-4-oate de méthyle, le 3-acétyloxy-4-nor-3,5-
secocholestan-5-one oxime et/ou l'acide 24-N,N-diéthylcarbamoyl-3,5-seco-4-nor-
cholan-5-hydroxyimino-3-oique ou un de ses esters et/ou de ses sels d'addition
avec les
acides pharmaceutiquement acceptables, à titre de principe actif.
Dans ces compositions, le principe actif est avantageusement présent à des
doses
physiologiquement efficaces; les compositions précitées peuvent comprendre
notamment une dose neuroprotectrice efficace d'au moins un principe actif ci-
dessus.
A titre de médicaments, les composés répondant à la formule (I), y compris le
3,4-
nor-2,5-secocholestan-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secostigmastan-
3-
oate de méthyle, le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secocholestan-3-oate de méthyle,
le 4,5-
secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 24-méthyl-A-nor-1,5-secocholest-22-èn-5-one
oxime, le 4-méthylidyne-4,5-secocholestan-5-one oxime, le 4-méthyl-4,5-
secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-4,5-secocholestan-4-oate de
méthyle, le 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime et/ou l'acide 24-
N,N-
diéthylcarbamoyl-3, 5-seco-4-nor-cholan-5-hydroxyimino-3-oique ainsi que leurs
esters
et/ou leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables
peuvent
être incorporés dans des compositions pharmaceutiques destinées à la voie
digestive ou
parentérale.
Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent comprendre en
outre au moins un autre ingrédient thérapeutiquement actif, pour une
utilisation
simultanée, séparée ou étalée dans le temps, notamment lors d'un traitement
chez un
sujet atteint d'une pathologie ou d'un traumatisme lié à la dégénérescence ou
à la mort
des cellules particulièrement des cellules cardiaques et/ou des motoneurones
tel que
défini ci-dessus.
Les compositions pharmaceutiques ou médicaments selon l'invention
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comprennent avantageusement un ou plusieurs excipients ou véhicules inertes,
c'est à
dire pharmaceutiquement inactifs et non toxiques. On peut citer par exemple
des
solutions salines, physiologiques, isotoniques, tamponnées, etc., compatibles
avec un
usage pharmaceutique et connues de l'homme du métier. Les compositions peuvent
contenir un ou plusieurs agents ou véhicules choisis parmi les dispersants,
solubilisants, stabilisants, conservateurs, etc. Des agents ou véhicules
utilisables dans
des formulations (liquides et/ou injectables et/ou solides) sont notamment la
méthylcellulose, l'hydroxyméthylcellulose, la carboxyméthylcellulose, les
cyclodextrines, le polysorbate 80, le mannitol, la gélatine, le lactose, des
huiles
végétales ou animales, l'acacia, etc. Les compositions peuvent être formulées
sous
forme de suspension injectable, de gels, huiles, comprimés, suppositoires,
poudres,
gélules, capsules, etc., éventuellement au moyen de formes galéniques ou de
dispositifs assurant une libération prolongée et/ou retardée. Pour ce type de
formulation, on utilise avantageusement un agent tel que la cellulose, des
carbonates
ou des amidons.
L'administration peut être réalisée par toute méthode connue de l'homme du
métier, de préférence par voie orale ou par injection, typiquement par voie
intra-
péritonéale, intra-cérébrale, intra-thécale, intra-veineuse, intra-artérielle
ou intra-
musculaire. L'administration par voie orale est préférée. S'agissant d'un
traitement à
long terme, la voie d'administration préférée sera sublinguale, orale ou
transcutanée.
Pour les injections, les composés sont généralement conditionnés sous forme de
suspensions liquides, qui peuvent être injectées au moyen de seringues ou de
perfusions, par exemple. Il est entendu que le débit et/ou la dose injectée,
ou de
manière générale la dose à administrer, peuvent être adaptés par l'homme du
métier
en fonction du patient, de la pathologie, du mode d'administration, etc. Il
est entendu
que des administrations répétées peuvent être réalisées, éventuellement en
combinaison avec d'autres ingrédients actifs ou tout véhicule acceptable sur
le plan
pharmaceutique (tampons, solutions saline, isotonique, en présence d'agents
stabilisants, etc.).
L'invention est utilisable chez les mammifères, notamment chez l'être humain.
La présente invention a encore pour objet un procédé de préparation d'une
composition ci-dessus décrite, caractérisé en ce que l'on mélange, selon des
méthodes
connues en elles mêmes, le ou les principes actifs avec des excipients
acceptables,
notamment pharmaceutiquement acceptables.
L'invention a particulièrement pour objet l'utilisation d'un composé de
formule (I) ci-
dessus, y compris le 3,4-nor-2,5-secocholestan-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-
4-nor-
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3,5-secostigmastan-3-oate de méthyle, le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-
secocholestan-3-
oate de méthyle, le 4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 24-méthyl-A-nor-1,5-
secocholest-22-èn-5-one oxime, le 4-méthylidyne-4,5-secocholestan-5-one oxime,
le
4-méthyl-4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-4,5-
secocholestan-4-
oate de méthyle, le 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime et/ou
l'acide 24-
N, N-diéthylcarbamoyl-3,5-seco-4-nor-cholan-5-hydroxyimino-3-oique dans la
préparation d'un médicament destiné au traitement ou à la prévention des
pathologies
ou traumatismes liés à la dégénérescence ou à la mort des cellules,
particulièrement
des cellules cardiaques et/ou des neurones, que celles-ci soient naturelles ou
accidentelles.
L'invention a encore plus particulièrement pour objet l'utilisation d'un
composé de
formule (1) ci-dessus, y compris le 3,4-nor-2,5-secocholestan-5-one oxime, le
5-
hydroxyimino-4-nor-3,5-secostigmastan-3-oate de méthyle, le 5-hydroxyimino-4-
nor-
3,5-secocholestan-3-oate de méthyle, le 4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, le
24-
méthyl-A-nor-1,5-secocholest-22-èn-5-one oxime, le 4-méthylidyne-4,5-
secocholestan-
5-one oxime, le 4-méthyl-4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-
4,5-
secocholestan-4-oate de méthyle, le 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-5-one
oxime
et/ou l'acide 24-N,N-diéthylcarbamoyl-3,5-seco-4-nor-cholan-5-hydroxyimino-3-
nique
dans la préparation d'un médicament destiné au traitement ou à la prévention
de la
nécrose et/ou de l'apoptose pathologique et/ou de la nécroptose (médicaments
antinécrotiques et/ou antiapoptotiques et/ou antinécroptotiques) ou encore au
traitement ou à la prévention des affections comme :
^ les maladies des os, des articulations, du tissu conjonctif et du cartilage,
telles
que l'ostéoporose, l'ostéomyélite, les arthrites dont par exemple
l'ostéoarthrite,
l'arthrite rhumatoïde et l'arthrite psoriasique, la nécrose avasculaire, la
fibrodysplasie
ossifiante progressive, le rachitisme, le syndrome de Cushing ;
^ les maladies musculaires telles que la dystrophie musculaire, comme par
exemple la dystrophie musculaire de Duchenne, les dystrophies myotoniques, les
myopathies et les myasthénies ;
^ les maladies de la peau, telles que les dermatites, l'eczéma, le psoriasis,
le
vieillissement, ou encore les altérations de la cicatrisation;
= les maladies cardiovasculaires telles que l'ischémie cardiaque et/ou
vasculaire, l'infarctus du myocarde, la cardiopathie ischémique;
l'insuffisance
cardiaque chronique ou aigue, la dysrythmie cardiaque, la fibrillation
auriculaire, la
fibrillation ventriculaire, la tachycardie paroxystique, l'insuffisance
cardiaque, la
cardiomyopathie hypertrophique, l'anoxie, l'hypoxie, les effets secondaires
dus à des
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thérapies avec des agents anticancéreux, les lésions cardiaques associées à la
reperfusion suite à une ischémie accidentelle ou provoquée (acte chirurgical)
;
= les maladies circulatoires telles que l'athérosclérose, les scléroses
artérielles,
et les maladies vasculaires périphériques, les accidents vasculaires
cérébraux, les
anévrismes ;
= les maladies hématologiques et vasculaires telles que : l'anémie,
l'amyloïdose
vasculaire, les hémorragies, la drépanocytose, le syndrome de la fragmentation
des
globules rouges, la neutropénie, la leucopénie, l'aplasie médullaire, la
pancytopénie, la
thrombocytopénie, l'hémophilie ;
^ les maladies du poumon incluant la pneumonie, l'asthme ; les maladies
chroniques obstructives des poumons comme par exemple les bronchites
chroniques
et l'emphysème ;
^ les maladies du tractus gastro-intestinal, telles que les ulcères ;
^ les maladies du foie comme par exemple les hépatites particulièrement les
hépatites d'origine virale ou ayant pour agent causal d'autres agents
infectieux, les
hépatites alcooliques, les hépatites auto-immunes, les hépatites fulminantes,
certains
désordres métaboliques héréditaires, la maladie de Wilson, les cirrhoses, la
maladie
hépatique alcoolique (ALD), les maladies du foie dues à des toxines ou des
médicaments ; les stéatoses comme par exemple :
- les stéatose hépatiques non alcooliques (NASH), ou accompagnant
l'intoxication exogène à l'alcool, aux médicaments, les hépatites virales ou
toxiques, les complications de procédures chirurgicales, les maladies
métaboliques (telles que diabète, syndrome d'intolérance au glucose,
obésité, hyperlipidémies, dysfonctions de l'axe hypothalamo-hypophysaire,
abétalipoproteinémie, galactosémies, maladies du glycogène, maladie de
Wilson, maladie de Weber-Christian, le syndrome de Refsum, déficit en
carnitine),
- les complications hépatiques des maladies inflammatoires du tube digestif,
- les hépatites auto-immunes.
^ Par le biais d'une action sur la stéatose ou d'une action sur l'apoptose
hépatique quelle qu'en soit la cause les composés pourraient avoir une action
préventive sur le développement de la fibrose hépatique et la. prévention de
la
survenue de cirrhoses.les maladies du pancréas comme par exemple les
pancréatites
aigues ou chroniques ;
35, ^ les maladies métaboliques telles que les diabètes mellitus et insipide,
les
thyroïdites ;
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^ les maladies des reins telles que par exemple les désordres rénaux aigus ou
la glomérulonéphrite ;
^ les infections virales et bactériennes telle que la septicémie ;
^ les intoxications sévères par des agents chimiques, des toxines ou des
5 médicaments ;
^ les affections dégénératives associées au Syndrome Immuno Déficitaire
Acquis (SIDA) ;
^ les désordres associés au vieillissement, tel que le syndrome du
vieillissement
accéléré ;
10 ^ les maladies inflammatoires, telles que la maladie de Crohn, la
polyarthrite
rhumatoïde ;
^ les maladies auto-immunes telles que le lupus érythémateux ;
^ les désordres dentaires tels que ceux aboutissant à la dégradation des
tissus
comme par exemple les périodontites ;
15 ^ les maladies ou désordres ophtalmiques incluant les rétinopathies
diabétiques, le glaucome, les dégénérescences maculaires, la dégénérescence
rétinienne, la rétinite pigmentaire, les trous ou déchirures rétiniennes, le
décollement
rétinien, l'ischémie rétinienne, les rétinopathies aigues associées à un
traumatisme, les
dégénérescences inflammatoires, les complications post chirurgicales, les
20 rétinopathies médicamenteuses, la cataracte ;
^ les désordres des voies auditives, tels que l'otosclérose et la surdité
induite
par des antibiotiques ;
^ les maladies associées aux mitochondries (pathologies mitochondriales),
telles que l'ataxie de Friedrich, la dystrophie musculaire congénitale avec
anomalie
25 mitochondriale structurelle, certaines myopathies (syndrome des MELAS,
syndrome
de MERFF, syndrome de Pearson), le syndrome de MIDD (diabètes mitochondriaux
et
surdité), le syndrome de Wolfram, la dystonie, et particulièrement
^ des maladies neurodégénératives comme par exemple la maladie de
Huntington, les maladies chroniques neurodégénératives, avantageusement les
maladies chroniques démyélinisantes et neurodégénératives, héréditaires ou
sporadiques, notamment la sclérose en plaque et les leucodystrophies, les
lésions
neuronales liées au vieillissement, les neuropathies périphériques
héréditaires ou
lésionnelles, la maladie de Charcot-Marie-Tooth, les neuropathies diabétiques
ou
induites par les traitements anticancéreux, les épilepsies, les traumatismes
du
cerveau, des nerfs périphériques ou de la moelle épinière, les ischémies du
cerveau
ou de la moelle épinière, les dégénérescences héréditaires, lésionnelles ou
liées au
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vieillissement des neurones sensoriels de la vision ou les dégénérescences du
nerf
optique, les dégénérescences héréditaires, traumatiques ou liées au
vieillissement des
neurones sensoriels de l'ouïe, les atrophies lobaires et les démences
vasculaires, les
maladies et traumatismes liés à la dégénérescence des motoneurones et plus
particulièrement les amyotrophies spinales particulièrement infantiles, la
sclérose
latérale amyotrophique, la sclérose en plaques et les traumatismes de la
moelle
épinière ou des nerfs moteurs périphériques.
L'invention a tout particulièrement pour objet l'utilisation d'un composé de
formule
(I), y compris, le 3,4-nor-2,5-secocholestan-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-4-
nor-3,5-
secostigmastan-3-oate de méthyle, le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secocholestan-3-
oate
de méthyle, le 4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 24-méthyl-A-nor-1,5-
secocholest-22-èn-5-one oxime, le 4-méthylidyne-4,5-secocholestan-5-one oxime,
le
4-méthyl-4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-4,5-
secocholestan-4-
oate de méthyle, le 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime et/ou
l'acide 24-
N,N-diéthylcarbamoyl-3,5-seco-4-nor-cholan-5-hydroxyimino-3-oique dans la
préparation d'un médicament destiné au traitement des amyotrophies spinales,
particulièrement infantiles, et des scléroses latérales amyotrophiques.
La mise en oeuvre de ces médicaments comprend habituellement l'administration
aux patients, particulièrement aux mammifères, tout particulièrement aux êtres
humains, d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un composé de formule I,
y
compris le 3,4-nor-2,5-secocholestan-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-
secostigmastan-3-oate de méthyle, le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secocholestan-3-
oate
de méthyle, le 4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 24-méthyl-A-nor-1,5-
secocholest-22-èn-5-one oxime, le 4-méthylidyne-4,5-secocholestan-5-one oxime,
le
4-méthyl-4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-4,5-
secocholestan-4-
oate de méthyle, le 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime et/ou
l'acide 24-
N,N-diéthylcarbamoyl-3,5-seco-4-nor-cholan-5-hydroxyimino-3-oique, . en
particulier
pour augmenter la survie des cellules, particulièrement des cellules
cardiaques et/ou
des neurones ou favoriser la croissance axonale.
L'invention a tout autant pour objet une méthode de traitement des maladies
précitées, notamment neurodégénératives, et notamment une méthode de
traitement
de pathologies ou traumatismes liés à la dégénérescence ou à la mort des
neurones,
chez des mammifères (en général des patients) atteints de telles pathologies
ou
traumatismes, comprenant l'administration à ces mammifères d'une quantité
thérapeutiqûement efficace d'un composé de formule I, y compris le 3,4-nor-2,5-
secocholestan-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secostigmastan-3-oate
de
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méthyle, le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secocholestan-3-oate de méthyle, le 4,5-
secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 24-méthyl-A-nor-1,5-secocholest-22-èn-5-one
oxime, le 4-méthylidyne-4,5-secocholestan-5-one oxime, le 4-méthyl-4,5-
secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-4,5-secocholestan-4-oate de
méthyle, le 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime et/ou l'acide 24-
N,N-
diéthylcarbamoyl-3,5-seco-4-nor-cholan-5-hydroxyimino-3-oique en particulier
pour
augmenter la survie des neurones ou favoriser la croissance axonale.
L'invention a de plus pour objet une méthode de traitement d'une des
affections
ci-dessus décrites et notamment des pathologies ou traumatismes liés à la
dégénérescence ou à la mort des motoneurones, chez des mammifères (en général
des patients) atteints de tels pathologies ou traumatismes, comprenant
l'administration
à ces mammifères d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un composé de
formule
I, y compris le 3,4-nor-2,5-secocholestan-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-4-nor-
3,5-
secostigmastan-3-oate de méthyle, le 5-hydroxyimino-4-nor-3,5-secocholestan-3-
oate
de méthyle, le 4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 24-méthyl-A-nor-1,5-
secocholest-22-èn-5-one oxime, le 4-méthylidyne-4,5-secocholestan-5-one oxime,
le
4-méthyl-4,5-secocholestan-3-yn-5-one oxime, le 5-hydroxyimino-4,5-
secocholestan-4-
oate de méthyle, le 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime et/ou
l'acide 24-
N,N-diéthylcarbamoyl-3,5-seco-4-nor-cholan-5-hydroxyimino-3-oique en
particulier
pour augmenter la survie des neurones. Plus spécifiquement, les pathologies
liées à la
dégénérescence ou à la mort des motoneurones sont la sclérose latérale
amyotrophique ou les amyotrophies spinales infantiles.
Selon une autre variante, l'invention concerne aussi des composés comportant
un groupement de marquage détectable et/ou visualisable directement ou
indirectement par les techniques de détection et/ou de visualisation connues
de
l'homme de l'art telles que la technique de la microscopie de fluorescence ou
la
technique tirant profit de la très forte affinité des avidines (streptavidine
ou
neutravidine) pour la biotine (Ka - 107M).
Au sens général du terme, on entend par "marquage" une entité telle qu'un
isotope radioactif ou une entité non isotopique telle qu'un agent fluorophore,
un.
colorant, un haptène, la biotine, etc.
Le terme fluorophore se réfère en général à la particularité qu'a une
substance
d'être fluorescente, c'est-à-dire d'absorber de l'énergie lumineuse (lumière
d'excitation)
lorsqu'elle est excitée par une source énergétique et de la restituer
rapidement sous
forme de lumière fluorescente (lumière d'émission). Cette, particularité
d'être
fluorophore permet d'envisager l'utilisation de telle substance comme marqueur
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fluorescent dans des systèmes biologiques (membranes, cellules, neurones,
mitochondries, etc.) pour réaliser par exemple l'imagerie des cellules
étudiées.
La biotine est une coenzyme, aussi appelée Vitamine H, synthétisée par les
plantes, les bactéries et certains champignons. La biotine est détectée au
moyen
d'avidines (streptavidine ou neutravidine) qui possèdent une très forte
affinité pour la
biotine (Ka - 107M). La structure de la biotine est la suivante :
O
HNÅNH
HO H ,. H
O S
Biotine
Il est connu dans l'art antérieur que l'incorporation d'un groupement biotine
à une
substance biologiquement active permet d'isoler et/ou identifier les cibles
protéiques
ou autres composés non protéiniques susceptibles d'interagir avec ladite
substance
active en utilisant l'une des approches tirant profit de la très forte
affinité des avidines
pour la biotine. Les cibles protéiques ou autres composés non protéiniques
ainsi isolés
sont par exemple caractérisés par spectrométrie de masse. Parmi les
applications
connues de l'homme de l'art, on peut citer par exemple: les tests diagnostics
utilisant
des composés biotinylés ; le test ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
qui
emploie des antibiotiques biotinylés ; la chromatographie d'affinité basée sur
l'utilisation d'une colonne d'avidine immobilisée sur laquelle on charge des
composés
biotinylés ; les techniques d'analyse protéomique (électrophorèse 2D et
spectrométrie
de masse), etc.
Le groupement de marquage selon la présente invention peut être choisi parmi
la biotine ou un groupement fluorophore tel que le 7-nitrobenz-2-oxa-1,3-
diazol-4-yl
(formule D); BODIPY fluorophore ; anthracène et fluorescéine. De préférence,
le
groupement de marquage selon la présente invention est choisi parmi la biotine
et le
groupement fluorophore 7- nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yle (formule D).
-N
O
~N
NO2
(D)
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Les composés selon la présente invention marqués par la biotine ou par un
groupement fluorophore sont des sondes très utiles pour :
- visualiser et/ou détecter les cellules qui sont en contact avec les composés
marqués,
- étudier leur distribution dans un organisme vivant, humain ou animal, et
leur
localisation dans les compartiments cellulaires (membranes, cellules,
neurones, mitochondrie, noyau, réticulum endoplasmique, golgi, lysosomes,
endosomes et autres organelles, etc),
- mettre en oeuvre une méthode de détection de protéines ou autres composés
non protéiniques susceptibles d'interagir avec lesdits composés marqués
- identifier leur(s) cible(s) moléculaire(s),
- étudier les interactions molécules-protéine d'un point de vue moléculaire,
- détecter les anticorps monoclonaux spécifiques de l'oxime du 3,5-seco-4-nor-
cholestane ou de ses dérivés,
- développer et réaliser des essais de binding permettant, entre autres,
l'optimisation de ligands plus affins pour la cible en question,
- développer des méthodes de dosage,
- développer de nouveaux outils de criblage de ligands
L'incorporation d'un tel groupement de marquage n'a pas provoqué de perte de
l'activité biologique des composés marqués selon la présente invention et a
permis
l'utilisation de ces composés marqués en tant que sondes en particulier en
tant que
traceurs ou agents de marquage.
Par conséquent, un autre objet selon l'invention est de fournir des composés
de
formule (I) comportant un groupement de marquage choisi parmi le groupe NBD et
la
biotine.
L'invention a de plus pour objet l'utilisation, en tant que sondes en
particulier en
tant que traceurs ou agents de marquage, des composés de formule I, pour
lesquels :
R2 peut représenter un groupement répondant à la formule (A) suivante :
R`-Q-(CH2),I- (A)
dans laquelle
+ n peut représenter un entier pouvant prendre l'une quelconque des valeurs de
1 à8;
+ Q peut représenter un atome d'oxygène ou un groupe -NRa dans lequel Ra est
tel que défini précédemment, et
+ Rc peut représenter un groupement répondant à la formule (C) ou (D)
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O
HN NH Q
H.... .... H
O S NOZ
(C) (D)
Les composés particulièrement préférés comme traceurs ou agents de
marquage selon l'invention sont représentés par les formules (II), (III),
suivantes :
O~_N O
FIN N
H S I HO-N
(I I)
OZN
N N
O_N HO-N
5 (III)
Les composés de formule (I) selon l'invention peuvent être obtenus par
différents
procédés de synthèse faisant appel notamment à la réaction d'oximation des
cétones
qui est bien connue de l'homme du métier. Le schéma ci-dessous est illustratif
du
procédé utilisé pour la préparation des composés de formule (I)
R7 R7
R2 R2
CR5 NH2OH, HCI CR5
O HO-N R3 R4 R3 R4
(II) (I)
A titre d'exemple, un procédé particulièrement approprié pour l'obtention des
composés de formule (1) consiste à faire réagir :
(i) un composé de formule (II) dans laquelle les groupements R, à R7 sont tels
que définis précédemment, avec
(ii) un halogénure d'hydroxylamine comme le chlorhydrate d'hydroxylamine.
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Ce procédé peut être avantageusement réalisé dans un solvant adapté comme
la pyridine.
Les composés de formule (I) peuvent être isolés du milieu réactionnel par
différentes méthodes bien connues de l'homme du métier. Optionnellement, les
composés de formule (I) peuvent être transformés en l'un de leurs sels
pharmaceutiquement acceptables. Les composés de formule (II) utilisés comme
produits de départ pour l'obtention des composés de formules (I) sont
disponibles
commercialement ou sont préparés par des méthodes connues de l'homme du
métier.
Les exemples suivants illustrent la présente invention mais sans la limiter.
Les
structures des composés décrits dans les exemples et dans les préparations ont
été
déterminées selon les techniques usuelles (résonance magnétique nucléaire,
spectroscopie de masse, etc).
Abréviations :
THF : tetrahydrofurane
AcOH : acide acétique
AcOEt : acétate d'éthyle
TBAF : tétrabutylammonium fluorure
DAST : (diéthylamino)sulfur trifluoride
s : singulet
d : doublet
t : triplet
sept : septuplet
Exemple 1 - Préparation de composés de formule (II)
Exemple la - Synthèse de la 3,3-difluoro-3-méthyl-4.5-secocholestan-5-one
Etape i : préparation du 3, 3-difluoro-5, 5-(éthylènedioxy)-4, 5-
secocholestane
290 mg (0,65 mmol) de 5,5-(éthylènedioxy)-4,5-secocholestan-3-one
(W020071101925) sont solubilisés dans 30 mL de dichlorométhane, puis 4 mL de
DAST sont ajoutés. Le milieu est agité à reflux pendant 2 jours, refroidit à 0
C et
hydrolysé par un goutte-à-goutte d'eau. Le milieu est alors extrait au
dichlorométhane,
les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO4 anhydre, filtrées et
concentrées sous vide. Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie
sur gel
de silice (éther de pétrole/acétate d'éthyle 98/2 puis 96/4). 64 mg (rendement
55%) du
produit attendu sont obtenus sous forme d'huile marron.
RMN-'H (CDCI3) ^ (ppm) 4,01-3,85 (m, 4H) ; 1,00 (s, 3H) ; 0,90 (d, 3H) ; 0,87
(dd, 6H) ; 0,67 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 469 [M+H]+
CA 02745503 2011-06-02
WO 2010/076418 PCT/FR2009/001434
32
Etape ii : préparation de la 3, 3-difluoro-4, 5-secocholestan-5-one
169 mg (0,36 mmol) de 3,3-difluoro-5,5-(éthylènedioxy)-4,5-secocholestane sont
ajoutés dans 15 mL d'une solution HCI 4N dans le dioxane à 0 C. Le milieu est
alors
agité 2h à 0 C puis concentré sous vide. Le résidu obtenu est purifié par
flash
chromatographie sur gel de silice (éther de pétrole/acétate d'éthyle 9812).
105 mg
(rendement 69%) du produit attendu sont obtenus sous forme d'huile jaune.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 3,31 (dd, 1H) ; 1,09 (s, 3H) ; 0,90 (d, 3H) ; 0,86 (dd,
6H) ; 0,69 (s, 3H)
RMN-19F (CDCI3) : 5 (ppm, non calibré) -86,35 (q)
MS (ESI+) : m/z = 440 [M+H]+
Exemple 1 b - Synthèse de la 4-nor-3.5-secocholestan-3,25-diol-5-one
Etape i : préparation de la 3-acétyloxy-4-nor-3, 5-secocholestan-25-ol-5-one
Une solution tampon pH=7 est préparée par mélange de 10 mL d'une solution
0,1 M de KH2PO4 et 10 mL d'une solution de NaOH 0,1 M.
200 mg (0,46 mmol) de 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-5-one* sont placés
dans 2 mL de CCI4 et 2 mL d'acétonitrile. 2,3 mL de la solution tampon
précédemment
préparée sont ajoutés, ainsi que 10,3 mg (0,046 mmol) de RuC13.H20 et 342 mg
(1,6
mmol) de Na104. Le milieu réactionnel est agité pendant 5 jours à 45 C, puis
extrait 3
fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont réunies, lavées par une
solution
saturée de NaCI dans l'eau, séchées sur MgSO4 anhydre, filtrées et concentrées
sous
vide. Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice
(éther de
pétrole/acétate d'éthyle 95/5). 51 mg (rendement 24%) du produit attendu sont
obtenus sous forme d'huile incolore.
RMN-1H (CDCI3) S (ppm) 4,03 (t, 2H) ; 2,05 (s, 3H) ; 1,21 (s, 6H) ; 1,08 (s,
3H) ;
0,92 (d, 3H) ; 0,72 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 371 [M-H2O-AcOH+H]+, 389 [M-AcOH+H]+
* La 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-5-one est décrite dans l'article de
Rodewald, W. J. et al. Bull. Acad. Pol. Sci., Série des Sciences Chimiques
(1963), 11(8), 437-
441
Etape ii : préparation de la 4-nor-3, 5-secocholestan-3, 25-diol-5-one
Un mélange de 50 mg (0,4 mmol) de 3-acétyloxy-4-nor-3,5-secocholestan-25-ol-
5-one et de 2,3 mL d'une solution de KOH à 5% dans le méthanol est agité 2h30
à
température ambiante. Le milieu réactionnel est alors noyé dans l'eau, agité
15
minutes à température ambiante, puis extrait 3 fois à l'acétate d'éthyle. Les
phases
organiques sont réunies, lavées par une solution saturée de NaCI dans l'eau,
séchées
sur MgSO4 anhydre, filtrées et concentrées sous vide. Le résidu obtenu est
purifié par
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flash chromatographie sur gel de silice (éther de pétrole/acétate d'éthyle 9/1
puis 8/2).
21 mg (rendement 46%) du produit attendu sont obtenus sous forme d'huile
jaune.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 4,12-3,86 (m, 1H) ; 3,73-3,53 (m, 1H) ; 1,21 (s, 6H)
1,08 (s, 3H) ; 0,92 (d, 3H) ; 0,66 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 389 [M-H2O+H]+, 447 [M+H]+
Exemple I c - Synthèse de la 4-nor-3,5-seco-3-(trifluorométhyl)cholestan-3-ol-
5-one
Etape i .préparation du 4-nor-5,5-(éthylènedioxy)-3,5-seco-3-
(trifluorométhyl)cholestan-3-ol
200 mg (0,46 mmol) de 5,5-(éthylènedioxy)-4-nor-3,5-secocholestan-3-al
(W020071101925) et 277 pL (0,555 mmol) de (trifluorométhyl)triméthylsilane 2M
dans
le THF sont placés dans 3 mL de THF anhydre sous argon. Le milieu est
refroidit à
0 C et 10 pL de TBAF I M dans le THF sont ajoutés. Le milieu est agité 24h à
température ambiante et 0,3 mL de (trifluorométhyl)triméthylsilane 2M dans le
THF
sont rajoutés. Après 24h supplémentaires à température ambiante, 0,3 mL de
(trifluorométhyl)triméthylsilane 2M dans le THF et 50NL de TBAF 1M dans le THF
sont
rajoutés. Le milieu est agité 72h à température ambiante, puis une solution
HCI 1N est
ajoutée. Le milieu est alors agité 15 minutes à température ambiante, puis
extrait 3
fois à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, lavées à l'eau,
par une
solution saturée de NaCI dans l'eau, séchées sur MgSO4 anhydre, filtrées puis
concentrées sous vide. Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie
sur gel
de silice (éther de pétrole 100% puis éther de pétrole/acétate d'éthyle 95/5).
63 mg
(rendement 27%) du produit attendu sont obtenus.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 4,02-3,84 (m, 4H) ; 3,83-3,67 (m, 1H) ; 1,00 (s, 3H) ;
0,91 (d, 3H) ; 0,86 (dd, 6H) ; 0,67 (s, 3H)
RMN-19F (CDCI3) : S (ppm) -80,30 (d)
MS (ESI+) : m/z = 443 [M-OCH2CH2O+H]+
Etape ii : préparation de la 4-nor-3, 5-seco-3-(trifluorométhyl)norcholestan-3-
o1--5-one
63 mg (0,125 mmol) de 4-nor-5,5-(éthylènedioxy)-3,5-seco-3-
(trifluorométhyl)cholestan-3-ol sont placés dans un mélange THF/H20/AcOH (2
mU2
mU2.5 mL). Le milieu réactionnel est agité 2 jours à température ambiante,
noyé dans
un mélange H2O/AcOEt et extrait 3 fois à l'acétate d'éthyle. Les phases
organiques
sont réunies, lavées par une solution à 10% de NaHCO3, puis par une solution
saturée
de NaCI dans l'eau, séchées sur MgSO4 anhydre, filtrées et concentrées sous
vide. Le
résidu obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éther
de
pétrole/acétate d'éthyle 95/5). 21 mg (rendement 37%) du produit attendu sont
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obtenus sous forme d'une huile incolore qui est engagée tel quelle dans
l'étape
suivante.
MS (ESI+) : m/z = 459 [M+H]+, 481 [M+Na]+
Exemple Id - synthèse de la 3-f(N-(+)-biotinoyl-N-méthypaminol-4-nor-3,5-
secocholestan-5-one
Etape i : préparation du 3-((N-(+)-biotinoyl-N-méthyl)amino]-5, 5-
(éthylènedioxy)-4-nor-
3, 5-secocholestane
Dans un ballon, sont introduits 500 mg (1,1 mmol) de 5,5-(éthylènedioxy)-3-(N-
méthylamino)-4-nor-3,5-secocholestane (W02007/101925), 232 mg (1,21 mmol) de
chlorhydrate de 1-(3-d iméthylam inopropyl)-3-éthylcarboiim ide, 309 mg (2,53
mmol) de
N,N-diméthylaminopyridine et 327 mg (1,34 mmol) de D(+)-biotine dans 80 mL de
dichlorométhane. Le milieu réactionnel est agité 48h à température ambiante
puis il est
lavé par une solution HCI 1 M, une solution saturée de chlorure de sodium,
séché sur
sulfate de magnésium anhydre et concentré sous vide. Après purification par
flash
chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane/méthanol 9812 puis 95/5),
432 mg
de l'amide sont obtenus avec une pureté HPLC de 70% et engagés tel quel dans
l'étape suivante.
MS (ESI+) : m/z = 674 [M+H]+
Etape ii : préparation de la 3-[(N-(+)-biotinoyl-N-méthyl)amino]-4-nor-3, 5-
2 0 secocholestan-5-one
280 mg (0,41 mmol) de 3-[(N-(+)-biotinoyl-N-méthyl)amino]-5,5-(éthylènedioxy)-
4-nor-3,5-secocholestane sont ajoutés dans 5 mL d'une solution HCI 4N dans le
dioxanne à 0 C. Le milieu est alors agité 1 nuit à température ambiante puis
concentré
sous vide. Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de
silice
(dichlorométhane puis dichlorométhane/méthanol 9/1). 146 mg (rendement 55%) du
produit attendu sont obtenus.
MS (ESI+) : m/z = 630 [M+H]+
Exemple le: synthèse de la 3-fméthyl-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yDaminoJ-4-
nor
3.5-secocholestan-5-one
Etape i : préparation du 5, 5-(éthylènedioxy)-3-(méthyl-(7-nitro-2,1, 3-
benzoxadiazol-4-
yl)amino]-4-nor-3, 5-secocholestane
Dans un ballon, sont introduits 200 mg (0,45 mmol) de 5,5-(éthylènedioxy)-3-(N-
méthylamino)-4-nor-3,5-secocholestane, 98 mg (0,49 mmol) de 4-chloro-7-
nitrobenzofurazane et 125 pL de triéthylamine dans 15 mL de chloroforme. La
solution
"35 est agitée une nuit à température ambiante à l'abri de la lumière puis le
milieu
réactionnel est lavé par une solution HCI 1M, séché sur sulfate de magnésium
anhydre
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et concentré sous vide. Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie
sur gel
de silice (dichlorométhane). 150 mg (rendement 43%) du produit attendu sont
obtenus.
RMN-1H (CDCI3) 6 (ppm) 8,45 (d, 1H) ; 6,06 (d, 1H) ; 4,07-3,69 (m, 6H) ; 3,54-
3,35 (m, 3H) ; 0,99 (s, 3H) ; 0,90 (d, 3H) ; 0,86 (dd, 6H) ; 0,66 (s, 3H)
5 Etape ii : préparation de la 3-[méthyl-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-
yl)amino]-4-nor-
3, 5-secocholestan-5-one
110 mg (0,18 mmol) de 5,5-(éthylènedioxy)-3-[méthyl-(7-nitro-2,1,3-
benzoxadiazol-4-yl)amino]-4-nor-3,5-secocholestane sont ajoutés dans 4 mL
d'une
solution HCI 4N dans le dioxane à 0 C. Le milieu est alors agité 1 nuit à
température
10 ambiante puis concentré sous vide. Le résidu obtenu est purifié par flash
chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane). 65 mg (rendement 63%) du
produit attendu sont obtenus.
RMN-1H (CDCI3) 6 (ppm) 8,47 (d, 1H) ; 6,13 (d, 1H) ; 4,08-3,80 (m, 2H) ; 3,60-
3,38 (m, 3H) ; 1,11 (s, 3H) ; 0,91 (d, 3H) ; 0,86 (dd, 6H) ; 0,73 (s, 3H)
15 Exemple If - synthèse de la 25-fluoro-4-nor-3, 5-secocholestan-3-ol-5-one
Etape i : préparation de la 25-fluorocholest-4-èn-3-one
Dans un ballon à 0 C sont introduits 100 mg (0,247 mmol) de 25-fluorocholest-5-
èn-3p-ol* et 15 mL d'acétone puis 160 pL de réactif de Jones sont ajoutés. Le
milieu
est agité 9 minutes à 0 C puis la réaction est stoppée par ajout d'éthanol.
Après
20 concentration sous vide à une température inférieure à 30 C, le résidu est
repris dans
10 mL d'éthanol et 100 pL d'une solution 1N d'acide chlorhydrique sont
ajoutés. Le
milieu est agité 15 minutes à 50-60 C puis concentré sous vide. Le résidu
obtenu est
repris dans l'eau et extrait à l'acétate d'éthyle ; la phase organique est
séparée, lavée
à l'eau, séchée sur sulfate de magnésium anhydre et concentrée sous vide.
Après
25 purification par flash chromatographie sur gel de silice (éther de pétrole
puis éther de
pétrole/acétate d'éthyle 95/5), 69 mg de l'énone sont obtenus avec un
rendement de
69%.
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 5,41 min, miz = 403 [M+H]+
* Le 25-fluorocholest-5-èn-3(3-ol est disponible chez Steraloids Inc (Wilton,
NH)
30 Etape ii : préparation de l'acide 25-fluoro-4-nor-5-oxo-3,5-secocholestan-3-
oïque
77 mg de 25-fluoro-4-cholestèn-3-one sont solubilisés dans 7 mL de tert-
butanol
chaud, puis 79 mg (0,57 mmol) de K2C03 sont ajoutés. Une solution de 12 mg
(0,076
mmol) de KMn04 et 191 mg (0,89 mmol) de NalO4 dans 7 mL d'eau est préparée à
60 C, puis coulée goutte-à-goutte sur le milieu réactionnel sans dépasser 40
C. Le
35 milieu réactionnel est alors agité à température ambiante pendant 1h. Après
refroidissement, l'excès d'oxydant est détruit par ajout de NaHSO3 solide. Le
milieu est
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acidifié jusqu'à pH=1 par ajout d'une solution HCI 1N, puis extrait 3 fois à
l'éther
diéthylique. Les phases organiques sont réunies, lavées par une solution de
Na2S2O3
dans l'eau, par une solution saturée de NaCI, séchées sur sulfate de magnésium
anhydre et concentrées sous vide. 92 mg de l'acide sont obtenus et engagé tel
quel
dans l'étape suivante.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 1,34 (d, 6H) ; 1,12 (s, 3H) ; 0,92 (d, 3H) ; 0,73 (s,
3H)
MS (ESI+) : m/z = 423 [M+H]+
Etape iii : préparation du 25-fluoro-4-nor-5-oxo-3, 5-secocholestan-3-oate de
méthyle
92 mg (0,218 mmol) d'acide 25-fluoro-4-nor-5-oxo-3,5-secocholestan-3-oïque
sont solubilisés dans 1 mL de méthanol et 3 mL de dichlorométhane. A 0 C, 48pL
(0,653 mmol) de chlorure de thionyle sont ajoutés et le milieu est agité 2h à
0 C. Le
milieu réactionnel est alors concentré sous vide, co-évaporé au toluène puis
au
dichlorométhane. 78 mg de l'ester (rendement 82%) sont obtenu et engagés tel
quel
dans l'étape suivante.
RMN-1H (CDCI3) b (ppm) 3,66 (s, 3H) ; 2,65-2,50 (m, 1 H) ; 2,40-2,26 (m, 1 H)
;
1,33 (d, 6H) ; 1,11 (s, 3H) ; 0,92 (d, 3H) ; 0,67 (s, 3H)
MS (ESI+) : mfz = 437 [M+H]+
Etape iv : préparation du 5, 5-(éthylènedioxy)-25-fluoro-4-nor-3, 5-
secocholestan-3-oate
de méthyle
123 mg (0,282 mmol) de 25-fluoro-4-nor-5-oxo-3,5-secocholestan-3-oate de
méthyle sont mis en solution dans 2 mL de triméthylorthoformate et 2 mL
d'éthylène
glycol. 5,4 mg (0,028 mmol) d'acide p-toluènesulfonique anhydre sont ajoutés
puis le
milieu est agité 1 nuit à température ambiante. Le milieu réactionnel est noyé
dans de
l'acétate d'éthyle, lavé par une solution à 10% de NaHCO3, puis par une
solution
saturée de NaCI, séché sur MgSO4 anhydre, filtré et concentré sous vide. Le
résidu
obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éther de
pétrole/acétate
d'éthyle 95/5). 74 mg (rendement 54%) du produit attendu sont obtenus sous
forme
d'huile jaune.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 3,98-3,87 (m, 4H) ; 3,64 (s, 3H) ; 2,65-2,50 (m, 1H) ;
2,40-2,26 (m, 1H) ; 1,34 (d, 6H) ; 0,99 (s, 3H) ; 0,91 (d, 3H) ; 0,66 (s, 3H)
Etape v : préparation du 5,5-(éthylènedioxy)-25-fluoro-4-nor-3,5-secocholestan-
3-ol
Dans un ballon sous argon, sont introduits 385 pL (0,385 mmol) d'une solution
de LiAIH4 1N dans le THF et 1 mL de THF anhydre. Une solution de 74 mg (0,154
mmol) de 5,5-(éthylènedioxy)-25-fluoro-4-nor-3,5-secocholestan-3-oate de
méthyle
dans 1 mL de THF anhydre est ajoutée goutte-à-goutte à 0 C à la solution de
LiAIH4
dans le THF. Le milieu réactionnel est agité l h à 0 C puis hydrolysé
lentement à 0 C
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par ajout d'une solution saturée de Na2SO4. Le milieu est alors repris dans de
l'acétate
d'éthyle, lavé par une solution à 10% de NaHCO3, puis par une solution saturée
de
NaCI, séché sur MgSO4 anhydre, filtré et concentré sous vide. 63 mg (rendement
90%) du produit attendu sont obtenus sous forme d'huile.
RMN-'H (CDCI3) 5 (ppm) 4,00-3,86 (m, 4H) ; 3,55 (t, 2H) ; 1,33 (d, 6H) ; 0,98
(s,
3H) ; 0,91 (d, 3H) ; 0,66 (s, 3H)
Etape vi : préparation de la 25-fluoro-4-nor-3, 5-secocholestan-3-ol-5-one
63 mg (0,139 mmol) de 5,5-(éthylènedioxy)-25-fluoro-4-nor-3,5-secocholestan-3-
ol sont placés dans un mélange THF/H20/AcOH (1 mU1 mU2 mL). Le milieu
réactionnel est agité 1 nuit à température ambiante, noyé dans de l'acétate
d'éthyle,
lavé par une solution saturée de NaHCO3, séché sur MgSO4 anhydre, filtré et
concentré sous vide. Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie
sur gel de
silice (éther de pétrole/acétate d'éthyle 98/2 puis 95/5). 17 mg (rendement
29%) du
produit attendu sont obtenus sous forme de solide.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 4,15-3,49 (m, 2H) ; 1,33 (d, 6H) ; 0,92 (d, 3H) ; 0,65
(s,
3H)
MS (ESI+) : m/z = 391 [M-H2O+H]+, 409 [M+H]+
Exemple I g - synthèse de la 4-nor-3,5-secocholestan-5-one
Etape i : préparation du 5, 5-(éthylènedioxy)-4-nor-3, 5-seco-3-
(tosyloxy)cholestane
1 g (2,3 mmol) de 5,5-(éthylènedioxy)-4-nor-3,5-secocholestan-3-ol
(W02007/101925) sont mis en solution dans 3,5 mL de chloroforme à 0 C, puis
0,39
mL de pyridine et 675 mg (3,54 mmol) de chlorure de tosyle sont ajoutés. Le
milieu
réactionnel est agité 2h à 0 C et 1 nuit à température ambiante. 7 mL d'éther
diéthylique et 2 mL d'eau sont ajoutés au milieu. La phase organique est
décantée,
lavée par une solution HCI 2N, puis par une solution à 5% de NaHCO3, séchée
sur
MgSO4 anhydre, filtrée et concentrée sous vide. 1 g du produit attendu est
obtenu
avec une pureté HPLC de 83% et engagé tel quel dans l'étape suivante.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 7,78 (d, 2H) ; 7,34 (d, 2H) ; 4,00-3,77 (m, 6H) ; 2,44
(s,
3H) ; 0,91 (s, 3H) ; 0,90 (d, 3H) ; 0,86 (dd, 6H) ; 0,64 (s, 3H)
Etape ii : préparation du 5, 5-(éthylènedioxy)-4-nor-3, 5-secocholestane
Dans un ballon sous azote, sont introduits 1 mL (1 mmol) d'une solution de
LiAIH4 IN dans le THF et 3 mL d'éther diéthylique anhydre. Une solution de 500
mg
(0,72 mmol) de 5,5-(éthylènedioxy)-4-nor-3,5-seco-3-(tosyloxy)cholestane dans
2 mL
d'éther diéthylque anhydre est ajoutée goutte-à-goutte à 0 C à la solution de
LiAIH4. Le
milieu réactionnel est agité 2h â reflux puis hydrolysé lentement à 0 C par
ajout d'une
solution saturée de Na2SO4. Le milieu est alors repris dans de l'eau et
extrait 3 fois à
CA 02745503 2011-06-02
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l'éther diéthylique. Les phases organiques sont réunies, lavées par une
solution
saturée de NaCI, séchées sur MgSO4 anhydre, filtrées et concentrées sous vide.
Le
résidu obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (éther
de pétrole
100% puis éther de pétrole/acétate d'éthyle 98/2, puis 95/5). 258 mg du
produit
attendu sont obtenus avec une pureté HPLC de 85% et engagés tel quel dans
l'étape
suivante.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 3,98-3,85 (m, 4H) ; 1,96 (d, 1H) ; 1,88-1,74 (m, 1H) ;
0,95 (s, 3H) ; 0,89 (d, 3H) ; 0,86 (dd, 6H) ; 0,81 (t, 3H) ; 0,66 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 419 [M+H]+
Etape iii : préparation de la 4-nor-3, 5-secocholestan-5-one
250 mg (0,506 mmol) de 5,5-(éthylènedioxy)-4-nor-3,5-secocholestane sont
placés dans un mélange THF/H20/AcOH (2 mL/2 mL/5 mL). Le milieu réactionnel
est
agité 1 nuit à température ambiante, noyé dans de l'acétate d'éthyle, lavé par
une
solution à 10% de NaHCO3, séché sur MgSO4 anhydre, filtré et concentré sous
vide.
Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice
(éther de
pétrole/éther diéthylique 99/1). 89 mg (rendement 41%) du produit attendu sont
obtenus.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 2,51 (td, 1H) ; 2,25 (ddd, 1H) ; 1,05 (s, 3H) ; 0,91
(d,
3H) ; 0,86 (dd, 6H) ; 0,72 (s, 3H)
Exemple l h : synthèse de la 4-nor-3, 5-secocholest-6-èn-5-one et de la 7-
hydroxyamino-4-nor-3, 5-secocholestan-5-one oxime
Etape i : préparation de la 6-bromo-4-nor-3, 5-secocholestan-3-ol-5-one
5,2 g (17,3 mmol) de 4-nor-3,5-secocholestan-3-ol-5-one (W020071101925) sont
mis en solution dans 91 mL de dioxane et 10 mL d'eau. 5,45 g (30,6 mmol) de N-
bromosuccinimide sont ajoutés et le milieu réactionnel est agité 10h à 50 C
puis 1 nuit
à 30 C. La solution est concentrée sous vide, le résidu est repris dans l'eau
et extrait 3
fois au dichlorométhane. Les phases organiques sont réunies, lavées par une
solution
saturée de NaCI, séchées sur MgSO4 anhydre, filtrées et concentrées sous vide.
Le
résidu obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice
(gradient éther de
pétrole/acétate d'éthyle 10/0 à 9/1). 4,88 g (rendement 78%) du produit
attendu sont
obtenus.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 4,49-4,37 (m, 1H) ; 4,15-3,91 (m, 1H) ; 3,79-3,68 (m,
1H) ; 0,95 (s, 3H) ; 0,90 (d, 3H) ; 0,86 (dd, 6H) ; 0,64 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 451/453 [M-H2O+H]+
35' Etape ii : préparation de la 4-nor-3, 5-secocholest-6-èn-3-ol-5-one
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4,88 g (10,4 mmol) de 6-bromo-4-nor-3,5-secocholestan-3-ol-5-one sont mis en
solution dans 53 mL de N,N-diméthylformamide anhydre, puis 5,73 g de bromure
de
lithium et 5,73 g de carbonate de lithium sont ajoutés. Le milieu réactionnel
est agité
6h30 à 100 C puis 1 nuit à 30 C. Après refroidissement, le milieu est noyé
dans l'éther
diéthylique, le précipité est filtré. Le filtrat est lavé 2 fois avec une
solution HCI 0,1 puis
2 fois à l'eau. La phase organique est séparée, séchée sur MgSO4 anhydre,
filtrée et
concentrée sous vide. Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie
sur gel
de silice (gradient dichlorométhanelacétate d'éthyle 10/0 à 8/2). 1,5 g
(rendement
37%) du produit attendu sont obtenus.
RMN-1H (CDCI3) 6 (ppm) 6,81 (dd, 1H) ; 5,92 (dd, 1H) ; 3,68-3,42 (m, 2H) ;
1,00
(s, 3H) ; 0,92 (d, 3H) ; 0,87 (dd, 6H) ; 0,76 (s, 3H)
Exemple l i - synthèse de la 3, 4-dinor-2, 5-secocholestan-2-o1--5-one
Etape i : préparation du 3, 4-dinor-5-méthoxy-2, 5-secocholest-5-èn-2-oate de
méthyle
500 mg (1,28 mmol) d'acide 3,4-dinor-5-oxo-2,5-secocholestan-2-oïque* et 12
mg d'APTS sont placés dans 7 mL de méthanol. Le milieu réactionnel est alors
chauffé
2h à reflux, puis 423 pL de triméthylorthoformate sont ajoutés. La chauffe est
poursuivie pendant 2h30 et 423 pL de triméthylorthoformate sont rajoutés et le
milieu
est chauffé à reflux 3h supplémentaires. Après refroidissement, du carbonate
de
potassium en poudre est ajouté au milieu, puis ce dernier est concentré sous
vide. Le
résidu est repris dans de l'eau et extrait 2 fois à l'acétate d'éthyle. Les
phases
organiques sont réunies, lavées par une solution saturée de NaCI, séchées sur
MgSO4
anhydre, filtrées et concentrées sous vide. Le résidu obtenu est purifié par
flash
chromatographie sur gel de silice (éther de pétrole 100% puis éther de
pétrole/acétate
d'éthyle 95/5). 331 mg (rendement 62%) du produit attendu sont obtenus.
;
RMN-'H (CDCI3) 6 (ppm) 3,58 (s, 3H) ; 3,45 (s, 3H) ; 2,74 (d, 1H) ; 2,31 (d,
1H)
1,06 (s, 3H) ; 0,90 (d, 3H) ; 0,85 (dd, 6H) ; 0,66 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 405 [M-CH2+H]+
* L'acide 3,4-dinor-5-oxo-2,5-secocholestan-2-oïque est décrit dans les
articles
suivants :
- Arencibia, M. T. et al. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, (1991), 12, 3349-60
- Conca, R. J. et al. J. Org. Chem, (1953), 18, 1104-111.
Etape ii - préparation du 3, 4-dinor-5-méthoxy-2, 5-secocholest-5-èn-2-ol
Dans un ballon sous argon, sont introduits 1,95 mL (1,95 mmol) d'une solution
de LiAIH4 IN dans le THF. Une solution de 327 mg (0,781 mmol) de 3,4-dinor-5-
méthoxy-2,5-secocholest-5-èn-2-oate de méthyle dans 4 mL de THF anhydre est
ajoutée goutte-à-goutte à 0 C à la solution de LiAIH4. Le milieu réactionnel
est agité 30
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minutes à 0 C puis hydrolysé lentement à 0 C par ajout d'une solution saturée
de
Na2SO4. Le milieu est alors extrait 3 fois à l'acétate d'éthyle, les phases
organiques
sont réunies, lavées par une solution saturée de NaCI, séchées sur MgSO4
anhydre,
filtrées et concentrées sous vide. 310 mg du produit attendu sont obtenus et
engagés
5 tel quel dans l'étape suivante.
MS (ESI+) : mlz = 359 [M-OCH3]+
Etape iii : préparation de la 3, 4-dinor-2, 5-secocholestan-2-ol-5-one
305 mg (0,78 mmol) de 3,4-dinor-5-méthoxy-2,5-secocholest-5-èn-2-ol sont
placés dans un mélange THF/H20/AcOH (2 mU2 mU6 mL). Le milieu réactionnel est
10 agité 1 nuit à température ambiante, noyé de l'acétate d'éthyle et extrait
3 fois à
l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont réunies, lavées par une
solution à 10%
de NaHCO3, puis par une solution saturée de NaCI dans l'eau, séchées sur MgSO4
anhydre, filtrées et concentrées sous vide. Le résidu obtenu est purifié par
flash
chromatographie sur gel de silice (éther de pétrole/acétate d'éthyle 95/5).
245 mg
15 (rendement 83%) du produit attendu sont obtenus sous forme d'une huile
incolore.
RMN-'H (CDCI3) 3 (ppm) 4,01-3,78 (m, 2H) ; 1,02 (s, 3H) ; 0,90 (d, 3H) ; 0,86
(dd, 6H) ; 0,68 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 359 [M-H2O+H]+
Exemple 2 - Synthèse de composés de formule (I)
20 Méthode générale A:
Dans un ballon, sont introduits 1 équivalent de cétone et 6 équivalents de
chlorhydrate d'hydroxylamine dans de la pyridine (environ 10 à 20 mUmmol). La
solution est agitée une nuit à température ambiante puis le milieu réactionnel
est
concentré sous vide. Le résidu obtenu est repris dans l'eau et extrait au
25 dichlorométhane ou à l'acétate d'éthyle ; la phase organique est séparée,
lavée à
l'eau, séchée sur MgSO4 anhydre et concentrée sous vide. Si nécessaire le
produit est
purifié par chromatographie flash sur gel de silice.
= Composé 1 : 3,3-difluoro-4,5-secocholestan-5-one oxime
L'oxime 3,3-difluoro-4,5-secocholestan-5-one est obtenue à partir de la 3,3-
30 difluoro-4,5-secocholestan-5-one (produit de l'exemple 1 a-étape ii) avec
un rendement
de 87% selon la méthode A.
RMN-'H (CDCI3) 8 (ppm) 2,56 (td, 1H) ; 2,23 (dd, 1H) ; 1,09 (s, 3H) ; 0,90 (d,
3H) ; 0,85 (dd, 6H) ; 0,71 (s, 3H)
RMN-19F (CDCI3) : S (ppm, non calibré) -86,14 (q)
35 MS (ESI+) : m/z = 405 [M-H2O+H]+, 447 [M+Na]+
= Composé 2 : 4-nor-3,5-secocholestan-3,25-diol-5-one oxime
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L'oxime de la 4-nor-3,5-secocholestan-3,25-diol-5-one est obtenue à partir de
la
4-nor-3,5-secocholestan-3,25-diol-5-one (produit de l'exemple lb-étape ii)
avec un
rendement de 63% selon la méthode A.
RMN-'H (CDCI3) 8 (ppm) 3,76-3,52 (m, 2H) ; 2,43-3,27 (dd, 1 H) ; 1,21 (s, 6H)
;
1,07 (s, 3H) ; 0,92 (d, 3H) ; 0,70 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 422 [M+H]+
= Composé 3: 4-nor-3,5-seco-3-(trifluorométhyl)cholestan-3-oi-5-one oxime
L'oxime de la 4-nor-3,5-seco-3-(trifluorométhyl)cholestan-3-oi-5-one est
obtenue
à partir de 4-nor-3,5-seco-3-(trifluorométhyl)cholestan-3-ol-5-one (produit de
l'exemple
1 c-étape ii) avec un rendement de 91 % selon la méthode A.
RMN-'H (CDCI3) 8 (ppm) 4,05-3,80 (m, 1H) ; 3,36 (dd, 1H) ; 1,10 (s, 3H) ; 0,91
(d, 3H) ; 0,87 (dd, 6H) ; 0,70 (s, 3H)
RMN-19F (CDCI3) : 8 (ppm) -79,59 (d) ; -80,96 (d)
MS (ESI+) : m/z = 474 [M+H]+
= Composé 4: 3-[(N-(+)-biotinoyl-N-méthyl)amino]-4-nor-3,5-secocholestan-5-
one oxime
L'oxime de la 3-[(N-(+)-biotinoyl-N-méthyl)amino]-4-nor-3,5-secocholestan-5-
one
est obtenu à partir de la 3-[(N-(+)-biotinoyl-N-méthyl)amino]-4-nor-3,5-
secocholestan-
5-one (produit de l'exemple 1d-étape ii) avec un rendement de 25% selon la
méthode
A.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 4,60-4,47 (m, 1H) ; 4,40-4,28 (m, 1H) ; 3,49-3,25 (m,
2H) ;
3,23-3,10 (m, 1H) ; 2,90 (s, 3H) ; 2,73 (d, 1H) ; 2,51-2,21 (m, 2H) ; 1,06 (s,
3H) ; 0,91
(d, 3H) ; 0,86 (dd, 6H) ; 0,70 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 645 [M+H]+
= Composé 5 : 3-[méthyl-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]-4-nor-3,5-
secocholestan-5-one oxime
L'oxime de la 3-[méthyl-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]-4-nor-3,5-
secocholestan-5-one est obtenu à partir de 3-[méthyl-(7-nitro-2,1,3-
benzoxadiazol-4-
yl)amino]-4-nor-3,5-secocholestan-5-one (produit de l'exemple le-étape ii)
avec un
rendement de 87% selon la méthode A.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 8,37 (d, 1H) ; 6,09 (d, 1H) ; 4,09-3,79 (m, 2H) ; 3,65-
3,39 (m,
3H) ; 3,31 (dd, 1H) ; 1,09 (s, 3H) ; 0,90 (d, 3H) ; 0,85 (dd, 6H) ; 0,70 (s,
3H).
MS (ESI+) : m/z = 582 [M+H]+
= Composé 6: 25-fluoro-4-nor-3,5-secocholestan-3-ol-5-one oxime
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L'oxime 25-fluoro-4-nor-3,5-secocholestan-3-ol-5-one est obtenue à partir de
la
25-fluoro-4-nor-3,5-secocholestan-3-ol-5-one (produit de l'exemple 1f-étape
vi) avec
un rendement de 34% selon la méthode A.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 3,75-3,53 (m, 2H) ; 3,36 (dd, 1H) ; 1,33 (d, 6H) ; 1,07
(s, 3H) ; 0,92 (d, 3H) ; 0,70 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 424 [M+H]+
= Composé 7: 4-nor-3,5-secocholestan-5-one oxime
L'oxime 4-nor-3,5-secocholestan-5-one est obtenue à partir de la 4-nor-3,5-
secocholestan-5-one (produit de l'exemple 1g-étape iii) avec un rendement de
20%
selon la méthode A.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 3,40-3,26 (m, 1H) ; 2,00 (d, 1H) ; 1,04 (s, 3H) ; 0,91
(d,
3H) ; 0,86 (dd, 6H) ; 0,69 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 390 [M +H]+
= Composé 8: 4-nor-3,5-secocholest-6-èn-3-ol-5-one oxime, et
= Composé 9: 7-hydroxyamino-4-nor-3,5-secocholest-6-an-3-ol-5-one oxime
195 mg (0,502 mmol) de 4-nor-3,5-secocholest-6-èn-3-ol-5-one (produit de
l'exemple l h--étape ii) et 200 mg de chlorhydrate d'hydroxylamine sont
ajoutés dans 2
mL de pyridine. La solution est agitée 1 nuit à température ambiante, puis 200
mg de
chlorhydrate d'hydroxylamine et 2 mL de pyridine sont rajoutés. Le milieu
réactionnel
est agité 1 nuit supplémentaire à température ambiante, puis il est concentré
sous
vide.
Le résidu est repris dans de l'eau et extrait 3 fois à l'acétate d'éthyle. Les
phases
organiques sont réunies, lavées par une solution saturée de NaCI, séchées sur
MgSO4
anhydre, filtrées et concentrées sous vide.
Le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice
(dichlorométhane 100% puis dichlorométhane/acétate d'éthyle 8/2) pour obtenir
65 mg
de l'oxime 4-nor-3,5-secocholest-6-èn-3-ol-5-one (composé 8).
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 6,79 (dd, 1 H) ; 6,22 (d, 1 H) ; 3,67-3,52 (m, 2H) ;
1,03
(s, 3H) ; 0,93 (d, 3H) ; 0,88 (dd, 6H) ; 0,75 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 404 [M+H]+
L'élution est poursuivie avec un éluant dichlorométhane/méthanol 95/5 pour
obtenir 71 mg de 7-hydroxyamino-4-nor-3,5-secocholest-6-an-3-ol-5-one oxime
(composé 9).
RMN-'H (CDCl3) 3 (ppm) 3,82 (dd, 1 H) ; 3,74-3,50 (m, 2H) ; 3,28-3,19 (m, 1 H)
;
1,10 (s, 3H) ; 0,87 (dd, 6H) ; 0,70 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 437 [M+H]+
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= Composé 10: préparation de la 3,4-dinor-2,5-secocholestan-2-ol-5-one oxime
L'oxime de la 3,4-dinor-2,5-secocholestan-2-ol-5-one est obtenue à partir de
la
3,4-dinor-2,5-secocholestan-2-ol-5-one (produit de l'exemple 1i-étape iii)
avec un
rendement de 81 % selon la méthode A.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 3,85-3,54 (m, 2H) ; 3,37 (dd, 1H) ; 1,09 (s, 3H) ; 0,86
(dd, 6H) ; 0,68 (s, 3H)
MS (ESI+) : mlz = 392 [M+H]+
= Composé 11 : préparation de la 4-nor-3,5-secocholest-24-èn-3-ol-5-one
oxime
L'oxime 4-nor-3,5-secocholest-24-èn-3-ol-5-one oxime est obtenue à partir de
la
4-nor-3,5-secocholest-24-èn-3-ol-5one avec un rendement de 74% selon la
méthode
A. La préparation de la 4-nor-3,5-secocholest-24-èn-3-ol-5-one est décrite
dans la
demande internationale W02008/056059.
RMN-'H (CDCI3) S (ppm) 5,09 (t, 1H) ; 3,77-3,55 (m, 2H) ; 3,36 (dd, 1H) ; 1,68
(s,
3H) ; 1,60 (s, 3H) ; 1,08 (s, 3H) ; 0,92 (d, 3H) ; 0,70 (s, 3H)
MS (ESI+) : m/z = 404 [M+H]+
= Composé 12 : préparation de la 243-éthyl-4-nor-3,5-secocholest-22-èn-3-ol-5-
one oxime
L'oxime 243-éthyl-4-nor-3,5-secocholest-22-èn-3-ol-5-one oxime est obtenue à
partir de la 4-nor-3,5-secocholest-24-èn-3-ol-5one avec un rendement de 88%
selon la
méthode A. La préparation de la 24p-éthyl-4-nor-3,5-secocholest-22-èn-3-ol-5-
one est
décrite dans le brevet W02008/056059.
MS (ESI+) : m/z = 432 [M+H]+
ETUDE PHARMACOLOGIQUE
Les composés ont été testés selon les protocoles suivants :
Effets des composés de formules (I) sur la survie des motoneurones
Pour mettre en évidence l'action neuroprotectrice des composés de formules
(I),
la demanderesse a étudié leur activité sur un modèle in vitro de privation
trophique de
motoneurones de rats. On pourra se référer utilement à la demande de brevet WO
0142784 de la demanderesse sur la mise en culture des motoneurones de moelle
épinière.
La moelle épinière d'embryons E14 de rat est disséquée et la partie ventrale
est
dissociée par trituration après trypsination.
Les motoneurones sont séparés des autres cellules spinales par une méthode
connue (Camu et col, 1993, Purification of spinal motoneurons from chicken and
rat
embryos by immunopanning. In "Immunoselection Strategies for Neural cell
culture",
CA 02745503 2011-06-02
WO 2010/076418 PCT/FR2009/001434
44
Neuroprotocols : A companion to Methods in Neurosciences 2, 191-199 ;
Henderson et
col., 1993, Neutrophins promote motor neuron survival and are present in
embryonic
Iimb bud. Nature 363 (6426) :266-70).
Les cellules sont centrifugées sur un gradient de densité. Les motoneurones
sont enrichis dans la fraction des grandes cellules (les moins denses). Les
cellules de
cette fraction sont incubées avec un anticorps anti-p75, un antigène de
surface
présent sur les motoneurones.
Des anticorps secondaires couplés à des billes magnétiques sont ajoutés et le
mélange de cellules est passé à travers une colonne'dans un aimant (Arce et
ai, 1999
Cardiotrophin-1 requires LIFRbeta to promote survival of mouse motoneurons
purified
by a novel technique. J. Neurosci Res 55(l): 119-26). Seuls les motoneurones
sont
retenus : leur pureté est de l'ordre de 90%.
Les motoneurones sont ensemencés à faible densité dans des puits de culture
sur un substrat de polyornithine-Iaminine dans un milieu neurobasal (GIBCO)
supplémenté selon Raoul et col, 1999, Programmed cell death of embryonic
motoneurons triggered through the Fas death receptor. J Cell Biol 147(5) :1049-
62.
Des contrôles négatifs (absence de facteurs trophiques) et positifs (en
présence
de BDNF (Brain-Derived Neurotrophic Factor) à 1 ng/mI, GDNF (Glial-Derived
Neurotrophic Factor) à 1 ng/ml et CNTF (Ciliary Neurotrophic Factor) à 10
ng/mI,
commercialisés par la société américaine PEPROTECH, Inc. et la société Sigma-
Aldrich, sont inclus dans chaque série.
Les composés à tester sont ajoutés 60 minutes après l'ensemencement et les
cultures sont maintenues à 37 C sous 5% de C02 pendant 3 jours.
Les motoneurones ont une tendance spontanée à mourir en l'absence de
facteurs neurotrophiques (Pettmann et Henderson, 1998, Neuronal cell death.
Neuron
20(4):633-47). Après 3 jours, la survie est évaluée par une mesure de
fluorescence
après incubation des cellules en présence de calcéine qui devient fluorescente
dans
les cellules vivantes.
Après 3 jours en culture à 37 C, sous 5% de C02 et en humidité saturante,
jusqu'à 50% des motoneurones ensemencés initialement survivent dans le milieu
supplémenté en facteurs neurotrophiques, alors que moins de 15% des
motoneurones
survivent en milieu de culture non additionné de facteurs neurotrophiques.
L'activité neuroprotectrice des composés à tester a été évaluée par leur
capacité
à empêcher la mort des motoneurones quand ils sont ajoutés au milieu
Neurobasal
(GIBCO) en comparaison avec la survie des motoneurones en milieu additionné de
facteurs neurotrophiques.
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Les composés de formule I selon l'invention ont montré une activité
neuroprotectrice à une concentration capable de permettre un meilleur taux de
survie
des motoneurones dans le milieu Neurobasal.
Ce taux de survie est exprimé par le nombre de cellules vivantes après
5 traitement avec le composé à tester par rapport à la survie induite par les
facteurs
neurotrophiques. Ce rapport peut donc représenter le pourcentage de survie due
au
composé testé par rapport à la survie induite par les facteurs
neurotrophiques. Si le
rapport est supérieur à 0, l'effet des composés est positif sur la survie des
motoneurones.
10 Les résultats obtenus sont les suivants :
Composé N Concentration en M Ratio
2 3 >0,2
3 1 >0,2
4 0,3 >0,2
5 1 >0,2
6 3 >0,2
7 1 >0,2
9 1 >0,2
8 1 >0,2
10 1 >0,2
11 1 >0.2
12 1 >0.2
De par leur effet trophique sur les motoneurones spinaux, les composés de
formule (I) selon l'invention se montrent donc potentiellement utiles comme
médicament, notamment dans le traitement des amyotrophies, en particulier dans
le
15 traitement de la sclérose latérale amyotrophique ou des amyotrophies
spinales
infantiles, et dans le traitement des traumatismes de la moelle épinière.
