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NOUVEAUX DERIVES DE MANNOPYRANOSIDE AYANT UNE ACTIVITE
ANTICANCEREUSE
La présente invention est relative à des composés dérivés de mannopyranoside,
à un
procédé de synthèse par chimie verte de tels composés, et à leur utilisation à
titre de
médicaments, notamment pour le traitement de maladies cancéreuses, ainsi qu'à
des
compositions pharmaceutiques comprenant de tels composés. Font également
partis de
l'invention des dispositifs médicaux implantables traités en surface par des
composés dérivés de
mannopyranoside selon l'invention.
De nombreuses pathologies ont été décrites dans l'état de l'art comme ayant
une
composante ou un stade lié au phénomène d'angiogénèse. On peut citer entre
autres de très
nombreux cancers, les rétinopathies liées au diabète, l'athérosclérose,
l'arthrose, la polyarthrite
rhumatoïde, le psoriasis, ainsi que les pathologies inflammatoires ou celles
liées à une
cicatrisation retardée.
L'angiogenèse est un mécanisme de néovascularisation prenant naissance à
partir d'un
réseau capillaire préexistant. Le bourgeonnement de petits vaisseaux, les
capillaires, à partir de
ceux préexistants, intervient pour le meilleur lors du développement
embryonnaire et
l'implantation du placenta, lorsqu'il s'agit de cicatriser une blessure, ou de
pallier l'obstruction
d'un vaisseau ; mais également pour le pire dans les cancers (croissance des
tumeurs et
développement des métastases), l'arthrite rhumatoïde, certaines maladies
ophtalmologiques
comme la rétinopathie diabétique ou la dégénérescence maculaire liée à l'âge.
Pour l'ensemble de
ces processus, le schéma général reste le même. L'activation des cellules
endothéliales conduit à
la dégradation de la membrane basale et de la matrice extracellulaire
environnante. La migration
orientée est suivie d'une phase proliférative. Les cellules se différencient
ensuite en une structure
de type capillaire pour former un réseau vasculaire nécessaire au
développement des tissus.
Toutefois, l'angiogenèse n'est pas contrôlée par un seul facteur, mais par une
balance d'inducteurs
et d'inhibiteurs produits par les cellules normales ou tumorales. Parmi ces
facteurs, des
polypeptides comme le facteur de croissance des fibroblastes-2 ("Fibroblast
Growth Factor-2" :
FGF-2) et le "facteur de croissance de l'endothélium vasculaire ("Vascular
Endothelial Growth
Factor" : VEGF) sont apparus comme étant des régulateurs clés de
l'angiogenèse.
De nombreuses molécules ont été étudiées pour leur effet inhibiteur ou
activateur de
l'angiogénèse.
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En ce qui concerne l'inhibition de l'angiogénèse, une révolution conceptuelle
récente dans
le traitement du cancer consiste à cibler le réseau vasculaire qui irrigue une
tumeur. Il est
maintenant bien établi que le développement d'une vascularisation intra ou
péritumorale est un
événement clé autant pour la croissance d'une tumeur que pour la dissémination
métastatique par
la voie sanguine. En décembre 2005, la revue scientifique anglaise Nature, qui
consacrait son
numéro à l'angiogénèse, dénombrait plus de 300 inhibiteurs, dont 80 en cours
d'essais cliniques.
Mais les premiers médicaments testés - angiostatine, endostatine, interférons,
inhibiteurs de
matrice métalloprotéinases, etc. - furent décevants. Parmi des molécules plus
récentes, on peut
citer le bevacizumab. Injecté au patient, il neutralise un type de VEGF
circulant dans les
capillaires ou diffus dans la tumeur, le VEGF-A. Sa première indication fut en
2004 pour le
cancer colorectal métastatique, en association avec une chimiothérapie. Il est
aujourd'hui en
essais cliniques contre les cancers du rein métastatiques, du poumon et du
sein. Le VEGF-A
présente néanmoins l'inconvénient d'accroître le risque d'hypertension et
d'hémorragie. On peut
également citer le sunitinib et le sorafenib qui présentent l'avantage de
pouvoir autoriser une
formulation sous forme de comprimés à absorber par voie orale et qui
conduisent à des résultats
thérapeutiques encourageants. Ils présentent également l'inconvénient
d'engendrer quelques effets
secondaires comme l'hypertension, la fatigue ou des problèmes de peau.
De plus, les molécules actuellement utilisées pour leurs propriétés
inhibitrices de
l'angiogénèse présentent des toxicités élevées souvent rédhibitoires pour la
poursuite des
traitements, cette toxicité limitant la durée et l'efficacité des médications
actuelles.
Il existe donc un besoin constant et extrêmement important en composés
inhibiteurs de
l'angiogénèse ayant une très faible toxicité et une meilleure affinité avec
les récepteurs, dans le
but de proposer de nouveaux traitements anticancéreux présentant une
excellente activité anti-
tumorale.
C'est donc afin de remédier à l'ensemble de ces inconvénients et de pourvoir à
des
composés ayant une activité d'inhibition de l'angiogénèse de très faible
toxicité alliée à une
excellente activité, ces composés pouvant notamment être utilisés pour la
préparation de
médicaments anticancéreux, que les inventeurs ont mis au point ce qui fait
l'objet de la présente
invention.
Les inventeurs ont en effet découvert que certains dérivés de mannopyranoside
présentent
une excellente activité anticancéreuse et une très faible toxicité, ces
composés pouvant être
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utilisés pour la préparation de compositions pharmaceutiques destinées au
traitement de
pathologies cancéreuses.
La présente invention a donc pour objet un composé dérivé de mannopyranoside
ou ses
sels pharmaceutiquement acceptables, répondant à l'une des formules suivantes
> Formule (1)
B
B B
B
B A
B
B
g
dans laquelle :
^ A est une nanoparticule de silice ou une nanoparticule métallique choisie
parmi les
éléments des colonnes (IB), (IIB), (IIIB), (IVB), (VB), (VIB), (VIIB) ou
(VIIIB) de
la classification de Mendeleïev, et
^ B est un groupement porteur d'une fonction mannopyranoside, également appelé
tête polaire , répondant à la structure suivante :
R,
O
O N/N\N
HO
HO
O
O O
S-
dans lequel m est un entier compris entre 0 et 10, et de préférence m = 3, 4,
5 ou 6,
les groupements B étant liés à la nanoparticule A via l'atome de soufre, et le
nombre de
groupements B liés à la nanoparticule A étant compris entre 100 et 1000, et de
préférence
entre 400 et 600,
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- Formule (II) :
HO
HO
R,
O
HO O O
OH
HO
Y
dans laquelle Y représente l'un des groupements suivants
O/
n O O
O X ou OH
H HO
ho OR2
avec :
o n, n' et n" étant des entiers compris entre 1 et 12, et de préférence entre
1 et 6, et
o n" étant égal à 0 lorsque X représente un atome d'oxygène,
- Formule (III) :
Z
HO--~ O
OH
HO
OR2
dans laquelle Z représente l'un des groupements suivants
OH ~/ IP IP
-CH2-B ou -X-HP ou -X~ ,
X~ OH ou -X-R
OH OH OH OH
dans lesquelles :
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les radicaux R1 et R' 1, identiques ou différents, représentent un radical
sélectionné parmi -O-
P03H2, -N3, -CH2-PO3H2, -CH2-COOH, -S03H2, -OPHO2H, -CH2-B(OH)2, -X-PH02H, X'-
PO2H-X-PO3H2, et de préférence -CH2-COOH et -N3,
- le radical R2 représente une chaîne alkyle linéaire ou ramifiée en C1-C12,
et de préférence en
C1-C4 ; une chaîne alkyle linéaire ou ramifiée en C1-C12, et de préférence en
C1-C4, porteur
d'au moins un groupement -OH, -NH2, -SH, -000H, -N3, -NO2 ; un cycle
hydrocarboné,
saturé ou insaturé, en C3-C6 ; un cycle hydrocarboné en C3-C10, saturé ou
insaturé, porteur
d'au moins un groupement -OH, -NH2, -SH, -000H, -N3, -NO2, alkyle en C1-C4 ;
un
hétérocycle saturé ou insaturé comportant au moins un hétéroatome choisi parmi
les atomes
d'oxygène, d'azote ou de soufre ; un radical -(CH2-CH2-O)y-H, dans lequel y
est compris entre
1 et 12, et de préférence entre 1 et 6, et
- les groupements X et X', identiques ou différents, sont choisis parmi : N,
O, S, une chaîne
alkyle en C1-C4, les groupements X et X' étant de préférence des atomes
d'oxygène.
Parmi les chaînes alkyles en C1-C4 mentionnées pour R2, on peut en particulier
citer les
radicaux méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, tert-butyle,
isobutyle et n-hexyle, le
radical méthyle étant le plus préféré.
Parmi les cycles hydrocarbonés saturés mentionnés pour R2, on peut en
particulier citer le
cyclopropane, le cyclobutane, le cyclopentane et le cyclohexane.
Parmi les cycles hydrocarbonés insaturés et les hétérocycles saturés
mentionnés pour R2,
on peut en particulier citer les cycles phényle, oxadiazole, triazole,
oxazole, isoxazole, imidazole,
thiadiazole, pyrrole, tétrazole, furane, thiophène, pyrazole, pyrazoline,
pyrazolidine, thiazole,
isothiazole, pyridine, pyrimidine, pipéridine, pyranne, pyrazine, pyridazine,
indole, indazole,
benzoxazole, naphtalène, quinoline, quinoxaline, quinazoline, anthracène et
acridine, les cycles
phényles étant les plus préférés.
Selon un mode de réalisation avantageux, lorsque le composé de l'invention est
un
composé de formule (1), la nanoparticule A est choisie parmi les
nanoparticules d'or, de fer et de
cobalt, et plus particulièrement les nanoparticules d'or. Les nanoparticules A
peuvent avoir un
diamètre compris entre 2 et 10 nm, et de préférence entre 4 et 8 nm.
Du fait de la présence de têtes multipolaires (groupements B), les composés de
formule (1)
présentent une meilleure affinité vis-à-vis des récepteurs, et par conséquent
des propriétés anti-
angiogéniques améliorées par rapport aux composés connus de l'art antérieur.
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Selon un autre mode de réalisation avantageux, lorsque le composé de
l'invention est un
composé de formule (II) dans lequel
n
Y = H O n.. X
ho
alors n = 1, n' = 2 et n" = 0, et X représente un atome d'oxygène.
Les composés conformes à l'invention peuvent être utilisés à titre de principe
actif pour la
fabrication de médicaments, en particulier pour la prévention et/ou le
traitement de maladies
dépendantes d'une inhibition de l'angiogénèse, parmi lesquelles on peut tout
particulièrement
citer les maladies cancéreuses, la cécité diabétique, la dégénérescence
maculaire, la polyarthrite
rhumatoïde et le psoriasis.
Un autre objet de l'invention est une composition pharmaceutique comprenant, à
titre de
principe actif, au moins un composé selon l'invention tel que défini ci-
dessus, et au moins un
excipient pharmaceutiquement acceptable, ladite composition pouvant elle aussi
être utilisée pour
la prévention et/ou le traitement de maladies dépendantes d'une inhibition de
l'angiogénèse,
telles que celles mentionnées précédemment.
La forme du médicament ou de la composition pharmaceutique peut être une
solution, une
suspension, une émulsion, des comprimés, des gélules, des suppositoires, et
dépendra de la voie
d'administration choisie.
Ainsi, au sens de la présente invention, le médicament ou la composition
pharmaceutique
peut être administrée selon n'importe quelle voie appropriée, par exemple par
voir orale, locale,
systémique, intraveineuse, intramusculaire ou mucosale, ou bien en utilisant
un patch.
En fonction de la voie d'administration du médicament ou de la composition
pharmaceutique de l'invention, l'homme du métier choisira un ou plusieurs
excipients
pharmaceutiquement appropriés. On peut notamment citer, à titre d'exemples non
limitatifs
d'excipients appropriés pour une administration par voie orale : le talc, le
lactose, l'amidon et ses
dérivés, la cellulose et ses dérivés, les polyéthylèneglycols, les polymères
d'acide acrylique, la
gélatine, le stéarate de magnésium, les matières grasses animales, végétales
ou synthétiques, les
dérivés de la paraffine, les glycols, les stabilisants, les conservateurs, les
anti-oxydants, les agents
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mouillants, les anti-agglomérants, les dispersants, les émulsionnants, les
agents modifiants du
goût, les agents de pénétrations, de solubilisation, etc.
Lorsqu'elle est destinée au traitement de maladies cancéreuses, la composition
pharmaceutique peut en outre comprendre un ou plusieurs principes actifs
antitumoraux parmi
lesquels on peut citer des antimitotiques, des inducteurs de la
différenciation, des anticorps, etc.
Plus particulièrement, ces principes actifs peuvent être la doxorubicine,
l'étoposide, le
fluorouracile, le melphalan, la cyclophosphamide, la béomycine, la
vinblastine, la mitomycine, la
lomustine (CCNU), le taxotère, le taxol, le métotrexate et le cisplatinum.
Les composés de l'invention peuvent être préparés selon des procédés bien
connus de
l'homme de l'art, ces synthèses ayant déjà été décrites dans les documents
suivants :
- B. G. Davis et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 9614-9615,
- M. E. Evans et al., Carb. Res., 1977, 54,105-114,
- P. A. M. Van der Klein et al., Carb. Res., 1992, 224, 193-200,
- H. H. Baer et al., Carb. Res., 1990, 200, 377-389,
- C. Grondal, Synlett, 2003, 10, 1568-1569,
- E. A. Hauser et al., Experiments in Colloid Chemistry, McGraw Hill, 1940,
p.18,
- J. Turkevich et al., Discuss. Faraday. Soc., 1951, 11, 55-75,
- J. Kimling et al., J. Phys. Chem. B, 2006, 110, 15700-15707,
- Formation de boronates : R. Soundararajan et al., J. Org. Chem., 1990, 55,
2274-2275,
- Formation de borates :
J. Meulenhoff et al., Allg. Chem., 1925, 373,
S. D. Ross et al., J. Org. Chem., 1965, 30, 2852,
- C. J. Salomon et al., Tetrahedron Lett., 1995, 36, 6759-6760,
- Formation de pyrophosphonates : A. M. Michelson, Biochem. Acta., 1964, 91, 1-
13,
- Synthèse d'hydrogénophosphonates :
Clavel et al., Tetrahedron Letters, 2004, 45(40), 7465-7467,
Z. Ge et al., Journal of Applied Polymer Science, 2007, 104 (2), 1138-1142,
- K. Jarowicki et al., Journal of the Chemical Society-Perkin Transactions,
2001, (18),
2109-2135,
- F. Onyemauwa et al., Organic Letters, 2006, 8, 5255-5258.
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Les composés de l'invention peuvent également être préparés selon un procédé
écologique, aussi appelé procédé par chimie verte . Ce procédé présente
l'avantage de ne pas
nécessiter de solvant, ni d'étape supplémentaire de purification par
chromatographie, tout en
permettant l'obtention de rendements élevés. En effet, les procédés décrits
dans l'art antérieur
nécessitent très souvent des étapes de protection/déprotection qui sont
consommatrices de réactifs
et de solvants chers et polluants. Ainsi, les inventeurs ont mis au point un
procédé permettant de
surmonter ces inconvénients, ledit procédé comprenant au moins les étapes
suivantes :
(i) une étape d'halogénation entre un composé de formule (l'), (II') ou (III')
porteur d'au
moins une fonction alcool primaire, par réaction avec un mélange
dihalogène/phosphine ou N-
halogénosuccinimide/phosphine, lesdits composés (I'), (II') ou (III')
répondant aux formules ci-
dessus :
- Formule (I') :
B'
B' B'
B'
B A
B'
B'
B'
dans laquelle A a la même signification que précédemment, et B' est un
groupement répondant à la structure suivante
OH
O
O
HO 0--/,,
N
HO
O
O O
M S-
dans lequel m a la même signification que précédemment,
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les groupements B' étant liés à la nanoparticule A via l'atome de soufre, et
le
nombre de groupements B' liés à la nanoparticule A étant compris entre 100 et
1000, et de préférence entre 400 et 600,
- Formule (II')
HO
HO OH
OH
O
HO O O
OH
HO
Y
dans laquelle Y, n, n' et n" ont la même signification que précédemment,
- Formule (III') :
OH
~_,
HO 0
OH
HO
OR2
le radical R2 et les groupements X et X' étant tels que définis précédemment,
(ii) une étape de substitution nucléophile des composés halogénés obtenus lors
de l'étape
(i) par réaction avec un réactif nucléophile porteur d'un radical R, et/ou R'
1, ce dernier étant de
préférence un lithien, le réactif nucléophile pouvant notamment être choisi
parmi LiO-P03H2,
NaN3, LiCH2-PO3H2, LiCH2-COOH, LiSO3H2, LiOPHO2H, LiCH2-B(OH)2, LiX-PHO2H,
LiX'-
PO2H-X-P03H2, pour obtenir les composés de formule (I), (II) ou (III) de
l'invention.
Lors des étapes (i) et (ii), les réactifs sont de préférence utilisés dans des
proportions
stoechiométriques.
Selon un mode de réalisation avantageux, la phosphine utilisée lors de l'étape
(i) est
choisie parmi une trialkylphosphine dont la chaîne alkyle est en C1-C6, la
triphénylphosphine Pcp3
ou la 2,2'-bis(diphénylphosphino)-1,1'-binaphthyle, et de manière encore plus
préférée l'étape (i)
est réalisée avec un mélange 12/Pcp3, en présence d'imidazole. Les réactifs
utilisés lors de l'étape
(i) sont de préférence préalablement broyés, puis chauffés dans un bain
d'huile à une température
pouvant varier de 60 à 100 C, sous agitation, pendant une durée comprise entre
15 et 30 minutes.
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A la fin de l'étape (i), le mélange réactionnel est dissous dans un solvant
tel que le méthanol,
concentré, puis filtré sur gel de silice.
L'étape (ii) peut, quant à elle, avantageusement être réalisée en mélangeant
le composé
halogéné obtenu lors de l'étape (i) avec un réactif nucléophile porteur d'un
radical RI et/ou R'1.
Les réactifs utilisés lors de l'étape (ii) sont de préférence préalablement
broyés, puis chauffés
dans un bain d'huile à une température pouvant varier de 60 à 100 C, sous
agitation, pendant une
durée comprise entre 15 et 30 minutes. A la fin de l'étape (ii), le mélange
réactionnel est purifié,
de préférence par filtration flash sur gel de silice.
Un exemple de synthèse selon le procédé par chimie verte est schématisé à
la Figure 5
annexée, le procédé mis en oeuvre comprenant une étape d'iodisation de l'a-D-
mannopyranoside,
l'iodo-a-D-mannopyranoside obtenu étant ensuite mis à réagir en proportions
stoechiométriques
avec de l'azide de sodium (NaN3), ce dernier permettant la fonctionnalisation
du
mannopyranoside en position 6.
Enfin, un dernier objet selon l'invention concerne un dispositif médical
implantable dans
le corps humain, ledit dispositif étant traité en surface par au moins un
composé dérivé de
mannopyranoside selon l'invention. Parmi les dispositifs mentionnés ci-dessus,
on peut citer les
prothèses, et plus particulièrement les stents vasculaires, urétrals et
biliaires. Le besoin de tels
dispositifs existe car, actuellement, de nombreux dispositifs médicaux ne
permettent qu'une
implantation limitée dans le corps humain, du fait d'une angiogénèse
excessive.
Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres
dispositions qui
ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de
préparation des
composés conformes à l'invention, ainsi qu'à des exemples de mise en évidence
de l'activité anti-
tumorale des composés de l'invention par rapport à d'autres composés
représentatifs de l'état de
l'art ne faisant pas partie de l'invention, ainsi qu'aux figures 1 à 15
annexées, suivantes
- la Figure 1 représente le schéma de synthèse des composés la à 5a,
- la Figure 2 représente le schéma de synthèse des composés 6a à 9a,
- la Figure 3 représente le schéma de synthèse des composés l0a à 13a
(fonctionnalisation
du mannopyranoside en position 6 par un groupement carboxy),
- la Figure 4 représente le schéma de synthèse des composés l4a à 16a
(fonctionnalisation
du mannopyranoside en position 6 par un groupement azido),
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- la Figure 5 représente le schéma de synthèse d'un composé de formule (11)
selon
l'invention,
- la Figure 6 représente le schéma de synthèse d'un composé de formule (III)
selon
l'invention,
- la Figure 7 représente le schéma de synthèse d'un composé de formule (111)
selon
l'invention,
- la Figure 8 résume la synthèse d'un dérivé pyrophosphonate (composés lg à
6g)
répondant à la formule (111) de l'invention.
- la Figure 9 résume la synthèse d'un dérivé pyrophosphate (composés lh à 6h)
répondant à
la formule (I11) de l'invention,
- la Figure 10 représente le schéma de synthèse d'un composé répondant à la
formule (I1)
de l'invention,
- la Figure 11 représente le schéma de synthèse d'un composé répondant à la
formule (111)
de l'invention (composés li à 7i),
- les Figures 12a et 12b sont des histogrammes représentant l'effet néo-
angiogénique in
vitro de différents composés de l'invention (modèle de Nicosia),
- la Figure 13 est un histogramme montrant l'effet cytotoxique de différents
composés de
l'invention,
- la Figure 14 est un graphe représentant le taux de survie de souris en
fonction du nombre
de jours de traitement, pour différents composés de l'invention,
- la Figure 15 est un graphe représentant la croissance tumorale en fonction
du nombre de
jours de traitement, pour différents composés de l'invention, et
- la Figure 16 représente des photographies de la vascularisation d'embryons
de poulets lors
d'un test classique d'étude de l'angiogénèse in vivo réalisé sur la membrane
chorioallantoïdienne
(CAM).
Il doit être entendu toutefois que ces exemples ne sont donnés qu'à titre
purement
illustratif de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une
quelconque limitation.
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EXEMPLE 1 : PREPARATION D'UN COMPOSE DE FORMULE (I)
1) SYNTHESE DU 2-BROMOETHYL-2,3,4,6-TETRA-O-ACETYL-a-D-
MANNOPYRANOSE (Composé la)
8 g d'acétyl-2,3,4,6-tétra-O-a-D-mannopyranose (20,5 mmol, 1 éq.) dissous dans
70 mL
de dichlorométhane sont mis à réagir avec 4,34 mL de 2-bromoéthanol (61,5
mmol, 2 éq.) et 15,5
mL de BF3-Et2O (123 mmol, 5 éq.). Après 8 heures d'agitation à température
ambiante, le
mélange réactionnel est dilué dans du CH2C12, lavé avec de l'eau, une solution
saturée en
NaHCO3, puis à nouveau avec de l'eau. La phase aqueuse est ensuite séchée sur
du Na2SO4,
filtrée et évaporée. Le produit est purifié par chromatographie sur colonne de
gel de silice
(acétate d'éthyle (AcOEt)/éther de pétrole (EP) 5/5 v/v). On obtient le 2-
bromoéthyl-2,3,4,6-
tétra-O-acétyl-a-D-mannopyranoside sous forme de poudre blanche (8,5 g, 91 %).
Rf : 0,86 (AcOEt/EP 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) : m/z 477,01, 478,95 [M+Na]+.
RMN'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 2,00, 2,05, 2,11, 2,16 (4s, 12H, Hb) ;
3,52 (t,
2H, J8--j = 6,0 Hz, Hg) ; 3,93 (m, 2H, H7) ; 4,13 (m, 2H, H5 et H6a) ; 4,27
(dd, 1H, J6b-5 = 5,8 Hz,
J6b-6a = 12,6 Hz, H6b) ; 4,88 (d, 1H, J1-2 = 1,6 Hz, H,) ; 5,27 (dd, 1H, J2_1
= 2,0 Hz, J2-3 = 3,2 Hz,
H2) ; 5,29 (t, 1H, J4-5 = J4_3 = 1,6 Hz, H4) ; 5,35 (dd, 1H, J3_2 = 3,6 Hz,
J3_4 = 10,0 Hz, H3).
RMN 13C (100,62 MHz, CDCI3) 8 (ppm) : 20,67, 20,70, 20,75, 20,87 (4 Cb) ;
29,60 (C8) ;
62,41 (C6) ; 66,00 (C4) ; 68,48 (C7) ; 68,93 (C5) ; 69,02 (C3) ; 69,42 (C2) ;
97,75 (CI) ; 169,76,
169,86, 170,03, 170,62 (4 Q.
2) SYNTHESE DU 2'-AZIDOETHYL-2,3,4,6-TETRA-O-ACETYL-a-D-
MANNOPYRANOSE (Composé 2a)
5,7 g de 2-bromoéthyl-2,3,4,6-tétra-O-acétyl-a-D-mannopyranoside (composé 1)
(12,6
mmol, 1 éq.) et 1,64 g d'azide de sodium (25,16 mmol, 2 éq.) sont dissous dans
50 mL de
diméthylformamide (DMF). Après 4 heures d'agitation à une température de 65 C,
le mélange
réactionnel est dilué dans 50 mL d'AcOEt et extrait avec une solution de NaCI
saturée, puis lavé
avec de l'eau distillée pour enlever le DMF. La phase organique est ensuite
séchée sur du
Na2SO4, filtrée et concentrée pour donner un solide blanc, le 2'-azidoéthyl-
2,3,4,6-tétra-O-
acétyl-a-D-mannopyranoside (5,25 g, 96%).
Rf : 0,86 (AcOEt/EP 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 440,12 [M+Na]+.
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
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RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) :2,00,2,05, 2, 1 1 , 2,16 (4s, 12H, Hb) ;
3,47 (m,
2H, H8) ; 3,67 (m, 1H, Hia) ; 3,87 (m, 1H, H7b) ; 4,05 (ddd, 1H, J5-6a = 2,4
Hz, J5-6b = 5,2 Hz, J5-4
= 9,7 Hz, H5) ; 4,13 (dd, I H, J6a-5 = 2,6 Hz, J6a-6b = 12,2 Hz, H6a) ; 4,29
(dd, J H, J6b-5 = 5,2 Hz,
J6b-6a = 12,4 Hz, H6b) ; 4,87 (d, 1H, J1-2 = 1,6 Hz, H,) ; 5,30 (t, 1H, J4-3 =
J4-5 = 10,0 Hz, H4) ; 5,28
(dd, 1 H, J2-, = 2,0 Hz, J2_3 = 3,2 Hz, H2) ; 5,36 (dd, 1 H, J3-2 = 3,2 Hz, J3-
4 = 10,0 Hz, H3).
RMN 13C (100,62 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 20,63, 20,68, 20,71, 20,84 (4C, CO ;
50,32
(C8) ; 62,42 (C6) ; 65,96 (C4) ; 67,02 (C7) ; 68,82 (C5 et C3) ; 69,36 (C2) ;
97,71 (CI) ; 169,73,
169,78, 169,98, 170,59 (4C, Ca).
3) SYNTHESE DU 2'-AZIDOETHYL-a-D-MANNOPYRANOSE (Composé 3a)
6,8 g de 2'-azidoéthyl-2,3,4,6-tétra-O-acétyl-a-D-mannopyranoside (16,3 mmol,
1 éq.) et
880 mg de méthanolate de sodium (16,3 mmol, l éq.) sont dissous dans 60 mL de
méthanol.
Après 30 minutes d'agitation à température ambiante, la solution est
neutralisée avec des billes de
résines Amberlyst IRC-50-H+, filtrée et concentrée. L'huile obtenue est
ensuite purifiée par
chromatographie sur colonne de gel de silice avec un gradient d'élution
(CH2C12/MeOH 9/1 v/v
jusqu'à CH2CI2/MeOH 6/4 v/v) pour donner des cristaux blancs (2,44 g, 65%).
Rf : 0,4 (CH2CI2/MeOH 8/2 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 272,11 [M+Na]+; 288,02 [M+K]+; 521,19 [2M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CD3OD) 8 (ppm) : 3,41 (t, 2H, J8-7 = 5,0 Hz, C8) ; 3,60
(m, 3H,
H30H5 et H7a) ; 3,71 (m, 2H, H4 et H6a) ; 3,85 (m, 2H, H2 et H6b) ; 3,92 (m, 1
H, H7b) ; 4,81 (d, 1 H,
J1_2 = 1,2 Hz, HI).
RMN '3C (100,62 MHz, CD3OD) 8 (ppm) : 51,76 (C8) ; 62,94 (C6) ; 67,74 (C7) ;
72,08
(C2) ; 72,49 (C4) ; 68,54, 74,93 (C3 et C5) ; 101,82 (C,).
4) SYNTHESE DU 2'-AZIDOETHYL-2,3-O-ISOPROPYLIDENE-a-D-
MANNOPYRANOSE (Composé 4a)
Formation du di-O-isopropylidène :
9,5 g de 2'-azidoéthyl-a-D-mannopyranose (composé 3a) (38,10 mmol, 1 éq.) sont
mis en
.suspension dans 40 mL d'acétone, 23,5 mL de 2,2-diméthoxypropane (190 mmol, 5
éq.) sont
ensuite ajoutés, puis 362 mg d'acide paratoluènesulfonique (APTS) (1,9 mmol,
0,05 éq.) sont
également ajoutés. Le mélange est laissé sous agitation magnétique à
température ambiante
pendant 4 heures. La réaction est suivie par CCM (AcOEt/éther de pétrole 6/4)
qui indique alors
qu'il ne reste plus de produit de départ (Rf = 0), quelques traces de
monoisopropylidène (Rf =
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0,5) sont observés, le produit majoritairement présent étant le
diisopropylidène (Rf = 0,8).
L'APTS est ensuite neutralisé par une solution de NaHCO3 à 5%, et la solution
est ensuite
concentrée pour enlever toute trace d'acétone. Le di-O-isopropylidène obtenu
est extrait à l'éther
de pétrole,,puis séché sur du Na2SO4, filtré et concentré. Le produit obtenu
sous forme d'une
huile jaune est assez pur pour être remis directement en réaction. La phase
aqueuse contenant le
mono-isopropylidène est ensuite lyophilisée.
Ouverture sélective
7,5 g de 2'-azidoéthyl-2,3,4,6-di-O-isopropylidène-a-D-mannopyranose (22,9
mmol, 1
éq.) sont dissous dans 60 mL d'un mélange acide acétique/eau 80/20 v/v. Après
2 heures
d'agitation à une température de 35 C, le produit de départ (2-azidoéthyl-a-D-
mannopyranose)
réapparait. Les solvants sont alors évaporés puis co-évaporés avec du toluène.
L'huile
transparente obtenue est purifiée par chromatographie sur colonne de gel de
silice (AcOEt/EP 6/4
v/v) pour donner une huile légèrement jaune (5,65 g, 85%).
Caractérisation du diisopropylidène :
Rf : 0,63 (AcOEt/EP 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 352,20 [M+Na]+; 368,02 [M+K]+.
RMN 'H (400,13 MHz, acétone-d6) 8 (ppm) : 1,31, 1,32 (2s, 6H, Hb et Hd) ;
1,47, 1,48
(2s, 6H, H, et He) ; 3,50 (t, 2H, J = 4,8 Hz, H8) ; 3,53 (m, 1 H, H5) ; 3,72
(m, 3H, H6a, H4 et Hia) ,
3,82 (dd, 1 H, J6b-5 = 5,8 Hz, J6b-6a = 10,6 Hz, H6b) ; 3,93 (qt, 1 H, J = 5,2
Hz, H7b) ; 4,03 (dd, 1 H,
J3-2 = 5,6 Hz, J3_4 = 8,0 Hz, H3) ; 4,18 (d, 1 H, J2-3 = J2-1 = 5,6 Hz, H2) ;
5,09 (s, 1 H, H 1).
RMN 13C (100,62 MHz, acétone-d6) 8 (ppm) : 20,11, 29,38 (Cb et Cd) ; 27,45,
30,50 (Ce
et Ce) ; 52,18 (C8) ; 63,48, 63,53 (C5 et C6) ; 68,17 (C7) ; 74,47 (C4) ;
76,78 (C3) ; 77,83 (C2)
99,68 (CI) ; 109,76 (Ca).
Caractérisation du monoisopropylidène :
Rf : 0,26 (AcOEt/EP 6/4 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 312,12 [M+Na]+; 328,15 [M+K]+,
(ESI-/MeOH) m/z : 324,12 [M+Cl]-.
RMN 'H (400,13 MHz, acétone-d6 + D20) S (ppm) : 1,27, 1,41 (2s, 6H, Hb et H )
; 3,45
(t, 2H, J = 5,0 Hz, H8) ; 3,52 (m, 2H, H4 et H5) ; 3,62 (dd, 1 H, J6a-5 =
5,2Hz, J6a-6b = 1 1,6Hz, H6a) ;
3,67 (m, 1 H, H7a) ; 3,80 (m, 1 H, H6b) ; 3,93 (m, 1 H, H7b) ; 4,02 (m, 1 H,
H3) ; 4,09 (d, 1 H, J2-3 =
J2-i = 5,6 Hz, H2) ; 5,03 (s, 1H, Hl).
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RMN 13C (100,62 MHz, acétone-d6 + D20) 8 (ppm) : 2,34, 29,11 (Cb et Q) ; 51,95
(C8) ; 62,97
(C6) ; 67,74 (C7) ; 70,41, 72,62 (C4 et C5) ; 77,30 (C2) ; 80,42 (C3) ; 98,60
(CI) ; 110,60 (Ca).
5) SYNTHESE DU 2'-AZIDOETHYL-2,3-O-ISOPROPYLIDENE-4,6-0-
(CYCLOSULFATE)-a-D-MANNOPYRANOSE (Composé 5a)
Formation du sulfite :
100 mg de 2'-azidoéthyl-2,3-O-isopropylidène-a-D-mannopyranose (composé 4a)
(0,345
mmol, 1 éq.) et 169 L de triéthylamine (0,001 mmol, 3 éq.) sont dissous dans
2 mL de CH2CI2.
Le ballon est placé dans un bain de glace et 27 L de chlorure de thionyle
(0,38 mmol, 1,1 éq.)
sont ajoutés lentement. Un précipité blanc de chlorure de triéthylammonium
apparaît rapidement
et le mélange réactionnel devient progressivement jaune, puis marron. Après 5
minutes
d'agitation à une température de 0 C, il ne reste plus de produit de départ,
le sulfite désiré est
obtenu sous forme de 2 diastéréoisomères (Rf = 0,53 et 0,62 (AcOEt/EP 5/5)).
Le mélange est
filtré, la phase organique est lavée avec de l'eau distillée, une solution
d'acide chlorhydrique
(HCI) à iN, puis à nouveau avec de l'eau. La phase organique est ensuite
séchée sur du Na2SO4,
filtrée et concentrée pour donner un solide marron directement remis en
réaction.
Formation du sulfate :
Le sulfite brut (0,345 mmol, 1 éq.) est dissous dans 2 mL d'un mélange
CH2C12/CH3CN
(1/1 v/v). 81 mg de métapériodate de sodium (0,38 mmol, 1,1 éq.), 0,5 mL d'eau
et un grain de
chlorure de ruthénium (1,38.10-3 mmol, 0,004 éq.) sont ajoutés successivement.
La réaction est
exothermique, un précipité de Na103 se forme très rapidement. Après 1 heure
d'agitation à
température ambiante, le sulfite a été consommé, le mélange réactionnel est
filtré et dilué dans 20
mL de CH2CI2. La phase organique est lavée avec une solution de NaHCO3 à 5%,
de l'eau
distillée, puis séchée, filtrée et concentrée. Le solide marron obtenu est
dissous dans un minimum
de CH2CI2 et filtré sur silice. La silice est rincée plusieurs fois avec du
CH2CI2. On obtient alors
un solide blanc (80 mg, 66%).
Rf : 0,58 (AcOEt/EP 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 374,13 [M+Na]+,
(ESI+/MeOH) m/z : 386,08 [M+CI]-.
RMN 'H (400,13 MHz, acétone-d6) 8 (ppm) : 1,37, 1,52 (2s, 6H, Cb et Q) ; 3,55
(m, 2H,
H8) ; 3,80 (m, 1H, Hia) ; 4,29 (m, 1H, H7b) ; 4,26 (td, 1H, J5.4 = JS_ba =
10,7 Hz, J5-6b = 5,5 Hz, H5)
4,36 (d, 1 H, J2_, = J2.3 = 6,0 Hz, H2) ; 4,43 (dd, 1 H, J3.2 = 5,6 Hz, J3.4 =
8,0 Hz, H3) ; 4,6 (dd, 111,
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J4-3 = 7,6 Hz, J4-5 = 10,8 Hz, H4) ; 4,63 (t, 1H, J6a-5 = J6a-6b = 10,8 Hz,
H6a) ; 4,84 (dd, 1H, J6b-5
5,6 Hz, J6b-6a = 10,4 Hz, H6b) ; 5,28 (s, 1H, H1).
RMN 13C (100,62 MHz, acétone-d6) 8 (ppm) : 27,16, 29,13 (Cb et C ) ; 52,06
(C8)
60,35 (C5) ; 68,75 (C7) ; 74,34 (C6) ; 74,95 (C3) ; 77,88 (C2) ; 86,65 (C4) ;
99,70 (C1) ; 112,07
(Ca).
Les synthèses des composés la à 5a décrites ci-dessus sont résumées à la
Figure 1
annexée.
6) SYNTHESE DU PENT-1-EN-5-YLHEXA(ETHYLENEGLYCOL) (Composé
6a)
25 g de hexa(éthylèneglycol) (88,5 mmol, 4,12 éq.) sont dissous dans une
solution de
NaOH à 50%. Après 30 minutes d'agitation à une température de 100 C, 2,58 mL
de 5-
bromopent-1-ène (21,85 mmol, 1 éq.) sont ajoutés. On maintient le mélange sous
agitation à une
température de 100 C pendant 15 minutes. Le mélange est ensuite dilué dans du
CH2C12 et le
produit est extrait avec de l'éther de pétrole. De l'eau est ajoutée à la
phase CH2CI2 qui est ré-
extraite plusieurs fois par de l'éther de pétrole. Les phases organiques sont
rassemblées, lavées
avec un minimum d'eau, séchées sur du Na2SO4, filtrées et concentrées. L'huile
jaune obtenue est
purifiée sur colonne de gel de silice (AcOEt/EP 9/1 v/v puis AcOEt/MeOH 9/1
v/v) pour donner
une huile liquide jaune (3,19 g, 99%).
Rf : 0,14 (AcOEt/EP 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 373,27 [M+Na]+; 389,20 [M+K]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 1,68 (m, 2H, H14) ; 2,09 (m, 2H, H15) ;
3,46 (t,
2H, J13-14 = 6,6 Hz, H13) ; 3,56-3,73 (m, 24H, H1-12) ; 4,99 (m, 2H, H17) ;
5,81 (m, 2H, H16).
RMN 13C (100,62 MHz, CDC13) 8 (ppm) :28,66 (C14) ; 30,12 (C15) ; 61,51, 61,58,
69,98,
70,11, 70,21, 70,35, 70,47, 70,58, 72,46 et 72,58 (13C, C1-13) ; 114,59 (C17)
; 138,18 (C16).
7) SYNTHESE DU (1-THIOACETYLPENT-5-
YL)HEXA(ETHYLENEGLYCOL) (Composé 7a)
3,1 g de pent-1-èn-5-ylhexa(éthylèneglycol) (8,85 mmol, 1 éq.), 3,1 mL d'acide
thioacétique (44,3 mmol, 5 éq.) et une spatule d'azobisisobutyronitrile
(A.IBN) (100 mg) sont
dissous dans 12 mL de tétrahydrofurane fraîchement distillé sur du sodium.
Après 1 heure
d'agitation à reflux (90-100 C), le mélange est dilué dans de l'AcOEt puis
lavé avec une solution
de NaHCO3 saturée. La phase organique est séchée sur du Na2SO4, filtrée et
concentrée pour
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donner une huile liquide jaune qui est purifiée sur colonne de gel de silice
(AcOEt/EP 9/1 v/v
puis AcOEt/MeOH 9/1 v/v). On obtient une huile jaune liquide (2,68 g, 71 %).
Rf : 0,27 (AcOEt/MeOH 9/1 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 449,26 [M+Na]+,
(ESI"/MeOH) m/z : 461,17 [M+C]]-.
RMN'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 1,40 (m, 2H, H15) ; 1,58 (m, 4H, H14 et
H16)
1,83 (s, 1H, OH) ; 2,32 (s, 3H, H19) ; 2,86 (t, 2H, J17_16 = 7,2 Hz, H17) ;
3,44 (t, 2H, J13_14 = 6,6
Hz, H13) ; 3,56-3,73 (m, 24H, H1-12)=
RMN 13C (100,62 MHz, CDC13) S (ppm) : 25,25 (C15) ; 28,90 (C17) ; 28,99, 29,24
(C14 et
C16) ; 30,52 (C19) ; 61,55, 69,96, 70,17, 70,42, 70,98 et 72,43 (13C, C1_13) ;
195,84 (C18)-
8) SYNTHESE DU (1-THIOMETHOXYTRITYLPENT-5-
YL)HEXA(ETHYLENEGLYCOL) (Composé 8a)
Déprotection de l'acétate :
2,6 g de (1-thioacétylpent-5-yl)hexa(éthylèneglycol) (60,9 mmol, 1 éq.) sont
mis à réagir
avec 3 mL de HCI concentré dans 65 mL d'éthanol absolu. Après 20 heures
d'agitation à une
température de 60 C, le mélange est neutralisé avec de l'ammoniaque, puis
concentré. La
solution obtenue est ensuite diluée dans de l'AcOEt, la phase organique est
lavée à l'eau, séchée
sur du Na2SO4, filtrée et concentrée. L'huile marron-noir obtenue est assez
pure pour être remise
directement en réaction.
Protection avec le trityl
Le thiol déprotégé est mis en présence de 2,8 g de chlorure de méthoxytrityl
(91,3 mmol,
1,5 éq.) dans 60 mL de THF anhydre. Après 24 heures d'agitation à température
ambiante, la
solution est concentrée et purifiée par chromatographie sur colonne de gel de
silice
(AcOEt/MeOH 9/1 v/v) pour donner une huile jaune (3,65 g, 91 %).
Rf : 0,4 (AcOEt/MeOH 7/3 v/v).
SM (ESI+/MeOH) mz : 679,34 [M+Na]+.
RMN'H (400,13 MHz, acétone-d6) 8 (ppm) : 1,31 (m, 2H, H15) ; 1,40 (m, 4H, H14
et
H16) ; 2,17 (t, 2H, J17-18 = 7,4 Hz, H17) ; 2,87 (s, 1H, OH) ; 3,35 (t, 2H,
J13-14 = 6,4 Hz, H13) ; 3,47-
3,63 (m, 24H, H1.12) ; 3,79 (s, 3H, H21) ; 6,86-7,42 (m, 14H, HAr).
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
18
RMN 13C (100,62 MHz, acétone-d6) 8 (ppm) : 27,37, 30,16 (3C, C,4, C,5 et C16),
33,54
(C17) ; 56,50 (C21) ; 62,94, 62,94, 67,64, 71,82, 72,19 et 72,33 (13C, C1-13)
; 74,48 (C18) ; 1 14,86,
128,32, 129,61, 131,26 et 132,54 (14C, CHAT) ; 138,81, 147,37 (3C, C19) ;
160,12 (C20)-
9) SYNTHESE DU O-(1-THIOMETHOXYTRITYLPENT-5-YL)-O-
PROPARGYLHEXA(ETHYLENEGLYCOL) (Composé 9a)
100 mg de (1-thiométhoxytritylpent-5-yl)hexa(éthylèneglycol) (0,152 mmol, ]
éq.) sont
dissous dans 3 mL de THF fraîchement distillé. 7,3 mg d'hydrure de sodium
(0,183 mmol, 1,2
éq.) puis 16 L de 2-bromopropyne (0,213 mmol, 1,4 éq.) sont ajoutés au
mélange à une
température de 0 C. Après 18 heures d'agitation à température ambiante, le
mélange est
concentré puis purifié sur colonne de gel de silice (AcOEt/EP 8/2 v/v). Le O-
(]-
thiométhoxytritylpent-5-yl)-O-propargylhexa(éthylèneglycol) est obtenu sous la
forme d'une
huile blanchâtre (103 mg, 97%).
Rf : 0,34 (AcOEt).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 717,39 [M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 1,28 (m, 2H, H15) ; 1,42 (m, 4H, H14 et
H16) ;
2,14 (t, 2H, J17.16 = 7,4 Hz, H17) ; 2,43 (t, 1 H, J = 2,4 Hz, H2') ; 3,36 (t,
2H, J,3-14 = 6,8 Hz, H,3)
3,52-3,71 (m, 24H, H1_12) ; 3,79 (s, 3H, H21) ; 4,20 (d, 2H, J = 2,4 Hz, H1')
; 6,79-7,40 (m, 14H,
HA,).
RMN '3C (100,62 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 25,59 (C,5) ; 28,46, 29,19(C 14et C16) ;
31,96
(C17) ; 55,20 (C21) ; 58,39 (C1,) ; 65,85 (C2') ; 69,10, 70,05, 70,40, 70,56
et 71,17 (13C, C1-13)
74,51 (C,8) ; 113,03, 126,44, 127,77, 129,47 et 130,73 (14C, CHAT) ; 137,12,
145,32 (3C, C19) ;
157,94(C20)-
Les synthèses des composés 6a à 9a décrites ci-dessus sont représentées à la
Figure 2
annexée.
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
19
CLICK CHEMISTR Y DES COMPOSES 5a ET 9a - FONCTIONNALISA TION
DU MANNOPYRANOSIDE EN POSITION 6 PAR UN GROUPEMENT CARBOXY (cf
Figure 3:
10) SYNTHESE DU {1-[2,3-0-ISOPROPYLIDENE-4,6-O-CYCLOSULFATE-a-
D-MANNOPYRANOSYL]ETHYL-IH-1,2,3-TRIAZOL-4-YL}METHYL-[O-(1-
THIOMETHOXYTRITYLPENT-5-YL)-O-HEXA(ETHYLENEGLYCOL)] (Composé 10a)
40 mg de 2'-azidoéthyl-2,3-O-isopropylidène-4,6-O-cyclosulfate-a-D-
mannopyranose
(0,11 mmol, 1 éq.) et 88 mg de O-(1-thiométhoxytritylpent-5-yl)-O-
propargylhexa(éthylèneglycol) (0,13 mmol, 1,1 éq.) sont dissous dans 4 mL d'un
mélange
CH2C12/H20 (1/1 v/v). 7 mg de CuSO4, 5H20 (0,03 mmol, 0,25 éq.) et 11,3 mg
d'ascorbate de
sodium (0,06 mmol, 0,5 éq.) sont ajoutés. Après 24 heures d'agitation à
température ambiante, le
mélange réactionnel est dilué dans du CH2CI2, puis lavé avec de l'eau. La
phase organique est
ensuite séchée, filtrée, concentrée et purifiée par chromatographie sur
colonne de gel de silice
avec un gradient d'éluant (CH2C12/MeOH 99/1 v/v à 98/2 v/v) pour donner une
huile incolore (80
mg, 64%).
Rf : 0,4 (CH2CI2/MeOH 9/1 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z: 1068,62 [M+Na]+,
(ESI+/MeOH) m/z: 1080,77 [M+Cl]-.
RMN 1H (400,13 MHz, CD3OD) S (ppm) : 1,36 (m, 6H, H25, H26 et H27) ; 1,34,
1,49 (2s,
6H, Hb et Hc) ; 2,14 (t, 2H, J28_27 = 7,2 Hz, H28) ; 3,38 (t, 2H, J24-25 = 6,4
Hz, H24) ; 3,44-3,66 (m,
25H, H5 et H12-23); 3,78 (s, 3H, H32) ; 3,97 (m, 1 H, H7a) ; 4,15 (m, J H,
H7b) ; 4,27 (m, 3H, H2, H3
et H6a) ; 4,50 (m, 2H, H6b et H4) ; 4,64 (m, 4H, H8 et Hl,), 5,12 (s, 1H, H1)
; 6,81-7,39 (m, 14H,
HAr) ; 8,07 (s,. I H, H9).
RMN 13C (100,62 MHz, CD3OD) S (ppm) : 26,34, 28,20 (Cb et CJ ; 26,71 (C26) ;
29,62
(C27) ; 30,23 (C25) ; 33,03 (C28) ; 51,19 (C8) ; 55,79 (C32) ; 59,79 (C5) ;
65,14 (C11) ; 67,42 (C7)
70,95, 71,19, 71,49, 71,58, 72,03 (13C, C12-24) ; 73,53 (C6) ; 74,46, 77,23
(C2 et C3) ; 85,66 (C4) ;
98,96 (C1) ; 108,26, 111,66 (C29 et Ca) ; 114,11, 127,66, 128,86, 130,73 et
132,02 (14C, CHAT) ;
126,04 (C9) ; 138,40, 146,86 (4Civ, C30 et C10) ; 159,71 (C31).
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
11) SYNTHESE DU {l-[6-CYANO-6-DEOXY-4-O-SODIUMSULFATE-2,3-0-
ISOPROPYLIDENE-a-D-MANNOPYRANOSYL]ETHYL-IH-1,2,3-TRIAZOL-4-
YL}METHYL-[O-(1-THIOMETHOXYTRITYLPENT-5-YL)-O-
HEXA(ETHYLENEGLYCOL)] (Composé 11a)
160 mg de {1-[2,3-0-isopropylidène-4,6-O-cyclosulfate)-a-D-
mannopyranosyl]éthyl-lH-
1,2,3-triazol-4-yl}méthyl-[O-(1-thiométhoxytritylpent-5-yl)-O-
hexa(éthylèneglycol)] (0,15
mmol, 1 éq.) et 15 mg de cyanure de sodium (0,31 mmol, 2 éq.) sont dissous
dans 1,5 mL de
DMF. Après 4 heures d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel
est dilué dans
10 mL d'une solution de NaHCO3 à 5% (pour éviter un éventuel risque de
dégagement d'acide
cyanhydrique HCN) et lavé avec du CH2CI2. Le produit est extrait avec de
l'eau, puis la phase
aqueuse est lyophilisée. La poudre jaune obtenue est purifiée par
chromatographie sur colonne de
gel de silice (CH2C12/MeOH 9/1 v/v) pour donner une huile incolore (106 mg,
65%).
Rf : 0,24 (CH2C12/MeOH 9/1 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 1117,77 [M+Na]+,
(ESI+/MeOH) m/z : 1071,63 [M-Na]-.
RMN'H (400,13 MHz, CD3OD) b (ppm) : 1,31 et 1,50 (2s, 6H, Hb et Hc) ; 1,38 (m,
6H,
H26, H27 et H28) ; 2,15 (t, 2H, J29-28 = 7,2 Hz, H29) ; 2,70 (dd, 1 H, J6a-5 =
8,8 Hz, J6a-6b = 17,2 Hz,
H6a) ; 3,02 (dd, 1H, J6b-5 = 3,0 Hz, J6b-6a = 17,0 Hz, H6b) ; 3,38 (t, 2H, J25-
26 = 6,4 Hz, H25) ; 3,48-
3,66 (m, 26H, H4,5 et H 13-24) ; 3,78 (s, 3H, H33) ; 3,93 (m, 1 H, H8a) ; 4,10
(d, 1 H, J2-3 = J2_1 = 4,8
Hz, H2) ; 4,19 (m, 2H, H8b et H3) ; 4,65 (m, 4H, H9 et H12) ; 5,00 (s, 1 H,
H1) ; 6,82-7,39 (m, 14H,
HAr) ; 8,04 (s, 1H, H10).
RMN 13C (100,62 MHz, CD3OD) S (ppm) : 21,83 (C6) ; 26,60, 28,05 (Cb et CJ ;
26,69
(C27) ; 29,62 (C28) ; 30,17 (C26) ; 33,04 (C29) ; 51,17 (C9) ; 55,81 (C33) ;
64,87 (C12) ; 66,66, 76,70
(C4 et C5) ; 67,02 (C8) ; 70,47, 70,99, 71,20, 71,26, 71,35 et 72,02 (13C, C13-
25) ; 77,54 (C2) ;
77,92 (C3) ; 98,52 (C1) ; 110,98 (C30 et Ca) ; 118,96 (C7) ; 114,12, 127,67,
128,87, 130,72 et
132,01 (14C, CHAr) ; 125,87 (C10) ; 138,38, 146,00 et 146,84 (4C1 , C31 et
C11) ; 159,71 (C32).
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
21
12) SYNTHESE DU {1-[ACIDE(6,7-DIDESOXY-4-O-SODIUMSULFATE-2,3-0-
ISOPROPYLIDENE-a-D-MANNO-HEPTOPYRANOSYL)URONIQUE]ETHYL-IH-1,2,3-
TRIAZOL-4-YL}METHYL-[O-(1-PENT-5-YL)-O-HEXA(ETHYLENEGLYCOL)]
(Composé 12a)
200 mg de {1-[6-cyano-6-déoxy-4-O-sodiumsulfate-2,3-O-isopropylidène-a-D-
mannopyranosyl]éthyl- 1H-1 ,2,3-triazol-4-yl }méthyl-[O-(1-
thiométhoxytritylpent-5-yl)-O-
hexa(éthylèneglycol)] (0,18 mmol, 1 éq.) et 60 mg de soude (NaOH) (1,46 mmol,
8 éq.) sont
dissous dans 1,5 mL d'une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène à 30%. La
solution est
agitée à température ambiante. A 12 heures et 24 heures de réaction, 60 mg de
NaOH et 1,5 mL
de H202 sont ajoutés au milieu réactionnel. Après 48 heures, la solution est
neutralisée avec des
résines Amberlyst H+, avant d'être filtrée et lyophilisée. Le produit obtenu
est ensuite purifié par
chromatographie sur colonne de gel de silice avec un gradient d'élution
(CH2CI2/MeOH 9/1 v/v à
NH4OH/iPrOH 5/5 v/v) pour donner une huile jaune (80 mg, 52%).
Rf : 0 (CH2C12/MeOH 8/2 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z: 864,34 [M+Na]+.
RMN'H (400,13 MHz, D20) 8 (ppm) : 1,35 et 1,52 (2s, 6H, Hb et Hc) ; 1,44 (m,
2H,
H27) ; 1,60 (m, 2H, H26) ; 1,73 (m, 2H, H28) ; 2,29 (dd, 1 H, J6a-5 = 10,6 Hz,
J6a-6b = 15,0Hz, H6a)
2,80 (dd, 1 H, J6b-5 = 2,0 Hz, J6b-6a = 15,2 Hz, H6b) ; 2,89 (t, 2H, J29-28 =
8,0 Hz, H29) ; 3,53 (t, 2H,
J25-26 = 6,6 Hz, H25) ; 3,50-3,69 (m, 26H, H5 et H13-24) ; 3,88 (m, 1H, H8a) ;
4,17 (m, 2H, H8b et
H4) ; 4,19 (d, 1H, J2-3 = J2-1 = 5,6 Hz, H2) ; 4,30 (m, 1H, H3) ; 4,68 (m, 4H,
H9 et H12) ; 4,95 (s,
1H, H1) ; 8,12 (s, 1H, H10).
RMN'3C (100,62 MHz, D20) 8 (ppm) : 23,80 (C28) ; 24,24 (C27) ; 25,45 et 26,80
(Cb et
CJ ; 28,06 (C26) ; 38,92 (C6) ; 49,99 (C9) ; 50,89 (C29) ; 62,95 (C12) ; 65,47
(C8) ; 66,41 (C5)
66,54, 68,69, 69,07, 69,40, 69,53 et 70,70 (13C, C13-25) ; 75,21 (C2) ; 76,00
(C3) ; 78,30 (C4)
95,99 (C1) ; 110,39 (Ca) ; 125,55 (C10) ; 143,85 (Ci,); 177,75 (C7)-
13) SYNTHESE DU {1-[ACIDE(6,7-DIDESOXY-a-D-MANNO-
HEPTOPYRANOSYL)URONIQUE]ETHYL-IH-1,2,3-TRIAZOL-4-YL}METHYL-[O-(1-
PENT-5-YL)-O-HEXA(ETHYLENEGLYCOL)] (Composé 13a)
60 mg de { 1-[acide(6,7-didésoxy-4-O-sodiumsulfate-2,3-O-isopropylidène-(I-D-
manno-
heptopyranosyl)uronique]éthyl- 1 H-1,2,3-triazol-4-yl} méthyl-[O-(1-pent-5-yl)-
O-
hexa(éthylèneglycol)] (0,07 mmol, 1 éq.) sont dissous dans 2 mL d'un mélange
MeOH/THF (1/1
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22
v/v), puis mis à réagir avec des résines Amberlyst 15-H+ pendant 36 heures.
Les résines sont
ensuite filtrées et la solution est neutralisée avec une solution de NaHCO3 à
5%. Les solvants
organiques sont évaporés et l'eau restante est lyophilisée. Le mélange est
repris au méthanol et le
NaHCO3 insoluble est filtré. L'huile obtenue est assez pure pour être remise
directement en
réaction (40 mg, 80%).
Rf : 0,18 (AcOEt/MeOH 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z: 765,86 [M-3H+3Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CD3OD) S (ppm) : 1,49 (m, 2H, H27) ; 1,61 (m, 2H, H26) ;
1,80
(m, 2H, H28) ; 2,41 (dd, 1H, J6a-5 = 10,2 Hz, J6a-6b = 16,2 Hz, H6a) ; 2,84
(m, 3H, H29 et H6b) ; 3,49
(t, 2H, J25-26 = 6,4 Hz, H25) ; 3,40-3,79 (m, 28H, H2-5 et 1113-24) ; 3,92 (m,
I R H8a) ; 4,22 (m, J H,
H8b) ; 4,71 (d, 1H, J1-2 = 1,2 Hz, H,) ; 4,87 (m, 2H, H9) ; 4,92 (m, 2H, H12)
; 8,65 (s, 1H, H10).
RMN '3C (100,62 MHz, D20) 8 (ppm) : 23,79 (C28) ; 24,23 (C27) ; 28,06 (C26) ;
36,51
(C6) ; 50,67 (C9) ; 50,90 (C29) ; 62,55 (C12) ; 65,29 (C8) ; 67,88, 69,08,
69,54 et 70,70 (13C, C13-
25) ; 52,32, 69,36, 69,82, 70,16 (4C, C2-5) ; 99,48 (C,) ; 109,39 (C11) ;
146,74 (C10) ; 175,27 (C7)-
CLICK CHEMISTRY DES COMPOSES 5a ET 9a - FONCTIONNALISATION
DU MANNOPYRANOSIDE EN POSITION 6 PAR UN GROUPEMENT AZIDO (cf Figure
4)
14) SYNTHESE DU {1-(6-AZIDO-6-DEOXY-2,3-O-ISOPROPYLIDENE-4-O-
SODIUMSULFATE-a-D-MANNOPYRANOSYL)ETHYL-IH-1,2,3-TRIAZOL-4-
YL}METHYL-[O-(1-THIOPENT-5-YL)-O-HEXA(ETHYLENEGLYCOL)1 (Composé 14a)
530 mg de { l -[2,3-O-isopropylidène-4,6-0-(cyclosulfate)-a-D-
mannopyranosyl]éthyl-
1 H-1,2,3-triazol-4-yl }méthyl-[O-(1-thiométhoxytritylpent-5-yl)-O-
hexa(éthylèneglycol)] (0,51
mmol, 1 éq.) et 65 mg d'azide de sodium (1,00 mmol, 2 éq.) sont mis à réagir
dans 10 mL de
DMF. Le même protocole que pour le 2'-azidoéthyl-2,3,4,6-tétra-O-acétyl-a-D-
mannopyranose
(composé 2a) est ensuite suivi (Exemple 1). On obtient alors une huile jaune
(350 mg, 62%).
Rf : 0,15 (CH2C12/MeOH 8,5/1,5 v/v).
15) SYNTHESE DU {1-(6-AZIDO-6-DEOXY-2,3-a-D-
MANNOPYRANOSYL)ETHYL-IH-1,2,3-TRIAZOL-4-YL}METHYL-[O-(1-THIOPENT-
5-YL)-O-HEXA(ETHYLENEGLYCOL)] (Composé 15a)
200 mg de { 1-(6-azido-6-déoxy-2,3-O-isopropylidène-4-O-sodiumsulfate-a-D-
mannopyranosyl)éthyl-1 H-1,2,3-triazol-4-yl}méthyl-[O-(1-thiopent-5-yl)-O-
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hexa(éthylèneglycol)] (0,18 mmol, 1 éq.) sont mis à réagir avec 50 mg de
nitrate d'ammonium
cérique (CAN) (0,09 mmol, 0,5 éq.) dans 4 mL d'un mélange CH3CN/H20 (95/5
v/v). Après 4
heures d'agitation à 60 C, le mélange réactionnel est dilué dans du CH2CI2,
lavé plusieurs fois à
l'eau, et la phase aqueuse lyophilisée. L'huile jaune obtenue est purifiée par
chromatographie sur
colonne de gel de silice avec un gradient d'éluant (CH2CI2/MeOH 90/10 v/v à
CH2CI2/MeOH
80/20 v/v) pour donner le {1-(6-azido-6-déoxy-4-O-sodiumsulfate-a-D-
mannopyranosyl)éthyl-
1H-1,2,3-triazol-4-yl}méthyl-[O-(1-thiopent-5-yl)-O-hexa(éthylèneglycol)] sous
forme d'une
huile incolore (100 mg, 72%).
Ce composé est ensuite mis à réagir avec des résines Amberlyst H+ dans 6 mL
d'un
mélange MeOH/THF (1/1 v/v) pendant 24 heures. Le même protocole que pour le {1-
[acide(6,7-
didésoxy-a-D-manno-heptopyranosyl)uronique] éthyl-1 H-1,2,3-tri azo1-4-yl
}méthyl-[O-(1-pent-5-
yl)-O-hexa(éthylèneglycol)] (composé 13a) est ensuite suivi (Exemple 1). On
obtient alors une
huile jaune (150 mg, 53%).
Rf : 0,25 (CH2Cl2/MeOH 9/1 v/v).
RMN'H (400,13 MHz, CD3OD) S (ppm) : 1,47 (m, 2H, H26) ; 1,60 (m, 2H, H25) ;
1,71
(m, 2H, H27) ; 2,70 (t, 2H, J28-27 = 7,2 Hz, H28) ; 3,48 (t, 2H, J24-25 = 6,2
Hz, H24) ; 3,19-3,78 (m,
30H, H2-6 et H12-23) ; 3,88 (m, 1H, H7a) ; 4,13 (m, 1H, H7b) ; 4,63 (m, 4H, H8
et H11) ; 4,72 (s, 1H,
Hl) ; 8,03 (s, 1 H, H9).
RMN 13C (100,62 MHz, CD3OD) 8 (ppm) : 26,13 (C26) ; 30,07 (C27) ; 30,36 (C25)
; 39,66
(C28) ; 51,34 (C8) ; 62,85 (C6) ; 65,05 (C11) ; 66,79 (C7) ; 68,38, 70,81,
71,24, 71,59, 71,93, 72,15,
72,51 et 75,01 (17C, C2-5 et Cie-24) ; 101,70 (CI) ; 132,57 (C9) ; 161,04
(C1o).
SYNTHESE DU COMPOSE DE FORMULE (I), DANS LEQUEL A EST UNE
NANOPARTICULE D'OR :
Deux solutions, l'une contenant 60 mg d'acide tétrachloroaurique (HAuC14)
(0,18 mmol,
1 éq.) et 250 mL d'eau, et l'autre contenant 150 mg de citrate de sodium (0,5
mmol, 2,78 éq.)
dissous dans 10 mL d'eau sont chauffées en parallèle à une température de 60 C
pendant 10
minutes. La solution de citrate de sodium chaude est ensuite ajoutée à la
solution d'HAuCI4, puis
le mélange est porté à une température de 120 C pendant 2,5 heures. La
solution passe
progressivement du gris au rouge-bordeaux, ce qui indique que les
nanoparticules d'or se sont
formées. Une fois la solution revenue à température ambiante, 50 mg de
glycoconjugué solubilisé
dans l mL de MeOH sont ajoutés et laissés sous agitation à température
ambiante pendant 48
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
24
heures. Les nanoparticules d'or sont ensuite précipitées par ajout d'une
solution de NaCI saturée.
Après une nuit au repos, le surnageant est enlevé et les nanoparticules d'or
sont centrifugées
pendant 30 minutes à une vitesse de 14 000 rpm. Elles sont ensuite lavées
plusieurs fois à l'eau,
puis au méthanol et séchées à l'air libre.
Taille des nanoparticules d'or A : 6-7 nm,
Taille des composés de formule (1) : 7-8 nm.
EXEMPLE 2: PREPARATION D'UN COMPOSE DE FORMULE (II)
1) SYNTHESE DU 2,3,4,6-TETRA-O-ACETYL-a-D-MANNOPYRANOSIDE DE
3,6,8-DIOXAOCTYLE (Composé lb)
OAc
OAc
-0
AcO
Réactifs :
Ac0
il ' -
2"
0 4 s OH - TEG : MW = 150,17 I
H3Cyo- O 3' 0~~ - BF3Et20: MW= 141,93
0
C20H 320 13
MW: 480,46
A une solution contenant 25,7 g (0,07 mol - 1 éq.) de a-D-mannose penta-
acétate et 26
mL (0,21 mol - 3 éq.) de triéthylène glycol dans 150 mL de dichlorométhane
anhydre refroidi à
une température de 0 C, on ajoute sous atmosphère d'argon 60 mL (0,56 mol - 8
éq.) de BF3Et2O
goutte à goutte. On laisse ensuite le mélange réactionnel revenir à
température ambiante. Le
mélange est maintenu sous agitation pendant toute la nuit, et la réaction est
suivie par CCM
(Et20/MeOH 90/10 v/v). Une fois la réaction terminée, le mélange réactionnel
est lavé
successivement avec 2 fois 100 mL d'une solution aqueuse saturée de NaHCO3,
avec 2 fois 100
mL d'eau distillée et enfin avec 100 mL d'une solution de saumure. La phase
organique est
séchée sur du Na2SO4, filtrée et évaporée sous pression réduite. Le brut
réactionnel est ensuite
purifiée par chromatographie sur colonne de gel de silice avec comme éluant
(EP/Et20 60/40
v/v).
Aspect physique : Huile jaune.
Rendement : 79%.
Rf : 0,43 (Et20/MeOH 90/10 v/v).
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
SM : (ESI+/MeOH) m/z: 503,1 [M+Na]+,
(ESI"/MeOH) m/z : 479,3 [M-H]-.
RMN 'H (400,13 MHz, CDCl3) S (ppm) : 2,05, 2,09, 2,12, 2,13 (4s, 12H, H2 ) ;
3,55-
3,68 (m, 12H, HI , H2', HY, H4', H5>, H0; 4,05-4,11 (m, 1H, H6a) ; 4,17-4,24
(m, 2H, H5 et H6b) ;
5,18 (d, 1H, 3JHI-H2 = 1,8 Hz, HI) ; 5,20 (dd, 1H, 3JH2-HI = 1,9 Hz, 3JH2-H3 =
3,2 Hz, H2) ; 5,25 (t,
1 H, 3JH4-H3 = 3JH4-H5 = 9,9 Hz, H4) ; 5,36 (dd, 1 H, 3JH3-H2 = 3,3 HZ, 3JH3-
H4 = 10,1 HZ, H3).
RMN 13C (100,62 MHz, CDC13) S (ppm) : 20,5 (2C), 20,6, 20,7 (4C, C2õ) ; 61,03
(IC,
C6') ; 62,5 (IC, C6) ; 66,0 (IC, C4) ; 66,53 (1C, CI) ; 68,1 (1C, C5) ; 68,8
(1C, C3) ; 69,94 (2C,
C3, et C4') ; 70,1 (1C, C2) ; 70,44 (1C, C2') ; 72,60 (1C, C5') ; 91,8 (1C,
CI) ; 169,8, 170,1, 170,2
et 170,9 (4C, CI-).
2) SYNTHESE DU BI(2,3,4,6-TETRA-O-ACETYL-a-D-MANNOPYRANOSIDE) DE
3,6,8-DIOXAOCTYLE (Composé 2b)
AcO OAc
AcO
OAc OAc
4 6 OAc Réactifs
-O Man(OAc)5 : MW = 390,34
Aco 5 I I BF3Et20 : MW = 141,93
AcO
3 2
O3'l0 2' J
Ac = CH CO C34H50022
3 MW: 810,75
A une solution contenant 13,4 g (27,9 mmol - 1 éq.) du composé lb et 10 g
(27,9 mmol -
1 éq.) de a-D-mannose penta-acétate dans 120 mL de dichlorométhane anhydre
refroidi à une
température de 0 C, on ajoute sous atmosphère d'argon 35,5 mL (0,28 mol - 10
éq.) de BF3Et2O
goutte à goutte. On laisse ensuite le mélange réactionnel revenir à
température ambiante. Le
mélange est maintenu sous agitation pendant toute la nuit, et la réaction est
suivie par CCM
(Et20/MeOH 90/10 v/v). Une fois la réaction terminée, le mélange réactionnel
est lavé
successivement avec 2 fois 80 mL d'une solution aqueuse saturée de NaHCO3,
avec 2 fois 80 mL
d'eau distillée et enfin avec 80 mL d'une solution de saumure. La phase
organique est séchée sur
du Na2SO4, filtrée et évaporée sous pression réduite. Le brut réactionnel est
par la suite purifié
par chromatographie sur colonne de gel de silice avec comme éluant (EP/Et20
60/40 v/v).
Aspect physique : Mousse blanche.
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Rendement : 87%.
Rf: 0,61 (Et20).
SM : (ESI+/MeOH) m/z : 833,4 [M+Na]+ ; 811,2 [M+H]+,
(ESI-/MeOH) m/z: 809,3 [M-Hf; 845,4 [M+C1]-.
RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) S (ppm) : 1,98, 2,00, 2,11, 2,13 (4s, 24H, H2õ) ;
3,42-
3,46 (m, 6H, H3, H5, H6b) ; 3,51 (dd, 2H, 3JH6a-H5 = 7,1 Hz, 2JH6a-H6b = 2,0
Hz, H6a) ; 3,53 (dd, 2H,
3JH4-H3 = 8,5 Hz, 3JH4-H5 = 2,7 Hz, H4) ; 3,58 (s, 4H, H3') ; 3,60 (t, 4H,
3JH2'-Hl' = 3,4 Hz, H2') ;
3,63 (dd, 2H, 3JH2-H3 = 9,2 Hz, 3JH2-H1 = 1,8 Hz, H2) ; 3,67 (t, 4H, 3JHI'-H2'
= 3.3 Hz, Hl,) ; 5,40
(dd, 2H, 3JHI-H2 = 1,5 Hz, Hl).
RMN 13C (100,62 MHz, CDCI3) S (ppm) : 20,6, 20,7, 20,75, 20,9 (8C, C2õ) ;
62,26 (2C,
C6) ; 66,53 (2C, C1') ; 69,94 (2C, C3') ; 70,44 (2C, C2) ; 70,46 (2C, C4) ;
73,34 (2C, C2) ; 74,80
(2C, C3) ; 76,66 (2C, C5) ; 103,79 (2C, Cl).
3) SYNTHESE DU BI(a-D-MANNOPYRANOSIDE) DE 3,6,8-DIOXAOCTYLE
(Composé 3b)
HO OH
HO
OH OH
4 6 0
HO 5 t 1 Réactifs
O~b
HO 2 McONa : MW = 54,02
03 Résines Amberlyst 15-H`
2'
C 18H34014
MW: 474,45
2,20 g (4 mmol - 0,3 éq.) de MeONa sont ajoutés à une solution de 100 mL de
méthanol
contenant 11 g (13 mmol - 1 éq.) du composé 2b. La réaction est suivie par CCM
(iPrOH/NH4OH 60/40 v/v). Après 30 minutes, le milieu réactionnel est
neutralisé avec des
résines acides Amberlyst 15-H+. Ensuite, les résines sont filtrées, rincées
avec du méthanol. Le
brut obtenu après concentration est purifié par chromatographie sur colonne de
gel de silice avec
un gradient d'élution (iPrOH/NE14OH 80/20 v/v jusqu'à iPrOH/NH4OH 60/40 v/v).
Aspect physique : Mousse beige clair.
Rendement : 97%.
Rf : 0,35 (iPrOH/NH4OH 60/40 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 497,3 [M+Na]+ ; 475,4 [M+H]+,
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(ESI-/MeOH) m/z : 473,3 [M-H]-.
RMN'H (400,13 MHz, MeOD) S (ppm) : 3,41-3,46 (m, 6H, H3, H5, H6b) ; 3,53 (dd,
2H,
3JH6a-H5 = 7,5 HZ, 2JH6a-H6b = 2,1 Hz, H6a) ; 3,54 (dd, 2H, 3JH4-H3 = 8,5 HZ,
3JH4-H5 = 3,1 Hz, H4) ,
3,57 (m, 4H, H3') ; 3,60 (t, 4H, 3JH2'-Hl' = 3,3 Hz, H2=) ; 3,64 (dd, 2H, 3JH2-
H3 = 8,7 Hz, 3JH2-H1 =
1,5 Hz, H2) ; 3,66 (t, 4H, 3JHI'-H2' = 3,3 Hz, Hi,); 5,38 (dd, 2H, 3JHI-H2 =
1,9 Hz, Hl).
RMN 13C (100,62 MHz, MeOD) b (ppm) : 63,08 (2C, C6) ; 66,64 (2C, Cl) ; 70,11
(2C,
C3') ; 70,44 (2C, C2') ; 70,51 (2C, C4) ; 73,35 (2C, C2) ; 75,20 (2C, C3) ;
76,83 (2C, C5) ; 104,19
(2C, C,).
4) SYNTHESE DU BI(6-DESOXY-6-IODO-a-D-MANNOPYRANOSIDE) DE 3,6,8-
DIOXAOCTYLE (Composé 4b)
HO
HO
OH Réactifs :
4 6 0
0 -b
I2 : MW = 253,81
HO 5 l l Imidazole MW = 68,08
HO 3 2 PPh3 : MW = 262,29
O O
O 3'
2'
C 1 aH32N6012
MW : 524,48
0,4 g (1,58 mmol - 1,5 éq.) d'iode, 0,5 g (1,05 mmol - 1 éq.) du composé 3b,
0,42 g (1,58
mmol - 1,5 éq.) de triphénylphosphine (PPh3) et 145 mg (2,1 mmol - 2 éq.)
d'imidazole sont
broyés ensemble dans un petit ballon à l'aide d'une baguette en verre. Le
mélange réactionnel est
chauffé à une température de 100 C sous agitation pendant 10 minutes. La
réaction d'iodation est
suivie par CCM (CH2Cl2/MeOH 90/10 v/v). Le mélange est ensuite refroidi à
température
ambiante puis solubilisé dans du méthanol. Le brut réactionnel est ensuite
concentré sous
pression réduite, et purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice
(CH2CI2/MeOH
90/10 v/v).
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5) SYNTHESE DU BI(6-DESOXY-6-AZIDO-a-D-MANNOPYRANOSIDE) DE 3,6,8-
DIOXAOCTYLE (Composé 5b)
HO N3
HO
N3 OH
4 6 Réactifs
HO 5 NaN3 : MW = 65,01
~
HO
3 2 ^ ^ O
O
O
2-
C 18H32N6012
MW: 524,48
140 mg du composé 4b (0,14 mmol, 1 éq.) et 38 mg d'azide de sodium (0,57 mmol,
4 éq.)
sont mélangés et broyés au mortier pendant 5 minutes, le mélange est ensuite
plongé dans un bain
d'huile à une température de 80 C. Après 20 minutes d'agitation manuelle, le
mélange
réactionnel est directement purifié par chromatographie sur colonne de gel de
silice
(CH2CI2/MeOH 9/1 v/v) pour donner une huile jaune (53 mg, 70 %).
Le schéma de synthèse du composé de formule (II) est représenté à la Figure 5
annexée.
EXEMPLE 3: PREPARATION D'UN COMPOSE DE FORMULE (III)
1) SYNTHESE DU 6-MONOMETHOXYTRITYL-a-D-MANNOPYRANOSIDE DE
METHYLE (Composé le)
g d'a-D-mannopyranoside de méthyle (51,5 mmol, 1 éq.) et 1,9 g de DMAP (15,45
mmol, 0,3 éq.) sont dissous dans 80 mL de pyridine. 24 g de chlorure de
monométhoxytrityle
(77,25 mmol, 1,5 éq.) sont ajoutés au mélange par fraction. La réaction est
terminée après 1,5
heures, le milieu réactionnel est ensuite dilué dans de l'AcOEt et lavé
successivement avec une
solution de HCI à 2N, une solution de NaHCO3 5% et de l'eau. La phase
organique est séchée sur
du Na2SO4, filtrée et concentrée. Le produit est ensuite purifié par
chromatographie flash sur gel
de silice avec un gradient d'élution (CH2CI2 jusqu'à CH2CI2/MeOH 95/5 v/v)
pour donner une
poudre légèrement jaune (21,6 g, 90%).
Rf : 0,43 (CH2CI2/MeOH 95/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 489,45 [M+Na]+ ; 955,67 [2M+Na]+,
(ESI+/MeOH) m/z : 465,28 [M-H]-.
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RMN'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 1,65-3,00 (3m, 3H, -OH) ; 3,30 (s, 3H, -
OCH3)
3,32 (m, 1H, H6a) ; 3,37 (m, 1H, H6b) ; 3,55-3,80 (m, 4H, H2, H3, H4 et H5) ;
3,72 (s, 3H, H13)
4,65 (d, 1H, J1-2 = 1,4 Hz, H1) ; 6,70-7,40 (m, 14H, H9,10,11).
RMN 13C (100,62 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 54,90 (-OCH3) ; 55,21 (C13) ; 64,98 (C6)
69,91, 69,99, 70,23 et 71,6 (C2, C3, C4 et C5) ; 87,15 (C7) ; 100,64 (C1) ; 1
13,38, 127,19, 127,85,
128,42, 130,42 (14C, C9,10,11) ; 135,32, 144,17, 144,26 (C8) ; 158,72 (C]2)-
2) SYNTHESE DU 2,3,4-TRI-O-BENZYL-6-MONOMETHOXYTRITYL-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé 2e)
g de 6-monométhoxytrityl-a-D-mannopyranoside de méthyle (10,72 mmol, 1 éq.)
sont
dissous dans 19 mL de bromure de benzyle (160,8 mol, 15 éq.). 15 g de KOH (268
mmol, 20 éq.)
sont ensuite ajoutés et le mélange est chauffé à une température de 80 C.
Après 1 heure de
réaction, le milieu réactionnel est dilué dans du CH2CI2, puis la phase
organique est lavée à l'eau
distillée, séchée sur du Na2SO4, filtrée et concentrée. Le produit est ensuite
purifié par
chromatographie sur gel de silice avec un gradient d'élution (EP jusqu'à
EP/Et20 5/5 v/v) pour
donner une mousse écru (7,1 g, 90%).
Rf : 0,62 (EP/Et20 6/4 v/v).
- SM (ESI+/MeOH) m/z : 759,45 [M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 3,19 (dd, 1H, J6a-5 = 5,2 Hz, J6b-6a =
9,8 Hz,
H6a) ; 3,28 (s, 3H, -OCH3) ; 3,43 (dd, 1H, H6b-5 =1,7 Hz, J6b-6a = 9,8 Hz,
H6b) ; 3,64 (s, 3H, H13) ;
3,69 (m, I H, H5) ; 3,73 (dd, I H, J2-1 = 1,8 Hz, J2-3 = 3,1 Hz, H2) ; 3,79
(dd, I R J3-2 = 3,2 Hz, J3-4
= 9,3 Hz, H3) ; 3,95 (t, 1H, J4-3 = J4-5 = 9,6 Hz, H4) ; 4,42-4,69 (m, 4H, Ha)
; 4,74 (s, 1H, H1)
6,66-7,49 (m, 29H, H9,10,11,c,d,e)=
RMN 13C (100,62 MHz, CDCI3) 8 (ppm) : 55,00 (-OCH3) ; 55,22 (C13) ; 63,85 (C6)
71,91 (C5) ; 75,32 (C4) ; 75,59 (C2) ; 80,37 (C3) ; 72,43, 72,86 et 75,20 (Ca)
; 86,01 (C7) ; 98,87
(C1) ; 113,18, 128,61, 127,45-127,90, 128,21-128,74, 130,64 (29C,
C9,1o,11,c,d,e) ; 135,92, 138,48,
138,76, 138,81, 144,72 et 144,90 (6C, Cb et C8) ; 158,52 (C12)-
3) SYNTHESE DU 2,3,4-TRI-O-BENZYL-a-D-MANNOPYRANOSIDE DE
METHYLE (Composé 3e)
7,12 g de 2,3,4-tri-O-benzyl-6-monométhoxytrityl-a-D-mannopyranoside de
méthyle
(9,66 mmol, 1 éq.) sont dissous dans 80 mL d'un mélange CH3CN/H20 95/5 v/v.
530 mg de
CAN (0,97 mmol, 0,1 éq.) sont alors ajoutés et le mélange est chauffé à une
température de 60 C
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
pendant 30 minutes. Le milieu réactionnel est ensuite dilué avec du CH2CI2,
puis la phase
organique est lavée avec de l'eau distillée, séchée sur du Na2SO4, filtrée et
concentrée. Le produit
est ensuite purifié par chromatographie flash sur gel de silice avec un
gradient d'élution (EP/Et20
3/7 v/v) pour donner une huile incolore (4,26 g, 95 %).
Rf : 0,5 (Et20/EP 4/6 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 487,12 [M+Na]+ ; 951,34 [2M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 1,88 (s, 1H, -OH) ; 3,25 (s, 3H, -OCH3) ;
3,57
(m, 1H, H5) ; 3,73 (m, 3H, H6a et H2) ; 3,80 (dd, 1H, J6a-5 = 3,0 Hz, J6a-6b =
11,8 Hz, H6b) ; 3,85
(dd, 1 H, J3-2 = 3,0 Hz, J3.4 = 9,4 Hz, H3) ; 3,92 (t, 1 H, J4-3 = J4-5 = 9,6
Hz, H4) ; 4,61 (m, 2H, Ha)
4,65 (m, 3H, H, et Ha) ; 4,73 (d, 2H, J = 12,4 Hz, Ha) ; 4,89 (d, 2H, J = 10,8
Hz, Ha) ; 7,21-7,305
(m, 15H, Hc,d,e)=
RMN '3C (100,62 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 54,73 (-OCH3) ; 62,37 (C6) ; 71,99 (C5)
74,64 (C2) ; 74,83 (C4) ; 72,17, 72,90, 75,16 (3Ca) ; 80,17 (C3) ; 99,29 (CI)
; 127,54-128,35
(Cc,d,e) ; 138,21, 138,37, 138,42 (Cb).
4) SYNTHESE DU .. 2,3,4-TRI-O-BENZYL-6-DEOXY-6-OXY-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé 4e)
500 mg de 2,3,4-tri-O-benzyl-a-D-mannopyranoside de méthyle (1,1 mmol, 1 éq.)
sont
dissous dans 12 mL de CH2CI2 avant d'ajouter 2,5 g de tamis moléculaire 4A et
464 mg de
chlorochromate de pyridinium (2,15 mmol, 2 éq.). Après 1 heure d'agitation à
température
ambiante, le milieu réactionnel est filtré sur célite puis sur charbon actif,
avant d'être purifié par
chromatographie sur silice (AcOEt/EP 3/7 v/v) pour donner une huile
transparente (250 mg,
50%).
Rf : 0,2 (AcOEt/EP 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 485,46 [M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) S (ppm) : 3,31 (s, 3H, -OCH3) ; 3,70 (t, 1 H, J2-,
= J2-3 =
2,8 Hz, H2) ; 3,88 (dd, IH, J3-2 = 3,0 Hz, J3-4 = 7,8 Hz, H3) ; 3,98 (t, 1H,
J4-5 = J4-3 = 8,2 Hz, H4)
4,01 (m, 111, H5) ; 4,54-4,76 (m, 6H, Ha) ; 4,78 (d, 1H, J,-2 = 2,8 Hz, HI) ;
7,19-7,29 (m, 15H,
Hc,d,e) ; 9,66 (s, I H, H6).
RMN 13C (100,62 MHz, CDCI3) b (ppm) : 55,51 (-OCH3) ; 72,27, 72,91 et 74,66
(3Ca) ;
74,17 (C2) ; 74,36 (C4) ; 76,00 (C5) ; 79,15 (C3) ; 99,42 (CI) ; 127,61-128,41
(Ccd,e) ; 137,73,
138,02 (3Cb) ; 197,86 (C6).
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31
5) SYNTHESE DU 2,3,4-TRI-O-BENZYL-6-DEOXY-6-ALLYL-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé 5e)
693 mg de bromure de méthyltriphosphonium (1,95 mmol, 1,2 éq.) sont dissous
dans 12
mL de THF anhydre avant d'ajouter sous atmosphère d'argon à une température de
-5 C, 2 mL
de BuLi (4,88 mmol, 3 éq.). L'agitation est maintenue pendant 30 minutes à une
température de -
C. La solution devient jaune puis 751 mg de 2,3,4-tri-O-benzyl-6-déoxy-6-oxy-a-
D-
mannopyranoside de méthyle (1,63 mmol, 1 éq.) préalablement dissous dans 8 mL
de THF
anhydre sont ajoutés à la solution à une température de -78 C. Après 2 heures
d'agitation à cette
température et 16 heures d'agitation à température ambiante, le milieu
réactionnel est dilué dans
de l'Et20 puis lavé avec une solution de NH4C1. La phase organique est ensuite
séchée sur du
Na2SO4, filtrée, concentrée et purifiée sur colonne de silice (AcOEt/EP 2/8
v/v) pour donner une
huile beige (300 mg, 60%).
Rf : 0,55 (AcOEt/EP 3/7 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 484,45 [M+Na]+.
RMN 1H (400,13 MHz, CD3OD) S (ppm) : 3,27 (s, 3H, -OCH3) ; 3,71 (t, 1H, J4-3 =
J4-5 =
9,4 Hz, H4) ; 3,75 (dd, 1H, J2-1 = 1,8 Hz, J2-3 = 3,0 Hz, H2) ; 3,84 (dd, 1 H,
J3_2 = 3,2 Hz, J3-4 = 9,2
Hz, H3) ; 3,98 (m, 1H, H5) ; 4,57-4,81 (m, 6H, Ha) ; 4,68 (d, 1H, J1_2 = 1,6
Hz, H1) ; 5,24, 5,27
(2m, 1 H, Hia) ; 5,40, 5,45 (2m, 1 H, H7b) ; 5,99 (m, 1 H, H6) ; 4,73 (d, 2H,
J = 12,4 Hz, Ha) ; 7,21-
7,35 (m, 15H, Hc,d,e).
RMN 13C (100,62 MHz, CD3OD) S (ppm) : 54,70 (-OCH3) ;,72,40, 72,80 et 75,11
(3Ca) ;
72,83 (C5) ; 74,80 (C2) ; 78,73 (C4) ; 79,82 (C3) ; 99,12 (C1) ; 118,12(C7);
127,49-128,31 (Cc,d,e)
; 135,49 (C6) ; 138,31, 138,48, 138,59 (Cb).
6) SYNTHESE DU 6-DEOXY-6-ACIDE (2,3,4-TRI-0-BENZYL-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE) BORONIQUE (Composé 6e)
100 mg de 2,3,4-tri-O-benzyl-6-déoxy-6-allyl-a-D-mannopyranoside de méthyle
(0,22
mmol, 1 éq.) sont dissous dans 2 mL de pentane avant d'ajouter sous argon à
une température de
-78 C, 36 .tL de tribromure de bore (0,22 mmol, 1 éq.) et 34 gL de
triéthylsilane (0,22 mmol, 1
éq.). L'agitation est maintenue pendant 3 heures à cette température, puis
pendant 15 minutes à
température ambiante. 17 mg de soude (0,44 mmol, 2 éq.) sont ensuite ajoutés
au milieu
réactionnel, qui est ensuite agité pendant 30 minutes. La solution est diluée
dans de l'AcOEt, puis
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
32
lavée à l'eau. La phase organique est séchée sur du Na2SO4, filtrée,
concentrée puis purifiée sur
colonne de silice (AcOEt/EP 2/8 v/v) pour donner une huile blanche (100 mg,
91%).
Rf : 0,34 (AcOEt/EP 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z: 529,87 [M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CD3OD) 8 (ppm) : 3,33 (dd, 1H, J6a-5 = 7,6 Hz, J6a-6b =
10,0 Hz,
H6a) ; 3,38 (s, 3H, H-OCH3) ; 3,52 (m, 1 H, H5) ; 5,57 (dd, 1 H, J6b-5 = 2,4
Hz, J6b-6a = 10,0 Hz, H6b)
3,78 (t, 1H, J4-3 = J4-5 = 9,2 Hz, H4) ; 3,80 (m, 1H, H2) ; 4,61-5,01 (m, 6H,
Ha) ; 4,76 (d, 1H, J1-2 =
1,6 Hz, H1) ; 7,26-7,41 (m, 15H, Hc,d,e)=
RMN 13C (100,62 MHz, CD3OD) S (ppm) : 7,04 (C6) ; 55,02 (C-OCH3) ; 71,41 (C5)
72,07, 72,70 et 75,37 (3Ca) ; 74,58 (C2) ; 78,58 (C4) ; 79,90 (C3) ; 99,03
(C1) ; 127,60-128,43
(Cc,d,e) ; 138,17, 138,22 et 138,26 (3Cb).
7) SYNTHESE DU 6-DEOXY-6-ACIDE (a-D-MANNOPYRANOSIDE DE
METHYLE) BORONIQUE (Composé 7e)
100 mg de boronate (0,42 mmol, 1 éq) sont mis en solution avec des résines
Amberlyst
15-H+ dans 4 mL d'un mélange MeOH/THF (1/1 v/v) selon le même protocole que
pour le { 1-
[acide(6,7-didésoxy-a-D-manno-heptopyranosyl)uronique] éthyl-1 H-1,2,3-triazol-
4-yl }méthyl-
[O-(1-pent-5-yl)-O-hexa(éthylèneglycol)] (composé 13a) (Exemple 1). On obtient
une huile
blanchâtre (0,40 mg, 85%).
Rf : 0,52 (IPrOH/NH4C1 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 259,37 [M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, D20) 8 (ppm) : 1,57 (m, 1H, Hia) ; 1,88 (m, 1H, H7b) ;
2,68 (m,
1 H, H6a) ; 2,78 (m, 1 H, H6b) ; 3,25 (s, 3H, H-OCH3) ; 3,36 (t, 1 H, J4-5 =
J4-3 = 9,6 Hz, H4) ; 3,45 (td,
1 H, J5-6a = J5-4 = 9,4 Hz, Js-6b = 2,7 Hz, H5) ; 3,57 (dd, 1 H, J3-4 = 9,4
Hz, J3-2 = 3,5 Hz, H3) ; 3,79
(dd, 1H, J2-3 = 3,4 Hz, J2-1 = 1,7 Hz, H2) ; 4,57 (s, 1H, H1).
RMN 13C (100,62 MHz, D20) 8 (ppm) : 32,90 (C7) ; 37,72 (C6) ; 55,16 (C-ocH3) ;
70,26
(C2) ; 70,58 (C4) ; 70,88 (C3) ; 71,04 (C5) ; 101,23 (C1).
Le schéma de synthèse du composé de formule (111) (composé 7e) est présenté à
la Figure
6 annexée.
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EXEMPLE 4: PREPARATION D'UN COMPOSE DE FORMULE (III)
1) SYNTHESE DU 2,3,4-TRI-O-ACETYL-6-MONOMETHOXYTRITYL-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé lf)
H34O I i
0
OAc Réactifs :
,0
AcO
MeOTrCI :MW= 308,81
AcO Ac20 : MW = 102,09
2' - DMAP: MW= 122,17
Hic o OMe -
0
C33H36O1o
M. 592.63
6 g (30,86 mmol - 1 éq.) d'a-D-mannopyranoside de méthyle et 1,13 g (9,26 mmol
- 0,3
éq.) de DMAP sont dissous dans 60 mL de pyridine. 14,2 g (46,30 mmol - 1,5
éq.) de chlorure de
monométhoxytrityle sont ajoutés au mélange par fraction. La réaction de
tritylation dure 1,5
heures, et est suivie par CCM (CH2CI2/MeOH 95/5 v/v). 13,15 mL (137,97 mmol -
4,5 éq.)
d'anhydride acétique sont alors ajoutés au milieu réactionnel. L'acétylation
est suivie par CCM
(Et20/EP 7/3 v/v). Après 3 heures de réaction, les sels de pyridinium sont
filtrés et le mélange
réactionnel est dilué dans 250 mL d'AcOEt. La phase organique est lavée
successivement avec
une solution d'HCl à 2N (jusqu'à pH = 1), une solution de NaHCO3 à 5%, et de
l'eau distillée,
puis séchée sur du Na2SO4, filtrée et concentrée. Le produit est ensuite
purifié par
chromatographie sur gel de silice avec un gradient d'élution (Et20/EP 3/7 v/v
jusqu'à Et20/EP
5/5 v/v) pour donner une mousse blanche.
Aspect physique : Mousse blanche.
Rendement : 90%.
Rf : 0,62 (Et20/EP 7/3 v/v).
SM : (ESI+/MeOH) m/z : 615,2 [M+Na]+.
RMN'H (400,13 MHz, CDC13) S (ppm) : 1,61, 1,81 et 2,02 (3s, 9H, H2') ; 3,07
(m, 2H,
H6a et H6b) ; 3,32 (s, 3H, -OCH3) ; 3,62 (s, 3H, H4') ; 3,76 (m, 1H, H5) ;
4,62 (d, 1H, 3JH1-H2= 1,7
Hz, H1) ; 5,09-5,17 (m, 3H, H2, H3 et H4) ; 6,67-7,22 (m, 14H, l4HPh).
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34
RMN 13C (100,62 MHz, CDCI3) 6 (ppm) : 21,0, 21,1 et 21,3 (3C, C2>) ; 55,4 (l
C, -
OCH3) ; 55,6 (l C, C4') ; 62,9 (1 C, C6) ; 67,1 (1 C, C4) ; 69,8 (l C, C3) ;
70,2 (1 C, C2) ; 70,5 (1 C,
C5) ; 86,8 (IC, C3') ; 98,7 (IC, Cl) 113,5, 127,3, 128,2, 128,3, 128,9 et
130,8 (14C, CHph)
135,9, 144,7 et 144,8 (3C, ClvPh) ; 155,0 (1C, ClvPh-OCH3) ; 169,8, 170,4 et
170,6 (3C, Cy).
2) SYNTHESE DU 2,3,4-TRI-O-ACETYL-a-D-MANNOPYRANOSIDE DE
METHYLE (Composé 2f)
OH
6 OAc
0
AcO 2
ACO 3 1 Réactif :
2'
H3C 110 - OMe - CAN : MW = 548,23
0 C13H2OO9
MW: 320.29
9,16 g (15,45 mmol - 1 éq.) de 2,3,4-tri-O-acétyl-6-monométhoxytrityl-a-D-
mannopyranoside de méthyle sont dissous dans 150 mL d'un mélange CH3CN/H20
(95/5 v/v).
847 mg (1,55 mmol - 0,1 éq.) de CAN sont ajoutés, puis le mélange est chauffé
à une température
de 60 C. La réaction est suivie par CCM (Et20/EP 7/3 v/v) et dure 1 heure. Le
milieu réactionnel
est ensuite dilué avec du CH2CI2. La phase organique est ensuite lavée 2 fois
avec de l'eau
distillée, puis séchée sur du Na2SO4, filtrée et concentrée. Le produit est
ensuite purifié par
chromatographie flash sur gel de silice avec un gradient d'élution (CH2CI2
jusqu'à
CH2CI2/MeOH 96/4 v/v) pour donner une poudre blanche.
Aspect physique : Poudre blanche.
Rendement : 90%.
Rf : 0,67 (CH2CI2/MeOH 95/5v/v).
SM : (ESI+/MeOH) m/z: 321,4 [M+H]+; 343,1 [M+Na]+; 663,5 [2M+Na]+,
(ESI-/MeOH) m/z : 639,2 [2M-H]-.
RMN'H (400,13 MHz, CDCI3) b (ppm) : 1,75, 1,83 et 1,90 (3s, 9H, H2') ; 2,48
(s, 1H,
OH) ; 3,18 (s, 3H, -OCH3) ; 3,41 (dd, I H, 3JH6a-H5 = 4,5 Hz, 2JH6a-H6b = -
12,6 Hz, H6a) ; 3,48 (dd,
1H, 3JH6b-H5 = 2,0 HZ, 2JH6b-H6a = -12,5 Hz, H6b) ; 3,54 (ddd, 1H, 3JH5-H6a =
4,5 Hz, 3JH5-H6b = 2,3
Hz, 3JH5-H4 = 9,9 Hz, H5) ; 4,50 (d, 1 H, 3JH1-H2 = 1,6 Hz, Hl) ; 5,00 (t, 1
H, 3JH4-H3 = 3JH4-H5 = 10,0
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Hz, H4) ; 5,01 (dd, 1H, 3JH2-H1 = 1,8 Hz, 3JH2-H3= 3,5 Hz, H3) ; 5,13 (dd, 1H,
3JH3-H2= 3,4 Hz, 3JH3-
H4 = 10,2 Hz, H3).
RMN 13C (100,62 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 20,9, 21,0 et 21,1 (3C, C2=) ; 55,5 (1C,
-
OCH3) ; 61,6 (1 C, C6) ; 66,7 (] C, C4) ; 69,3 (1 C, C3) ; 69,2 (] C, C2) ;
70,9 (1 C, C5) ; 98,1 (l C,
C1) ; 170,2, 170,4 et 171,0 (3C, C1').
3) SYNTHESE DU 6-O-HYDROGENOPHOSPHONATE-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé 4f)
0
I I
HO' HQ
QH Réactifs :
O
HO 2
H(PO)(OPh)2 : MW = 234,19
1 - Et3N : MW = 101,19
MeONa : MW = 54,02
QMe - Résines Amberlyst 15-H'
C7H1508P
MW: 258.16
0,5 g (1,56 mmol - 1 éq.) de 2,3,4-tri-O-acétyl-a-D-mannopyranoside de méthyle
(composé 3f) sont dissous dans 10 mL de pyridine distillée. 2,1 mL (10,92 mmol
- 7 éq.) de
phosphite de diphényle sont ajoutés goutte à goutte au mélange à température
ambiante. Après 30
minutes d'agitation, 4 mL d'un mélange Et3N/H20 (1/1 v/v) sont ajoutés au
milieu réactionnel,
puis le mélange est maintenu sous agitation pendant 30 minutes
supplémentaires. La réaction est
suivie par CCM (iPrOH/NH4OH 95/5 v/v). Le mélange réactionnel est ensuite
concentré, puis
dilué dans 50 mL de CH2C12. La phase organique est lavée trois fois avec une
solution saturée de
NaHCO3, lavée avec de l'eau distillée, puis séchée sur du Na2SO4, filtrée et
concentrée. Lors de
cette étape, la totalité du sucre de départ est consommée. 28 mg (0,46 mmol -
0,3 éq.) de MeONa
sont ajoutés au milieu réactionnel, puis dilué à nouveau dans 10 mL de MeOH
anhydre. La
réaction est suivie par CCM (iPrOH/NH4OH 9/1 v/v) et dure 30 minutes. Le
milieu réactionnel
est alors neutralisé avec des résines acides Amberlyst 15-H+. Les résines sont
ensuite filtrées,
puis rincées avec du McOH. Le brut obtenu après concentration est purifié par
chromatographie
sur colonne de gel de silice avec un gradient d'élution (iPrOH jusqu'à
iPrOH/NH4OH 9/1 v/v).
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Aspect physique : Poudre beige claire.
Rendement : 93%.
Rf : 0,24 (iPrOH/NH4OH 9/1 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 259,2 [M+H]+ ; 281,1 [M+Na]+ ; 539,2 [2M+Na]+,
(ESI-/MeOH) m/z : 257,4 [M-H]-.
RMN 'H (400,13 MHz, CD3OD) S (ppm) : 3,23-3,26 (m, 1H, H6a) ; 3,32 (s, 3H, -
OCH3)
3,32-3,36 (m, 1 H, H5) ; 3,45 (t, 1H, 3JH4-H3 = 3JH4-H5 = 9,4 Hz, H4) ; 3,5
(dd, 1 H, 3JH6b-H5 = 2,2
Hz, 2JH6b-H6a = -10,9 Hz, H6b) ; 3,65 (dd, 1H, 3JH3-H2 = 3,4 Hz, 3JH3-H4 = 9,5
Hz, H3) ; 3,82 (dd, 1H,
3JH1-H2= 1,7 HZ, 3JH2-H3= 3,4 Hz, H2) ; 6,10 (d, 1H, 3JHI-H2= 1,5 Hz, Hl).
RMN 13C (100,62 MHz, CD3OD) S (ppm) : 6,3 (1C, C6) ; 55,0 (1C, -OCH3) ; 69,8
(IC,
C2) ; 70,1 (1C, C3) ; 70,6 (1C, C4) ; 71,5 (1C, C5 ;101,1 (1C, C1).
RMN 31P (162 MHz, CD3OD) S (ppm) : 9,23 (s, H(PO)OH).
Le schéma de synthèse du composé de formule (111) (composé 4f) est présenté à
la Figure
7 annexée.
EXEMPLE 5: PREPARATION D'UN DERIVEPYROPHOSPHONATE DE FORMULE
(III)
1) SYNTHESE DU 2,3-O-ISOPROPYLIDENE-4,6-0-(CYCLOSULFATE)-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé 1g)
3,79 g de 2,3-O-isopropylidène-a-D-mannopyranoside de méthyle (16,18 mmol, 1
éq.),
6,75 mL de triéthylamine (48,54 mmol, 3 éq.) et 1,3 mL de chlorure de thionyle
(17,80 mmol, 1,1
éq.) sont mis à réagir dans 75 mL de CH2CI2 selon le même protocole que pour
le 2'-azidoéthyl-
2,3-O-isopropylidène-4,6-0-(cyclosulfate)-u-D-mannopyranose (composé 5a)
(Exemple 1). Le
sulfite brut (16,18 mmol, 1 éq.), 3,8 g de métapériodate de sodium (17,80
mmol, 1,1 éq.), 20 mL
d'eau et 14 mg de chlorure de ruthénium (0,06 mmol, 0,004 éq.) sont ensuite
mis à réagir dans 60
mL d'une solution CH2Cl2/CH3CN (1/1 v/v) selon le même protocole.
Rf : 0,48 (AcOEt/EP 3/7 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 297,65 [M+H]+ ; 319,23 [M+Na]+.
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2) SYNTHESE DU 6,7-DIDEOXY-DIMETHOXYPHOSPHINYL-2,3-0-
ISOPROPYLIDENE-4-SODIUMSULFATE-a-D-MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE
(Composé 2g)
Dans un bicol, 3,5 g de diméthylméthylphosphonate (28,37 mmol, 2 éq.), 3
gouttes de
1,1-diphényléthylène (indicateur coloré) et 10 mL de DMPU (40,53 mmol, 4 éq.)
sont dissous
dans 20 mL de THF anhydre, sous atmosphère d'argon. Le bicol est plongé dans
un bain à une
température de -80 C pendant 5 minutes. Un excès de BuLi est ensuite ajouté
goutte à goutte
jusqu'à obtention d'une coloration rouge persistante. 6 g de cyclosulfate
(20,27 mmol, 1 éq.)
préalablement dissous dans 40 mL de THF anhydre sont ajoutés goutte à goutte.
La solution
devient jaune après ajout de quelques gouttes. Le bain est ensuite maintenu à
une température de
-70/-80 C pendant 3 heures, puis pendant 14 heures à température ambiante. Le
mélange est
ensuite dilué dans du CH2C12, puis le produit est extrait par lavage à l'eau.
La phase aqueuse est
lavée avec du CH2C12 avant d'être lyophilisée. L'huile marron obtenue est
purifiée par
chromatographie sur gel de silice (CH2CI2/MeOH 9/1 v/v) pour donner une huile
jaune (1,84 g,
20%).
Rf : 0,28 (CH2CI2/MeOH 9/1 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 465,15 [M+Na]+
(ESI-/MeOH) m/z : 419,18 [M-Na]-.
RMN 'H (400,13 MHz, CD3OD) S (ppm) : 1,33, 1,51 (2s, 6H, H10) ; 1,89 et 2,17
(2m,
4H, H6 et H7) ; 3,35 (s, 3H, -OCH3) ; 3,62 (m, 1H, H5) ; 3,74 et 3,77 (2s, 6H,
Hg) ; 4,10 (d, 1H, J2-
1 = J2_3 = 5,2 Hz, H2) ; 4,23 (m, 2H, H3 et H4) ; 4,83 (s, 1H, Hl).
RMN '3C (100,62 MHz, CD3OD) S (ppm) : 21,00 et 25,28 (C6 et C7) ; 26,30 et
27,90
(C1o) ; 53,09 et 53,16 (C8) ; 55,43 (-OCH3) ; 68,60 (C5) ; 76,79 (C2) ; 77,93
et 78,56 (C3 et C4)
99,54 (Ci) ; 110,41 (C9).
RMN 31P (81,02 MHz, CD3OD) S (ppm) : 36,31.
3) SYNTHESE DU 6,7-DIDEOXY-PHOSPHINYL-a-D-MANNOPYRANOSIDE DE
METHYLE (Composé 3g)
1,8 g de 6,7-didéoxy-diméthoxyphosphinyl-2,3-O-isopropylidène-4-sodiumsulfate-
a-D-
mannopyranoside de méthyle (4,07 mmol, 1 éq.) sont tout d'abord mis à réagir
dans 15 mL d'un
mélange CH3CN/H20 (8/2 v/v) selon le protocole décrit pour le 2'-azidoéthyl-
2,3-O-
isopropylidène-a-D-mannopyranose (composé 4a) (Exemple 1). 1,1 g du produit
obtenu, une
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38
huile jaune (3,67 mmol, 1 éq.), sont mis à réagir avec 2,9 mL de pyridine
(36,77 mmol, 10 éq.) et
2,42 mL de bromure de triméthylsilane (18,33 mmol, 5 éq.) dans 12 mL de
dichlorométhane,
sous atmosphère d'argon. Après 8 heures d'agitation à température ambiante, le
mélange est
concentré et 10 mL de soude à O,1N sont alors ajoutés. L'agitation est
maintenue pendant 30
minutes. Les traces de pyridine sont éliminées par trois extractions à l'Et20,
puis la phase
aqueuse est acidifiée avec une solution de HCI à IN avant extraction trois
fois à l'Et20. Les
phases organiques sont rassemblées, séchées sur du Na2SO4, filtrées et
concentrées pour donner
une huile incolore (708 mg, 71 %).
Rf : 0,18 (CH2CI2/MeOH 8/2 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 295,12 [M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CD3OD) 6 (ppm) 1,94 et 2,17 (2m, 4H, H6 et H7) ; 3,36 (s,
3H,
-OCH3) ; 7,20 (m, 1 H, H5) ; 3,87 (m, 2H, H2 et H3) ; 4,32 (t, 1 H, J4.3 =
J4.5 = 9,2 Hz, H4) ; 4,64 (s,
1H, H1).
RMN 13C (100,62 MHz, CD3OD) 6 (ppm) : 20,93 et 25,03 (C6 et C7) ; 55,52 (-
OCH3)
70,33 (H5) ; 71,58 et 71,85 (C2 et C3) ; 78,48 (C4) ; 102,23 (C1).
RMN 31P (81,02, CD3OD) 8 (ppm) : 36,66.
4) SYNTHESE DU 6,7-DIDEOXY-PHOSPHINYL-2,3,4-O-ACETYL-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé 4g)
1,1 g de 6,7-didéoxy-phosphinyl-a-D-mannopyranoside de méthyle (2,74 mmol, 1
éq.) et
2 mL d'anhydride acétique (10,9 mmol, 4 éq.) sont mis à réagir dans 20 mL de
pyridine. Après 1
heure d'agitation à température ambiante, la solution est diluée dans du
CH2CI2, puis lavée avec
une solution de HCI à IN et de l'eau. La phase organique est séchée sur du
Na2SO4, filtrée et
concentrée pour donner une huile marron (850 mg, 64%).
Rf : 0,15 (CH2CI2/MeOH 8/2 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 421,87 [M+Na]+.
RMN 1H (400,13 MHz, CD3OD) 6 (ppm) : 1,90 et 2,21 (2m, 4H, H6 et H7) ; 2,01 et
2,11
(2s, 6H, Hb) ; 3,41 (s, 3H, -OCH3) ; 3,62 (m, 1 H, H5) ; 4,41 (t, 1 H, J4_3 =
J4_5 = 9,8 Hz, H4) ; 4,67
(s, I H, HI) ; 5,12 (m, I H, H2) ; 5,26 (dd, I H, J3_2 = 3,4 Hz, J3_4 = 9,8
Hz, H3).
RMN 13C (100,62 MHz, CD3OD) 6 (ppm) : 19,62 et 25,18 (C6 et C7) ; 20,73 et
20,85
(Cb) ; 55,66 (-OCH3) ; 70,63, 71,56, 72,87 (H2, C3 et C5) ; 75,73 (C4) ; 99,68
(Ci) ; 171,75,
172,26 (Ca).
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
39
RMN 31P (81,02, CD3OD) 8 (ppm) 36,31.
5) SYNTHESE DU 6,7-DIDEOXY-PYROPHOSPHINYL-2,3,4-O-ACETYL-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé 5g)
700 mg de 6,7-didéoxy-phosphinyl-2,3,4-O-acétyl-a-D-mannopyranoside de méthyle
(0,15 mmol, 1 éq.) sont dissous dans 8 mL de méthanol avant d'ajouter de la
dibutylamine (0,15
mmol, 1 éq.). Le mélange est laissé sous agitation à température ambiante
pendant 30 minutes. Le
solvant est ensuite évaporé, puis coévaporé avec de la pyridine anhydre pour
éliminer toute trace
d'eau. Le monosel phosphonique de dibutylamine obtenu est dissous dans 7 mL de
THF anhydre,
puis du chlorophosphate de diphényle (0,15 mmol, 1 éq.) et de la dibutylamine
(4,39 mmol, 3
éq.) sont successivement ajoutés. Le mélange est maintenu sous agitation à
température ambiante
sous atmosphère d'argon pendant 2 heures.
De la même manière, le monosel de dibutylamine d'orthophosphate est préparé :
l'acide
orthophosphorique (4,39 mmol, 3 éq.) est dissous dans 8 mL de méthanol, puis
de la
dibutylamine (4,39 mmol, 3 éq.) est ensuite ajoutée. Après 20 minutes
d'agitation à température
ambiante, les traces de pyridine sont éliminées par coévaporation à la
pyridine anhydre. Le
monosel de dibutylammonium d'orthophosphate (4,39 mmol, 3 éq.) est dissous
dans 8 mL de
pyridine anhydre, puis l'anhydride phosphonique activé est additionné
lentement. La solution est
maintenue sous agitation à température ambiante sous atmosphère d'argon
pendant 15 heures.
Les solvants sont ensuite évaporés, l'huile obtenue est purifiée par
chromatographie sur gel de
silice (IPrOH/NH4CI 9/1 v/v) pour donner une huile transparente (470 mg, 50%).
Rf : 0,12 (CH2C12/MeOH 8/2 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 421,87 [M+Na]+.
RMN 1H (400,13 MHz, CD3OD) S (ppm) : 1,74 et 2,00 (2m, 4H, H6 et H7) ; 2,02 et
2,10
(2s, 6H, Hb) ; 3,40 (s, 3H, -OCH3) ; 3,58 (m, 1 H, H5) ; 4,43 (t, 1 H, J4-3 =
J4-5 = 9,8 Hz, H4) ; 4,69
(s, 1H, H1) ; 5,13 (m, 1H, H2) ; 5,28 (dd, 1H, J3-2 = 3,4 Hz, J3-4 = 9,8 Hz,
H3).
RMN 13C (100,62 MHz, CD3OD) S (ppm) : 19,56 et 25,01 (C6 et C7) ; 20,73 et
20,85
(Cb) ; 55,69 (-OCH3) ; 70,63, 71,58, 72,87 (H2, C3 et C5) ; 75,71 (C4) ; 99,65
(C1) ; 171,75,
172,26 (Ca).
RMN 31P (81,02, CD3OD) 8 (ppm) : -9,9 et 8,4.
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
6) SYNTHESE DU 6,7-DIDEOXY-PYROPHOSPHINYL-a-D-MANNOPYRANOSIDE
DE METHYLE (Composé 6g)
470 mg de 6,7-didéoxy-phosphinyl-a-D-mannopyranoside de méthyle (0,89 mmol, 1
éq.)
sont déprotégés selon le protocole décrit pour le 2'-azidoéthyl-a-D-
mannopyranose (composé 3a)
(Exemple 1) dans 8 mL de méthanol et en présence de 190 mg de méthanolate de
sodium (3,55
mmol, 4 éq.), pour donner une huile blanche (297 mg, 80%).
Rf : 0,20 (IPrOH/NH4CI 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 441,57 [M+Na]+.
RMN'H (400,13 MHz, D20) b (ppm) : 1,97 (m, 1H, H7a) ; 2,36 (m, 1H, H7b) ; 2,99
(m,
1H, H6a) ; 3,13 (m, 1H, H6b) ; 3,37 (s, 3H, -OCH3) ; 3,78 (m, 1H, H5) ; 3,89-
3,96 (m, 2H, H2 et
H3) ; 4,45 (t, 1 H, J4-5 = J4-3 = 9,4 Hz, H4) ; 4,70 (s, l H, H 1).
RMN 13C (100,62 MHz, D20) 8 (ppm) :26,81 (C7) ; 47,60 (C6) ; 55,43 (-OCH3) ;
69,16
(C5) ; 69,94 (C3) ; 70,44 (C2) ; 79,03 (C4) ; 100,99 (CI).
RMN 31P (81,02, CD3OD) S (ppm) : -9,8 et 8,5.
Le schéma de synthèse du dérivé pyrophosphonate de formule (111) (composé 6g)
est
présenté à la Figure 8 annexée.
EXEMPLE 6: PREPARATION D'UN DERIVE PYROPHOSPHATE DE FORMULE (III)
Les composés lh, 2h et 3h sont préparés selon le mode opératoire décrit ci-
dessus (cf.
synthèse des composés le, 2e et 3e de l'exemple 3).
1) SYNTHESE DE L'ETHYL (6-DEOXY-6-PHOSPHATE-2,3,4-TRI-O-BENZYL-a-
D-MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé 4h)
100 mg de sucre (0,22 mmol, 1 éq.) et 750 mg de diéthyldiéthylphosphoramidite
(0,22
mmol, 1 éq.) sont dissous dans 2 mL de THF avant d'ajouter sous atmosphère
d'argon 290 L de
]H-tétrazole goutte à goutte. Après 4 heures d'agitation à température
ambiante, 600 mg d'acide
méta-chloroperbenzoïque (mCPBA) (3,47 mmol, 1,6 éq.) dissous au préalable dans
6 mL de
CH2CI2 sont ajoutés au mélange à une température de -78 C. L'agitation est
maintenue à cette
température pendant 10 minutes, puis à température ambiante pendant 10
minutes. Le mélange
réactionnel est dilué avec de l'AcOEt, puis lavé avec une solution de NaHCO3
saturée. La phase
organique est séchée sur du Na2SO4, filtrée, concentrée puis purifiée sur
colonne de silice
(AcOEt/EP 2/8 v/v) pour donner une huile transparente.
Rf : 0,45 (CH2CI2/MeOH 9/1 v/v).
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
41
SM (ESI+/MeOH) m/z : 623,13 [M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 1,21 (t, 6H, J8-7 = 7,1 Hz, H8) ; 2,80
(m, 1H,
H6a) ; 2,93 (m, 1 H, H6b) ; 3,29 (s, 3H, -OCH3) ; 3,78 (td, 1 H, J5-4 = J5-6a
= 9,3 Hz, J5-6b = 2,6 Hz,
H5) ; 4,03 (m, 4H, H7) ; 4,53 (s, 1H, H1) ; 4,55-4,64 (m, 6H, Ha) ; 5,00 (t,
1H, J4-5 = J4-3 = 9,9 Hz,
H4) ; 5,07 (dd, 1 H, J2-3 = 3,3 Hz, J2-1 = 1,7 Hz, H2) ; 5,15 (dd, 1 H, J3-2 =
3,4 Hz, J3-4 = 10,0 Hz,
H3) ; 7,17-7,31 (m, 15H, H ,d,e).
RMN 13C (100,62 MHz, CDC13) 5 (ppm) : 16,42 et 16,58 (C8) ; 32,63 (C6) ; 55,76
(-
OCH3) ; 64,03 et 64,10 (H7) ; 69,31 (C3 et C4) ; 69,97 (C2) ; 70,58 (C5) ;
98,84 (CI) ; 72,33, 73,01
et 75,34 (Ca) ; 127,64-128,56 (Cc,d,e) ; 138,30, 138,41 et 138,55 (Cb).
RMN 31P (81,02 CDC13) S (ppm) : 28,0.
2) SYNTHESE DU 6-DEOXY-6-PHOSPHATE-2,3,4-TRI-O-BENZYL-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé 5h)
Le composé 5h est préparé selon le mode opératoire décrit ci-dessus (cf.
Exemple 5,
synthèse du 6,7-didéoxy-phosphinyl-2,3,4-O-acétyl-a-D-mannopyranoside de
méthyle).
Rf : 0,23 (CH2CI2/MeOH 9/1 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 567,34 [M+Na]+.
RMN 1H (400,13 MHz, CDCl3) 8 (ppm) : 2,96 (m, 1 H, H6a) ; 3,23 (m, 1 H, H6b) ;
3,28 (s,
3H, -OCH3) ; 3,65 (td, 1H, J5-4 = J5-6a = 9,3 Hz, Js-6b = 2,6 Hz, H5) ; 4,51
(s, 1H, HI) ; 4,54-4,64
(m, 6H, Ha) ; 5,04 (t, 1 H, J4-5 = J4-3 = 9,9 Hz, H4) ; 5,04 (dd, 1 H, J2-3 =
3,3 Hz, J2-1 = 1,7 Hz, H2)
5,17 (dd, 1 H, J3-2 = 3,4 Hz, J3-4 = 10,0 Hz, H3) ; 7,18-7,32 (m, 15H,
Hc,d,e)=
RMN 13C (100,62 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 32,61 (C6) ; 55,78 (-OCH3) ; 69,33 (C3
et C4) ;
69,89 (C2) ; 70,56 (C5) ; 98,84 (C,) ; 72,36, 73,05 et 75,34 (Ca) ; 127,64-
128,53 (Ce,d,e) ; 138,33,
138,48 et 138,65 (Cb).
RMN 31P (81,02 CDC13) 8 (PPm) : 22,5.
3) SYNTHESE DU 6-DEOXY-6-PYROPHOSPHATE-2,3,4-TRI-O-BENZYL-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé 6h)
100 mg de 6-déoxy-6-phosphate-2,3,4-tri-O-benzyl-a-D-mannopyranoside de
méthyle
(0,52 mmol, 1 éq.) sont dissous dans 3 mL de THF anhydre, puis 85 L de
pyridine (1,03 mmol,
2 éq.) et 52 pL de POCI3 (0,57 mmol, 1,1 éq.) sont ajoutés à une température
de 0 C sous
atmosphère d'argon. L'agitation est maintenue à une température de 0 C pendant
4 heures,
quelques mL d'une solution de NaHCO3 saturée sont ajoutés toujours à une
température de 0 C,
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
42
et le mélange est agité pendant encore 15 minutes. Le milieu réactionnel est
ensuite lyophilisé,
puis purifié sur colonne de silice (CH2CI2/MeOH 9/1 v/v) pour donner une huile
blanchâtre (35
mg, 30%).
Rf : 0,12 (CH2CI2/MeOH 8/2 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 647,78 [M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) S (ppm) : 2,96 (m, 1H, H6a) ; 3,23 (m, 1H, H6b) ;
3,28 (s,
3H, -OCH3) ; 3,65 (td, 1H, J5-4 = J5-6a = 9,3 Hz, J5-6b = 2,6 Hz, H5) ; 4,51
(s, 1H, H1) ; 4,54-4,64
(m, 6H, Ha) ; 5,04 (t, 1 H, J4-5 = J4-3 = 9,9 Hz, H4) ; 5,04 (dd, 1 H, J2-3 =
3,3 Hz, J2-1 = 1,7 Hz, H2)
5,17 (dd, 1 H, J3-2 = 3,4 Hz, J3-4 = 10,0 Hz, H3) ; 7,18-7,32 (m, 15H,
Hc,d,e)=
RMN 13C (100,62 MHz, CDCI3) 8 (ppm) : 32,61 (C6) ; 55,78 (-OCH3) ; 69,33 (C3
et C4) ;
69,89 (C2) ; 70,56 (C5) ; 98,84 (C1) ; 72,36, 73,05 et 75,34 (Ca) ; 127,64-
128,53 (Cc,d,e) ; 138,33,
138,48 et 138,65 (Cb).
RMN 31P (81,02 CDCI3) 8 (ppm) : -6,78 et 7,34.
4) SYNTHESE DU 6-DEOXY-6-PYROPHOSPHATE-a-D-MANNOPYRANOSIDE
DE METHYLE (Composé 7h)
Le composé 7h est préparé selon le mode opératoire décrit ci-dessus (cf.
Exemple 5,
synthèse du 6,7-didéoxy-pyrophosphinyl-2,3,4-O-acétyl-a-D-mannopyranoside de
méthyle).
Rf : 0,12 (IPrOH/NH4CI 7/3 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z: 377,91 [M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CD3OD) 8 (ppm) : 3,44 (s, 3H, H-ocH3) ; 3,64 (m, 1H, H5) ;
3,67
(t, 1H, J4-3 = J4-5 = 10,0 Hz, H4) ; 3,77 (m, 1H, H6a) ; 3,80 (d, 1H, J2-1 =
J2-3 = 5,6 Hz, H2) ; 3,91
(d, 1H, J1-2 = 1,6 Hz, H1) ; 3,96 (dd, 1H, J6b-5 = 1,8 Hz, J6b-6a = 9,8 Hz,
H6b) ; 3,97 (dd, 1H, J3-2 =
1,6 Hz, J3-4 = 3,2 Hz, H3).
RMN 13C (100,62 MHz, CD3OD) 8 (ppm) : 58,59 (CO ; 64,42 (C4) ; 67,57 (C3) ;
68,19
(C2) ; 70,19 (C5) ; 98,51 (C1).
RMN 31P (81,02 CDCI3) 8 (ppm) : -6,53 et 8,62.
Le schéma de synthèse du dérivé pyrophosphate de formule (III) est présenté à
la Figure 9
annexée.
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
43
EXEMPLE 7: PREPARATION D'UN COMPOSE DE FORMULE (II)
1) SYNTHESE DU 6-DESOXY-6-AZIDO-D-MANNOPYRANOSYL-(1,6)-6-DESOXY-
6-AZIDO-D-MANNOPYRANOSYL-(1,4)-D-MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE
A 2,35 g de mono-2,3-isopropylidène-mannopyranoside de méthyle (0,01 mole, 1
éq.)
dissous dans 40 mL de THF anhydre sont ajoutés 12 g de trichloroacétimidate
(0,03 mole, 3 éq.).
La solution est ensuite refroidie à une température de 0 C, avant que 30 mL
(0,28 mole) de
BF3Et2O soient ajoutés goutte-à-goutte, sous atmosphère d'argon. Le mélange
réactionnel est
ensuite maintenu à température ambiante et laissé sous agitation pendant toute
une nuit. Une fois
la réaction terminée, le mélange réactionnel est lavé successivement avec 2
fois 80 mL d'une
solution aqueuse saturée de NaHCO3, puis avec 2 fois 80 mL d'eau distillée. La
phase organique
est séchée avec du Na2SO4, filtrée et évaporée sous pression réduite. Le
résidu obtenu est
chromatographié sur gel de silice en utilisant un mélange de CH2CI2/MeOH comme
éluant. Le
produit obtenu est une poudre blanche (5 g, rendement 80%).
Rf : 0,5 (CH2CI2/MeOH : 8/2 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 661,7 [M+Na]+ ; 661,7 [M+H]+.
3,3 g de trisaccharide (5 mmol, 1 éq.) et 2,1 mL de triéthylamine (15 mmol, 3
éq.) sont
dissous dans 25 mL de CH2CI2. Le ballon est placé dans un bain de glace et 3,5
mL de chlorure
de thionyle (5,5 mmol, 1,1 éq.) sont ajoutés lentement. Un précipité blanc de
chlorure de
triéthylammonium apparaît rapidement et le mélange réactionnel devient
progressivement jaune.
Après 5 minutes d'agitation à une température de 0 C, le produit de départ a
disparu, le sulfite
désiré est obtenu. Le mélange est filtré, la phase organique est lavée avec de
l'eau distillée, une
solution de HCI à IN, puis à nouveau de l'eau. Elle est ensuite séchée sur du
Na2SO4, filtrée et
concentrée pour donner un solide brun directement remis en réaction.
Formation du sulfate :
Le sulfite brut (5 mmol, 1 éq.,) est dissous dans 20 mL d'un mélange
CH2C12/CH3CN (1/1
v/v). 1,17 g de métapériodate de sodium (5,5 mmol, 1,1 éq.), 5 mL d'eau et
trois grain de
chlorure de ruthénium sont ajoutés successivement. La réaction est
exothermique, un précipité de
Na103 se forme très rapidement. Après 1 heure d'agitation à température
ambiante, I.e sulfite a été
consommé, le mélange réactionnel est filtré et dilué dans 200 mL de CH2CI2. La
phase organique
est lavée avec une solution de NaHCO3 à 5%, de l'eau distillée, puis séchée,
filtrée et concentrée.
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
44
Le solide obtenu est dissous dans un minimum de CH2CI2 et filtré sur silice.
La silice est rincée
plusieurs fois avec du CH2CI2. Un solide blanc est obtenu (2,8 g, 70%).
Formation du di-azido protégé :
823 mg de sulfate cyclique (0,15 mmol, 1 éq.) et 200 mg d'azide de sodium
(0,31 mmol, 2
éq.) sont dissous dans 10 mL de DMF. Après 4 heures d'agitation à température
ambiante, le
mélange réactionnel est dilué dans 50 mL de NaHCO3 à 5% et repris avec 100 mL
de CH2C12,
lavé à l'eau, séché sur du Na2SO4, puis évaporé. La poudre obtenue est
dissoute dans 10 mL de
méthanol, puis traitée avec 2 mL de résine Amberlite H+. Après évaporation du
solvant, 800 mg
de poudre jaune sont isolés et chromatographiés sur gel de silice avec un
gradient d'élution
(CH2C12 jusqu'à CH2CI2/MeOH 6/4 v/v) pour donner une poudre blanche (rendement
de 80%).
Rf : 0,67 (CH2CI2/MeOH 6/4 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z : 688,7 [M+H]+ ; 710,7 [M+Na]+.
(ESI-/MeOH) m/z : 687,7 [M-H]-.
Le schéma de synthèse du composé de formule (I1) exemplifié est présenté à la
Figure 10
annexée.
EXEMPLE 8: PREPARATION D'UN COMPOSE DE FORMULE (III)
1) SYNTHESE DU 6-DEOXY-6-IODO-a-D-MANNOPYRONOSIDE DE METHYLE
(Composé li)
Une solution de 25 mL de THF anhydre contenant 4,90 g (19,3 mmol, 1,5 éq.) de
diiode est
ajoutée, goutte à goutte, sous azote, à une solution de THF anhydre à reflux
contenant 100 mL de THF
anhydre contenant 2,5 g (12,8 mmol - léq.) de a-D-mannopyranoside de méthyle,
5 g (19,3 mmol - 1,5
éq.) de Pcp3 et 1,75 g (25,7 mmol - 2 éq.) d'imidazole. Après 3 heures de
réaction à reflux, le mélange est
refroidi à température ambiante, les sels d'imidazole sont filtrés et après
concentration du filtrat, le brut
réactionnel est directement purifié par chromatographie sur colonne de gel de
silice (CH2CI2/MeOH 9/1
v/v). Le produit est ensuite recristallisé dans Et20 pour donner des cristaux
blancs (85%).
Rf : 0,25 (CH2C12/MeOH 9/1 v/v).
Pf: 118-120 C.
SM (ESI+/CH3CN-H2O-CF3CO3H) m/z : 305,0 [M+H]+, 327,0 [M+Na]+, 609,0 [2M+H]+,
(ESI-/CH3CN-H2O-CF3CO3H) m/z : 339,2 [M+Cl]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CDCl3) 6 (ppm) : 3,26 (dd, 1H, J6a-5= 7,0 Hz, ha-6b= 10,9
Hz, H6a) ; 3,32
(s, 3H, -OCH3) ; 3,32-3,36 (m, 1 H, H5) ; 3,45 (t, 1 H, J4-3 = J4-5 = 9,4 Hz,
H4) ; 3,5 (dd, 1 H, J6b-5 = 2,2 Hz,
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
J6b-6a = 10,9 Hz, H6b) ; 3,65 (dd, I R J3-2 = 3,4 Hz, J3-4 = 9,5 Hz, H3) ;
3,82 (dd, 1 H, J 1-2 = 1,7 Hz, J2-3 = 3,4
Hz, H2) ; 6,10 (d, 1H, J1-2= 1,5 Hz, H1).
RMN 13C (100,62 MHz, CDCI3) 5 (ppm) : 6,31 (C6) ; 55,08 (-OCH3) ; 69,86 (C2) ;
70,14 (C3) ;
70,66 (C4) ; 71,59 (C5) ; 101, 10 (C1).
[a]D : + 67,5 (c = 1,00 g/100 mL, MeOH).
2) SYNTHESE DU 6-DESOXY-6-IODO-2,3,4-TRI-O-BENZYL-a-D-
MANNOPYRANOSIDE DE METHYLE (Composé 2i)
4,37 g de 6-déoxy-6-iodo--D-mannopyranoside de méthyle (14,34 mmol, 1 éq.)
sont dissous
dans 100 mL de DMF anhydre avant d'ajouter 8,5 mL de bromure de benzyle (71,72
mmol, 5 éq.). 1,7 g
de NaH (71,72 mmol, 5 éq.) sont ensuite ajoutés par petites fractions pendant
l heure. Après 4 heures de
réaction, 5 mL de MeOH sont ajoutés et le mélange est dilué dans de l'éther
Et,O avant lavage à l'eau. La
phase organique est relavée plusieurs fois à l'eau, séchée puis concentrée.
Une purification par
chromatographie sur colonne de silice (AcOEt/EP 4/6 v/v) permet d'obtenir le
produit sous forme d'une
huile jaune (3,57 g, 44%).
Rf : 0,42 (EP/AcOEt 8/2 v/v).
SM (ESI ESI+/CH3CN-H2O-CF3CO3H) m/z: 543,1 [M-OCH3]+, 592,2 [M+NH4]+, 597,1
[M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 3,31-3,43 (m, 1H, H6a) ; 3,38 (s, 3H, -
OCH3) ; 3,47-
3,59 (m, 2H, H5 et H6b) ; 3,76-3,80 (m, 2H, H2 et H4) ; 3,90 (dd, 1 H, J3-2 =
2,9 Hz, J3-4 = 9,2 Hz, H3) ; 4,61
(s, 2H, Ha) ; 4,74 (d, 2H, J = 12,2 Hz, Na) ; 4,76 (d, 1H, J1_, = 1,5 Hz, H1)
; 4,84 (d, 2H, J = 11,0 Hz, Ha) ;
7,28-7,41 (m, 15H, 15Hc,d,e).
RMN '3C (100,62 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 7,01 (C6) ; 55,05 (-OCH3) ; 71,48 (C5) ;
72,09, 72,73
(2 Ca) ; 74,56 (C2) ; 75,44 (Ca) ; 78,52 (C4) ; 79,87 (C3) ; 99,05 (C1) ;
127,66, 127,82, 128,06, 128,33,
128,40 (15C, C,,d,e) ; 138,11 (Cb) ; 138,24 (2Cb).
[aID : + 28,0 (c = 1,00 g/100 mL, CHC13).
3) SYNTHESE DU (3R,4R,5S,6R)-3,4,5-TRIS(BENZYLOXY)-TETRAHYDRO-6-
METHOXYPYR-2-ENE (Composé 3i)
1 g de 6-désoxy-6-iodo-2,3,4-tri-O-benzyl-a-D-mannopyranoside de méthyle (1,74
mmol, 1 éq.)
et 2,6 mL de DBU (17,4 mmol, 10 éq.) sont mis en réaction sous argon dans 20
mL de DMF. Après 3
heures et demi de réaction à 80 C, la solution est refroidie à température
ambiante, diluée dans de l'AcOEt
et lavée avec une solution de NaHCO3 saturée. La phase organique est ensuite
lavée à l'eau, séchée,
concentrée et purifiée par chromatographie sur colonne de silice (AcOEt/EP 2/8
v/v) pour donner une
huile marron (430 mg, 56%).
Rf : 0,34 (AcOEt/EP 5/5 v/v).
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
46
SM (ESI+/MeOH) : m/z 469,34 [M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) 5 (ppm) : 3,62 (s, 3H, -OCH3) ; 3,99 (dd, 1H, J2_,
= 2,6 Hz, J2-3 =
8,2 Hz, H2) ; 4,02 (m, 2H, H4 et 1Ha) ; 4,17 (d, 2H, J = 10,2 Hz, Ha) ; 4,34-
4,62 (m, 4H, Ha), 4,94 (dd, 1H,
J3.2 = 1,2 Hz, J3_4 = 5,1 Hz, H3) ; 4,73 (d, 1H, J1_2 = 2,2 Hz, H,) ; 4,82,
4,90 (2m, 2H, H6) ; 7,18-7,32 (m,
15H, Hc,d,e)=
RMN 13C (100,62 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 55,52 (-OCH3) ; 72,27, 72,91 et 74,66
(3Ca) ; 74,34
(C3) ; 76,08 (C2) ; 79,18 (C4) ; 82,34 (CO ; 99,43 (C,) ; 127,59-129,11
(Cc,d,e) ; 137,73, 138,02, 140,12
(3Cb et C5)-
4) SYNTHESE DU (3R,4R,5S,6R)-3,4,5-TRIS(BENZYLOXY)-TETRAHYDRO-6-
METHOXYPYRAN-2-ONE (Composé 4i)
1,13 g de (3R,4R,5S,6R)-3,4,5-tris(benzyloxy)-tetrahydro-6-methoxypyr-2-ène
(2,53 mmol, l éq.)
sont mis en solution dans 500 mL de tBuOH avant d'ajouter 1,3 g de K2CO3 (8,36
mmol, 3,3 éq.) dissous
au préalable dans 100 mL d'eau. 0,12 g de K1vInO4 (0,76 mmol, 0,3 éq.) en
solution dans 100 mL d'eau et
406 mg de Na104 (1,90 mmol, 0,75 éq.) en solution dans 100 mL d'eau sont
ensuite ajoutés. Après lh
d'agitation à température ambiante, la solution est extraite au CH2CI2, la
phase organique est séchée,
concentrée et purifiée sur colonne de silice (AcOEt/EP 5/5 v/v). Le produit
est obtenu sous forme d'une
huile jaune pâle (1,07 g, 94%).
Rf : 0,55 (AcOEt/EP 6/4 v/v).
SM (ESI+/MeOH) : m/z 471,18 [M+Na]+.
RMN'H (400,13 MHz, CDCl3) 8 (ppm) : 3,54 (s, 3H, -OCH3) ; 3,73 (dd, 1 H, J2_1
= 2,7 Hz, J2_3 =
8, l Hz, H2) ; 4,01 (m, 2H, H4 et 1 Ha) ; 4,15 (d, 2H, J = 10,4 Hz, Ha) ; 4,96
(dd, 1 H, J3_2 = 1,0 Hz, J3_4 = 5,0
Hz, H3) ; 4,76 (d, 1H, J1_2 = 2,6 Hz, HI); 7,20-7,29 (m, 15H, Hed,e).
RMN 13C (100,62 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 55,51 (-OCH3) ; 72,27, 72,91 et 74,66
(3Ca) ; 74,17
(C5) ; 74,36 (C3) ; 76,00 (C2) ; 79,15 (C4) ; 99,42 (CI); 127,61-128,41
(Ce,d,e) ; 137,73, 138,02 (3Cb).
5) SYNTHESE DU (3R,4R,5S,6R)-3,4,5-TRIS(BENZYLOXY)-TETRAHYDRO-6-
METHOXYPYRAN-2-OL (Composé 5i)
1,07 g de (3R,4R, 5 S,6R)-3,4,5 -tri s(benzyl oxy)-tétrahydro-6-méthoxypyran-2-
one (2,39 mmol, 1
éq.) sont mis à réagir avec 1 80 mg de NaBH4 (4,78 mmol, 2 éq.) dans 25 mL de
MeOH. Après 16 heures
d'agitation à température ambiante, 2 mL d'eau sont ajoutés et la solution est
ensuite concentrée. Une
chromatographie sur colonne de gel de silice (AcOEt/EP 5/5 v/v) permet
d'obtenir le produit sous forme
d'une huile jaune (1 g, 94%).
Rf 0,55 (AcOEt/EP 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) m/z 473,67 [M+Na]+
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
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RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 3,49 (s, 3H, -OCH3) ; 3,60 (dd, 1H, J2_1
= 1,2 Hz, J2_3 =
6,8 Hz, H2) ; 3,82 (m, 2H, H4 et 1Ha) ; 4,00 (d, 1H, J = 10,4 Hz, 1Ha) ; 4,10
(dd, 1H, J3_2 = 1,0 Hz, J3-4 =
5,0 Hz, H3) ; 4,31 (t, 1H, J5.4 = J5.6 = 6,2 Hz, H5) ; 4,38-4,78 (m, 4H, Ha) ;
4,77 (d, 1H, J1.2 = 2,6 Hz, H1) ;
7,18-7,31 (m, 15H, Hc,d,e).
RMN 13C (100,62 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 57,40 (-OCH3) ; 73,60, 74,23, 74,86
(3Ca) ; 76,65 (C3)
78,61 (C2) ; 79,12 (C4) ; 100,56 (C1) ; 127,97-128,64 (Ced,e) ; 137,14, 137,89
(3Cb).
6) SYNTHESE DU (3R,4R,5S,6R)-3,4,5-TRIS(BENZYLOXY)-TETRAHYDRO-6-
OXYDIISOPROPYLPHOSHONYLMETHOXYPYRANE (Composé 6i)
640 mg de (3R,4R,5S,6R)-3,4,5-tri s(benzyloxy)-tétrahydro-6-méthoxypyran-2-ol
(1,43 mmol, 1
éq.) sont dissous dans 6,4 mL de DMF pour former une solution très visqueuse.
14 mg de Lil (0,10 mmol,
0,07 éq.) et 241 mg de tBuOK (2,14 mmol, 1,5 éq.) sont ensuite ajoutés, la
solution devient liquide. Sous
argon, 482 mg de phosphonate (1,86 mmol, 1,3 éq.) dissous au préalable dans
3,2 mL de DMF sont
ajoutés au mélange goutte à goutte. La réaction est laissée 10 minutes sous
agitation à température
ambiante puis chauffée pendant 3 heures à 60 C. Après refroidissement, le
mélange est dilué dans
l'AcOEt et lavé avec une solution de NaCI saturée. La phase organique est
séchée sur Na2SO4, filtrée,
concentrée et purifiée sur colonne de silice (AcOEt/EP 8/2 v/v) pour donner
une huile incolore (698 mg,
78%).
Rf : 0,45 (AcOEt/EP 8/2 v/v).
SM (ESI+/MeOH) : m/z 651,90 [M+Na]+.
RMN 'H (400,13 MHz, CDC13) 8 (ppm) : 1,35 (d, 8H, J8_7 = 6,0 Hz, H8) ; 3,22
(s, 2H, H6) ; 3,55
(s, 3H, -OCH3) ; 3,66 (dd, 1H, J2., = 1,2 Hz, J2.3 = 6,4.Hz, H2) ; 3,89 (m,
2H, H4 et ]Ha) ; 4,06 (d, 2H, J =
10,4 Hz, Ha) ; 4,16 (dd, 1H, J3.2 = 1,2 Hz, J3.4 = 6,0 Hz, H3) ; 4,37 (t, 1H,
J5.4 = J5.6 = 6,2 Hz, H5) ; 4,44-
4,84 (m, 6H, Ha, H, et H7) ; 7,26-7,36 (m, 15H, Hc,de).
RMN 13C (100,62 MHz, CDCl3) 8 (ppm) : 17,99 (C6) ; 23,78, 23,83, 23,97, 24,01
(C8) ; 56,94 (-
OCH3) ; 69,47, 71,95 et 72,67 (3Ca) ; 72,10 et 72,17 (C7) ; 73,12 (C5) ; 75,27
(C3) ; 75,92 (C2) ; 77,17 (C4)
; 102,86 (CI); 127,53-128,46 (C,,d,e) ; 137,23, 138,35 (3Cb).
7) SYNTHESE DU (3R,4R,5S,6R)-3,4,5-TRIS(BENZYLOXY)-TETRAHYDRO-6-
OXYPHOSHONYLMETHOXYPYRANE (Composé 7i)
700 mg de (3R,4R,5S,6R)-3,4,5-tris(benzyloxy)-tétrahydro-6-
oxydiisopropylphosphonyl-
méthoxypyrane (1,12 mmol, 1 éq.) sont mis à réagir dans 20 mL de CH2CI2 avec
900 L de pyridine (11,2
mmol, 10 éq.) et 813 L de TMSBr (5,59 mmol, 5 éq.). Après 16 heures
d'agitation à température
ambiante, le mélange est dilué dans de l'AcOEt, puis lavé à l'eau. La phase
organique est séchée et
concentrée. L'huile transparente obtenue est assez pure pour être remise
directement en réaction. Le
phosphonate protégé dissous dans 30 mL d'un mélange MeOH/THF 1/1 v/v, dégazé
au préalable sous
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argon, est mis à réagir avec du Pd/C sous atmosphère de H2. Après 18 heures de
réaction, la solution est
filtrée puis concentrée. Le produit est obtenu sous forme d'une huile blanche
(43% sur les 2 étapes).
Rf : 0,15 (Isopropanol, NH4OH 5/5 v/v).
SM (ESI+/MeOH) : m/z 277,64 [M+Na]+.
RMN'H (400,13 MHz, D20) S (ppm) : 3,25 (s, 3H, -OCH3) ; 3,48 (m, 2H, H4 et H5)
; 3,60 (m,
2H, H3 et H6a) ; 3,76 (m, 1H, H6b) ; 3,77 (dd, 1H, J2_1 = 1,8 Hz, J2-3= 3,4
Hz, H2) ; 4,61 (d, 1H, JI -2= 2,0
Hz, HI).
RMN 13C (100,62 MHz, D20) 8 (ppm) : 54,61 (-OCH3) ; 60,86 (C6) ; 66,67 (C4) ;
69,82 (C2)
70,44 (C3) ; 72,45 (C5) ; 100,76 (C,).
RESULTATS BIOLOGIQUES :
A- Sur anneaux d'aorte de rat
Les effets biologiques des composés de l'invention sur l'angiogenèse ont été
testés selon
une technique bien connue de l'homme du métier : la technique des anneaux
d'aorte de rat
(Nicosia et al., M. Am. J. Pathol., 1994 Nov ; 145(5) : 1023-9). Cette
approche est rapide et
consiste à placer un anneau d'aorte de rat d'un millimètre d'épaisseur dans un
système de culture
en trois dimensions formé à partir d'un réseau de collagène de type 1. Les
aortes sont obtenues
chez des rats Sprague-Dawley et cultivées pendant 9 à 11 jours en présence ou
non des composés
à tester. L'angiogenèse est ensuite appréciée en évaluant le nombre, la taille
et l'organisation des
bourgeons vasculaires progressant dans le lattis de collagène.
Les histogrammes des Figures 12a et l2b représentent l'effet néo-angiogénique
in vitro
(modèle de Nicosia) de différents composés de l'invention
- Contrôle : aorte non traitée,
- Composé 111 (composé 4f) : aorte traitée avec un composé de formule (III)
dans lequel Z
est -X-HP(O)OH, X est un atome d'oxygène et R2 est un groupement méthyle
(synthétisé
selon l'exemple 4),
- Composé II : aorte traitée avec un composé de formule (11) dans lequel
n
Y H O X
n'
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X est un atome d'oxygène, n = 1, n' = 2 et n" = 0, et RI = R'1 _ -N3,
- Composé 111 (composé 7e) : aorte traitée avec un composé de formule (111)
dans lequel Z
est -CH2-B(OH)2 et R2 est un groupement méthyle (synthétisé selon l'exemple
3),
- Composé I : aorte traitée avec un composé de formule (1) dans lequel A est
une
nanoparticule d'or, Ri = -COOH et m = 5, et
- Référence : aorte traitée avec du sunitinib : le Sutent (commercialisé par
Pfizer)
répondant à la formule
(CH3
CH3
p Nom/
H3C
NH
F N CH3
H
O
N
H
B- Sur cellules endothéliales
Des cellules endothéliales dermiques humaines (15 000/puits) sont traitées
avec différents
composés répondant à la définition de l'invention pendant 48 heures.
Au terme de ce traitement, le nombre de cellule est estimé grâce à l'activité
des succinates
déshydrogénases (test au MTT, Mosmann T. J., Immunol. Methods, 1983 Dec. 16 ;
65(1-2) : 55-
63). Les résultats montrent que le traitement des cellules avec les composés
de l'invention à trois
doses différentes (10"2 mol.L-', 10-4 mol.L-' et 10-6 mol.L-1) n'a pas d'effet
cytotoxique sur les
cellules endothéliales.
L'histogramme de la Figure 13 représente l'effet cytotoxique de différents
composés
- Contrôle : cellules non traitées,
- Composé III (composé 4f) : cellules traitées avec un composé de formule
(111) dans lequel
Z est -X-HP(O)OH, X est un atome d'oxygène et R2 est un groupement méthyle
(synthétisé selon l'Exemple 4),
- Composé II : cellules traitées avec un composé de formule (11) dans lequel
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
n
Y = H O n.. X
ho
X est un atome d'oxygène, n = 1, n' = 2, n" = 0, et Ri = R'1 _ -N3,
- Composé 1 : cellules traitées avec un composé de formule (1) dans lequel A
est une
nanoparticule d'or, RI _ -COOH et m = 5, et
- Composé III (composé 7e) : cellules traitées avec un composé de formule
(I11) dans lequel
Z est -CH2-B(OH)2 et R2 est un groupement méthyle (synthétisé selon l'Exemple
3).
C- Sur souris présentant un mélanome B16
Un mélanome est induit sur une souris par injection sous-cutanée de cellules
tumorales
(cellules B16). La tumeur se développe dans les 10 jours en position sous-
cutanée (face ventrale
de la cuisse). La taille de la tumeur est mesurée au pied à coulisse et son
volume estimée selon la
formule V = L x 1 x 1, dans laquelle L représente la longueur et 1 représente
la largeur. Différents
composés de l'invention ont été administrés à des souris ayant reçu des
cellules de mélanomes
syngéniques (B 16) à une dose de 300 mg/kg.
Les différents composés testés sont les suivants
- Contrôle : souris non traitées,
- M6P : souris traitées avec du mannose-6-phosphate (M6P),
- Composé III (composé 4f) : souris traitées avec un composé de formule (III)
dans lequel Z
est -X-HP(O)OH, X est un atome d'oxygène et R2 est un groupement méthyle
(synthétisé
selon l'Exemple 4),
- Composé III (composé 7e) : souris traitées avec un composé de formule (III)
dans lequel
Z est -CH2-B(OH)2 et R2 est un groupement méthyle (synthétisé selon l'Exemple
3),
- Composé II : cellules traitées avec un composé de formule (I1) dans lequel
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51
O
n
Y H O X
hio
X est un atome d'oxygène, n = 1, n' = 2, n" = 0, et R2 = R'2 = -N3,
Composé I : cellules traitées avec un composé de formule (1) dans lequel A est
une
nanoparticule d'or, RI = -COOH et m = 3.
Le taux de survie des souris en fonction du nombre de jours de traitement est
représenté
sur le graphe de la Figure 14 annexée.
L'évolution de la croissance tumorale en fonction du nombre de jours de
traitement est
représentée sur le graphe de la Figure 15 annexée.
Nous avons observé une forte inhibition (65%) de la croissance tumorale dans
le groupe
de souris traité avec le composé 7f de formule (111) de l'invention, une
inhibition de 40% dans le
groupe de souris traité avec le composé 4e de formule (I1I) de l'invention, et
une inhibition de
30% dans le groupe de souris traité avec le composé de formule (1) de
l'invention. Parallèlement,
aucune mortalité n'est observée dans le groupe de .souris traité avec le
composé 7f de formule
(III) de l'invention après 18 jours de traitement, en comparaison au groupe de
souris non traité
(40% de mortalité).
D- Activité angiogénique sur membrane chorioallantoïdienne (CAM)
Sur les photographies de la Figure 16 annexée, on peut observer les résultats
obtenus lors
d'un test classique d'étude de l'angiogénèse in vivo réalisé sur la membrane
chorioallantoïdienne
(CAM) d'embryon de poulet.
Les différents composés testés sont les suivants
- Contrôle : souris non traitées,
- Référence : souris traitées avec le Sutent ,
- M6P : souris traitées avec du mannose-6-phosphate (M6P),
- Composé I : cellules traitées avec un composé de formule (1) dans lequel A
est une
nanoparticule d'or, RI = -N3 et m = 5,
- Composé IIa cellules traitées avec un composé de formule (II) dans lequel
WO 2011/058245 PCT/FR2010/000749
52
n
Y H O X
n"
O
n'
X est un atome d'oxygène, n = 1, n' = 2, n" = 0, et Ri = R'1 _ -N3,
- Composé IIb : cellules traitées avec un composé de formule (II) (composé de
l'exemple 7)
dans lequel
O
Y = i0 0
HO
OR2
R, = R', = -N3, et R2 est un groupement méthyle,
- Composé III (composé 4f) : souris traitées avec un composé de formule (111)
dans lequel Z
est -X-HP(O)OH, X est un atome d'oxygène et R2 est un groupement méthyle
(synthétisé
selon l'Exemple 4),
- Composé 111 (composé 7e) : souris traitées avec un composé de formule (III)
dans lequel
Z est -CH2-B(OH)2 et R2 est un groupement méthyle (synthétisé selon l'Exemple
3).
Les composés de l'invention présentent un fort effet inhibiteur, ainsi que des
effets
secondaires considérablement amoindris par rapport à ceux de la référence. Les
composés de
l'invention présentent également une activité anti-angiogénique supérieure à
celle du M6P.
