Note: Descriptions are shown in the official language in which they were submitted.
WO 2022/029140 PCT/EP2021/071696
1
HYDROGEL COMPRENANT DU GLYCEROL ET UN CARBOMERE POUR LE TRAITEMENT PAR VOIE
NASALE
DES SYMPTOMES RESPIRATOIRES DE LA MALADIE COVID-19
Domaine Technique
La présente invention concerne un produit pour le traitement par voie nasale
de
maladies virales, notamment le COVID-19. Ce produit comprend un hydrogel à
base
d'eau, de glycérol et d'un carbomère.
Technique antérieure
Le traitement des infections virales respiratoires par pulvérisation nasale
d'une
composition liquide comprenant un mélange de kappa-carragénane, de chlorure de
sodium et de sorbitol a été décrit dans la demande WO 2017/009351. Cependant,
les concentrations en chlorure de sodium dans les produits proposés sont très
élevées, et provoquent une irritation de la muqueuse nasale qui est très
préjudiciable
lorsque la muqueuse est fragilisée par une infection. De plus, sous la force
du jet, la
pulvérisation de la composition propulse les virus présents dans les fosses
nasales
vers les voies pulmonaires, et risque d'aggraver la maladie à traiter.
Le besoin subsiste de disposer d'un traitement viral par voie nasale plus
efficace.
Description générale de l'invention
L'invention répond à ce besoin en proposant un produit comprenant un hydrogel
essentiellement constitué d'eau, de glycérol et d'un carbomère.
Dans la présente description, on entend par essentiellement dépourvu une
quantité inférieure à 0.1% en masse, de préférence inférieure à 0.05% en masse
et
de préférence encore inférieure à 0.01% en masse, les pourcentages étant
exprimés
soit par rapport à la masse de l'hydrogel, soit par rapport à la masse du
produit selon
le cas.
Il a été découvert de façon surprenante que le produit selon l'invention
permet de
soigner et d'éviter les maladies virales.
Le produit de l'invention permet avantageusement de limiter l'infection en
créant un
film qui empêche le virus de se fixer sur les cellules de la muqueuse nasale
et qui
empêche également d'amorcer le cycle d'infection et de réplication. Le produit
empêche le virus de pénétrer les cellules de l'épithélium nasal et de les
infecter. Il
permet également de favoriser l'hydratation de la muqueuse nasale inflammée,
sans
perturber l'élimination du mucus.
Le produit permet ainsi de limiter l'entrée du coronavirus par le nez, et de
limiter sa
dissémination dans les voies respiratoires, notamment dans la trachée et les
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
2
poumons, lors de l'inspiration. Il permet d'éviter une aspiration des
sécrétions
contaminantes provenant des voies respiratoires supérieures, dans les poumons.
L'épithélium des voies nasales est protégé de la déshydratation et des virus
inhalés
par la sécrétion de mucus, qui constitue une barrière physique et un filtre
pour
empêcher les corps étrangers d'atteindre les alvéoles pulmonaires. Le produit
de
l'invention permet de protéger les cellules ciliées de l'infection, sans
bloquer la
sécrétion de mucus par les cellules calciformes. Enfin, il n'augmente pas la
consistance du mucus et ne perturbe pas son évacuation.
Le traitement de la maladie est efficace dès les premiers jours de l'infection
et il est
1.0 facile à appliquer.
De nombreuses maladies virales, dont la maladie COVID-19, se manifestent
principalement par une atteinte pulmonaire des bronches, des bronchioles et
des
alvéoles. La maladie du COVID-19 peut évoluer en syndrome de détresse
respiratoire aiguë. Le produit de l'invention agit en amont de l'infection des
cellules
pulmonaires en limitant l'entrée du virus dans l'organisme au niveau du nez,
plus
précisément en évitant sa fixation et sa réplication dans les cellules
épithéliales des
fosses nasales.
Le produit de l'invention permet de supprimer totalement la présence des
virus. Il est
donc beaucoup plus efficace que les produits de l'art antérieur dits anti-
viraux qui
zo diminuent la charge virale sans éliminer totalement le virus. Les
produits de l'art
antérieur utilisés pour traiter les maladies virales par voie nasale
présentent une
activité anti-virale permettant de réduire le nombre de virus, sans pour
autant les
éliminer complètement.
Description détaillée de l'invention
L'invention a donc pour objet un produit pour son utilisation dans le
traitement ou la
prévention des symptômes respiratoires de la maladie du COVID-19 chez l'homme,
ledit produit comprenant un hydrogel à base d'eau, de glycérine et d'un
carbomère,
et étant destiné à être appliqué sur l'épithélium respiratoire. Le produit est
particulièrement adapté à une application topique sur la muqueuse nasale.
II est également décrit un produit pour son utilisation dans le traitement de
la maladie
du COVID-19 chez l'homme causée par le coronavirus SARS-CoV-2 ou d'une
maladie causée par un des variants de ce coronavirus. Le produit comprend un
hydrogel susceptible d'être obtenu par mise en suspension d'un carbomère dans
un
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
3
mélange essentiellement constitué, voire constitué, d'eau, de glycérine et
d'un
carbomère. Le produit est destiné à être appliqué sur l'épithélium
respiratoire.
Il a en effet été découvert de façon surprenante que le produit de l'invention
est bien
plus efficace que les produits administrés par voie nasale proposés dans l'art
antérieur pour traiter les maladies virales. Il a été découvert que le produit
de
l'invention bloque la réplication du virus SARS-CoV-2 par inhibition de
certaines
enzymes impliquées dans le processus de pénétration du virus dans les cellules
de
la muqueuse.
En particulier, le produit de l'invention inhibe les activités enzymatiques de
la furine
et de l'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ACE2) du virus SRAS-CoV-2 ou
de ses variants.
La furine est une sérine protéase qui appartient à la famille des proprotéines
convertases comme la subtilisine. Cette enzyme catalyse la maturation
protéolytique
des substrats de proprotéine dans la voie sécrétoire, et permet l'inhibition
de la
réplication des virus qui utilisent la furine pour activer leurs
glycoprotéines, en
particulier les coronavirus et les virus de la grippe. Les inventeurs ont
démontré que
le produit de l'invention peut inhiber plus de 99% de l'activité enzymatique
de la
furine. En inhibant l'activité de la furine, le produit de l'invention empêche
la fixation
du virus sur les protéines membranaires des cellules hôtes, et limite leur
infection.
Les coronavirus se caractérisent par une couronne de protéines dites Spike
ou
protéines S, et doivent subir une étape d'activation pour infecter
l'organisme. Cette
étape d'activation, induite par une enzyme appelée furine, consiste à couper
la
protéine Spike afin de la rendre fonctionnelle. La protéine Spike, une fois
activée,
s'attache à l'un des récepteurs présents à la surface de la cellule humaine
hôte, ce
récepteur étant l'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 ou ACE2 (de
l'anglais
Angiotensin-Converting Enzyme 2).
La maladie à coronavirus 2019 (COVID-19) est causée par le coronavirus 2 du
syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV-2), dont le mécanisme d'entrée
dans
la cellule hôte implique une activation par la furine. La protéine virale
Spike activée
peut ensuite se fixer à des récepteurs ACE2 que l'on retrouve à la surface des
pneumocytes de type I et II, mais également sur les cellules endothéliales et
les
cellules épithéliales bronchiques ciliées. Les produits ciblant l'interaction
entre la
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
4
protéine Spike du SRAS-CoV-2 et l'ACE2 sont donc efficaces pour lutter contre
le
COVID-19.
Inhiber la furine permet également de contrôler les infections par les virus
de la
grippe aviaire A, qui entrent dans les cellules par clivage de la
glycoprotéine
hémagglutinine (HA). Les virus de l'influenza aviaire faiblement pathogènes
contiennent un seul acide aminé basique sur le site de clivage de la protéine
HA.
L'insertion d'un site de clivage de la furine dans la protéine HA du virus de
la grippe
aviaire H5N1 entraîne une réplication dans plusieurs tissus et une
pathogénicité plus
élevée, en raison de la présence des furines dans plusieurs tissus.
L'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ACE2) est une exopeptidase qui
catalyse la conversion de l'angiotensine II en angiotensine 1-7 et en L-
phénylalanine. L'ACE2 s'est avéré être l'un des récepteurs du coronavirus
respiratoire humain NL63, mais aussi des coronavirus du SRAS (SRAS-CoV et
SRAS-CoV-2). Les inventeurs ont démontré que le produit de l'invention permet
une
inhibition directe de l'activité de la protéine ACE2 à hauteur de 84%.
En conclusion, le produit de l'invention qui inhibe à la fois l'activité de la
furine et
l'activité de la protéine ACE2, protéines essentielles à la translocation
virale
intracellulaire, permet donc de lutter contre les maladies causées par des
virus
activés par la furine et des virus qui se fixent sur la protéine ACE2 des
cellules
hôtes.
L'invention a donc pour objet un produit pour son utilisation dans le
traitement ou la
prévention des symptômes respiratoires de la maladie du COVID-19 chez l'homme,
ledit produit comprenant un hydrogel à base d'eau, de glycérol et d'un
carbomère, et
ledit produit étant sous une forme adaptée pour une application par voie
topique sur
l'épithélium respiratoire.
On entend par hydrogel au sens de l'invention, un gel contenant de l'eau et de
la
glycérine dont la matrice est un réseau de carbomère. L'hydrogel peut être
capable
de gonfler substantiellement en présence d'une grande quantité d'eau ou d'une
solution aqueuse telle qu'un fluide biologique, en particulier le mucus nasal.
L'hydrogel est susceptible d'être obtenu par mise en suspension d'au moins un
carbomère dans un mélange essentiellement constitué ou constitué d'eau, de
glycérol. On entend par essentiellement constitué un mélange dans lequel
la
somme du pourcentage massique en eau et la somme du pourcentage en glycérol
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
est supérieure à 99.0%, de préférence supérieur à 99.5% et de préférence
encore
supérieur à 99.9% en niasse par rapport à la masse du mélange. Après mise en
suspension du carbomère dans le mélange essentiellement constitué ou constitué
d'eau et de glycérol, on ajoute de préférence un agent ajusteur de pH. On peut
5 également ajouter à la suspension du carbomère au moins un polyol
différent de la
glycérine. Le polyol est peut être choisi parmi les polyéthylène glycols et
les 1,2-
alcane-diols. Le polyéthylène glycol est de préférence non hydroxylé.
Le ratio massique entre le glycérol et l'eau dans l'hydrogel ou le ratio
massique entre
le glycérol et l'eau dans la suspension du carbomère est de préférence compris
1.0 entre 0.8 et 10.0, par exemple entre 1.0 et 5.0, entre 1.0 et 3.0,
entre 1.5 et 3.5, ou
entre 2.0 et 2.5. L'hydrogel est de préférence essentiellement dépourvu de
tout
corps gras et de tout composé biologiquement actif tel qu'un sel de zinc,
l'alpha-
pinène, le méthyl n-nonanone ou un extrait de plante. Dans un mode de
réalisation
particulier de l'invention, l'hydrogel est essentiellement constitué ou
constitué d'eau,
de glycérine, d'au moins un carbomère, d'au moins un polyol différent de la
glycérine
et d'au moins un agent ajusteur de pH.
Le produit de l'invention peut être constitué de l'hydrogel ou être constitué
de
l'hydrogel et d'au moins un autre ingrédient choisi parmi l'eau, les ajusteurs
de pH,
et les agents gélifiants différents du carbomère contenu dans l'hydrogel.
L'hydrogel
zo de l'invention peut donc être mélangé à de l'eau pour préparer le
produit de
l'invention. L'eau qui est présente dans le produit peut donc provenir de
l'eau
contenue dans l'hydrogel et de l'eau qui a été éventuellement ajoutée à
l'hydrogel,
une fois ce dernier préparé. L'eau présente dans le produit peut représenter
de
préférence de 70% à 98% en masse, de préférence de 85% à 95% en masse de la
masse du produit. Dans un mode de mise en oeuvre de l'invention, l'hydrogel
représente par exemple de 5% à 100%, de 5% à 90%, de 10% à 85%, de 10% à
70%, de 10% à 50%, de 10% à 40%, ou de préférence de 10% à 30% en masse de
la masse du produit.
Le carbomère est un composé de dénomination INCI CARBOMER. Il peut avoir
comme numéros CAS suivants: 9007-20-9, 9003-01-4, 76050-42-5, 9062-04-8,
9007-16-3 ou 9007-17-4.
Le carbomère comprend de préférence de 55% à 70%, de préférence encore de
56% à 68%, de groupements acide carboxylique (-COOH). Ce pourcentage pourra
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
6
être déterminé par toute méthode connue de l'homme du métier, en particulier
une
méthode de titrage acido-basique conforme à l'une des méthodes décrites dans
les
monographies relatives aux carbomères des pharmacopées américaine,
européenne et chinoise. Selon une de ces méthodes, une dispersion carbomère
est
titrée par potentiométrie avec de l'hydroxyde de sodium en utilisant une
électrode en
verre-calomel. La teneur en acide carboxylique est calculée sur la base du
volume
de solution standard d'hydroxyde de sodium utilisée.
Dans un mode de réalisation, le carbomère est un homopolymère de l'acide
acrylique réticulé avec un éther allylique du pentaérythritol, ou un
homopolymère de
1.0 l'acide acrylique réticulé avec un éther allylique de saccharose.
La viscosité du carbomère, mesurée à 0.5% en masse dans l'eau, à pH 7.5 et 25
C
(Brookfield RVT, 20 tours/min), va de préférence de 35 000 cps à 70 000 cps,
et de
préférence encore de 40 000 cps à 60 000 cps. La viscosité su carbomère pourra
être mesurée par toute méthode connue de l'homme du métier, en particulier
toute
méthode décrite dans l'une des monographies relatives aux carbomères des
pharmacopées américaine, européenne et chinoise.
Dans un cas particulier, le carbomère est un homopolymère de l'acide acrylique
réticulé avec un éther allylique du pentaérythritol dont la dénomination,
selon la
pharmacopée américaine est Carbomer Homopolymer Type C. Un tel carbomère est
zo disponible dans le commerce sous la marque CARBOPOL8 980 de la société
Lubrizol.
Dans l'hydrogel, le ratio massique entre le carbomère et la glycérine est
compris de
préférence compris entre 1/100 et 20/100, par exemple entre 1/100 et 5/100 ou
2/100 et 5/100.
Le glycérol représente de préférence de 30% en masse à 80% en masse de
l'hydrogel, et de préférence encore de 50% en masse à 75% en masse de
l'hydrogel, par exemple de 60% à 75% en masse de l'hydrogel.
Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, l'hydrogel contient
de 30% à
80% en masse de glycérol et le ratio massique entre le glycérol et l'eau est
compris
entre 1.0 et 4Ø L'hydrogel peut contenir au moins un polyol non hydroxylé
différent
du glycérol, de préférence choisi dans le groupe constitué par les
polyéthylène-
glycols, de préférence non hydroxylés, et les 1,2-alcane-diols. On pourra
utiliser le
1,2-octanediol à titre de 1,2-alcane-diol.
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
7
On préfère utiliser des polyols non hydroxylés, car il a été découvert que les
polyols
hydroxylés peuvent s'avérer très irritants pour la muqueuse nasale. Le produit
de
l'invention contient de préférence moins de 1% en masse, de préférence encore
moins de 0.1% en masse d'un polyol hydroxylé. Le produit de l'invention en est
avantageusement dépourvu.
Les polyéthylène-glycols utilisés dans le produit de l'invention ont de
préférence une
masse moléculaire moyenne en masse allant de 200 g/mol à 1000 g/mol, ou une
masse moléculaire moyenne en nombre allant de 200 g/mol à 1000 g/mol. On
préfère également que le rapport massique entre le glycérol et le(s) polyol(s)
non
io hydroxylé(s), en particulier le rapport massique entre le glycérol et le
polyéthylène-
glycol, soit compris entre 1/1 et 3/1.
L'hydrogel contient de préférence de 5% à 50% en masse d'eau, par exemple de
10% à 40% ou de 15% à 35%, et de préférence de 20% à 30% en masse d'eau.
Selon un mode de réalisation, l'hydrogel est constitué d'eau, de glycérol,
d'au moins
un carbomère (en particulier l'honnopolymère de l'acide acrylique réticulé
avec un
éther allylique du pentaérythritol), d'au moins un polyol non hydroxylé et
d'un
ajusteur de pH.
L'hydrogel peut être fabriqué en mettant le carbomère, en particulier
l'homopolymère
d'acide acrylique réticulé avec un éther allylique du pentaérythritol, en
suspension
zo dans un mélange comprenant de l'eau et du glycérol, notamment un mélange
constitué d'eau et de glycérol.
Dans un exemple particulier, le produit de l'invention est comprend plus de
99% en
masse d'un mélange constitué d'eau, d'au moins un polyol non hydroxylé, de
glycérol, d'un carbomère, comme par exemple un homopolynnère de l'acide
acrylique réticulé avec un éther allylique du pentaérythritol, et d'un
ajusteur de pH.
De façon avantageuse, le produit de l'invention ne contient pas de composés
anti-
inflammatoires stéroïdiens ou non stéroïdiens généralement utilisés dans l'art
antérieur. Il a en effet été découvert de façon surprenante, que le produit de
l'invention est doté d'une activité anti-inflammatoire sur la muqueuse nasale,
en
l'absence de tout principe actif pénétrant dans le métabolisme.
Le pH de l'hydrogel et/ou le pH du produit de l'invention va de préférence de
5.5 à
6.5, et peut être de l'ordre de 6Ø
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
Selon un mode de réalisation particulier, l'hydrogel comprend un
mucopolysaccharide. Les mucopolysaccharides, conformément à la définition qui
en
est donnée dans le dictionnaire de l'Académie de Médecine portent également le
nom de glycosaminoglycanes. Ils sont formés d'unités de répétition issues d'un
ose
(le galactose ou un acide uronique tel que l'acide iduronique ou l'acide
glucuronique)
et d'un disaccharide comprenant une hexosamine sulfatée ou non.
Parmi les mucopolysaccharides que l'on peut utiliser dans le cadre de
l'invention
figurent l'acide hyaluronique, les chondroïtines-sulfate, les héparanes-
sulfate,
l'héparine, les dermatanes-sulfate et les kératanes-sulfate. Les
mucopolysaccharides sulfatés peuvent être liés à des protéines par
l'intermédiaire
d'une courte séquence glycanique pour former un protéoglycane.
Le mucopolysaccharide est avantageusement apporté dans le produit par un
ingrédient d'origine naturelle le contenant. Le produit de l'invention peut
contenir de
1`3/0 à 10% en masse de mucopolysaccharide(s), par exemple de l'ordre de 5% en
masse.
Le produit de l'invention contient avantageusement de très faibles quantités
de
conservateur(s), comme par exemple l'éthylène-diamine-tétraacétique, le
phénoxyéthanol, le sorbate de potassium et les parabens comme l'éthyl paraben.
Il
en est de préférence essentiellement dépourvu, voir totalement dépourvu. En
zo particulier, l'hydrogel et le produit de l'invention sont
essentiellement dépourvus,
voire dépourvus d'éthanol, qui est excessivement irritant pour les muqueuses.
Contrairement à la plupart des produits utilisés dans l'art antérieur pour
soigner les
maladies touchant la muqueuse nasale, le produit de l'invention contient des
quantités de chlorure de sodium inférieures à 0.1% en masse. Il en est
avantageusement dépourvu, car le chlorure de sodium est irritant et desséchant
pour les muqueuses nasales. Son pouvoir irritant est d'autant plus
préjudiciable
lorsque la muqueuse est inflammée.
Dans un mode de réalisation de l'invention, le produit de l'invention est
essentiellement dépourvu de tout composé biologiquement actif. Il est
avantageusement dépourvu d'ions ou de molécules ayant une activité anti-virale
et/ou une activité anti-inflammatoire, comme par exemple les sels de zinc, les
extraits de plantes, l'alpha-pinène ou le méthyl n-nonanone. Il a été en effet
découvert de façon très surprenante et contrairement à l'enseignement de l'art
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
9
antérieur suggérant la nécessaire présence d'un actif pharmaceutique anti-
viral ou
anti-inflammatoire, qu'un hydrogel comprenant de l'eau, du glycérol et un
carbomère
dépourvu d'un composé biologiquement actif permet de soigner les maladies
provoquées par le SARS-CoV2 et ses variants.
Le produit peut être sous toute forme adaptée à une application par voie
nasale, de
préférence sous une forme adaptée pour une application par voie topique sur
l'épithélium de la muqueuse nasale, dans les fosses nasales, ou sur
l'épithélium de
l'oropharynx (arrière des fosses nasales). Le produit peut ainsi être appliqué
à l'aide
d'un moyen d'application local tel qu'un coton-tige jetable, une canule ou un
spray
nasal doux. On préfère utiliser un coton-tige jetable dans le cadre de
l'invention.
La viscosité du produit est de préférence comprise entre 40 000 cps et 100 000
cps,
par exemple entre 50 000 cps et 90 000 cps, lorsqu'elle est mesurée à 25 C
avec un
appareil Brookfield DV+PRO muni d'une aiguille RV06, à la vitesse de 3 tours
par
minutes, la mesure étant effectuée 1 minute après le début de la mise en
rotation.
Le produit est avantageusement appliqué dès les premiers symptômes de la
maladie
pour atténuer ou supprimer la charge virale et traiter la maladie.
Le produit peut être appliqué en l'absence de tout symptôme pour prévenir une
infection virale, en particulier pour prévenir une infection à coronavirus
comme le
COVID-19.
zo L'invention concerne également un procédé de fabrication du produit
décrit
précédemment, ledit procédé comprenant une étape de préparation de l'hydrogel
par mise en suspension du carbomère dans un mélange essentiellement constitué
ou constitué d'eau et de glycérol.
Un procédé de fabrication d'un produit selon l'invention peut comprendre,
outre
l'étape de préparation de l'hydrogel à titre de première étape, une deuxième
étape
de mélange de l'hydrogel obtenu avec au moins un autre ingrédient choisi parmi
l'eau, les agents gélifiants hydrophiles connus de l'homme du métier, et les
produits
biologiquement actifs. L'hydrogel obtenu peut donc être mélangé à de l'eau
pour
préparer le produit de l'invention. Un agent gélifiant hydrophile est de
préférence
différent du carbomère qui a été utilisé pour fabriquer l'hydrogel.
Dans le cadre de l'étape de fabrication de l'hydrogel, on prépare un mélange
essentiellement constitué ou constitué d'eau et de glycérol, le ratio massique
entre le
glycérol et l'eau étant de préférence compris entre 1/1 et 3/1, puis on
disperse le
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
carbomère dans ce mélange, de préférence sous agitation. Le ratio massique
entre
le glycérol et l'eau dans le mélange servant à préparer l'hydrogel peut être
compris
entre 1.0 et 4.0, de préférence compris entre 1.0 et 3M, de préférence encore
compris entre 1.5 et 2.5. Dans le procédé de fabrication de l'hydrogel, le
ratio
5 massique entre le carbomère et le glycérol peut être compris entre 1/100
et 10/100,
de préférence entre 1/100 et 5/100, de préférence encore entre 1/60 et 1/30.
Après dispersion du carbomère dans le mélange essentiellement constitué d'eau
et
de glycérol, on ajoute un agent ajusteur de pH, de préférence en une quantité
suffisante pour obtenir un pH compris entre 5.5 et 6.5. Après dispersion du
10 carbomère dans le mélange essentiellement constitué d'eau et de
glycérol, on peut
ajouter au moins un polyol différent du glycérol tel que décrit précédemment.
Le produit de l'invention peut être fabriqué en au moins deux étapes, dont une
première étape de fabrication de l'hydrogel comprenant l'eau, le glycérol et
le
carbomère, et une deuxième étape de mélange de l'hydrogel obtenu avec le ou
les
autres ingrédients entrant éventuellement dans la composition du produit.
La deuxième étape peut comprendre l'ajout d'au moins un ingrédient choisi dans
le
groupe constitué par l'eau, un agent gélifiant, un mucopolysaccharide, un
conservateur, un agent ajusteur de pH. Selon un mode de réalisation
particulier, on
ajoute de l'eau, un agent gélifiant et un agent ajusteur de pH pour préparer
le produit
zo de l'invention.
Le produit de l'invention peut être appliqué sur un masque textile pour le
doter d'une
capacité barrière à la pénétration du virus dans l'organisme, ou pour
améliorer sa
capacité barrière à la pénétration du virus dans l'organisme. Le masque
textile sur
lequel on applique le produit de l'invention pourra être connu de l'art
antérieur.
Aussi, l'invention a-t-elle également pour objet un masque de protection en
matière
textile comprenant le produit tel que décrit précédemment.
Le masque de l'invention pourra être fabriqué à partir de matériaux textiles
choisi
les tissus, les tricots, les fibres, les fils, les tresses et les non tissés,
Dans un mode de réalisation particulier, le masque est un masque protection KN
95,
un masque FFP2 ou un masque FFP3. Les masques FER (abréviation anglaise du
terme "Filtering Face Piece Particles" que l'on peut traduire par "pièce
faciale filtrante
de particules") comprennent trois catégories selon leur capacité de
filtration, laquelle
est déterminée et validée par la norme européenne N149. Un masque FFP2 filtre
au
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
11
moins 92% des particules en suspension dans l'air d'une taille supérieure à
0.6
microns (c'est-à-dire qu'il autorise une fuite vers l'intérieur entre le
masque et le
visage, d'une moyenne maximum de 8%), tandis qu'un masque FFP3 filtre au moins
98% des particules en suspension dans l'air (c'est-à-dire qu'il autorise une
fuite vers
l'intérieur entre le masque et le visage, d'une moyenne maximum de 2%).
Un masque N95 FFP2 est conforme à la norme américaine N95, dont le respect est
nécessaire pour pouvoir être vendu sur le territoire américain, et un masque
KF94
FFP2 sera conforme à la norme à respecter pour une commercialisation en Corée
du Sud ou en Chine. La durée d'utilisation du masque FFP2 varie de 3 à 8
heures.
Dans un autre mode de réalisation, le masque de protection de l'invention
pourra
être un masque chirurgical, par un exemple un masque chirurgical comprenant au
moins trois épaisseurs, tel que par exemple un masque 3 plis de Type II
conforme à
la norme EN14683:2019, et éventuellement également conforme à la norme EN
14638:2016. La filtration bactérienne de ces masques peut être supérieure à
98%,
le degré de respirabilité (Delta P) peut être supérieur à 3 Pa/cm2.
Enfin, le masque de protection de l'invention peut également être un masque en
tissu, tel que par exemple un masque en tissu conforme à la certification
UNS1,
conforme à la norme AFNOR S76-001 et certifié lavable 50 fois par l'organisme
indépendant IFTH. Le masque en tissu pourra avoir une capacité de filtration
égale à
zo 100%.
Le produit de l'invention peut également être utilisé pour lutter contre les
infections
provoquées tout type de virus se fixant sur la muqueuse nasale, notamment
d'autres
coronavirus que le SARS-CoV-2 comme le SARS-CoV, le coronavirus NL63, des
rhinovirus, des métapneumovirus, des virus syncytiaux, le virus de la grippe
saisonnière, le virus de la grippe aviaire A, le virus de la grippe aviaire
H5N1 et des
adénovirus.
L'invention est illustrée par l'exemple suivant.
Exemple 1: Préparation du produit de l'invention
Le produit selon l'invention est obtenu à partir des ingrédients suivants, les
pourcentages étant en masse. Conformément au procédé de l'invention, on
prépare
l'hydrogel avant d'ajouter éventuellement d'autres ingrédients. Dans cet
exemple,
l'ingrédient ajouté à l'hydrogel est l'eau.
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
12
Ingrédients utilisés pour préparer le produit : 10% de glycérol, 0.3% d'un
carbomère
vendu sous la référence commerciale CARBOPOLO 980 par la société Lubrizol et
dénommé Carbomer Homopolymer Type C selon la pharmacopée américaine, 2%
de REG-400 (polyéthylène glycol ayant une masse moléculaire moyenne en nombre
égale à400 g/mol), 0.1% de NaOH 10 N, et le complément à 100% d'eau purifiée,
les pourcentages étant exprimés en masse par rapport à la masse totale du
produit.
Dans une première étape, on disperse le carbomère dans un mélange constitué de
glycérine et d'une partie de l'eau purifiée, le ratio massique entre la
glycérine et l'eau
étant égal à 1.4, sous agitation à température ambiante, puis on ajoute le REG-
400
et le NaOH. Dans une deuxième étape, on ajoute à l'hydrogel obtenu le reste de
l'eau purifiée. Le produit peut éventuellement être filtré avant son
conditionnement.
Le produit est appliqué sur l'épithélium nasal à l'aide d'un coton-tige
jetable ou d'un
spray nasal, chez plusieurs personnes présentant les premiers symptômes du
COVID-19, à raison de trois à quatre fois par jour.
Le produit permet d'éliminer tous les coronavirus responsables de la COVID-19
présents dans les fosses nasales.
Exemple 2: Inhibition de l'activité de la furine convertase par le produit de
l'invention
L'objectif de cette étude est d'évaluer la modulation de l'activité de la
furine du
produit de l'invention dans un modèle In Vitro acellulaire faisant appel au
kit
d'analyse vendu sous la marque The Sensolyte Rh110 Furin Assay Kit.
Matériel
Le produit de l'invention conforme à l'Exemple 1 a été testé en triplica à
trois
concentrations : 5%, 2% et 0,5%.
Le kit vendu sous la marque SensoLyte Rh110 Furin Assay Kit permet le dosage
continu de l'activité de la furine à l'aide d'un substrat fluorogénique. Lors
du clivage
par furine, ce substrat génère une fluorescence vert vif. Les réactifs
utilisés sont
présentés dans le tableau 1 ci-dessous.
[Table il
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
13
REM1F POURNISSE
REÇERENCE
Sensolytt ln A ty Assay Kit (Fl-
c :m ;,î ANASPE-
Ce portent , Rh110 furtn substrate ANASPEC AS .f
256
Cs portent C = -combinant hi f. in ANASPEC
AS-72256
Comportent e= 2X Assay eut ier AtdASPEC AS-
7÷..56
Comportent , Cktor ANASPEC AS-
'2. __
Water pl arlo Erba 4L.
1 -.2
Dettb0 Sigma 0841.8-
2SOML
Tableau 1 : réactifs utilisés
Protocole
Une solution tamponnée de Furine réagit avec le substrat vendu sous la marque
Rh110 Furin substrate , pour former le fluorophore Rh110 (rhodamine 110). Une
légère agitation pendant 30 secondes est réalisée puis le tout est incubé est
à
température ambiante pendant 60 minutes.
Le produit de l'invention à trois concentrations différentes (El), le produit
de
référence (T+) et le contrôle (T-) sont mis en contact avec une solution de
Furine en
même temps que le substrat de l'enzyme. L'activité de la Furine en
présence/absence du produit de l'invention ou du produit de référence est
alors
évaluée.
Les intensités de fluorescence sont collectées en utilisant un filtre à
l'excitation
laissant passer les longueurs d'ondes de 473 nm à 497nm (filtre Exc485-12) et
un
filtre à l'émission laissant passer les longueurs d'ondes de 505 à 565nm
(filtre
Em535-30).
La modulation de cette activité est exprimée en pourcentage d'inhibition ou
d'activation de l'activité de la Furine en l'absence d'actif, c'est-à-dire
uniquement en
présence du substrat de l'enzyme.
Résultats
A la fin de la période d'incubation, l'activité de la Furine avec et sans
produit
(invention ou référence) a été évaluée par mesure des intensités de
fluorescence
(exprimées en RFU : unité de fluorescence relative). Pour chaque concentration
testée, la modulation de l'activité de la Furine par le produit à l'essai est
calculée
selon la formule suivante.
[Math. 1]
Pourcentage de modulation de la Furine = 100 x [(DO ¨ DO Furine seule)/DO
Furine seule]
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140 PCT/EP2021/071696
14
Si le résultat est négatif, le pourcentage est exprimé en inhibition de
l'enzyme, si le
résultat est positif, le pourcentage est exprimé en activation de l'enzyme.
Les
résultats sont présentés dans le tableau 2.
[Table 2]
i Moyenne DO nhibition
d!
Mayenne activité
EchntUons , Echantilion
l'activité
DO (nm) enzymatique 1
DO Blanc (nmLL
enzymatique
d-
44,3 0,00
100,0L
540,3 496,0 100,00 0,00
149,0 104,7 21,10
78,90
El à 5% 4j 4,7 0.4
99,06
E1 à 2% 10,3 2,08
97,92
El 8 0,5% 121,0 79,3 15,99
84,01
Tableau 2 : Résultats moyens obtenues sur le produit de référence (T+), le
contrôle
(T-) et le produit de l'invention (El) à trois concentrations différentes.
Aux concentrations testées de 5%, 2% et 0.5%, une activité inhibitrice de la
Furine
est observée.
Exemple 3: Inhibition de l'activité de l'enzyme ACE2 par le produit de
l'invention
L'objectif de cette étude est d'évaluer la modulation de l'activité de
l'enzyme de
conversion de l'angiotensine 2 (ACE2) par le produit de l'invention dans un
modèle
In Vitro acellulaire faisant appel au kit d'analyse vendu sous la marque ACE2
Inhibitor screening assay kit conçu pour mesurer l'activité de l'exopeptidase
de
l'ACE2.
Matériel
Le produit de l'invention a été testé en triplica à la concentration de 5%.
Les réactifs utilisés sont énumérés dans le tableau 3 suivant.
zo [Table 3]
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
=
FOU,RNISSEUR
REFERENCE il
ACE2 = õi; _ Bit _______________________ - 799-:
.wme So ?nce 11003
iuorogenic substrate BP: ance
Ae. ' say auffer BP 4uv eace
96-well black microplate (Nunc U96 PP0.5m1) BPS fisasaence
79685
DX600 Cdyman 22186
Tableau 3 : Réactifs utilisés
Méthode
Une solution de ACE2 est mise en contact avec du tampon l'inhibiteur DX600 ou
5 avec le produit de l'invention (El 5%) puis le substrat est incorporé. La
microplaque
est incubée à température ambiante pendant 60 minutes. La solution de ACE2
réagit
avec le substrat spécifique vendu sous la marque ACE2 Fluorogenic substrate ,
pour former un composé fluorogénique. Les intensités de fluorescence sont
collectées en utilisant un filtre à l'excitation laissant passer les longueurs
d'ondes de
io 544nm (filtre Exc544) et un filtre à l'émission laissant passer les
longueurs d'ondes
de 580 à 600nm (filtre Em590-10). L'activité de l'ACE2 est ainsi évaluée.
Résultats
A la fin de la période d'incubation, l'activité de l'ACE2 avec et sans produit
(invention
El 5%, ou référence T+ ou T-) a été évaluée par mesure des intensités de
15 fluorescence (exprimées en RFU : unité de fluorescence relative).
Pour chaque concentration testée, la modulation de l'activité de l'ACE2 par le
produit
de l'invention ou par la référence est calculée selon la formule suivante.
[Math. 2]
Pourcentage de modulation de ACE2 = 100 x [(DO¨ DO ACE2 seule) / DO ACE2
seule].
Les résultats sont présentés dans le tableau 4 suivant.
[Table 4]
CA 03188053 2023- 2- 1
WO 2022/029140
PCT/EP2021/071696
16
-de
e?rlt"
f)t:
I glat 89576,0 = 0,00
101450,3 11874,3 100,00 0,00
93017,7 3441,7 _____ 28,98 71,02
El à 5% 89113,7 ' 1900,0 6,00
84,00
Tableau 4 : Résultats moyens obtenues sur le produit de référence (T+), le
contrôle
(T-) et le produit de l'invention (El).
A la concentration testée de 5%, une activité inhibitrice de l'ACE2 observée.
Exemple 4 : Mise en évidence de la stimulation de la microcirculation sanguine
et du gonflement des cellules par le produit de l'invention
Méthode
La stimulation de la nnicrostimulation sanguine et le gonflement des cellules
exercés
par le produit de l'invention ont été évalués avec un appareil de marque
VivaScopee
1500 (Reflectance Confocal Microscope) pour chaque sujet :
- avant l'application du produit puis
-5 minutes et 120 minutes après une seule et même application du produit de
l'invention.
Le nombre de cellules sanguines dans un capillaire se déplaçant pendant 10 sa
été
déterminé pour donner des informations sur la microcirculation.
En termes de gonflement cellulaire, la taille moyenne des cellules a été
mesurée au
moyen du logiciel de l'appareil (moyenne sur 10 cellules).
Résultats
La microcirculation a été augmentée de 28%, 5 minutes après l'application du
zo produit. L'impact sur la microcirculation a un effet à long terme
jusqu'à 2 heures (+
10%) après l'application du produit.
L'augmentation de la microcirculation à partir des capillaires sanguins
traduit un effet
hydratant important de l'ensemble du tissu qui permet de chasser les
médiateurs de
l'inflammation et de rcedème et entraine un effet réparateur de la muqueuse
nasale.
CA 03188053 2023- 2- 1
