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5 4 ~ ~
~ a présente invention a pour obje~ un procédé de prépa
ration d~un nouveau sel d'érythxomycine, le pyroglutamate d~e~
rythromycine, caractérisé en ce ~ue l'on fait réagir de l'acide
pyroglutamique sur de l'é~ythromycine base.
Dan~ des conditions pré~érentielle~ de mise e~ oeuvre du
procede de l'in~ention, on fait réagir de l'acide pyroglutami~ue
a~ec la quantité stoechiométrique ou avec un e~cès d'érythromy-
ci~e ba~e au sein d'un ~olv~nt, tel que l'ea~ distillée, l'acé-
to~e anhydre ou la méthylét~ylcétone ~aturée d'eau, e~ sur~eil-
laat le pH de manière ~ ce que celui-ci s~it toujours ~upérie~r
ou égal ~ 7,1.
0~ evite ainsi la dégradation par~ielle de l'érythromy-
cine e~ anhydroérythromycine inactive.
Si l'on a fait réagir l'acide pyr~glutamique avec un e2cès
d'érythromycine base, on élimine par filt,~tion l'ér~thromyci~e
base n'àya~t pa~ réagi et, recueille le filtrat renferma~t le
pyroglutamate d'érythromycine~ On isole ~e pyroglutamate d'éry-
thromycine par les méthodes u~uelles telle~ que la lyophili~ation.
Selon l'in~e~tion,~o~ peut également préparer le pyro-
glutamate d'érythromycine par double déco~position e~tre un selsoluble d'érythromycine et ~n ~el soluble de llacide pyroglutami-
que en opérant au ~ein d'une faible quantité d'eau et d'un sol- `
v~t organique peu miscible à l'eau. ~n t~l sol~ant peut ~tre
par exemple un acétate d'alco~le inférie~r ou un solvant organi-
ue chloré.
~ e pyroglutamate d'érythromycine e~t doué d'une importan-
te activite bactério~tatique et bactéricide notamme~t envers les
germe~ à gram (~, activité qui ~ustifie son utilisation e~ mé~e-
. ci~e humalne et Yétérinaire; ai~9iy on peut emplo~er, ~ tit~e de
médicame~t, le pyroglutamate d'érythrom~cine.
Ce pxoduit peut ~tre utilisé en ~herapeutique pour lut-
ter ~otamment contre le~ affections pr~oquées par les germes
- t - ~
- ;
~azs~z
sensibles ~ llérythromycine tel~e~ le~ gas~roentérite~ le~ e~-
térites infectieuse.~, les affections intes~inales, les septicé-
mieS~ le~ infections de~ voies respiratoires comme les pneumonies9
le~ in~ections de la sphère O.R.~. telle~ ~eS SinUSites~ le~ .
~treptococcies ou les staphylococcies cutæ~ées telles les furon-
cles .
~ thérapeutique humaine9 la posc~gie utile9 variable
8elo~ l'a~ection en cau~e~ peut être, pa~ exemple, de 100 mg à
2 g par jour pa~ ~oie orale chez l~adulte.. ~n thérapeutique ~é
téri~aire, la posologie utile varie selo~ l~a~imal traité et
l'affect-on e:~ cau~e, elle peut ~treD par exemple7 de 50 mg
1 g par jour chez le veau par voie injectable~.
~ e pyroglutamate d ~érythromy~ine peut ~tre employé pour
préparer des oomposition~ pharmaceutique~ renfermant comme prin-
cipe acti~ le pyro~lutamate d~éxythromyci~e aSsocié ou non a
d~allt;re~ principe~ actifs.
Ces compositions peuvent ~tre réalisées de façon ~ pou-
~oie être administrées par ~es voie~ dige~tive ou.~ocal~. Elle
peUvent 8tre ~olides oU liquides et Se préSenter sous leæ ~orme3
pharmaceuti~ues CoUramment utilisée~ en médecineJ comme~ par
exemple~l~s comprimés~ simple~ ou dragéifiés~ les gélules~ les
pommades, les crèmes; elles sont préparéeS selon le~ méthode3
~suelle~a ~e principe actif peut y ~tre incorporé à des exci-
pients habituellement employés dans ces compositions pharmaceu-
tiques~ tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon,
}~ 3téarate de ma~nésium, le beurre de cacao, les corps gra~ d'o-
rigi~e a~i~ale ou végétale~ les dérivé~ paraffiniques, les gly~
. .
C0~3, le~ divers agent~ mouillants, dispersa~ts ou émulsifiantst
les conservateur~ .
Ce~ compositions peuvent également atre realisées de
faço~ ~ pouvoir être admini!~trées par voie parentérale, ~es pré-
: parations injectable~ corresponda~te~ peu~ent êtrg~ par exemple,
-~ 2
.~
~zs~z
préparées e~temporanément par addition d'un ~oluté aqueux stérile
au p~roglutamate d'~rythromycine lyophili~é~
Parmi ces compositions,on peut citer en particuliex les
compositions renfermant le pyrog:lutamate d~erythromycine comme
seul pri~cipe actif, les compositions renfermant le pyrogluta-
mate d~érythromycine et l'érythromycine ba~e~ les compositions
renfermant le pyroglutamate d~érythromycine et un sel de colis-
tine, par exemple, le sulfate, les compo3itions renfermant le
p~roglutamate d'érythromycine, l'érythromyci~e base et u~ sel de
colistine~ par exemple, le sulfate. On trou~sra plus loin dans
la partie expérimental~ des exemples de telles compositions phar-
maceutlques.
- Il va ~etre donné maintenant a titre non limitati~ des
exemples de mi3e en oeuvre de l~inventio~
EXEMP~E 1'
.
On met en suspension 250 g d'érythromycine base dans
1550 cm3 d'eau distillée. On agite la su~pensio~ et y introduit
lenteme~t, de mani~re que le pH ~oit toujours supérieur ou égal
7,1 une solution fo~mée par 40 g diacide pyroglutamique dans
1550 cm3 d'eau di~tillée. ~'addition de l'acide pyroglutamique
demande une heure ~uarante cinq minutes enYiron.
On maintient l'agitation pendant une heure environ et
~ ~iltre la solution o~tenue ~ur verre fritté. On recueille le fil-
;~ : trat et les e~ux della~age du ~iltre ~t obtient 3~38 litres de olutio~ a~ueu~e de pyroglutamate d'érythromycine~
. 0~ lyophilise la solution obtenue et r~cueille 271994 g
de pyroglutamate d'érythromycine solvaté ~ 3,4 ~ d'eau.
~e produit se présente sous forme d'une poudre blanche,
solubi~ dans l'eau et fondant vers 145-155C.
/~/20 = -66,7 (c = 2% ethanol)
~itre bactériologlque 880 r/mg
.,
~: ~ H ~ O - 863
42 74 2 16
Calcule : C% 58,45 H% 8~ 64 ~% 3~ 24
~rouvé . 58,~ 8~,4 ~,0
~3XEMP~ 2:
~r
On a préparé de gélules de formule:
- pyroglutamate d I érythromycine .. , .. O ...... O O ........ .250 mg
- excipient q.s. pour 1 gélule
Détail de l'e~cipient : talc~ amidon~ lacto~e~
EXEMP~æ 3:
a) On a préparé des suspensi~ns injectables répondant à
la composition sui~nte
érythromycine base (sous forme de pyroglutamate) ......... .500 mg;
- sulfate de coli~tine ~ O~ 0~ 2,400 000 unites;
. . - excipient q.~.
~ mettre en suspension extemporanément dans 10 ml d7e~u.
: b) 0~ a préparé des suspensions inaectables répondant ~ :
la composition suivante:
- érythxomycine ba~e O~ 50 mg;
- pyroglutamate d'érythromycine correspondant en
éxythromyci~e ba~e ~ D~ O~ O~ OO 50 mg;
- mannitol ........ ~............................ ,........... 100 mg ;
- merouxothiolactate sodique ~ 0~ 0~ 9~ 0915 mg;
polysorbate 80 .. O.................. O..... ~....... ~...... ..2 mg ;
mo~ooléate de sorbita~ polyoxgéth~lène)
~, .
~ - ~u1~ate de colistine ~ O~ 240 000 unités
;~ ~ mettre en ~u~pe~io~ e~temporanément dang 2 ml d~eau.
, .
~ . I/ Activité antibactérienne in vitro
: Par méthode des dilutio~sen milieu liquide~ on a détermi
30 ~é la concentration minima inhibitrice (C.M~I.) en~ug/ml vis-~-
~is dé diYerse~ souches gram positif et gram négatif.
hibitio~ de la croissance bactérienne a été détermi-
,
-- 4 ~
S~2née par trans illumination apres ~ing~ quatre et quarante huit
heures d'incubation à 37Co
~es déterminations des ~MoI~ ont été effectuée~ compa-
rativemellt eIltre l' erythromycine base et le pyroglutamate d ' é-
rythromycine dont les concentration~ so~t exprimees en éryth-
romycine base contenue.
~es résultats obtenu~ figurent da~s le tableau 1 ci-
apr~s:
~A~I EAU
~ ~ r
~~_ ~
C,M.I. en ~g/ml C.M,I. e~ ~ug/ml .
. ~r~t~omyci~ePgroglutamate
Souch~ d ' éryth~ omycine
24h 48h 24h 48h
__ _ . .
Staphylococcus aureu~ 54 146 0,4 0,4 9 4 0,4
: A 8 P 0~2 0,4 94 0,6
A~CC 6 5~8 0,1 0,2 0~2 ~4
8 514 0,2 0,2 9 4 0,4
: 5 159 o~4 0,4 0.4 0,6
~: 20 4 546 ~92 0,4 0~4 0,4
1 098 0,2 0,4 0,4 o~4
. . 889 ~20 ~2~
7 17~ ~20 ~20
.~rstti~ nasal o~ 4 , 4 o~ 4 0, 4
~:~ : ~84 ~,~ o94 0,4 096
` 9 729 ~20 ~20
. ~ 7 777 2 5 2 5
. 9 973 0~6 0,6 096 0,6
23 0~2 ~4 0,2 o54
~ IY ~ 14 o~4 0,~ 0~4 o~4
V ~ 12 0,2 74 094 0~4
~treptococcushemolyticus 0, 01 0, 01~ 0, 01o, 02 !
-- 5 --
S~
TA131JEAU 1 C~uit~.
. . . --_ . _ .
C.M.X. e~ ~lg/ml C.M.I. en ~g/ml
~r~y thromycine P; rxoglutamate
Souche . ~ ? ' ~ryt~:ro~ e -
24h 48h 24h .48h
~ . . . _
~ae cali~ 5432 > 20 . ~20
3 09 05 0,1 0~1 0,1
- 759.- 0,2 0,2 0,2 0~2
Bacillu~ subtili3 0~ 05 0, 2 0, 2 0, 2
Escherichia coli Sp 7 3~ ~0 3~ 40
- Taylor ~6 20 6~ 30 40
- ,4 224 20 30 20 30
7 810 ~ 200 > 200
7 583 60 6~ 40 60
7 806 30 30 30 60
1 52 30 ~ 30 40
Enterobacter cloacae 681, 100 150 60 ~ 200
~ ~ Klebsiella p~eumonia 52 145 4o ~0 30 60
.~ P:roteus vulgari~ A 232 ~ 60 ~ 60
Protauæ mirabilis A 235 ~60 ~60 .
;~ Proteu~ m~rga;tlii A 236 ~ 60 ~60
:~ Salmo~ella t;yphimurium 420 60 ~60
-.
Ce~ xé~ultats montre~t ~ue le pyro~lutamate d'érgthromycine
03s~ae ~ Qpectre d'acti~rité qualitatiYem~nt et guantitativement
identique ~ celu~ de l'érythromycine. ~e ~roglutamate d'érythro-
myoi~e pos~ède do~ wle boD~e activité ~ur les germes ~ gram posi-
~: tif.
II~ Activité antibactérienne in ~ivo chez 1a 90uri~
.. _ . = ~ ~
De~ 90uri8 m~les d'un poids moye~ de 22 g, ~o~t ~épartie~
en 9 l~t~ de 10 a;rlimaux. ~ous le~ imawc de chacu~ de~ 9 lots
-- 6 --
.~.
~ ~ 25 4 ~ 2
reçoivent, en injection intra~peritonéale~ ~u temps ~éro~ 0~5 ml
d'une culture de Staphylococcus aureus No. 54 146 ~gée de dix sept
heure~ en bouillon nutritif I.P. pH 7,4, diluée dans la propor-
tion de 1 à 3,5.
~ es animaux traités reçoivent alors en trois injection~
~ous-cutanée~ (une heure, cinq heure~ et vingt trois heures tren-
te apx~ l'infection), le pyroglut~mate d'ér~thromycine e~ solu-
tion aqueuse, ~ différente~ doses.
On note le3 mortalités au cours de~ ~ix jours ~uivants.
~es résultat~ obte~us dans deux série~ d'expériences suc-
ce~sives ~igurent dan~ le tab1eau 2 ci-après.
~AB~EAU 2
- . . . . Mortalité ~ Survivant~
. Posologie ~ , ._ . au
- ~1j 2j 3j ~ ~ ~ 8ième a our
~émoins . 10 . 0/10
Pyroglutamate 3 x 0,05 ~g 3 5 2 0/10
d~érythromycine ~ x 0,1 mg 1 1 8/10
'3 x 0~15 mg ~ ~ ~ _ ~ ~ 10/10
- 20~émoins O 0/10
Pyroglutamat~ 3 x 0,01 mg 9 1 0/10
d~érythromycine 3 x 0,025mg 3 7 0/10
3 x 0,05 mg 1 4 1 - 4/10
~ _ ~ 1 ~ 0
: Ces résultats obte~us au COUr9 de deu~ expériences 9UC-
cessiYes montre~t que le pyroglutamate dlérythromycine possède une
bo~ne activité thérapeutique in ~ivo et en particulier ~ue cette
. - activité est progressive selon les doses.
~ ux sanguins chez le lapin
~n a administré ~ des lapins par injection dans le jéjunum
une su~pension renfermant du pyroglutamate dlérythromycine à rai-
~on de 25 mg/kg, exprimé en érythromycine base.
-- 7 --
~25~42
0~ a prélevé le ~ang à diveræ intervalle~ de temp~O
On a dosé le pou~oir a~tibiotique par la méthode des dilu- j
tion3en "Antibiotic Mediu~ 3~ ~ pH 7 a~ec la souche Staphylococ-
cus ~ureus A~'CC 6538 (incubation de 24 heure~).
On a obtenu les résultats suiv~nt~:
~ i
T:emps de prélèvement Quantité d'érythromycine
après l'i~ject~on d~ns le sang en ~g/ml
_ .
1/4 h~ 9
1/2 h. 3,6
1 h. 1,2
1 h 30 1,5
~ e tableau montre qu'il y a pa~sage inte~tinal rapide
~pras l'admini~tration de pyroglutamate d'érythromycine da~s le
jéju~um.
: IV - T.aux sanguins chez le veau
.
On a administré a de~ veaux, par i~jection dans le muscle
du COU9 une su~penæion telle qu'elle est obtenue à l'exemple 3(b),
~ xaiso~ de 20 mg/kg, exprimés en é~ythromycine ba~e.
. 0~ a étudié le taux d'é~ythromycine dans le sang~ Cn a
constaté ~ue le taux d~érythromyci~e dan3 le sang était égal ou
sup~ie~r ~ 1 ~/ml pe~dan~ au moins huit heure~ 0~ on sait
que oe taux correæpo~d à la csncentrati~n moyen~e inhibitrice de
la majorité ~de~ germe~ pathog~es chez le ~eau~
Conclusion : ~e p~roglutamate d'érythromycine pré~ente une acti-
Y~té anti-bactérienne int~éres~ante et durable.
.
. .
- 8 - I
