Note: Descriptions are shown in the official language in which they were submitted.
~3~L235
La présente invention a pour objet un procede d'obtention
de nouveaux amino-acides cycliques. Elle a plus particulièrement
pour objet un procede d'obtention des amino-acides dont la cha~ne
alcoylène est substituee par un radical thio. Elle a specifiquement
pour ob;et la preparation des amino-acides cycliques ~-substitues de
formule I
A ,~OX
(CH ~ ~I)
dans laquelle R est de l'hydrogène ou un radical alcoyle
inférieur
R' est de l'hydrogène, un radical alcoyle
inferieur, un radical alcoyle inferieur dont la cha~ne alcoyle est
substituee par un ou deux hydroxyles, acyloxy, alcoxy inferieur,
alcoylamino, dialcoylamino; un radical aryle, un radieal phenylalcoyle
inferieur, un radical phenylalcoyle inferieur dont le radical phenyle
ese substitue, un benzhydryle, un triphenyl methyle ou un radical
alcényle inférieur,
~ est un hydroxyle, un radical alcoxy infé-
rieur, un radical alcoxy inférieur substitué, un radical amino, un
radical hydroxyamino ou un radical alcoylamino,
et n varie de 0 a 3.
caractérise en ce que l'on soumet une cycloalcanone de
formule II
,~
~L~3~:23~i `
(CH~ ~ (II)
\R
dans laquelle R et n ont les significations antérieures
à l'action d'un agent d'halogénation pour former une ~-halogéno cétone
de formule III
(C~ ~ - (III)
R/ al
dans laquelle Hal est un halogène autre que le fluor
et R et n ont les signifi&ations anté-
rieures, que l'on fait réaglr avec un mercaptan de formule
RlSH
dsns laquelle Rl est un radical alcoyle inférieur, un .
radical aryle ou un radical benzyle
pour former le derivé thio de formule IV
(C~ ~ - (IV)
R
dans laquelle les substituants R, Rl et n sont définis
comme précédemment
fait réagir ce dernier avec un cyanure de métal alcalin
et un sel d'ammonium dans les conditions de la Réaction de Strecker
pour former une spiro hydanto~ne de formule Y
: ~. .. : ,
~3~23~;
V)
~ N
dans laquelle R, Rl et n ont les significations anté-
rieures,
puis hydrolyse cette dernière en milieu alcalin pour
fournir un amino acide de formule VI
~ Rl 2 (VI)
dans laquelle les substituants R, Rl et n sont definis
comme précedemment
que l'on soumet, le cas écheant lorsque Rl est un radical
benzyle, ~ une débenzylation pour former un dérivé thio de formule
VII
~ ~2 (VII)
qu'il est possible dans un stade ulterieur d'alcoyler,
d'alcenyler, d'aryler ou d'aralcoyler par action d'un agent ~
. ~ .
, . ' ~
- 4 - ~
d'alcoylation, d'alcénylation~ d'arylation ou d'aralcoylation, pour
obtenir un amino~a~ide de formule VIII
OOH
(VIII~
R SR'
dans laquelle R et n ont les significations fournies an-
térieurement
et R' est un radical alcoyle inférieur, un
radical alcoyle inférieur substitué, un radical aryle, un radical phé-
nylalcoyle inférieur, substitué ou non, triphénylméthyle ou alcényle.
Pour obtenir les composés pour lesquels X n'est pas un
hydroxyle, un composé de formule VI
COO~
NH2 (VI)
R
dans laquelle les substituants R, Rl et n sont définis
comme précédemment -
est soumis à l'action d'un agent de bloquage labile de la
fonction amine puis transformé en dérivé fonctionnel de la fonction
carboxylique que l'on condense avec un alcanol, une amine ou l'hydro-
xylamine pour former un ester d'alcoyle, un amide ou un hydroxamate
-, .' ~
. .
,
23S
et lib~re par hydrolyse ménagee la fonction amine pour obtenir un
compose de formule IX
~ ~/OX
2 ~ H (IX)
R S 1
dans laquelle X est un radical alcoyle substitue ou non,
un radical amino, un radical alcoylamino ou un radical hydroxyamino.
Les composes de formule generale I peuvent être con~ertis en sels
d'addition avec un acide ou avec une base
Lorsque X est un hydroxyle, les composes sont amphotères
et peuvent être salifies soit par un acide mineral ou organique soit
par une base minerale ou organique.
Lorsque X est un radical amino ou alcoylamino les compo~
ses peuvent être salifiés par un acide mineral ou organique.
Lorsque X est un radical hydroxyamino, les composes
peuvent être salifies soit par un acide mineral ou organique soit
par une base forte.
Parmi les acides ou les bases convenant pour la salifi-
cation9 on citera plus particulièrement les acides ou les bases mine-
rales ou organlques, physiologiquement compatibles. Parmi les acides
on citera notamment l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique, l'a-
cide sulfurique, l'acide nitrique, l'acide phosphorique; l'acide
~ .~
: - ; : ::
. ,; : -,
235
formique, l'acide acétique, l'acide butyrique, llacide nicotinique,
l'acide glycyrrhit~que? l'acide embonique~ l'acide méthane sulfoni-
que, l'acide iséthionique, l'acide benzene sulfonique ou l'acide
glucose l-phosphorique,
Parmi les bases on citera notamment l'hydroxyde de sodium,
de potassium, de lithium, de calcium, de strontium, l'ammoniaque, la
magnésie, l'alumine, l'hydroxyde ferreux; une amine inférieure comme
la méthylamine ou la diéthylamine; un amino alcanol comme la diétha-
nol amine ou l'éthanolamine; une amina arylaliphatique ln~érieure co~me
la phénylethylamine, la benzylamine, la (trifluoromethyl phenyl)
methylamine; une base pyridique comme la ~-pyridylethylamine; une
base aromatique comme la naphtylamine ou la dinaphtyléthylène diamine;
un amino sucre comme la glucosamine, la N-mPthyl glucamine ou la
mannosanine. On peut également salifier les composés de formule I
par un acide ou une base qui ne conviennent pas pour la thérapeuti-
que. Les sels en résultant conviennent pour l'identification, la
purification ou la séparation des composés de formule I comme par
exemple le perchlorate, le pé~iodate, le dinitrotoluate, le ferricyanu-
re, un sel de baryum ou encore un sel de quinine.
Les composés selon l'invention possèdent deux atomes
de carbone asymetrique et il est possible de separer les diastéréoi-
somères érythro et thréo. Chacun de ces diastéreoisomères peut aussi
être dédoublé en ses énantiomères optiquement actifs. La séparation
des diastereoisomères est effectuee de préference à l'aid~ de metho-
des physiques comme la chromatographie en phase liquide preparative
ou la chromatographie en phase gazeuse.
.~
', '
~13~
Le dédoublement en isomeres optiques est effectue par un
réactif chiral comme par exemple un acide ou un~ base optiquement
active tel que le réactif de Mosher, la brucine, la strychnine, l'é-
pnédrine, la pseudoephedrine, l'acide dibenzoyl d-tartrique ou l'a-
cide N~diethyl d-tartramique.
Le procede selon l'invention peut encore être defini par
les modes d'exécution suivants, actuellement préférés:
1) l'halogénation de la cycloalcanone de formule II est
effectuée à l'aide d'un agent d'halogénation comme par exemple le
chlore ou le brome, un N-halogeno amide, un N-halogenoimide, un hy-
pochlorite d'alcoyle ou un perhalogenure de pyridinium.
Des exemples plus specifiques sont notamment ~-chlorosuc-
cinimide, la N-bromo succinimide, la N-bromo acitamide, la N-iodo-
acetamide, la N-bromobenzamide, la N-bromophtalimide; la 5,5-di-
chlorodiphenylhydanto~ne; l'hypochlorite de terbutyle; le perbromure
de pyridinium.
2) l'halogenation est effectuee dans un solvant inerte,
de preference polaire comme le dioxane, la pyridine, le dimethyla-
cetamide, le d~ethylacétamide, le diméthyl sulfoxyde, l'hexamethyl-
phosphorotriamide ou l'acide acetique.
3) la condensation de ~-halogéno alcanone de formule
III et le mercaptan de formule RlSH est effectuee soit en milleu ba-
sique soit après avoir converti le mercaptan en derive metallique
comme le mercaptide de sodium, de potassium ou de lithium.
: ..:
. . .
. . ' .
~3~3~
4) la condensation de ~-thiocetone de formule IV et le
cyanure de metal alcalin est eEfectuée en presence de carbonate
d'ammonium comme source d'ammoniac.
5) l'hydrolyse de la spirohydanto~ne de formule V est
effectuee a l'aide d'un agent alcalin modere comme le carbonate de
sodium, le carbonate de lithium ou l'hydroxyde de baryum.
On peut egalement effectuer la condensation de la thioce-
tone IV avec le cyanure alcalin et l'hydrolyse en une seule etape
sans isoler l'hydanto~ne intermediaire.
6) la debenzylation du ~-ben~ylthio amino-acide de for-
mule VI est effectuee par hydrogenolyse en presence d'un catalyseur
de la famille du platine ou par reduction à l'aide d'un metal alcalin
comme le sodium, le potassium ou le lithium dans l'ammoniac liquide.
7) la reaction d'alcoylation du thiol de formule VII est
effectuee à l'aide d'un agent d'alcoylation comme un halogénure d'al-
coyle, un sulfate d'alcoyle, un époxyalcane en milieu basique.
L'emploi d'un époxyalcane comme l'oxyde d'éthylène ou
ltoxyde de propylène conduit à un thio éther (hydroxy alcoylé) que
l'on peut, si desiré, ethérifier ou estérifier au moyen d'un agent acylant
dérivé d'un acide carboxylique ou sulfonique. Les esters d'acides
aryl ou alcoylsulfoniques peuvent ensuite etre transformés en dérives
am$nes ou (alcoyl inferieur) amine par échange de fonction.
8) l'arylation du derive thio de formule VIII est effec-
tuee à l'aide d'un agent arylant comme par exemple un derive brome
ou iode en so~vant polaire comme la pyridine ou le dimethyl formamide.
",,~
- . i
.
.~
:: ,' .: ~
~L3~3~i
9~ l'aralcoylation du dérive thio de formule VII est
effectuée à l'aide d'un halogénure ou d'un ester sulfonique d'aral-
coyle en présence d'un accepteur de protons comme par exemple une
trialcoylamine telle que la triéthylamine, une aryl dialcoylamine
telle que la NN dimethylamiline, une base pyridique telle que la
pyridine, la collidine, ou la lutidine; un dialcoyl al~oylcarbo-
xamide tel que le diméthyl formamide ou le diéthyl acetamide, ou
un reactif basique tel qu'un carbonate de metal alcalin ou alcalino
terreux, le phosphate de magnesium ou la magnesie.
Les composes obtenus selon les procédes de l'invention
sont doués de proprietés pharmacologiques interessantes qui les
rendent aptes à servir de principes actifs de medicament. Ils mani-
festent en particulier des propriétés immunodepressives. Ils mani-
festent également un effet favorable sur la resistance mécanique du
derme et un effet protecteur sur le collagène soluble.
C'est ainsi que sur des lots de souris CBA ils entra~-
nent une diminution sensible de l'hypersensibilite de contact retar-
dee après badigeonnage avec une solution d'oxazolone.
Les composés de formule I ainsi que leurs sels d'addition
obtenus selon les procedes de l'invention sont administrés en medeci-
ne humaine ou vetérinaire sous forme de compositions pharmaceutiques
appropriees pour l'administration par voie parenterale, orale, rectale
ou sublinguale.
Les compositions pharmaceutiques peuvent renfermer en
outre un autre principe actif d'action similaire ou complémentaire
: : :: : : : . : :;
-- 10 --
~3~23S
ou synergétique comme par exemple un p.aminophenyl sulfamide tel
que le sulfamétoxazole ou la sulfapyridazine. La posologie journa-
lière varie de 100 mg à 2 g selon la voie d'administration, l'âge du
patient et l'indication thérapeutique.
En tant qu'agents immunodépressants ils trouvent un emplo~
dans le traitement du rhumatisme, dans les greffes d'organe comme
par exemple les transplantations du coeur, du foie, des reins ou du
pancréas.
Parmi les composés de formule générale I on distinguera
les sous-groupes suivants:
l? les composes de formule IA
CO - X
(CH ~ NH2 ,R2 (I~)
R4
dans laquelle Rl, X et n sont définis comme précédem~ent
R2 et R3 sont chacun de l'hydrogène, un
radical alcoyle ou un radical alcoyle substitué ou un radical phenyle
R4 est de l'hydrogène ou, lorsque R2 et R3
sont un radical phényle, un radical phényle
2) les composes de formule IB
(Cl ~ COH2 X ( B)
R ~ Ar
.: :-.. - : :
, ~' : - . ~.
~L3~ 35
dans laquelle X, R et n ont les significations fournies
antérieurement
et Ar représente un radical aromatique non
substitué ou substitue choisi dans le groupe constitue par phényl,
phényl substitué, thényl, furyl, thiazolyl, oxadiazolyl et pyridyl
3) les composes de formule I
X (Ic)
(D)~
dans laquelle X, R et n sont definis comme ci-dessus
D est un halogène, un trifluoromethyle, un
amino, un (alcoyl inferieur) amino ou wn (acyl inferieur) amino
et n est un nombre variant de O à 3
4) les composes de formule I
(CH2~X2 (ID)
R H
dans laquelle X, R et n ont les significations fournies
anterieurement.
Parmi les composés de formule I on considerera comme
deri~es du cyclohexane ceux pour lesquels n est egal à 1, du cyclohep-
tane ceux pour lesquels n est egal à 2 et du cyclooctane ceux pour
. ., ..:
. ' ' ~
~L3~23~
lesquels n est égal a 3.
On préfère néanmoins les composés pour lesquels n est
égal à O ou l.
On pourra citer à ti~re d'exemples de composés preferés:
- l'acide 2-méthyl 2-benzylthio l-amino cyclohexyl -1-
carboxylique et ses diastéréoisomères.
- l'acide l-amino 2-benzylthio cyclohexyl -l-carboxylique
- l'acide 2-méthyl 2-méthylthio l-amino cyclahexyl
l~carboxylique
- l'acide 2-benzylthio l-amino cyclopentyl l-carboxylique
et ses diastéreoisomères
- l'acide 2-(p.chlorophénylthio) l-amino cyclohexyl
l-carboxylique et ses diastéréoisomères
- l'acide 2-méthyl 2-benzylthio l-amino cyclopentyl
l-carboxylique
- l'acide 2-mercapto l-amin.o cyclohexyl l-carboxylique
- l'acide 2-mercapto l-amino cyclopentyl -l-carboxylique
- l'acide 2-(thiényl-thio) l-amino cyclohexyl -l-carboxy-
lique
- l'acide 2-benzylthio l-amino cyclopentyl l-carboxylique.
Chaque fois qu'ils sont obtenus selon les procédés con-
formement à l'invention.
L'invention comprend aussi à titre de produits intermé-
diaires, les spirohydanto~nes de formule V
: ^ '~ '' ' ' ' : ~,
, ~
. , ' .: ; ^ .' : :: ~,,
3~
,~ ~ H
S
dans laquelle R, Rl et n ont les définitions fournies
précédemment.
Pour autant que la présente invention est concernée, le
terme "alcoyle inférieur" désigne des radicaux hydrocarbones ayant
de 1 à 6 atomes de carbone comme par exemple méthyle, éthyle, iso
propyle, sec butyle, neo pentyle, terbutyle ou n-hexyle.
Le terme sryle désigne un radical ~ caractère aromatique
ayant 5 à 6 cha~nons et pouvant comporter 1 ou 2 hétéroa~omes. En
outre ce cycle peut porter un ou deux substituants choisis dans le
groupe constitué par les halog~nes, un alcoxy inférieur, un trifluo-
rométhyle, un alcoylthio inférieur, un méthylene dioxy, un hydroxy et
un alcoyle inférieur.
Le terme alcényle inférieur designe une chalne hydrocar-
bonée mono ou polyethylenique ayant de 2 à 10 atomes de carbone
comme par exemple propenyle-2-S allyle, me~hallyle, 3,3-dimethyl
allyle, but-2 enyle, penta 2,4-dienyle ou triallyl methyle.
Les exemples suivants illustrent l'invention. Ils ne
la limitent en aucune façon.
: : .: .;.
- : :, ,, . :
: -: : -
: , ~ : , `:
: :
., : .:, ~
~l3~23 S
Exemple I
dl acide l-amino 2-methyl 2-ben~ylthiocyclohexyl -1
carboxylique (mélange des isomères ~ et ~)
Stade A 2-méthyl 2-chloro cyclohexanone
_______
Après avoir dissout 112 g de 2-methyl cyclohexanone dans
500 ml de tétrachlorure de carbone on ajoute goutte à goutte une
solution de 90 ml de chlorure de thionyle dans 150 ml de tétrachlo-
rure de carbone. L'addition dure 60 mn et s'e~fectue sous forte agi-
tation en maintenant la température du milieu réactionnel à 15
environ à l'aide d'un bain dleau. L'agitation est ensuite maintenue
pendant une période supplémentaire de deux heures. Le mélange ré-
actionnel est alors lavé à trois reprises avec l'acide chlorhydrique
dilué, puis à deux reprises avec une solution saturée de bicarbonate
de sodium et enfin avec une solution saturée de chlorure de sodium.
La phase organique est séparée, séchée sur sulfate de sodium, filtrée
puis évaporée à sec sous pression réduite. On obtient un résidu sec
pesant 180 g environ que l'on purifié par distillation fractionnee.
La fraction principale distille à 85-90~ sous 20 mm Hg.
nD - 1,4672
Stade B 2-méthyl 2-benzythio cyclohexanone
On dissout 126,5 g de 2-méthyl 2-bromo cyclohexanone ob~
tenue au stade précédent dans 70 ml d'éthanol. On y a~oute un mélange
de 82 g de benzylmercaptan et de 26,4 g de soude en solution dans 330
ml d'éthanol. Le mélange est porté au reflux pendant 15 mn. Il
'
- 15 -
~3L3~235
appara~t alors une coloration rose. On laisse ensuite revenir le
mélange à la température ordinaire et on évapore l'éthanol. Le résidu
huileux est repris dans 400 ml d'eau et on épuise la suspension avec
3 fois 25 ml de chlorure de méthylène. Les phases organiques sont
réunies, lavées à l'eau jusqu'a neutralité puis séchées, filtrées et
évaporées à sec. Le résidu est purifié par distillation fractionnee.
On obtient ainsi 120 g de 2-méthyl 2-benzylthio cyclohexanone qui
distille à 142-144 (Rendement 78%).
Stade C 2-methyl 2-benzylthiocyclohexyl
l-spirohydanto~ne
Dans une fiole à bouchage hermetique on introduit suc-
cessivement 2,5 g de cyanure de potassium préalablement dissout dans
15 ml d'eau puis un melange de 11,7 g de 2-methyl 2-benzylthio cyclohe-
~anone, 0,6 g de carbonate d'a~monium et 40 ml d'ethanol à 60%.
L'addition dure environ 15 mn. Le mélange est placé dans un bain
thermostatique à 50 environ et maintenu à cette temperature pendant
45 heures sous agitation. Après ce laps de temps le solvant de la
reac~ion est evapore et le résidu sec est mis en suspension dans un
mélange de 180 ml d'eau et 100 ml d'éther. On agit vigoureusement
et on isole le precipite par filtration. On le lave à l'eau et on
le sèche à 50. On isole ainsi 2,5 g de spirohydanto~ne fondant à
210. La concentration des eaux mères pPrmet d'isoler un second jet
pesant 0,9 g. Le rendement global est d'environ 20%.
. ;~
.: ..:
, . : :: .:., , ,: .
- 16 -
~L~3~;23S
Stade D Acide dl 2-methyl 2-ben7ylthio l-amino
cyclohexyl l-carboxylique
On prepare une solution de 63,1 g d'hydroxyde de baryum
dans 500 ml d'eau a chaud. On filtre l'insoluble après retour à la
tempreature ordinaire. On ajoute le filtrat à une suspension de 30,5 g
de la spirohydanto~ne obtenue au stade C dans 150 ml d'eau. On com-
plète ensuite le volume à lOOO ml. Le recipient est hermetiquement
ferme et chauffe à 140 pendant 65 h. On laisse ensuite revenir la
température intérieure à 90 et on transvase le liquide dans une fiole
conique. Les parois du récipient hermetique sont rincées à deux re-
prises avec une solution N d'acide chlorhydrique. Les solutions
acides sont a~outees au melange reactionnel. On acidifie alors l'en-
senble des liqueurs à pH l par addition d'acide chlorhydrique.
On neutralise, ensuite, par addition de bicarbonate de
sodium ~usqu'à un pH de 6,3. Il appara~t un insoluble et le melange
est laisse repose une nuit en glacière. On epuise la suspension au
chloroforme. On separe les phases chloroformiques que l'on filtre
et evapore à sec~ Le residu cristallin es~ repris dans de l'acide
chlorhydrique N et chromatographié sur une colonne garnie de résine
carbo~ylique échangeuse d'ions (DOWE~ XW8)*. Après écoulement du
solvant, on elue l'amino acide par une solution aqueuse de triethyla-
mine ~usqu'à disparition de la réaction coloree à la ninhydrine.
* Marque de commerce
.
~ ff,
,
L23S
Après évaporation des éluats sous pression réduite, on
obtient 7 g d'acide 2-benzylthio 2-méthyl l-amino cyclohexyl l-carbo-
xylique (rendement 25%). Le produit est recristallise pour l'ana-
lyse de l'acétone. Son point de fusion est de 215
Analyse; C H N02S = 279,40
15 21
C H N S%
Calculé 64,48 7,57 5,01 11,47
Trouvé 64,20 7,20 5,00 11,32
Ce composé retlent l'eau très énergiquement et la déshy-
dratation necessite un chauffage à 150 pendant une heure.
Spectre IR : en accord avec la structure globalement, pas de bande
sp8cifique.
Spectre RMN : en accord avec la structure l'intégration des champs
magnétiques s'avère correcte.
Exemple II
Acide dl l-amino 2-benzylthio cyclohexyl l-carboxylique
En utilisar.t le mode opératoire de l'exemple I au départ de la cyclo-
hexanone, on obtient successivement :
- la 2-benzylthiocyclohexanone bo 07 = 128-132 (Rende-
ment 7270)
- la 2-ben~ylthiocyclohexyl l-spirohydanto~ne F = 216
- l'acide dl l-amino 2-benzylthio cyclohexyl -1 carboxy-
lique (melange d'isomeres) F = 220 (recrist. de l'eau)
.;~
: .'' ,: ,. . ~
.:.~ : . ...
- 18 -
~13:~L235
Analyse; C14 H19 N02S ~ 265,377
C H N S ~
Calcule63,40 7,35 5,29 12,0g
Trouvé 62,93 7,03 5,22 11,92
Ce compose est soluble dans l'acide chlorhydrique dilue.
L'évaporation de la solution fournit le chlorhydrate. ~`
Exemple III
Acide dl l-amino 2-thio cyclohexyl l-carboxylique (mélange d'isomères)
~près avoir condense 100 ml d'ammoniac liquide dans de la neige car-
bonique et de l'acetone, on laisse le liquide revenir vers -30C et
on ajoute alors 3,2 g de sodium fra~chement coupe en lamelles, par pe-
tites portions jusqu'à ce que le melange prenne une coloration bleue
stable. On ajoute alors 6 g d'acide l-amino 2-benzylthiocyclohexyl
l-carboxylique obtenu à l'exemple II. Le melange est maintenu sous
agitation pendant une heure et garde sa coloration bleue. L'excès de
reactif est decomposé par addition menagee de chlorure d'ammonium.
On laisse ensuite l'ammonlac s'evaporer à temperature ordinaire. On
evapore ensuite l'acetone sous pression reduite. Le residu sec est
repris par quelques ml d'eau et la suspension est rendue acide par
addition d'acide chlorhydrique ~l (jusqu'à pH 2). On evapore ensuite
a sec. Le residu est lave à l'acetone puis recristallisé de l'iso-
propanol. On obtient ainsi 3 g de chlorhydrate retenant encore de
petites quantités de sels mineraux. On le purifie par retour en
milieu basique puis transformation en chlorhydrate. Le chlorhydrate
pur fond au dessus de 250.
. ~ .
- 19 - ~
~L~3~3~
S % = 13,98 (~héorie 14,20)
Spectre RMN Massif de 2,6 à 3,1 ppm (1 proton)
(D20) Signaux de 1,6 à 2,6 ppm correspondant a 10 protons
dont 2 singulets.
Exemple IV
Acide dl l-amino 2-(p.chlorophénylthio) cyclohexyl l-carboxylique
(mélange d'isomères)
En utilisant le mode operatoire de l'exemple I au depart
de la cyclohexanone et en remplacant le benzylmercaptan par le
p.chlorophenylthiol on obtient l'acide dl l-amino 2-(p.chlorophe-
nylthio) cyclohexyl l-carboxylique (melange d'isomères). Il fond
au dessus de 250 (avec dec.)
Analyse C13 H16 Cl N2S a 285~8
C H N Cl S %
Calcule 54,64 5,644,90 12,41 11,22
Trouve 54,26 5,494,89 12,50 11,40
Exemple V
Acide dl l-amino 2-benzylthiocyclopentyl l-carboxylique (melange
d'isomères)
En operant selon le mode operatoire de l'exemple I au
depart de la cyclopentanone, on obtient l'acide dl l--amino 2-benzylthio-
cyclopentyl l-carboxylique sous forme de mono hydrate.
Le point de fusion de ce produit ne peut être determine avec certi-
tude. L'acide dl l-amino 2-benzylthiocyclopentyl l-carboxylique est
.~`h~
', :' ~', ' :
. !
'
- 20 -
1~3:1~3S
soluble dans l'acide méthane sulfonique dilué par chauffage a 40.
Après évaporation du solvant on récupère le méthane sulfonate.
Analyse de l'hydrate:C13 H17 02NS.H20 = 269
C H N S %
Calculé57,97 7,10 5,20 11,90
Trouvé58,69 7,05 5,20 12,46
Exemple VI
Acide dl 2-méthyl 2-benzylthio l-amino cyclopentyl l-carboxylique
Au départ du 2-oxocyclopentyl l-carboxylate d'éthyle, on forme la
2-méthylcyclopentanone par méthylation au moyen d'iodure de méthyle
en presence d'une basè forte comme l'hydrure de sodium.
La 2-methylcyclopentanone est--conver~ie en acide dl
2-methyl 2-benxylthio l-amino cyclopentyl l-carboxylique en opérant
selon le mode opératoire de l'exemple I. Il fond au dessus de 250
(avec dec.). Cet amino-acide est soluble dans les solutions aqueuses
diluees d'acide chlorhydrique mais insoluble dan les solution
aqueuses d'hydroxydes de metaux alcalins.
Analyse: C14 Hlg N02S = 265,38
C H N %
Calculé63,36 7,22 5,28
Trouvé63,34 7,07 ` 5,~8
D'une manière similaire au départ du 2-oxocyclopentyl -
ou cyclohexyl - ou cycloheptyl - ou cyclooctyl carboxylate d'éthyle
et de l'agent d'alcoylation approprié, on peut préparer les 2-méthyl,
, ~ ` '
- 21 -
~l~3:~23~
2-isopropyl ou 2-butyl cycloalcanones, matières premières necessaires
à l'obtention des acides l-amino 2-alcoyl 2-thiocycloalcoyl l-carbo-
xyliques.
Exemple VII
Acide dl l-amino 2-(thienylthio) cyclohexyl-l carboxylique
~n utilisant le mode operatoire de l'exemple I au depart
de 2-chlorocyclohexanone et de tthienyl-2~thiol, on obtient l'acide
dl l-amino 2-(thienylthio)cyclohexyl l-carboxylique sous forme d'un
melange de diastereoisomères.
Ce compose fond au dessus de 250. Il est très soluble
dans la potasse aqueuse.
AnalyseCll H15 N2S ' 257~378
C H N S %
Calculé 51,33 5,87 5,44 24,91
Trouvé 51,42 6,04 5,70 24,81
Exemple VIII
Acide dl l-amino 2-thlocyclopentyl l-carboxylique
On condense 900 ml d'a~moniac dans un mélange refrigerant
acétone~carboglace à -70. On ajoute 20 g d'acide dl 1 amino 2-
benzylthio cyclopentyl l-carboxylique en une fois puis par petites
fractions environ 8 g de fragments de sodium fra~chement decoupes.
Le melange prend une coloration bleu fonce. On laisse reposer le
tout pendant une heure puis on decolore le melange reactionnel par
addition menagee de chlorure d'ammoniumO On laisse ensuite l'ammoniac
' :~`
~ . . ~ .. ., . ; . - ,: :-
.' ' ~,
'' ' ' ' '
- 22 - ~
Z3~
s'évaporer à température ordinaire. La solution acétonique est di-
luée à l'eau et acidifiée par de l'acide chlorhydrique jusqu'à une
valeur du pH de 2, La solution acide est chromatographiée sur une
colonne de résine échangeuse d'ions DONEX 50W8 préalablement traitée
~ l'acide chlorhydrique et lavée à l'eau. Après passage de l'effluent,
on élue l'acide l-amino 2-thiocyclopentyl -l-carboxylique par une
solution aqueuse de triéthylamino à 50 g/litre. On recuei~le les
éluats en 16 fractions de 25 ml. Après évaporation de chaque fraction
on recueille le thiol dans les fractions 9 à 16. Le thiol est lavé
à l'éther puis à l'éthanol. On obtient ainsi 4,3 g d'acide dl l-amino
2-thiocyclopentyl l-carboxylique (rendement 27%). Il est soluble
dans l'eau donnant une solution de pH 6,4.
Analyse: C6 Hll N02S ~ 16:L,32
C H N S %
Calcule44,67 6,B7 8,68 l9,B7
Trouvé44,52 7,02 8,55 19,57
Par réaction avec le chlorure de triphénylméthyle, on peut
bloquer à la fois la fonction amine et la fonction thiol. Le groupe
carboxylique peut ensuite etre transforme en derives fonctionnels9
puis esterifie ou amidifie. On débloque ensuite les groupes amino et
thiol par hydrolyse acétique.
Exemple IX
Séparation des diastéréoisomères de l'acide l-amino 2-benzylthiocy-
clopentyl l-carboxylique.
, ::.,. . . , , . ::
- 23 -
~13~Z~5
On met 3,5 g d'acide l-amino 2-benzylthio cycloheptyl
l-carboxylique en solution dans un melange de chloroforme et de
methanol. On injecte la 801utio~ dans un chromatographe haute pres-
sion en phase liquide equipe d'une colonne garnie de 1,5 kg de silice
(10-40 ~) en suspension dans de la cyclohexanone.
On elue les deux diastereoisomères successivement. Les
produits retiennent encore des sels mineraux. Ils sont encore purifies
par chromatographie en phase liquide preparative (colonne de silice
5,20 ~ RP8~ et elution au methanol. On recristallise chaque diasté~
reoisomère d'~m melange chloroforme/methanol/ester.
On recueille le premier isomère en deux ~ets pesant au
total 2 g (isomère ~). Le second isomère est également obtenu en 2 ~ets
(poids to~al 0,9 g isomère ~).
Isomère ~: point de fusion au dessus de 250, soluble dans les so-
lutions aqueuses N/10 d'acide methane sulfonique.
Analyse; C13 H17 N2S = 251~35 + 2~5% eau
C H ~ %
Calcule 62,12 6,82 5,57 12,76
Trouve 62,00 6,72 5,68 13,18
Isomère ~ point de fusion au dessus de 250
AnalyseC13 ~17 N2S = 251~35
C H N S %
Calcule62,126,82 5,57 12,76
Trouve62,017,17 5,60 12,73
D
- 24 -
~ 3L3~;235
Exemple X
Séparation des deux diastéréoisomères de llacide l-amino 2-méthyl
2-6enzylthio cyclohexyl l-carboxylique.
On separe les deux diastéréoisomères par chromatographie en phase
liquide haute pression à l'aide d'un appareil HPLC de la firme
Jobin et Yvon garni avec une colonne chargée avec 1,5 kg de silice
(10-40 ~) en suspension dans la cyclohexanone. On injecte une solu-
tion de 3 g d'acide l-amino 2-méthyl 2-benzylthio cyclohPxyl l-carboxy-
lique dans 100 ml de mélange chloroforme-méthanol. Les deux isomères
sont obtenus successivement et les éluats sont amenés à sec. On
obtient le premier diastéreoisomère en deux jets (poids tatal 1,87 g).
On ob~ient le deuxième diastereoisomère par recristallisation et à
partir des liqueurs-mères (poids total 0,4 g). Le rapport ponderal
entre les deux diastereoisomères dans le. melange initial est d'environ
75 pour llisomère ~ -/25 pour l'isomère ~.
Isomère ~: point de fusion 262 (avec clecomposition) soluble dans
la soude N/10
-~Y 15 21 2
C H N S %
Calcule 64,48 7,58 5,01 11,48
Trouvé 64,39 7,39 5,14 11,82
Isomère ~: point de fusion: 260 (avec décomposition) soluble
dans la soude N/10
- 25 -
~13~35
Analyse C15 H21 N2S ~ 279~40
C H N S %
Calcule 64,48 7,58 5sO1 11,48
Trouve64,39 7,41 5,15 11,62
Exe~
Séparation des diastéréoisomères de l'acide l-amino 2-p chlorophényl-
thio cyclohexyi l-carboxylique.
Au départ de 5 g de mélange de diastéréoisomères et en utilisant la
tec~niquF~ de l'exemple IX, on sépare 3 g d'un des isomères (isomères ~).
Dansles liqueurs-mères on récup~ere en outre 1 g de cet isomère a
d'une pureté moins grande et 0,5 g d'un mélange renfermant le second
diastéréoisomère contaminé par des selc; minéraux. Le dias~éréoisomère
a fond au dessus de 250 (avec dec~) F;on chlorhydrate est très solu-
ble dans l'eau.
Analyse du chlorhydrate: C13 H16 CL N02S, ClH ~ 322,27
C H N S Cl
total ionique
Calculé48,45 5,32 4,35 9,95 22,00 11,00
Trouvé48,30 5,37 4,67 9,91 22,65 11,45
Exemple XII
Acide dl l-amino 2-méthylthlo 2-méthyl cyclohexyl ~1 carboxylique
(mélange de diastéréoisomères).
Au départ de la 2-methylcyclohexanone et du m~thylmercap-
tan, on obtient selon le mode operatoire de l'exemple I l'acide
l-amino 2-méthyl 2-methylthiocyclohexyl l-carboxylique.
F au dessus de 225 sans fusion nette. Il est tres soluble dans l'eau.
- 26 - ~
~L~L3~23~i
Analyse Cg H17 N02S = 203,31
C H N S ~
Calcule53,17 8,43 6,89 15,77
Trouve53,24 8,59 6,97 15,93
L'acide l-amino 2-methylthio 2-methyl cyclohexyl l-carboxy-
lique peut egalement être obtenu a partir de l'acide 1 amino 2-ben-
zylthio 2-methylcyclohexyl l-carboxylique par bloquage du groupement
amine sous forme de derive triphenylmethyl amino, debenzylation par
hydrogenolyse, methylation du groupe thio puis detritylation par l'aci-
de acetique aqueux.
Exemple XIII
Comprimes renfermant 250 mg d'acide 2-methyl 2-benzylthio l-aminocY-
clohexyl l-carboxylique (melange de dias~téreoisomères).
Acide 2-methyl 2-benzylthio l-amino cyclohexyl l-carboxylique 2,500 kg
amidon de ma~s ~.............................................. 0,250 k8
amidon de blé ................................................ 0,250 kg
éthyl cellulose .............................................. 0,040 kg
silicate de magnésium ........................................ 0,150 kg
talc ......................................................... 0,100 kg
caséine formolee ................. ~........................... 0,025 kg
lactose ...................................................... 0,200 kg
pour 10,000 comprimés d'un poids moyen de 0,35 g
Exem~le XIV
Etude pharmacologique des composés selon l'invention.
Les produits selon l'invention sont des acides ~-amines
~-thiol ou thioester qui ont e~e synthetises et testes dans la
. ~ .
- 27 -
~ 3~;235
perspective de produits actifs sur le tissu conjonctif: sur la
polymerisation du collag_ e par un mecanisme analogue à la D-pe-
nicillamine selon les descriptions de JAFFE et NIMMI et sur 1'action
_munodepressive de la D-penicillamine, par un mecanisme different
de celui des corticoYdes, des agents alcoylants ou des antimetabo-
lites.
Les composes selon l'invention ont été testés principale-
ment dans ces deux directions. Dans cette série on a trouvé des
produits d'activité imm~modépressive: leur mode d'action se rapproche
soi~ de la D-~pénicillamine soit des antimétaboli~es, dtautres pro-
duits actifs sur le tissu con~onctif et également immunodépresseurs.
TECHNIQUE
Immunodépression: le test d'hypersensibilité retardée de contact
à l'oxazolone décrit par Phanuphak et Coll.~J. of Immunol 1974, 112-
115) a été modifié de manière à obtenir une réponse cellulaire T pra-
tiquement pure. En bref, la sensibilisation des souris ~CD ~ 25-27 g~
s'effectue par application percutanee dorsale avec une solution
oleoacetonique (1/4) à 3% d'oxazolone; le challenge a lieu 5 jours
après, egalement par contact au niveau de l'oreille, avec une solution
a 3% d'oxa~olone dans le même solvant. La reaction est lue 24 et
48 h après. L~epaisseur de l'infiltration est mesuree, le nombre
d'animaux repondeurs au-dessous d1un seuil~ est note. Les animaux
sont traites soit 3 ~ois: 2 jours avant le jour de la sensibilisa-
tion soit à dose unique, 2 ~ours apres la sensibilisation.
,~ .
- 28 - ~
~L~L3~Z3S
Synthèse et polymérisat on du collagene elles sont étudiées glo-
balement par la résistance physique à l'élongation des tissus, me-
surée par jauge selon la technique de JAFFE et Coll.(Science 1968,
161, 1016). La résistance du conjonctif néoformé post-cicatriciel
est mesuré 8 jours après la lésion, le traitement ayant lieu du
5e au 7e jour; la résistance du derme natif est mesurée après
9 jours de traitement.
RESULTATS
Activite im unodepressive: pour les produits de référence l'acti-
vite est retrouvee à dose elevee, mais nous avons affaire à des trai~
tements par dose unique (j + 2) ou relativement courts (; - 2,
- 17 O) alors que ces produits nécessitent une certaine imprégnation
pour manifester leurs effets. Deux types d'activité sont retrouvés:
1) En cours de sensibilisation, pour les antimétabolites,
les agents alcoylants et les corticoYdes.
2) Avant sensibilisation pour la D pénicillamine et la
cycloleucine.
Les composés selon l'invention aux doses de 50 à 200 mg/kg
possèdent une action soit en cours de sensibilisation soit avant
sensibilisation.
Activité sur le tissu conjectif;
On peut etablir l'activite de la D-penicillamine sur ce
test comme substance de reférence à la dose de 250 mg/kg. Les cor-
t1soniques possèdent egalement une efficacite. Par contre les autres
~, , 1
: ' `, : .
- 2~ - ,
~3~'~35
métabolites et les agents alcoylants sont sans effet car dejà trop
toxiques.
Les composés selon l'invention et notamment l'acide
l-amino 2-ben7ylthio 2-méthylcyclohexyl l-carboxylique sont plus
actifs sur le collag~ne natif que sur le collagène néoformé. Ils
agissent à partir de la dose de 250 mg/kg per os.
Détermlnation de la toxicité aiguë:
Les composés selon l'invention ont été administrés par
voie buccale à doses croissantes à des lots de 10 souris tsouche CD)
pesant 20 g environ. Les animaux sont placés en observation pendant
8 ~ours et les morts, s'il y en a, sont dénombrés. La dose lethale
moyenne est déterminée graphiquement. Selon les produits elle varie
entre 1 et plus de 2 g. A titre de comparaison la DL50 de la
D-pénlcillamine est de 8 g environ per os.
