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La présente invention concerne un nouveau procédé de
purification de l'acide ursodésoxycholique.
L'acide ursodésoxycholique ou acide dihydroxy-3u, 7~
(5~)-cholanique permet la dissolution des calculs biliaires cho-
lestéroliques et est utilisé en médecine humaine dans le traitement
de la lithiase biliaire.
De façon classique, l'acide ursodésoxycholique est pré-
paré à partir d'acide chénodésoxycholique /C.A~ 51~ (1957) 17965/,
lui-même préparé à partir d'acide cholique /J.A.C.S. 72, 5530
(1950)/, lui-même extrait de bile animale.
Au terme de sa préparation, l'acide ursodésoxycholique
brut renferme un certain nombre d'impuretés (autres acides biliaires
et notamment l'acide chénodésoxycholique, et dérivés d'acides
biliaires formés au cours de la synthèse).
La présence de ces impuretés dans un produit destiné à
être administré de façon prolongée, comme c'est le cas pour l'acide
ursodésoxycholiqueF risquerait de produire des effets secondaires
indésirables.
Il importe donc de disposer d'un procédé de purification
de l'acide ursodésoxycholique qui permette d'obtenir un produit
de très haute pureté.
Il est connu de purifier l'acide ursodésoxycholique par
formation de l'ester méthylique de l'acide ursodésoxycholique,
recristallisation de cet ester dans un solvant organique et hydro-
lyse (demande de brevet japonais n 154864/1975).
Le but de la présente invention est de fournir un procédé
de purification de l'acide ursodésoxycholique qui, sur un plan
industriel, permette d'obtenir un acide ursodésoxycholique de très
haute pureté, avec des rendements meilleurs que ceux obtenus lors
de la mise en oeuvre industrielle des procédés connus.
C'est ainsi que la présente demande a pour objet un
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procédé de ~urification de l~acide ursodésoxycholiq~e, car~ctérisé
en ce que l'on traite un sel de métal alcalin de l'acide ursodé-
soxycholique à purifier, en solution aqueuse, en présence de chlo-
roforme, par un acide, recueille le produit cristallisé formé et
récupère de celui-ci l'acide ursodésoxycholique purifié.
Le sel de métal alcalin peut être notamment un sel de
sodium, de potassium, de lithium. De fa~on préférée, le sel de
métal alcalin est un sel de sodium, mais ce peut etre également un
sel de lithium, comme on le verra plus loin.
Dans des conditions préérentielles de mise en oeuvre
de l'invention, l'acide utilisé pour traiter le sel de métal
alcalin de l'acide ursodésoxycholique est un acide minéral, tel
que l'acide chlorhydrique, l'acide phosphorique, l'acide sulfurique.
On utilise avantageusement l'acide chlorhydrique.
On obtient donc, à ce stade, un produit cristallisé
et dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre du pro-
cedé de l'invention, on récupère l'acide ursodésoxycholique par
séchage du produit cristallisé. Par "séchage", on entend action
de la chaleur, du vide ou ventilation.
Le sel de métal alcalin de l'acide ursodésoxycholique
peut etre obtenu par estérification de l'acide ursodésoxycholique
brut avec le méthanol, suivie d'une recristallisation de l'ester
méthylique de l'acide ursodésoxycholique et d'une saponification.
Selon un mode particulièrement avantageux de mise en
oeuvre d'un tel procédé, l'ester méthylique de l'acide ursodésoxy-
cholique est recristallisé dans l'acétate d'éthyle.
L'utilisation de l'acétate d'éthyle comme solvant de
recristallisation de l'ester méthylique de l'acide ursodésoxy-
cholique présente sur celle des autres solvants, comme le méthanol
(demande de brevet japonais n 15~6~/1975 citée pl~ls haut) l'avan-
tage de permettre une meilleure purification de l'ester, avec un
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meilleur rende,nent de recristallisation.
Le sel de métal alcalin de l'acide ursodésoxycholique
peut être également obtenu au cours de la synthèse de l'acide
ursodésoxycholique à partir de l'acide chénodésoxycholique, selon
le procédé décrit notamment dans C.A. 51, (1957) 17965, au dernier
stade, lors de la réduction de l'acide 3~-hydroxy 7-cétocholanique
par un métal alcalin.
Ce métal alcalin peut etre le sodium, agissant en pré-
sence de ter-butanol (demande de brevet japonais n 154~65/1975).
Ce peut être également le lithium, dans le cas où l'on
réduit ~'acide 3~-hydroxy 7-cétocholanique par le lithium dans
l'ammoniac liq~lide en présence d'un alcool qui peut être~ par
exemple, le méthanol, la réaction étant conduite de préférence, au
sein d'un solvant organique qui peut être le tétrahydrofuranne.
I,es exemples donnés ci-après illustrent l'invention
sans toutefois la limiter.
Exemple 1: On dissout 1,320 kg d'acide ursodésoxycholique brut
(contenant de l'ordre de 8 % d'acide chénodésoxycholique) dans
5,280 litres de méthanol en agitant à 20C pendant environ 15
minutes, puis introduit, en 15 minutes, 132 cm3 d'acide sulfurique
66 Bé, maintient sous agitation pendant 2 heures, puis ajoute
un mélange de 3,960 litres d'eau déminéralisée, 0,400 kg de bicar-
bonate de sodium, 1,320 kg de glace et 3,960 litres de chlorure
de méthylène.
On agite 15 minutes, sépare la phase chlorométhylénique
et réextrait la phase aqueuse au chlorure de méthylène. On lave
la solution chlorométhylénique a l'eau et réextrait les eaux de
lavage au chlorure de méthylène. On sèche la solution chloromé-
thylénique au sulfate de sodium anhydre en traitant au charbon
actif, essore et lave au chlorure de méthylène. On concen-tre à
sec et ajoute 2,640 litres d'acétate d'éthyle, distille à pression
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ordinaire environ 1,320 litres d'acétate d'éthyle, puis concentre
à sec sous pression réduite. On ajoute à l'extrait sec solide
7,920 litres d'acétate d'éthyle~ chauffe au reflux sous agitation
jusqu'à dissolution ~otale, puis distille à pression ordinaire
1,320 litres, refroidit à 60C, abandonne au repos pendant 18
heures, refroidit ensuite sous agitation à 0 + 5C, maintient
dans ces conditions pendant une heure, lave par empatage avec 3
fois 0,660 litre d'acétate d'éthyle à 0 + 5C, sèche à 60C, et
obtient 1,134 kg d'ester méthylique de l'acide ursodésoxycho]ique.
F. = 158 C.
On récupère par ailleurs des eaux-mères et des eaux de
lavage 62 g d'ester méthylique de l'acide ursodésoxycholique.
On dissout en agitant entre 20 et 25C les 1,196 kg
d'ursodésoxycholate de méthyle obtenu dans 5,980 litres de méthanol,
ajoute une-solution de 0,360 litre d'hydroxyde de sodium 36 Bé
dans 7,180 litres d'eau démineralisée, porte au reflux sous bonne
agitation, et maintient au reflux sous agitation pendant une
heure. On refroidit entre + 50 et + 60C, essore, lave avec 1,196
litres de méthanol à 50- 60C, puis distille à pression ordinaire.
On ajoute au concentrat aqueux 3,590 litres d'eau, puis après
re~roidissement à 27 + 2 C, 5,980 litres de chloroforme.
On ajoute ensuite, sous bonne agitation en 30 minutes
environ à 27 _ 2C, 1,500 litres environ d'une solution d'acide
chlorhydrique 22 Bé, (14% en volume) dans de l'eau déminéralisée
(86~ en volume).
On agite à 27 ~ 2C pendant 30 minutes, puis ajoute en
30 minutes environ, 1,345 litre de la même solution d'acide chlo-
rhydrique. On agite pendant 2 heures à 27 + 2C, e~sore et obtient
un produit cristallisé. On lave ce produit cristallisé par em-
pâtage au chloroforme à 27 + 2C, puis avec de l'eau déminéra-
lisée, sèche à 60C et obtient 1,130 kg d'acide ursodésoxycholique.
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On récupère à partir des eaux-mèreS chloroformiques
25 9 d ' acide ursodésoxycholique.
D = + 305 + 5 (c = 5%j éthanol).
ar chromatographie sur couche mince, on voit que l'acide
ursodésoxycholique purifié obtenu ren~erme moins de 0,25 % d'acide
chénodésoxycholique et moins de 0,25 ~ d'acides biliaires ou
dérivés autres que l'acide ursodésoxycholique et l'acide chéno-
désoxycholique.
Exemple 2; On mélange sous agitation en une heure environ, à
la température de - 35 à ~40C, 7,650 litres d'ammoniac liqué-
fié et un mélange refroidi à -10C de 9,180 litres de tétrahydro-
furanne et 0,460 litre de méthanol, puis ajoute en 15 minutes
environ, 1,530 kg d'acide 3~-hydroxy 7-cétocholanique. On ajoute
sous agitation, en maintenant entre -35 et -38C en une heure
environ 111 g de lithium, maintient sous agitation entre -35 et
-38C pendant une heure et ajoute ensuite en 15 minutes environ
1,530 litre de méthanol.
On ajoute ensuite, en 15 minutes environ, sous agitation,
1,530 litre d'eau déminéralisée à 20C, puis distille l'ammoniac~
Lorsque la majeure partie de l'ammoniac est évaporée, on ajoute
à 27 + 2C, sous agitation, 7,650 litres d'eau. On distille le
mélange tétrahydrofuranne-méthanol sous pression réduite en chauf-
~ant par un bain à 60 maximum, en maintenant à niveau con~tant
par ajout progressif de 1,530 litre d'eau déminéralisée. Après
refroidissement à 27C environ, on ajoute 15,300 litres d'eau,
ajoute sous agitation 7,650 litres de chloroforme puis, en une
heure en maintenant à ~ 27 + 2C, 3,060 litres d'aGide chlorhy-
drique 22 Bé. (On ajoute l'acide chlorhydrique jusqu'au moment
où le pH = 7 est atteint, arrête l'introduction d'acide et agite
pendant 30 minutes à 27 ~ 2C, puis reprend l'introduction d'acide).
On maintient ensuite sous agitation à 27 + 2C pendant
2 heures, essore sur toile de coton, remet ].e produit humide
en suspension dans 2,300 litres de chloroforme à 27 t 2C, agite
pendant 15 minutes à 27 ~ 2C, essore, remet en suspension pendant
15 minutes dans 2,300 litres de chloro~orme à 27 ~ 2C et essore.
. On lave plusieurs foisà l'eau, sèche à 60C et obtient
1,320 kg d'acide uxsodésoxycholique. F = 198C.
D = + 555 ~ 05 (c = 5%, éthanol).
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