Note: Descriptions are shown in the official language in which they were submitted.
~3~
La présente invention a pour obje-t un procedé
pour préparer de nouveaux derives du 3-amino pregn-5-~ne,
ainsi que leurs sels d'addition avec les acides minerauY. ou
organiques repondant a la formule generale (I):
~ ~ (I)
1 Nl ~
dans laquelle X represente un groupement CH3 ou fH3
/C~O /c~oH
les traits ondulés signifient que le radical correspondant
se trouve dans l'une ou l'autre des configurations u ou ~;
Rl represente un atome d'hydrogene ou un radical hydroxy-
alcoyle renfermant de 2 a 5 atomes de carbone;
R2 represente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyalcoyle
renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, acyle aliphatique ren~
fermant de 3 a 8 a-tomes de carbonel alcoxycarbonyle renfermant
de ~ à 8 atomes de carbone ou un radical derive dlun acide
~-amine ou d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides amines dont
l'amine est soit libre, soit mono- ou disubstituee par un ra-
dical alcoyle renfermant de 1 a 5. atomes de carbone, etant
entendu que d'une par-t, Rl et R2 ne representent pas en même
temps un atome d'hydrogene et ~ue d'autre part, si le groupe-
ment amino est en position 3~,
i) lorsque X represente un groupement: CH3
/~o
~.
-- 1 -- '
~3~
Rl et R2 ne peuvent pas représenter en meme temps un radical
hydroxyethyle,
ii) Lorsque X représente un groupement: CH3
/CH
bH
si Rl represente un atome d'hydrogene, R2 ne représente pas
un radical ethoxy carbonyle, ainsi qu'a la formule generale I
ci-dessus, dans laquelle X represente un groupement: j H3
1 0 _ _ -C\\
Rl represente un reste glycyle, R2 ~epresente un radical
methyle et le groupement amino est en position 3~.
Dans la formule generale I et dans ce qui suit, le
terme radical alcoyle renfe.rmant de 1 à 5 atomes de carbone,
designe, par exemple, un radical methyle, ethyle, propyle,
isopropyle, butyle, isobutyle ou pentyle, le terme radical
hydroxyalcoyle renfermant de 2 a 5 atomes de carbone designe,
par exemple, un radical hydroxyethyle ou hydroxypropyle; le
terme radical acyle renfermant de 3 a 8 atomes de carbone,
designe9 par exemple, un radical propionyle, n-butyryle ou
isobutyryle, le terme radical alcoxycarbonyle renfermant de
2 a 8 atomes de carbone designe, par exemple, un radical
methoxy, ethoxy ou propoxycarbonyle; le reste derive d'un
acide ~-aminé peut être choisi par exemple dans le groupe
constitue par Ala, Val, Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gln, Ser,
Thr, Cys, Met, Lys, Arg, Phe, Tyr, Trp, His, Pro, Nva, Nle,
Hyp, Orn, ces acides amines etant sous la forme D ou L,
ainsi que par Sar et Gly; lorsque R2 represente un radical
derive d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides ~-amines,
ceux-ci sont choisis dans le groupe constitue par les acides
~-aminés ci-dessus.
Lorsque les acides ~-amines ou les peptides sont
N-mono- ou di-alcoyles, c'est de preference par des radicaux
.~ - 2 -
methyle, ethyle ou propyle.
On admettra par convention que les symboles des
acides ~-aminés representent ces acides sous leur conEigura-
tion D ou L (par exemple, le terme ~la signiEie Alanine sous
forme D ou sous forme L).
La nomenclature utilisee dans la presente demande
est la nomenclature IUPAC, dont les règles sont publiees
notamment dans Biochem. J. 11972) 126, 773-780.
Les sels d'addition avec les acides minéraux ou
organiques peuvent etre, par exemple, les sels formés avec
les acides chlorhydrique, bromhydrique, nitrique, sulfurique,
phosphorique, acétique~ formique, propionique, benzolque,
maleique, fumarique succinique, tartrique, citrique, oxalique,
glyoxylique, aspartique, alcane sulfoniques tels que les
acides methane ou ethane sulfoniques, arylsulfoniques, tels
que les acides benzene ou paratoluene sulfoniques et aryl-
carboxyliques.
Parmi les produits obtenus par le procede, objet
de l'invention, on peut citer notamment les derives repondant
à la formule I ci-dessus, ainsi que leurs sels d'addition
avec les acides mineraux ou organiques caracterises en ce que,
dans ladite formule I, le groupement amino est en position 3~,
Rl represe~te un atome d'hydrogene et R2 represente un radical
derive d'un acide ~-amine ou d'un peptide comprenant 2 ou 3
acides amines.
Parmi ceux-ci, on peut citer plus particulierement
les derives, caractérises en ce que, dans ladite Eormule I,
X represente un groupement: IH3 ou fH3
C CH
/ ~ / ~
O H
dont l'hydroxyle est en position 20~ et tout particulierement
la 3~-méthylamino pregn-5-ene 20-one et les autres derives
prepares dans les exemples.
4~7
Le procédé de l'invention est caractérisé en ce
que l'on fait réagir une amine de formule (II):
~ J (1~)
H2N
dans laquelle le trait indulé et X ont la signification
déja indiquee,
soit avec un halogenure de formule III:
~ al-R'2 (III)
dans laquelle Hal represente un atome de chlore, de brome
ou d'iode, et R'2 represente un radical acyle aliphatique
renfermant de 3 à 8 atomes de carbone ou alcoxycarbonyle
renfermant de 2 a 8 atomes de carbone, pour obtenir un pro~
duit de formule I dans laquelle Rl représente un atome
d'hydrogene, R2 represente un radica] R'2 tel que defini
ci-dessus, X et le trait ondule ont la signiication-déja
indiquee, produit de formule I que l'on isole et salifie,
si desire,
- soit avec un acide ou un ahydride d'acide de formule
III':
A-O-R"2 (III')
dans laquelle A represente un atome d'hydrogene ou un
radical R"2 et R"2 represente Ull radical acyle aliphatique
renfermant de 3 a 8 atomes de carbone, pour obtenir un pro-
duit de formule I dans laquelle Rl represente un atome
d'hydrogene, R2 représente R"2 tel que defini ci-dessus et
X et le trait ondule ont la signification deja indiquee,
produit de formule I que l'on isole et salifie, s.i desire,
- soi.t avec un ~-amino acide ou un peptide comprenant 2 ou
3 acides amines dont la fonction amine est monosubstituee
ou disubstituée par un radical alcoyle renfermant de 1 a 5
atomes de carbone ou encore libre et, lorsqu'elle est libre,
est protégée par un groupement facilement clivable notarnment
par hydrolyse acide ou par hydrogénolyse, puis traite de
façon a éliminer le groupement protecteur, pour obtenir un
produit de formule I dans laquelle Rl représente un atome
d'hydrogene, R2 représente un radical dérivé d'un acide
a-amine ou d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides a-amines
et X et le trait ondule ont la signification déjà indiquee,
que l'on isole et salifie, si désiré,
- s _ avec un halogénure d'hydroxyalcoyle renfermant de 2
à 5 atomes de carbone et dont l~halogène est un atome de
chlore, de brome ou d'iode, pou~ obtenir un produit de
formule I dans laquelle l'amine en 3 est mono ou disubstituée
par un radical hydroxy alcoyle renfermant de 2 a 5 atomes
de carbone et X et le trait ondulé ont la signification
déja indiquée,
- soit dans le cas où X représente un groupement: -C-CH3
et où le groupement amino est un groupement methyla~ino en position 3~,
avec la ~lycine dont la fonction amine libre est protegée par un
groupement facilement clivable, puis traite de façon a
éliminer le groupement protecteur, pour obtenir un produit
2S de formule I, dans laquelle X représente un groupement
-~-CH3, Rl represente un reste glycyle, R2 représente un
radical methyle et le groupement amino est en position 3~,
produit de formule I que, ou bien l'on isole et salifie, si
d~siré, ou bien dans le cas où R2 représente un atome
d'hydrogene, l'on fait réagir ledit produit de formule I
avec un halogenure de formule IV:
~ al - R" '2 tIV)
dans la~uelle R" '2 represente un radical hydroxyalcoyle
~ 5
o
~3~
renfermant de 2 a 5 atomes de carbone, acyle aliphatique
.. renfermant de 3 à 8 atomes de carbone ou alcoxycarbonyle
renfermant de 2 à 8 atomes de carbone e-t Hal a la signifi-
cation de~a indiquée, pour obtenir un produit de formule I
dans laquelle R1 represen-te un radical hydroxyalcoyle ren-
fermant de 2 à 5 atomes de carbone, R2 représente un radical
R"'2 tel que défini ci-dessus, et X et le trait ondulé ont
la signification déja indiquée, que l'on isole et salifie si
désiré, ou bien encore dans le cas ou R représente un atome
d'hydrogene, l'on fait réagir ledit produit de formule I
avec un ~-amino acide ou un peptide comprenant 2 ou 3 acides
aminés dont la fonction amine est monosubstituée ou disubs-
tituée par un radical alcoyle renfermant de 1 a 5 atomes de
carbone ou protégée par un groupement facilement clivable
notamment par hydrolyse acide ou par hydroyénolyse, puis
traite, le cas échéant, de façon à éliminer le groupement
protecteur, pour obtenir un produit de formule I dans la-
quelle Rl représente un radical hydroxy alcoyle renfermant de2 a 5 atomes de carbone, R2 représente un radical dérivé d'un
acide ~-aminé ou d'un peptide comprenant 2 ou 3 acides ~-
aminés et X et le trait ondulé ont la signification déja
indi~uee, que l'on isole et salifie, si désiré.
Dans des conditions preféren-tielles de mise en
oeuvre de l'invention, le procédé de prépara-tion ci-dessus
décrit, est caracterisé en ce ~ue:
a) La réaction de l'amine dé formule II avec l'halogénure
de formule III est effectuee en presence d'un agent fixateur
d'acides, en particulier un hydroxyde, un carbonate, un
bicarbonate ou un acétate alcalin tpar exemple de sodium ou
de potassium), un carbonate alcalino-terreux, (par exemple
de calcium)~ une amine ter-tiai.re (par exemple, une trialcoyl-
amine ou la pyridine) ou un alcoolate alcalin ( par exemple
lléhtylate de sodium). La réaction peut s'effectuer, par
e~cemple, dans des solvants ou milieux de suspension inertes
2~L~
tels que le dioxanne, le dlméthylformamide, le benzene, le
toluene ou un hydrocarbure halogéné, tel que le chlorure de
méthylène.
b) La réac-tion de l'amine de formule II avec un acide de
formule III' est efec-tuee avec un agent d'ac-tivati.on tel
qu'un carbodiimide. D'autres techniques sont utili.sables,
telles que celles decrites, par exemple, dans ~<The Pep-tides>~
Vol. 1 Academic press 1979.
c) La réac-tion de l'amine de formule II ou du produit de
formule I, dans laquelle R2 représente un atome d1hydrogene
et Rl représente un radical hydroxyalcoyle, avec l'acide
~-aminé ou le peptide don-t la fonction amine est monosubsti-
tuee, disubstituée ou protégée par un groupement protecteur
facilement clivable, a lieu en présence d'un agent de conden-
sation. L'agent de condensation a, dans ce cas, pour butd'activer la fonction acide de l'amino-acide.
Comme agent de condensation, on peut utiliser un
carbodiimide de formule:
N=C=N-Bl
dans laquelle A1 et Bl représentent un radical alcoyle ren-
fermant de l à 8 atomes de carbone éventuellement porteur
d'un radical dialcoylamino, ou représentent un radical cyclo-
alcoyle.
On peut citer, par exemple, le dicyclohexylcarbo-
diimide ou, de préférence, le l-ethyl 3-(3-diméthylamino-
propyl)carhodiimide.
On peut utiliser également un halogénure de 2-chloro
N~méthyl pyridinium tel que l'iodure.
On peut aussi utiliser un chloroformiate a'alcoyle
comme, par exemple, lc chloroformiate de mé-thyle, d'éthyle
ou d'isobutyle; on peut aussi utiliser un pyrophosphite
d'alcoyle, comme par exemple le pyrophosphite d'éthyle.
Comme groupement protecteur facilement clivable,
on peut utiliser selon le cas, de preférence le groupement
3~
~ o
benzyloxycarbonyle (Z) ou le groupement tertbutyloxycarbo-
nyle (~OC).
Pour éliminer le groupement protecteur facilement
clivable ci-dessus, on utilise de preférence comme agent de
clivage un acide tel que l'acide chlorh~drique; on opère par
exemple a l'aide d'une solution alcoolique d'acide chlorhy-
dri~ue, ou a l'aide d'acide chlorhydrique anhydre par barbo-
tage dans le nitromethane. On peut aussi utiliser des acides
tels que l'acide paratoluène sulfonique, l'acide formique ou
l'acide trifluoroacétique. On peut utiliser également
l'hydrogène en presence de palladium, pour le groupement pro-
tecteur Z par exemple.
d) La réaction de l'amine de formule II avec l'halogenure de
méthyle ou dlhydroxyalcoyle se fait en presence des mêmes
agents fixateurs d'acides et solvants que dans le cas de la
reaction avec l'halogenure de formule III.
La fonction hydroxy de l'hydroxyalcoyle est avan-
tageusement bloquee par un groupement protecteur facilement
clivable notamment par hydrolyse acide.
e) La reaction du produit de formule I dans laquelle R2 repre-
sente un atome d'hydrogene, Rl represente un radical hydroxy-
alcoyle renfermant de 2 à 5 atomes de carbone et X et le trait
ondule ont la signification dejà indiquee, avec l'halogenure
de formule IV est effectuee selon la nature de R"'2, dans
les conditions precedemment decrites pour la reaction de
l'amine de formule II avec l'halogenure de formule III.
Pour la preparation des produits de formule (I)
N-methyles, il peut être interessant d'operer de façon parti-
culiere: on peut preparer un carbamate de l'amine du produit
de formule (II)I par exemple par action d'un haloformiate
d'alcG~le tel que d'ethyle, puis reduire le carbamate, par
exemple a 1'aide d'hydrure d'aluminium-lithium. O
Dans le cas ou X represente un radical
/ CH3
, .
~ ~ - 8 -
i:~ sl~ f
lors de la reduction, il faut proteger ]a cetone en 20, par
exemple par action d'éthylène glycol, puis, apr~s la reduc-
tion, hydrolyser le cétal, par exemple à l'aide d'un acide
minéral tel q-ue l'acide chlorhydrique.
I,es dérives de formule II), a :L'exceptlon de ceux
pour lesquels R2 représente un radical acyle ou alcoxy~
carbonyle, présentent un caractère basiq-ue. On peut avanta-
geusement preparer les sels d'addi-tion des derives de formule
(I), en faisant réagir, en propor-tions sensiblement stoechio~
métriques, un acide mineral ou organique avec ledit derive de
formule (I). Les sels peuvent être préparés sans isoler les
bases correspondantes.
Les dérivés, objet de la présente invention, possè-
dent de très intéressantes propriétes pharmacologiques; ils
sont doués notamment de remarquables propriétés immunothéra-
peutiques. Ils sont en particulier capables de stimuler les
réactions immunitaires.
Ces propriétés sont illustrées plus loin dans la
partie expérimentale.
Ces propriétés justifient l'utilisation des dérives
du 3-amino pregn-5-ane, ainsi que de leurs sels pharmaceuti-
quement acceptables) à titre de medicaments.
Parmi les medicaments, selon l'invention, on retient,
de préférence, les médicaments caractérisés en ce qu'ils sont
constitués par les nouveaux dérivés du 3~amino pregn-5-ene
repondant à la formule (I), dans laquelle le groupement amino
est en position 3~, Rl represente un atome d'hydrogène et R2
represente un radical derive d'un acide ~-amine ou d'un peptide
comprenant 2 ou 3 acides amines, ainsi que leurs sels d'addi-
tion avec les acides pharmaceuti~uement acceptables.
Parmi ceux-ci, on retient notamment ceux repondant
à la formule (I), dans laquelle X represente un groupement
-- g ~
~32~
fH3 ou fH3 dont l'hydroxyle est en position 20~, ainsi
C CH
I ~ O / ~OH
que leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquelQent
acceptables.
Parmi ces derniers, on retient tout particulierement
les dérivés dont les noms suivent:
- le 2~amino N-t20-oxo pregn-5-ene 3~-yl) acétamide,
- le (2S) 2 amino N-~20-oxo pregn-5~ene 3~-yl) propionamide,
- la 3~-méthylamino pregn-5-ene 20-one,
ainsi que leurs sels d'addition avec les acides pharmaceuti-
quement acceptables.
Les médicaments selon l'invention trouvent leur
emploi par exemple, dans le traitement des immunodéficiences,
et notamment des maladies autoimmunes résultant d'une défi-
cience en certains lymphocytes, qu'il s'agisse de maladies du
tissu conjonctif non spécifiques d'un organe comme par exemple
l'arthrite rhumato;de, le lupus érythémateux s~s-témique ou
qu'il slagisse de maladies spécifiques d'un organe comme la
thyroidite, le pemphigus ou l'anémie hémolytique.
Les produits obtenus par le procédé de llinvention
peuvent être ainsi utilisés comme traitement adjuvant de
l'antibiothérapie et de la chlmiothérapie anti-cancéreuse.
La dose usuelle, variable selon le dérivé utilisé,
le sujet traité et l'affection en cause peut etre, par exemple,
de 10 mg à 1 g par jour, par voie orale chez llhomme du dérivé
de l'exemple 4 comme adjuvant de l'antibiothérapie.
Les derivés de formule (I), ainsi que leurs sels
d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceuti-
quement acceptables peuvent donc être utilisés pour préparer
des compositions pharmaceutiques renfermant lesdits derives
ou sels, a titre de principe actif.
~ titre de médicaments, les dérivés répondant a la
-- 10 --
~ 3~
formule I et leurs sels d'addition avec les acides pharma-
ceutiquement acceptables peuvent être incorporés dans des
compositions pharmaceutiques destinées a la voie di.yesti-ve
ou parentérale.
Ces compositions pharmaceu-ti.ques peuvent ê-tre, par
exemple, solides ou liqu.:ides e-t se présen-ter sous le.s formes
pharmaceutiques couramment utilisees en medecine humaine,
comme par exemple, les comprimes, simples ou drageifiés, les
gélules, les granules, les suppositoires, les preparations
injectables; elles sont preparees selon les methodes usuelles.
Le ou les principes actifs peuvent y être incorpores a des
excipients habituellement employes dans ces compositions
pharmaceutiques, tels que le talc, la ~omme arabique, le
lactose, l'amidon, le stearate de magnésium, le beurre de
cacaot les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine
animale ou végetale, les dérivés paraffiniques, les glycols,
les divers agents mouillants, dispersants ou emulsifiants,
les conservateurs.
Les produits de depart de formule (II) dans laquelle
X represente un groupement fH3 peuvent etre prepares comme
/C~OH
suit.
On reduit un produit de formule (V):
~0
H2N ~-- (V )
dans laquelle le trait ondule a la signification deja indi~
quée, par exemple a l.'aide d'un metal alcalin, tel que le
sodium, dans un solvant tel qu'un alcool aliphatique infé-
rieur comme l'éthanol, pour obtenir un produit de formule
(II) ~H3
J ~ O~l ~II)
H2N
dans laquelle les traits ondulés ont la signification déja
indiquée, sous forme d'un mélange d'isomères 20(~) et 20
¦~), que l'on separe, par exemple par preparation du derive
trifluoroacetylé de l'amine et de l'alcool, chromatographie,
puis hydrolyse des groupements trifluoroacétyls des isomères
separes.
Un exemple d'une telle preparation figure ci-après
dans la partie experimentale.
Les acides amines ou peptides dont la fonctiGn
amine est mono ou disubstituee, peuvent etre prepares,
lorsqu'ils ne sont pas connus, par les procedes classiques
d'alcoylation des amines.
Les exemples suivants illustrent l'invention, sans
toutefois la limiter.
E~EMPLE 1: Chlorhydrate de 3~-methylamino pregn-5-èn 20-one
Stade A: (20-oxo-~re~n-5-èn 3~ carbamate d'ethyle
___.___ _______ __ __________ _ _______________ __
On dissout 6 g de 3~-amino pregn-5-ene-20-one
(holamine) dans 100 cm3 de chlorure de me-thylène, ajoute entre
+ 5 et + 10C de 22 cm~ de soude aqueuse N, puis en 10 minutes,
2 cm3 de chloroformiate d'éthyle et agite pendant 1 heure.
On acidifie par 15 cm3 d'une solution aqueuse dlacide
chlorhydrique 2N, décante, lave la phase organi~ue a l'eau,
seche et amène à sec. On reprend le résidu obtenu par 70 cm3
d'ether éthylique, porte au reflux, essore, lave a l'éther,
sèche et obtient 6,25 g du~produit attendu. pF = 202C.
- 12 -
.
3:~L7
Stade B: (20L20-éthylène dioxy ~re~n-5-en 3~-yl)carbamate
d'ethyle.
On chauffe vers 50C sous atmosphère inerte,
10,9 g de produit tel qu'ob-tenu au stade précedent avec
54,5 cm3 d'éthylène glycol et 22 cm3 d'orthoformiate d'éthyle
On ajoute 220 mg d'acide paratoluene sulfonique monohydraté
et agite pendant 3 heures environ. On refroidit à 20C,
ajoute 4,2 cm3 de triethylamine, verse sous agitation sur
550 cm3 d'eau, essore, lave a l'eau, sèche à 60C et obtient
12 g du produit attendu. F ~ 200C.
_tade_C: 3~-methyl amino ~re~n-5-èn 20-one ~N-meth~l hola-
mineL et son chlorhydrate.
On met en suspension sous atmosphere inerte 1,145 g
d'hydrure d'aluminium et de lithium dans 110 cm3 de tétra-
hydrofuranne et introduit au reflux, en 30 minutes, 6,51 g du
produit obtenu au stade précedent en solution dans 65 cm3 de
tetrahydrofuranne. Après 1 heure 5 minutes de reflux, on
ramène à 15-20C, ajoute avec précaution 15 cm3 d'eau, puis
15 cm3 d'acide chlorhydrique concentré et agite pendant 1
heure 45 minutes. On alcalinise par 25 cm3 de lessive de
potasse et 5 cm3 d'ammoniaque concentrée, agite pendant 10
minutes, ajoute 100 cm3 de solution de sel de Seignette, dé-
cante, extrait à l'acétate d'éthyle, lave à l'eau saturée au
chlorure de sodium, sèche, amene à sec sous pression reduite,
recristallise dans l'acétate d'éthyle et obtient 4,07 g du
produit attendu~ F - 139C.
Formation du chlorhydrate:
On dissout 1~5 g de base dans 30 cm3 d'acétate
d'éthyle à 25 - 30C, ajoute un excès d'acide chlorhydrique
dissous dans l'acétate d'éthyle, glace, essorey lave à
l'acétate d'éthyle, seche a 40C sous pression réduite,
recristallise dans l'éthanol et obtieni 1,31 g de produit
attendu. F - 270C.
Analyse pour C22H36NOCl = 365,99
- 13 -
3;247
Calculé C ~ 72,20 H % 9,91 N % 3,83 Cl % 9,69
Trouve 72,4 10,1 3,8 9,7
EXEMPLE 2: Fumarate de 2-amino N-méthyl N-(20-oxo pregn-5-
ene-3~-yl) acetamide.
Stade A: 2-r~(~henylmethoxylcarbon~l7aminQ7 N-~120-oxo)
_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ . _ _ _ _ _ _ _ _
~re~n-5-èn-3~-y ~ N-méth~l acetamlde.
On dissout sous atmosphère inerte 4,43 y de la
base de l'exemple 1 dans 130 cm3 de chloroforme et 27 cm3
de triethylamine, ajoute 5,6 g de N-(benzyloxycarbonyl)
glycine (Z glycine) puis en 20 minutes, sous agitation,
3,89 g d'iodure de 2-chloro N-methyl pyridinium. Une heure
après on rajoute 800 my du sel de pyridinium ci-dessus,
agite pendant 20 minutes, a~oute encore 400 mg de sel de
pyridinium, agite encore pendant 20 minutes, lave avec une
solution aqueuse d'acide chlorhydrique N, puis de soude N,
avec de l'eau, sèche, amene à sec, purifie par chromatogra-
phie sur silice (eluant: chlorure de methylène-acetate
d'ethyle 9/1), recristallise dans l'acetate d'ethyle pour
obtenir 5,8 g de produit attendu. F = 130C, puis 150C.
S_ade B: 2-amino N-methyl N-l20-oxo ~re~n-5-ène 3~-yl)
acetamide et son fumarate.
On dissout sous atmosphère inerte 6,2 g du produit
obtenu au stade A, dans 60 cm3 de tetrahydrofuranne, ajoute
1,2 g de charbon palladie à 5% et fait barboter de l'hydro-
gène~ Après 2 heures, on filtre, lave le catalyseur avec du
chlorure de methylène, amène à sec et obtient 4,55 g du
produit attendu sous forme de resine.
Formation du fumarate:
. . . _ .
On dissout à chaud 1,9 g de la base ci-dessus dans
4 cm3 dlethanol à 95, ajoute une solution chaude de 560 mg
d'acide fumarique dans 6 cm3 d'éthanol à 95, amorce la
cristallisation, glace pendant 1 heure, essore, lave à l'e-
thanol glace, sèche à 60C sous vide, et obtient 2,02 g du
produit attendu sous forme d'hemi-hydrate. F ~ 160C.
- 14 -
. . .
3;~
Analyse pour C24H38N2O2, C4~4O4, 1/2 H2O = 511,63
Calcule: C % 65,73 H % 8,67 N % 5,47
Trouve: 65,6 8,5 5,~
EXEMPLE 3: (2S) 2-amino N-(20-oxo preyn-5-en-3~-yl)~ropi.o-
namide e-t son chlorh~drate.
Stade A: 2-~(1,1-dimé-thylethoxylcarbonyl7 amino N--120-oxo
_______ ~_ _ ____~___ ______ ___ __ _._________ ______
~reqn-5-en-3 -YlL ~ro~ionamide.
On dissout sous atmosphère inerte 3,15 g d'holamine
et 2,08 g de tert-butyloxycarbonyl L-alanine (sOC L-alanine)
dans 75 cm3 de chloroforme et 15 cm3 de pyridine, ajoute
2,1 g de chlorhydrate de 1-éthyl-3-(3-dimethyl amino propyl)
carbodiimide et agite pendant 1 heure 15 minutes. On lave
avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 2N, avec une
solution aqueuse de bicarbonate de sodium/ seche, distille a
1.5 sec sous pression reduite, purifie par chromatographie sur
silice (eluant: benzene methyl ethyl cetone 1 - 1) et obtient
4,5 g du produit attendu sous forme d'hui.le.
Stade B: Chlorhydrate de 12Sl_2-amino N-(20-oxo ~reqn-5-en-
3-yl) pro~ionamide.
On agite pendant 2 heures 30 minutes sous atmosphere
inerte 4,5 g du produit obtenu au stade A, en solution dans
30 cm3 d'une solution ~N d'acide chlorhydrique sec dans le
methanol. On distille a sec sous pression reduite à 30C,
cristallise dans 30 cm3 d'acetate d'ethyle, essore, dissout
dans lS cm3 de methanol au reflux, filtre, ajoute 50 cm3
d'acetate d'ethyle, concentre a mi volume, essore, seche a
40C sous pression reduite et obtient 2,5 g du produit attendu.
F = 260C.
Analyse pour C24H3~ClN2O2 = 423,03
Calculeo C % 68,14 H ~ 9,2~ N % 6,62 Cl % 8,38
Trouve: 68,4 9,3 6,5 8,5
EXEMPLE 4: Chlorhydrate de 2-amino N-(20-oxo pregn~5-en-
-
3~-yl) ace-tamide.
En operant selon un pxocede analogue a celui decrit
- 15 ~
.. ..
ci-dessus pour l'exemple n 2, en faisan-t reagir la Z-
glycine ou N-(benzyloxy carbon~l) glycine avec l'holaMine,
on a prepare le produit attendu. F = 295C apres cris-
tallisation dans l'acetate d'ethyle.
Anal~se pour C H N O , HC] = ~09,019
- - 23 36 2 2
Calcule: C % 67,5~ H % 9,12 C1 % 8,67 N % 6,85
Trouve: 67,8 9,1 8,5 6,7
EXEMPLE 5- Fumarate de (2S) 2-amino N-(20-oxo pregn-5-en-
--
3a-yl) lH-indole~3-propanamide.
En operant selon un procedé analogue a celui decrit
ci-dessus pour l'exemple 3, en faisant reagir le BOC L-trypto-
phane avec l'holamine, on a preparé le produit attendu.
F = 180C apres cristallisation dans le methanol.
Anal~se pour C32H43N3O2, ~OOC-CX=CH-COOH, CH3OH = 617,76
Calcule. C % 6~,39 H % 7,91 N % 6,47
Trouvé: 68,1 8,0 6,5
EXEMPL~ 6: Chlorh~drate de 2-amino N-[(20 S)20-h~droxy preyn-
5-en-3~-yl~acetamide.
En opérant selon un procéde identique a celui decrit
ci-dessus pour la preparation de l'exemple 2, en faisant
reagir la Z-glycine avec le ~20 S) 3~-amino pregn-5-en-20-ol,
on a prepare le produit attendu. PF~ = 264C (avec decomposi-
tion) apres cristallisation dans l'acetate d'éthyle.
Analyse pour C H , N2O2, ~Cl = 447r495
23 38
Calcule: C % 67,20 H % 9,56 Cl % 8,63 N % 6,82
Trouvé: 67,3 9,6 8,7 6,8
Le t20 S) 3~-amino pré~n-5-en-20 ol de depart peut être pre-
pare comme suit:
Stade 1. 3~-amino pre~n-5-en-20-ol.
____ 3
On porte au reflux 100 cm de propanol, ajoute en
20 minutes et simultanément 5 g de sodium par petites portions
et une solution de 5 g d'holamine dans 5 cm3 de propanol et
maintient le re~lux. Apres 1 heure 25 minutes, on laisse
revenir ~ température ambiante, glace, acidifie a l'acide
- 16 -
3~
acetique jusqu'à pH = 6, revient à pH = 8 à l'aide de car-
bonate de potassium, dilue avec 500 cm3 d'eau, évapore en
partie, reprend par 300 cm3 d'eau, laisse cris-talliser
pendant 24 heures au refrigerateur, ~iltre, rince les
cristaux à lleau, les dissout dans 10 cm3 de chlorure de
methylène, ajoute 50 cm3 d'acétate d'éth~le et 30 cm3
d'éther isopropyliquer évapore le chlorure de méthylène,
laisse cristalliser 16 heures au refrigérateur et obtient
3 g du produit attendu. F = 160C.
Stade 2: Trifluoroacétate de (20 SL L~ trifluoroacetyl-
_______ _____ __~___________~____ _____ _____________ _
amino~ ~ré~n-5-en-20-yle~
On dissout 5,5 g de produit tel qu'obtenu ci-dessus
dans 55 cm3 de chlorure de méthylène, ajoute 5,5 cm3 de
pyridine, amene a 0C, ajoute 5,5 cm3 d'anhydride trifluoro-
acétique en 5 mn, agite à température ambiante pendant 15
minutesj amène à sec, reprend au cyclohexane, filtre, concen-
tre à sec, chromatographie le residu sur silice (eluant:
cyclohexane-acé-tate d'éthyle 9~1) et obtient trois fractions,
la premiere correspondant a l'isomere (20R), la seconde
(3,56 g) a un melange ~20R-20S), la troisieme 11,5 g) à
l'isomere (20S) recherche. F = 140C.
Stade 3: (20 Sl 3~-amino ~regn-5-èn-20-ol
_______ ____ _~________ __ ____________
On refroidit au bain de glace une suspension de
2,4 g de produit tel qu'obtenu ci-dessus dans 24 cm3 de
méthanol, ajoute 12 cm3 de solution aqueuse de soude 2N,
agite pendant 2 heures 30 minutes à temperature ambiante,
dil~e à l'eau, extrait au chlorure de methylène, lave la
phase organique à l'eau saturée de chlorure de sodium, sèche,
evapore et obtient 1,42 g de la base attendue. F = 190C.
EXEMPLE 7: On a préparé des comprimés répondant à la ~ormule:
- chlorhydrate de 2-amino N-~20-oxo prégn-5-èn~3~-yl)
acétamide ........................................ 20 mg
- excipient q.s. pour un comprime terminé a ........ 100 mg
(detail de l'excipient: lac-tose, amidon, talc, stearate Mg)
- 17 -
~:~932~7
ETUDE PHARMACOLOGIQUE
1 - Adjuvant du choc anaphylacti~ue
Princi~e:
L'administration a des animaux d'un produit capable
de stimuler l'activité des s~stemes immunitaires se traduit
par une augmentation du choc en réponse a l'administration
d'un antigane auquel l'animal etait sensibilise.
Des souris mâles pesant 30 a 35 y sont sensibili-
sees par voie intra-plantaire avec l'albumine serique de
boeuf. 8 jours plus tard, elles reçoivent cet antigène par
voie intra-veineuse. Dans des conditions de sensibilisation
minimum les animaux témoins ne font pas de choc mortel lors
de cette dernière administration.
Le produit a tester est injecte par voie intra-
plant~aire mélangé avec l'antigène: si ce produit est adju-
vant, il va augmenter la sensibilisation et il en ~esultera
un choc mortel lors d'une administration par voie in-traveineu-
se.
On retient comme dose active la dose qui provoque
une mortalite egale ou supérieure a 50 ~ des animaux.
Resultats: Produit de l'exemple Dose par animal en mg
4 : 1
6 : 4
2 - Test des rosettes aux g]obules rouges de mouton
Princi~e:
L'administration à des animaux d'un produit capable
de stimuler l'activite des systemes immunitaires se traduit
par une augmentation de leur capacité de reaction à l'injec-
tion d'un produit immunogène.
Des rats mâles agés de 3 mois sont sensibilises
par voie intra-peritoneale avec des erythrocytes de mouton
- 18 ~
z~
(jour 0). 7 jours plus tard (jour 7) leur rate es-t prélevee
et les splenocytes sont mis en contact avec des erythrocytes
de mouton: on compte ensuite le pourcentage de leucocytes
autour desquels les ery-throcytes ont forme des rose-ttes.
Le produit a etudier est administre per os quoti-
diennement du ~our -1 au jour 1.
On considère comme dose immunostimulante la dose
de produit qui multiplie environ par 2 le pourcentage de
rosettes o~serve chez les animaux temoins.
Resultats: Produit de l'exernple Dose par animal en
mg/ky per os
3 '. 2
4 '. 5
3 - Etude de la toxicite aigue.
On a evalue les doses non letales (DLo~ de diffe-
rents composes testes après adrllinistration par voie orale
chez la souris.
On appelle DLo la dose maximale ne provoquant
aucune mor-t.alite en 8 jours.
Les resultats obtenus sont les suivants:
Produit de l'exemple . DLo en mg/kg
_ :
3 > 400
4 :600
6 > 400
-- 19 --
