Note: Descriptions are shown in the official language in which they were submitted.
La présente invention ooncerne de nouveaux tri-, tétra-
ou pentapeptides de form~e générale :
RC0-~E7EC0-~HIHCO-R1
C~3 CH2CE2C0-~ECI~_R2
- (Cl2)m
(I)
~(CE )
3 4
éven~tuellement.leurs sels, leur préparation et les médicaments
qui le~ contiennent.
- Dana la formule générale (I)
RC0- représente un reate d'acide gras dans lequel R repré~ente
un radioal alooyle oontenant 1 à 44 atomes de oarbone (éventuel-
lement ~ubstitué par un radical hydroxy, phényle ou cyclohexyle),
aloényle contenant 2 à 29 atomes de carbo~e et pou~ant oontenir
plus d'une double liaison ou un reste d'aoide mycolique tel que
renoontré dans la structure de la paroi bactérienne des myco-
bactéries, de ~ocardia ou de corynébactérie~,
R1 représente un radical hydroxy, amino, alcoyloxy oontenant 1
4 atome~ de oarbone ou benzyloxy,
les symboles ~2 et R4, identique~ ou dif~érenta, repré~entent un
atome d'hydrogène.ou un radical carbox~, carbamoyle, alcoyloxy-.
carbonyle dont la partie alcoyle contient 1 à 4 atome~ de oarbone,
benzylo~ycarbonyle~ ~-oarbonylglycyle ou ~-oarbonyl D alanyle
éventuellement est~rifi~ par un radioal alcoyle conten~.nt 1 ~ 4
- atomes de oarbone ou benzyle, étant entendu que R2 et R4 ne peuvent
pas représenter simultanément un atome d'hydrogène,
R3 représente un atome d'hydrogene ou un re~te glycyle ou D alanyle~
etant entendu que, lorsque R2 et R4, identiques ou différentæ,
représentent chacun un radical N-caxbonyl~lycyle (-CON~C~2COOH)
ou ~-carbonyl D alanyle (-CONECHCOOE), R3 repré~ente
C~
un atome d'hydrogène, X re~résen~e un atome de soufre ou
un radical méthylène, m et n, identiques ou diff~rent~,
représentent chacun un nombre entier é~al à 1 ou 2,
.
étant entendu que, lorsque ~ représente un radical méthylène,
m et n ne peuvent pas être simultanément égaux à 17 étant en-tendu
que l'alanine liée à l'acide glutamique est ~ou~ forme L,
l'acide ~lutamique es-t sous forme D, la lanthionine, lorsque
X repr2sente un atome de soufre et m et n sont égaux à 1, la
cystathionine, lorsque X représente un atome de soufre et
m et n sont différents, l'homolanthionine, lorsqua X représente
un atome de soufre et m et n sont égaux à 2, l'acide diamlno-2,7
subérique, lQrsque X représente un radical méthylène et l'un de~
symboles m ou n e~-t égal à 1 e-t l'autre est égal à 2, ~ont sous
forme D,D ; L,L ; DD,~L (racémique) ou D,L (méso) ou 90U9 forme
des mélanges ~,meso ou D;rmeso, et la thialysine, lorsque l'un des
symboles R2 ou R4 représente un atome d'hydrogène~ X repréaente
un atome de soufre et m et n sont égaux à 1, est sous forme L ou
D ou ~,L.
~elon la présente inYention, les nouveaux peptides de
formule`générale (I) peuvent être obtenus selon les méthodes gén~-
ralement utilisées en chimie peptidique. ~es différentes réactlons
sont mises en jeu après blocage,par des groupements protecteurs
convenables,des fonctions ami~es ou acides qui ne doivent pas
participer ~ la réaction et sont suivies éventuellement du déblo-
cage de ces fonctions.
Selon la présente invention, les nouveaux produits de
formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un dipep-
tide de formule générale :
R ao - N~ CH CO - N~ ÇH CO - R
b~3 C~2 2 OH (II)
dans laquelle R est d~fini comme pr~c~demment et ~5 repr~sente un
radical amino, alcoyloxy contenant 1 à 4 atome~ de carbone ou
benzyloxy9 sur un produit de formule générale -
H2~ ICH-R2
(la~2)m
(III)
(~H2)n
R6 - ~ CE-R4
~L2~
dans laquelle R2, R4, X, m et n sont dé~ini~ comme précédemment et
R6 représente un groupement protecteur de la fonction amine ou
un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction ~m;ne eYt subs-
tituée par un groupement protecteur de la fonction amine, suivie
du remplacement du groupement pro-tecteur représenté ou porté par
R6 par un atome d'hydrogène et éventuellemen-t du remplacement
du radical R5, lorsqu'il représente un radical alcoyloxy contenant
1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, par un radical hydroxy et
des radicaux al-eoyloxycarbonyles contenant 2 à ~. atomes de carbone
o~ benæyloxycarbonyle,représentés ou portés par R2 et/ou R4,par
des radicaux carboxy,
~orsque les symboles R2 et R4 sont différents d'un radi-
cal carboxy ou ne contiennent pa~ un radical carboxy, la conden-
~ation du dipeptide de formule générale (II) e~t effectuée géné-
ralement en présence d'un agent de condensation tel que le dicyclo-
hexylcarbodiimide en opérant dans un solvant organique tel quele chlorure de methylène ou le diméthylformamide, à une tempéra-
ture comprise entre -10 et 30C.
Généralement il e~t-néces~aire d'activer la fonction
acide libre du dipeptide de formule générale (IT) préalablement
à son action sur le produit de formule générale (III). De pr~fé-
rence, le dérivé activé du dipeptide de formule générale (II) e~t
-un anhydride.mixte, préparé in situ par action d'un halogénofor-
miate d'alcoyle tel que le chloroformiate d'isobutyle. ~a conden-
satio~ du dérivé activé s'effectue dan3 un solvant organique telque le dioxAnne, le tétrahydrofuranne, le chloroforme, le toluène
ou le diméthylformamide ou en milieu hydro-organique, e~
présence d'une base (minérale, telle que la soude, ou organique,
telle que la triéthylamine), à une températurs comprise entre
-10 et +30~C.
~ e remplacement du groupement protecteur de la fonction
amine représenté ou porté par R6 par un atome d'hydrogène,.du
radical R5 par un radical hydroxy et des radicaux repré3entés
ou portés par R2 et/ou R4 par des radicaux carboxy peut être
~ effectué selon les méthode~ connues en fonction de la nature de
ces ~roupements. Il est particulièrement avantageux de choi~ir
le9 radicaux R2, ~49 ~5 et ~6 de telle manière que leur rempla-
cement puis9e 91 effectuer en une 9eule étape. Par exemple, R6peut
5 représenter ou oontenir un radical t.butyloxycarbonyle, R1 peut
représenter un radical t.butyloxy et R2 et/ou R4 peuvent repré-
senter ou contenir un radical t.butyloxyoarbonyle et, dans ces
conditions, le remplacement de ces radicaux s'effectue par hydro-
lyse acide. L'hydroly~e pe~-t être effectuée en opérant dans
l'acide acétique en présence d'acide chlorhydrique à une tempé-
rature voisine de 20C.
Par exemple encore, le groupement pr~tecteur d'une
fonction aoidepoUvant 8tre un radical benzyle et celui de la
fonction amine un radical benzylo~ycarbonyle, l'~limination
simultanée de ces groupements protecteurs peut être effectuée au
moyen d'a~ide bromhydrique dzns l'acide trifluoroacétique ou bien
en utilisant le sodium dans l'ammoniac liquide. Cependant 9 il
peut être nécessaire d'éliminer un ou plu~ieurs de ce~ groupements
protecteùrs sans toucher aux autres. D~ns ce cas les groupement~
protecteurs seront choisis, par exemple, de telle manière que leur
remplzcement s'effectue dans de~ oonditions di$~érentes d'hydro-
lyse. Ainsi le groupement protecteur d'une fonotion acide pourra
être un radioal t.butyle éliminable par action de l'aoide chlor-
i hydrique dans l'acide acétique et le groupement probecteur de la
$onction amine un radical benzyloxycarbonyla éliminable par
action de l'acide bromhydrique dan~ l'acide trifluoro acéti~le.
Selon la présente invention, les nouveaux peptide~ de
formule générale (I) peuvent être obtenus par action d'un dérivé
de la ~ alanine de formule générale :
RC0 - ~E~C~ C0 - OH
~ .
'
.
5 ~2~C~3~
dans laquelle R e~ d~fini comme précédemment, ~ur un di-, tri-
ou tétrapeptide de formule générals :
H2~CECO-Rt
IE2CE2CO~ 2
(plI2)m
x (v
p 2 n
. . R6-~H C~R4
dans,laquelle Rl, R2, R4, R6, X, m et n sont définis,comme pré-
cédemment, ~uivie-du remplacement du groupement protecteu,r repré-
senté ou porté par R6 par un atome d'hydrogène et éventuellement
du remplacement du radioal R1 lorsqu'il représente un radical
al¢oyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy~ par
un radioal hydroxy, et des radicaux alcoyloxycarbon~les contenant
2 ~ 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyles repr~entés ou
portés par R2 et/ou R4 par des radicaùx carboxy, dans les condi-
tions dé¢rites ci-de~us pour l'ac~ibn d'un produit de formule
~é~érale (II) sur un produit de formu~e générale (III).
Selon la présente invention, les nouveaux peptide~ de
formule générale (I) peuvent également être obtenus par action
d'un acide de ~ormule générale :
RCO-OE (VI)
dans laquelle H est défini comme précédemment sur un tri-,
tétra- ou pentapeptide de fo~mule générale :
CE3 ~2CH2CO-~ECH-R2
( ~CE2)m
1 (~II)
( ~H2)n
R6-~ICE-R4
dans laquelle R~, R2~ R4, R6~ X, m et n sont définis comme préc~-
demment, suivie du remplacement du groupement protec-teur repré-
senté ou porté par R6 par un atome d'hydrogène et é~entuellement
du remplacement du radical R1, lorsqu'il repré~ente un radioal
6 ~ 3~3
alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyloxy, par
un radical hydroxy et des radioa~ alcoyloxyoarbonyles contenan-t
2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle~ représentés ou
portés par R2 et/ou R4 par des radicaux carboxy, en opéran-t dans
les condition3 données précédemment pour la conde~3ation du dipep-
tide de formule générale (II) sur le produit de formule générale
(III). Il .est également possible d'utili~er l'acide de formule
générale (VI) sous forme d'halogénure d'acide, de préférence le
chlorure,en effectuant la réactio~ dan~ un ~olvant or~anique tel
que l~éther di~thylique ou le chlorure de méthylène, en présence
d'une base (minérale,telle que la soudey ou organique, telle que
la triéthylamine~ à une température comprise entre 0 et 30C.
Selon la présente invention, les nouveaux peptides de
formule gén~rale (I) dans laquelle les symboles R2 et/ou R4 repré-
gentent un radical ~-carbonylglycyle ou ~-carbonyl D alanyle
éventuellement estérifi~ par un radical alcoyle oontenant 1 à 4
atomes de carbone ou benzyle peuventégalement être obtenus par
action d'un aminoaoide libre ou estérifié de formule générale :
H2NICHC0-R8 (VIII)
.20 dans laquelle R7 représente un atome d'hydrogène ou un radioal
-méthyle, l'aminoacide étant dans ce cas sous forme D, et R8
représente un radical hydroxy ou alcoyloxy oontenant 1 à 4 a-tomes
de carbone ou benzyloxy, sur un peptide de formule générale :
RC0-NH~HC0-N~ICHCO-R5
CH3 C~2C~2C NHICH H9
(,CH2)m
X (IX)
( I H2)n
R6-~ CH-Rl o
dans laquelle R, R5, R6, X, m et n sont définis comme précédemment
et,l'un aes symbole~ Rg ou R1o représentant un radioal carbo-xy,
l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radic~.l carboxy,
.. _ :
~ ~5
carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atome0 de carbone,
benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou ~-oarbonyl D alanyle
estérifié par un radical alcoyle contenant 1 à 4 atomes de carbone
ou benzyle, étant entendu que lorsque Rg et R10 rep~ésentent
chacun un radical carboxy, R6 représente un groupement protecteur
de la ~onction amine, suivie éventuellement du remplacement des
radicaux R5 et/ou Ra~ lo.rsqu'ils représentent un radioal alcoylox~y
oontenant 1 ~ 4 atomes de carbone ou benzyloxy, par un radical
hydroxy, et/ou des radicaux alcoyloxycarbonyles contenant 2 ~ 5
- 10 atomes de carbone ou henzyloxycarbonyle repr~senté~ ou porté~
par Rg ou R10 par un radical carboxy, et du remplacement du
groupement protecteur représenté ou porté par R6 par un atome
d'hydrogène, dans les conditions décrites précédemment pour
l'aotion d'un produit de formule générale (II) sur un produit
de formule générale (III).
Pour obtenir un produit de formule générale (I) dans
- lequel R2 et R4 sont identiques et représentent un radical
~-carbonylglycyle ou ~-oarbonyl D alanyle éventuellement estérifié,
il est possible d'utiliser un prodult de formule géné~le (IX)
dan9 laquelle Rg et R10 représentent chacun un radical carboxy.
Pour obtenir un produit de formule générale (I) dan~
lequel les symboles R2 et R4 sont identiques ou dlfférents et
représentent un iadical ~-carbo~ylglycyle ou ~-carbonyl D alanyle
éventuellement estérifié, il est possible d'utiliser un produit
de formule générale (rX) dan9 laquelle l'un de~ symbole~ Rg ou
R1o représente un radical carboxy et 1'autre représente un radical
alcoyloxycarbonyle contenant 2 à;5 atomes de carbone ou ben7.yloxy-
carbonyle. Dan~ ces condition~, on fait réagir le produi~ de
. formule générale (VIII) sur le produit de formule générale (IX) 9
- 30 puis, après remplacement du radical alroyloxycarbonyle ou benzyl-
oxycarbon~le représenté par Rg ou R10 par un radical carboxy, on
fait réagir à nouveau le produit de formule générale (VIII)
identique au(ou différent du)produit de formule générale (VIII)
utilisé lor~ de la première condensation.
.
~.-.
- 8 ~ 3~
Selon la présente invention, les nouveaux peptidea de
formule générale (I) dan3 laquelle ~3 repré~ente u~ radical
glycyle ou D alanyle peu~ent également être obtenus par action
d'un ami~oacide de formule générale :
R~ HCH COOH
l7 (X)
dans laquelle R7 est défini comme pré¢édemment et R11 repré3ente
un groupement protecteur de la fonction amine, ~ur un tri- ou
tétrapeptide de formule générale :
RCO-lilE[~CHCO-~CHCO-R1
CH.~ bH2CH2CO-N~ R2
( ICH2)m
X (XI)
(~E2)n
~2N-C~-R4
dans laquelle R.~ R1, R2, R4, X, m et n 30nt définis comme précé-
demment, R2 et ~4 ne pou~ant pa~ être ~imultanément un radical
N-carbonyl~lycyle ou ~-carbonyl D alanyle éventuellement esté-
rifié, suivie du remplacement de R11 par un atome d'hydrogène et
~ventuellement du remplacement de R1, lorsqu'il repr~3ente un
radical alcoyloxy oontenant 1 à 4 atome~ de carbone ou benzyloxy,.
par un radical hydroxy et des radicaux alcoyloxycarbonyles conte-
nant 2 à 5 atome3 de carbone ou benzyloxycarbonyle~ repré~enté3
ou portés par R2 et/ou R4 par des radioaux carboxy, dans les
conditions décrites ci-des~us pour l'action d'un produit de
formule générale (II) 3ur un acide de formule générale (III).
~ e dipeptide de formule générale (II) peut être obte~u
par actlon d'un dérivé activé de la ~ alanine de formule générale :
R ~ hCO-O~
12 (XII)
dans laquelle R12 représente un radical RCO- dans lequeI R est
défini comme précédemment, ou un groupement protecteur de 1
,
.
9 ~ 3~
fonction amine, sur un dérivé de l'acide D glutamique de formul~
générale :
E21~CECO-R
- b~2CH2 CO-O~ (XIII)
.
dans laquelle R5 est défini comme précédemment et la fonction
carbox~ est éventuellement protégée, dans les conditions décrites
ci-dessus pour l'action d'un produi-t de formule générale ~II) sur
un produit de formule générale (III), suivie le ca~ échéant, aprè3
- remplacement du radical R12, lorsqu'il représente un groupement
protecteur de la fonction amine, par un atome d'hydro~ène, de
l'action d'un aoide de formule générale (VI) puis du remplacement
du groupement carboxy protégé par un radical carbox~.
~ e~ dérivés de la lanthionine, c'e~t-à-dire les produi~s
de formule générale (III) dan~ laquelle X représente u~ atome de
soufre et m et n sont égaux à 1 peuvent être pr~parés de la
manière suivante :
a) - ~e dérivé de la lanthionine de formuIe générale (III), da~s
laquelle R2 et R4 représentent un radical carboxy et R6 représente
un radical benzyIoxycarbonyle, peut être préparé selon la méthode
-de I. P~OT~I et Goll.~ J. Chem. Soo. Perkin I, 2599 (1979)~
b) ~e dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans
laquelle R2 représente un radical carboxy9 R4 représente un
radical carbamoyleet R6représente un ~roupement protecteur de
la fonction ~m;ne ou un radical glycyle ou D alanyle dont la
fonction amine est substituée par un groupemen-t protecteur de la
- 25 fonction amine, sous forme D,D ou L,~ peut être préparé ~ partir
de la lanthionine correspondante dont la préparation est décrite
par J. GREE~STEI~ et M. WI~I~Z, "Chemistry of the Amino ~cids" 9
John Wlley and Sons, 1961, p, 2675. ~ cet effet, on prépare
selon les méthodes connues l'ester dibenzylique de la dibenzyloxy-
carbonyllanthionine qui est monosaponi~ié selon la méthode
d~crite par A. AR~D~ et coll., Ro¢zniki Chemii Ann . SOC . Chim~
Polonorum, 48, 1305 (1974)9 ~Chem. Abstr., 82, 31497 g (1975)~
puis transformé par action du méthanol ammoniacal en monoamide
de formule générale :
~2~3~
Z~ COO~
~H2
(XIV)
IC~2
Z-~C~CO~E2
(dans laquelle Z représente un radical benzyloxycarbonyle) qui,
après hydrolyse acide ou hydrogénolyse, fournit le monoamide de
la lanthionine.
. Par action d'~n sel de cuivra, tel que le bromure cuivri- .
que ou le carbonate basique de~cuivre, sur le monoamide de la
lanthionine, il se forme un complexe qui peut être représenté par
la formule : ~
E2~ pH C0~2
1 2
~2
E2~ CE-~00 (XV)
Cu~
OC0-CH NH2
ClI
. 1 2
&E2
E2~C0 CE ~2
dans laquelle le r38te amino en a du groupement carbamoyle peut
être acylé au moyen d'un aminoacide de ~ormNle générale (X)
ou protégé par actlon d'un halo~énoformiate d'alcoyle ou de
benzyle. Le complexe ainsi formé est déplacé pax action de
l'hydrogène sulfuré pour donner l'amino acide ou le dipeptide
~5 de formule générale (III) dan~ laquelle R2 représente un radical
carboxy, R4 représente un radical carbamoyle et R6 est dé~ini
comme ci~dessusO
c)- Le dérivé de la lanthionine de formule génerale (II~) d~n~
laquelle R2 représente un radical carboxy, R4 représent~-un
radical carbamoyle, R6 représente un groupament protecteur de la
fonction amine, sous forme méao, l'atome de carbone porta~t la
1 1
fonction carbamoyle étan-t 80US forme D, peut ê-tre pr~paré ~ partir
de la mésolanthionine selon la méthode décrite dans le brevet
belge 821 385~pour préparer l'aoide diaminopimélamique.
d)- Le dérivé de la lan-thionine de formule générale (III) dans
laquelle R2 représente un radical carbamoyle, R4 représente un
radical carboxyet R6représente un groupement protecteur de la
fonction amine ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction
amine est protégée par un groupement protecteur de la fonction
amine peut être obtenu en protégea~t la ~onction amine en ~ du
groupement carbamoyle du produit de formule générale (XV) par
action d'un halogénoformiate d'alcoyle ou de benzyle, Le complexe
ainsi formé est déplacé par action de l'hydr.ogène ~ulfuré pour
donner le dérivé de la lanthionine de formule générale ~III) dans
laquelle R4 rspré3ente un radical carbamoyle, R2 représente un
radical carboxy et R6 représente un groupement protecteur de la
fonction amine. Le radical amino en ~ du ~roupement carboxy peut
être prot~é par un groupement protecteur ou acylé par action d'un
dérivé activé d'un aminoacide de formule générale (X). Après
remplacement du radical R6 par un atome d'hydrogène,par des
- 20 méthodes qui ne touchent pas au reste de.la molécule, on obtient
le dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans laquelle
R4 représente un radical carboxy, R2 représente un radical carba-
moyle et ~représente un groupement protecteur de la fonction amine
ou un reste glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est subs-
tituée par un groupement proteoteur de la fonotion amine.e)- Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dan3
laquelle R4 représente un radioal oarbamoyle, R2 représente un
radioal alooyloxyoarbonyle con-tenant 2 à 5 atomes de carbone,
-~ benzyloxycarbonyle ou ~-oarbonylglyoyle ou ~ oarbon~l D alanyle
éventuellement e3-térifiéspar un radioal alcoyle oontenant 1 à 4
atome~ de oarbone ou benzyle et R6 repré~ente un groupement protec-
teur de la fonction amine ou un radical glycyle ou D alanyle dont
1 foncti.on amine est substituée par un groupement protecteur de la
fonction amine, peut êt~e obtenu, ~ ^
12 39 ~
par action d'un aminoacide de formule générale (VIII) 9 OU d'un
alcool aliphatique contenant 1 à 4 atomes de oarbone ou de l'alcool
benzylique, sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale :
Y~ COO~
ÇE
b 2 ~XVI)
~2
R6-~HC~cOE~2
da~s laqu.elle R6 est défini comme ci-dessu~ et Y représente un
groupement protecteur de la fonction amina, en opérant dans les
conditions habituelles, suivie du remplacement du groupement
protecteur Y par un atome d'hydrogène et éventuellement du grou-
pement ester (porté par le reste glycyle ou D alanyle) par un
ra~ical hydroxy, sana toucher au re~te de la molécule. En parti-
oulier, il importe de oholsir Y de telle manière que ~on rempla-
cement par un atome d'hydrogène s'effectue ~ans tou¢her au grou-
pement protecteur représenté ou porté par R6.
f)- Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III),dans
15 laquelle R4 représente un radical carbamoyle, R2 représente un
radical alcoyloxycarbonyle oontenant 2 à 5 atome~ de c~.rbone ou
benzyloxycarbonyle ou un reste ~-carbo~ylglycyle ou ~-carbonyl
D alanyle éventuellement estérifié et R6 représente un radical
glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est substituée par
un groupement protecteur de la fonction amine, peut être obtenu par
action ~ d'un aminoacide de formule
- générale (X) sur un produit de ~ormule générale :
. Y-~Hc~-R2
H2
- ~ (XVII)
~2
~2~ C~ C~2
dans laquelle ~2 est définl comme ci-dessu~ et Y repré~ente un
groupement protecteur de la fonction amine 9. en opér~nt dans les
conditions habituelles, auivie du remplacement de Y par un atome
d'hydrogène sans toucher au re~te de la moléculen
.
13
g)- ~e dérivé de la lanthionine de formule générale (III) dans
laquelle R2 représente un radical carbamoyle, R4 représente un
radical alcoyloxycarbonyle oonte~ant 2 à 5 atome3 de carbone,
benzyloxycarbonyle~ ~-carbonylglycyle ou ~-carbonyl D alanyle
éventuellement egtérifié~par un radical alcoyle co~tenant 1 à 4
atomes de carbone ou benzyleet H6représente un groupement protecteur
de la fonction amine ou un reste ~lycyle ou D alanyle dont la
fonction amine est substi-tuée par un groupement protecteur de la -
fonction amine peut être obtenu par action, .
d'un amlnoaoide de formule générale (VIII) ou d'un
alcool aliphatique contenant l à 4 atomes de carbone ou de l'aIcool
benzylique sur un aminoacide ou un dipeptide de formule générale :
Y - ~ECECO~IE2
E2
(XVIII)
~l6-l!~c~I-coQE
dans laquelle R6 est défini comme ci dessus et Y repré~ente un grou--
15 pementprotecteur de lafonction amine, en opérant danslesconditions
habituelles, suivie du ramplacement du groupement protecteur Y par
un atome d'hydrogène e~ éventuellement du groupsment es-ter por-té
par le reste glycyle ou D alanyle par un radical hydroxy, sans
touoher au reste de la molécule. En particulier, il importe ds
choisir Y de telle manière que ~on remplacement par un atome
d'hydrogène a'effectue sans toucher au groupement proteoteur repré
senté ou porté par R6.
Lorsque l'on fait r~agir l'aminoacide de formule géné-
rale (VIII) sur 1'aminoacide de formuls générale (X~I) ou (XVIII),
on opèra dans le8 conditions qui permettent la création d'une
liaison peptidique sans toucher au reste de la molécula. ~orsque
l'on fait réagir un alcool(aliphatique ou benzylique), on opèrs dans
des conditions douce3 d'estérification afin de ne pas -toucher aux
groupements protecteurs Y et R6 et plu~ particulièrement selon la
méthode de V. ~OCCHI, Synthesi~, p. 961 (1979).
3~8
14
.
h)- Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III~ dans
laquelle R2 représente un radical caxbamoyle, R4 repré~ente un
radical alcoyloxycarbonyle ou benzyloxycarbonyle ou un reste
N-carbonylglycyle ou ~-carbonyl D alanyle éventuellement e~térifiéet
R6 représente un reste glycyle ou ~ alanyle dont la fonction amine
est substituée par un groupement protecteur de la fonction amine,
peut être obtenu, . par action d'un
aminoa¢ide de formule généralè (X) sur un aminoacide ou un dipeptide
de formule générale :
EpECO~t2
PE2
S (XIX)
~ 2
H21~CHR4
dans laquelle R4 est défini oomme ci-dessus et Y repré~ente un
groupement protecteur de la fonction amine en op~rant dan~ lee
condition~ habituelles, suivie du remplacement du groupement Y par
un atome d'hydrogène sans toucher à Rl1.
15~es produit~ de formule générale (XVII) et(XIX) peuvent
être obtenus selon les méthodes habituelles utilisées en chimie
peptidique pour l'introduction d'un groupement protecteur de la
fonction amine à partir d'un dérivé de la lanthionine de formule
générale (III) dans laquelle l'un des radicaux R2 et R4 représente
un radical carbamoyle, et l'autre représente un radioal alooyloxy-
oarbonyle contenant 2 à 5 atomes de oarbone ou benzyloxyoarbonyle,
ou u~ reste N-oarbonylglyoyle ou ~¢arbonyl D alanyle éventuellement
estérifié et R6 représente un groupement protecteur de la fonotion
- - amine, suivies au remplacement du groupement protecteur R6 par un
atome d'hydro~ène sans toucher au reste de la moléoule~ En parti-
oulier le5 groupements proteoteurs des fonctions amines du monoamide
de la lanthionine sont diff~rents et choi31s de telle manière
que le remplacement de R6 n'entraine ias oelui de Y.
.
~ 2~5 ~ 398
~ e dériv~ de la lanthionine de formule générale (III) dans
laquelle R2 et R4 repré~entent chaoun un radical carbamoyle et
R6 représente un groupement protecteur de la fonction amine
peuvent être obtenus par action de l'ammoniac sur l'anhydride
mixte, préparé in ~itu par ac-tion d'un halogénoformiate
d'alooyle ~ur un dérivé de la lanthionine de formule générale :
~ CHC00~.
CH2
(XX)
l~2
R6-~lcEcooH '
. .
dans laquelle Y rQprésente un groupement protecteur différent de
R6, sui~ie de l'élimination du groupement-protecteur Y sans toucher
10 au reste de la molécule.
~ e d~rivé de la lanthionine de formule générale (III) dans
laquelle R2 et R4 repré~entent chacun un radical carbamoyle et
R6 représente un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction
amine est substituée par un groupement protecteur peut ~etre obtenu
par action d'un aminoacide de formule générale (X) sur le dérivé
de la lanthionine de formule générale : :
Y-~I.~CECONE2
P~ .
(XXI)
~2
H2NCHCOl9~I2
dans laquelle Y repre~ente un groupement protecteur da la fonction
amine, suivie de 1'élimination du groupement Y ~ans toucher au
- 20 groupement protecteur porté par R6.
k)- ~e dérivé de la lanthionine de formule générale (III),d~n~
laquelle R2 et R4 représentent chacun un radical alcoyloxy-
carbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou ben~yloxycarbonyle e~
~6 représente un groupement protecteur de la fonction amine,
peut être obtenu par estérification d'un dérivé de la lanthionine
de formule ~énérale :
16
Y-~HICHC
~CE~2
S tX}~II)
lc~2
R6~CHCOOlI
dans laguelle Y représente un groupement protecteur différent de
. R6 d~fini comme ci-dessus, suivie de.l'élimination de Y sans
,. toucher au reste de 13 molécule.
5 l)- Le dérivé de la lanthionine de formule générale (III),dan~ -
laquelle R2 et R4 repré9entent chacun un radical alcoyloxycarbonyle
contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxycarbonyle et R6 repré-
sente un radical glycyle ou D alanyle dont la fonction amine e~t
cubstituée par un groupèment protecteur de la fonction amine,
10~ peut être obtenu par action d'un aminoacide de formule générale (X)
~ur un dérivé de la lanthionine de formule gén~rale :
Y-N~ICHCOOR13
IC~2 (XXIII)
~2
H2~ CE-COOR13
dans laquelle R1~ représente un radical alcoyle contenant ~ à 4
atomes de carbone ou benzyleet Yreprésente un groupement protec-
teur de la fonction amine, suivie de l'élimination de Y sanstoucher au reste de la molécule.
~ es dérivés de la L lanthionine utilisables pour la
préparation de~ produits selon la présente invention peuvent é~a-
lement être préparés à partir du diester éthylique de la dibenzyl--
oxycarbonyl-h lanthionine dont la préparation est décrite par
D. H~RPP et co~l~9 J. Org. Chsm., 36, 73 (1971).
Les dérivés de la lanthionins de formule générale (III)~
dan~ laquelle l'un des symboles R2 ou ~ représente un radioal
~ car~mo~le
carboxy,7a-lc~y~oxycarbonyle contenant 2 ~ 5 atomes de carbone ou
benzyloxycarbonyle, N-carbonylglycyle ou ~-carbonyl D alanyle
éventuellement estérifié et l'autre repréoente un radical carboxy,
'
- ~ 7 ~L2~5~
alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou benzyloxy-
carbonyle et R6 représente un groupement protecteur de la fonction
amine ou un re3te glycyle ou D alanyle dont la fonction amine est
substituée par un groupement protecteur, peuvent être obtenus par
action d'un dérivé de la cystéine de formule 3énérale :
X-N~pHC0-I (XXIV)
CH2SE
da~s laquelle X repréaente un atome d'hydro~ène ou un groupement
protecteur de la fonotion amine ou un reste ~lycyle ou D alanyle
dont la fonotlon amine est substituée par un gToupement p~otecteur
et Y représente un radical hydroxy, amino, alcoyloxy contenant 1 à 4
atomes de carbone, benzyloxy, ~-glycyle ou ~-D alanyle
.éventuellement estérifié, sur un produit de formule
générale :
x~-~a~co-~ (}D~V) `
b~2-Zl
dans laquelle X' représen~e un atome d'h~drogène ou un groupement
protecteur de la fonction amine, Y' a la même définibion que le
symbole Y ci-dessus, et peut être différent de Y, et Z1 représente
un atome d'halogène, autre que le fluor, ou un reste d'e~ter
réactif tel qu'un radical toluènesulfonyle ou méthane~ulfonyle~
ou sur un produit de formule générale :
X'-~H~ CO-Y' (XXVI)
~ 2
da~s }aquelle X' et Y' ont les définitiona donnéea ci-deasua,
suivie de l'élimination éventuelle de l'un des groupements protec~-
teurs X ou X' de la fonction amine du dérivé de la lanthionine ainsi
obtenu..
- Généraleme~t la condensation du produit de formule géné-
rale (XXIV) sur un produit de formule générale (XXV) ou (XXYI)
~'effectue dans un milieu hydro-organique, tel.qu'un ~élange
eau-tétrahydrofuranne~en préaence d'une base(minérale, -telle que
la soude ou la potasse, ou or~anique9 telle qu'un hydroxyde d'ammo-
nium quate~naire)~ une température voi3ine de 0C0 La conden~ation
peu-t aussi être effeotuée dans l'ammoniac liquide.
.
33~
18
~a condensation du dérivé de la cystéine de ~ormule
générale (X~IV) 9Ur le produit de formulê générale (XXV) peut
s'accompagner d'ulle racémisation au niveau de l'atome de carbone
asymétrique du produit de formule générale (XXV).
Plus pa~ticulièrement, la racémisa-tion ne se produit pas
lorsque, dans les formules générales (XXIV) et (XXV), Z1 représente
un atome d'halogène, Y' repré~ente un radical h~rdroxy, Y repré-
sente un radical hydro~cy ou amino, X représente un atome d'hydro-
gène ou un radical benæyloxycarbonyle, t.butylo~ycarbonyle,-
t.butyloxycarbonyl glycyle ou t.butyloxycarbonyl D alanyle et
X' représente un atome d'hydrogène ou un radical benz~loxycarbonyle.
Pour éviter ou limiter la racémisation, il est-avanta~eux d'opérer
- dans 1'ammoniac liquide.
Les dérivés de la thialysine, c'est-à-dire les produit~
15 de formule générale (III) dans laquelle l'un des symboles R2 ou R4
repr~sente un atome d'hydrogène, X représente un atome de soufre et
m et n sont égaux à 1 peuvent être obtenus à partir de la thialysine,
dont la préparation est décrite par D. ~IOPE et coll., J. Chem. Soc.
(C), 1098 (1966), selon les méthodes données ci-de~sus pour la
20 préparation des dérivés de la lanthionine.
~es dérivés de la cystathionine, c'est-à-dire les pro-
duits de formule générale (III) dans laquelle X représente un atome
de soufre, m est égal à 1 et n est égal à 2, les symboles R2 et R~
étant différents d'un atome d'hydrogène~ peuvent être obtenus à
25 partir des dérivés de la cystathionine dont la préparation est
décrite en particulier par 1~. JOS~ et coll~, Coll. Czech. Chem.
- Comm., ~2, 24B5 (t967) et par Z. PROC~AZE~ et coll., Coll. Czech.
Chem. Comm., 45, 1982 (1980) 9 selon les méthodes dor~ées ci-dessus
pour la préparation des dérivés de la lanthionine. -
3o Les dérivés da l'acide diamino-2,7 subérique, c'e~t-à-dire
les produits de formule générale (III) da~s laquelle X repré~ente
un radical m~thylène et l'un des symboles m et n est égal ~ 1 et
l'autre est ~gal à 2, les symboles R2 et R4 éta~t différents d'un
atome d'hydrogène, peuvent etre obte~us à partir de dérivés de
19
. .
l'acide diamino-2,7 subérique, dont la prépar~tion est déorite
dans J. Org. Chem., 45, 3078 (1980), selon le3 méthodes données
ci-dessus pour la préparation des dérivés de la lanthionine.
L'aminoacide de formule générale (IV) peut être obtenu
par action d'un aoide de formule générale (VI) ou d'un dérivé
activé de cet acide sur la ~ alanine dont la fonction acide est
éventuellement protégée sous forme d'ester, suivie éven-tuellement
du remplacement de la fonction ester par la fonction ¢arboxy, en
opérant dan~ les condltion~ indiquées ci-dessus pour l'action de
t~. l'àcide de formule générale (VI) sur le peptide de formule géné-
rale (VII).
~ e peptide de formûle générale (V) peut ~tre obtenu par
action, dans les conditions habituelles, d'un dérivé de l'aoide
D glutamigue de formule générale (XIII) dont.la fonction amine est
15 protégée, et dans laquelle R5 représente un radioal amino ou
alooyloxy oontenant 1 à 4 atomes de oarbone ou bsnzyloxy, sur
un produit de formule générale (II~) dans laquelle R2, R4, R6~
m et n sont définis oomme précédemment, suivie du remplacement
éventuel du radioal R5, lorsqu'il représente un radical alooyloxy
20 contenant 1 à 4 atome~ de carbone ou benzyloxy, par un radical
hydroxy et des radioaux alooyloxyoarbonyles oontenant 2 à 5 atomes
de oarbone ou benzyloxyoarbonyles représentés ou porté~ par R2 et/
ou R4 par des radioaux oarboxy sans touoher au reste de la molé-
oule. Toutsfois lorsque R5 forme avec le groupement oarbonyle
25 auquel il e~t lié une fonotion ester, et R2 et/ou R4 représentent
ou oontiennent une fonotion ester, il peut être nécessaire que
le~ fonotions esters représentées ou portée~ par R~ , R2 et/ou
soient différentes et ohoi~ies de telle manière que le xempla-
cement de l'un des radioaux R2 ou R4 par un radical oarboxy
s'effectue sans touoher au radical R5 et à l'autre radical R2
. eu R4.
Le peptide de formule générale (~II) peut être obtenu
par aotion, dans les oonditions habituelles., d'un dérivé activé
de la ~.alanine de formule g~nérale :
R14-NHIC~-COO~ ~XXVII)
C~3
.
`
..
dans laquelle R14 représente un groupement protecteur de la
fonction amine sur un peptide de formule générale (V) dans
laquelle Rl, R2? R4, R6, X~ m et n sont définis comme précédemment,
suivie du remplacement du radical R14 par un atome d'hydrogène
et du remplacement éventuel du radical R1, lorsqu'iI représente
un radical alcoyloxy contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyl-
oxy, par un radical hydroxy et des radicaux alcoyloxycarbonyles
contenant 2 à 5 atome~ de carbone ou benzyloxycarbonyle par de~
radicaux carboxy sans toucher au reste de la molécule.
_, ~ . . .. .. .
10~orsque R1, R2 et R4 forment ou contiennent une fonction
ester, il est possible que ces fonctions soient différentes et
choisies de telle ma~ière que le remplacement d'un des radicaux
R2 ou R4 par un radical carboxy 8 ~ effec-t~e sans toucher au radical
R1 et à l'autre radical R2 ou R4.
15Le peptide de formule générale (IX~ dans laquelle R, R5,
R6, R9, Rlo, X, m et n sont définis comme préc~demment, peut 8tre
obtenu par action dans les conditions habituelles, d'un dipeptide
de formule générale (II) dans laquelle R et R5 son-t définis comme
précédemment, aur un produit de Yormule générale (III) dans
laquelle R6 est défini comme précédemment et R2 et R4 ont les
définitions donnéesPa Rg et R~o, suivie du remplacement, le
cas échéant, des radicaux R2 et/ou R~, lorsqu'il~ représentent un
radical alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5 atomes de carbone ou ~
- benzyloxycarbonyle,par un radical carboxy sans toucher au res-te de
25 la molécule.
En particulierj lorsque R5 forme avec le groupement
carbonyle auquel il est lié une fonction ester et R2 et/ou ~4
représentent une fonction ester, il peut être nécessaire que les
radicaux R5, R2 et R4 soient différents et choisis de telle manière
que le remplacement de8 radicaux R2 et/ou R4 par un radical carbox~
~'effectue sans toucher au radical R5 et éventuellement à l'un des
radicaux R2 ou R4.
Le peptide de formule générale (XI),dans laquelle Rl
représente un radical hydroxy, amino ou alcoyloxy contenant 1 à 4
atome~ de carbone ou benzyloxyet~essymboles R2 et R4 sont définis
21 ~503~1~
-
comme précédemment, peut être obtenu par action, dans les oondit~ons
habituelles, d'un dipeptide de formule générale ~II) dans laquelle
R et R5 sont définis comme ci-des~u~ ~ur un aminoacide de formule
générale (III) dans laquelle R2 et R4 sont définis comme précé-
demment et R6 représente un groupement protec-teur de la fonction
amine, suivie du remplacement de ce groupement protecteur par un
atome d'hydrogène sans toucher au reste de la molécule.
Selon l'invention les produits de formule générale (I)
- peuvent également être obtenu~ par action d'un p~oduit de formule
générale :
R15-N~IHCO-X5
CH2C~2CO-~ECHCO-Y (xxvIII)
CH2-Z2
dans laquelle R5 est défini comme précédemment, R15 represente un
groupement protecteur de la fonction amine ou un reste L alanyle
dont la fonction amine est substituée par un groupement protecteur
de la fonction amine ou par un reste d'acide gras, Y est défini
comme précédemment et Z2 représente un groupement -S~ ou un atome
d'halogène, autre que fluor, ou un reste d'ester réactif tel qu'un
radical toluènesulfonyle ou méthanesulfonyle, sur un produi-t de
formule générale :
EC~ICO-Y1 .
C~2 Z 2 (X~
dans laquelle X1 représente un atome d'hydrogène ou un groupement
protecteur de la fonotion amine ou un reste glyoyle ou D alanyle
- dont-la fonotion amine est éventuellement substituée par un groupe~
ment proteoteur de la fonotion amine, Y1 représente un radioal
hydroxy, alooyloxy oontenant 1 à 4 atomes de carbone9 benzyloxy,
~- glycyle ou ~- . . D alanyle é~entuelleme~t estérifié~
et Z'2 a la même définition que Z2~ étant entendu que l'u~ des
symboles Z2 ou Z'2 représente un radioal -S~ et que, lorsque Z'2
représente un radical toluènesulfonyle ou mé-thanesulfonyle, X1 est
différent d'un reste glyoyle ou D alanyle, dans les oonditions
décrites précéde~ment pour l'action d'un produit de formule géné-
rale (X2IV) sur un produit de formule générale tXXV), suivie,
` .
~L2~
22
- l,orsque R15 représente un groupement proteoteur de la
fonction amine, du remplaoement de ce groupement protecteur par un
atome d'hydrogène sa~s toucher au re~te de la moléoule, et de l'a¢-
tion d'un dérivé de la ~ alanine dont la fon¢tion amine est substi-
tuée par u~ re~te d'acide gra~ ou un groupement protecteur de lafonction amine et, dans ce dernier cas, de l'action de l'acide
de formule générale (VI) après élimination de ce groupement pro-
tecteur,
et lorsque R15 représente un reste h alanyle dont la
lG fonction amine e9t substituée par un groupement protecteur de la
fonction amine~ de l'action d'un acide de formule générale (VI)
après élimination de ce groupemen~t protecteur,
puis elimination, le cas ~chéant, des groupements
protecteurs représe~tés ou portés par ~5, Y, X1 et Y1 san~ toucher
au reste de la molécule.
L~ présente invention concerne également un prooédé
de préparation de~ produits de formule ~énérale (I) p~r synthèse
peptidique de Merrifield en phase solide.
Le procédé consiste essentiellement à fixer ~ur un
~upport approprié un aminoacide ou un peptide de formule générale :
R17 ~ICE R2
(I H2)m
X (XgX)
(P~2)n
16 4
d ns laquelle X, m et n sont définis comme précédemment, l'un des
symboles H2 ou R4 représente un radical carboxy ou N-carbonyl-
glycyle ou ~-carbonyl D alanyle et l'autre représen-te un atome
d'hydrogène ou un radical carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenan-t
2 à 5 atomes de carbone, benzyloxyoarbonyle, ~-carbon~lglycyle ou
~-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant
1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, R16 repréaente un groupement
protecteur de la fonction amine ou ~m radical glycyle ou D alanyle
~0 dont la fonction amine est sUbstituée par un groupement protecteur
de la fonction amine-et R17 représente un groupement protecteur de
la fonction amine, étant entendu que les groupements protecteurs
~ . . . , _
.
~%~9~3
23
de la fonction amine représenté~ ou portés par R17 et R16 sont
différents, puis après déblocage de la fonotion amine protégée
par R17, à condenser :
- soit l'acide D glutamique dont les fonctions ami~e et ~-carboxy
sont convenablement protégées7 c'est-~-dire le produit de formule ~
générale ..................................................... _.__
.... . _, . , ,, ~, . .. ... . ... .. , . ...... . .. , ~ , R18-~CECO-R5 (XXXI)
dans laquelle R1~ représente un groupement protecteur de la
fonction amine différent de R16 et R5 représente un radical amino -
ou un radical alcoyloxy contenant 1 ~ 4 atome~ de carbone oubenzyloxy, puis, après déblocage de la fonction amine protégée par
le radical R18 sans toucher à R16,
- soit un dérivé de la L alanine de formule générale
(XXVII), puis, après déblocage de la fonction amine protégée
15 par R14, étant entendu que R14 est différent de R16, l'acide de
formule générale (VI),
- soit un dérivé de la L alanine de.~ormule g~nérale (IV)
- soit le dipeptide de formule générale :
R19~ cEco-~Ec~co-R5 (XXXII)
CH3 b~2C~2C-~
dans laquelle ~5 est défini comme précédemment et R19 représente
~n regte d'aoide gras ou un groupement protecteur de la fon¢tion
amine, étant entendu que, lorsque Rlg représente un groupement
protecteur de la fonction amine,celui-ci est différent du groupe-
ment protecteur R16 du produit de formule générale (XXX), et
ensuite à faire'i éventuellement ré~gir ltacide de for~ule géné-
rale (VI), après déblocage de la fonction amine protégée par
le radical R19, puis à séparer le produit obtenu de son support
et à éliminer si nécessaire les groupements protecteurs des
fonctions amines et carboxy.
Selon une variante du p.rocédé9 il est po9sible de ~ixer
sur un support approprié le peptide de ormule générale -
~2St:~3~8
24
R2o~ co-R5
C~[2cE2co-~lcE-R2
(CH2)m (XXXIII)
(1~2)n
R16~ c~-R4
dans laquelle R5, R16, X, m et n sont définis comme précédemment,
l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical carbo~y, ~-carbonyl-
glycyle ou N-carbon~l D alanyle et l'autre représente un atome .
d'~ydrog~ne ou un radical carbamoyle, alcoyloxycaxbonyle con-tenant
2 à 5 atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, ~-carbonylglycyle ou
N-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant
1 ~ 4 atomes ds carbone ou benæyleet R20représente un groupement
protecteur de la fonction amine, ~tant entendu que le~ groupements
protecteur~ de la Eonotion amine repr~oenté~ ou portés par R16 et
R20 ~ont diff~rents, puis, après déblocage de la fonction amine
proté6~e par R20, de condenser :
- soit un dérivé de la L alanine de formule générale (XXVII), puls
après déblocage de la fonction amine protégée par R14, l'acids gras
de formule générale (VI),
- soit un dé~ivé de la ~ alanine de formule générale (IV), puis ~
séparer la produit obtenu de son support et à éliminer, si néces-
saire, les groupements protecteurs des fonctions amine et carboxy~ :
Selon une autre variante du prooéde, il e~ possible de
20 fixer gur un support approprié le peptide de formule générale :
R21 -~HlcHco-llHcHco-R~
CE3 lH2CH2C~~CH R2
(~E2)m (XXX N)~
~ (IH2)n
R 1 6-~E-C~ 4
dans laquelle R5, R16, X, m et n sont definis comme précédemment,
l'un des ~ymboles R2 ou R4 représe.nte un radical carboxy, N-carbo-
nylglycyle ou ~-carbonyl D alanyle et l'autre repr~ente un atome .
d'hydrogène ou u~ radical carbamoyle, alcoyloxycarbohyle contenant
.
,
:;
. 25
-
2 à 5 atome~ de carbone, benzyloxycarbonyle, N-carbonylglyoyle
ou N-carbonyl D alanyle estérifié par un radical alcoyle contenant
1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, et R21 représe~te un groupe-
ment protecteur de la fonction amine difféxent du groupement
protecteur de la fonction amine représenté ou porté par R16,
pUi9 , après déblocage de la fonction ~mine protégée par R21, de
conden3er l'acide de formule générale (VI), pUi9 de ~éparer le
prodult obtenu de son support êt d'éliminer, si nécessaire, le8
groupementa protecteurs des fonctions amine..et carboxy.
La synthèse peptidique de Merrifield peu-t aussi êt~e
mise en oeuvre en fixant ~ux un support approprié un prod~it de -
formule générale (XXXI) ou (XXXII) dans.lesquelles R5 représente
un radical hydroxy , les symboles R18 et R19 sont respectivement
définis comme précédemment et le radical ~-carboxy est protégé,
15 puisl apxès déblocage de ce ~roupement protecteur pUi9 activation
de la fonction acide, en fai~ant réagir le produit de formule
générale (XX~) dont les fonctions amines et carboxy sont conve-
nablement protégées, puis, le cas échéant selon les significations
de R18 et R19, un acide de formule générale (~I) ou le dérivé de
la L alanine de formule générale (XXVII) et,selon la signification
de R14,éventuellement l'acide de formule générale (VI).
Lorsque dans la formule générale (I), l'un des symboles
R2 ou R4 représente un radical ~-carbonylglycyle ou ~-carbonyl
D alanyle et l'autre représente un atome d'hydrogène ou un radi-
cal carboxy, carbamoyle, alcoyloxycarbonyle contenant 2 à 5
atomes de carbone, benzyloxycarbonyle, ~-carbonylglycyle ou
N-carbonyl D alanyle éventuellement est~rifié par un radical
alooyle contenant 1 à 4 atomes de carbone ou benzyle, il e~t
possible de fixer sur un support convenable la glycine ou la
D alanine dont la fonction amine est protégée, puis, après
déblocage de la fonction amine, de condenser un aminoacide ou un
peptide de formule générale :
`` ~2~3~
26
\
R22-~E-R2 .,.
( kH2)m
I (X~V)
( IC~2)n
R16-~E CH-R4
dan~ laquelle R16, X, m et n sont défini~ comme précédemment,
l'un des symboles R2 ou R4 représente un radical carboxy et 1'autre
représente u~ atome d'hydrogène ou un radical carbamoyle, alcoyl-
- 5 oxycarbonyle contenant 2 à 5 atome~ de carbone, benzyloxycarbonyle, .
~-carbonylglycyle ou ~-carbonyl D alanyle estérifié par un .
radical alcoyle oontenant 1 à 4 atomes de carbone ou ben~yle, et
R22 représente un groupement protecteur de la fonction am~ne
.différent de R16 ou un reste d'un D aminoacide de formule générale :
` R23-NHC~CO-R5
10 CH2C~2C OH (XXXVI) ¦
dan~ laquelle RS est défini comme précédemment et R23 représente
un groupement protecteur de la fonction amine différent de R16 ou
un reste d'un ~ aminoacide de formula générale : .
R -~C~-COO~
24 b (xxxvII)
15 dans laquelle R24 représente un groupement protecteu~ de la fonc-
tion amine ou un reste d'acide gras défini précédemment, étant
entendu que les groupements protecteurs representés par R22, R23
! et R24 sont différents de R16 et peuvent etre éliminé~ san~ toucher
~ ce dernier, puis
: 20 - lorsque R22 représente un groupemen-t protecteur de la fonction
amine, d'éliminer ce groupement protecteur, puis de condenser s
: - soit u~ déri~e de l'acide D glutamique de formule générale
(X~XVI) dans laquelle R23 représente ùn groupement protecteur de
! ' la fonction amine, puis, après élimination de R23, de condenser un
dérivé de la L alanine de formule générale (XXXVII) dan~ laquelle
R24 est défini comme précédemment et, lorsque R24 repres~nte un
groupement protecteur de la fonction amine, d'éliminer le radical
R24, pui~ de condenser l'acide de formule générale (VI),
.
.
: `~
27
- soit un dérivé de l'acide D glutamique de formule ~énérale
~ Vl) dans laquelle R2~ représente un reste d'un L aminoaoide de
formule générale (XXXVII) dans laquelle R24 est défini comme pré-
cédemment, et, lorsque R24 représente un groupement protecteur de la
fonotion amine, d'éliminer le radical R24 puis de condenser l'acide
gras de formule générale (VI),
- lorsque R22 représente un reste d'un aminoacide de formule
générale (XXXVI) aans laquelle R2~ représente un groupement pro-
tecteur de la fonction amine, d'éliminer ce g~oupement protecteur,
puis de condenser un dériv~ de la L alanine de formule ~énérale
(XXXYII) dans laquelle R24 est défini comme précédemment et,
lorsque R24 représente un groupement protecteur de la fonction
amine, d'éliminer le radioal R24, puis de conden~er l'acide gras
de formule générale (VI), et
- lorsque R22 représente un reste d'aminoacide de formule-générale
(XXXVI) dans laquelle R2 représente un rbste d'un L aminoacide de
formule générale (XXXYII~ dans laquelle R24 représente un groupement
protecteur de la fonction amine, d'éliminer le radical R24 puis de
condenser l'acide gras de formule générale (VI).
Lorsque dans la formule générale (I), R~ représente un
reste glycyle ou D alanyle, l'introduction d'un tel radical peut
être effectuée à n'importe quel stade de la synthèse de Merrifield.
- Par exemple il est possible de fixer sur un support approprié le
produit de formule généræle (XXX) dans laquelle R16 représente un
groupement protecteur de la fonction amine différent de R171 puis
d'éliminer R16 sans toucher à R17 et de condenser un dériv~ de la
glycine ou de la D alanine dont la fonction amine est substituée par
un groupement protecteur de la fonction amine différent de R17
puis, après élimination de-R17, de conden3er }e produit de formule
générale (XXXI) ou (XXXII) dans les conditions indiquées précé-
demment 9 OU bien il est possible de fixer 9ur un support ap~roprié
le produit de formule générale (XXX) dans laquelle R16 représente un
groupement protecteur de la fonction amine, puis de cundenser un
produit de formule générale (XXXI) ou (XXXII~ dans 1e~ conditions
indiquées précédemment, puis aprè3 élimination de R16 de condenser
la glycine ou la D alanine dont la fonction amine est substi-tuée
par un gToupement protecteur.
28
Les supports qui conviennent particulièrement bien sont
les copoly~ères styrène-divin~lbenzène chlorométhylés ou hydroxy-
méthylés. De préférence le copolymère styrène-divinylbenzène (98 2
ou 99-1) chîorométhylé est utilisé.
La fixation des peptldes de formule générale (XXX),
(XXXI), (XXXII), (XXXIII) ou (X~XIV) sur le support chlorométhylé
s'affectue selon les méthodes habituelles, en particulier en
faisant réagir le peptide de formule ~énérale (XXX), (~XI),
(XXXII), (XXXIII) ou (XXXIV) en solution dans un ~olvant organlque
tel que l'éthanol et en présence d'un accepte~r d'acide tel que
la triéthylamine. I1 est particulièrement avantageux de chauffer
le mélange réaotionnel jusqu'à une température voi~ine de la tempé~
rature d'ébullition du mélange ~éactionnel.
Les grou~ements protecteurs des fonctions amines des
peptide9 de formule gén~rale (XXX), (XXXI), (XXXII), (XXXIII) ou
(XX~IV) doivent être choisis de telle manière que leur ~limination
s'effectue sans toucher ~ la lialson pep-tlde-support. ~n particulier
x R17~ R18' R19' ~20 et R21 doivent 8tre différent~ du
radical R16 et 8tre tels que leur élimination s'effectue sans
toucher au groupement protecteur ~16 et ~ la liaison peptide-
support.
Généralement les fonctions esters représentées ou portées
par R2, R4 ou R5 sont choisiesde telle manière que, lors de la
ooupure de la liaison peptide-support, les radicaux R2, R4 ou ~5
25 puissent être 90it conserv~s, 90it transformés e~ radlcaux car'boxy
ou carbamoyle selon que la coupure e~t une hydrolyse acide, une
alcoolyse ou une ammonolyse.
Plus particulièrement la liaison peptide-~pport, qui e~t
de nature benzylique, est coupée par traitement au moyen d'un
mélange aoide bromhydrique-acide trifluoroacétique en régé~érant
une fonction acide.
Les ~ouveaux peptides de formule générale (1) peuvent être
éventuellement purifiés par aes méthodes ph~siques (telles que la
cristallisation ou la chromatographie) ou chimiques (telles que
formation d'un sel, cristallisation de celui-ci puis décomposition).
~ es nouveaux produits selon l'invention peuvent être
transformés en sels d'addition avec les acides ou en ~els métalli-
que~ ou en sels d'addition avec les bases organiques selon la
nature des substituants.
Les sels d'addition avec les acides peuvent être obtenus
par aotion des nou~eaux produits sur des acides dans un solvant
approprié. Généralement on solubilise le produit dans l'eau par
addition de la quantité théorique d'acide puis on lyophilise la
solution obtenue.
~es ~els métalliques ou les sels d'addition avec le~ base~
organiques peuvent être obtenue par action des nouveaux composés sur
des bases-minérale~ ou organique~ dans un ~olvant approprié;
Généralement on solubilise le produit dans l'eau par addition de
la quantité théorique de base puis on lyophili~e la ~olution
obtenue.
~ es nouveaux composés selon la présente invention sont
des ad~u~ants et des stimulant~ de l'immunité : ils augmentent les
réactions d'hypersensibilité et/ou la produotion d'anticorps
circulants vis-à-vis des antigènes avec lesquels ils sont adminis-
trés et ils stimulent de manière non spécifique des réactions dedéfense contre certaines infections (par exemple l'infeotion
de la souris par la bacterie intracellulaire Listeria monooytogenes).
~ 'un intérêt tout particulier sont les produits de
formule générale (I) dans laquelle RC0- représente un reste d'aoide
gras dans lequel R représente un radical alcoyle contenant 2 à 21
atomes de carbone, éventuellement substitué par un radical hydroxy,
R1 représente un radical hydroxy ou amino, les symboles R2 et R4,
identiques ou différent~, repré~entent un atome d'hydrogène ou
un radical carboxy, carbamoyle, ~-carbonylglycyle ou ~-carbonyl
D alanyle, ~tant entendu que R2 et R4 ne peuvent pas représenter
simultanément un atome d'hydrogène, R3 represente un ~tome
d'hydrogène ou un reste glycyle ou D alanyle, étant entendu
que,lor~que R2 et R4, identique~ ou différent~, repré~entent ohacun
~- .
.
~2~3~3
un radical ~-carbonylglycyle ou ~-carbonyl ~ alanyle, R3 repré-
sente un atome d'hydrogène, X repré~ente un atome de 30u~re,
m et n, identique3 ou différents, représentent chaoun un nombre
entier égal à 1 ou 2, étant entendu que l'alanine liée à l'acide
glut.amique est sous forme L, l'acide glutamique est sous forme D,
là lanthionine; lorsque m et n sont égaux à 1, la cystathionine,
lorsque m et n sont diférents, l'homolanthionine, lorsque m et n
sont égaux à 2, sont sous forme D,D ; ~,~ ; DD,L~ (racémique)
où D,L (méso) ou sous forme des mélanges L, méso ou D, m~so, et
la thialysine, lorsque l'un des sym~oles ~2 ou ~4 représente un
atome d'h~drogène, est sous forme L ou D ou D,L.
In vitro, ils sont actifs à des concentra-tions molaires
généralement comprises entre 10 3 et 10 , en particulier dans
les tests suivants :
15 -~stimulation de la synthèse de l'ADN (pouvoir mitogène) selon la
technique de G. M~RC~L, ~nn. Immunol. (Inst. Pasteur), 125 C,
519 ~1974)
- stimulation de la production d'anticorps selon la technique de
P.H. EIæSIUS, ProcO Soc. Exp. ~iQl. Med. (~.YO), ~, 155 (1970) et
20 H. VAN DIJE et ~. BLOKSM~, J. Immunol. Methods, 14, 325 (1977)
- augmentation du nombre de macrophages phagocytaires selon la
technique de J. MICHL et coll., J. exp. Med., ~9 1465 (1976)
- augmentation de 1'activité c~Jtostatique des macrophage~ d'un
exsudat péritonéa} vis-~-vis des ceIlules tumorale~.
- In vivo, chez la souris, à des doses comprises entre 1
et 30 mg/kg, ils augmentent l'hypersensibilité retardee et la
production d'anticorps en particulier ~elo~ la tech~ique de
~ T~Eo ~I~LER et coll~, J. ~at . Canoer Inst., 51, 1669 ~1973)~
. ~'
3~ ~25i~98
Chez la souris, il~ stimulent les réactions de défense
contre l'infection soit à Listeria monoc~vtogenes, ~oit ~
Elebsiell~ pneumoniae ~ des doses comprises entre 1 eb 100 m~/kg
selon la technique de R.M. FAUVE et ~. HEVI~, C~Ro AcadO Sci~ (D),
285, 1589 (1977).
Chez la souris, ils stimulent le pouvoir d'élimination
du carbone oollo~dal par le système réticulo-endothélial suivant
la technique de B.N. ~ATPERN et coll., Ann. Institut Pasteur, 80,
582 (1951).
Les exemples suivants, donnés à titr~ non limitatif,
ilIustrent la présente invention.
Les produits selon la pr~sente invention peuvent former
des comple~es aveo les m~taux alcalins ou alcalino-terreux ;
il en résulte que les résultats de l'analyse ~lémentaire de~
produits peu~ent sensiblement s'écarter des valeurs th~oriques.
Cependant la structure des produits est confirmée par le rapport
C/N ou C/S qul est en accord avec la théorie, par la teneur en
acides aminés, et p æ leur homogénéité en chromatographie sur
couche mince de silicagel.
Les conditions d'hydrolyse utilisées pour déterminer le
rapport des aci`des aminés entre eux ~acide ohlorhydrique conoentré -
acide acétique anhydre (1-1 en volumes) ~ 960C pendant 5 heures
selon la méthode de I. P~OTAEI, J; Chem. Soc., Perkin I, 2599
(1~79)] sont des conditions qui ne racémisent pas la lanthionine
msis sont insuffisantes pour rompre entièrement la liaison amide
entre l'aoide ~ras et l'alanine.
.
: . ' : .,
.~ '
~2~5~3~3
~2
On a~oute 1 cm3 de chloroformiate d'i~obutyle à une
solution, maintenue à -5C, de 3,9 g de ~ -lauroyl L alanyl)-
a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 200 cm3 de tétrahydro-
furPnne et de 1,1 cm3 de triéthylamine. ~e mélange est agité pen-
dant 40 minutes à -5C, puis on ajoute une solution refroidie
0C de 2,7 g de ~-benzyloxycarbonyl L lanthionine dans 158 cm3
de soude 0,1 N. Le mélange r~actionnel est agit~ pendant 20 minutes
à 0C, puls pendant 16 heures à 20QC environ. On évapore le tétra-
hydrofuranne par concentration 90u9 pression r~du~te (20 mm demeroure ; 2,7 kPa) à 50C ; le concentrat est àcidifié à pE 2
par addition d'environ 30 cm3 d'acide chlorhydrique 1 ~, extrait
3 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. ~es phases orga-
ni~ues réunies sont lavées avec 50 cm3 d'une solu-tion saturée de
chlorure de sodium, séchées ~ur sulfate de sodium anhydre et
concentrées à sec 90U9 pression réduite (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) à 40C. Le résidu obtenu est trituré dans 200 cm3 d'éther,
séparé par filtration et séché sous pression réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 2,25 g de pnudre
amorphe à laquelle on ajoute 0,45 g d'un produit similaire obtenu
dans une autre préparation. Ce mélange est chromatographié sur 50
de gel de silice neutre (o,04-0,063 mm) contenus dans une colonne
de 2,3 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 2,70 g de produit
dans 200 cm3 d'acétate d'éthyle bouillant et à la solution obtenue,
on ajoute 5 g de gel de silice neutre (o,04-0,063 mm). On évapore à
sec le mélange 90U9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)
à 50C et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de
silice. On élue successivement avec 300 cm3 d'un méla~ge acétate
d'éthyle-cyclohexane (2-8 en volumes), 150 cm3 d'un mélange acétate
d éthyle-cyclohexane (1-1 en volumes), 750 cm3 d'un mélange aGétats
d'éthyle-cyclohexane (3-1 en volumes), 1,2 litre d'acétate d'éthyle,
850 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volu-
mes) et 250 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique
(8-2 en volumes) en recueillant de~ fractions de 50 cm3. ~es
fractions 51 à 70 sont réunies, concentrées à sec sous pression
33
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le résidu est trituré
dans 200 cm3 d'éther, 3éparé par filtration, lavé 2 fois par
100 cm3 au total d'éther et séché 90US pression rédulte (0,3 mm
de mercure ; 0,04 l~Pa) à 50C. On obtient ainsi 1,86 g d'acide
~ 01-benzyl ~ lauroyl L alanyl) y-D glutamgl] ~ -benzyloxy-
carbonyl L,L diamino-2,6 thia-4 pimélique.
Rf = 0,45 ~silicagel ; acétate d'éthyle - acide acétique
(9-1 en volumes)~
- Dans une solution de 1,8 g d'acide ~2-[01-benzyl ~- -
(N-lauroyl L alanyl) y-D glutamyl] ~ -benzyloxycarbonyl L,1 diami-
no-2,6 thia-4 pimelique dans 50 cm3 d'acide trifluoracétique, on
envoie un courant d'acide bro~hydrique pendant 5 heure~ 1/2.
En~uite, lem~lange réactionnel est purgé avec de l'azote pendant
10 minutes, débarrassé d'un léger insoluble par filtration et
concentr~-~ sec ~ous pre9~ion r~duite (20 mm de meroure ;
2,7 kPa) à 50C. Le résidu obtenu est -trituré dans 50 cm3 d'acé-
tate d'éthyl~, separé par filtration et lav~ 2 fois par 60 cm3
au total d'ether. On obtient ainsi 1,o6 g d'une poudre amorphe
trèshygroscopique que l'on dissout dans 50 cm3 d'une solution
anhydre d'acide chlorhydrique 1,9 N dans l'acide acétique. Cette
solutio~ est concentrée à sec 90u8 pression réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le résidu est dissous dans 5 cm3
d'acide acétique anhydre et jeté dans 1 litre d'éther. ~e précipité
ainsi formé est séparé par filtration9 lavé avec 100 cm3 d'éther,
9éché 80u9 pression réduite (0,3`mm de mercure ; 0,04 kPa) à
20C et dissous dans 10 cm3 d'eau. La solution ainsi obtenue ~e
gélifie au bout de 1/.2 heure ; elle est alors diluée par 500 cm3
d'eau. Le précipité ainsi formé est séparé par filtration,
dissous dans 5 cm3 d'acide acétique et jeté dans 800 cm3 d'éther.
Le nouvea~ pré¢ipité ainsi formé est sép re par filtration, lavé
3 fois avec 300 cm3 au total d'ether et séché sous pression
réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 50C. On obtient ainsi
380 mg d'acide ~2-[~ -lauroyl L alanyl)-y-D glutamylJ L~L
diamino-2,6 thia-4 pimélique contenant 2,1 ~ d'eau.
RE = 0,25 Csilicagel ; n.butailol - pyridine - acide
acétique - eau ~50-20-6 24 en volumes~]
.
~ 34
A~alyse: Calc. % C 52787 H 7,85 ~ 9,48 S 5,43
Tr. 49,5 7'9 8,75,2
Cendres sulfuriques : 2,1 ~
Aprèa hydrolyse dans un mélange acide chlorhydrique
concentré - acide acétique anh~dre ( 1-1 en volumes) pendant
5 heures à ~6C, l'analyse sur`autoanalyseur ~IO~RO~IE révèle
la présence des aciaes aminés suivant~ :
~ an 1,00 (théorie = 1)
` méso ~an O (théorie = O)
Glu 1,02 (théorie = 1)
La ~-benzyloxycaxbonyl L lanthionine peut être préparée
selon la méthode de I. PHOTAKI et coll., J. Chem. Soc. Perkin I,
2599 (1979)-
: ~e ~-lauroyl L alanyl-~-D glutamate de benzyle peut
15 être préparé selon 1'une de~ deux méthodes suivantes
a) A une ~olution de 12,75 g de chlorh~drste de
L ala~yl-a-D glutamate de benzyle dans 75 cm3 de soude 1 ~, on
ajoute simultanément en 37 minutes, 8 g de chlorure de lauroyle
dissous dans 75 cm3 d'éther et 37,4 cm3 de soude 1 ~ de façon à
maintenir le pH du mélange réaotionnel compris entre 8 et 9. Le
mélange est agité pendant 1 heure 20 minutes. Après décantation,
la phase aqueuse est acidifiée à pE 2 par addition d'acide
chlorhydrique 1 ~ (60 cm3) et extraite 3 fois par 300 cm3 au
total d'aoétate d'éthyle. Les extraits organiques réu~i~ sont
lavés par 25 cm3 d'ea~, séchés sur du sulfate de sodium anhydre e-t
concentrés à sec sous pression réduite (20 mm de mercure j 2,7 kPa)
. . .
à 45C. On obtient ainsi 7,4 g d'un solide blanc que l'on chroma-
- tographie sur 80 g de gel de silice neutre contenus dans une
colonne de 2 cm de diamètre. On élue successivemen-t par 100 cm3
d'un mélange acétate d'éthyle - méthanol (8-2 en volumes) et
200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - méthanol (1-1 en volumes),
en recueillant de~ ractions de 50 cm30 ~a fraction ~ est concen-
trée à sec sous pression réduite (20 mm de meroure ; 2,7 kPa)
45C. On obtient ainsi 2 g de ~`-lauroyl L alanyl-o~-D glutamate
de benzyle fondant à l30C. ~es fractions 2 à 4 sont de m~me
concentrées à sec et chromatographiées sur 100 g de gel de silice
3L2~3~1
neutre (0,063-0,20 mm) contenus dans une oolonne de 2 cm de
diamàtre. On élue par 250 cm3 d'aoétone en recueillant des fractions
de 25 cm3. Les fractions 1 et 2 sont conoentr~es à sec sous pxe~-
sion réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 45C. On obtient
ainsi 4,07 g de ~-lauroyl ~ alanyl-a-D glutamate de benæyle
fondant à 130C dont les caractéristiques sont les suivantes :
Rf = 0,9 [silicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)~
~nalyse Calc. ~ C 66,10 ~ 8,63 ~ 5,71
Tr. 66,3 8,8 5,6
b) On ajoute 31 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution, mai~tenue à une température voisine de 10C, de 47,75 g
d'acide laurique dans 3 litres de dioxanne et 33,3 cm3 de triéthyl-
amine. Le mélange est agité pendant 20 minutes ~ 10C, puis on
ajo~te en 10 minutes une solution, refroidie à 10C, de 88,95 g
de chlorhydrate de L alanyl-x-D glutamate de benzyle, dans un
mélange de 1 litre de dio~anne, de 476 cm3 d'eau et de 476 cm3
de soude 1 N. Le mélange réactionnel e~-t aæite pendant 1 heure
à 10C, pUi8 pendant 18 heures à une température voisine de 20C ;
il est ensuite dilué par addition de 4 litres d'eau, acidifié à
pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 1 ~ (environ 475 cm3)
et conservé pendant 2 heures à 0C. Le préoipité obtenu est
séparé par filtration, lavé successivement par 500 cm3 d'eau et
- 500 cm3 d'éther, puis séché sous pression réduite (20 mm de
25 mercure ; 2,7 kPa) ~ 20C. ~e produit est mi3 en suspension dans
800 cm3 d'éther, agité penda~t 1 heure, ~éparé par filtra-tion et
lavé 2 foi~ par 200 cm3 au total d'éther. Après séchage 30U9
pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) ~ 20C, on obtiant
71,79 g de ~-lauroyl ~ alanyl~-D glutamate de benzyle fonda~t a
30 130~C. - -
Rf = ~,77 ~silicagel ; acétate d'éthyle - méthanol
(4-1 en volumes)].
Le chlorhydrate de L alanyl-x-D glutamate de benzyle
peut être préparé de la fason ~uivante : -
': - .
.
. -~ .
~ 3
- 36
.
On dissout 97,16 g de ~-t.butyloxyoarbonyl L alanyl-a-D
glutamate de benzyle dans 970 cm3 d'une 301ution anhgdre d'aoide
chlorhydrique 1,7 ~ dans l'acide acétique. On agite pendant
2 heures, pui~ on ajoute rapidement 3,8 litres d'éther anhydre et
on laisse reposer pendant 2 heures à 0C. Le préoipité huileux
qui s'est formé, séparé du surnageant par décantation~ e~t dissous
dans 500 cm3 d'acétone ; la solution ainsi obtenue e~t concentrée
à sec sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C.
On obtient ains-i 88,9 ~ de chlorhydrate de ~ alanyl-a-D glutamate
de benzyle. ~
Le ~-t.butyloxycarbonyl L alanyl-~-D glutamate de
benzyle peut être pr~par~ selon la méthode de E. BRICAS et coll.,
Biochemistry ~, 823 (1970).
EXEMPLE 2 -
15On aJoutQ 2,6 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution maintenue à -5C, de 9,12 g de ~ lauroyl L alanyl)
~-D glutamate de t.butyle.dans un mélange de 440 cm3 de tétra-
- hydrofuranne et de 2,8 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité
pendant 20 minutes à -5C, puis on ajoute u~e ~olu-tion refroidie à
2C de 6,82 g d'acide ~6-benzyloxycarbonyl diamino-2 (~), 6 (D,L)
thia-4 pimélamique dans un mélange de 20 cm3 de soude ~ et 172 cm3
d'eau.
Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes à 0C,
~ puis pendant 20 heures à 20C environ. On évapore le tétrahydro-
furanne par concentration sous pression rédui-te (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) à 50C ; le concentrat est refroidi ~ 0C, acidifié
pE 2 par addition d'acide chlorhydrique 1 ~ (23 cm3 environ).
~e précipité formé est séparé par iltration, lavé par 100 cm3
d'acide chlorhydrique 0,1 N puis 2 fois par 400 cm3 au total d'eau
et séché à l'air liDre. On obtient ainsi 11,8 ~ d'une poudre lëge-
rement colorée en vert que l'on chromatographie sur 250 g de gel
de silice neutre (o,o4-o,o63 mm) contenus dans une colonne de
4 cm de diamètre. Pour cela, on di~sout les 11 ,a g de poudre dans
150 cm3 d'acide acetique et à la solution obtenue, on ajoute 20 g
37
de gel de silice neutre (o,04-0,063 mm). On évapore ~ sec le
mélange sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C et le
~ résidu ainsi obtenu est chargé sur la oolonne de silice. On élue
successivement avec 1 litre d'un mélange acétate d'éthyle - acide
acétique (98-2 en volumes) et 3,2 litres d'un mélange acétate
d'éthyle - acide acétique (9-1 en volumes) en recueillant des
fractions de 100 cm3. Les fractions 17 à 42 sont réunies, concen-
trées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50C.
Le ~sidu obtenu est trituré dans 150 cm3 d'éther, séparé par
filtration et séché. On obtient ainsi 6,3 g d'acide ~2-[01-t.butyl
lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl~ N6-benzyloxycarbonyl
diamino-2(h), 6 (D,~) thia-4 pimélamique.
Rf = 0,83 [silicagei ; acide acétique - acétate d'éthyle
(3~1 en volumes)]
Rf - 0,63 ~silicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)~
Spectrométrie de masse = M=779 (théorie = 779)
On dissou-t 6,3 g d'acide ~2-[01-t~butyl ~ -lauroyl
L alanyl)-y D glutamyl] N6-benzyloxycarbonyl diamino-2(~), 6(D,L)
thia-4 pimélamique dans un me;lange refroidi à ooa de 27,5 cm3
d'acide bromhydrique en solution à 35 ~ dans l'acide acétique,
9 cm3 de diéthylphosphite et 14 cm3 de diéthylsu fure. On agite le
milieu réactionnel pendant 1 heure 1/4, puis on le verse dans
2 litres d'éther-anhydre refroidi ~ 0C. On agite le mélange pen-
dant 2 heures ; le précipité obtenu est séparé par filtxa-tion,
la~é 4 fois par 1,2 litre au total diéther et séché sous pression
- réduite (0,3 mm de mercure ; O,04 kPa). On obtient ainsi 7,5 g
d'une poudre beige clair, hygroscopique, que l'on chromatographie
sur 300 g de gel de silice neutre (o,o4-o,o63 mm) contenus dans
une colonne de 4 cm de diamètre. Pour cela, on di~sout les 7,5 g
de poudre dans un mélange de 100 cm3 ~e méthanol et 4 cm3 d'ammo-
niaque (d = 0,92) e~ à la solution ainsi obtenue, on ajoute 16 g
de gel de silice neutre (o,04-0,063 mm). On évapore à sec le
mélange sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)~à
- 35 50C et le résidu ainsL obtenu est chargé sur la colonne de
silice~ On élue avec 1,53 litre d'un mélange méthanol - acétate
d'éthyle ~8-2 en volumes) en recueillant des ~ractions de 30 cm3.
- 38
~es fractions 35 ~ 51 sont réunies, concentrées à sec sou~
presaion réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le ré~idu
obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther, séparé pax filtration et
séché à 40C sous pre~sion réduite (0,3 mm de mercure ; 0?04 kPa).
On obtient ainsi 4905 g d'acide ~2~ lauroyl ~ alanyl)-y-D
glutamyl] diamino-2(~), 6 (D,L) thia-4 pimélamique.
Rf = 0,41 ~silicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique -eau (50-20-6-24 en volumes)]
Spectrométrie de masse s M = 589 (th~orie = sag)
Analyse : Calc % C 52,95 H 8,03 ~ 11,88 S 5,44
Tr, 48,6 7,4 10,9 4,9
Le ~-(N-lauroyl ~ alanyl) a-D glutamate de t.butyle
- peut être preparé de la façon suivante :
On dissout 55 g de ~ -lauroyl h alanyl)-D glutamate
de ~-t.butyle et de y-benzyle dans 4,7 litre~ de t.butanol. On
ajoute 55 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium), puis on
fait passer un lent courant d'hydrogène pendant 7 heures. ~prè~
filtration, on concentre à sec le milieu réactionnel sous pression
réduite (20 ~m de mercure ; 2,7 kPa - puis 0,~ mm de mercure ;
0,04 kPa) à 50C. On obtient ainsi 47,1 g d'huile épaisse que l'on
dissout dans 500 cm3 d'une solution saturée de bicarbonate de
sodium. Cette solution est extraite 2 fois par 500 cm3 au total
d'acétate d'éthyle, la phase acétate d'éthyle est lavée ave¢
200 cm3 d'une solution saturée de bicarbonate de sodiu~4 ~e~
25- phasas aqueuses réunies sont acidlfiées à p~ 3-4 par addition
d'acide cltrique, extraites 3 fois par 600 cm3 au total d'acétate
d'éthyle. Cette dernière phase o~ganique est séchée sur sulfate de
sodium et concentrée à sec sous pres~ion réduite (20 mm de mercure;
2,7 kPa) à 50C. On obtient ain i 36,5 g de ~ lauroyl L alanyl)
~ 30 ~-D glutamate de t.butyle sous forme d'une huile cristallisant
20C.
Rf : o,67 ~silicagel ; acétate d'éthyle - acide acétique
(9-1 en volumes)]
Spectrométrie de masse : M = 456 (théorie _ 456)
~a2~3
- 39
Le ~ lauroyl L alanyl) D glutamate de ~-t.butyle et
de y-benzyle peut être préparé de la façon suivante :
On ajoute 23,2 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution, maintehue vers -7C, de 48 g de ~-lauroyl L alanine dans
un mélange de 300 cm3 de tétrahydrofuranne et de 24,9 cm3 de
triéthylamine ~e mélange est agité pendant 20 minutes vers -7C,
pUi9 on ajoute une solution de 80 ~ de D glutamate de ~-t.butyle et
de y-benzyle dans 330 cm3 de tétrahydrofuranne. Le mélange réac-
tionnel est a~ité pendant 30 minutes à une température voisine de
0C; puis pendant 16 heures ~ une température voisine de 20C ;
il est ensuite filtréO ~e filtrat est concentré à sec sous pres-
sion réduite (20 mm de mercure ; 217 kPa) à 45C. ~'huile rési-
duelle obtenue est reprise par 1,5 litre d'acétate d'~thyle, refroi-
di vers 5C, lavé successlvement par 400 om3 d'une solution saturéQ
: 15 et glacée-d'acide citrique, 4 fois par 1,2 litre au total d'une
solution saturée de bicarbonate de sodium et 300 cm3 d'une solu-
tion saturée de chlorure de sodium Après séchage sur sulfate de
sodium, la phase organique est concentrée à sec sous pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 45C. On ob-tient 79 g
d'huile jaune pâle qui est chromatographiee sur une colonne de
8 cm de diamètre contenant 2,4 kg de silioe neutre (0,063-0,2 mm).
On élue successivement par 3 litres d'un mélange de cyclohexane - -
acétate d'éthyle (85-15 en volumes), 2,4 litres d'un mélange de
cyclohexane - acétate d~éthyle (80-20 en volumes), 15,6 litres
d'un mélange de cyclohexane - acétate d'éthyle (75-25 en volume~),
2,4 litres d'un mélange de cyclohexane - acétate d'éthyle (70-30
en volumes), 2,4 litres d'un mélange de cyclohexane - acétate
d'éthyle (65-35 en volumes), 3 litres d'un mélange de cyclohexane -
acétate d'éthyle (60-40 en volumes), 4,2 litres d'un mélange de
cyclohexane - acétate d'éthyle (50-50 en volumes) et 4,2 litres
d'un mélange de oyolohexane - acétate d'éthyle (40-60 en volume~)
en recueillant des fractions de 600 cm3. Les fractlons 34 à 60
réunies 30nt concentrées à sec sous pression réduite (20 mm demer-
cure;2,7 ~pa)~ 40~ Onobtient ainsi 55 g de ~ -lauroyl L alanyl)-D
gluta~ate de ~-b.butyle et de ~-benzyle sous forme d'huile ~aune.
~f = 0,55 ~ilicagel ; cyclohexane acét~te d'éthyle
(1-1 en volumes)]
,
- . ~
.
~ e D-glutamate de ~-t.butyle et de y-benzyle peut ê~re
prép~é de la façon suivante : ~
On ajoute en 15 minu-tes, 49 cm3 d'acide sulfurique
(d = 1,83) à une suspension, refroidie vers 13C9 de 64 g de
D glutamate de y-benzyle dans 500 cm3 de dioxanne. A la solution
ainsi obtenue, maintenue vers 13C, on fait pa~sex un courant
d'isobutène pendant 40 minutes ; e~suite 1e milieu réactionnel est
conservé à 20C pendant 16 heures, puis de nouveau, on y fait
passer un courant d'isobutène pendant 4 heures et on lais3e au
repos pendant 20 heures. On ajoute alor9,en 10 minutes~ le mélange
réactionnel à un mélange de 2,6 litres de soude ~ et de 4,15 litres-
d'éther, refroidi vers 0C. On sépare la phase or~anique, on
extrait la phase aqueuse avec 1 litre d'éther. Les phases or~a-
niques ainsi obtenues sont réunies, séchées sur sulfate de sQdlum
et concentrées sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)
à 32C. On obtient ainsi 80 g de D glutamate de ~-t.butyle et de
y-benzyle, contenant environ 20 % ~e diox~nne et 10 ~ d1alcool
benzylique. ~ne concentration sous pression plus faible ou à
température plu9 élevée diminue le rendement. Ce produit ainsi
obtenu doit etre utilisé dans les quel~ues jours qui suivent
l'isolement.
Le ~lauroyl L alanine peut être préparé selon la
méthode de E. J~GE~M~ et coll., J. Amer, Chem. Soc. 78, 172
- (1956).
- 25 ~e D glutamate de y-benzyle peut être préparé selon
la méthoae de P. LEF~ANCIER et E. B~ICAS, Bull. Soc. Chim. Fran¢e,
, 3668. 6
h'acide ~ -benzyloxycarbonyl diamino-2(~), 6(D,L) thia-4
pimélamique peut être préparé de la façon suivante :
On ajoute 24~3 g de potasse en pastilles dissous dans
280 cm3 d'~thanol anhydre dans une so~ution de 25,35 g de
L cystéine, chlorhydrate, hydrate, dans 280 cm3 de diméthyl-
for~amide. A la bouillie ainsi obtenue, on ajoute 56,65 g da
~-~enzyloxycarbonyl O-p.toluènesulfonyl D9L s~rinamide dissous dans
280 cm3 d'éthanol anhydre. On agite le mélangeréactionnel pendant
.,
41 ~2~iO3~38
5 heures à 20C, ensuite on filtre l'inseluble, on le lave 2 ~oi3
par 60 cm3 au total d'éthanol. Les filtrats réunis sont concentré3
à sec SOU9 pression réduite (20 mm de mercuré ; 2,7 kPa) à 600C. Le
- ré3idu semi-cristallisé ainsi obtenu est repris par 300 cm3 d'eau
tiadie à 50C, l'in~oluble est ~éparé par filtration, le filtrat
est refroidi à 0C, acidifié à pH 6-7 par addition de 5,5 cm3
d'acide acétique anhydre et conservé à 0C pendant 20 heures
. L'insoluble est séparé par filtration, lavé successivement
2 fois par 200 cm3 au total d'eau, 2 fois par 120 cm3 au total
d'éthanol et 100 cm3 dioxyde d'isopropyle, séché SOU3 pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C~ On obtient 27 g
d'acide ~6-benzyloxycarbonyl diamino-2~L), 6(D,L) thia-4 pime-
lamique fondant avec décomposition vers 185C~
Rf = 0,50 Csilicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)~
-Spectrométrie de masse : M = 341 (théorie ~ 341)
6 = ~60 (acide chlorhydrique ~ ; c = 1)
~ près hyarolyse dans un mélange acide chlorhydrique
concentré - acide acétique a~hydre (1-1 en volumes) pendant 5 heures
à 960C, l'analyse sur autoanalyseur ~IOTRO~IE*révèle la présence
des acides aminés suivants :
Lan 0,45 (théorie = 0,5)
- méso Lan 0,55 (thaorie = 0,5)
Le ~-benzyloxyoarbonyl O-p.toluènesulfonyl D,L sérinamide
peut être préparé selon la méthode de L. ~OITO~ et ooll., J.
Chem. Soc. p. 824 (t964).
EXEMPL3 ~ -
On ajoute 0,53 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
olution, maintenue à -5C, de 720 mg de ~-t.but~loxycarbonyl-
glycine dans un mélauge de 6Q om3 de tétrahydrofura~ne et de 0,57 cm3de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à ~5C,
puis on ajoute une solution refroidie à O~C de 2,55 g d'aoide
-C~ -lauroyl L alanyl)-y-D 6lu-tamyl~ diamino-2(L),6(D,L) thia~4
pimélamique dans 50 om3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité
pendant quelques minute3 à 0C, pUi8 pendant 18 heure3 à 15C
environ. On évapore le tétrahydrofuranne par concentration ~ou~ -
.
~`?~ * Marque de commerce
`
42
pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 45C ; le concen-
trat est acidifié à p~ 2 par addition de 1 cm3 d'acide acétique,
extxait 3 fois par 90 cm3 au total d'acétate d'éthyIe. ~es phases
organiques réunies sont lavées par 10 cm3 d'eau, séchées 9Ur
sulfate de ~odium et concentrées à sec 90US pres~ion réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) ~ 45C. Le résidu obtenu est trituré
dans 50 cm3 a~ éther et séché ~OU9 pression réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On ob-tient ainsi 2,72 g de poudre
- orangée que l'on chromato6raphie sur 115 g de gel de silioe neutre (o,04-0,063 mm) contenusdans une colonne de 2,5 cm de diamatre.
Pour cela, on dissout l~ 2,72 g de poudre dans 40 cm3 d'acide
acétique et, à ~a solution obtenue, on ajoute 12 g de gel de sllice
neutre (o,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 55C et le ré~idu ainsi
obtenu egt chargé sur la colonne de ~ilice. On élue successivement
avec 1,68 litre d'un m~lange acétate d'éthyle - acide acétique
(9-1 en volumes) et 1,5 litxe d'un mélange acétate d'éthyle -
acide acétique (8-2 en volumes) en recueillant des fractiona de
60 cm3. Les fractions 14 ~ 53 sont réunies, concentrées à sec
sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. ~e
résidu obtenu est trituré dans 50 cm~ d'éther, séparé par filtra-
tion et séché sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)
à 20C. On obtient ainsi 1,8 g d'acide ~2-[~-(N-lauroyl L alanyl)-
y-D glutamyl] ~ -t.butyloxycarbonylglycyl diamino-2(L), 6(D,~)
thia-4 pimélamique.
~f = 0,43 ~silicagel ; n.butanol ~ pyridine - acide
acétique - eau (50-20~6-24 en volumes)]
- On dissout 1~8 g d'acide ~2-~ -lauroyl L alanyl)-
y-D glutamyl] ~6-t.butylox~carbonylglycyl diamino-2(~), 6(D,L)
thia-4 pimélamique dans 36 cm3 d'une solution anhydre d'acide
chlorhydrique 1,7 ~ dans l'acide acétique. On agite le mélange
réactionnel pendant 2 heures, puis on le débarras~e d'un très
léger insoluble par filtration ; dan~ le fil-trat, on ajoute
15 cm3 d'éther et on agite pendant 1/4 d'heure. ~e précipité
apparu est séparé par filtration, lavé 3 fois par 60 cm3 au
5: ~ , .f4~
43
total d'éther, séché sous pression réduite (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) à 20C. On obti0nt ainsi 1,44 g de poùdre que l'on dissout
dans 25 cm3 d'eau. On ajoute successivement 0,5 cm3 de triéthyl-
amine et 0,5 cm3 d'acide acétique. Après 1/4 d'heure de repos dans
un bain à 0C, on sépare le précipité formé par filtration, le
lave 2 fois par 10 cm3 au total d'eaN et le ~èche sou~ pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi
1,18 g de poudre que l'on chromatographie sur 42 g de gel de
silice neutre (0,04-0,063 mm) contenu~dan~ une colonne de 2,5 cm
de diamètre. Pour cela, on dissout les 1,18 g de poudre dans
50 cm3 de méthanol contenant~0,25 cm3 d'ammoniaque concentrée et
la solution obtenue, on ajoute 5 g de gel de silice neutre ~
(o,o4-o,o63 mm)~ On évapore à sec le mélange sous pression réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C et le résidu ainsi-obtenu est
chargé sur la colonne de silice. On élue avec du méthanol en recue~l-
la~t des fraction~ de 30 cm3. Le~ fractions 14 ~ 26 sont réunie~,
concentrées à sec 90U9 pression réduite (20 mm de mercurs; 2,7 kPa)
à 50C. On obtient ainsi 630 mg d'acide ~2-[~ lauroyl L alanyl)-
y-D glutamyl] ~ -glycyl diamino-2(L), 6(D,L) thia-4 pimélamique.
Rf = 0,30 Csilicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)~
~nalyse : Calc ~ C 52,00 H 7,79 ~ 12,99 S 4,96
~r. 49,1 7,7 12,0 4,6
Aprè~ hydrolyse dans un mélange acide chlorhydrique
concentré - acide acétique anhydre (1-1 en volumes) pendant
5 heures à 960C, l'analyse sur autoanalyseur ~IO~O~IE révèle la
présence des acides aminés sui~ants :
Glu - 0,92 (théorie = 1)
Gly = 1,03 (théorie = 1)
~an = 0,55 (théorie = 0~5)
méso Lan = 0,45 (théorie = 0,5)
EXEMPhE 4 -
On ajoute 0,3 cm3 de chloroformiate d'i~obutyle ~ une
solution, maintenue à -5C, de 1,05 g de ~ -lauroyl h al~nyl)-
~-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 45 cm3 de tétrahydro-
furanne et de 0,32 cm3 de triethylamine, Le mélange est agité
44
pendant 20 minutes à ~5C, puis on ajoute une solution re~roidie à
0C de 1 g de chlorhydrate de ~ -benzyloxycarbonyl diamino-2 (mé-
lange D et L), 6(L) thia-4 pim~lamoyl-glyoine dans un mélange de
4,6 cm3 de soude 1 ~, 23 cm3 d'eau et 17 cm3 de tétrah~Ydrofuranne.
Le mélange réactionnel est agité pendant quelques minutes ~ 0C,
puis pendant 20 heures ~ 20C environ, ensuite on acidifie à p~ 3
par addition de 2,5 cm3 d'acide chlorhydrique 1 ~. On évapore le
tétrahydrofuranne par concentration 90u9 pression réduite (20 mm
de mercure) à 50C. Le concentrat est dilué par addition de 25 cm3
d'eau ; le précipité apparu est séparé--par filtration, lav~ 3 fois
par 15 cm3 au total d'eau distillée et séché sous presslon réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 1,82 g de
poudre que l'on chromatographie sur 91 g de gel de silice ~0,04-
o,o63 mm) contenus dans une colonne de 2,5 cm de diamètre. On élue
~uccessivement par 200 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - acide
aoétique (95-5 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle -
acide acétique (9-1 en volumes), 240 cm3 d'un mélange acétate
d'éthyle - acide acétique (8-2 en volumes) et 200 cm3 d'acétate
d'éthyle - acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des
20 fractions de 40 cm3. he~ fractions 16 à 21 sont réunies, concen-
trées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 20C. On
obtient ainsi 510 mg de ~2-~01-t.butyl ~ -lauroyl L alanyl)-y-D
glutamyl] ~6-benzyloxycarbonyl diamino-2 (mélange D et L), 6(~)
thia-4 pimélamoyl-glycine.
Rf - 0,76 [silicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)]
On dissout 470 mg de ~2-[01-t.butyl ~ lauroyl h ala-
nyl)-y-D glutamyl] ~5-benzyloxycarbonyl diamino-2 (mélange D e-t L),
6~L) thia-4pimélamoykglycine dans 5 cm3 d'acide bromhydrique en
3o solution ~ 33 % dans l'acide acétique. On agite lemélange réaction-
nel pendant 40 minutes à 20C, le purge pendant tO minute~ par un
barbotage d'azote et le concentre à sec sou3 pres3ion réduite
~20 mm de mercure ; 2,7 kPa pUi9 0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa)
50C. ~e résidu obtenu est trituré dans 20 cm3 d'éther, séparé
35 par filtration, lavé par 5 cm3 d'éther et séché sous pres~ion
~ réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi
530 mg de poudre orangée que l'on di~sout dans 20 cm3 d'eau.
.
-
g~2~39
- ~ cette solution, on ajoute 0,2 cm3 de triéthylamine puis 072 cm3
d'acide acétique. On refroldit le milieu réactionnel à 0C pendan-t
15 minutes. Le précipité aln~i formé est séparé par ~iltration,
lavé 5 fois par 10 cm3 au total d'eau et séché sous pression
réduite (0,3 mm de mercure ;-0,04 kXa) à 20C. On obtient 360 mg
de poudre que l'on chromatographie sur 36 g de gel de silice
(o,o4-0,063 ~m) contenus dans une colonne de 2,5 cm de diamètre.
On élue avec du méthanol en recueillant des fractions de 5 cm3.
Les ractions 5 à 16 sont réunies, concentrees à sec sous pressio~
r~duite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 50C. On obtient ainsi
160 mg de ~2-[N~ lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] diamino-2
(mélange D et ~) 9 6(~) thia-4 pimélamoyl-glycine.
Rf = o,26 ~silicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)]
~nalyse : Calc. ~ C 52,00 ~ 7,79 ~ 12,99 S 4,96
Tr. 47,1 7,3 11,4 4,6
~prè~ hydrolyse dans un mélange acide chlorhydrique
concentr~ - acide acétlque ~nhydre ( 1-1 en volumes) pendant
5 heuxes ~ 960C, l'analyse sur autQanalyseur ~IOT~O~IE révèle
la présence des acidës aminés suivants :
Glu = 1,00 (théorie - 1)
Gly = 1,02 (théorie = 1)
Lan = 0~601(tEéorie = 1)
méso ~an = 0,37~
~ne fraction supplémentaire de 90 mg de ~2-[~ -lauroyl
L alanyl)-y-D glutamylJ diamino-2(mélange D et L), 6 (~)thia-4
pimélamoyl-glycine peut être obtenue de la façon suivante :
les fractions 3 et 4 sont réunies, concentrées ~ sec sous pres-
sion réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C et chromato-
graphiée~ sur 22 g de gel de silice (o,04-0,063 mm) contenu9 dans
une colonne de 2,5 cm de diamètre. On élue avec du méthanol en
recueillant des fractions de 5 cm3. On réunit les fractions 7 à 18,
les concentxe à sec sous pression r~duite (20 mm de mercure ;
2,7 XPa) à 50C et les sèche sous pression réduite (0,3 mm de
mercure ; 0,04 kPa) à 50C.
~. . ~,.~"Y ~;
~ 2~3~8
6 -
Le N -benzyloxycarbonyl diamino~2 (mélange D et L),
6(L) thia-4 pimélamoyl-glycine peut être préparé de la façon
suivante :
On dissout 2 g de ~ -t.butyloxycarbonyl ~6-benzyloxy-
carbonyl diamino-2 (mélange D et L), 6(L) thia-4 pimélamoyl-~lyci-
nate de t.butyle dans 20 cm3 d'une solution anhydre d'acide
chlorhydrique 1,65~ dans 1'acide acétique. On agite pendant
2 heures à 20C. ~nsuite, on ajoute au mel~nge réac-tionnel 50 cm3
d'éther. On obtient un précipité blanc que l'on sépare par fil-
10 tratlon, lave 2 fois par 20 cm3 au total d'éther et sèche 80U9
pression réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 20C. On obtient
ain~i 1,13 g de chlorhydrate de ~ -benzyloxycarbonyl diamino-2
(mélange D et L), 6(L) thia-4 pimélamoyl-glycine.
Rf = 0,38 [silicagel ; n.b~tanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)]
Après hydrolyse dans un mélange acide chlorhydrique
eoncentré - acide acétique anhydre (1-1 en volumes) pendant
5 heures à 96C, l'analyse sur au-toanalyseur BIOTRO~IE révèle la
pré~ence des acide~ aminés suivants :
Lan - -591(théorie = 1)
mé~o Lan = 0,34J
Gly = 1,00 (théorie = 1)
Le ~2-t.butyloxycarbonyl ~ -benzyloxycarbonyl diamino-2
(mélange D et L), 6(~) thia-4 pimélamoyl-glycinate de t.buty}e
- 25 peut être préparé de la façon suivante :
On ajoute 253 mg de potasse en pastille~ dissous dans
9 cm3 d'éthanol anhydre dans une solution de 1,14 g de ~-benzyl-
oxycarbonyl L cystéinamide dans 9 cm3 de diméthylformamide. Cette
solution ainsi obtenue est ajoutée dans une suspension de 1,9
de ~-t.butyloxycarbonyl O-p.toluènesUlfonyl L séryl-glycinate de
t.butyle dans 9 cm3 d'éthanol. On agite lemélange réactio~nel
pendant 4 heures à 20C. On obtient ainsi une solution jaune pâle
que l'on concentre à sec ~O,U9 pre~sion réduite (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) à 600C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 d'eau,
conservé à 5C pendant 48 heures, séparé par filtration, lavé par
o~
~7
10 cm3 d'eau et séché sous pression réduite (0,~ mm de mercure;
0,04 kPa) à 20C. On obtient ainsi 2,1 g de ~ -t.butyloxycarbonyl
-benzyloxycarbonyl diamino-2 (mélange D et L), 6(~ thia-4
pimélamoyl-glycinate de t.butyle 90U9 forme de poudre blanche.
Rf = 0,72 Csilicagel; acétate d'éthyle].
Spectrométrie de masse = M = 554 (théorie = 554)
Après hydrolyse dans un mélange acide ohlorhydrique
concentré - acide acétique anhydre (1-1 en volumeis) pendant
5 heures à 96C, l'analyse sur autoanalyseur BIOq!ROMIK révèle la
présence des acides aminés suivan-ts:
Lan a 0,59
méso Lan = 0,34 (théorie = 1)
Glv = 1,00 (théorie = 1)
Le ~-t.butyloxycarbonyl O-p.toluènesulfonyl L s~ryl-
t5 glycinate de t.butyle peut ètra préparé de la façon ~uivante
~n 3 minutes, on aJoute par petites portions 3,09 g
de chlorure de p.toluènesulîonyle à une ~olution refroidie à -60C
de 2,58 g de ~-t.butyloxycarbonyl L ~éryl-glycinate de t.butyle
dans 9 cm3 de pyridine. On maintient le mélange reactionnel pen-
dant 2 heures à -6C, ensuite on le verse sur 60 g de glace
- pilée et conser~re le mélange pendant 20 heures à 4C. Le précipité
ainsi obtenu est ~éparé par filtration, lavé 5 fois par lOO cm3
au to-tal d'eau, séché sous pre~sion ré~uite (20 mm de mercure)
20C et recristallisé dans 100 cm3 d'éthanol~ On obtient ain~i
2,54 g de ~-t.butyloxycarbonyl O-p.toluène~ulfonyl L séryl-
glycinate de t.butyle fondant à laO-182C.
Rf = 0,91 C~ilicagel ; acétate d'éthyle]
Le ~-t.butyloxycarbonyl ~ séryl-glyclnate de t.butyle
peut être préparé de la façon suivante:
` Dans une solution refroidie ~ 5C, de 6,16 g de ~-t.butyl~
oxycarbonyl L sérine et de 3,93 g de glycinate de t.butyle dans
100 cm3 de chlorure de méthylène, on a~oute 6,81 g de dicyclo-
hexglcarbodiimide. On agite lemélange réactionnel pendant
30 minutes à 5C, puis pendant 18 heures à 20C environ. ~e
précipité de dicyclohexylurée formé est séparé par filtration,
.
~ 2 ~
48
lavé 2 fois par 40 om3 au total de ohlorure de méthylène. Les
phases organiques réunies sont lavées successivement 3 fois par
90 cm3 au total d'une 301lltion saturée de bicarbonate de sodium,
2 fois par 60 cm3 au total d'eau, séchées sur sulfate de sodium
et concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 10,22 g d'huile que l'on chro-
matographie sur 100 g de gel de silice neutre (o,o4-0,063 mm)
contenus dans une colonne de 3,4 cm de diamètre. On élue succes-
sivement avec 500 cm3 d'un mélange cyclohexane - acétate d'ethyle
(1-1 en volumes) et 600 cm3 dlun mélan~e cyclohexane - acétate
d'éthyle (1-3 en volumes) en recueillant des fractions de 100 cm3.
Les fractions 5 à 8 sont réunies, concentrées à sec sous pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On obtient ainsi
2,64 g de N-t.butyloxycarbonyl L séryl-glycinate de t.butyle SOU9
forme d'huile cristallisant lentement.
Rf = 0,68 [silicagel ; acétate d'éthyle~
EXEMPL~ 5 -
On ajoute 1,3 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution, maintenue à -10C, de 4,56 g de ~ lauroyl L alanyl)-
~-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 230 cm3 de tétra-
hydrofuranne et de 1,4 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité
pendant 25 minutes à -10C, pUi3 on ajoute une solution refroidie ~
0C de 3,7a g de chlorhydrate d'acide ~ -benzyloxycarbonyl diamino-2
(L), 6 (D,L) thia-4 pimélamique dans 100 cm3 de soude 0,1 N.
Le mélange réactionnel est a~it~ pendant 5 minutes à
0C, pui~ pendant 18 heures à 20C environ. On évapore le tétra-
hydrofuranne par concentration sous pression réduite (20 m~ de
mercure ; 2,7 kPa) ~ 50C ; le concentrat est acidifié ~ p~ 2 par
addition d'environ 15 cm3 d'acide chlorhydrique 1 ~. On sépare p~.r
décantation l'hulle formée dans lemélange réactionnel et la triture
d~ns 200 cm3 d'éther. On obtient un solide amorphe que 1'on sépare
par filt!ration, lave 3 fols avec 600 cm3 au total d'~ther. On
agite trè~ fortement le produit obtenu dans 100 cm3 d'acétate
d'éthyle bouillant, puis après refroidissement à 20C~ on ajoute
49 1;~5039~ .
100 cm3 d'éther, refroidit la 3uspension à 0C pendant 1/4
d'heure, ~épare l'in~oluble par filtration. Après lavage avec
100 cm3 d'éther, séchage ~ous pression réduite (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) ~ 20C, on obtient 5,15 g d'acide ~2-benzyloxycarbonyl
~6-[01-t.butyl ~-lauroyl L alanyl)-y-D glutam~l] diamino-2 (~),
6(D,L) thia-4 pimélamique.
~f = o,69 ~silicagel ; acétate d'éthyle - acide acé-
tique (3-1 en volumes)~
Spectrométrie de masse = M = 779 (théorie = 779
On di~sout 5 g d'acide ~2-ben~ylox~carbon~1 ~6-[0-1-t.
butyl ~ lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl~ diamino-2(L), 6(D,L)
thia-4 pimélamique dans 30 cm3 d'acide bromhydrique en solu-tion
à 28 ~ dans l'acide acétique. On agite le mélangeréaCtionnel
pendant 3 heure~, le filtre pour le débarrasser d'un l~ger inso-
luble et le concentre à sec ~OUB pression réduite (20 mm de
meroure ; 2,7 kPa, pUi3 0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 50C.
Le résidu ainsi obtenu est trituré dans 400 cm3 d'éther, séparé
par filtration et repris dans 1,5 iitre d'eau SOU8 forte agitation;
il ~e solubilise in~tantanément dan~ l'eau, pUiB au bout de
quelques minutes, il précipite. On le sépare par filtration, le
lave successivement avec 50 cm3 d'eau, 50 cm3 d'éther, 50 cm3
d'acétate d'éthyle et 50 cm3 d'éther et le sèche 90u9 pres~ion
réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 50C. On obtient ain~i
3,2 g dlacide ~ -[~ lauroyl L alanyl) y-D glutamyl~ diamino-2(L),
25 6(D,D) thia-4 piméiamique fondant avec décomposition vers 176C.
~f - 0,32 ~ilicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)]
~nalyse : Calc. % C 52,95 ~ ~,03 ~ 11,87 S 5,44
Tr. 49,7 797 11,0 5,1
CendreQ sulfuriques : 3,9 %
Après hydrolyse dans un ~élange acide chlorhydrique
concentré - acide aoétique anhydre (1-1 en volumes) pendant
5 heures à 960C, l'analyse ~ur autbanalyseur BIO~RO~IK révèle
la pré3ence des acides aminés suivants :
Lan = 0,55 tthéorie = 0,5)
~éso Lan = 0,50 (théorie = 0,5)
Glu - 1,00 (théorie = 1
Le chlorh~drate de 1'acide ~ -benzyloxycarbonyl diamino-2
(L?, 6(D,L) thia-4 pimélamique peut être préparé de la ~açon
suivante :
A une solution de 37 g d'acide N2-benzyloxycarbonyl ~6_
t.butyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D,L) thia-4 pimélamique dans
r 100 cm3 d'acide acétique anhydre, on a~oute 500 cm3 d'une solution
anhydre d'acide chlorhydrique 1,65 ~ dans l'acide acétique. On
15~ a~ite pendant 2 heures à une température voisine de 20C.
Ensuite, on concentre à sec lemélange réactionnel sous pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa, puis 0,3 mm de mercure ;
0,04 kPa) à 50C. Le résidu obtenu est trituré 4 foi~ dans
2 litres au total d'éther, séparé par filtration, lavé 3 fois par
20 600 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm
de mercure ; 0,04 kPa) à 20C. On obtient ainsi 19,1 g de chlor-
hydrate de l'acide ~2-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D,L~
thia-4 pimélamique.
Rf = 0,48 [silicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)~
~]D1 _ -22,8 (acide chlorhydrique ~ ; c ~ 1)
Après hydrolyse dan~ un mélange acide chlor~ydrique
concentré - acide acétique anhydre (1-1 en vol-umes) pendant 5 heures
à 960C, l'analyse sur autoa~alyseur BIO~O~IE révèle la pré~ence
des acides aminés suivants :
Lan = 0,5 (théorie - 0,5)
mé~o Lan = 0,5 (théorie = 0,5)
L'acide ~2-benzylo~ycarbonyl ~ -t.butyloxycarbonyl
diamino-2(L), 6(D,L) thia-4 pimélamique peut être préparé de la
façon suivante :
.
~ ~ 5 ~ ~ ~ 8
51
On ajou-te 16,8 g de pota~e en pastilles diasous dans
190 cm3 d'éthanol anhydr~ dans une solution de 25,5 g de ~-benzyl-
oxycarbonyl L cystéine dan3 190 cm3 de diméthylformamide. A la
solution ainsi obtenue~ on a joute 35,8 g de ~-t.butyloxycarbonyl
O-p,toluènesulfonyI DL sérinamide dissous dans 190 cm3 de
diméthylformamide. On agite le mélangeréactionnel pendant
18 heures à 20C ; ensuite on le conoentre à sec sous pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa, puis 0,3 mm de mercure ;
- 0,04 kPa) à 60C, Le résidu ainsi obtenu est repris par 250 cm3
d'eau, extrait ~ fois par 600 cm3 au total d'acétate d'éthylè,
aoidifié à p~ 3 par environ 40 g d'acide citrique. ha phase
aqueuse-ainsi obtenue est extraite 3 fois par 600 cm3 au total
d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées par
100 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur
gulfate de sodium et concentrées à sec sou~ pression ~éduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On obtient ainsi 37 g
d'acide ~2-benzylox~carbonyl ~6-t.butyloxycarbonyl diamino-2(L),
6(D,L) thia-4 pimélamique sous ~orme d'huile orangée.
Rf a 0,49 ~silicagel ; acétate d'éthyle - acide acé-
tique (9-1 en volumes)]
~f = 0,52 [silicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique -eau (50-20-6-24 en volumes)
Le N-benzyloxycarbonyl L cystéine peut être préparé
selon la méthode de W. ~OYE et coll., J. ~m. Pharm. Ass. 46,
273 (1957).
Le ~-t.butyloxycarbonyl O-p.toluènesulfonyl DL séri-
namide peut être préparé de la façon sulvante :
En 20 minutes, on ajoute par petites portions 67,5 g
de chlorure de p.toluènesulfonyle à une solution re~roidie entre
-20C et -10C de 67 g ~-t.butyloxycarbonyl D~ sérinamide dan~
280 cm3 de pyridine. On maintient le mélange réactionnel pendant
1 heure 1/2 a une température comprise entre -10C et -5C, pui~
on l'abandonne à 20C pendant 2 heure3 1j2. On le ver~e ensuite
~ur 550 g d'un mélange eau-glacel ~e précipité blanc ainsi obtenu
~2~3~
52
est séparé par filtration, lavé 4 fois par 1,2 litre au total
d'eau, séché à l'air, lavé 2 fois par 400 cm3 au total d'éther
et séché sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)
à 50C. On obtient ainsi 73,3 g de ~-t.butyloxycarbonyl O~p.toluène-
5 sulfonyl D~ sérinamide fondant à 161C.
Rf = 0,82 [silicagel ; acétate d'é-thyle - acide acétique
(9-1 en volumes)]
Le ~-t.butylox~carbonyl DL sérinamide peut être préparé
de la façon ~uivante :
Dans une solution de 217 g de N-t.butyloxycarbonyl
DL sérinate de méthyle dan~ 2,17 litres de méthanol, refroidie à
0C, on fait passer un courant d'ammoniac pendant 7 heures ;
on laissQ ensuite le mélangeréactionnel au repos pendant 15 heures
~ 20C, puis de nouveau après avoir refroidi ver~ 0C, on fait
passer un courant d'ammoniac pendant 6 heures et on laisse au
repos à 20C pendant 18 heures. On concentre le mélange réac-tion-
nel sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C.
Le résidu ainsi obtenu est repris par 1,5 litre d'é-ther. Les
cristaux obtenus sont séparés par filtration, lavés 3 fois par
1,5 litre au total d'éther et séchés à l'air. On obtient ainsi
158 g de 19-t.butyloxycarbonyl DL sérinamide fondant à 115-l16C.
Le ~-t.butyloxyca~bonyl Dh sérinate de méthyle peut
être préparé selon la méthode de N. ~OGGS et coll., J. Org. Chem.,
44, 2262 (1979),
2 5 1~ LE 6
On a~oute 0,28 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solutio~, maintenue à -10C, de 382 mg de ~-t.butyloxycarbonyl
glycine dan~ un mélange de 32 cm3 de tétr~hydrofuranne et de
0,3 cm3 de triéthylamine. L~ mélange est agité pendant 20 minutes
~ -10C, puis on ajoute une solution refroidie à 0C de 1928
d'acide ~6-~ lauroyl ~ alanyl)-y-D glutam~l] dlamino-2(~),
6(D,L) thi~ 4 pim~lamique dan~ un m~lange de 4,3~ cm3 de ~oude
1 ~ et 32 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant
5 minutes à 0C, puis pendant 70 heure~ à 20C environ. On évapore
~2~i~3~3
53
le tétrahydrofuranne par concentration ~OU8 pression réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C, le concentrat est acidifié
à p~ 2 par addition d'environ 5 cm3 d'acide chorhydrique 1 ~,
extrait 3 foi3 par 90 cm3 au total d'acétate d'éthyle. hes
phases organiques xéunies sont séchées sur sulfate de sodium et
concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) à 50C.~ On obtient ainsi 1,7 g de poudre blanche que
l'on chromatographie sur 50 g de ge) de silice neutre (0,04-
0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,4 cm de diamètre. On
élue-succ2ssivement avec 120 cm3 d'acétate d'éthyle, 5GO cm3
d'un mélange acétate d'ethyle - acide acétique ~95-5 en volumes),
1,12 litre d'un mélange acétate d'éthyle acide acétique (90-10
en volumes) et 480 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide
acétique (80-20 en volumes) en recueillant des frac-tions de :
40 cm3. hes fractions 25 à 57 ~ont réunies, concentrées à sec
80U9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50Co he
résidu obtenu est trituré 3 fois dans 90 cm3 au total d'éther,
séché 90U9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C.
On obtient 490 mg d'acide ~ -(t.butyloxycarbonylglycyl) ~6~
(~-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] diamino-2(~), 6(D,~) thia-4
pimélamique.
Rf = 0,48 [silicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique eau (50-20-6~24 en volume~)]
Rf - 0,24 ~silicagel ; acétate d'éthyle - acide
acétique (3-1 en volume~)]
On dissout 490 mg d'acide N2-(t.butyloxyc~rbonylglyoyl)
-C~ -lauroyl h alanyl)-y-D glutamyl~ diamino-2(~), 6(h,h)
thia-4 pimélamique dans 10 cm3 d'une solution anhydre d'acide
chlorhydrique 1,65 ~ dans l'acidè acétique~ On agite pendant
30 2 heures 1/4 à une température voisine de 20C, Ensuite, le
mélangeréaction~el est filtré pour le débarrasser d'un léger
insoluble et est concentré à sec sous pre~sion réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 50C. ~e résidu ainsi obtenu est trituré
... . _ .. .. .. .. . ..
54 ~ 3
dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration, lavé 3 ~oi~
par 150 cm3 au total d'éther. On obtient ain3i 0,42 ~ ~e poudre
blanche que l'on chromato~raphie sur 24 g de gel de silice neutre
(o, 04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 1,6 cm de diamètre.
On élue avec de l'acide aeétique en recueillant des fractions de
10 cm3. Les fractions 24 à 45 sont réunies, concentrées à sec
80U9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 4soc. Le
résidu obtenu est trituré dans 50 cm3 dlacétate d'éthyle9 séparé
par filtration, lavé 3 fois par 90 cm3 au total dléther et séehé
sous pression réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 50C. On obtient
ainsi 200 mg de chlo~ly~rate ~'acide N2-gl~cyl N6-~N-~N-lauroyl L alanyl-
- y-D gluta~nyl) diamino-2~L), 5(D,L) thia-4 pi~lamique.
R~ = O, 29 ~ silicagel ; n.butanol - pyridine - aeide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)J
15 Analyse : Cale. % C 49,22 ~ 7,62 Cl 5,19 ~ 12,30 S 4,6g
~r. 45,6 7~5 ~ 4,6 11,5 4,6
Speetrométrie de masse : M = 646 (théorie pour la
base = 646),
~près hydrolyse dans un mélange aeide chlorhydrique
coneentré - aeide aeétique anhydre (1-1 en volumes) pendant
5 heures à 960C, l'analyse sur autoanalyseur ~IO~O~IE révèle la
présence des acides aminés suivants :
Lan s 0,59 (théorie = 0,5)
- méso Lan = 0,43 (théorie = 0,5)
Glu = Oj97 (théorie = 1
Gly = 1,00 (théorie - 1
E~EMPLE 7 -
On ajoute 0, 65 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution, maintenue à -10C, de 2,28 g de ~ lauroyl L ala-
ny ~ -D glutamate de-t.butyle dans un mélange de 125 em3 de
tétrahydrofuranne et de 0,7 cm3 de triéthylamine. ~e mélange est
agité pendant 40 minutes à -10C, puis on ajoute une solution
refrdidie à 0C de 1,9 g de chlorhydrate d~ ~2-ben~yloxycarbonyl
L lanthioninediamide dans un mélange de 5 cm3 de soude 1 ~ et
50 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 minutes
~ 2
vers OJC, puis pendant 70 heures à 20C environ. Le précipité
apparu dans lem-élange réactionnel est séparé par filtration,
lavé successivement par 25 cm3 d'eau, 25 om3 d'é-thanol et 50 cm3
d'oxyde d'isopropyle et séché sous pression rédui-te (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 2,9 g de ~ -~0 -t,
butyl ~-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] ~ -benzyloxycarbonyl
L lanthionined~amide.
Rf = 0,41 ~silicagel ; acétate d'éthyle - acide acétique
(9-1 en volumes)]
tO On di~sout 4,4 g de ~ -~0 -t.butyl N-(~-lauroyl L ala-
nyl)-y-D glutamyl] ~ -benzyloxycarbonyl L lanthioninediamide dans
44 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 35 ~ dans l'acide acé-
tique. On agite lemélan~a réactionnel pendant 4 heures à 20C,
ensuite on le purge pendant 1/2 heuxe avec de l'azote et on le
concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)
à 50~C. Le résidu ain~i obtenu est trituré dan~ 50 cm3 d'oxyde
d'isopropyle et s~paré par filtration. Cette opération est répétée
2 fois, pUi9 on agite le solide dans 50 cm3 d'acétone pendant
une heure, le sépare par filtration, le lave 2 fois par 10 cm3
au total d'acétone et le sèche sous pression réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 3,24 g de bromhydrate
de ~2~ lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L lanthioninediamide
~ou~ forme de poudre crème.
Rf _ 0,47 ~silicagel ; n.butanol - pyridine - acids
acétique eau (50-20-6-24 en volumes)]
~naIy~e : Calc. % C 46,63 E 7,38 Br 11,93 ~ 12,55 S 4,79
Tr. ~ 42,0 7,0 10,1 11,1 4,4
~prè~ hydrolyse dans un mélan~e acide chlorhydrique
concentré - acide acétique anhydre (1~1 en ~olumes) pendant
5 h3ures à 96~C, l'analyse sur autoanalyseur ~IO~RONIE révèle
la présence des acid2s aminés suivan-ts :
Glu 0,87 (théorie = 1)
Lan = 0,88 (théorie - 1)
méso Lan = 0,12 (théorie = O)
Le chlorhydrate de ~ -benzyloxycarbonyl L lanthionine;~:
diamide peut ~tre préparé de la façon ~uivante :
:, :
.
56 ~2~
On dissou-t 9,56 g de ~ -benzyloxycarbonyl N -t.butyloxy-
carbonyl L lanthioninediamide aans 190 cm3 d'une ~olution anhydre
d'acide chlorhydrique 1,7 ~ dans l'acide acétique. On agite le
mélange roactionnel pendant l heure à 20C, le purge pendant
1/2 heure avec un courant d'a~ote et le verse sur 950 cm3
d'oxyde d'isopropyle. ~près 1 heure 1/2 d'agitation, on sépare le
précipit~ blanc apparu par filtration, le lave 2 fois par 200 cm3
au total d'oxyde d'i~opropyle et le sèche sous pression réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 7,95 g de
chlorhydrate de ~2-benzyloxycarbonyi ~ lanthioninediamide.
Le ~2-benzyloxycarbonyl ~ -t.butyloxycarbonyl L lanthio- -
ninediamide peut être préparé de la façon buivante :
On ajoute 14,4 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dan~
une solution, maintenue à -iOC, de 27,7 g de ~ -benzyloxyca~bonyl
N6-t.butyloxycarbonyl L lanthionine dans 480 cm3 de tétrahydro-
furanne et 13,5 cm3 de triéthylamine. La solution est a~itée
pend~nt 20 minutes à -10C, puis cn fait passer un courant d'ammo-
niac dans le mélange réactionnei pendant environ 3 heures vers
-10C. On concentre à sec le mélange réactionnel sous pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 45C. Le residu pâteux~est
repris par un mélange de 500 cm3 de solution aqueuse ~ 7 ~0 de
carbonate de potassium et 250 cm3 d'acétate d'éthyle. ~'in~oluble
est séparé par filtration, la phase organique est séparée par
décantation, la phase aqueuse e~t extraite par 50 cm3 d'acétate
d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées 3 fois par
150 cm3 au total d'eau, séchées sur sulfate de sodium et concentrées
à sec sous pressio~ réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kP~) ~ 45C.
Le résidu obtenu est agité pendant 1/2 heure dans 50 cm3 d'oxyda
d'isopropyle, séparé par filtration, lavé 2 fois par 50 cm3
au total d'oxyde d'isopropyle et séché sous pression rédui-te
(20 mm ~e mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 9,1 g de
N2-benzyloxycarbonyl ~ t.butylo~ycarbonyl L lanthioninediamide
fondant à 120C.
Rf = 0,61 ~silicagel ; acétate d'éthyle - acide acé-
tique (9-1 en volumes)}
2 ~ ~ ~ 9
57
~ e ~2-benzyloxycarbonyl ~ -t.butyloxyoarbonyl L lanthio
nine peut être préparé de la fa~con suivante :
A une suspension de 16,5 g de ~2-benzyloxycarbonyl
L lanthionine et de 10,2 g de carbonate de sodium dans un mélange
de 100 cm3 d'eau et 300 cm3 de dioxanne, on ajoute 11,6 g de
carbonate de di t.butyie en solution dans 100 cm3 de dioxanne,
Le mélange réactionnel est agité pendant 69 heures à une tempéra-
ture voisine de 20C. L'insolubla est séparé par filtration et le
dioxanne du filtrat est éliminé par concentration sou3 pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 45C. ~ la solution aqueuse
résiduelle, on ajoute 150 cm3 d'une solution saturée d'acide
oitri~ue et 150 cm3 d'acétate d'éthyle. La phase organique e3t
séparée par décantation pUi9 la phase aqueuse es-t extraite 2 fois
par 150 cm3 au total~d'acétate d'éthyle. Les phases organigues sont
. 15 réunies, lavées par 100 cm3 d'eau, séchées sur sulfate de sodium et
oonoentrées à sec 90U9 pression réduite (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) à 45C; On obtient ainsi 27,7 g de ~2-benzyloxycarbonyl
~ -t.butyloxycarbonyl L lanthionine sous forme d'huile ~aune~
EX~MPLE 8--
On ajoute 0,4 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
- ~olution maintenue à -8C, de 1,41 g de ~ lauroyl L alanyl)-
~-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 67 cm3 de tétrahydro-
furanne et de 0,43 cm3 de triéthylamine. Le mélange e~t agité
pendant 25 minutes à -7C, puis on ajoute une solution refroidie
à 0C de 1,1 g d'acide ~ -benzyloxycarbonyl ~,~ diamino~2,7
thia-4 subéramique dans un mélange de 3,1 cm3 de soude 1~ et
27 cm3 d'eau. Le mélange réactio~nel est agité pendant 10 minutes
-.7C, pUi8 pendant 20 heures à 20C environ. ~nsuite, il est
concentré à 3ec sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)
à 45C. ~e résidu obtenu est dissous dans 30 cm3 d'eau, aci~ifié
à pH~2 par addition de 3,8 cm3 d'acide chlorhydrique 1 ~. ~e
précipité formé est séparé par filtration, lavé 2 fois par
100 cm3 au total d'eau et séché sous pres3ion réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa, puis 0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 20C. On
obtient ainsi 2,9 g de poudre que l'on chromatographie 3ur 90 g
de gei de silice neutre (o,o4-0,063 mm) contenu~ dans une colonne
de 2,5 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 279 g de poudre
., ~
58
dans un mélange de 30 cm3 d'acide acétique et 15 om3 d'acétate
d'éthyle et à la solution obtenue, on ajoute 9 g de gel de
silice neutre (0904-0,063 mm). On évapore à seo le melange 90u9
pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C et le
résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue
avec 2,9 litres d'un mélange acétate d'éthyle - acide acétique
(95-5 en volumes) en recueillant des fraction~ de 50 cm3. ~es
fractions 17 à 55 sont réunies, concentrées à sec sous pres~ion
réduite (20 mm de mercure ; 2j7 kPa) ~ 50C. ~e résidu obtenu est
10 trituré dans 100 cm3 d'éther, séparé par iltration, la~é 2 018
par 10 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (20 mm
de mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 1,~ g d'acide
-~01-t.butyl ~ -lauroyl L alanyl)-y-D glutamylJ N7-benzyloxy-
carbonyl ~,L diamino-2,7 thia-4 subéramique.
t5 Rf = 0,59 ~silicagel ; aoétate d'éthyle - acide
acétique (4-1 en volumes)]
On dissout 1,2 g d'acide N -[O -t.butyl N-(~-lauroyl
L alanyl)-y-D glutamyl~N7-benzyloxycarbonyl L,L-diamino-2,7
thia-4 subéramique dans 12 cm3 d'acide bromhydrique en solution à
33 ~o dans l'acide acétique. On agite le mélangeréactionnel pen-
dant 2 heures à 20C, le concentre à sec sous pre~ion réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C, le reprend par 20 cm3 d'acétate
d'éthyle, le concentre à nouveau à ~ec sous pression réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C, le triture dans un mélange de
100 cm3 d'éther et 10 cm3 d'acétate d'éthyle, le sépare par
filtration et le lave 4 fois par 80 cm3 au total d'éther. Après
aéchage ~ou9 presslon réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) ~ 20C,
on obtient 950 mg de poudre brune que l'on chromatographiR sur 40 6
de gel de silice neutre (o,04-0,063 mm) contenus dans une colonne
de 2 cm de diamèt-e. Pour cela, on dissout les 950 mæ de poudre
dans un mélange de 30 cm3 de méthanol et 0,4 cm3 d'ammoniaque
concentré (d = 0,92) et à la solution obtenue9 on ajoute 3 6 de
gel de silice.neutre(O,04-0,063 mm-). On évapore à sec le mél~nge
90U9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2;7 kPa) ~ 50C et le
résidu ainsi obtenu e~t char~é sur la colonne de silice. On élue
. . :
: '
.
59 ~2~3~3
succe3sivement avec 260 cm3 d'un mélange n.butanol - acide acé-
tique (4-1 en volumes) et 320 cm3 de méthanol en recueillant des
fraction3 de 20 cm3. Les fraction3 14 à 29 sont ré~nies, concen-
trées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)
à 55C. ~e résidu obtenu est trituré dans 100 cm3 d'éther, 3éparé
par filtration, lavé 3 fois par 60 cm~ au total d'éther et séché
sous pression réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) ~ 50C. On
obtient ainsi 450 mg d'acide ~2-[~ -lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl]
L,L diamino-2,7 thia-4 subéramique.
Rf = 0,33 ~silicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)~
Spectrometrie de masse : M = 603 (théorie = 603)
knalyse : Calc. % C 53,71 H 8,18 ~ 11,60 S 5,31
Tr. % 49'5 7,6 10,3 4,g3
L'acide ~7-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 7(L) thia-4
- ~ubéramique peut être préparé de la fason suivante :
~ une solution refroidie à -40C de 720 mg de L cystine
dans 90 cm3 d'ammoniac, on ajoute du sodium ~usqu'~ ce que l'on ait
une solution bleue persistante (environ 360 mg de sodium). Ensuite,
on ajoute successivement quelques mg de chlorure d'ammonium pour
décolorer le milieu réactionnel et 2 g de ~-benzyloxycarbonyl
L -amino~-bromobutyrate de méthyle. On agite le mélange
réactionnel pendant 1/4 d'heure à -35C, pui~ on y ajoute 25a~3 de
méthanol refroidi vers -35C et on l'abandonne pendant 18 heures
à 20C. On le concen-tre à sec sous pression réduite ~20 mm de
mercure) à 45C. Le résidu obtenu est di~sous dans 50 cm3 d'eau.
Cette solution est acidifiée à pE 5-6 par addition de 6,5 cm3
d'acide acétique 1-~. Le précipité formé est séparé par filtration,
lavé 3 fois par 60 cm3 au total d'eau et séché ~OU8 pre3sion
réduite (0,3 mm de mercure) à 20C. On obtient ainsi 600 m~ d'acide
~7-benzyloxycarbonyl diamino-2(~ 7(L) thia-4 subéramlque fon-
dant ~ 240-244Co
Rf = 0940 ~silicagel ; n.butanol - pyridine ~ acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)~
Spectrométrie de masse : M = 355 (theorie = 355)
Un deuxième jet de 600 mg d'acide ~7-benzyloxycarbonyl
diamino-2(~), 7(~) thia-4 subéramique peut être obtenu dl la
façon suivante : le filtrat obtenu ci-dessu3 est concentré à 5 cm3
. .
39
sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. ~e
précipité apparu dans le concentrat est séparé par filtration,
lavé 2 fois par 4 cm3 au total d'eau et séché 90U8 pre3sion
réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 20C.
~e ~-benzyloxycarbonyl ~ a-amino y-bromobutyrate de
méthyle peut être préparé selon la méthode de Z. PROCHAZKA et
coll., Coll. C~ech. Chem. Commun. ~ 19a2 (1980).
EX~MPLE 9
On ajoute 2,64 om3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution, maintenue à -5C, de`8-g de N-(N-lauroyl L alanyl) D i90-
glu-tamine dans un mélange de 200 cm3 de tétrahydrofuranne, de
400 cm3 de diméthylformamide et de 2,8 cm3 de triéthylamine, ~e
mélange e~t agité pendant 20 minutes à -5C, puis on ajoute une
solution refroidie a 5C de 7,56 g de chlorhydrate d'acide ~2-ben-
15 2yloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D,~) thia-4 pimélamique dans un
mélange de 20 om3 de soude ~ et de 80 cm3 d'eau. ~e mélange
réaotionnel est agité pendant quelques minu-tes vers 0C, puis
pendant 18 heures à 20C environ. Ensuite, le tétrahydrofuranne
est éliminé par concentration sous pression réduite (2Q mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 50C. ~e concentrat est débarras~é d'un léger
insoluble par filtration et dilué par 2 litres d'eau et 45 cm3
d'acide chlorhydrique ~. ~e précipité ~ormé est séparé par fil-
tration, lævé 2 fois par 400 cm3 au total d'eau et séché à l'air
libre. On obtient ainsi 16,1 g de poudre crème que l'on chromato-
graphie ~ur 450 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenu~
dans une colonne de 5 cm de diamètre. Pour cela9 on dissout les
16,1 g de poudre dans 100 cm3 d'acétate d'~thyle tiédi à 50C et
à la solution obtenue, on ajoute 30 g de gel de ~ilice neutre
(o,o4-o,063 mm). On évapore à sec le mélange ~ou~ pre~sion réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa' à 50C et le résidu ainsi obtenu est
chargé sur la colonne de silice. On ~lue successivement avec
1,5 litre d'un mélange acétate d'éthyle - acide acétique (1-1
en volumes), 750 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - acide acé-
tique (4-6 en volumes) et 750 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle -
acide acétique (3-7 en volume~) en recueillant des frac-tions de
.
-
- 6l
50 cm3. Les fractions 20 à 60 sont réunies, concentrées à sac
sou~ pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) ~ 50C. Le
résidu obtenu est trituré dans 500 cm3 d'acétate d'éthyle, ~éparé
par filtration~et lavé par de l'éther. On obtient ainsi 7,1 ~
d'acide ~ -C~ lauroyl ~ alanyl) D isogiutaminyl] ~2-benzyloxy-
carbonyl diamino-2(L), 6 (D,L~ thia-4 pimélamique.
Rf - 0,24 [silicagel ; acétate d'éthyle - acide
acétique (7-3 en volumes)].
On di~sout 7 g d'acide ~ -[~ (~-lauroyl L alanyl)
D igoglutaminyl] ~2-benzyloxycarbonyl diamino-2(D), 6(D,L) thia-4
pim~lamique dans un mélan~e de 50 cm3 d'acide bromhydrique en
solution à 33 % dans l'acide acétique et de 50 cm3 d'acide
acétique. On agite le mélange réactionnel pendant 1 heure à 20C,
le concentre à sec SOU9 pression réduite (20 mm de mercttre ;
2,7 ~Pa) à 45C, Le résidu obtenu est trituré dan~ 100 cm3
d'acétate d'éthyle, separé par filtration, lavé 2 fois pa~
100 cm3 au total d'acétate d'éthgle et-3 foi~ par 150 ~m3 au
total d'éther, Après séchage sous pression réduite (0,3 mm de
mercure ; 0,04 kPa) à 20C, on obtient 8,14 g de poudre rose que
l'on dissout dans 500 cm3 d'eau. Après 1/2 heure d'agitation,
le précipité apparu est s~paré par ~iltration, ia~é ~ucce~slvement
2-fois par 100 cm3 àu total d'e~u, 5 fois par 250 cm3 au total
d'éther et séche SOU9 pres~ion réduite (0,3 mm de mercure ;
0,04 kPa) à 20C. On obtient ainsi 5,47 g d'acide ~ -~N-(~-lauroyl
L alanyl) D isoglutaminyl] diamino-2(~), 6 (D,L) thia-4 piméla-
mique.
- Rf = 0,39 ~silicagel ; n.butanol - pyridine - aclda
acétique - eau (50-20-6-24 en volume~)].
Spectrométrie de masse : M - 588 (théorie = 58a)
nalyse : Calc. % C 53,04 ~ 8,22 ~ 14,27 S 5,45
~r. ~ 50,0 B,1 13,1 5,0
~e ~-lauroyl ~ alanyl-D iso~lutamine peut être préparé
de la façon suivante :
On dissout 6,6 g de ~-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate
de benzyle dans 330 cm3 d'acide acétique. On ajoute 6,6 g de
palladium sur noir (à 3 % de palladium) puis on fait passer un
lent courant d'hydxogène pendant 2 heures. Après filtration du
62
mélange réactionnel, on verse le filtrat dans 3 litres d'eau.
Aprè~ 2 heures de repos à 0C, le précipité apparu est séparé par
filtration7 lavé 2 fois par 80 cm3 au total d'eau, pUi9 séché.
On obtient ainsi 5,16 g de produit auquel on ajoute 0,5 g d'un
produit obtenu dans des conditions analogues. Ce mélange est
dissous dans 90 cm3 de méthanol bouillant et à la solution
obtenue on ajoute 45 cm3 d'eau. Après 2 heures de repos à une
température voisine de 20C, les cristaux apparus sont séparés
par filtration, lavés 2 fois par 60 cm3 au total d'eau et ~échés
10 S0U9 presgion réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa). On obtient
ainsi 5,1 g de ~-lauroyl h al~nyl-D isoglutamine fondant à 163C.
Rf a 0,18 [silicagel ; acétate d'éthyle - méthanol
(4-1 e~ volumes)]
Analgse : Calc. % = C 60,12 ~ 9,33 N 10,52
~r. = 60,2 9,5 10,9
Le ~-lauroyl L alanyl-D isoglutaminate de benzyle peut
etre préparé de la façon suivante :
On a~oute 2,54 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dan~
une solutlon, maintenue à 0C, de 3,9 g d'acide laurlque dans
156 cm3 de toluène anhydre et 2,7 cm3 de triéthylamine. Le mélange
est sgité pendant 20 minutes à 0C, puis on ajoute une solution,
refroidie à 0C, de 6,7 g de chlorhydrate de L alanyl-D iaogluta-
minate de benzyle dans 52 cm3 d'eau et 2,7 cm3 de triéthylamine.
~e mélange réactionnel est agité pendant 65 heures à une tempé~
- 25 rature voisine de 20C. On obtient une masse réaotionnelle d'aspect
gélitineux à laquelle on ajoute 150 cm3 d'acétate d'éthyle~ Le
précipité est séparé par filtration, lavé par 30 cm3 dieau puis
séché. On obtient 7,6 g de ~-lauroyl L alanyl-D i~oglutaminate
de benzyle 80U9 forme d'une poudre blanche. La phase aqueuse du
filtrat précédent est extraite 2 fois par 100 cm3 au total
d'acétate d'éthyle, cette phase acétate d'éthyle est réunie avec
la phase organique du filtrat, lavée par 125 cm3 d'acide chlor-
hydrique 0,1 ~, 120 cm3 d'eau, séchée sur sulfate de magnéslum
puis concentrée à sec 80U9 preBsion réduite (20 mm de mercure)
à 50C. On obtient à nouveau 1,5 g de ~-lauroyl L alanyl-D iso-
glutaminate de benzyle. Le produit (7,6 g et 1,5 g)est
- ~. . .
33~
6~
recristallisé dan3 120 cm~ de méthanol. On obtient ainsi 6,6 g de
~-lauroyl L alanyl-D iso~lutaminate da benzyle fondant à 169~C.
Rf = 0,13 ~silicagel ; acétate d'éthyle~
- Le chlorhydrate de L alanyl-D isoglutaminate de benzyle
peut etre préparé 3elon le procédé de S. K~S~MO~O, ~ull. Chem~
Soo. Japon 49, 533 (1976).
EXE~E 10 -
En opérant comme à l'exemple 2, mai3 à partir de ~-(N
lauroyl L alanyl) a-D glutamate de t.butyle èt d'aclde M -benzyl-
oxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4 pimelamique~ on obtient l'aclde
- ~2-~ -lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] L,L diamino-2,6 thia-4
pim~lamique qui, en opérant des les conditions de l'exemple 3,
fournit l'acide ~2-~ -lauxoyl L alanyl)-y-D glutamyl] ~ -glycyl
L,L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.
15 ~ L'a¢ide ~6-benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4
pimélamique peut être préparé de la façon suivante :
A une solution de 3 cm~ d'éthanol et 0,33 cm3 de soude
4 ~, on ajoute 250 mg de chlorhydrate de ~6-benzyloxycarbonyl
L,L diamino-2,6 thia-4 pimélamate de méthyle. On a~ite le mélange
20 réactionnel pendant 1 heure 1/4 ; ensuite, on ajoute 0,65 cm3
d'acide chlorhydrique ~ et 3 cm3 d'eau pour amener le p~ à la
neutralité. Aprè~ 2 heures de repos à 20C, le précipité apparu
est séparé par filtration, lavé successivement par 2 om3 d'éthanol
et 2 cm3 d'acétone et séché sous pression réduite (20 mm de
25 mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On ob-tient ainsi 60 mg d'acide
-benzyloxycarbonyl L?L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.
Rf = 0,53 ~silicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)]
Spectrométrie de masse : M = 341 (théorie = 341)
Le ~6-benzyloxycarbonyl L,L diam~no-2,6 thia-4 pimélama-te
de méthyle peut ~etre préparé de la façon suivante :
~ une solution de 1,4 g de ~ -trityl ~ -benz~loxycarbonyl
L,L diamino-2,6 thia-4 pimélamate de méthyle dans 6 cm3 d'acé-tone-,
on ajoute 0,25 cm3 d'acide chlorhydrique concentre (d = 1719) et
on agite pendant 2 minutesO Ensuite, on ajoute 12 cm3 d'oxyde
. .
5~
d'isopropyle. L'huile relarguée est séparée par décantation,
di~soute dan~ 5 cm3 d'acé-tone et relarguée par addition de 20 cm~
d'oxyde d'isopropyle. Cette huile, séparée par décantation est
redissoute dans 5 cm3 de méthanol. A cette ~olution, on ajoute de
l'acétate d'éthyle jusqu'à ce que l'on obtienne un louche persis-
tant. Le précipité ainsi formé, est séparé par filtration, lavé
2 fois par 10 cm3 au total d'acétate d'éthyle et séché solls
pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient -
ainsi 400 mg de chlorhydrate de ~ -benzyloxycarbonyl L~L diamino-
2,6 thia-4 pimélamate de méthyle.
~ Rf = Oj70 [silicagel ; n.butanol-- pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)~
Spectrométrie de masse : M = 355 (théorie = 355)
~e ~ -trityl ~6-benzyloxycarbonyl ~,L diamino~2,6 thia-4
pimélamate de méthyle peut être préparé de la façon suivante :
On ajoute 0,56 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution maintenue à -60C, de 2,6 g d'acide Ol-méthyl ~2-trityl
-benzyloxycarbonyl L,L dlamino-2,6 thia-4 pimélique dana un
mélange de 26 cm3 de chloroforme et de O,6 cm3 de triéthylamine.
~e mélange est agité pendant 20 minutes vers -60C, pui~ on ajoute
une solution refroidie à 0C de 31 cm3 de chloroforme ammoniacal
(1,4 ~ e mélange réactionnel est agité pendant 1 heure vers 0C,
puis pendant 25 heures à 20C environ, puis lavé par 50 cm3 d'eau
et séché sur sulfate de sodium. Après concentration à sec sous
- 25 pression reduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 40C, on obtient
2,9 g~de ~ -trityl ~ -benzyloxycarbonyl ~,L diamino-2,6 thia-4
pimélamate de méthyle sous forme d'huile jaune.
~f = 0,82 [silica~el ; nObutanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)~
L'acide O - méthyl ~ -trityl ~ -benzyloxycarbonyl L,~
diamino-2,6 thia-4 pimélique peut être préparé ~elon la méthode
de I. PEO~AEI et coll., J.C.S. PEREI~ I 2599 (1979).
~ 3
EX~MP~E 11
- On ajoute 0,91 cm3 de chloroformiate d'i30butyle ~ une
.
solution maintenue à -7C, de 3,43 g de ~ -lau~oyl L alanyl)
~-D glutamate de benzyle dan~ un mélange de 140 cm3 de té-tra
hydrofuranne et de 0,98 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité
pendant 20 minutes à -7C, puis on ajoute une solution refroidie à
2C de 2,64 g de chlorhydrate d'acide ~2-benæyloxycarbonyl L,L
diamino-2,6 thia-4 pim~lamique dans un mélange de 14 cm3 de
soude ~ et 53 cm3 d'eau.
Le mélange réac-tionnel est agité pendant 2 minutes à -5C,
pui~ pendant 20 heures ~ 20C environO Le mélange réactionnsl est
acidifié par addition de 5 cm3 d'acide chlorhydrique~4~. On évapore
le tétrahydrofuranne ~ar concentration 90U~ pression réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le concentrat est extrait
5 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les phases orga-
niques réunies aont lavées par 20 cm3 d'eau et 20 cm3 d'une aolution
saturée de chlorure de sodium, e-t concentrée~ à sec 30u9 pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On obtient ainsi 5,58 g
d'une poudre blanche que l'on chromatographie sur 100 g de gel de
silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,5 cm
de diamètre. Pour cela, on aissout les 5,58 ~ de poudre danR 50 cm3
d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 15 g de gel
de silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange
30US pression réduite (20 mm de mercure) à 50C et le ré~idu ainsi
obtenu est charge sur la colonne de silice. On élue successivement
avec 360 cm3 d'acétate d'éthyle, 360 cm3 d'un mélange acétate
d'éthyle-acide acétique (98-2 en volumes), 360 cm3 d'un mélange
acétate d'éthyle-acide acétique (g5-5 en volumes), et 880 cm3 d'un
mélanga acétate d'éthyle-acide acétique (90-10 en volumes) en
}o recueillant des fractions de 40 cm3. Les fractions 27 à 49 sont 2 7kPa)
réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure;/
à 50C. Le réaidu huileux obtenu est trituré dans un melange de
45 cm3 d'éther et 15 cm3 d'éther de pétrole, séparé par filtratlon
et séché. On obtient ainsi 2,52 g d'acide ~ -[01-benzyl ~ -lauroyl
L alanyl)-y-D glutam~l] ~2-benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4
pimélamique.
Rf = 0,50 [silicagel; acétate d'éthyle-acide acétique
(9-1 en volumes)]
3~3
66
On dissout 2,5 g d'acide ~6-~01-benzyl ~ -lauroyl
L alanyl)-y-D glutamyl~ ~ -benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6
thia-4 pimélamique dans un mélange de 7 cm3 de méthanol et
6,75 cm3 de soude 1~.
On agite le mélangeréactionnel pendant 80 minute3.
On élimine un léger insoluble par filtration. Au filtrat, on ajoute
10 cm3 d'eau et on acidifie par addition de 8 cm3 d'acide chlor-
hydrique 1~. Il se forme un précipité huileux. On extrait
l'en~emble 4 foi~ avec 80 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Les
phases-organiques ré~mies sont lavées par 3 cm3 d'eau, séchées sur
- sulfate de sodium et concentrées à sec sous pres~ion réduite.
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à-50C. On obtient ainsi une huile
que l'on triture dans 50 cm3 d'éther, sépare par filtration et
sèche sous pression réduite (20 mm de mercure , 2,7 kPa) à 20C.
On obtient ain~i 2,1~ g d'acide ~ -lauroyl L alanyl)-y-D
glutamyl~ N2-benzyloxycarbonyl L7L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.
Rf = 0?47 ~silicagel ; n.butanol-pyridine-aoide acétique-
eau (50-20-6-24 en volumes)~.
~ Spectre de masse ; M = 723 (théorie = 723)
On dissout 2,13 g d'acide ~ lauroyl h alanyl)-
y-D glutamyl~ ~ -benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4 pimé-
lamigue dans un mélange de 8,5 cm3 d'acide bromhydrique en
solution à 33 ~ dans l'acide acétique et 8,5 cm3 d'acide acétique.
On agite lemélange réactionnel pendant 2 heures, le concentre a sec
90U9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) ~ 50C. Le
ré~idu ainsi obtenu est trituré dan~ 100 cm3 d'éther, séparé par
filtration et repris dans 600 cm3 d'eau sous forte asita-tion ;
il se solubilise instantanément dans l'eau, puis au bout de
quelques minutes, il précipite. ~près 1 heure, on le ~épare p~.r
filtration, Ie lave 5 fois avec 250 cm3 au total d'eau et le
sèche 90U9 pres~ion réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 k~a) ~
600C. On obtient ainsi 1,33 g d'acide ~ -[~ lauroyl h alanyl)-
y-D glutamyl] h,h diamino-2,6 thia-4 pimélamique.
~2~i~3~3~
67
Rf = 0,30 ~silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau
(50-20-6-24 en volumes)
Rf = 0,43 ~silicagel ; acide acétique]
Analyse : Calc. % C 52,95 ~ 8,0~ ~ 11,88 S 5,44
Tr. 51,1 8,0 11,1 4,8
Spectre de masse : ~ = 589 (théorie = 589)
L'acide ~2-benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4 pimé
lamiq~e peut être préparé selon l'une des méthodes suivantes :
a) On dissout 5,48 g d'acide ~2-benzyloxycarbonyl ~6-t.buty-
10 loxycarbonyl L,L diamino-2,6 t~ia-4 pimélamique dans 50 cm3-d'une
solution anhydre d'acide chlorhydrique 1,7 ~ dana l'acide acétlque.
On agite pendant 1 heure, puis on a~oute 500 cm3 d'éther anh~dre et
on agite pendant 3/4 d'heure. Le précipité qui s'est form~ est
séparé par filtration, lavé 2 fois par 60 cm3 au total d'éther
15 et 9éohé 80u9 pre38ion réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa)
à 20C. On obtient ainsi 2,9a g de chlorhydrate de l'aoide
N -benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.
Rf = 0,47 ~silicagel ; n.butanol-pyridine-a¢ide acétique-eau
(50-20-6-24 en volumes)]
Après hydrolyse, dérivati~ation et chromatographie sur
colonne capillaire optiquement active, on obtient :
L lanthionine 95,7 % (théorie = 1)
D lanthionine <0,5 % (théorie = O)
méso lanthionine 4,3 % (théorie = O)
L'acide ~ -benzyloxycarbonyl ~ -t.butyloxycarbonyl
L,L diamino-2,6 thia-4 pimélamique peut etre préparé de la manière
suivante :
une solu-tion maintenue vers -75C de 4 ~ de di t.butyl-
oxycarbonyl L cystinamide dans 200 cm3 d'ammoniac, on a~oute par
30 petites portions du sodium ~usqu'à l'ob-tention d'une coloration
bleue persistante pendant quelques minute~. Ensuite? on a~oute
su¢¢essivement du chlorure d'ammonium jusqu'à dé¢oloration du
milieu réa¢tionnel et 4,7 g d'acide L ~-benzyloxycarbonylamino
~-chloropropionique. Le mélangeréactionnel e~t abandonné pendant
35 18 heures à 20C environ. Le solide crème ain~i obtenu est repris
par 80 cm3 d'eàu ; la solution aqueuse e3t a¢idi~iée à pH 2 par
` addition d'une solution sa-turée d'acide citrique, ex-tralte 5 fois
~S~39~3
68
par 150 cm3 au total d'acétate d'éthyle. ~es phases organiques
réunies sont lavées avec 20 cm3 d'eau, séchées sur sulfate de
sodiu~ et ooncentrées à sec SOU9 pression réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On obtient ainsi 7,5 g d'huile jaune
que l'on chromatographie sur 125 g de gel de silice neutre
(O,Q4-0,063 mm)O On élue avec de l'acétate d'éthyle en recueillant
des fractions de 40 cm3. Les fractions 7 à 16 sont réunies,
concentrées à sec sou~ pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)
à 50C. L'huile obtenue eut di~soute dans 50 cm3 d'acétate
d'éthyle, extraite 4 fois par 200 cm3 au total d'une aolution dé~i-
normale de soude. Les phases aqueuses réunies sont aoidifiéea à
p~ 2 par addltion d'une solution saturée d'acide citrique,
extraites 4 fois par 100 cm3 au total d'acétate d'éthyle; Les
phases organiques réunies sont ~échées aur sulfate de sodium et
concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) à 50C. On obtient ainsi 2,5 g d'acide ~2-benzyloxy-
oarbonyl ~ -t.butyloxycarbonyl L,~ dia~ino-2,6 thia-4 pimélamique.
Rf - 0,62 ~silicagel ; aoétate d'éth~le-acide acétique
(9-1 en volumes)~
~e di t.butyloxycarbonyl ~ cystinamide peut être prépare
de la manière suivante :
On ajoute 16,6 cm3 de ¢hloroformiate d'isobutyle à une solu-
tion maintenue à -5C de 25 g de di t.butyloxycarbonyl ~ oystine
dans un mélange de 500 cm3 de tétrahydrofuranne et de 15,9 cm3 de
- 25 triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes ~ -5C, pui~
on a~oute 125 cm3 d'une solution de chloroforme ammoniacal 1,4 N
en 1/4 heure. Ens!uite en maintenant la température du mélange
réactionnel vers -5C, on sature pendant 1/2 heure par un oourant
de gaz am~oniac anhydre, puis on agite pendant 20 heures à 20C
3 environ. On ajoute 100 cm3 de tétrahydrofuranne, on filtre
l'insoluble, on le lave 6 fois par 2,25 litres au total d'eau,
puis par 1 litre d'acétate d'éthyle et sèche ~ l'air libre. On
obtient ain i 16,98 g de di t.butyloxycarbonyl ~ oystinamide.
Rf = 0,85 ~silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau
(50-20-6-24 en volumes)~
Rf = 0,77 ~silicagel ; méthanol]O
~2~5
b) On ajoute 950 mg de chlorhydrate d'acide ol- méthyl
-benzyloxycarbonyl L,~ diamino-2,6 thia-4 pimélique dans 11 cm3
d'éthanol ammoniacal 2,3 ~ et la solution obtenue est conservée
pendant 70 heures vers 20C. Ensuite, on élimine un léger lnso-
luble par filtration et concentre à sec le filtrat 80U pressionréduite ~20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. ~e résidu obtenu
est trituré dans 20 cm3 d'acétone, séparé par filtration et séche
gOU9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On
obtient ain~i 0,18 g d'acide ~ -benzyloxycarbonyl L,h diamino-2,6
thia-4 piméla~ique.
Rf = 0,62 Csilicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en volumes)]
Spectrométrie de masse * M = 341 (théorie = 341)
L'scide o1- méthyl M -benzyloxycarbonyl L,~ diamino-2,6
thia-4 pimélique peut être préparé de la façon suivante :
~ une solution de 3 g d'acide ol- méthyl ~2-trityl
N6-benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4 pimélique dans 13 cm3
d'acétone, on a~oute 0,52 cm3 d'acide chlorhydrique concentr~
(d = 1,1g) et on agite pendant 2 minutes. Ensuite on verse le
20 mélange réactionnel dans 25 cm3 a~ éther. L'huile relarguée est
séparée par décantation et triturée dans un mélange de 5 cm3
d'acétone et 25 cm3 d'éther. Le solide blanc formé est séparé par
filtration, dissous dans 5 cm3 de méthanol et précipité à nouveau
par addition de 50 cm3 d'acéta-te d'éthyle et 25 cm3 d'~-ther~ ~près
filtration, la~age par 20 cm3 d'éther et séchage SOU9 pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 20C, on obtient 1 g de
chlorhydrate d'acide ol méthyl N6-benzyloxycarbonyl ~,~ diamino-
2,6 thia-4 pimélique.
Rf - o,64 ~silicagel ; n.butanol - pyridine - acide
acétique - eau (50-20-6-24 en ~olumes)~
~ ~5 ~ 3 ~ ~
EXEMPL~ 12 -
~ n opérant oomme dans l'exemple 3 mais à partir de
~-t.butyloxycarbonylglycine et d'acide ~ -C~ -lauroyl ~ alanyl)-
y-D glutamyl] L~ diamino-2,6 thia-4 pimélamique, on obtient
l'acide N -[~ -lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] ~2-glycyl ~,L
diamino-2,6 thia-4 pimélamique.
EXEMPIE 13 -
On ajoute 1,95 cm3 de chloroformiate d'isobutyle a une
solution maintenue à -7C, de 6,84 g de ~ -lauroyl ~ alanyl)
~-D glutamate de t.buty~e dans un mélange de 330 cm3 de tétra-
hydrofurannè et de 2,1 cm3 de triéthylamine. Le mélange est agité
pendant 20 minutes ~ -7C, puis on ajoute une-~olution refroidie à
10C de 5,11 g d'acide ~ -benzyloxycarbonyl diamino-2 (D), 6 (L)
thia-4 pimélamique dans un mélange de 15 cm3 de soude ~ et
1~0 om3 d'eau.
he mélange réaotionnel est agité pendant 5 minutes à 0C,
puis pendant 24 heures à 20C environ. On évapore le tétrahydro-
furanne par concentration sous pression réduite (20 mm de meroure ;
2,7 kPa) ~ 50C ; le oonoentrat est refroidi ~ 0C, acidifié à
pE 2 par addition d'acide chlorhydrique 1~. Le précipité formé
est séparé par filtration, lavé par 50 cm3 d'acide chlorhydrique
0,1 ~ puis 2 fois par 2QO cm3 au total d'eau et séché ~ l'air
libre. On obtient ainsi 10 g d'acide ~2-~Q1-t.butyl N~ lauroyl
L alanyl)-y-D glutamyl] ~ -benzyloxycarbonyl diamino-2 (D), 6 (h)
thia-4 pimélamique.
~f = 0,65 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau
(50-20-6-24 en volume~)]
Rf = 0,72 ~silicagel ; acétate d'éthyle-~cide acétique
(3-1 en volumes)]
On di~sout 5 ~ d'acide ~2_~o -t.butyl ~ lauxoyl
L alanyl)-y-D glutamyl] ~6-benzyloxycarbonyl dlamino-2(D), 6(L)
thia-4 pimélamique dans 22 cm3 d'acide bromhydrique en ~olution
à 35 % dans l'acide acétique. On agite le mélange réac-tionnel
. . . _ . .
71 leso3s~
pendant 1/2 heu~e avec un agitateur à ultra 90ns, pUiS on le verse
dans 1 litre d'éther anhydre refroidi à 0C. On agite le mélange
pendant 1 heure ; le précipité obtenu est séparé par filtration,
lavé 4 fois par 400 cm3 au total d'éther, et dissous dan~ 100 cm3
da méthanol. A la solution obtenue, on ajoute 5 cm3 d'ammoniaque
(d , 0,92~ On concentre à sec sous pression réduite ~20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On obtient ainsi 4,36 g de poudre
blanche~ que l'on chromatographie sur 200 g de gel de ~ilice neutre
(o,04-0,063 mm) contenus dans une co~o~ne de 3,5 cm de diamètre.
On élue avec un mélange-méthanol-ammoniaque(d = 0,92) (999,5-0,5 en
volumes) en recueillant des fraotions de 30 cm3. Les fractions
25 à 39 sont r~unies, concentrées à sec sous pression réduitH
(20 mm de mercure) à 50C. On obtient ainsi 2,8 g de poudre
blanche que l'on chromatographie sur 100 g de gel de silice neutre
(o,o4-o,o63 mm) contenus dans une colonne de 3 cm de diamètre. Pour
oela, on dissout les 2,8 g de poudre dans 50 cm3 de m~thanol
oontenant 0,5 cm3 d'ammonisque (d = 0,92) pQr litre et, ~ la
solution ainsi obtenue, on a~oute 3 g de gel de 8ilice neutre
(o,04-0,063 mm). On évapore à seo le mélange sous pre~sion réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C et le résidu ainsi obtenu est~
chargé sur la colonne de silice. On élue avec un mélange méthanol-
ammoniaque(d = 0,92) (999,5-0,5 en volumes) en recueillant des
fraotions de 15 om3. ~es fraotions 13 à.23 sont réunies, concen-
trées à seo 9eu9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa3 à 50C.
On obtient ainsi 0,71 g d'acide ~ -[~ ~royl ~ alanyl)-y-D
glutamyl)] diamino-2(D), 6(~) thia-4 pimélamique.
Rf = 0,35 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau
(50-20-6-24 en volumes?]
Analyse : Calc. % C 52,95 ~ 8,03 ~ 11,87 S 5,44-
3 Tr~ 50,2 7,8 11,6 5
Cendres sulfuriques = 7,3 ~
Spectre de masse : M = 5B9 (théorie = 589).
. .
'
' ,A'
-
03~3~
72
L'acide ~ -benzyloxycarbonyl diamino-2(~), 6(L) thia-4
pimélamique peut être préparé de la façon 3uivante :
A une solutio~ maintenue ver~ -70C de 17,93 g de
~-ben~yloxycarbonyl ~ cystéinamide dans 570 om3 d'~mmoniac,
on ajoute 12,6 cm3 d'une solution méthanolique 5,6 ~ de méthylate
de sodium et ensuite par petites portions en ltespace de 10 minutes,
11,3 g de chlorhydrate d'acide D ~-amino ~-chloropropionique.
Le mélange réactionnel e3t agité pendant 10 minutes vers -600C,
pUi9 abandonné pendant 20 heures ~ 20C environ~ Le résidu ainsi
obtenu est repris par 200 cm3 d'eau ; la p~a~e aqueuse es-t d~b~r~
rassée d'un insoluble par flltration, extraite 2 fo$s par 400 cm3
au total d'acétate diéthyle, acidifi~e à pE 2 par addition d'acide
chlorhydrigue 10~, extraite 2 fois par 400 cm3 au total d'acétate
d'éthyle, concentrée à un volume de 170 cm3 sous pression réduite
15 (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C, amenée à pE 5-6 par addition
de triéthylamine et refroidie à 0C pendant 2 heures. ~'insoluble
apparu dans la phase aqueuse est séparé par filtration, lavé
3 fois par 150 cm3 au total d'eau et séché successivement à l'air
libre et sous pression réauite (0,3 ~m de mercure ; 0,04 kPa)
20 50C. On obtient ainsi 8,88 g d'aoide ~6-ben~yloxycaxbo~yl
diamino-2(D), 6(~) thia-4 pimélamique.
~f = 0,48 [silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau
(50-20-6-24 en volumes)]
- ~]20 = -20 (soude ~ ; c = 1)
Spectrométrie de masse : M = 341 (théorie = 341)
Après hydrolyse, d~rivatisation et chromatographie
sur colonne capillaire optiquement active, on obtient :
méso ~an 100 % (théorie = 1)
L Lan ~0~5 % (théorie = O)
30 ~ Lan <0,5 % (théorie = O)
73
EX3MPL3 14 -
On ajoute 1,92 cm3 de chloroformiate d'isobut~le à une
solution maintenue à -10C, de 6,66 g de ~ -lauroyl ~ alanyl)
~-D glutamate de t.butyle dans un mélange de 320 cm3 de tétra-
hydrofuranne et de 2 cm3 de triéthylamine. Le mélange es-t agité
pendant 20 minutes à -10C, puis on ajoute une aolution refroidie
~ 10C de 5 g d'acide ~ -ben~yloxycarbon~l ~,L diamino~2,6 thia-4
pimélamique dans un mélange de 14,6 cm3 de soude ~ et 120 cm3
d'eau.
Le mélange réactionnel est agite pendant 5 minutes à 0C,
pUi9 pendant 20 heures à 20C environ. On évapore le tetrah~dro-
furanne par concentration sous pression réduite ~20 mm de mercure ;
2,7 kPa) à 50C ; le concentrat est dilué avec 200 cm3 d'eau,
acidifié à p~ 2 par addition d'acide chlorhydrique 1~ (25 cm3
environ). ~ la suspension ainsi obtenue, on ajoute 500 cm3
d'acétate d'éthyle. ~près agitation du mélange, on sépare l'inso-
luble par fil-tration et on le sèche sous pres~lon réduite (0,3 mm
de mercure ; 0,04 kPa) à 20C. On obtient ainai 2,55 g de poudre
auxquels on joint 4,45 g obtenus de la façQ~ suivante :~dans le
filtra-t, on sépare la phase organique, on la sèche sur sulfate de
sodium et la concentre à sec sous pression réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le résidu obtenu est repris par 200 cm3
d'acétate d'éthyle. La solution jaune pâle ainsi obtenue est
refro~die à 0C pendant 1 heure. ~e précipité formé est séparé
par filtration, lavé 2 fois par 200 cm3 au total d'éther et séché
sous pression réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 20C.
Les 7 g de poudre ainsi obtenus sont chromatographiés sur 140 g
de gel de ~ilice neutre (0,04-0,063 mm) contenus da~s une colonne
de 3,2 cm de diamètre. Pour cela, on dissout les 7 g de poudre
dans 50 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute
14 g de gel de silice neutre (o,o4-o,o63 mm). On évapore à sec le
mélange 90U9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) a 50C
et le résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice.
On élue successivement avec 2,15 litres d'un mélange acétate
d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes), 0,3 litre d'un mélange
74 ~Z~9~
acétate d'éthyle-acide acétique (1-1 en volumes) en recueillant des
fractions de 50 cm3. Les fraotions 10 à 49 sont réunies, concen-
trées à sec 90U9 pressiQn réduite (20 m~ de mercure ; 2,7 kPa)
à 50C.
Le résidu huileux obtenu est repris par 100 cm3
diacétate d'éthyle. La sQlution obtenue est refroidie k 0C
pendant 1 heure. Le précipité formé est séparé par filtration,
lavé 2 fois par 100 cm3 au total d'éther et séché BOU8 pression
réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 20C. On obbient ainsi
3,4 g d'acide N -~0 -t.butyl ~-(N_lauroyl L alanyl)-y-D glut~myl]
-benzyloxycarbonyl L,L dlamino-2, 6 thia-4 pim~lamique.
Rf = o,63 ~silicagel ; acétate d'~th~le-acide acétique
(3-1 en volumes).
On dissout 3,4 g d'acide ~2_[o -t.butyl ~ lauroyl
L alanyl)-y-D glutamyl] ~6-benzylox~carbonyl L,L diamino-2,6 thia-4
pimélamique dans un mélange de 17`cm3 d'aoide bromhydrique en
solution à 35 % dans l'acide acétique et 10 cm3 d'aoide acetique.
On agite le milieu réactionnel pendant 2 heures et le concentre à
seo sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 55C.
Le résidu huileux obtenu est trituré dans 30 cm3 d'acétate d'éthyle,
séparé par filtration, lavé 2 fois par 60 cm3 au total d'éther st
séché sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 XPa) à 20C.
On obtient ainsi 4 e de poudre beige que l'on chromatographie ~ur
90 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une
colonne de 3 cm de diamètre. Pour cela, on dissout 109 4 g de
poudre dans 50 cm3 de méthanol auquel on ajoute 7 om3 d'ammoniaque
(d = 0,92) et a g de gel de silice neutre (0,04-0,063 ~m). On
évapore à sec le mélange 90U9 pression réduite (ZO mm de mercure ;
2,7 kPa) ~ 50C et le résidu ainsi ob-tenu e~t chargé sur la
oolonne de silioe. On ~lue avec un mélange méthanol-ammoniaque
(d = 0,92)(999,5-0,5 en volumes) en reoueillant des ~ractions de
10 cm3. Les fraction~ 13 ~ 24 sont réunies, conoentrée~ ~ seo
sous pre~ion réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) ~ 50C. Le
résidu pâteux est trituré dans 100 cm3 d'éther, sép3ré par
filtration et séohé sous pression réduite (20 mm de meroure ;
2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 2,4 ~ de poudre que llon
~ 3 ~ ~
chromatographie sur 90 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm)
contenus dans une colonne de 3 cm de diamètre. Pour oela, on
dis~out les 2,4 g de poudre dans 30 cm3 de méthanol auquel on
ajoute 4 g de gel de sili¢e neutre (o,o4-0,063 mm). On évapore à
se¢ le mélange 90U9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)
à 50G et le résidu ain-si obtenu est chargé sur la colonne de
silice. On élue avec un mélange méthanol-ammoniaque(d = 0,92)
(999,5-0,5 en volumes) en recueillant des fractions de 5 cm3.
Les fractions 22 à 30 sont réunies, concentrées à sec 90U8 pres~ion
réduite ~20 mm de mercure ; 2,7 kP~ à 50C. Le résidu obtenu e~t
trituré dans 50 cm3 d'éther, séparé par filtration eb séché
- 90U3 pression réduite (20 ~m de mercure ; 2,7 kPa) ~ 50C. On
obtient ainsi 1,54 g de poudre. 1 g de cette poudre est mi~ en
~uspension dans 50 cm3 d'eau. On dissout la poudre en amenant le
p~ du mélange à 1,8 par addition d'acide chlorhydrique 0,1 ~
(40 cm3). Ensuite, on amène le p~ à 3,6 par addition de 20 cm3
de soude 0,1 ~. Le précipité apparu est séparé par filtration,
lavé par 30 cm3 d'eau et séché à l'air libre, puis sous pres~ion
réduite (0,3 mm de mercure ; O,04 kPa) à 50C. On obtient ainsi
0,66 g d'acide ~2-[~ -lauroyl ~ alan~ y-D glutamyl] L,L
diamino-2,6 thia-4 pimélamique.
~f = 0,36 ~silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau
(50-20-6-24 en volumes)]
~nalyse : Calc. % C 52,95 ~ 8,03 ~ 11,87 S 5,44
- 25 - ~r. 52,0 8,2 11,5 5,4
Spectre de masse : M = 589 (théorie = 589)
L'acide ~ -benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4
pimélamique peut être préparé de la façon suivante :
A une solution maintenue vers -75C de 2,54 g de
~-benzyloxycarbonyl L cystéinamide dans 80 cm3 d'ammoniac, on
ajoute 1,72 om3 d'une solution 5,8 ~ de méthylate da ~odium dan~
le méthanol. Ensuite, on ajoute 1,6 g de chlorhydrate d'acide
L x-amino ~-chloropropionique. Le milieu réaction~el est abandonné
pendant 18 heures à 20C environ. Le résidu ~olide obtenu est
~ 3 ~ ~ ~
76
repris par 50 cm3 d'eau, la phase aqueuse est débarrassée d'un
insoluble par filtration, extraite 3 fois par 60 cm3 au total
d'acétate d'éthyle, acidifiée à pE 3-4 par addition d'acide
citrique et refroidie à 0C. ~près 2 heures de repos à 0C, le
précipité apparu est sépar~ par filtration, lavé par 10 om3 d'eau,
3 fois par 30 cm3 au total d'acétate d'éthyle et 3 ~ois par
30 cm3 au total d'éther, séché SOU8 pression réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 0,83 g d'acide
~6-benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.
-~f = 0,54 ~silicagel ; n~butanol-pyridine-acide acétique-eau
(50-20-6-24 en volumes~]
Après hydrolyse, dérivati3ation et chromatographie sur
colonne capillaire optiquement active, on obtient :
L han : 99,2 % (théorie : 1)
Méso Lan : 0,8 % (théorie : ~)
D Lan : C-5 % (-th~orle : O)
EXEMP~E 15 ~
On aJoute 0,53 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution maintenue à -5C, de 1,88 g de ~ -lauroyl L alanyl)
20 a-D glutamate de t.butyle dan3 un mélange de 100 cm3 de tétra-
hydrofuranne et de O,58 cm3 de triéthylamine. ~e mélange e~t agité
pendant 20 minutes à -5C, puis on ajoute une solution refroidie
- à 2C de 1,5 g d'acide ~ -t.butyloxycarbonylglycyl L,L diamino-276
thia-4 pimélamique dans un mélange de 4,1 cm3 de ~oude ~ et
35 cm3 d'eau.
Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minute~ à
10C, puis pendant 20 heures à 20C environ, On évapore le tétra-
hydrofuranne par concentration 90u9 pression réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa)-à 50C ; le concentra-t est refroidi à 0C,
acidifié à p~ 2 par addition`d'acide chlorhydrique 1~ (7 cm3
environ).
Le mélange réactionnel e~t extrait 3 fois par 200 cm3
au total d'acétate d'éthyle. Les pha~es organiques réunies sont
séchée~ sur sulfate de 30dium et concentrées à sec 90U~ pres~ion
35 réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On ob-tient ain~i une
huile qui, triturée dans 100 cm3 d'éther, donne une poudre (2,1 g)
-
77 ~2~3~3
que l'on chromatographie sur 60 g de gel de silice neutre
(o,04~0,063 ~m) contenu~ dans une colonne de 2,2 om de diamatre.
Pour cela, on di~sout leæ 2,1 g de poudre dan~ 20 om3 d'acide
acétique et à la solution obtenue, on ajoute-4 3 de gel de silice
neutre (o,o4-o,o63 mm). On évapore à ~ec le mélange sous pression
réduite (20 mm de mercure) à 50C et le résidu ainsi obtenu est
chargé sur la colonne de silice~ On élue avec un mélange aoétate
d'éthyle-acide acétique (9-1 en volumes) en reoueillant des
fractions de 20 cm3. Les fractions 13 à 42 sont réuniesy ooncen-
- 10 trées à sec 90u~ pres~ion réduite (20 mm de meroure ; 2,7 kPa)
~ à 50C. Le résidu obtenu est trituré dans 200 cm3 d'ébher,
séparé par filtration et séché. On obtient ainsi t,3 g d'acide
-~01-t.butyl ~-(N-lauroyl L alanyl)-y-D glutamyl] ~6-t.butyloxy-
carbonylglycyl L,L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.
~f = 0,49 ~silicagel ; acétate d'éthyle-acide acétique
(8-2 en volume~]
On dissout 1,3 g d'acide ~2_~o -t.butyl N-(~-lauroyl
L alanyl)-y-D glutamyl] ~ -t.butyloxyoarbonylglycyl L,L diamino-2,6
thia-4 pimélamique dans 30 cm~ d'une solution anhydre d'aoide
ohlorhydrique 1,7 ~ da~s l'acide acétique. On agite le mélange
réactionnel pendant 1 heure, puls on le débarrasse d'~n très léger
insoluble par filtration, le concentre à seo sous pression réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le ré~idu ainsi obtenu est
trituré dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration,
lavé succe~sivement par 30 cm3 d'acétate d'éthyle et 2 fois par
60 cm3 au total d'éther et séché. On obtient ainsi 0,9 g de poudre
que l'on chromatographie sur 30 g de gel de silice neutre (0,04-
0,063 mm) contenus dans une colonne de 2,1 cm de diamè-tre. Onlélue
avec de l'acide acétique en recueillant des fractions de 10 cm3.
~es fractions 13 à 20 sont réunies, concentrées à seo sous pre~ion
r~duite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le résidu obtenu est
trituré dans 50 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé p æ filtration, lav~
par 30 cm3 d'éther et séché. On obtient ainsi 0,79 g de poudre
que l'on dissout dans 40 cm3 d'eau. On amène la phase aqueuse à
:
,
:
.
[D.3~
7a
p~ 3,5 par addition de 6 cm3 de soude 0,1 ~. Le pré¢ipité apparu
est séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'eau et séché sous
pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On obtient
ainsi 0,59 g d'acide ~2_[~ lauroyl L alanyl)-y~D glutamyl]
~ -glycyl L9L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.
Rf = 0,34 ~silicagel ; n.butanol-pyridine-acide acétique-eau
(50-20-6-24 en volumes)~
Analyse : Calo. % C 51,99 ~ 7,79 ~ 12,99 S 4,96
Tr. 49,9 8,0 12,8 4,9
Cendres sulfuriques : ~,9 %
L'acide ~6-t.butyloxycarbonylglycyl diamino-2(~), 6(L)
thia-4 pimélamique peut être prépar~ de la façon suivante :
h une aolution maintenue vers -75~ de 4,6 g de di t~butyl-
oxycarbonylglycyl L cystinamide dans 400 cm3 d'ammoniac, on a~oute
par petites portions du sodium ju~qu'à l'obtention d'une colo-
ration bleue persistante pendant quelques minutes. ~nsuite on
ajoute successivement du chlorure d'ammonium jusqu'à décoloration
d~ mélange réactionnel et 2,66 g de chlorhydrate d'acide ~ ~-amino
~-chloropropionique.Le mélange réactionnel est agité pendant
2 heures vers -75C, puis abandonné pendant 18 heure~ à 20G
environ. La pâte blanche ainsi obtenue est triturée dans 100 cm3
d'éthanol et filtrée. Le filtrat est concentré à sec sous pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Lè résidu huileux est
trituré dans 50 cm3 d'acide acétique et filtré. Le filtrat e~t
concentré à sec sous pression réduite (20 mm de meroure ; 2,7 kPa)
~ 50C. Cette opération est répétée 2 fois avec 60 cm3 au total de
méthanol. On obtient ainsi 10,5 g de résidu huileux que l'on
chromatographie aur 250 g de ~el de silice neutre (o,o4-o,063 mm)
contenus dans une colonne de ~,5 cm de diamètre. Pour cela, on
dissout les 10,5 g de r~sidu dans 50 cm3 de méthanol et à la
solution obtenue, on a~oute 20 g de gel de ~ilice neutre (0,04-
0,063 mm). On évapore à sec le mélange sous pression réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C et le résidu ainsi obtenu
est chargé sur la colonne de silice. On élue ~uccessivement avec
~ 3
- 79
1,15 litre d'un ~élange acétate d'éthyle-méthanol (1-1 en volumes),
850 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (2-8 en volume~),
en recueillant de fractions de 50 cm3. Les fractions 26 ~ 33 sont
réunies, concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) ~ 50C. Le résidu obtenu est trituré dans 50 cm3
d'acétate d'éth~le, séparé par filtration, lavé par 20 cm3 d'acétate
d'éthyle et séché sous pression réduite (0,3 mm de mercure ;
O,04 kPa) à 50~C. On obtient ainsi 2 g d'acide ~ -t.butyloxy-
carbonylglycyl dia~ino-2(L), 6(L) thia-4 pimél~mique.
~f = 0,41 ~silicagel ; n.butanol-pyridine-acide ac~tique-eau
(50-20-6-24 en volumes)~
~`]20 = _go (soude N ; c = 1)
Après hydrolyse, dérivatisation et chromatographie sur
colonne capillaire optiquement active, on obtient :
~5 L Lan : 95,5 % (théorie = 1)
D Lan : ~0,5 ~ (théorie = O)
Méso Lan : 4,5 % (théorie = O)
Le di-t.butyloxycarbohylglycyl L cystinamide peut être
préparé de la façon suivante:
On ajoute 13 cm3 de chloroformiate d'i~obutyle ~ une
solution, maintenue à -5C~ de 17,6 g de t.butyloxycarbonylglyoine
da~s un mélange de 1,7 litre de tétrahydrofuranne et de 14 cm3 de
triéthylamine. Le mélange est agité penda~t 20 mi~utes vers -5C,
puis on ajoute une solution refroidie ve~s 5C de 20 g de bromhy-
drate de L cystinamide dans un mélange de 100 cm3 de soude 1~ et
de 1 litre d'eau. Le mélange réactionnel e~t agité pendant guelques
minutes vers 0C, pUi9 pendant 18 heures à 20C environ~ ~nsuite
le tétrahydrofuranne est éliminé par concentration sous pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le conc2ntrat e~t
acidifié à pH 3 par addition d'acide citrique et extrait 3 foi~
par 1,5 litre au total d'acétate d'éthyls. La phase acétate d'éthyle
est séchée sur sulfate de ~odium et concentrée à sec ~ous pres~io~
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le résidu obtenu est
repris par 700 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé 2 fois par
.
il2~;~3~
200 cm3 au total d'étherO On obtient ainsi 19 g de poudre. 15 g de
cette poudre sont chromatographies sur 600 g de gel de silice
neutre (0,04-0,063 mm) contenu~ dan3 une colonne de 4,8 cm de
diamètre. Pour cela, on dissout les 15 g de produit dans 100 cm3
de méthanol et à la solution obtenue, on ajoute 15 g de gel de
silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange sou~
pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C et le résidu
ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On ~lue succes-
sivement avec 2,1 litres d'un mélange acétate d'éthyle-acide acé-
tique (97-3 en volumes), 199 litres d'un mélange ~cét~te d'éthyle-
acide acétique (96-4 en volumes)~~ 850 cm3 d'un mélange acétate
d'éthyle-aoide acétique (95-5 en volumes), 1,7 litre d'un mélange
acétate d'éthyle-acide acétique (94-6 en volumes)~ 850 cm3 d'un
, mélange acétate d'éthyle-acide acétique (9-1 en volume~), 900 cm3
d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (8~2 en volumes) et
950 om3 d'un mélange acétate d'éthyle-acide acétique (1~1 en volumes)
en recueillant des fractions de 50 cm3. Les fraotions 150 à 182
sont réunies, concentrées à 3ec 90u9 pression réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le résidu huileu~ obtenu e~t trituré
20 dans 400 cm3 d'éther, séparé par filtration, lavé 2 fois par
200 cm3 au total d'éther et séché sous pression réduite (0,3 mm
de mercure ; O,04 kPa) à 50C. On obtient aîn~i 7,5 g de
di-t.butyloxycarbonylglycyl L cystinamide.
Rf = 0,38 ~silicagel ; acétate d'éthyle-acide acétique
(9-1 en volumes)]
~MPLE 16 -
On ajoute 1,15 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
so}ution maintenue à -60C de 3951 g de ~ lauroyl ~ alanyl)
D isoglutamine dan3 un mélange de 260 cm3 de diméthylformamide
et de 1,23 cm3 de tr~éthylamine. Le mélange est a~ite pendant
20 minutes à -60Ct puis on ajoute une solution refroidie ~ 5C
de 3 g d'acide ~6-benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 6 (D,L) thia-4
pimélamique dans un m~lange de 8,8 cm3 de soude ~ et ~0 cm3 d'eau.
- ~ 2 ~ ~ 3
81
.
Le mélange réactionnel est ag~te pendant 10 minutes à
5C, pUi3 pendant 24 heure~ à 20C environ. On le débarrasse d'un
léger in~oluble par filtration, le dilue avec 700 cm3 d'eau et
l'acidifie à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 4~ (environ
6 cm3). Le précipité apparu est séparé par filtration, lavé succes-
sivement par 100 cm3 d'acide chlorhydrique 0,1 N et 3 foi~ par
600 om3 au total d'eau et ~éché à l'air libre. On obtien-t ainsi
5,6 g de poudre blanohe que l'on chromatographie sur 168 g de gel
de silice neutre (o,o4-o,063 mm) contenuc dan~ une colonne de
3,5 om de diamètre. Pour oela, on dissout les 5,6 g de poudre-
dans 30 cm3 d'acide aoétique et à la solution obtenue, on ajoute
12 g de gel de silice neutre (0,04-o,o63 mm). On évapore ~ sec
le mélange sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à
50C et le ré~idu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice.
On élue sucoe~3ivement aveo un mélange acétate d'éthyle-aoide
aoétique (7-3 en volumes) en recueillant de~ fraotions de 100 cm3.
Les fraotions 13 à 38 sont réunies, oonoentrées à sec sous pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. ~e résidu obtenu est
trituré dans 100 cm3 d'éther, séparé par filtration et séché. On
obtient ainsi 3,3 g d'acide ~2~ -lauroyl L alanyl) D i~o-
glutaminyl] ~ -benzyloxycarbonyl diamino-2(L), 6(D,L) thia-4
piméIamique.
On dissout 2,25 g d'acide N -[~ -lauroyl ~ alanyl)-D
isoglutaminyl] ~ -benzyloxyoarbonyl diamino-2(~), 6(D,L) thia-4
pimélamique dan~ 16 cm3 d'acide bromhydrique en solution à 35 %
dans l'acide acétiqus. On agite le mélange réactionnel pendant
35 minutes avec un agitateur à ultra-son~, puis on le verse dans
1,5 litre d'éther. On agite le mélange pendant 2 heure~ ~e
précipité obtenu est séparé par filtration, lavé 3 foi~ par 150 cm3
au total d'~ther, et dissous dans 350 cm3 d'sau. ~a phase aqueu~e-
est neutralisée à p~ 7 par addition d'ammonia~ue 0,1 ~ Après
16 heures de repos`à 20C, le précipité apparu est séparé par
filtration, lavé successivement 2 fois par tOO cm3 au total d'eau,
par 100 cm3 d'éther, 50 cm3 d'acétone, 50 cm3 d'acétate d'éthyle,
~2
50 cm3 de méthanol et 50 cm3 d'éther et séché 90~ pression
réduite (0,3 mm de mercure ; 0~04 kPa) à 20C. On obtient ain~i
0,8 g de poud~e auquel on joint 0,3 g de poudre obtenue dans un
ess~i similaire et que l'on chromatographie 3ur 55 g de gel de
silice neutre (o,o4-o,063 mm) contenus dans une colonne de 2,5 cm
de diamètre. Pour cela, on dissout les 1,1 g de poudre dans
20 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 3 g
de gel de silice neutre (o,04-0,063 mm). On évapore à sec le
mélange sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C
et }e résidu ainsi obtenu est chargé sur la c~lonne de 3illce.
On élue avec un mélange méthanol-acétate d'éthyle-ammo~i2que
(d = 0,92)(65-35-0,25 en volumes) en recueillant des fractions de
50 cm3. Les fraotions 7 à 13 ~ont réunie~, concentr~es à se~ cou~
pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le résidu
obtenu est trituré dans 30 cm3 d'éther, séparé par filtration,
lavé succQssiveme~t par 5 cm3 d'eau, 3 fois par 15 cm3 au total de
méthanol et 3 fois Far 30 cm3 au total d'éther et séché sous
pression réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 50C. On obtient
ainsi 0,41 g d'acide ~ -[~ -lauroyl L alanyl) D isoglutaminyl]
diamino-2(L), 6(D,L) thia-4 pimélamique.
Rf = o,60 ~silicagel ; pyridine-acétate d'éthyle-acide acétique-
eau-méthanol (30-40-6-10-10 en volumes)]
~nalyse : Calc. ~ C 53,04 ~ 8,21 ~ 14,27 S 5,44
~r. 51,1 7,9 13,6 5,4
Spectre de masse : M = 588 (théorie - 588)
E~lPIæ 11 -
On ajoute O,55 cm3 de ohloro~ormiate d'isobutyle à une
solution, maintenue à -8C, de 73,2 mg de ~-t.butyloxycarbonyl
glycine dans un mélange de 120 cm3 de tétrahydrofuranne et de
0,58 om3 de triéthylamine. he mélange e~t -agité pendant 2~ minutes
à -8C, puis on ajoute une solution refroidie à 4~C de 2,46 g
d'acide ~2-[~ lauroyl L alanyl) D isoglutaminyl] diamino-2(L),
6(D,L) thia-4 pimélamique dan~ un mélange de 4,18 cm3 de soude
1 ~ et 120 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel e~t agité pendant
~2~3~
83
5 minutes à 0C, puis pendant 20 heure~ à 20C environ. On~
évapore le tétr2hydrofuranne par concentra-tion 90ug pre~sion
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. ~e conoentrat est
acidifié à p~ 2 par addition d'acide chlorhydrique 4 ~0 Le
préoipité apparu est ~éparé par filtration, lavé suoce~sivement
4 fois par 200 cm3 au total d'eau et 3 foi~ par t50 cm3 au total
d'acétate d'éthyle et séché sous pression réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 2,25 g de poudre
blanche que l'on chxomatographie sur 112 g de gel de silice
10 neutre (o,04-0,063 mm) con~enus dans une~colonne de 3,2 çm
de diamètre. On élue successivement avec 1 litre d'un mélange
acétate d~éthyle-aoide acétique (20-80 en vol~mes) et 1 litre
d'a¢ide acétiq~e en recueillant des fraotions de 25 cm3. Les
fractions 41 à 80 sont réunies,~ oonce~trées à sec sous pres~ion
15 réduite (20 mm de mercurè ; 2,~ kPa~ à 50C. Le résidu obtenu
est trituré dans 100 cm3 d'éther, séché sous pression réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C~ On obtient 1,04 g d'acide
-C~-(N-lauroyl ~ alanyl) D isoglutaminy~ N6-(t.b~tyloxycarbonyl-
glycyl) diamino-2(L), 6tD,L) -thia-4 pimélamique.
Rf = 0,57 Csilicagel ; n.butanol -~ pyridine - acide acétique-
eau (50-20-6-24 en volumes)]
Rf = 0,69 [silicagel ; acétate d'éthyle - acide acétique
(2-8 en volumes)~
On dissout 0,88 g d'acide ~ -[~ lauroyl L alanyl D
isoglutamin~l] N -t.butyloxyoarbonyl diamino-2(L), 6(D,L) -thia-4
pimélamique dans 12 cm3 d'une solution anhydxe d'acide chlorhy-
drique 1,6 ~ dans l'acide aoétiqua. On agite pendant 35 minutes.
On verse le milieu réactionnel dans 120 cm3 d'éther, on agi-te
pendant 1 heure. Le précipité formé e~t séparé par filtration,
lavé 3 oi~ par 60 cm3 au total d'éther et géché B0U8 preg~ion
réduite (20 mm de mercuxe ; 2,7 kPa) à 20C. La poudre ainsi
obtenue est dissoute dans 70 cm3 d'eau. On amène le p~ de cette
sQlution à 5-6 par addition d'ammoniaque 0,1 ~. Après 1~2 heure
de repos, on séparQ le précipité formé par filtration, le lave
84
successivement 3 fois par 60 cm3 au total d'eau, 3 fois par
60 cm3 au total d'éther, 2 fois par 40 cm3 au total d'acétate
d'éthyle et 2 fois par 40 cm3 au total d'éther et le sèche sous
pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient
ainsi 0,55 g de poudre blanche que l'on chromatographie 9UI' 25 g
de gel de silice neutre (o,04-0,063 mm) contenus dans une colonne
de 1,6 cm de diamètre. On élue avec de l'acide acétique en
recueillant des fractions de 10 cm3. Les fractlons 58 à 72 ~ont
réunies, concentrées à sec 90u9 pression réduite (20 mm de mercure ;
10 2,7 XPa) ~ 50C. Le résidu obtenu.est trituré dans 50 cm3 d'éther,
séparé par filtration, lavé 3 fois par 60 om3 au total d'éther et
séche sous pression réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 50C~
On obtient ainsi 300 mg d'acide ~ -lauxoyl L alanyl) D iso-
glutaminyl] ~ -glycyl-diamino-2(~), 6(D,L) thia-4 pimélamique.
Rf = Oj33 ~silicagel ; n.butanol : pyridine acida acétique -
eau (50-20-6-24 en volumes)]
~nalyse : Calc. % C 52,07 H 7,96 ~ 15,18 S 4,96
~r. 5,5 8,0 14,1 4,9
EXEMPL~ 18 -
On ajoute 1 cm3 de chloroformia-te d'isobutyle à une
solution maintenue à -8C, de 3,38 ~ de O-acétyl D laatoyl-h
alanyl- ~-D glutamate de benzyle dans un mélange de 160 cm3 de
tétrahydrofuranne et de 1,12 cm3 de triéthylamin0. Le mélange e~t
agité pendant 20 minutes à -~C, puis on ajoute une solu-tion
refroidie à 2C de 3,02 g d'acide ~ -benzyloxycarbo~yl L,L diamino-
2,6 thia-4 pimélamique dans un mélange de 16 cm3 de soude ~ et
60 cm3 d'eau.
Le mélange réactionnel est agité pendant 5 minutes ~ ~8C,
puis pendant 20 heures à 20C environO On évapore le tétrahydro-
furanne par concentxation sous pression réduite (20 mm de mercure ;2t7 kPa) à 50C ; le concentrat est refroidi à 0C, acidifié à pH 2
par addition d'acide chloxhydrique 4 ~ (S cm3 environ), extrait
5 fois par 300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. Le~ phase~ orga~
niques réunie~ sont lavée~ successivement par 40 cm3 d'eau
~2~ 3~3
. . .
et 20 cm3 d'une solution saturée de chlorure de sodium, séchées sur
sulfate de sodium, concentrées à ~ec ~OU8 preB~iOIl réduite (20 mm
de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On obtient ainsi 5,68 g d'huile que
l'on chromatographie sur 100 g de gel de silice neutre (0,04-
0,063 mm) contenus dans une colonne de 3 cm de diamètreO On éluesuccessivement avec 400 cm3 d~acétate d'éthyle, 360 cm3 d'un
mélange acétate d'éthyle - acide acétique (98-2 en ~olume~),
320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - acide acétique (95-5 en
volumes) et 280 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - aride acétique
(9-1 en volumes) en recueillant des fractions de 40 cm3. Lea
fractions 23 à 34 sont réunies, concentrées à sec aoua pres~ion
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa~ à 50C. On obtient~ ainsi
5,o6 g d'acide ~6-~01-benzyl ~-(O-acétyl D lactoyl L alanyl)-y-D
glutamyl] ~2-benzyloxycarbonyl L,h diamino-2,6 thia-4 pimélamique
sou~ forme d'h~ile.
R~ = o,67 ~silicagel ; n.butanol - pyridine - a¢ide aoétique -
eau (50-20-6-24 cn volumes)]
Rf = 0,23 ~silicagel ; acétate d'éthyle - acide acétique
(9-1 en volumes)~
On dissout 3,16 g d'acide ~ -[O -benzyl ~-(O-acétyl D lac-
toyl L àlanyl~y-D glutamyl] ~2-benzyloxycarbonyl h,h diamino-2,6
thia-4 pimélamique dans un mélange de 13 cm3 d'acide bromhydrique en
solution à 35 ~ dans l'acide- acétique et de 11 cm3 d'acide acé-
tique. On agite le milieu réactionnel pendant 2 heures, puis on y
a~oute 500 cm3 d'ether et on lais~e repo~er une nuitO he précipité
apparu eet ~éparé par filtration, lavé 3 fois par 150 cm3 au total
d'éther et séché ~ous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)
à 20C. On obtient ain~l 2,22 g d'acide ~ -C01-benzyl ~-(O-acétyl
D lactoyl h alanyl)-y-D glutam~l~ h9L diamino-2,6 thia-4 pim~lamique
80U8 forme de poudre hygro~copique,
Rf = 0,83 ~silica6el ; isopropanol - eau (6-4 en volume~)]
:
.
" ~
86 ~2~3~ .
On di3sout 2,20 g d'acide ~ -~0 -benzyl ~-(O-a¢étyl
D lactoyl L alanyl) y-D glutamyl] ~,L diamino-2,6 thia-4 piméla-
mique dan~ un mélange de 14 cm3 de méthanol et de 14 om~ de soude
1~. On agite lemélange ré~ctionnel pendant 2 heure~. On la neutra-
lise à pH 7 par addition d'acide chlorhydrique 1~, on le concentre
~ous pres~ion réduite (20 mm de meroure ; 2,7 kPa) ~ 50C, on le
reprend par 3 cm3 d'eau et on l'acidifie avec 3,5 om3 d'acide
chlorhydrique 4~. La solution ainsi obtenue e~t chromatographiée
sur une colonne de Sephadex*G-10 de 2 mètres de hauteur et 2,2 cm
~10 de diamètre. On élue avec de l'eau en recueillant des fractions
de 5 cm3. Le~ fractions 57 à 69 sont réunies, lyophilisée~ et
séchées sous pression réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à
-600C. On obtient ainsi 900 mg d'acide ~6~ -D lactoyl L alanyl)
y-D ~lutamyl] L,L diamino-2,6 thia-4 pimélamique,
Rf = 0,75 Csilicagel ; isopropanol - eau
(6 4 en ~olumes)]
Analyse : CaloO ~ C 42,58 E 6,10 ~ 14,60 S 6,69
Tr. 39'7 6,4 13,2 6,4
L'O-acétyl D lactoyl-L alanyl-x-D glutamate de benzyle
peut être préparé de la façon-~uivante :
On ajoute 5,5 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution maintenue à -60C, de 5,61 g d'acide O-acétyl D lac-tique
dans un mélange de 425 cm3 de tétrahydrofuranne et de 6 cm3 de
triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à -60C, pui9
on aJoute une solution re~roidie à 3C de 14,66 ~ de chlorhydrate
de L alanyl-x-D glutamate de benzyle dans un mélange de 85 om3
de soude ~ et 42 cm3 d'eau.
Le mélange réaction~el e3-t agité pendant quelques
minutes à 0C, puis pendant 18 heures à 20C environ. On acidifie
30 le méla~gel à pH 2 par addition d'acide chlorhydrique 1 ~ (50 c~3
environ). On évapore le tétrahydrofuranne par conce~tration sous
pre~sion réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Au concentrat,
on ajoute 100 cm3 d'acétate d'éthyle et 35 cm3 d'acide chlorhydrique
1~. La phase or~anique est séparée, la phase aqueuse e~t extraite
* Marque de commerce
? ~;,
3~3
87
.
3 fois par 150 cm3 au total d'aoétate d'éthyle. ~outes les phases
organiques sont réunies, lavées par 50 cm3 d'une solution saturée
de chlorure de sodium, séchées sur sulfate de sodium et concentrées
à sec 80U9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C.
On obtient une huile que l'on chromatographie sur 550 ~ de gel de
silice neutre (0,03-0,2 mm) contenus dans une colonne de 5 cm de
diamètre. On élue succes~ivement avec 500 cm3 d'un mélange acétate
d'éthyle - méthanol (98-2 en volumes), 700 cm3 d'un mélange acétate
d'~thyle - méthanol (95 - 5 en volumes), 400 cm3 d'un mélange
acétate d'éthyle - méthanol (9-1 en volumes), 600 cm3 d'un m~lange
acétate d'éthyle - méthanol (8~2 en Yolumes) en recueillant des
fractions de 100 cm3. Les fractions 13 à 22 sont réunies, concen-
trées à sec 90U8 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à
50C. On obtient ainsi 8,78 g de O-acét~l D lactoyl-L alanyl-K-D
~lutamate de benzyle sous forme d'huile.
Rf = 0,63 Csilicagel ; acide acétique - aoétate d'éthyle
(9-1 en volumes)]
EXEMPLE 1~ -
On a~oute 0,91 cm3 de chloroformiate dli~obutyle ~ une
solution maintenue à -8C7 de 3,04 g de ~ -octanoyl L alanyl)
a-D glutamate de benzyle dans un mélange de 140 cm3 de tétra-
hydrofuranne et de 0,98 cm3 de triéthylamine. ~e mélange est agité
pendant 20 minutes à -8C, puis on ajoute une solution refrbidie à
20 de 2,64 g d'acide ~ -benzyloxycarbonyl ~,~ diamino-2,6 thia-4
pimélamique dan~ un mélange de 14 cm3 de soude ~ et 53 cm3 d'eau.
Le mélange réactionnel est agit~ pendant 5 minu-te~ à ooa,
puis pendant 4 heures à 20C environ. On évapore le tétrahydro-
furanne par concentration 90U8 pression réduite (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) à 50C ; le concentrat est refroidi à 0C, acidifié
p~ 2 par addition d'acide ohlorhydrique 4 ~ ~5 cm3 environ),
extrait 5 fois par 300 cm3 au total d'aoétate d'é-thyle. Les phases
orga~iques réunies sont lavées successivement par 25 cm3 d'èau et
25-¢m3 d'une solution saturée de chlorure de ~odium, ~échée~ ~ur
sulfate de sodium et conoentrées à sec sous pression réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 XPa~ à 50C. On obtient ainsi 5,18 g d'une
9~3
88
poudre beige clair que l'on chromatographie sur 100 g de gel de
3ilice neutre (o,04-0,063 mm) contenus da~s une colonne de 3 cm
de diamètre. On élue successivement avec 160 cm3 d'acétate
d'éthyle, 360 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - acide acétique
S (97-3 en volume3), 720 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - acide
acétique (95-5 en volumes) et 680 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle-
acide acétique (9-1 en volumes) en recueillant des ractions de
40 cm3. ~e~ fractions 15 ~ 48 ~ont réunies, concentrées à ~ec 90U~
pres~ion réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le résidu
obtenu est trituré dans 100 cm3 d'~ther, séparé par filtration et
séché. On oW ient ainsi 3,33 g d'acide ~6_~o -benzyl ~ -octanoyl
L alanyl)-y-D glu-tamyl] ~2-benzyloxycarbonyl L,~ diamino-2,6 thia-4
pimélamique.
Rf = 0,37 ~silicagel ; acétate d'éth~le - acide acétique
(9-1 en volume~)]
Spectrométrie de masse : M = 757 (théorle a 757)
On dissout 3,33 g d'acide ~6-[01-benzyl ~ -oc-tanoyl
L alanyl)-y-D glutamyl] ~2-benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4
pimélamique dan~ un mélange de 33 cm3 de méthanol et de 9,7 cm3
de soude 1 ~. On agite le milieu réactionnel pendant-60 minutes.
On évapore en partie le méthanol par concentration ~ou~ pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. Le concentrat est
dilué par 30 cm3 d'eau-, acidi~ié à pE 1 par addition d'acide
chlorhydrique 1 ~. On laisse reposer pendant 18 he~-re~. ~ne huile
déoante sur le~ parois ; elle est séparée par décantation, lavée
2 fois par 40 cm3 au total d'eau et séchée sous pression réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient ainsi 2,86 g
d'huile que l'on chromatographie sur 77 g de gel de ~ilice neutre
(o,o4-o,o63 mm) contenus dans une colonne de 3 cm de diamètre. Pour
cela, on dissout les 2,86 g d'huile dan~ 30 om3 d'acide acétique
et ~ la solution obtenue, on ajoute 8 g de gel de silice neutre
(o,o4-o,063 mm). On évapore ~ sec le mélange 90U9 pression réduite
(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) ~ 50C et le résidu ainsi obtenu est
chargé sur la colonne de silice. On élue successivement aveo
80 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - acide acëtique (9-1 en
volumes), 80 cm3 d'un mél~nge acétate d'éthyle - acide acétique
~25i~3~l~
89
(8-2 en volumes), 280 d~3 d'un melange acétate d'éthyle - acide
acétique (1-1 en volumea) en reoueillant des fractions de 40 cm3.
Les fractions 5 à 11 ~ont réunies, concentrées à seo sous pression
réduite (20 mm de meroure ; 2,7 kPa) à 50C. Le résidu est trituré
dans 40 cm3 d'acétate d'éthyle, séparé par filtration et séché.
On obtient ain~i 1,94 g de poudre que l'on chromatographie sur
80 g de gel de silice neutre (0,04-0,063 mm) contenu~ dans uné
colonne de 3,5 cm de diamètre. Pour cela, on dissout le~ 1,94 g
de poudre dan~ 30 cm3 d'acide acétique et à la solution obtenue,
on ajoute 6 g de gel de silice neutre (0704-0;063 mm~. On évapore
à aec le mélange 90U9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)
à 50C et le réaidu ainai obtenu esb chargé sur la colonne de ailioe.
On élue successivement avec 600 cm3 d'un mélange acétate d'éthyls -
acide acétique (8-2 en volumes) et 400 cm3 d'un mélange acétate
d'éthyle - acide acétique (7-3 en volumes) en recueillant des
fractions de 40 cm3. Les fractions 7 à 25 sont réuniea, concentrées
à aec aoua pression réduite (20 mm de mercure ;-2,7 kPa) à 50C.
Le résidu obtenu est trituré dans 30 cm3 d'éther, séparé par
filtration et séché. On obtient ainsi 1744 g d'acide ~ -[~ -octa-
noyl L alanyl)-y-D glutamyl] ~ -benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6
thia-4 pimél~m;que.
Rf = 0,52 [silicagel ; n~butanol - pyridine - acide acétique -
eau (50-20-6-24 en volumes)]
On disaout 1,4 g d'acide ~6-[~ -octa~oyl ~ alanyl)-~-D
glutamyl} ~2-benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4 pimélamique
dans un méla~ge de 5,6 cm3 d'acide bromhydrique en ~olution à 3
dans l'acide acétique et de 5 cm3 d'acide acétique~ On agite le
mélange réactionnel pendant 2 heures à 28C, le concentre à sec
sous pression réduite (20 mm de merdc,~th 7 2,7 kPa) ~ 50 C. ~e
résidu obtenu est trituré dans 60 cm~. ~ne huile décanté sur les
parois, elle est séparée par décantation, retriturée dans 50 cm3
d'éther, separée a nouveau par décantation, dissoute dans 200 cm3
d'eau. Cette phase aqueuse est concentrée à sec 90u9 preasion
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 55C. On obtient ain~i une
huile que l'on chromatographie sur ao g de gel de 3ilice neutre
(o,o4-o,063 mm) contenus dans une colonne de 3 cm de diamètre.
On élue avec un mélange méthanol - acé-tate d'éthyle - ammoniaque
5 (d = 0,92)(75-25-0,5 en volumes) en recueillant des ractions de
20 cm3. Les fractions 15 à 21 sont réunies, concentrées ~ sec
sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On
obtient ainsi 460 mg de poudre blanche. 360 mg de cette poudre
. ~ont aissous danc 5 cm3 d'eau et chromatographiés sur une colonne
de Sephadex G-10de 2 mètres de hauteur et 2,2 cm de diam~tre. On
élue a~ec de l'eau en recueillant des fractions de 5 cm3. Les
fractions 68 à 84 ~ont réunies, lyophilisé~s at séchées 90U8
pression réduite (0,3 mm de mercure ; 0,04 kPa) à 60Co On obtient
ainsi 300 mg d'acide ~6~ -octanoyl L alanyl)-y-D glutamyl~
L,L diamino-2,6 thia-4 pimélamique.
Rf = 0,25 ~silicagel ; n.butanol - pyridine - acide acétigue -
eau (50-20-6-24 en volumes)]
Analyse : Calc. % C 49,52 E 7,37 ~ 13,12 S 6,01
Tr. 45,3 7,4 11,7 5,7
Cendres sulfuriques : 1 %
Le ~-octanoyl ~ alanyl-a-D glutamate de benzyle peut
être préparé de la façon suivante :
On ajoute 3,6 cm3 de chloroformiate d'isobutyle dans une
solution, maintenue à -1C, de 3,95 g d'acide oc-tanoique dans
140 cm3 de tétrahydrofuranne et 3,8 cm3 de triéthylamine. Le
mélange e~t agité pendant 20 minu-tes à -1C, puis on ajoute une
solution, refroidie à 0C, de 9,45 6 de chlorhydrate de L alanyl~
~-D glutamate de benzyle dan~ un mélange de 54,8 cm3 de soude 1
et 30 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pend~t 1 heure
à -1C puis pendant 20 heures~à 20C environ. Il est ensuite
aoidifié à p~ 1 par addition d'acide chlorhydrique 1 ~. Le tétra-
hydrofurahne e~t évaporé sous pression rédui-te (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) à 45C, puis le concentrat est extrait par 100 cm3
d'acétate d'éthyle. La phase organique ainsi obtenue e~t la~ée
2 fois par 50 cm3 au total d'acide chlorhydrique 1 ~ et par
_
~2~i~3~
91
25 cm3 d'une 301ution saturée de ohlorure de sodium et ooncentrée
à sec ~OU9 pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 45C.
On obtient ainsi 10 g d'une huile jaune pâle qui est ohromatogra-
phiée sur une oolonne de 2~5 cm de diamètre contenant 200 g de gel
de silice neutre (o,063-0,20 mm). On élue`avec de l'acétate d'éthyle
en recueillant des fractions de 100 cm3~ hes fractions 7 à 9
réunies sont concentrées à sec 90u~ pression réduite (20 mm de
mercure ; 2,7 kPa) à 45C. Le résidu obtenu est tritur~ dans
100 cm3 d'un melange éther - éther de pétrole ~P.~. = 35-600C)
(1-4 en volumes), ~éparé par filtration et séché. On obtient
ainsi 3,27 g de ~-octanoyl L alanyl-a-D glutamate de benzyle
sous orme d'une poudre blanche.
~f = o,56 Csilicagel ; acétate d'éthyle - méthanol
8 ~ en volumes)]
EXæMP~E 20 -
On a~oute 1 cm3 de chloroformia~e d'isobutyle à une
solution maintenue à 10C, de 5,047 g de ~ -docosanoyl ~ alanyl)
x-D glutamate de benzyle ~ans un mélange de 160 cm3 de tétrahydro-
furanne et de 1,12 cm3 de triéthylamine. he mélange est agit~
pendant 20 minutes à 10C, puis on ajoute une solution refroidie à
2C de 3,023 g d'acide ~ -benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia-4
pimélamique dans un mélange de 16 cm3 de ~oude ~ et 60 cm3 d'eau.
- Le mélange réactionnel est agité pendant 16 heure~ à
20C environ. On acidifie le mélange réactionnel ~ p~ 1 par addition
de 6 cm3 d'acide chlorhydrique 4 ~, on l'extrai-t 5 foi~ par
300 cm3 au total d'acétate d'éthyle. ~es pha3es organiques réunie~
sont lavées successivement par 30 cm3 d'eau et 30 cm3 d'une 901u-
tion saturée ae chloru~e de ~odium, 3échées sur sulfate de
sodium et concentrées à ~ec sou~ pression réduite (20 mm de mercure;
2,7 kPa) à 50C. On obtient ainsi 7,7 g de solide que 1'on chroma-
tographie sur 150 ~ de gel de silice neutre ~0~04-0,063 mm) contenus
dans une colonne de 3,5 cm de diamètre~ Pour cela, on dissout les
7,7 ~ de poudre dans 60 cm3 d'acide acétique et à la solution
2 ~ 2~
obtenue, on ajou-te 20 g de gel de silice neu-tre (0,04-0,063 mm).
On évapore à ~e¢ le mé~-ange sous pression réduite (20 mm de.
-mercure ; 2,7 kPa) à 50C et le résidu ainsi obtenu e~t chargé
9ur la colonne de silice. On élue successivement avec 240 cm3
d'acétate d'éthyle, 320 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle -
acide acétique (98-2 en volumes), 640 cm3 d'un mélange acétate
d'éthyle - acide acétique (~5 5 en volumes), 360 cm3 d'un mélan~e
acé-tate d'éthyle - acide acétique (9-1 en volume3), 440 cm3
d'un mélange aoétate d'éth~le - acide acétique (8-2 en volumes)
et 400 cm3 d'acide acétique en recueillant des fraotions de 40 cm3;
Les fractions 11 à 60 30nt réunie~, concentréea à sec sou3
pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On obtient
ainsi 4,51 g d'acide ~6_[o -benzyl ~ docosanoyl ~ alanyl)-y-D
glutamylJ ~2-benzyloxycarbonyl L,L diamino-2,6 thia 4 pimélamique
. 15 impur.
~f (t~che principal-e) - 0,72 [silicagel ; acétate d'éthyle -
acide acétique (9-1 en volumes)~
On di980ut 4,4 g d'acide ~ -~0 -benzyl ~ -doco3anoyl
~ alanyl)-y-D glutamyl]N2-benzyloxyoar~onyl L,~ diamino-2,6
thia-4 pimélamique dan9 un mélange de 220 cm3 de mé-thanol et
10,1 cm3 de soude 1 ~. On agite le mélange réactionnel pendant
, 2 ~oUr9, le verse sur un mélange de 670 cm3 d'eau et 13 cm3
d'acide chlorhydrique 1 ~ ; le précipité obtenu e~t séparé par
filtration, la~é 5 fois par 125 cm3 au total d'eau et séché sous
pre99ion réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 20C. On obtient
ainsi 2,1 g de poudre crème que l'on dissout dans un mélange de
8 cm3 d'acide bromhydrique en solution ~ 33 % dan3 l'acide acé-
tique et de 8 cm3 d'acide acétique. On agite le méla~ge réactionnel
pendant 3 heure~ à 20Co L'insoluble formé est sépar~ par filtra-
tion, la~é suocessivemen~ 5 foi3 par 12,5 cm3 au total d'acideacétique, par 5:cm3 d'éther et par 5 cm3 d'éther de pétrole
(P.~.- 35-600C), séché sous pression réduite (20 mm de mercure ;
2,7 kPa) ~ 20C. On obtient ~insi 1,66 g de poudre crème. Les
filtrats sont réunis, concentrés à sec sous pression réduite (20 mm
de mercure ; 2,i kPa) à 20C,repris 3 fois par 150 cm3 au total
d'éther, concentrés à 3ec sous pression réduite (20 mm de mercure g
2,7 kPa) à 30C et repris par un mélange de 25 cm3 d'éther et de
25 cm3 d'éther de pétrole (P.~. = 35-60oC)O ~e solide est sépa~é par
.. .
.
93
filtration puis est lavé ~ fois par 20 cm3 au total d'éther de
pétrole (P~Eo = 35-600C) et séché sous pression réduite (20 mm
de mercure ; 297 kPa) ~ 20Co ~a totalité de la poudre obtenue
(1 ?66 g + 0,55 g) est versée dans 500 cm3 d'eau for-tement agitée.
Après 1 heure d'agitation, le précipité est ~éparé par filtration,
lavé 3 fois par 150 cm3 au total d'eau et séohé sous pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa)à 20C. On obtient ainsi 1,52 g
de poudre crème que l'on chromatographie sur 45 g de gel de silice
neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2 cm de
diamètre. Pour cela, on dissout 1,52 g de poudre dans 60 cm3 d'acide
acétique tiédi à 60oC et, à la solution obtenue, on ajoute 5 g de
gel de sill-ce neutre (o,04-0,063 mm). On évapore à sec Ie mélange
sous pression réduite-(20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C.et le
résidu ainsi obtenu est chargé sur la colonne de silice. On élue
avec de l'acide acétique en recueillant des fractions de 30 cm3.
Les fractions 11 à 27 sont réunies, concentrées à sec sous pression
réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On obtient ainsi
720 mg de poudre rosée que l'on chromatographie ~ur 36 æ de ~el de
silice neutre (0,04-0,063 mm) contenus dans une colonne de 2 cm de
diam~tre. Pour cela, on dissout les 720 mg de poudre dans 30 cm3
d'acide acétique et à la solution obtenue, on ajoute 3 g de ~el de
silice neutre (0,04-0,063 mm). On évapore à sec le mélange 90u~
pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C et le ré8idu ainsi
ohtenu est chargé sur la colonne de ailice. On élue avec un mélange
acétate d'éthyle - acide acétique (2-8 en volume~) en recueillant
des fractions de 40 om3, Les fractions 12 à 29 sont réunies,
concentrées à sec sous pression r~duite (20 mm de meroure ; 2,7 kPa)
à 50C. Le résidu obtenu est trituré dans un mélange de 25 cm3
d'éther et 25 cm3 d'éther de pétrole (P.E.=35-60QC), séparé par
filtration et séché sous pres~ion réduite (0,3 mm de merc~re ;
- o,O4 kPa) ~ 20C. On obtient ainsi 220 mg d'acide ~6-~ -docosanoyl
L alanyl)-y-D glutam~l] L,~ diamino-2?6 thia-4 pimélamique.
Rf = 0,32 ~silicagel ; n~butanol~- pyridine - acide acétique -
eau (50-20-6-24 en volumes)~
Rf = 0,60 Csilicagel ; acide acétique]
Spectre de masse : M = 729 (théorie : 729)
~2~ 9
94
. .
Le ~-doco3anoyl L alanyl-K-D glutamate de benzyle peut
être préparé de la façon 3uivante :
On ajoute 1,95 cm3 de chloroformiate d'isobutyle à une
solution, maintenue à 25Ct de 5,19 g d'acide docosanoIque dans
un mélange de 150 cm3 de tétrahydrofuranne et de 2,1 cm3 de
triethylamine. Le mélange est agité pendant 20 minute~ à 25C,
puis on ajoute une solution de 5,69 g de chlorhydrate de ~ alanyl-
a-~ glutamate de benzyle dans un mélange de 33 cm3 de souae 1 ~ et
17 cm3 d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 30 minutes
verg 30C, pUi8 pendant 18 heures vers 20C environ. On aJoute
alors 100 cm3 d'eau et on acidifie à pE 1. On obtient un précipité
que l'on sépare par filtration, lave 3 fois par 75 cm3 au total
d'eau et seche 80U9 pression réduite (0,~ mm de mercure ; 0,04 kPa)
à 20C. On obtient ainsi 6,53 g d'uné poudre blanche. On en disaout
15 6 g dans 50-cm3 de tétrahydrofuranne contenant 20 g de gel de
silice neutre (o,o4-Q,o63 mm). On concentre à ~ec le mélange ~ous
pres~ion réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C et on charge
l'ensemble sur une colonne de 3,5 cm de diamètre contenant 180 g
de gel de silice neutre (o,04-0,063 mm). On élue successivement par :
20 1300 cm3 d'un mélange cyclohexane - acétate d'éthyle (1-1 en volumes)
600 cm3 d'acétate d'éthyle
500 cm3 d'un mélange ac~tate d'éthyle - tétrahydrofuranne
(95-5 en volumes)
900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - tétrahydro~uranne
(9-1 en volumes)
800 cm3 d'un mélange acétat~ ;d'éthyle - tétrahydrofuranne
(8-2 en volumea)
1000 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - tetrahydrofuranne
(6-4 en volumes)
- 30 900 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - tétrahydrofuranne
(4-6 en volumes)
500 cm3 d'un mélange acétate d'éthyle - tétrahydrofuranne
(2-8 en volumes) et
600 cm3 de tétrahydrofuranne en recueillant des fractions de
100 cm3.
~ _.. .... ~
Les fractions 17 à 68 réunies, sont concentrées à sec
sous pression réduite (20 mm de mercure ; 2,7 kPa) à 50C. On
obtient ainsi 3,31 g de ~-docosanoyl L alanyl-a-D glutamate de
benzyle.
Rf = 0~54 Csilicagel ; acétate d'éthyle - tétrah~drofuranne
(8-2 en volumes)]
.
. .
