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WO 97/37681 1
PCT/FR97/00614
MEDICAMENT
OPTIMISANT LA VISCOSITE DES MUCUS ET
STIMULANT LE FONCTIONNEMENT DE L'INTESTIN
L'invention se rapporte au domaine de la biologie et plus particulièrement à
celui de la
chimie thérapeutique.
L'invention a pour objet des compositions pharmaceutiques et/ou diététiques, à
base d'un
enzyme ou d'un complexe enzymatique contenant cet enzyme, pouvant contribuer à
la
prévention et/ou au traitement de maladies.
Elle a plus particulièrement pour objet des compositions pharmaceutiques à
base d'un
enzyme ou d'un complexe enzymatique contenant cet enzyme stimulant les
fonctions de
l'intestin, et pouvant ainsi contribuer à la prévention et/ou au traitement
des maladies
dégénératives liées au vieillissement.
Elle a spécifiquement pour objet des compositions pharmaceutiques renfermant à
titre de
principe actif un ou plusieurs enzymes extraits ou contenus dans le complexe
enzymatique obtenu par mise en culture de Streptomyces fradiae dans les
conditions
définies dans le brevet français 2.600.340 au nom du Demandeur.
Dans le brevet précité, on a décrit la production et l'utilisation en
zootechnie d'un nouveau
complexe protéolytique, obtenu à partir d'une bactérie filamenteuse,
Streptomyces
fradiae ; ce complexe est désigné ci-après par sa dénomination commerciale
actuelle :
PANSTIMASE O.
Cette bactérie filamenteuse peut produire simultanément au moins 5 protéinases
et 2
peptidases ; ces 7 enzymes ont été décrits par K.MORIHARA et
al.(Biochim.Biophys.Acta,
1967, 139, 382). Lorsqu'ils sont ajoutés conjointement dans les aliments
consommés par
les animaux, ces 7 enzymes provoquent une réduction excessive de la viscosité
du mucus
intestinal, et peuvent ensuite provoquer une ulcération de la paroi
intestinale. Ces 7
enzymes ont donc des effets négatifs en zootechnie lorsqu'ils sont utilisés
conjointement.
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Dans les conditions indiquées dans le brevet précité, on obtient la
PANSTIMASEO, qui
est constituée seulement par 3 protéinases exocellulaires, avec prépondérance
de l'une
d'entre elles, et à l'exclusion des protéinases et peptidases endocellulaires.
Ajoutée dans
les aliments consommés par les animaux, la PANSTIMASEO provoque une réduction
modérée de la viscosité du mucus intestinal, et n'est pas susceptible
d'attaquer la paroi
intestinale.
En même temps que son action relativement modérée sur les protéines du mucus
intestinal, la PANSTIMASEO exerce une action plus forte sur les protéines de
matières
premières entrant dans la composition des aliments, ce qui améliore leur
digestibilité.
Outre ces actions directes dans l'intestin, la PANSTIMASE8 exerce des actions
indirectes
sur les différents organes, notamment sur le pancréas ; comme déjà indiqué
dans le
brevet antérieur, on a constaté qu'elle provoque une augmentation de 50 à 80 %
de la
concentration en enzymes ou en proenzymes dans cet organe.
En raison de ces actions favorables, la PANSTIMASEO est maintenant utilisée
comme
complément nutritionnel s'ajoutant dans les aliments destinés aux animaux,
pour
améliorer leur croissance ou leur productivité. C'est ainsi qu'on a pu
constater qu'elle
améliore aussi la résistance des animaux vis-à-vis des maladies infectieuses,
bactériennes ou virales, et qu'elle réduit certains effets négatifs du
vieillissement.
Ces constatations ont suggéré l'application possible en thérapeutique, pour
l'animal
comme pour l'homme, de la PANSTIMASEO, ou des principes actifs dont elle est
constituée, à savoir, la protéinase prépondérante exocellulaire produite par
Streptomyces
fradiae ou le mélange de cette protéinase prépondérante exocellulaire avec au
moins
l'une des deux autres protéinases exocellulaires produites par Streptomyces
fradiae.
Les principes actifs des compositions pharmaceutiques requièrent une
purification
supplémentaire par rapport au produit utilisé pour l'animal. Dans les
conditions indiquées
dans le brevet antérieur, on obtient une PANSTIMASEO non purifiée dont le
titre est au
moins égal à 2.000 U.A./mg.
L'Unité Anson (en abrégé U.A.) est ici définie comme étant la quantité
d'enzyme qui,
incubée pendant 10 min à 25 C et à pH 7.5 en présence d'hémoglobine dénaturée,
libère
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de ce substrat l'équivalent de 1 mcg de tyrosine, déterminée par absorption
spectrophotométrique à 280 nm sur le filtrat non précipitable par l'acide
trichloracétique.
Divers ajustements des conditions indiquées dans le brevet antérieur
permettent d'obtenir
une PANSTIMASE semi-purifiée dont le titre est au moins égal à 4.000 U.A./mg.
Les
techniques classiques de précipitations fractionnées, ou de passages sur
colonne,
permettent d'obtenir isolément chacune des 3 protéinases composant la
PANSTIMASE .
L'activité spécifique de la protéinase prépondérante exocellulaire est
supérieure à
100.000 U.A./mg, elle est nettement plus élevée que celle des 2 autres
protéinases ; son
poids moléculaire est voisin de 32 kDa, et son point isoélectrique est voisin
de 7Ø
Cette protéinase prépondérante explique à elle seule les principales
propriétés
physiologiques de la PANSTIMASE , en raison notamment du fait qu'elle est
seule à
exercer une action caractéristique sur deux protéines importantes : la toxine
cholérique et
le collagène.
La toxine cholérique est l'homologue de la toxine LT produite par certains
colibacilles
pathogènes ; elle est composée de la sous-unité A qui est agressive, et de la
sous-unité B
qui est immuno-stimulante. A faible concentration, comparable à celle qui
existe dans
l'intestin des animaux recevant un aliment supplémenté en PANSTIMASE , la
protéinase
prépondérante détruit sélectivement la sous-unité A sans détruire la sous-
unité B qui
conserve ainsi sa capacité de stimuler le système immunitaire.
Le collagène est la protéine la plus abondante dans le règne animal : chez les
mammifères, les différents types de collagène représentent environ un tiers
des protéines
totales. On sait que la solubilité du collagène musculaire dans l'eau chaude
est forte s'il
provient d'animaux jeunes, et faible s'il provient d'animaux âgés.
Lorsqu'on traite par la protéinase prépondérante le collagène d'animaux âgés,
on
augmente sa solubilité dans l'eau chaude qui devient comparable à celle
d'animaux
jeunes. On peut en conclure que cette protéinase provoque un certain
rajeunissement>
du collagène.
La plupart des résultats sur animaux correspondent à des essais effectués avec
de la
PANSTIMASE non purifiée ou semi-purifiée. Pour l'homme on pourra utiliser
soit la
PANSTIMASE serni-purifiée, soit la ou les protéinases purifiées dont elle est
composée,
_
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à savoir la protéinase prépondérante exocellulaire ou le mélange de cette
protéinase
prépondérante exocellulaire avec l'une au moins des deux autres protéinases
exocellulaires, ou avec une ou des protéinases dont les séquences en acides
aminés ont
au moins 60 % d'homologie avec celles de la protéinase prépondérante
exocellulaire ou
avec celles du mélange de protéinases tel que défini précédemment.
La présente invention a pour objet des compositions pharmaceutiques et/ou
diététiques
renfermant à titre de principe actif la protéinase prépondérante exocellulaire
produite par
mise en culture de Streptomyces fradiae présentant une activité spécifique
supérieure à
100.000 U.A./mg, un poids moléculaire variant de 30 à 36 kDa et de préférence
voisin de
32 kDa, un point isoélectrique voisin de 7.0, et susceptible de détruire
sélectivement la
sous-unité A de la toxine cholérique sans détruire la sous-unité B, en mélange
ou en
association avec un excipient ou un véhicule inerte, non toxique,
physiologiquement
acceptable.
La présente invention a encore pour objet des compositions pharmaceutiques
et/ou
diététiques renfermant à titre de principe actif la protéinase prépondérante
exocellulaire
telle que définie, ou le mélange de cette protéinase prépondérante
exocellulaire avec
l'une au moins des deux autres protéinases exocellulaires produites par mise
en culture
de Streptomyces fradiae, ou, une ou des protéinases dont les séquences en
acides
aminés ont au moins 60 % d'homologie avec celles de la protéinase
prépondérante
exocellulaire ou avec celles du mélange de protéinases tel que défini
précédemment, en
mélange ou en association avec un excipient ou un véhicule inerte, non
toxique,
physiologiquement acceptable. Les protéinases homologues peuvent être
extraites de
culture de différents micro-organismes et en particulier de Streptomyces
fradiae ou de
Streptomyces griseus.
La présente invention a pour objet l'utilisation de la protéinase
exocellulaire prépondérente
de type Il extraite des cultures de streptomyces fradiae, ou le mélange de
celle-ci avec l'une
au moins des deux autres protéinases exocellulaires produites dans les
cultures de
streptomyces fradiae, présentant une activité spécifique supérieure à 100.000
U.A./mg, un
poids moléculaire d'environ 30-36 kDa et un point isoéléctrique d'environ 7.0,
en mélange ou
en association avec un véhicule ou un excipient inerte non toxique, pour la
fabrication d'un
médicament destiné à traiter les malabsorptions de médicaments ou des
nutriments.
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4a
Le principe actif est administré par voie orale, pulmonaire ou génitale à des
doses
comprises entre 5.000 et 100.000 U.A. A ces fins, le principe actif est mis,
en mélange ou
en association avec des excipients classiques, sous une des formes
pharmaceutiques
convenant à ces types d'administration
Le principe actif est présenté notamment sous l'une des formes usuelles en
pharmacotechnie comme les comprimés, les dragés, les gélules, les capsules,
les
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poudres, les solutions ou suspensions, les aérosols secs, les ovules, les
comprimés
vaginaux.
L'administration se fera en fonction du besoin thérapeutique, d'une à trois
fois par jour.
Les résultats obtenus sur animal semblent avoir tous une même origine :
l'action
fondamentale de la PANSTIMASEO sur l'intestin ; cette action présente
différents aspects
qui seront décrits successivement.
ETUDE PHARMACOLOGIQUE
DES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES SELON L'INVENTION
ACTION DE LA PANSTIMASE DANS L'INTESTIN
1. - Villosités
Sur des rats relativement jeunes (environ 2 mois), des examens en microscopie
photonique montrent que les villosités présentent un développement normal,
pour les rats
témoins comme pour les rats traités.
Sur des rats relativement âgés (environ 7 mois), ces examens montrent que les
villosités
des rats témoins sont atrophiées, tandis que celles des rats traités depuis
leur sevrage à 4
semaines sont aussi développées que celles des rats âgés de 2 mois. On
constate donc
que la PANSTIMASEO provoque un certain rajeunissement de l'intestin, dont
les
villosités conservent plus longtemps leur capacité initiale de développement
et de
renouvellement rapide.
L'intestin n'est pas seulement un filtre, physiologiquement inactif ; c'est
aussi la plus
grande des glandes endocrines (B.LEBLANC et al.Rec. Med. Vet. 1981, 157 629 ;
K.UVNAS-MOBERG, pour la SCIENCE, Septembre 1989, 24). Constitué de petites
cellules en renouvellement rapide durant toute la vie, l'intestin est l'organe
la plus riche en
Acides Nucléiques : ADN+ARN (G.DURAND et al. Ann. Biol. Anim. Bioch. Biophys.
1.966.
6. 389) ; il a donc la plus forte capacité latente de synthèse protéique.
L'examen de coupes histologiques de l'intestin indique que la PANSTIMASEO
permet une
meilleure expression de cette capacité latente, et par suite une production
plus forte de
nombreux composés physiologiquement actifs : enzymes digestifs, hormones
(agissant
-
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sur le pancréas, le foie, le cerveau), immunoglobines, cytokines,
neurotransmetteurs (par
exemple le VIP = Vasoactive Intestinal Peptide) ; facteurs de croissance (ou
de survie)
cellulaire... On peut ainsi expliquer que la PANSTIMASEO, qui agit directement
dans
l'intestin, puisse agir indirectement sur les organes et les systèmes
physiologiques
influencés par les composés précédents ; ainsi s'expliquerait notamment son
action
remarquable sur le pancréas (A.ESTIVAL et al. Communication aux Journées
Métabolisme de Nancy 25-26 Janvier 1979 - Université de Nancy l).
L'intestin est également l'organe le plus riche en cellules immunitaires, qui
circulent dans
ses vaisseaux sanguins et lymphatiques, ou qui se rassemblent et se
multiplient dans les
plaques de PEYER. Ces cellules immunitaires sont une composante du MALT
(Mucosae
Associated Lymphoid Tissue) qui se subdivise en GALT situé dans l'intestin, et
en BALT
situé dans les bronches, et qui présente des analogies avec le SALT situé dans
la peau.
Le GALT et le BALT sont interdépendants et agissent en synergie pour assurer
la défense
immunitaire des muqueuses, et pour contribuer à la défense de l'organisme dans
son
ensemble.
L'examen de coupes histologiques de l'intestin montre que la PANSTIMASEO
stimule
directement le GALT ; elle peut donc stimuler indirectement la défense
immunitaire
générale. Ainsi s'expliquerait le fait que la PANSTIMASEO augmente la
résistance des
animaux vis-à-vis des maladies infectieuses.
2 - Microvillosités
Sur des rats, jeunes ou âgés, des examens en microscopie électronique montrent
que les
microvillosités des rats témoins sont enrobées par du mucus hypervisqueux et
par des
traces de résidus alimentaires ; au contraire, celles des rats traités par la
PANSTIMASEO
apparaissent plus nettes, plus hautes, plus nombreuses. La PANSTIMASE0 peut
donc
augmenter la surface développée totale des microvillosités, c'est-à-dire leur
capacité
d'absorption.
In vitro , en traitant par la PANSTIMASEO des fragments d'intestin prélevés
sur des
rats témoins, on a constaté qu'on pouvait, sans endommager les
microvillosités, éliminer
le mucus hypervisqueux qui les enrobe ; cette action détergente modérée peut
s'effectuer
en quelques minutes.
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In vivo , ce nettoyage de la muqueuse intestinale permet l'établissement d'un
contact
plus étroit entre les germes infectieux et cette muqueuse, ce qui peut induire
la
multiplication dans l'intestin de cellules immunitaires aptes à lutter contre
ces germes.
3 - Cellules sécrétrices et microqlandes exocrines
Diverses cellules sécrétrices (productrices de mucus, de lysozyme...) et de
nombreuses
microglandes exocrines sont réparties tout au long de l'intestin dans lequel
elles déversent
d'importantes quantités de sécrétions (environ 2 000 ml par jour chez
l'homme).
L'écoulement de ces sécrétions peut être freiné, ou même bloqué, par la
présence de
microbouchons muqueux.
L'examen de coupes histologiques de l'intestin montre que la PANSTIMASEO
désagrège
ces microbouchons, rétablit l'écoulement normal de ces sécrétions, et provoque
une
augmentation réactionnelle de leur production.
On sait que la sécrétion de salive contient un facteur de croissance
cellulaire : Epithélial
Growth Factor (E G F) ; de même, les sécrétions intestinales peuvent contenir
des
facteurs de croissance susceptibles d'agir sur les entérocytes, les
lymphocytes...
L'augmentation de la production de tels facteurs, sous l'action de la
PANSTIMASE , peut
expliquer le meilleur développement des villosités et du GALT, constaté sur
les coupes
histologiques de l'intestin des rats traités.
4 - Plaques de PEYER
Les plaques de PEYER, qui sont des agrégats de cellules immunitaires répartis
tout au
long de l'intestin, sont plus nombreuses chez les rats traités : elles
apparaissent dès le
duodénum chez ces rats, mais seulement à partir du jéjunum chez les rats
témoins ; elles
sont aussi plus denses : leurs lymphocytes sont plus petits, plus serrés, et
semblent plus
actifs (ils sont plus intensément colorés par les réactifs utilisés en
histologie).
5 - Non adhérence prolongée des germes infectieux
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La PANSTIMASEO peut s'opposer à l'adhérence prolongée des germes infectieux
sur les
muqueuses, et notamment sur la muqueuse intestinale.
Cette adhérence prolongée résulte de la formation de liaisons chimiques entre
des
adhésines fixées sur ces germes et leurs récepteurs fixés sur la muqueuse :
adhésines et
récepteurs sont des (glyco-lipo) protéines complexes.
Des essais in vitro ont montré que la PANSTIMASEO, qui a une certaine
affinité pour
les protéines complexes, peut couper des adhésines, ou détacher des récepteurs
de la
muqueuse où ils sont fixés ; il en résulte souvent une rupture de l'adhérence
qui peut
s'effectuer en quelques dizaines de minutes.
En outre, la PANSTIMASEO peut stimuler le renouvellement des villosités de
l'intestin,
c'est-à-dire l'élimination d'anciennes cellules anormales ou affectées par
l'adhérence des
germes infectieux ; cette élimination est facilitée par l'intensification du
flux des sécrétions
intestinales, dont la production est augmentée sous l'action de la
PANSTIMASEO.
On voit que, si la PANSTIMASEO peut d'abord permettre un contact plus étroit
entre les
germes infectieux et la muqueuse intestinale (et induire la multiplication
dans l'intestin de
cellules immunitaires aptes à lutter contre ces germes), elle peut aussi
s'opposer ensuite
à l'adhérence prolongée de ces germes sur la muqueuse et à leur pénétration
dans le
tissu sous-jacent.
6 - Destruction des entérotoxines protéiques
A des concentrations comprises entre 10 et 100 U.A./ml, et par chauffage à 37
C
pendant quelques dizaines de minutes, la PANSTIMASEO détruit de nombreuses
toxines
protéiques, et peut ainsi contribuer à la prévention et/ou au traitement de
diarrhées. Parmi
les toxines détruites par la PANSTIMASE , on peut citer la toxine botulique,
la toxine
cholérique, la toxine LT produite par des colibacilles pathogènes, le Facteur
Cytotoxique
Nécrosant également produit par ces colibacilles...
Dans les mêmes conditions, les protéinases endogènes (Trypsine,
Chymotrypsine...) ne
détruisent pas ces toxines, et ne peuvent donc pas contribuer à la prévention
et/ou au
traitement de ces diarrhées.
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Dans le cas de la toxine LT, la PANSTIMASE détruit la sous-unité A qui est
agressive,
sans détruire la sous-unité B qui est immunostimulante.
7 - Conclusion
La PANSTIMASE exerce, tout au long de l'intestin, une action fondamentale qui
stimule
le fonctionnement global de cet organe-clé, et par suite de tout l'organisme ;
d'où la
grande diversité des exemples d'applications thérapeutiques.
APPLICATIONS THERAPEUTIQUES
DES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES SELON L'INVENTION
L'action fondamentale de la PANSTIMASE sur l'intestin permet d'envisager son
utilisation ou l'utilisation des principes actifs dont elle composée, à savoir
la protéinase
prépondérante exocellulaire ou le mélange de cette protéinase prépondérante
exocellulaire avec l'une au moins des deux autres protéinases exocellulaires,
pour
contribuer à la prévention ou au traitement de maladies.
1 - Mucoviscidose et maladies respiratoires
La mucoviscidose est caractérisée par la sécrétion excessive d'un mucus trop
visqueux,
au niveau intestinal comme au niveau bronchique. Tous les mucus ont le même
type de
structure biochimique ; c'est pourquoi la PANSTIMASE peut optimiser la
viscosité du
mucus intestinal, du mucus bronchique ou du mucus génital.
La ou les protéinases exocellulaires selon l'invention, ou la ou les
protéinases dont les
séquences en acides aminés ont au moins 60 % d'homologie avec celles de la ou
les
protéinases exocellulaires de l'invention, peuvent être utilisées pour la
fabrication d'un
médicament destiné à optimiser la viscosité des mucus intestinal, bronchique
et/ou
génital.
La ou les protéinases exocellulaires selon l'invention, ou la ou les
protéinases dont les
séquences en acides aminés ont au moins 60 % d'homologie avec celles de la ou
les
protéinases exocellulaires de l'invention, peuvent être utilisées pour la
fabrication d'un
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médicament destiné au traitement de la mucoviscidose et des maladies en
rapport avec
un excès de sécrétion d'un mucus intestinal, bronchique et/ou génital, et
notamment
quand celui-ci est trop visqueux.
2 - Amélioration de la résorption et de la circulation sanguine
Par son action détergente modérée sur la paroi intestinale, la PANSTIMASEO
contribue à
l'amélioration de la résorption.
Cette amélioration de la résorption peut se constater en dosant dans le sang
des animaux
des médicaments administrés par voie orale. Par exemple, on a administré à des
poulets,
par sonde gastrique, 50 mg de tétracycline sans PANSTIMASEO (lot témoin) ou en
association avec 3 mg de PANSTIMASE0 titrant 400 U.A./mg (lot traité) ; on a
prélevé 2.5
ml de sang 2 heures après cette administration, et on a constaté que la
concentration
moyenne de tétracycline dans le sérum est de 1.35 mcg/ml pour le lot témoin et
de 1.90
mcg/ml pour le lot traité.
Cette amélioration de la résorption peut s'analyser plus précisément en
étudiant la fixation
des médicaments dans différents organes. Par exemple, on a donné à des
truites,
pendant 2 jours, un aliment médicamenteux contenant 4g/kg d'Oxytétracycline
non
supplémenté en PANSTIMASE0 (lot témoin), ou supplémenté par 300 mg/kg de
PANSTIMASE titrant 400 U.A./mg (lot traité). On a ensuite sacrifié ces
poissons et on a
dosé l'antibiotique dans le foie, les muscles et les reins. On a constaté que
la
PANSTIMASEO permet d'obtenir une augmentation importante de la concentration
tissulaire en antibiotique, qui varie beaucoup suivant l'organe considéré :
+ 100 % dans le foie soit 5,75 mcg/g pour le lot traité vs 2,5 mcg/g pour le
lot témoin
+ 400 % dans les muscles soit 1,75 mcg/g pour le lot traité vs 0,3 mcg/g pour
le lot témoin
+ 1.000 % dans les reins soit 5,75 mcg/g pour le lot traité vs 0,5 mcg/g pour
le lot témoin
Il apparaît que la PANSTIMASEO provoque une meilleure résorption de
l'Oxytétracycline,
et une meilleure distribution de cet antibiotique dans tout l'organisme, ce
qui semble
impliquer une amélioration de la circulation sanguine.
La ou les protéinases exoceilulaires selon l'invention, ou la ou les
protéinases dont les
séquences en acides aminés ont au moins 60 % d'homologie avec celles de la ou
les
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protéinases exocellulaires de l'invention, peuvent être utilisées pour la
fabrication d'un
médicament destiné au traitement des malabsorptions de médicaments ou de
nutriments,
ainsi qu'au traitement des troubles de la circulation sanguine ; en
particulier, ce
médicament est destiné au traitement de la dénutrition constatée chez les
personnes
âgées ou chez les malades ayant reçu des médicaments dont les effets
secondaires
affectent le bon fonctionnement de l'intestin.
3 - Ulcères digestifs et entérotoxémies
Les ulcères digestifs ont pour origine l'adhérence sur la paroi stomacale
d'une bactérie
(Helicobacter pylori), et certaines entérotoxémies ont pour origine
l'adhérence sur la paroi
intestinale de divers germes infectieux.
La PANSTIMASE0 s'oppose à l'adhérence prolongée de germes infectieux sur les
muqueuses, et détruit de nombreuses entérotoxines ; elle peut ainsi contribuer
à stimuler
le renouvellement de l'intestin et peut prévenir et/ou traiter des ulcères
digestifs et des
entérotoxémies.
De fait, en élevage industriel, on a constaté que la PANSTIMASEO est capable
de réduire
le nombre de porcs souffrant d'ulcères digestifs, ainsi que la mortalité par
entérotoxémies.
La ou les protéinases exocellulaires selon l'invention, ou la ou les
protéinases dont les
séquences en acides aminés ont au moins 60 % d'homologie avec celles de la ou
les
protéinases exocellulaires de l'invention, peuvent être utilisées pour la
fabrication d'un
médicament destiné à prévenir et/ou à traiter l'adhérence prolongée des germes
infectieux sur les muqueuses, à faciliter la régénération des villosités
atrophiées ou
détruites de la muqueuse intestinale, ainsi qu'à prévenir et/ou à traiter les
ulcères digestifs
et les entérotoxémies.
4 - Diabète, insuffisances hépatiques et troubles du transit intestinal
Dans le brevet antérieur, on a déjà indiqué que la PANSTIMASEO stimulait la
fonction
exocrine du pancréas ; on a en effet constaté une importante augmentation de
la
concentration dans le pancréas de tous les enzymes ou proenzymes dosés : + 50
% pour
l'amylase, + 70 % pour le trypsinogène et le chymotrypsinogène, + 80 `)/0 pour
la lipase
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(A.ESTIVAL et al. Communication aux Journées Métabolisme de Nancy 25-26
Janvier
1979- Université de Nancy I).
L'examen de coupes histologiques de pancréas a ensuite montré que les îlots de
LANGERHANS, sont plus nombreux et ont un meilleur aspect chez les rats
traités. Ces
examens suggèrent que la PANSTIMASEO stimule d'abord la fonction endocrine du
pancréas, avec pour conséquence une amélioration générale de l'anabolisme
protéique,
d'où la stimulation consécutive de sa fonction exocrine.
Cette stimulation qui s'exerce sur le pancréas, s'exerce également sur le
foie, ce qui a
pour conséquence une amélioration du transit intestinal. En élevage intensif,
on observe
souvent des constipations chez les truies gestantes attachées ; on a constaté
que la
supplémentation de leur alimentation en PANSTIMASEO permet d'éviter ces
perturbations nuisibles du transit intestinal.
La ou les protéinases exocellulaires selon l'invention, ou la ou les
protéinases dont les
séquences en acides aminés ont au moins 60 % d'homologie avec celles de la ou
les
protéinases exocellulaires de l'invention, peuvent être utilisées pour la
fabrication d'un
médicament destiné à prévenir et/ou à traiter le diabète, les insuffisances
hépatiques et
les troubles du transit intestinal.
5 - Maladies infectieuses, dysfonctionnements immunitaires, et vaccination
On a déjà indiqué que la PANSTIMASEO agit favorablement sur le GALT, et par
suite sur
l'ensemble du système immunitaire. Il en résulte des améliorations dans 3
domaines
différents.
A - Maladies infectieuses
Certaines observations en élevage intensif ont montré que la PANSTIMASEO
améliorait
souvent l'état sanitaire des animaux, ce qu'on a d'abord attribué au fait
qu'elle facilitait la
résorption des antibiotiques qui sont ajoutés dans la plupart des aliments
industriels. Mais
on a constaté ensuite que cette amélioration était particulièrement nette en
cas
d'infections par différents virus, alors que ceux-ci sont en général
insensibles à l'action
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des antibiotiques. Ces constatations concernent la grippe et la maladie
d'AUJESKY chez
les porcins, la maladie de GUMBORO chez les poulets et l'ecthyma chez les
chevreaux.
Dans ce dernier cas, l'infection virale constatée au cours d'un essai en
station
expérimentale, a fait l'objet d'observations précises, portant au total sur
120 chevreaux ; le
pourcentage d'animaux non atteints a été de 34 % pour le lot témoin, et de 70
% pour le
lot traité ; le pourcentage d'animaux très atteints a été de 28 % pour le lot
témoin, alors
qu'aucun animal n'a été très atteint dans le lot traité.
Cette action antivirale peut s'expliquer par le fait que la PANSTIMASE
augmente le
nombre et la densité de plaques de PEYER qui sont des agrégats de cellules
immunitaires répartis tout au long de l'intestin.
B - Dysfonctionnements immunitaire
D'autres observations sur des porcelets en élevage intensif ont montré que la
PANSTIMASE réduisait la durée des arthrites qui sont des réactions
inflammatoires
consécutives à des blessures aux articulations affectant les animaux élevés
sur caillebotis
métalliques. Après cicatrisation des blessures, ces réactions inflammatoires
peuvent
s'estomper progressivement sous l'action de cellules immunitaires dites
suppressives, qui
sont nombreuses dans l'intestin, et qui peuvent migrer vers les zones
d'inflammation. Il est
possible que la PANSTIMASE stimule la multiplication de ces cellules dans
l'intestin, et
qu'elle facilite leur migration, ce qui expliquerait le fait qu'elle réduit la
durée des arthrites,
d'environ 50 %.
C - Vaccinations
Les améliorations de l'état sanitaire constatées en élevage intensif peuvent
s'expliquer par
une meilleure réponse aux vaccinations des animaux recevant un aliment
supplémenté en
PANSTIMASE . Des essais préliminaires en laboratoire, sur des souris, ont
effectivement
confirmé que la PANSTIMASE peut augmenter l'efficacité des vaccinations,
notamment
lorsque celles ci sont effectuées par voie orale.
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La ou les protéinases exocellulaires selon l'invention, ou la ou les
protéinases dont les
séquences en acides aminés ont au moins 60 % d'homologie avec celles de la ou
les
protéinases exocellulaires de l'invention, peuvent être utilisées pour la
fabrication d'un
médicament destiné à prévenir et/ou à traiter les maladies infectieuses et les
dysfonctionnements immunitaires, ainsi qu'à augmenter l'efficacité des
vaccinations.
6 - Insuffisances hormonales et maladies dégénératives liées au vieillissement
On a constaté que, sur les porcins reproducteurs âgés, la PANSTIMASE8 provoque
une
réduction de l'intervalle sevrage-saillie fécondante (qui tend à augmenter
chez les truies),
et une stimulation de l'ardeur sexuelle, (qui tend à décliner chez les
verrats). Il apparaît
donc que la PANSTIMASEO permet de remédier aux insuffisances hormonales, et
probablement à d'autres effets négatifs dûs au vieillissement.
On a effectivement constaté que la PANSTIMASEO provoque un rajeunissement
chez
les rates reproductrices âgées, et une réduction des effets négatifs du
vieillissement chez
les truies et les poules reproductrices âgées.
A. La première saillie des rates est normalement affectée vers l'âge de 70
jours ;
lorsqu'elle est effectuée vers 140 jours, les performances de reproduction
sont
mauvaises pour le lot témoin et sont meilleures pour le lot traité (recevant
le même
aliment supplémenté par 300 mg/kg de PANSTIMASEO titrant 400 U.A./mg).
Lot témoin Lot témoin Lot traité
saillie à 70 j saillie à 140 j saillie à 140 j
Taux de fécondation 62 h 29 % 45 %
Mortalité périnatale des ratons 18 % 35 % 18 %
Nombre de ratons sevrés par portée 9 6,6 8,1
On constate que les rates témoins saillies à 140 j donnent de mauvais
résultats mais que
les rates traitées également saillies à 140 j donnent des résultats qui se
rapprochent des
résultats normaux donnés par les rates témoins saillies à 70 j, et même
deviennent
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identiques dans le cas du taux de mortalité périnatale. On peut donc dire que
la
PANSTIMASEO a provoqué un rajeunissement des rates âgées de 140 j.
B. Les truies reproductrices sont réformées dès qu'elles apparaissent en
mauvais état ,
par exemple lorsque l'éleveur estime qu'elles ne peuvent plus se tenir bien
d'aplomb, ni
se coucher en souplesse (au lieu de se laisser tomber lourdement en risquant
d'écraser
les porcelets nouveau-nés). Dans un élevage de 80 truies, avant l'utilisation
de la
PANSTIMASEO, les truies sont réformées après 4,4 cycles de reproduction en
moyenne; six mois après cette utilisation, il est apparu que l'on pouvait
réformer les
truies après 5,8 cycles de reproduction en moyenne. On peut donc considérer
que la
PANSTIMASEO a permis de prolonger, d'environ 30%, la vie productive des
truies,
sans altération inacceptable de leur bon état et de leurs performances.
En vieillissant, les poules pondeuses ont tendance à produire des oeufs ayant
une
coquille plus fragile, de sorte que le pourcentage d'oeufs fêlés peut devenir
supérieur à 10
% en fin de ponte. La PANSTIMASEO a permis de réduire de moitié ce
pourcentage, ce
qui implique une stimulation du métabolisme phosphocalcique.
La ou les protéinases exocellulaires selon l'invention, ou la ou les
protéinases dont les
séquences en acides aminés ont au moins 60 % d'homologie avec celles de la ou
les
protéinases exocellulaires de l'invention, peuvent être utilisées pour la
fabrication d'un
médicament destiné à prévenir et/ou à traiter les insuffisances hormonales et
les maladies
dégénératives liées au vieillissement, par exemple l'arthrite, l'arthrose,
l'ostéoporose.
EVALUATION PRELIMINAIRE DE LA TOLERANCE
DES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES SELON L'INVENTION
Des essais toxicologiques ont montré que la PANSTIMASEO n'a aucune toxicité
sur les
porcelets lorsqu'elle est administrée pendant 1 mois à une dose 20 fois
supérieure à la
dose d'emploi actuellement recommandée qui est de 40.000 U.A. par Kg
d'aliment, ni
aucune toxicité sur le rat lorsqu'elle est administrée pendant 3 mois à une
dose 200 fois
supérieure à cette dose d'emploi.
En conséquence, on a pu engager un essai préliminaire de tolérance chez
l'homme, sous
une dose d'emploi relativement élevée par rapport à la dose actuellement
prévue ; on a
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en effet utilisé des gélules contenant 750.000 U.A. de PANSTIMASE purifiée
(soit 50
mg d'un lot tirant 15.000 U.A./mg) qu'on a administrées à raison de 2 à 3
gélules par jour
pendant 2 ou 3 semaines à des malades.
On a sélectionné 24 patients (12 hommes - 12 femmes), ayant 44 ans d'âge moyen
avec
des extrêmes allant de 25 à 70 ans; 17 de ces patients souffraient de
dyspepsie au sens
le plus large du terme sans qu'aucune lésion organique n'ait pu être mise en
évidence par
les investigations paracliniques (examens de laboratoire, radiologies, dans
certains cas
endoscopie ; 7 de ces patients étaient porteurs de lésions organiques : 3
pancréatiques, 2
gastrectomie (l'une pour ulcère, l'autre pour néoplasme), 2 colectomie (l'une
pour
rectocolite ulcérohémorrhagique, l'autre pour néoplasme).
Sur l'ensemble de ces 24 patients, on a étudié l'évolution de la
symptomatologie et du
poids, lorsqu'une insuffisance pondérale, avec ou sans dénutrition, existait
au début du
traitement. Plusieurs sujets ont signalé une amélioration portant sur la
régularisation du
transit intestinal en cas de constipation ou au contraire de diarrhée, ainsi
qu'une reprise
de poids en cas de dénutrition.
On a également engagé un essai préliminaire concernant la mucoviscidose chez
un
malade âgé de 18 ans qui a reçu chaque jour, pendant 3 semaines, 2 gélules
contenant
chacune 10.000 U.A. de PANSTIMASE ; on a constaté une amélioration des
symptômes, au niveau intestinal (fèces moins abondantes et moins collantes) et
au
niveau bronchique (expectorations plus faciles et moins fréquentes).
En conclusion, on peut dire que la PANSTIMASE a été bien tolérée, et qu'elle
semble
particulièrement efficace en cas de dénutrition.
La ou les protéinases exocellulaires selon l'invention, ou la ou les
protéinases dont les
séquences en acides aminés ont au moins 60 % d'homologie avec celles de la ou
les
protéinases exocellulaires de l'invention, peuvent être utilisées pour la
fabrication d'une
composition diététique pour l'alimentation des sujets fragiles ou dénutris.
