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Patent 2360488 Summary

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Claims and Abstract availability

Any discrepancies in the text and image of the Claims and Abstract are due to differing posting times. Text of the Claims and Abstract are posted:

  • At the time the application is open to public inspection;
  • At the time of issue of the patent (grant).
(12) Patent Application: (11) CA 2360488
(54) English Title: USE OF A PLANT EXTRACT OF THE GENUS ROSMARINUS IN COMPOSITIONS FOR TREATING AGEING SKIN SYMPTOMS
(54) French Title: UTILISATION D'UN EXTRAIT D'UN VEGETAL DU GENRE ROSMARINUS DANS DES COMPOSITIONS DESTINEES A TRAITER LES SIGNES CUTANES DU VIEILLISSEMENT
Status: Dead
Bibliographic Data
(51) International Patent Classification (IPC):
  • A61K 8/97 (2006.01)
  • A61Q 19/00 (2006.01)
  • A61Q 19/08 (2006.01)
(72) Inventors :
  • BRETON, LIONEL (France)
  • BERNERD, FRANCOISE (France)
  • MARTIN, RICHARD (France)
(73) Owners :
  • L'OREAL (France)
(71) Applicants :
  • L'OREAL (France)
(74) Agent: ROBIC
(74) Associate agent:
(45) Issued:
(86) PCT Filing Date: 2000-01-10
(87) Open to Public Inspection: 2000-07-20
Examination requested: 2001-07-09
Availability of licence: N/A
(25) Language of filing: French

Patent Cooperation Treaty (PCT): Yes
(86) PCT Filing Number: PCT/FR2000/000034
(87) International Publication Number: WO2000/041674
(85) National Entry: 2001-07-09

(30) Application Priority Data:
Application No. Country/Territory Date
99/00406 France 1999-01-15

Abstracts

English Abstract

The invention concerns the use of at least a plant extract of at least the genus Rosmarinus, in or for the preparation of a composition for preventive and/or curative treatment of the ageing skin symptoms. In particular the extract or the composition are designed to stimulate the restoring of the skin structure and/or to inhibit degeneration of the skin and/or the mucous membranes by stimulating collagen synthesis and/or by inhibiting collagenase.


French Abstract




L'invention se rapporte à l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un
végétal du genre Rosmarinus, dans ou pour la préparation d'une composition
destinée à traiter, de manière préventive et/ou curative, les signes cutanés
du vieillissement. En particulier, l'extrait ou la composition sont destinés à
stimuler la restructuration et/ou inhiber la dégradation de la peau et/ou des
muqueuses par la stimulation de la synthèse du collagène et/ou par
l'inhibition des collagénases.

Claims

Note: Claims are shown in the official language in which they were submitted.





REVENDICATIONS
1. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus
pour
la préparation d'une composition destinée à traiter, de manière préventive
et/ou
curative, les signes cutanés du vieillissement.
2. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus
pour
la préparation d'une composition destinée à stimuler de la synthèse du
collagène.
3. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus
pour
la préparation d'une composition destiné à inhiber l'expression des protéases
de la
matrice extracellulaire.
4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée par le fait que la
composition sont
destinée à inhiber l'expression des métalloprotéinases.
5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 3 ou 4, caractérisée
par le
fait que la composition sont destinée à inhiber l'expression de la
métalloprotéinase de
type 1.
6. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus
pour
la préparation d'une composition destinée à traiter les atteintes cutanées
liées à la
ménopause.
7. Utiisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus
pour
la préparation d'une composition destinée à lutter contre les rides et ridules
8. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus
pour
la préparation d'une composition destinée à lutter contre la peau molle.
9. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus
pour
la préparation d'une composition, destinée à lutter entre la peau molle.
10. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre
Rosmarinus pour
la préparation d'une composition destinée à lutter contre la peau amincie.




11. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre
Rosmarinus pour
la préparation d'une composition destinée à lutter contre le manque
d'élasticité et/ou
de tonus de la peau.
12. Utilisation d'au moins un extrait d'au moins un végétal du genre
Rosmarinus pour
la préparation d'une composition destinée à lutter contre les dégradations
internes de
la peau consécutives à une exposition aux rayonnements ultraviolets.
13. Utilisation selon la revendication 12, la composition étant destinée à
lutter contre
les dégradations du collagène.
14. Utilisation selon l'une quelconque des revendication précédentes,
caractérisée
par le fait que le matériel végétal est issu de plante entière ou de partie de
plante
comme les feuilles, les tiges, tes fleurs, tes pétales, les racines ou encore
des cellules
dédifférenciées.
15. Utilisation selon la revendication 14, caractérisée par le fait que le
matériel
végétal est issu des feuilles.
16. Utilisation selon l'une quelconque des revendication précédentes,
caractérisée
par le fait que le matériel végétal est issu d'au moins un végétal du genre
Rosmarinus cultivé in vivo ou issu de culture in vitro,
17. Utilisation selon la revendication 16, caractérisée par le fait que le
matériel
végétal est issu d'au moins un végétal du genre Rosmarinus cultivé in vivo.
18. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes,
caractérisée
par le fait que l'extrait est un extrait aqueux.
19. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes,
caractérisée
par le fait que l'extrait ne contient pas d'acide rosmarinique
20. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes,
caractérisée
par le fait que l'extrait est utilisé en une quantité représentant de 0,001% à
20% du
poids total de la composition.




21. Utilisation selon la revendication précédente, caractérisée par le fait
que l'extrait
est utilisé en une quantité représentant de 00.01% à 10% du poids total de la
composition.
22. Utilisation selon, l'une quelconque des revendications précédentes,
caractérisée
par le fait que l'extrait est utilisé dans la préparation d'une composition
cosmétique.
23. Procédé de traitement cosmétique de la peau destiné stimuler la synthèse
du
collagène et/ou traiter les atteintes cutanées liées à l'âge et/ou à la
ménopause et/ou
lutter contre l'amincissement du derme et/ou combattre l'apparence de la peau
molle
et ridée, caractérisé par le fait que l'on applique sur la peau, sur les
cheveux, et/ou
sur les muqueuses, une composition cosmétique comprenant au moins extrait d'au
moins un végétal du genre Rosmarinus.

Description

Note: Descriptions are shown in the official language in which they were submitted.




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WO 00/41674 , PCT/FR00/00034
Utilisation d'un extrait d'un végétal du genre Rosmarinus dans des
compositions destinées à traiter les signes cutanés du vieillissement
L'invention se rapporte à l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins un
végétal
du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition destinée à
traiter, de manière préventive etlou curative, les signes cutanés du
vieillissement.
En particulier, l'extrait ou la composition sont destinés à stimuler la
restructuration
et/ou inhiber la dégradation de la peau et/ou des muqueuses par la stimulation
de
la synthèse du collagène et/ou par l'inhibition des collagénases. L'invention
a
également pour objet un procédé de traitement cosmétique de la peau et/ou des
muqueuses.
La peau humaine est constituée de deux cornpartiments à savoir un compartiment
superficiel, l'épiderme, et un compartiment profond, le derme.
L'épiderme humain naturel est composé principalement de trois types de
cellules
qui sont les kératinocytes, très majoritaires, les mélanocytes et les cellules
de
Langerhans. Chacun de ces types cellulaires contribue par ses fonctions
propres
au rôle essentiel joué dans l'organisme par la peau.
Le derme fournit à l'épiderme un support solide. C'est également son élément
nourricier. II est principalement constitué de fibroblastes et d'une matrice
extracellulaire composée elle-même principalement de collagène, d'élastine et
d'une substance, dite substance fondamentale, composants synthétisés par le
fibroblaste. On y trouve aussi des leucocytes, des mastocytes ou encore des
macrophages tissulaires. II est également traversée par des vaisseaux sanguins
et
des fibres nerveuses. Dans une peau normale, c'est à dire non pathologique ni
cicatricielle, le fibroblaste est à l'état quiescent, c'est à dire non
prolifératif, peu
actif d'un point de vue métabolique et non mobile.
Ce sont les fibres de collagène qui assurent la solidité du derme. Les fibres
de
collagène sont constituées de fibrilles scellées les unes aux autres, formant
ainsi
plus de dix types de structures différentes. La solidité du derme est en
grande
partie due à l'enchevêtrement des fibres de collagène tassées les unes contre
les
autres en tous sens. Les fibres de collagène participent à l'élasticité et à
la tonicité
de la peau et/ou des muqueuses.
Les fibres de collagènes sont constamment renouvelées mais ce renouvellement
diminue avec l'âge ce qui entraîne un amincissement du derme. Cet



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- amincissement du derme est également dû à des causes pathologiques comme
par exemple l'hypersécrétion d'hormones corticoïdes, certaines maladies
(syndrome de Marfan, syndrome de Ehlers-Danlos) ou encore des carences
vitaminiques (scorbut). II est également admis que des facteurs extrinsèques
comme les rayons ultraviolets, le tabac ou certains traitements
(Glucocorticoïdes,
vitamine D et dérivés par exemple) ont également un effet sur la peau et sur
son
taux de collagène.
Cependant, divers facteurs entraînent la dégradation du collagène, avec toutes
les
l0 conséquences que l'on peut envisager sur la structure et/ou la fermeté de
la peau
et/ou des muqueuses.
Bien que très résistantes, les fibres de collagène sont sensibles à certaines
enzymes appelées collagénases. Une dégradation des fibres de collagène
entraîne l'apparence de peau molle et ridée que l'être humain, préférant
l'apparence d'une peau lisse et tendue, cherche depuis toujours à combattre.
Les collagénases font partie d'une famille d'enzymes appelées
métalloprotéinases
(MMPs) qui sont elles-mêmes les membres d'une famille d'enzymes
2o protéolytiques (endoprotéases) qui possèdent un atome de zinc coordonné à 3
résidus cystéine et une méthionine dans leur site actif et qui dégradent les
composants macromoléculaires de la matrice extracellulaire et des lames
basales
à pH neutre (collagène, élastine, etc. ...). Très largement répandues dans le
monde vivant, ces enzymes sont présentes, mais faiblement exprimées, dans des
situations physiologiques normales comme la croissance des organes et le
renouvellement des tissus.
Leur surexpression chez l'homme et leur activation sont cependant liées à de
nombreux processus, parfois pathologiques, qui impliquent la destruction et le
remodelage de la matrice. Cela entraîne soit une résorption non contrôlée de
la
3o matrice extraceflulaire, soit inversement l'installation d'un état de
fibrose.
La famille des métalloprotéinases est constituée de plusieurs groupes bien
définis
basés sur leurs ressemblances en terme de structure et de spécificité de
substrat
(voir Woessner J. F., Faseb Journal, vol. 5, 1991, 2145). Parmi ces groupes,
on
peut citer les collagénases destinées à dégrader les collagènes fibrillaires
(MMP-1
ou collagénase interstitielle, MMP-8 ou collagénase de neutrophile, MMP-13 ou
collagénase 3), les gélatinases qui dégradent le collagène de type IV ou toute
forme de collagène dénaturé (MMP-2 ou gélatinase A (72 kDa), MMP-9 ou
gélatinase B (92 kDa) ), les stromélysines (MMP-3) dont le large spectre
d'activité



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s'adresse aux protéines de la matrice extracellulaire telles que les
glycoprotéines
(fibronectine, laminine), les protéoglycannes, etc., ou encore les
métalloprotéinases membranaires.



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L'exposition prolongée aux rayonnements ultraviolets, particulièrement aux
rayonnements ultraviolets de type A etlou B, a pour effet une stimulation de
l'expression des collagénases, particulièrement de la MMP-1. C'est là une des
composantes du vieillissement cutané photo-induit.
Par ailleurs à la ménopause, les principales modifications concernant le derme
sont une diminution du taux de collagène et de l'épaisseur dermique. Cela
entraîne chez la femme ménopausée un amincissement de la peau et/ou des
muqueuses. La femme ressent alors une sensation de "peau sèche" ou de peau
qui tire et l'on constate une accentuation des fines rides et ridules de
surface. La
peau présente un aspect rugueux à la palpation. Enfin la peau présente une
souplesse diminuée.
On comprend alors à la lecture de ce qui précède l'importance du collagène
dans
la structure des tissus, particulièrement de la peau et/ou des muqueuses, et
l'importance qu'il y a à non seulement maintenir son taux dans les tissus mais
également à combattre sa dégradation pour ainsi lutter contre le
vieillissement qu'il
soit chronobiologique ou photo-induit et ses conséquences, l'amincissement du
derme et/ou la dégradation des fibres de collagène ce qui entraînent
l'apparence
de peau molle et ridée.
30
Un des buts de la présente invention est donc de pouvoir disposer d'un produit
nouveau qui présente une effet stimulateur de la synthèse du collagène, un
effet
inhibiteur des collagénases et si possible pas d'effets secondaires notables.
Or, de manière surprenante et inattendue la demanderesse a maintenant
découvert qu'un extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus présente une
activité stimulatrice de la synthèse du collagène et une activité inhibitrice
de .
l'activité des collagénases.
Les végétaux du genre Rosmarinus, outre leurs propriétés gustatives et
odorantes, sont connus pour leurs effets anti-inflammatoires. On peut citer à
cet
égard les demandes de brevet FR-A-2504551, JP=A-7017846, WO-A-9325209,
SU-A-1733000, FR-A-2662078, DE-A-3536342, US 5393526 ou encore la
demande déposée par la demanderesse sous le numéro WO-A-9701288.



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A la connaissance de la demanderesse l'activité stimulatrice de la synthèse dü
collagène et l'activité inhibitrice de l'activité des collagénases d'un
extrait d'au
moins un végétal du genre Rosmarinus n'ont jamais été décrites.
5 Ainsi, l'invention a pour objet premier l'utilisation d'au moins un extrait
d'au moins
un végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition,
l'extrait ou la composition étant destinés à traiter, de manière préventive
et/ou
curative, les signes cutanés du vieillissement.
lo Par extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus, on entend aussi bien
un
mélange brut de parties du végétal grossièrement réduites en morceaux et du
solvant d'extraction que des préparations élaborés des principes actifs
solubilisés
lors de l'extraction.
Par principe actif, on entend toute molécule ou composition susceptible de
modifier ou de moduler le fonctionnement d'au moins un système biologique
donné.
Par signes cutanés du vieillissement on entend toutes modifications de
l'aspect
2o extérieur de la peau dues au vieillissement qu'il soit chronobiologique
et/ou photo-
induit, comme par exemple les rides et ridules, la peau flétrie, la peau mole,
la
peau amincie, le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau, mais également
toutes modifications internes de ~ la peau qui ne se traduisent pas
systématiquement par un aspect extérieur modifié, comme par exemple toutes
dégradations internes de la peau, particulièrement du collagène, consécutives
à
une exposition aux rayonnements ultra-violets.
L'invention a pour second objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins
un
végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition,
l'extrait ou la composition étant destinés à stimuler de la synthèse du
collagène.
L'invention a pour troisième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au
moins un
végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition,
l'extrait ou la composition étant destinés à inhiber l'expression des
protéases de la
matrice extracellulaire, particulièrement des métalloprotéinases et encore
plus
particulièrement de la métalloprotéinase de type 1.



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L'invention a pour quatrième objet l'utilisâtion d'au moins un extrait d'au
moins un
végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition,
l'extrait ou la composition étant destinés à traiter les atteintes cutanées
liées à la
ménopause.
L'invention a pour cinquième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au
moins un
végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition,
l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre les rides et
ridules.
l0 L'invention a pour sixième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au
moins un
végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition,
l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre la peau flétrie.
L'invention a pour septième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au
moins un
végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition,
l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre la peau molle.
L'invention a pour huitième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au
moins un
végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition,
l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre la peau amincie.
L'invention a pour neuvième objet l'utilisation d'au moins un extrait d'au
moins un
végétal du genre Rosmarinus dans ou pour la préparation d'une composition,
l'extrait ou la composition étant destinés à lutter contre le manque
d'élasticité et/ou
de tonus de la peau.
L'extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus utilisé selon l'invention
peut
étre obtenu à partir de matériel végétal issu de plante entière ou de partie
de
plante comme les feuilles, les tiges, les fleurs, les pétales, les racines ou
encore
3o des cellules dédifférenciées.
Par cellules végétales dédifférenciées, on entend toute cellule végétale ne
présentant aucun des caractères d'une spécialisation particulière et capable
de
vivre par elle-même et non en dépendance avec d'autres cellules.
Préférentiellement selon l'invention on utilise de la plante entière,
particulièrement
de la tige et/ou des feuilles, très particulièrement des feuilles.



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L'extrait d'au moins un végétal du genre Rosmarinus peut être tout extrait
préparé
à partir de tout matériel végétal issu d'au moins un végétal du genre
Rosmarinus
cultivé in vivo ou issu de culture in vitro.
Par culture in vivo on entend toute culture de type classique c'est à dire en
sol à
l'air libre ou en serre, ou encore hors sol.
Par culture in vitro, on entend l'ensemble des techniques connues de l'homme
du
métier qui permet de manière artificïelle l'obtention d'un végétal ou d'une
partie
lo d'un végétal. La pression de sélection imposée par les conditions physico-
chimiques lors de la croissance des cellules végétales in vitro permet
d'obtenir un
matériel végétal standardisé et disponible tout au long de l'année
contrairement
aux plantes cultivées in vivo.
Préférentiellement selon l'invention on utilise un végétal du genre Rosmarinus
issu
de culture in vivo.
L'espèce Rosmarinus officinales comporte deux variétés qui sont Rosmarinus
tenuifolius et Rosmarinus latifolius.
L'extrait de l'invention peut être préparé à partir de matériel végétal
provenant de
l'espèce Rosmarinus officinales quelque soit la variété.
Toute méthode d'extraction connue de l'homme du métier peut être utilisée pour
préparer l'extrait selon l'invention.
On peut, en particulier, citer les extraits alcooliques, notamment
éthanoliques ou
encore hydroalcooliques.
Préférentiellement selon l'invention, l'extrait est un extrait aqueux.
On peut également utiliser un extrait préparé par la méthode décrite dans la
demande de brevet français n° 95-02379 déposée par la demanderesse.
Ainsi, dans une première étape on broie le matériel végétal dans une solution
aqueuse à froid et dans une deuxième étape les particules en suspension sont
éliminées de la solution aqueuse issue de la première étape. Cette solution
aqueuse correspond à l'extrait.
Eventuellement, dans une troisième étape on stérilise la solution aqueuse
issue de
la deuxième étape.
Cet extrait peut alors être lyophilisé.



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La première étape peut étre avantageusement remplacée par une opération de
congélation simple des tissus végétaux (par exemple à -20°C ou encore à
-180°C
dans l'azote liquide), suivie d'une extraction aqueuse reprenant les deuxième
et
troisième étapes ci-dessus décrites.
i0
Le traitement à froid permet de geler les activités enzymatiques, la
filtration
stérilisante évite la dégradation des actifs par les micro-organismes de
l'environnement. Enfin, le véhicule eau est compatible avec les récepteurs ex
vivo
et facilite les formulations cosmétiques ou pharmaceutiques.
II est connu que les extraits végétaux contiennent des oxydases responsables,
entre autres, de l'oxydation desdits extraits. Or une telle oxydation conduit
à une
coloration marron foncée des extraits et à une odeur âcre rendant ceux-ci peu
compatibles avec leur utilisation en cosmétique. Dans cet ordre d'idée on
connait
is en particulier une laccase dont le poids moléculaire est supérieur à 100000
daltons.
Ainsi, avântageusement, l'extrait obtenu peut être fractionné par toute
méthode de
fractionnement connue permettant d'éliminer les oxydases et en particulier la
2o polyphénoloxydase. On peut par exemple filtrer l'extrait de l'invention sur
une
membrane de dialyse afin d'en éliminer les molécules d'un poids moléculaire
supérieur à 100000 daltons. II est également possible de faire subir à
l'extrait un
fractionnement par précipitations sélectives.
25 D'autres méthodes permettent de se prémunir des phénomènes d'oxydation. En
particulier, l'extrait peut également être stabilisé. Toute méthode de
stabilisation
connue peut être utilisée selon l'invention. On peut par exemple stabiliser
l'extrait
de l'invention par barbotage d'azote pour éliminer l'oxygène dissout ou encore
en
y ajoutant de la cystéine et/ ou des dérivés soufrés à une concentration
finale
30 comprise entre 0,5 g/l et 10 g/l et de préférence entre 1 g/l et 2,5 g/l.
Bien évidemment l'extrait selon l'invention peut être fractionné et stabilisé.
L'extrait peut constituer à lui seul le principe actif des compositions de
l'invention.
Sous une forme particulière de l'invention, l'extrait ne contient pas d'acide
rosmarinique.



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Un exemple de préparation d'extrait utilisable selon l'invention est donné par
ailleurs dans les exemples.
La quantité d'extrait utilisable selon l'invention est bien entendu fonction
de l'effet
recherché et peut donc varier dans une large mesure.
Pour donner un ordre de grandeur, on peut utiliser un extrait tel que défini
précédemment en une quantité représentant de 0,001 % à 20% du poids total de
la
composition et préférentiellement en une quantité représentant de 0,01 % à 10%
du poids total de la composition.
La présente invention a en outre pour objet un procédé de traitement
cosmétique
de la peau destiné à stimuler la synthèse du collagène et/ou traiter les
atteintes
cutanées liées à l'âge et/ou à la ménopause et/ou lutter contre
l'amincissement du
derme et/ou combattre l'apparence de la peau molle et/ou ridée, caractérisé
par le
fait que l'on applique sur la peau, sur les cheveux, et/ou sur les muqueuses,
une
composition cosmétique comprenant au moins extrait d'au moins un végétal du
genre Rosmarinus.
Le procédé de traitement cosmétique de l'invention peut être mis en oeuvre
notamment en appliquant les compositions cosmétiques telles que définies ci-
dessus, selon la technique d'utilisation habituelle de ces compositions. Par
exemple : application de crèmes, de gels, de sérums, de lotions, de laits, de
shampooings ou de compositions ante-solaires, sur la peau, ou sur les cheveux
ou
encore application de dentifrice sur les gencives.
Les exemples et compositions suivants illustrent l'invention sans la limiter
aucunement. Dans les compositions les proportions indiquées sont des
pourcentages en poids.
Exemple 1 : Préparation d'un extrait de Rosmarinus officinales
636 grammes de matériel végétal de Rosmarinus officinales, partie aérienne
correspondant à des tiges et des feuilles, sont plongés dans environ 1 kg
d'azote
liquide.
Après élimination des tiges, les feuilles sont réduites en poudre par broyage
au
Turrax à 24000 T/min. durant 1 minute à 4°C (bain de glace).
La poudre obtenue est mélangée à 5 litres de tampon phosphate 0,05 M à pH 8,5.
L'ensemble est agité durant 30 minutes à 4°C, puis centrifugé à 10000 G
à 4°C.



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Le surnageant est filtré à 0,22 Nm (filtration stérilisante).
L'extrait est alors fractionné par ultrafiltration sur membrane de type
Sartorius afin
d'en éliminer les phénomènes d'oxydation.
L'extrait est ensuite lyophilisé. On obtient ainsi 29,5 grammes d'extrait
actif
5 dénommé "extrait lyophilisé".
Exemple 2 : Effet de l'extrait de l'exemple 1 sur la synthèse du collagène
L'étude est faite par mesure de l'incorporation de proline radioactive dans
des
cultures de fibroblastes dermiques huri-~ains normaux.
10 Les cultures de fibroblastes sont effectuées selon les méthodes classiques
de
culture cellulaire, à savoir en milieu MEM/M199 vendu par la société Gibco, en
présence de bicarbonate de sodium (1,87 mg/ml) de L-glutamine (2 mM), de
pénicilline (50 Ul/ml) et de 10% de sérum de veau foetal (Gibco).
Le test est effectué sur des cultures de cellules à 80% de confluence en
plaque de
24 trous. L'extrait de l'exemple 1 (extrait lyophilisé titré à 25 mg/ml d'eau
pour
obtenir une solution mère à 100%), aux concentrations finales de 0,2%, 1% et
2%,
est mis en contact avec les cellules pendant 48 heures. Le marquage à la
proline
tritiée (L-[2,3 3H]-proline vendue par Amersham, 33 ~Ci/ml) est effectué
pendant
24 heures.
Le taux de proline tritiée incorporée est mesuré en fin de test par
précipitation
acide des protéines sur filtres et comptage en scintillation liquide.
Les résultats sont évalués par rapport à un témoin constitué par des cellules
n'ayant pas été traitées avec l'extrait de l'exemple 1.
Un témoin positif (vitamine C à 20 p.g/ml) connu pour stimuler la synthèse du
collagène est introduit dans le test comme référence.
Les résultats de ce test, exprimés en pourcentages d'activation, sont
présentés
dans le tableau suivant
Traitement cpm % p


Cellules non traites 7498 - -


Vitamine C 13091 75 <0,01


0,2% 9537 8 >0,05


Extrait de l'exemple 1 1 9181 22 >0,05
%


2% 8098 27 >0,05





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cpm : coups par minute
p : intervalle de confiance calculé selon la méthode de Dunett.
Ces résultats montrent que l'extrait de l'exemple 1 stimule de façon
significative
l'incorporation de proline dans le collagène et donc qu'il présente un effet
sur la
néosynthèse du collagène. .
Exemple 3 : Effet de l'extrait de l'exemple 1 sur l'expression des
collagénases.
L'étude permet d'évaluer l'efficacité d'un produit à inhiber l'induction de la
transcription du gène de la collagénase par le rayonnement ultra-violet.
Le test est réalisé sur des cellules Hela (ATCC CCL2) dans lesquelles le
promoteur du gène de la collagénase 1 (3,8 kB) cloné en amont du gène de la
chloramphénicol acétyltransférase (CAT) a été introduit.
Les cellules sont exposées à un rayonnement ultra-violet B (UVB) émis par un
tube Phifips TL 12W/20, filtrés KADACEL afin d'éliminer les UVC, aux doses de
5
et 10 mj/cm2. Les cellules sont alors mises en contact pendant 2 heures avec
l'extrait de l'exemple 1 à des concentrations variant de 0,05% à 0,5%.
Le dosage de la CAT est réalisé à l'aide d'un kit "CAT-Elisa" vendu par la
société
Boehringer, selon les indications du fournisseur.
Un "taux de base" de l'expression de la CAT est mesuré dans des cellules
n'ayant
reçu ni rayonnement ultra-violet ni traitement par le produit à tester.
Les résultats du test, présentés dans le tableau ci-joint, sont exprimés par
rapport
au taux de base (100%), en pourcentage d'activation ou d'inhibition de
l'expression du gène CAT.
Ces résultats reflètent donc l'activité du promoteur de la collagénase 1 après
induction par les ultra-violets et en présence ou non du produit à tester.
UV B* Sans extraitExtrait Extrait
0,05% 0,1%


5 926 416 289


10 3930 1104 568


* : Dose en mJ/cm2
Ces résultats montrent que
- l'activité ~du promoteur de la collagénase est stimulée par les rayons UVB
(colonne "sans extrait") ;



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- - cette stimulation est diminuée en présence de l'extrait de l'exemple 1
(colonnes
"Extrait à ...") ;
Ces résultats montrent bien l'effet inhibiteur de la synthèse de la
collagénase 1,
par inhibition de l'activité de son promoteur, de l'extrait de Rosmarinus
officinalis
de l'exemple 1.
Exemple 4 : Exemples de formulations illustrant l'invention et
particulièrement les
compositions selon l'invention associant au moins un extrait de Rosmarinus
l0 officinalis. Ces compositions ont été obtenues par simple mélange des
différents
composants.
Composition 1 : Lotion dmaquillante pour
le visage


Extrait de l'exemple 1 10,00


Antioxydant 0,05


Isopropanol 40,00


Conservateur 0,30


Eau qsp 100,00


Composition 2 : Shampooing
Extrait de l'exemple 1 0,50
Hydroxypropyicellulose (Klucel H~ vendu par la société Hercules) 1,00
Parfum 0,50
Conservateur 0,30
Eau qsp 100,00
Composition 3 : Crme de soin du visage (mulsion ,
huile dans eau)


Extrait de l'exemple 1 2,00


Starate de glycrol 2,00


Polysorbate 60 (Tween 60~ vendu par la socit1,00
ICI)


Acide starique 1,40


Trithanolamine 0,70


Carbomer 0,40


Fraction liquide du beurre de karit 12,00


Perhydrosqualne 12,00


Antioxydant 0,05


Parfum 0,50


Conservateur 0,30





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Eau qsp 100,00
Composition 4 : Gel pour la peau
Extrait de l'exemple 1 0,50
Acide tout trans rétinoïque 0,05
Hydroxypropylcellulose (Klucel H~vendu par la société Hercules) 1,00
Antioxydant 0,05
Isopropanol 40,00
1o Conservateur 0,30
Eau qsp 100,00
Composition 5 : Gel pour le soin du visage
Extrait de l'exemple 1 5,00
Hydroxypropylcellulose (Klucel H~ vendu par la société Hercules) 1,00
Antioxydant 0,05
Isopropanol 40,00
Conservateur 0,30
Eau qsp 100,00
Composition 6 : Gel
Extrait de l'exemple 1 1,00
Hydroxypropylcellulose (Klucel H~ vendu par la société Hercules) 1,00
Antioxydant 0,05
Chlorhydrate de lidocaïne 2,00
Isopropanol 40,00
Conservateur . 0,30
Eau qsp 100,00
Composition 7 : Crme de soin de l'rythme solaire
(mulsion huile-dans-eau)


Extrait de l'exemple 1 2,50


Starate de glycrol 2,00


Polysorbate 60 (Tween 60 vendu par la socit ICI) 1,00


Acide starique 1,40


Acide glycyrrhtinique 2,00


Trithanolamine 0,70


Carbomer 0,40


Fraction liquide du beurre de karit 12,00





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Huile de tournesol 10,00
Antioxydant 0,05
Parfum 0,50
Conservateur 0,30
Eau qsp 100,00
Composition 8 : Crme de soin antirides pour
le visage (mulsion huile/eau)


Extrait de l'exemple 1 5,00


Starate de glycrol 2,00


l0 Polysorbate 60 (Tween 60~ vendu par la 1,00
socit ICI)


Acide starique 1,40


Acide n-octanoyl-5-salicylique 0,50


Trithanolamine 0,70


Carbomer 0,40


Fraction liquide du beurre de karit 12,00


Perhydrosqualne 12,00


Antioxydant 0,05


Parfum 0,50


Conservateur 0,30


Eau qsp 100,00


Composition 9 : Lotion
Extrait de l'exemple 1 0,50
Acide glycolique 50,00
Hydroxypropyfcellulose (Klucel H~ vendu par la société Hercules) 0,05
Conservateur 0,30
NaOH qsp pH = 2,8
Ethanol qsp 100,00

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Claims 2010-03-23 2 79
Claims 2001-07-09 3 136
Abstract 2001-07-09 1 58
Description 2001-07-09 14 618
Cover Page 2001-12-07 1 32
Description 2006-08-17 14 613
Claims 2006-08-17 3 86
Description 2008-08-26 14 612
Claims 2008-08-26 3 87
PCT 2001-07-09 17 674
Assignment 2001-07-09 5 143
Correspondence 2001-11-26 1 36
Assignment 2002-01-15 2 71
Prosecution-Amendment 2006-03-01 2 81
Prosecution-Amendment 2006-08-17 8 232
Prosecution-Amendment 2008-02-27 5 236
Prosecution-Amendment 2008-08-26 13 467
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Prosecution-Amendment 2010-04-28 3 74
Correspondence 2011-09-13 1 77
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Prosecution-Amendment 2010-12-21 4 204
Correspondence 2011-03-07 1 87