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COMPOSÉS LACTONES, UTILTSABLES EN TANT QU'AGENTS
ANTIOXYDANTS DANS DES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES,
COSMÉTIQUES OU ALIMENTAIRES ET LEUR PROCÉDÉ DE
PRÉPARATION
DESCRIPTION
DOMAINE TECHNIQUE
La présente invention a trait à des
composés lactones particuliers, pouvant être utilisés
en tant qu'agents antioxydants pour la fabrication de
compositions antioxydantes, en particulier de
compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou
alimentaires.
La présente invention a également trait à
un procédé de préparation de tels composés.
Le domaïne général de l'invention est donc
celui. des antioxydants.
ÉTAT DE LA TECHNIQUE
Les antioxydants ont pour particularité de
capter les radicaux libres, qui sont des molécules très
réactives intervenant dans de nombreuses pathologies,
en particulier les pathologies découlant d'un stress
oxydant, comme par exemple, les maladies
inflammatoires, les maladies cardiovasculaires, le
diabête.
Ainsi, certains antioxydants peuvent être
utilisés pour leur activité anti-inflammatoire, en
particulier les antioxydants permettant d'inhiber la
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production de cytokines pro-inflammatoires tels que le
facteur TNF-oc, dans les macrophages et les monocytes.
Les antioxydants peuvent également
intervenir dans la protection des cellules, en limitant
le déclenchement du programme gênétique de mort
cellulaire ou apoptose, pouvant être engendré par une
accumulation de radicaux libres.
Plusieurs antioxydants d'origine naturelle
ont fait l'objet également d'évaluations quant à leur
action contre le cancer. Ainsi, dans l'article de
M.Jang et al, « Cancer Chemoprotective Activity of
Resveratrol, a natural product derived from grapes »,
Science 1997, 275, 218-220 [1], le résvératrol, une
phytoalexine antioxydante extraite du raisin est
décrite comme présentant une activité préventive contre
le cancer sur des modèles animaux. L'article de M.V
Eberhardt et al. « Antioxydant Activity of Fresh
Apples », Nature 2000, 405, 903-904 [2] démontre que
des . extraits de pomme testés sur des lignées
cellulaires anticancéreuses engendrent, de même, une
activité antiproliférative in vitro de ces lignées.
Enfin, des études, telles que celles
publiées dans l'article de T.Finkel et al. « Oxydants,
Oxidative Stress and the biology of ageing », Nature
2000, 408, 239-247 [3] ont également mis en évidence
les liens entre stress oxydant et vieillissement
cellulaïre. De ce fait, on peut envisager d'incorporer
des antioxydants dans des compositions cosmétiques,
destinés à capter les radicaux libres responsables,
notamment de l'apparïtion de rides.
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EXPOSÉ DE L'INVENTION
Le but de la présente invention est de
proposer des composés lactones particuliers, dont
certains sont nouveaux, utilisables, de manière
particulièrement efficaces en tant qu'agents.
antioxydants pour la fabrication de compositions
antioxydantes, telles que des compositions
pharmaceutiques, cosmêtiques, et alimentaires.
Le but de la présente invention est de
proposer également un procédé de préparation de
composés lactones conformes à l'invention.
Ainsi, la présente invention a trait, selon
un premier objet, à des composés répondant à la formule
( I ) suivante
(I)
dans laquelle .
- les R~, R6, R~ et R8, identiques ou
différents, représentent H, -OH ou -OR9;
- R2 représente H, -OH ou -OR9 ; R3
représente H, R9, -C02R9 ou -CO-NHRlo ; ou Rz et R3
forment ensemble -O-CO- ;
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- les R4 et R5, identiques ou différents,
représentent H ou R9;
- R9 représente un groupe alkyle linéaire ou
ramifié, comportant de 1 à 20 atomes de carbone ;
- R1o reprêsente R9 ou un groupe - (CH2) a-NH-
(CH2) b-NHz, avec a et b, identiques ou différents,
étant des entiers allant de 2 à 4 ;
et les sels de ces composés ;
à l'exception .
- du composé pour lequel R2 et R3 forment
ensemble un groupe -OCO-, les R4, R5, R6 et R$
représentent H, les Rl et R7 représentent -OH et les
disels de potassium correspondant à ce composé ;
- du composé dans lequel R2 et R3 forment
ensemble un groupe -O-CO-, les R1 et R7 représentent
OCH3, les R4 et RS représentent -CH3 et les R6 et R$
représentent H ;
- du composé dans lequel les R1, R2 et R7
reprêsentent -O-CH3, R3 représente -COZCH3, les R4 et R5
représentent CH3 et les R6 et R$ représentent H.
Comme cela est mentionné ci-dessus,
l'invention comprend également les sels ëventuels
correspondant aux composés tels que définis ci-dessus.
On entend par sels, dans ce qui précède et
ce qui suit, les composés ioniques résultant de
l'action d'une base minérale sur le ou les protons
labiles d'un composé de formule (I).
Ainsi, lorsque RS représente H dans le
composé selon l'invention, le sel correspondant se
présente sous le forme suivante .
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Lorsque R4 représente H dans le composé
selon l'invention, le sel correspondant se prêsente
5 sous le forme suivante .
io
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le symbole A pouvant représenter pour les
deux formes salines susmentionnées un mêtal alcalin,
tel que Na+, K+, un cation ammonium NH4~''.
On précise que, pour le premier composé
exclu, les disels de potassium sont notamment ceux
représentés par la formule (XII) ci-après.
On précise que, selon l'invention, dans ce
qui précède et ce qui suit, on entend par groupe alkyle
linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes de
carbone, un groupe hydrocarboné insaturê tel qu'un
groupe méthyle, êthyle, propyle, isopropyle, butyle,
isobutyle, tertiobutyle.
Dans la formule (I), lorsque R2 et R3
forment ensemble un groupement -0-CO-, le composé
répond à la formule (II) suivante .
{II)
1 e s Rl , R4 , RS , R6 , R~ et RB rêpondant à 1 a même
définition que celle donnée précédemment. Ces composés,
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notamment de part la présence d'un motif cyclique
central avec un cycle lactone se caractérisent par un
pouvoir antioxydant particulièrement efficace.
Dans la formule (I), les Ra et R3 peuvent
également former indépendamment des radicaux identiques
ou différents, tels que des atomes d'hydrogène. A titre
d'exemple, on peut citer le composé ~de formule (III)
suivante .
(III)
dans laquelle les Rl; R2, R3, R6 et R$ représentent H, les
R4 et R5 représentent CH3 (désïgné par Me dans la
formule ci-dessus), les R~ représentent -OCH3 (désigné
par -OMe dans la formule ci-dessus).
En ce qui concerne le groupe R9, représentant un groupe
alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes
de carbone, on peut citer, à titre d'exemples, le
groupe méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle, t-butyle.
La présente invention a également pour
obj et un procédé de préparation de composés de formule
(I) suivante .
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(I)
dans laquelle .
- les R1, R6, R~ et R8, identiques ou
différents, représentent H, -OH ou -OR9;
- R2 représente H, -OH ou -OR9 ; R3
représente H, R9, -C02R9 ou -CO-NHRlo ; ou R2 et R3
forment ensemble -O-CO- ;
- les R4 et R5, identiques ou différents,
représentent H ou R9 ;
- R9 représente un groupe alkyle linéaire ou
ramifié, comportant de 1 à 20 atomes de carbone ;
- R1o représente R9 ou un groupe - (CH2) a-NH
(CH2) b-NH2, avec a et b, identiques ou diffêrents,
étant des entiers allant de 2 à 4 ;
et les sels de ces composés,
ledit procédé comprenant successivement .
- une étape consistant à faire réagir un composé de
formule (IV) suivante .
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(IV)
dans laquelle .
-les R1, R2 et R3 ont la même définition que celle
donnée précédemment ;
-les R11, Rl~ représentent, indépendamment, -B (OR13) (OR14)
ou -Sn (Rls) 3 ;
-les R13 et R14, idéntiques ou différents, représentent
H ou un groupe alkyle de 1 â 7 atomes de carbone ou les
R13 et R14 forment ensemble un groupe alkylène linéaire
ou ramifié ;
-Rls reprêsente un groupe méthyle ou butyle,
avec un composé de formule (V) suivante .
(V)
dans laquelle .
-les R4, R5, R6, R7 et R8 répondent à la même définition
que celle donnée précédemment ;
- X représente un groupe partant,
ladite rêaction s'effectuant en présence d'une base et
d'un catalyseur à base de platine ou palladium ; et
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-éventuellement une étape de traitement destinée à
obtenir un sel correspondant au composé de formule (I).
Lorsque R13 et R14 forment ensemble un groupe alkylène
linéaire ou ramifié, ce groupe comprend, par exemple,
5 de 2 à 3 atomes de carbone, tel que les groupes -CHZ-
CH~-, -CH2-CH2-CHz-, -C (CH3) 2-C (CH3) 2-, -CH (Ph) -CH2_
CH(Ph)-, Ph représentant un groupement phényle.
De préférence, le groupe partant X est
10 choisi parmi les halogènes tels que F, Cl, Br, I, le
triflate -O-S02CF3, le groupe de formule -O-S02- (CFZ) n-
CF3 avec n étant un entier allant de 1 à 8.
Selon l'invention, le catalyseur à base de
platine ou palladium est choisi de manière à obtenir
une réaction de couplage entre le composé de formule
(IV) et le composé de formule (V). De préférence, ce
catalyseur est un complexe de platine ou palladium, tel
que le dichlorobis(triphénylphosphine)palladium
PdCl2(PPh3)~, le tétrakis(triphénylphosphine)palladium
2 0 Pd ( PPh3 ) 4 .
Selon l'invention, la base utilisée dans
le cadre de ce procédé est une base choisie, par
exemple, parmi NaOH, Ba (OH) 2, Na2C03, K2C03, CsaC03,
K3P04, CH3COONa, CH3COOK, CH30Na, CH3CH20Na, les amines
telles que la triéthylamine.
L'éventuelle étape destinée à obtenir les
sels correspondants consiste, une fois le composé de
formule (I) obtenu, à traiter ce produit, par exemple
en faisant réagir sur celui-ci une base minérale.
Ainsi, lorsque les RS représentent H, un traitement par
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une solution d'hydroxyde de potassium permet obtenir
le disel de potassium correspondant, qui n'est autre
qu'un dicarboxylate de potassium.
On note que le procédé selon l'invention
peut comporter éventuellement des étapes de protection
des fonctions sensibles aux conditions réactionnelles,
l
ces fonctions étant ensuite déprotégées en fïn dudit
procédé. Ces étapes de protection et de déprotection
sont des étapes à la portée de l'homme du métier.
De manière plus détaillée, le procédé de
préparation des composés de formule (I) peut se
dérouler de la manière suivante.
Dans un premier temps, il est procédé au
mélange des rêactifs répondant aux formules (IV) et,
(V) avec un catalyseur adéquat tel que mentionné ci
dessus , dans un solvant aprotique, par exemple du
tétrahydrofurane (THF), sous atmosphère de gaz inerte.
Ensuite, après homogénéisation du mélange
réactionnel, on introduit une base, par exemple, du
bicarbonate de sodium.
Le mélange réactionnel est ensuite porté à
reflux sous agitation vigoureuse pendant une durée
adéquate (c'est-à-dire la durée nécessaire à
l'obtention du composé de formule (I), l'avancement de
la réaction pouvant être suivi par des techniques
classiques telles que 1a chromatographie sur couche
mince) .
Le mélange réactionnel est alors traité par
ajout d'eau. La phase aqueuse est extraite avec un
solvant organique, par exemple du dichlorométhane. Les
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phases organiques sont rêunies, séchées puis
concentrées. Le produit obtenu est finalement purifié
par des techniques classiques telles que la
chromatographie sur colonne.
Le procédê de préparation des composés
conformes à l'invention met en jeu des composés de
formule (IV) et (V), qui peuvent être disponibles
commercialement ou préparés avant la mise en oeuvre du
procédé de l'invention.
Ainsi, le composé de formule (IV), avec R1s
et Rl~ représentant -B (OR13) (OR14) , peut être obtenu en
faisant réagir un composé dêrivé du naphtalène de
formule (VI)
Ri
(VI)
dans laquelle .
-les Rl, R~ et R3 ont la même définition que celle
donnée précêdemment ;
- les Y, identiques ou différents, représentent des
groupes partants choisis, par exemple, parmi les
halogènes tels que le fluor, chlore, brome, iode, le
triflate -O-SO~-CF3,
avec un composé boré rëpondant à l'une des formules
suivantes .
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~~R13 RigO- .OR13
~\B-B/A~
R14 R14~ OR14
R13 et R14 ayant la même signification que celle donnée
ci-dessus,
ladite réaction s'effectuant en présence d'une base et
d'un catalyseur à base de platine ou de palladium tel
que le l,1'-bis(diphénylphosphino)ferrocène
dichloropalladium ou PdCl2(dppf), dppf signifiant le
1,1'-bis(diphénylphosphino)ferrocène.
Le composé de formule (V), quant à lui,
peut être obtenu par un procédé comprenant la
succession d'étapes suivantes .
a) réaction d'un phénylacétate de formule (VII)
suivante
(VII)
les R5, R6, R7 et R8 ayant la même définition que celle
donnée précédemment, en milieu basique, avec un oc-
alcoxyacétate d'alkyle de formule R40-CHZ-CO-OAlk, R4
répondant à la même définition que celle donnée
précédemment, le groupement Alk étant un groupement
alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 20 atomes
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de carbone, à l'issue de laquelle l'on obtient un
composé de formule (VIII) suivante .
(VIII)
b) réaction du composé (VIII), en milieu basique avec
un composé silylé de formule (R~,6) 3SiHal, R16 étant un
groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4
atomes de carbone, Hal étant un groupe halogène, tel
que F, Cl, Br, I, à l'issue de laquelle l'on obtient un
composé disilylé de formule (IX) suivante:
(IX)
c) réaction de cyclisation du composê (IX) avec le
chlorure d'oxalyle (C1C0)2, à l'issue de laquelle l'on
obtient le composé de formule (X) suivante .
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(X)
d) réaction du composé (X) avec un réactif apte à
5 former par réaction avec le -OH du cycle lactone un
groupe partant X à l' issue de laquelle l' on obtient le
composé de formule (V) .
A titre d'exemples, ce groupe partant X
peut être choisi parmi les halogènes, le triflate -O
10 S0~-CF3 ou le groupe de formule -O-S02- (CF2) n-CF3 avec n
étant un entier allant de 1 à 8.
On note que, dans les formules ci-dessus,
les liaisons symbolisées par .
15 signifient que les composés concernés peuvent exister
sous leurs différentes formes isomères.
Ainsi, dans l'étape a), la réaction
s'effectue dans un milieu basique, ce milieu étant
destiné à déprotoner le groupement -CH2- situé en
position oc du groupement -CORS du composé (VII). Ce
milieu basique peut être par exemple une solution de
diisopropylamidure de lithium (ou LDA). L'espèce
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réactive ainsi formée se condense avec l'oc-
alcoxyacétate d'alkyle pour donner le produit (VIII).
Les étapes b) et c), qui consistent à synthétiser un
composé 1,3-bis(trialkylsiloxy)-1,3-butadiène (IX),
suivi d'une cyclisation sont adaptées des travaux de
Langer, tels que ceux explicités dans la publication
« Domino Reaction of 1,3-bis(trimethylsilyloxy)-1,3-
dienes with Oxalyl Chloride . General and
Stereoselective Synthesis of y-Alkylidenebutenolides »
P.Langer et al., Chem.Eur.J.2000, 6, N°7, 3204-3214
[6] .
Enfin, l'étape d) peut s'envisager selon
tout type de réactions à la portée de l'homme de l'art,
lesdites réactions permettant de convertir le
groupement -OH en groupement réactif tel qu'un triflate
ou un fluoroalkylsulfonate -SOZ- (CF2)n-CF3 avec n étant
un entier allant de 1 à 8.
A titre d'exemple, lorsque le groupe
partant X est un groupe triflate (symbolisé par OTf),
le composé référencé 5a faisant partie des composés de
formule (V), peut être synthétisé selon le schéma
réactionnel particulier suivant .
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COZRS
1) i-Pr2NLi,-78°C
THF
2) Rq0-CHZ-COZMe
RB RB
R~
1) Et3N, Me3SiC1
2) i-Pr2Nli, -78°C
suivi de Me3SiC1
~ (C1C0)2
Me3SiOTf(0,3 é
CH2Ciz, -78°C
(9a)
)
Tf20
Pyridine
Selon ce schéma de synthèse particulier, le
triflate (5a) est préparé à partir de l'alcool
correspondant (X) par traitement avec l'anhydride
triflique (Tf20), en présence d'une base telle que la
pyridine. L'alcool (X) provient de la réaction d'un
1,3-bis(triméthylsiloxy)-1,3-butadiène (9a)
convenablement substitué avec le chlorure d'oxalyle,
catalysée par du triflate de méthyle. Cette réaction de
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cyclisation, ainsi que la préparation du 1,3-
bis(triméthylsiloxy)-1,3-butadiène (9a) sont adaptés
des travaux de Langer, tels que ceux mentionnés ci-
dessus. Le (3-cétoester (VIII) précurseur du 1,3-
bis(triméthylsiloxy)-1,3-butadiène (9a) est obtenu par
réaction de l'énolate lithié formé à partir du
phénylacétate correspondant (VII) avec un oc-
alcoxyacétate de méthyle.
Les inventeurs ont découvert, de manière
surprenante, que les composés (I) tels que définis dans
le premier objet, y compris les composés exclus,
peuvent être utilisés, de manière efficace, en tant
qu'agents antioxydants pour la fabrication de
compositions antioxydantes.
Ainsi, la présente invention a également
pour objet des agents antioxydants de formule (I)
suïvante .
(I)
dans laquelle .
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- les R1, R6, R~ et R8, identiques ou
différents, représentent H, -OH ou -OR9 ;
- R2 représente H, -OH ou -OR9 ; R3
représente H, R9, -C02R9 ou -CO-NHRla ; ou R2 et R3
forment ensemble -O-CO- ;
- les R~ et R5, identiques ou différents,
représentent H ou R9;
- R9 représente un groupe alkyle linéaire ou
ramifié, comportant de 1 à 20 atomes de carbone ;
- Rlo représente R9 ou un groupe - (CHZ) a-NH-
(CH2)b-NH~, avec a et b, identiques et différents,
étant des entiers allant de 2 à 4 ;
et les sels de ceux-ci. '
Lorsque R~ et R3 forment ensemble -O-CO-,
l'agent antioxydant présente une structure chimique
identique à celle du composé de formule (II) dêfinie
ci-dessus.
Parmi ces agents de formule (II), on peut
citer la norbadione sous forme diacide, pour laquelle
les R1 et R~ représentent -OH, R2 et R3 forment ensemble
-O-CO-, les R4, R5, R6 et R$ représentent H. La
norbadione sous forme diacide peut être représentêe par
la formule (XI) suivante .
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(XI)
On peut citer également, parmi les agents
5 antioxydants selon l'invention, la norbadione sous
forme de disel potassique, qui peut être ainsi
représentée par la formule (XII) suivante (pouvant
présenter deux formes (a) et (b) )
(XII)
cs~ cb~
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La norbadione est un produit naturel, qui
a été extrait à ce jour de deux espèces de champignons.
Elle constitue l'un des pigments du chapeau du bolet
bai (Xerocomus badins), qui est une espèce comestible
très appréciée, tel que cela est décrit dans l'article
« Pigments from the cap_cuticle of the Bay Boletus »,
Angew.Chem.Int.Ed.Engl.23(1984),n°6 [4]. On la trouve
également dans le pisolithe des sables (Pisolïthus
ti.nctorius), comme l'indique l'article intitulé « A
naphtalenoid pulvinic acid derivative from the Fungus
Pisolithus Tinctorius », Phytochemistry, vol 24, n°6,
pp 1351-1354, 1985 [5] .
La norbadione est extraite de ces
champignons sous forme de disel de potassium (formule
XII) et peut être convertie en le diacide correspondant
(formule XI) par traitement avec une solution d'acide
chlorhydrique.
Les inventeurs ont, de manière surprenante,
mis en évidence l'activité antioxydante de la
norbadione.
Grâce à leurs propriétés antioxydantes
particulièrement efficaces, les agents antioxydants de
formule (I) peuvent entrer dans la fabrication de
compositions antioxyda.ntes, en particulier de
compositions pharmaceutiques, de compositions
cosmétiques ou de compositions alimentaires.
Ainsi, l'invention a trait à des
compositions pharmaceutiques, comprenant au moins un
agent antioxydant selon l'invention tel que défini
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précédemment et un véhicule pharmaceutiquement
acceptable.
On entend par véhicule pharmaceutiquement
acceptable un vêhicule, qui peut être administré à un
individu en même temps que l'agent antioxydant et qui
ne comporte pas d'effet biologique indésirable.
Ces compositions pharmaceutiques peuvent
être utilisées pour le traitement des maladies
découlant d'un stress oxydant.
Ainsi, ces compositions pharmaceutiques
comprenant les agents selon l'invention peuvent être
utilisées pour le traitement de maladies
ïnflammatoires, en particulier les maladies se
traduisant, en réaction à un allergisant, par la
production de cytokines.
Par exemple, des compositions
pharmaceutiques comprenant de la norbadione sous forme
de diacide (formule XI) ou de disel (formule XII)
contribuent, de façon dose-dépendante à diminuer la
production de cytokines TNF-oc et IL-10 d'un hôte
infecté par un allergisant tel qu'un liposaccharide, ce
qui montre que les agents antioxydants, selon la
présente invention, présentent une activité anti
inflammatoire.
Ces compositions pharmaceutiques peuvent
être également utilisées pour assurer un effet
protecteur de cellules vis-â-vis d'une apoptose
consécutive à une accumulation de radicaux libres au
sein desdites cellules.
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Ainsi, ces compositions peuvent être
utilisées pour traiter, de manière préventive ou
curative, des cellules ou un organismes vivant
exposés) à un rayonnement ionisant induisant la
production de radicaux libres.
De ce fait, ces compositions sont aptes à
contrer les effets d'un rayonnement ionisant (par
exemple, celui émanant d'une zone contaminée par des
substances radioactives) ou d'un rayonnement ultra-
violet envers des cellules soumises audit rayonnement,
du fait que les agents antioxydants selon la présente
invention incorporés dans ces compositions captent les
radicaux formés par action dudit rayonnement sur ces
cellules or organismes vivants.
Ces compositions peuvent également être
utilisées pour inhiber les effets secondaires d'un
médicament induisant la production de radicaux libres.
De ce fait, ces compositions peuvent atténuer la
cytotoxicité de médicaments, engendrant par leurs
effets secondaires, un stress oxydant, tel que cela est
le cas du cisplatine.
En d'autres termes, l'invention a trait à
l'utilisation d'un agent antioxydant tel que défini
précédemment pour la fabrication d'une composition
pharmaceutique destinée au traitement de maladies
inflammatoires.
L'invention a trait à l'utilisation d'un
agent antioxydant tel que dêfini précédemment pour la
fabrication d'une composition pharmaceutique destinée
au traitement d'un organisme vivant exposé à un
rayonnement ionisant.
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L'invention a enfin trait à l'utilisation
d'un agent antioxydant tel que défini précédemment pour
la fabrication d'un médicament destiné à inhiber les
effets secondaires d'un médicament induisant la
production de radicaux libres. ,
On précise que, selon l'invention, on
entend par traitement, un traitement pouvant être
préventif mais également curatif.
De plus amples détails concernant
l'activité de ces compositions incorporant des agents
antioxydants selon~l'invention tels que mentionnés ci
dessus seront explicités dans la partie détaillée de la
description.
La présente invention a également pour
objet des compositions cosmétiques incorporant au moins
un agent antioxydant selon l'invention.
Ces compositions cosmétiques peuvent se
présenter sous différentes formes, telles que des
crèmes, huiles, destinées à un usage topique cutané, le
rôle des agents antioxydants étant de piéger les
radicaux libres au niveau de la surface cutanée sur
laquelle est appliquée la composition cosmétique. Les
compositions selon l'invention contribuent ainsi à
ralentir le processus de vieillissement cutané,
engendrê notamment par l'accumulation de radicaux
libres .
Enfin, la présente invention a pour objet
des compositions alimentaires, comprenant au moins un
agent antioxydant selon l'invention. Les agents
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antioxydants selon la présente invention peuvent être
utilisés, en particulier, en tant qu'additifs dans des
compositions alimentaires pouvant produire, lors de
leur vieillissement des radicaux libres, tels que les
5 huiles, le beurre.
Des agents antioxydants particulièrement
efficaces pouvant entrer dans les compositions
pharmaceutiques, cosmêtiques ou alimentaires,
correspondent aux agents de formule (XI) ou (XII), tel
10 que définis ci-dessus.
D'autres avantages et caractéristiques de
la présente invention apparaîtront encore à la lecture
de la description qui suit, donnée à titre illustratif
15 et non limitatif en référence aux dessins annexés.
Bréve description des dessins.
les figures 1, 2 et 3 sont des graphiques illustrant
20 l'activité antioxydante de la norbadione sous forme
de disel potassique par rapport à des antioxydants
classiques, ladite activité antioxydante étant mise
en évidence par suivi de la dégradation de la
thymidine soumise à un stress ôxydant de nature
25 radiative (rayons y émis par le 137Cs sur la figure 1
ou rayons W sur la figure 2) ou de nature chimique
( f figure 3 ) ;
- les figures 4 et 5 sont des graphiques illustrant
l'effet anti-inflammatoire de la norbadïone sous
forme de diacide (figures 4) ou de disel potassique
(figures 5) par mesure de la production de certaines
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cytokines par des cellules soumises à un
allergisant ;
- la figure 6 est un graphique illustrant l'activité
protectrice de la norbadione sous forme de diacide
ou de disel potassique vis-à-vis de cellules
soumises à un rayonnement ionisant ;
- la figure 7 est un graphique illustrant l'activité
protectrice de la norbadione sous forme de diacide
ou de disel potassique vis-à-vis de cellules
soumises à l'action du cisplatine ;
- la figure 8 est un graphique qui représente la
contraction vasculaire d'anneaux d'aorte de rat C(g)
(g signifiant gramme) en fonction de la
concentration en pyrrogallol [Pyr] (~t.M) , en
l'absence de norbadione et en présence de norbadione
s o o ~,Nt ;
- la figure 9 est un graphique représentant le taux de
relaxation vasculaire d' anneaux d'aorte de rat R(%)
en fonction de la concentration en Sin-1 [Sin-1]
((.~,M) en l'absence de norbadione et en présence de
norbadione 100 ~t.M.
EXPOSE RETAILLE DE L'TNVENTION
Les exemples 1 à 5 illustrent les
propriêtés antioxydantes de la norbadione sous forme de
diacide ou de disel.
L'exemple 6 illustre un exemple de synthèse
totale d'un composê de formule (III) présentant
également une activité antioxydante.
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Exemple 1. Évaluation de l'activité antioxydante de la
norbadione.
L'évaluation de l'activité antioxydante du
disel potassique de la norbadione a été effectuée par
un test de criblage in vitro.
Ce test est basé sur le suivi de la
dégradatïon de la thymidine soumise à différents stress
oxydants en présence de différents agents antioxydants,
qui sont la norbadione sous forme de disel potassique
(intitulée Nor-B sur les figures 1 à 3) conforme à
l'invention, et les agents antioxydants suivants .
quercétine (1), fisétine (2), myricétine (3), catéchine
(4), 7-hydroxy-4-méthyl-8-nitrocoumarine (5), Trolox
(6) sur les figures 1 à 3.
En prêsence d'un antioxydant, la thymidine
est protégée de maniêre plus ou moins efficace selon la
nature dudit antioxydant. L'effïcacité de l'antioxydant
est quantifiée en dosant la thymidine restante
(quantifiée en ~ en ordonnée du graphique) à l'aide
d'un dosage immunoenzymatique, du type ELISA dit « par
compétition ». Ce dosage ELISA consiste à réaliser une
compétition de liaison à un anticorps monoclonal
spécifique de la thymidine fixé sur une phase solide,
entre la thymidine restante à la fin du test et la
thymidine marquée par une enzyme (l'acétylcholine
estérase). Après lavage, l'enzyme fixée est quantifiée
par détection colorimêtrique à l'aide du diacide 5,5'-
. dithio-bis(2-nitrobenzoïque) (dit réactif d'Ellman) et
en prêsence d'acétylcholine.
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Trois séries de tests ont été mises en
aeuvre
- une première série consistant à doser la
thymidine restante suite à une irradiation gamma
(pendant 3H30) induite par du césium 137, ladite
thymidine étant présente en début de test à une
concentration de 15 [.lM avec une concentration
d' ant ioxydant de 12 ~t.M ( f figure 1 ) ;
- une deuxième série consistant à doser la
thymidine restante suite à une irradiation
ultraviolette à 254 nm (1,75J/cm2) en présence de H202
5mM, ladite thymidine étant présente en début de test à
une concentration de 70 ~,M avec une concentration
d' ant ioxydant de l0 0 EI.M ( f figure 2 ) ;
- une troisième série consistant à doser
la thymidine restante soumise à un stress chimique
oxydant (réactif de Fenton FeS04/EDTA 0,35mM en
présence de H202 35mM), ladite thymidine étant présente
en début de test à une concentration de 70 (.LM avec une
concentration d'antioxydant de 20 ~.t,M (figure 3) .
Les résultats de ces tests sont regroupés
respectivement, pour la première série sur la figure 1,
pour la deuxième série sur la figure 2, pour la
troisième série sur la figure 3.
Les figures 1 à 3 montrent explicitement
que la norbadione présente le meilleur pouvoir
antioxydant (ce dernier étant quantifié par la mesure
du pourcentage de thymidine restante après action du
stress oxydant, ~ représenté en ordonnée des graphiques
des figures 1 à 3) par comparaison, par exemple, avec
la quercétine (1) issue du thé ou du vin réputée pour
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sa propriété antioxydante puissante et par comparaisons
avec les autres agents antioxydants classiques (2),
(3) , (4) , (5) et (6) .
EXEMPLE 2. Evaluation du ouvoir anti-inflammatoïre de
la norbadione.
Dans cet exemple, on démontre l'effet
biologique antiinflammatoire induit par l'activité
antioxydante de la norbadione sous forme de diacide ou
de disel potassique, en détectant des cytokines
produites par des cellules de type monocytes lors d'un
traitement par un liposaccharide allergisant. Ce
liposaccharide est une endotoxine située sur la
membrane externe des bactéries Gram-négatives. En
particulier, i1 stimule la production de cytokines pro-
inflammatoires par les cellules mononucléaires
(monocytes, macrophages) de l'hôte infecté.
Si en présence du produit à tester, une
modification de la production des cytokines est mise en
évidence, on en déduit que le produit présente un
activité anti-inflammatoire.
Ce test est effectué de la façon suivante.
Des cellules sanguines humaines de donneurs sains
(dites PBMC pour 'peripheral blond mononuclear tells')
sont incubées avec la norbadione sous forme diacide ou
de disel potassique à des concentrations croissantes
(de 10-$ M à 10-5 M) avec ou activation simultanée par
le lipopolysaccharide de Salmonella abortus equi à la
concentration de 5 ju.g.mL-i, dans des plaques de culture
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de 24 puits, pendant 24 heures à 37°C, dans une
atmosphère humidifiée de 5~ en CO2 et 95~ en air. Après
incubation, le surnageant est enlevé et stocké à -20°C
jusqu'à réalisation du test.
5 Plus précisément, la détection des
cytokines présentes dans les échantillons est mesurée à
l'aide d'un dosage ELISA cytométrique de type
« sandwich ». Des microparticules (billes) de
polystyrène (de 6 types différents, chacunes étant
10 marquées par une quantité différente de colorant
fluorescent dont la longueur d'onde d'émission FL-3 est
d'environ 650 nm) sont couplées à un anticorps
spécifique de l'une des 2 cytokines TNFOC, IL-2, IL-
10. On obtient ainsi des anticorps de type Ac-PS. Lors
15 de l'incubation, les cytokines présentes dans
l'échantillon sé lient aux anticorps Ac-PS. Les
cytokü~.es capturées sont détectées à l'aide d'un test
immunologique mené directement, qui utilise 2 anticorps
spécifiques de chaque cytokine couplés à de la
20 phycoérythrine qui émet à une longueur d'onde FL-2
d'environ 585 nm (Ac-PE). Après lavage de l'excès de
Ac-PE, la présence des cytokines est mesurée par
cytométrie en flux.
On mesure la fluorescence selon les 6
25 intensités de fluorescence FL-3 et selon la longueur
d'onde FL-2. L'intensité de la fluorescence FL-3 permet
de déterminer la quantité de chaque cytokine présente
dans l'échantillon (par comparaison avec des courbes
standards).
30 De plus amples informations concernant
cette technique sont disponibles dans l'article de Cook
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et al, Journal of Tmmunological Methods, 2001, 254,
pages 109-118 [7]
Les résultats de ces tests sont regroupés
sur les figures 4 à 5 qui représentent le pourcentage
de réponse noté % (c'est-à-dire la quantité de
cytokine observée par rapport à la quantité observée
lors d'un contrôle où le produit n'a pas été ajouté) en
fonction de la concentration (en nM) de norbadione sous
forme de diacide ou de disel potassique, noté [Nor-A]
ou [Nor-B] sur lesdites f figures .
En présence de norbadione sous forme de
diacide (Nor-A) (figure 4), ou de norbadione sous forme
de disel potassique, (Nor-B) (figure 5) , les tests ont
mis en évidence une réduction significative dose-
dêpendante de la production de cytokines TNF-a et IL-
10, ce qui prouve l'effet anti-inflammatoire de la
norbadione.
EXEMPLE 3. Evaluation de l'activité de protection par
la norbadione de cellules soumises à un rayonnement
Ce test consiste à mesurer, en présence ou
en l'absence de la norbadione sous forme de diacide ou
de disel potassique, le taux de survie de cellules
traitées par un rayonnement ionisant, à l'aide
d'indicateurs sélectifs de certains organites
cellulaires tels que les mitochondries.
Des échantillons de norbadione sous forme
diacide ou de disel potassique sont ajoutés à des
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cultures de cellules RDM4 (lymphomes de souris AKR) à
des concentrations croissantes (de 0,12 à 20 ~.l,g/mL),
deux heures avant l'irradiation. Celle-ci est réalisée
par exposition de plaques microtests contenant les
cellules à des rayons X de 15 MV, à 8 Gy, le milieu de
culture étant inchangé.
Le nombre de cellules vivantes est
déterminé au sixième jour au moyen du test Uptiblue
(qui consiste à mesurer l'actïvitê mitochondriale des
cellules). Le réactif Uptiblue (réazurine, encore
commercialisé sous la marque ALAMAR BLUE) est un
indicateur coloré d'oxydorêduction. La réazurine
(bleue et non fluorescente) est réduite en résorufine
(rose et fluorescente) par les cellules vivantes.
Expérimentalement, l'Uptïblue (dilué au 1/4
dans le milieu de culture) est ajouté aux cellules à
raison de 20 ~,L par puits de 200 ~,L. Après une
incubation de 4 heures à 37°C, on mesure la
fluorescence à une longueur d'onde de 590 nm, après
excitation à une longueur d'onde de 530 nm à l'aide
d'un lecteur de mïcroplaques en fluorescence
(Fluorolite 1000, Dynex). L'intensité de fluorescence
est proportionnelle au nombre de cellules vivantes.
Elle est exprimée en « unité arbitraire de
fluorescence ». Cette valeur dépend du rêglage de
l'appareil (notamment de la tension) et du bruit de
fond (du à la fluorescence émise par des puits ne
contenant pas de cellules, mais contenant de
l'Utpiblue). Cette dernière valeur est soustraite des
valeurs expérimentales.
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Les résultats de ce test sont regroupés sur
la figure 6, qui représente la fluorescence observée
permettant de quantifier le nombre de cellules
vivantes, ladite fluorescence étant exprimée en unités
arbitraires de fluorescence en ordonnée du graphique
(U.A.F) en fonction de la concentration en norbadione
sous forme de diacide ou de disel potassique, notée
[Nor-A] ou [Nor-B] (en ~,g/mL) . Sur cette figure, on
constate une forte augmentation du nombre de cellules
vivantes en fonction de la concentration de la
norbadione.
Cependant, à partir d'une concentration en
norbadione de 20 ~,g/mL, cette valeur diminue fortement.
On en déduit ainsi, que la nordadione, sous
sa forme de disel ou de dïacide, protêge les cellules
contre les rayonnements ionisants, de manière
significative et dose-dépendante.
On peut noter que, sans irradiation, la
norbadione est sans effet sur la croissance et la
viabilité des cellules RDM4, méme â 20 [.t,g/mL.
EXEMPLE 4. Evaluation de l'activité de protection par
la norbadione de cellules soumises à l'action du
cisplatine.
Ce test consiste à mesurer, en présence de
norbadione sous forme de diacide ou de disel
potassique, le taux de survie de cellules traitées par
le cisplatiné.
Des cellules Kl de carcinomes thyroïdiens
humains sont cultivées dans des plaques microtest de 96
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puits à font plat en présence d'une concentration
unique (20 ~,g/mL) de norbadione sous forme de diacide
ou de disel potassique. Après deux heures, un agent
génotoxique, le cisplatine, est ajouté au milieu de
culture à des concentrations croissantes (de 12 à 100
~.M). Deux jours plus tard, le nombre de cellules est
déterminé au moyen du test à la sulforhodamine B (dite
SRB), qui mesure la quantité de protéines cellulaires.
La sulforhodamine B (dite SRB) est un
colorant anionique se fixant de façon électrostatique
aux protéines cellulaires. Ce test est fréquemment
utilisé pour l'évaluation des activités cytotoxiques et
cytostatiques de nouvelles drogues antitumorales.
De plus amples informations concernant
cette technique sont disponibles dans l'article de
Papazisis et col « Optimization of the sulforhodamine B
colorimetric assay », J.Immunol.Meth, 208, pages 151
158, 1997 [8] .
Les résultats de ce test sont regroupés sur
la figure 7, qui représente la fluorescence observée
près addition de SRB (exprimée en unités arbitraires de
fluorescence) en fonction de la concentration en
cisplatine (en E1M) .
D'après cette figure, l'on peut constater
que la cytotoxïcité du cisplatine est três nettement
atténuée par la prêsence de norbadione sous forme de
disel( courbe a) ou de diacide (courbe b), par rapport
au cas où la cytotoxicité du cisplatine est évaluée en
l'absence de norbadione (courbes c et d).
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Cette activité de protection des cellules
vis-à-vis du cisplatine découle de l'activité
antioxydante de la norbadione.
5 EXEMPLE 5 - Effets de la norbadione sur les anneaux
d'aorte de rat.
Cet exemple a pour objectif de montrer
l'activité antioxydante de la norbadione sous forme de
10 disel potassique sur les anneaux d'aorte de rat.
Ces séries de tests mettent en évidence
l'activité antioxydante de la norbadione sur les
anneaux d'aorte de rat.
Au cours d'une première série de tests, on
soumet, dans un premier temps, des anneaux d'aorte de
rat, au pyrogallol, générateur de radicaux superoxydes,
ces radicaux induisant une contraction des anneaux
d'aorte de rat et on mesure, en l'absence de norbadione
le taux de contraction de ces anneaux.
Dans un deuxième temps, on réitère les
mêmes opérations, dans les mêmes conditions que celles
mentionnées ci-dessus, cette fois en présence de
norbadione.
Les résultats sont regroupés sur la figure
8, qui représente le taux de contraction vasculaire des
anneaux C(g) en fonction de la concentration en
pyrrogallol [Pyr] (~,I,M) , en l' absence de norbadione
(courbe a) et en présence de norbadione à la
concentration de 100 [.1,M (courbe b) .
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L'on constate que la courbe (a) est située
au-dessus de la courbe (b), ce qui signifie que la
contraction des anneaux d'aorte provoquée par le
pyrogallol est supprimée en présence de norbadione, du
fait que la norbadione capte les espèces oxygénées
réactives radicalaires engendrées par le pyrogallol.
Au cours d'une deuxième série de tests, on
soumet des anneaux d'aorte de rat, au SYN-1 (3-
morpholino-sydnonimime), générateur de radicaux NO,
induisant une relaxation des anneaux d'aorte de rat et
on mesure le taux de relaxation de ces anneaux. En
présence de norbadione, on mesure, dans les mêmes
conditions que celles mentionnées ci-dessus, le taux de
relaxation des anneaux. Les résultats sont reportés sur
la figure 9, qui représente le taux de relaxation
vasculaire des anneaux R(%) en fonction de la
concentration en Sin-1 [Sin-1] (~,M) en l'absence de
norbadione (courbe a) et en présence de norbadione
100 [.i.M) (courbe b) .
L'on constate que la courbe (a) est située
en-dessous de la courbe (b), ce qui signifie que la
relaxation des anneaux d'aorte provoquée par le SYN-1
est amoindrie en présence de norbadione, du fait que la
norbadione capte partiellement les radicaux NO.
EXEMPLE 6-Préparation du com osé de formule (III)
Cet exemple présente un exemple de
préparation d'un composé de formule (III) .
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(III)
Ce composé est conforme â la définition
générale des composés de formule (I) , avec les R1, R~,
R3, R6 et R$ représentent H, les R4 et R5 représentent
CH3, les R~ représentent -OCH3.
La synthèse de ce composé correspond au
schéma réactionnel suivant .
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1) i-Pr2NLi, -78°C
.THF
2) Me0-CHZ-COZMe
(7a)
(8a)
1) Et3N, Me3SiC1
2) i-Pr2NLi, -78°C
suivi de Me3SiCl
~SiMe3
(C1C0)2
Me3SiOTf (0,3
CHZCL2, -78°C
(9b)
(IDa)
Tf20
Pyridine
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suivi d'un couplage dit « de Suzuki » pour former la
molécule de formule (III), le couplage étant précédé de
la synthèse du composé (4a) .
+2
c~n
On précise que les déplacements chimiques pour les
résultats de RMN 1H et de RMN 13C sont symbolisés par 8
et sont exprimés en ppm.
a)Préparation du composé (8a).
Dans un bicol de 100 mL, le 4-
méthoxyphénylacétate de méthyle (7a) (4,7 mL ; 29,6
mmol ; 2éq) est dissous dans le THF (15 mL) et le
mêlange est refroidi vers -70°C. Une solution de
diisopropylamidure de lithium 2M dans l'heptane (15
mL ; 30 mmol ; 2éq) est ajoutée goutte à goutte à la
seringue et le mélange est maintenu 1 heure vers -70°C.
Le méthoxyacétate de méthyle (1,5 mL ; 15 mmol ; 1 éq)
est additionné à la seringue et on laisse réagir 5.
heures en revenant lentement à température ambiante.
Après hydrolyse par une solution saturée de chlorure
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d'ammonium, la phase aqueuse est extraite 3 fois au
dichlorométhane, séchée sur MgS04 et filtrée. Après
évaporation, on obtient une huile orange que l'on
chromatographie sur colonne de silice (éluant .
5 pentane/acétate d'éthyle . 8/2). On isole ainsi 2,93 g
de produit . Aspect . solide j aune, Tfusion : 44 °C,
Rendement . 77~.
RN~ 1H (CDG13) . ~= 3,37 (s, 3H, OMe) ; 3,75 (s, 3H,
10 OMe) ; 3, 81 (s, 3H, C02Me) ; 4, 06 et 4,10 (AB, J~=17, 1
Hz, 2H, CH2) ; 4, 90 (s, 1H, CH) ; 6, 91 (d, J=8, 5 Hz,
2H, Ph) ; 7, 26 (d, J=8, 5Hz, 2H, Ph) .
RIS 13C (CDC13) : 8= 52, 5 ; 55, 2 ; 59, 3 ; 59, 8 ; 69, 6 ;
15 113,6 ; 114,2 ; 123,7 ; 130,6 ; 132,0 ; 159,5 ; 169,0 ;
202,0.
TR (KBr, cm-1) . 1612 ; 1741 ; 2836 ; 2960 ; 3013 ;
3434.
Analyse élémentaire (%) . calculée pour Cl3Hlg05
C=61,90 ; H=6,39 ; trouvée C=62,03 ; H=6,44.
b)Préparation du composé (9b).
Le produit de condensation (8a) préparé ci-
dessus (5,65 g ; 22,4 mmol ; 1 êq) est dissous dans le
THF (47 mL) dans un ballon de 100 mL. La triéthylamine
(3,7 mL ; 26,6' mmol ; 1,2 éq.) puis le chlorure de
triméthylsilyle (3,7 mL ; 29 mmol ; 1,3 éq.) sont
ajoutés à la seringue. On observe immédiatement la
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formation d'un précipité blanc. On laisse réagir une
nuit à température ambiante. Après évaporation du THF,
le résidu est repris dans le pentane. Le précipité
formé est filtrê sur fritté puis sur millipore 5 ~,m et
rincé au pentane. Après évaporation, 7,28 g d'une huile
orange sont obtenus.
Le dérivé monosilylé obtenu (7,27 g ; 22,4
mmol ; léq.) est placé dans un ballon de 100 mL et
dissous dans le THF (33 mL). Le mélange est refroidi
vers -70°C. Une solution de LDA (lithium
diisopropylamidure) 2M dans l'heptane (11,2 mL ; 22,4
mmol ; 1 éq.) est ajoutée goutte à goutte à la seringue
et le mélange est maintenu 1 heure vers -70°C. Le
chlorure de triméthylsilyle (3,4 mL ; 26,7 mmol ; 1,2
éq.) est additionnê à la seringue et le mélange est
ramené à la température ambiante en 3 heures. Aprês
évaporation du THF, le résidu est repris dans le
pentane et le précipité blanc formé est filtré sur
fritté puis sur millipore 5 ~,m. Après concentration,
8, 52 g d' une huile orange sont obtenus . Rendement - 95
. %. Deux isomères géométriques sont prêsents dans cet
échantillon.
R1~1' 1H (CDC13) OSiMe3 isomre
. 8= 0, 04 (s,
9H,
majoritaire) ; 0,05 (s, 9H, OSiMe3 isomre
minoritaire) ; 0,28 (s, 9H, OSiMe3 isomre
minoritaire) ; 0,30 (s, 9H, OSiMe3 isomre
majoritaire) ; 3,46 (s, 3H, OMe isomre
majoritaire)
;
3,49 (s, 3H, OMe isomr e minoritaire); 3,51 (s, 3H,
OMe isomre minoritaire); 3,56 (s, 3H, OMe isomre
majoritaire) ; 3,80 (2s, 2*3H, OMe isomre
minoritaire
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et Ome isomère majoritaire) ; 5,62 (s, 1H, CH ismoère
majoritaire) ; 5,95 (s, 1H, CH ismoère minoritaire) ;
6, 83 (d, J=8, 5 Hz, 2H, Ph) ; 7, 24-7, 31 (m, 2H, Ph) .
c) Préparation du composé (l0a).
Dans un tricol de 1 L, le dérivé bis-silylé
(9b) préparé ci-dessus (8,52 g ; 21,4 mmol ; 1 éq.) est
dissous dans du dichlorométhane (400 mL) et le mélange
est refroidi vers -70 °C. Le chlorure d'oxalyle (2,5
mL ; 28, 6 mmol ; 1, 3 éq. ) est ajouté à la seringue et
le milieu devient orange. Urie solution de triflate de
triméthylsilyle (1,2 mL ; 6,6 mmol ; 0,3 éq.) dans le
dichlorométhane (120 mL) est coulée par une ampoule à
additionner en une heure. Le bain froid est saturé de
carboglace pour que le milieu réactionnel revienne très
lentement à température ambrante au cours de la nuit.
Après hydrolyse par une solution saturée de NaCl, on
extrait 3 fois avec du dichlorométhane, on sèche sur
MgS04, on filtre et on concentre. On récupère 7,95 g
d'un solide marron. Après chromatographie sur colonne
de silice (éluant . acétate d'éthyle/pentane . 1/1), on
obtient 3,53 g de produit (5'). Aspect . solide jaune,
Tfusion= 16 0 ° C , Rendement= 54 % , isomère ( E ) .
RI~.ù 1H (CD30D) . ~= 3, 85 (s, 3H, OMe ou C02Me) ; 3, 87
(s, 3H, C02Me ou OMe) ; 4,16 (s, 3H, OMe phényle) ;
6,96-9,99 (m, 2H, Ph) ; 7,47-7,50 (m, 2H, Ph).
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RIS 13C (acétone-d6) . 8= 52, 3 ; 55,,2 ; 59, 8 ; 113, 5 ;
114,5 ; 124,6 ; 130,6 ; 131,7 ; 139,9 ; 143,3 ; 160,4 ;
164,5 ; 167,3.
IR (KBr, cm-1) . 1667 ; 1731 ; 3239 ; 3295.
Ar~,alyse élémeritaire (%) . calculée pour C15Hs407
C=58,82 ; H=4,61 ; trouvée C=59,07 ; H= 4,92.
d) Préparation du composé (5b).
Dans un ballon de 250 mL, l'alcool (10a)
préparé ci-dessus (3,24 g ; 10,6 mmol ; 1 éq.) est mis
en suspension dans le dichlorométhane (100 mL) et le
mélange est refroidi vers -70°C. La pyridine (2, 2 mL ;
27 mmol ; 2,5 éq.) puis l'anhydride triflique (2,2 mL ;
~13 mmol ; 1,2 éq.) sont ajoutés à la seringue. Après
retour à température ambiante en 6 heures, le mélange
est hydrolysé, lavé 3 fois à l'eau, séché sur MgS04,
filtré et concentré. Aprês chromatographie sur colonne
de silice (éluant . dichlorométhane), on isole 3,14 g
de triflate (VI) . Aspect . solide jaune ; Tfusion=93°C ;
Rendement=68~, isomère (E).
RMN 1H (CDC13) . $= 3, 85 (s, 3H, OMe) ; 3, 90 (s, 3H,
OMe) ; 4, 29 (s, 3H, OMe) ; 6, 94 (d, J=9, 2 Hz, 2H, Ph) .
RMN i3C (CDC13): b= 53,1 ; 55,5 ; 61,1 ; 114,6 ; 116,4 ;
120, 6 ; 122, 6 ; 129, 4 ; 131, 4 ; 135, 7 ; 155, 8 ; 161, 3 ;
166, 1.
Masse [m/z (%) J . 456 (100) (M+NH4+) ; 439 (11) (M+1) .
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IR (KBr, cm-i) . 1604 ; 1643 ; 1667 ; 1733 ; 1744 ;
1783 ; 1802 ; 2961.
e) Préparation du composé (4a).
Le bistriflate dérivé du 1,7-
dihydroxynaphtalène (157 mg ; 0,98 mmol), le
pinacolborane (0,44 mL ; 3 mmol), le PdCl~ (44 mg ;
0,06 mmol), la triéthylamine (0,84 mL ; 6 mmol) et le
dioxane préalablement dégazé (8 mL) sont introduits
dans un bicol de 50 mL et placés sous atmosphère
d'argon. On porte à reflux pendant 2 heures sous
agitation. Après hydrolyse par 20 mL d'eau, la phase
aqueuse est extraite 3 fois avec du dichlorométhane.
Les phases organiques sont réunies, séchées sur MgSO4,
filtrées et concentrées. Une chromatographie sur
colonne de silice (éluant . hexane/acétate d'éthyle .
8/2) permet d'isoler 104 mg de dérivé boré ;
Rendement=43%.
RN.~1' 1H (CDC13) . 8= 1, 43 et 1, 49 (2s, chacun 12H, Me) ;
7,55 (t , 1H , J=6,7 Hz , g) ; 7,88 (m , 2H) ; 7,97
(d , 1H , J=6, 7 Hz) ; 8, 09 (d , 1H , J=6, 7 Hz) ; 9, 31
(s , 1H) .
13'-, (CDC13) . ~= 24, 8 ; 83, 6 ; 126, 9 ; 128, 2 ;
125, 7 ; 127, 2 ; 129, 8 ; 130, 1 ; 130, 9 ; 134, 7 ; 136, 0 ;
136,5.
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f) Prêparation du composé final (III).
Le triflate (5b) préparê ci-dessus (214
mg ; 0,488 mmol ; 2,1 êq.), le 1,7-bis(4,4,5,5-
5 tétraméthyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)naphatlène (89 mg ;
0,234 mmol ; 1 éq.) (4b) le
dichlorobis(triphênylphosphine)palladium (19 mg ; 0,003
mmol ; 0,1 éq.) et 20 mL de THF préalablement dégazê
sont introduits dans un bicol de 50 mL et placés sous
10 atmosphère d'argon. Une solution aqueuse 2M de
bicarbonate de sodium (4, 8 mL) est ajoutée. On porte à
reflux pendant 3 heures. Après hydrolyse par 30 mL
d'eau, la phase aqueuse est extraite 3 fois avec du
dichlorométhane. Les phases organiques sont réunies,
15 séchées sur MgS04, filtrées et concentrées. Une
chromatographie sur colonne de silice (éluant .
hexane/acétate d'éthyle . 6/4) permet d'isoler 104 mg
de composé (). Aspect . solide jaune. Rendement . 63~.
20 RMN lI~ (CDC13) : 8= 3, 63 (s, 3H, OMe énolique) ; 3, 80 (s,
3H, OMe phénolique ; 3, 86 ; 3, 87 ; 3, 90 ; 3, 92 (4s, 3H
chacun, OMe phénoliques, C02Me) ; 6,94-6,99 (m, 4H,
CHCOMe) ; 7,57-7,59 (m, 2H) ; 7,66-7,74 (m, 5H) ; 7,90
(s, 1H) ; 7, 96-7, 99 (m, 2H) .
RMN 13C (CDC13) . $= 52, ; 55, ; 60, 61, 103,
6 2 6 ; 5 ; 4 ;
106,5 ; 114,1 116,9 123,2 125,9 126,5 127,3
; ; ; ; ; ;
127,5 ; 128,7 129,3 130,1 130,6 130,7 131,3
; ; ; ; ; ;
133,1 ; 139,4 139,5 160,3 163,0 164,0 166,8
; ; ; ; ; ;
168,0.
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Analyse élémentaire ( ô) . calculée pour C4oH3a01~
C=68,18 ; H=4,58 ; trouvée C=68,03 ; H=4,83.
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grapes », Science 1997, 275, 218-220 ;
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Fresh Apples », Nature 2000, 405, 903-904 ;
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the biology of ageing », Nature 2000, 408, 239-
247 ;
[4] « Pigments from the cap cuticle of the Bay
Boletus », Angew.Chem.Int.Ed.Engl.23(1984),n°6 ;
[5] « A naphtalenoid pulvinic acid derivative from the
Fungus Pisolithus Tinctorius », Phytochemistry, vol
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bis(trimethylsilyloxy)-1;3-dienes with Oxalyl
Chloride . General and Stereoselective Synthesis of
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