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PRODUITS ARYL-HETEROAROMATIQUES, COMPOSITIONS LES
CONTENANT ET UTILISATION
La présente invention concerne de nouveaux composés chimiques,
particulièrement de nouveaux produits aryl-hétéroaromatiques, des
compositions les contenant, et leur utilisation comme médicaments.
Plus particulièrement, l'invention concerne, selon un premier aspect, de
nouveaux produits aryl-hétéroaromatiques présentant une activité
anticancéreuse, et en particulier une activité inhibitrice de polymérisation
de
la tubuline.
Les produits aryl-hétéroaromatiques bicycliques dont il est question ici
répondent à la formule générale suivante (I)
X W.~U~E\ X W~U~Ev
(R3)n-t ~ ~ g-L ou (R3)n ~ ''. ~. ~g-R2 (I)
Y~~V A~ G-R1 V A R1
R2 L'G
IA IB
Quelques produits aryl-hétéroaromatiques bicycliques répondant à la formule
générale (I) sont connus
BE 849627 (Hoechst) revendique des dérivés de 2-amino-3-carbonyl-indoles
ayant une activité sur la circulation cardiaque. Aucun exemple de produit
dans lequel R2 = 4-(aryl/hétéroaryl)-pipéridinyle et R1 = aryle/hétéroaryle
n'est présenté ni suggéré.
W0 03/037862 (Nippon Shinyaku) revendique la préparation de dérivés
d'amides d'indole, pyrrolo[2,3-b]pyridine, pyrrolo[3,2-b]pyridine pyrrolo[2,3-
b]pyrazine et autres azaindoles utiles comme antagonistes de TGF-[i
(Transforming growth factor-~3). Ces produits sont utiles pour le traitement
de
l'ostéoporose. Les produits divulgués par WO 03/037862 ne font pas partie
de l'invention.
WO 01/43746 (Nippon Shinyaku) (équivalent à EP 1243268) revendique
l'utilisation d'indoles substitués par des amides pour le traitement des
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néphrites. Une utilisation de ces produits en oncologie n'est ni revendiquée,
ni évoquée. Tous les produits décrits dans WO 01/43746 étaient déjà
divulgués dans WO 00/44743, ci-dessous.
W0 00/44743 (Nippon Shinyaku) (équivalent à EP 1156045) revendique des
antagonistes et des inhibiteurs de production de TGF-Vii, utiles pour le
traitement de l'ostéoporose ou du prurit, comprenant des dérivés d'indol-3-yl-
carboxamides connus et nouveaux. Une utilisation de ces produits en
oncologie n'est ni revendiquée, ni évoquée.
EP 624584 (Daichi) revendique des dérivés de pipérazine utiles comme
inhibiteurs de calmoduline, pour le traitement de maladies telles que
l'ischémie, l'hypoxie, ou certaines maladies liées au système nerveux central.
EP 1314733 (Aventis) revendique notamment des indoles substitués en
position 2 par une N-carbonylpipérazine, pour une utilisation dans le domaine
cardio-vasculaire. Une utilisation en oncologie est revendiquée, bien
qu'aucune démonstration de l'activité anticancéreuse ne soit présentée. Dans
les exemples de EP 1314733: lorsque G est pipéridine, R1 n'est jamais
aryle, mais alkyle substitué par aryle ou hétéroaryle. Toutefois, les produits
selon l'invention, décrits plus loin, ne peuvent pas avoir de substituant R1
qui
soit alkyle substitué par aryle ou hétéroaryle éventuellement substitué, sous
peine de perte d'activité biologique. Les produits selon l'invention ont un
. substituant R1 qui est exclusivement aryle ou hétéroaryle, éventuellement
substitué. Cette remarque s'applique mutatis mutandis au substituant R2.
Or, de façon surprenante, il a été trouvé que des produits répondant à la
formule générale (I) suivante présentent une activité inhibitrice de
polymérisation de la tubuline importante
X W~U~E ~W. ,E
(R3)n-ti 'I g-L ou (R3)n ~':'. ~~' U..~ ' B-R2
Y~. , .~ v ~ A ~
V A G-R1 V ~ ~R1
R2 L' G
IA Ig
dans laquelle
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1 ) (i) A, B, U, V, W, X, Y peuvent être N, C ou CR4 ; ou
(ü) A, B, U, peuvent être N, C ou CR4 ; V et W sont CH2,
X est choisi parmi S, SO et S02 ; et Y est une liaison ;
R5 ~R1 R5 R1
[~' 'JN ~ 'J
L~N~ LIN
2) L-G-R1 est choisi parmi R6 et R6
3) E est CR4, N, NR4 ou S ;
4) R1, R2 sont indépendamment sélectionnés dans le groupe
constitué par aryle, hétéroaryle,, aryle substitué, hétéroaryle
substitué ;
5) L est sélectionné dans le groupe constitué par C=O, C=S,
C=N(R7) ;
6) R3 est sélectionné dans le groupe constitué par halogène,
CF3, CN, N02, (C1-C3)alkyle, (C1-C3)alkènyle, (C1
C3)alkynyle, O-R7, S-R7, SO-R7, S02-(R7), N(R7)(R8), CO
OR7, CO-N(R7)(R8), S02-N(R7)(R8), NR7-CO-R8 et NR7
S02-(C1-C3)alkyle ;
7) n = 0,1,2,3, étant entendu que lorsque n est supérieur à 1,
les radicaux R3 peuvent être identiques ou différents, et lorsque
n = 2, X et Y ne sont pas simultanément substitués par R3 ;
8) R4 est sélectionné dans le groupe constitué par H, (C1-
C3)alkyle ;
9) R5, R6 sont indépendamment sélectionnés dans le groupe
constitué par H, (C1-C3)alkyle ;
10) R7, R8 sont indépendamment sélectionnés dans le groupe
constitué par H, (C1-C3)alkyle, (C1-C3)alkyle substitué ;
sous forme racémique, enrichie en un énantiomère, enrichie en un
diastéréoisomère, ses tautomères, ses prodrogues et ses sels
pharmaceutiquement acceptables, sous réserve que le produit de formule (I)
ne soit pas un des composés suivants (éventuellement salifiés):
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O ~N-R1
T N
U ' ~~- R2
N
R4
dans lequel
(i) R1 est choisi parmi pyrid-2-yle, pyrid-2-yle substitué, chacun
éventuellement sous forme de N-oxyde ;
R2 est choisi parmi thien-2-yle, pyrid-2-yle, pyrid-3-yle, pyrid-4-yle,
phényle, phényle substitué par au moins un substituant choisi parmi F,
OH, CF3, Me, OMe, N02, dans lequel lorsque R2 est pyrid-2-yle,
pyrid-3-yle, pyrid-4-yle, R2 peut être présent sous forme de N-oxyde;
R4 est choisi parmi méthyle, 2-fluoroéthyle, éthyle ;
T, U sont indépendamment choisis parmi H; méthyle, CI, F ;
(ü) R1 est choisi parmi pyrid-3-yle, pyrid-4-yle,
R2 est choisi parmi thien-2-yle et phényle;
R4 est choisi parmi méthyle, 2-fluoroéthyle ;
T, U sont indépendamment choisis parmi H, méthyle, CI, F ;
(iii) R1 est pyrid-2-yl substitué en position 5 par un substituant
tétrazolyle ou amide, éventuellement substitués ;
R2 est phényle ;
R4 est méthyle ; T est 5-méthyl ; U est H ;
(iv) R1 est pyrazin-2-yl substitué en position 5 par CH2CONH2 ou
amide éventuellement substitué ;
R2 est phényle ;
R4 est méthyle ; T est choisi parmi 5-méthyl, 5-chloro, 5-fluoro et 5-
bromo ; U est H ;
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O
p N N ~ ~ H~H~Het
R14\ / ~ ~ R2
T~Q N
R4
dans lequel
n est 2 ou 3 ;
Het est 4-méthyl-thiazol-5-yl ou imidazol-1-yl ;
5 R2 est phényle ;
R4 est méthyle ;
T, Q, est Z sont indépendamment choisis parmi N et CH, et R14 est H
ou méthyle ; dans lequel
lorsque T est N, alors Q et Z sont CH et R14 est H ;
lorsque Q est N, et T et Z sont CH, alors R14 est H ou méthyle ;
et
lorsque T est CH, alors R14 est H.
Des produits de formule générale (I)
.W. 'E
(R )n~~ W,.U~ E B-L ou (R3)n~ ~ w- U.... ; B_R2
3 Y~. ~~ v Y~. A
V A G-R1 V \ ~R1
R2 ~' G
IA IB
R5
~N~R1
L~Nr \~
dans laquelle L-G-R1 est choisi parmi R6 sont préférés.
Des produits de formule générale (IA) pour lesquels
A est N, B est C et E est CR4 avec R4 est H sont préférés.
Des produits de formule générale (1B) pour lesquels
A est C, B est N et E est NR4 avec R4 est H sont préférés.
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Des produits de formule générale (I) pour lesquels
U=N;A,B=C;E=CH;VetWsontCH2,XestS02;etYestune
liaison.
Un substituant R1 préféré pourra être choisi parmi phényle, phényle substitué
par au moins un radical choisi parmi halogène, CF3, CN, N02, (C1-C3)-
alkyle, O-R10, S-R10, N(R10)(R11 ), CO-O-R10, CO-N(R10)(R11 ), NH-CO-
R10 dans lequel R10, R11 sont indépendamment choisis parmi H, (C1-C3)-
alkyle, (C1-C3)-alkyle halogéné, (C1-C3)-alkyle-OH, (C1-C3)-alkyle-NH2,
(C1-C3)-alkyle-COOH, (C1-C3)-alkyle-OCH3, (C1-C3)-alkyle-NHCH3,
pyridyle, pyridyle substitué par au moins un radical choisi parmi halogène,
(C1-C3)-alkyle, O-R12, S-R12, N(R12)(R13), dans lequel R12, R13 sont
indépendamment choisis parmi H, (C1-C3)-alkyle.
Plus préférentiellement, R1 sera phényle substitué en 3 par halogène ou (C1-
C3)-alkyle, (C1-C3)-alkoxy, (C1-C3)amino, CONH2, CO-NH-(CH2)2-OH ou
NH-CO-CH3 ; ou 3-pyridyle.; 2- ou 3-pyridyle substitué par halogène, (C1-
C3)-alkyle ou (C1-C3)-alkoxy.
Lorsque R1 est phényle substitué, des combinaisons préférées de
substitution peuvent étre choisies parmi phényle-2,3-disubstitué, phényle-2,5-
disubstitué, phényle-3-substitué, phényle-3,5-disubstitué, phényle-3,4-
disubstitué, plus préférentiellement parmi phényle-3-substitué, phényle-3,5-
disubstitué, phényle-3,4-disubstitué.
Lorsque R1 est 2-pyridyle, des substitutions préférées sont choisies parmi
2-pyridyle-4- ou 6-substitué ou 2-pyridyle-4,6-disubstitué.
Lorsque R1 est 3-pyridyle, des substitutions préférées sont 3-pyridyle-2- ou
5-substitué.
Très préférentiellement, R1 est phényle substitué en position 3 par un radical
chloro ou un radical cyano ou un radical carboxamido ou un radical méthanol,
ou en positions 3 et 5 par deux radicaux méthoxy.
Un substituant R2 préféré pourra étre choisi parmi phényle, phényle substitué
par au moins un radical choisi parmi halogène, alkyle, O-R10, S-R10,
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N(R10)(R11 ), dans lequel R10, R11 sont indépendamment choisis parmi H,
alkyle, alkyle halogéné ; ou 3-pyridyle.
Selon un second aspect, l'invention concerne des compositions
pharmaceutiques comprenant un produit selon son premier aspect, en
combinaison avec un excipient pharmaceutiquement acceptable.
Un produit selon l'invention peut être avantageusement utilisé comme agent
inhibant la polymérisation de la tubuline, comme agent inhibant la
prolifération
de cellules tumorales, pour favoriser la désagrégation d'amas de cellules
provenant d'un tissu vasculaire, ou pour la fabrication d'un médicament utile
pour traiter un état pathologique, de préférence le cancer.
D'une manière générale, l'invention concerne l'utilisation d'un produit de
formule générale (I) suivante:
.W. 'E
X W,~U~ E X
(R3)n-t 'g-L ou (Rs)n~' ,~ ,g-R2
A
Y~~V~A~ G-R1 Y\.V ~ R1
R2 L' G
IA Ig
dans laquelle
1 ) (i) A, B, U, V, W, X, Y peuvent être N, C ou CR4 ; ou
(ü) A, B, U, peuvent être N, C ou CR4 ; V et W sont CH2,
X est choisi parmi S, SO et S02 ; et Y est une liaison ;
R5 ~R1 R5 R1
~~'JN 'J
L~N~ LIN
2) L-G-R1 est choisi parmi R6 et R6 ;
3) E est CR4, N, NR4 ou S ;
4) R1, R2 sont indépendamment sélectionnés dans le groupe
constitué par aryle, hétéroaryle, aryle substitué, hétéroaryle
substitué ;
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5) L est sélectionné dans le groupe constitué par C=O, C=S,
C=N(R7) ;
6) R3 est sélectionné dans le groupe constitué par halogène,
CF3, CN, N02, (C1-C3)alkyle, (C1-C3)alkènyle, (C1-
S C3)alkynyle, O-R7, S-R7, SO-R7, S02-(R7), N(R7)(R8),
halogène, CO-OR7, CO-N(R7)(R8), S02-N(R7)(R8), NR7-CO-
R8 et NR7-S02-(C1-C3)alkyle ;
7) n = 0,1,2,3, étant entendu que lorsque n est supérieur à 1,
les radicaux R3 peuvent être identiques ou différents, et lorsque
n = 2, X et Y ne sont pas simultanément substitués par R3 ;
8) R4 est sélectionné dans le groupe constitué par H, (C1-
C3)alkyle ;
9) R5, R6 sont indépendamment sélectionnés dans le groupe
constitué par H, (C1-C3)alkyle ;
10) R7, R8 sont indépendamment sélectionnés dans le groupe
constitué par H, (C1-C3)alkyle, (C1-C3)alkyle substitué ;
sous forme racémique, enrichie en un énantiomère, enrichie en un
diastéréoisomère, ses tautomères, ses prodrogues et ses sels
pharmaceutiquement acceptables,
(i) comme agent inhibant la polymérisation de tubuline,
(ü) comme agent inhibant la prolifération de cellules tumorales,
(iii) pour favoriser la désagrégation d'amas de cellules provenant d'un tissu
vasculaire, et/ou
(iv) pour traiter le cancer.
De manière générale, des produits de formule générale (IAa), (lab), (Iba) ou
(IBb) conformes à l'invention dans lesquels L est C(O) peuvent être préparés
par couplage d'un acide hétéroarylcarboxylique substitué en ortho de la
fonction carboxylique par un radical aryle ou hétéroaryle, de formule générale
(11A) ou (11B) , dans lequels A, B, U, V, W, X, Y, E et R2 sont définis tels
que
précédemment, avec, respectivement, un dérivé de pipérazine de formule
générale (Illa) ou un dérivé de 1,2,3,6-tétrahydropyridine (Illb), dans
lesquels
R1 est défini tel que précédemment selon le schéma 1
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R5
R5 O
R B- ~~ ~.____-~_--_ Ri_N NH _-_-__~-~ R1-N N
Ri-N N~A~' X ~ ~ B
O Vc~~(R3)n R2~ (II a) HO~ R6 R2~A~fU~ X
(18a) B=E. B=~ V
HO~A~~y R2.AY~~- X (IAa) Y\(R3)n
O V,~~
R5 R2~ (11B) (R3)n R5 (11A) (Ra)n R5
O
R1 ~ N-irA~~U W ~.-______-_-_ R1 ~ NH _- --~ R1~N--~B,~
O V, ~ R6 .A~.
R6 Y (R3)n R6 R2 .,' ,.
X
(IBb) (Illb) (IAb) V,Y~(R3)n
Schéma 1
Les acides hétéroarylcarboxyliques de formule générale (11A) ou (11B) dans
lesquels A, B, U, V, W, X, Y, E et R2 sont commerciaux ou peuvent étre
obtenus selon les méthodes générales de synthèse connues de l'homme de
l'art.
Les dérivés de pipérazine de formule générale (Illa), dans lesquels R1, R5 et
R6 sont définis comme précédemment, sont soit commerciaux, soit préparés
selon les méthodes classiques connues de l'homme de l'art.
Parmi ces méthodes, la N1-aryl(hétéroaryl)ation, selon le schéma 2, de
pipérazines porteuses d'un groupement protecteur sur l'azote 4, est
particulièrement avantageuse dans le cadre de l'invention
arylation ~ clivage de GP
H ~N-GP -~ R1-N~N-GP -' Ri-N~NH
R~6 R6 R6
(Illa)
GP = Boc, Ac, Cbz, Bn ...
Schéma 2
La réaction d'aryl(hétéroaryl)ation des pipérazines, généralement de type
Hartwig / Büchwald, peut être effectuée en opérant dans les conditions
décrites dans Biorg. Med. Chem. Lett., 11, 1375 (2001 ) ou dans Biorg. Med.
Chem., 10, 3817 (2002).
Une autre méthode de synthèse d'aryl(hétéroaryl)pipérazines,
particulièrement avantageuse dans le cadre de l'invention, lorsque R5 et R6
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représentent des atomes d'hydrogène, consiste en la réaction d'une
aryl(hétéroaryl)amine avec une bis (2-hydroxy- ou 2-halo-éthyl)amine, à
température supérieure à 100-120°C selon le schéma 3
OH(Hal)
R1-NHZ + ~NH --~ R1-N NH (Illa)
~J
OH(Hal)
5 Schéma 3
II est particulièrement avantageux d'opérer en présence de micro-ondes dans
les conditions décrites dans Synth. Comm. , 28, 1175 (1998) ou dans
Tetrahedron Lett, 38, 6875 (1997).
Les dérivés de 1,2,3,6-tétrahydropyridine (Illb), dans lesquels R1, R5 et R6
10 sont définis comme précédemment, sont soit commerciaux, soit préparés
selon les méthodes classiques connues de l'homme de l'art.
Parmi ces méthodes, l'action, selon le schéma 4, d'un dérivé
organométallique d'aryle(hétéroaryle), tel qu'un organomagnésien, un
organolithien àu un organocérique, sur un dérivé de pipéridin-4-one dont
l'atome d'azote est substitué par un groupement protecteur, est
particulièrement avantageuse.
j~ R1-M R1 /~ -..~ R1 ~ N-GP~ R1 ~ NH
O~N-GP~ \~~N-GP
H ~/O
(Illb)
GP = Boc, Ac, Cbz, Bn ....
M = MgCI(Br), CeCl2...
Schéma 4
On peut en particulier opérer dans les conditions décrites dans J. Med.
Chem., 38, 1998 (1995) ou dans E.P. 306764 ou dans J. Med. Chem., 28,
311 ( 1985
Lorsque R5 et R6 représentent des atomes d'hydrogène, le couplage de type
Suzuki de l'ester pinacolique de l'acide N-Boc 1,2,3,6-tétrahydropyridyl-4-
boronique avec un halogénure, de préférence un bromure ou un iodure,
d'aryle ou d'hétéroaryle, dans les conditions décrites dans Te~rahedron Leti,
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41, 3705 (2000), selon le schéma 5, est particulièrement avantageux dans le
cadre de l'invention: II est entendu que le groupement protecteur Boc peut
être remplacé par tout autre groupement protecteur compatible avec les
conditions de la réaction et que l'ester boronique de pinacol peut également
être remplacé par tout autre dérivé boronique, acide ou ester, compatible
avec lesdites conditions.
Ri -Hal + ~ B~N-boc ~ R1 ~N-boc ---~ R1 ~NH
(Illb)
Schéma 5
De manière générale, des produits de formule générale (IAa), (IAb), (IBa) ou
(IBb) conformes à l'invention dans lesquels L est C(S) peuvent être préparés
par thionation d'un composé de formule générale respectivement (IAa), (IAb),
(IBa) ou (IBb), dans lequel L est C(O), par l'une quelconque des méthodes de
réduction connues de l'homme de l'art. II est particulièrement avantageux
dans le cadre de l'invention d'effectuer la thionation à l'aide du réactif de
Lawesson, en opérant selon Bull. Soc. Chim. Belg., 87 , 293 (1978).
De manière générale, des produits de formule générale (la) ou (lb) conformes
à l'invention dans lesquels L est C(NH) peuvent être préparés à partir des
nitriles dérivés des produits de formule générale (II), en utilisant les
diverses
méthodes connues de l'homme de l'art. II est généralement nécessaire
d'activer le nitrite, peu réactif, soit avec du chlorure d'aluminium, en
opérant
selon J. Chem. Soc. 1947, 1110 ; soit avec de l'iodure cuivreux, en opérant
selon Tetrahedron Lett, 34, 6395 (1993) ; soit en transformant nitrite en
iminoéther préalablement à la réaction avec le dérivé de pipérazine - ou de
1,2,3,6-térahydropyridine ou de pipéridine, en opérant selon Eur.J.
Med.Chem., 24, 427 (1989).
De manière générale, des produits de formule générale (la) conformes à
l'invention dans lesquels L est C(NR7), avec R7 égal ou différent de l'atome
d'hydrogène, peuvent être préparés à partir des produits de formule générale
(la) dans lesquels L est C(O) et/ou C(S), en utilisant les diverses méthodes
connues de l'homme de l'art. Dans le cadre de l'invention lorsque L est C(O),
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il est particulièrement avantageux de faire réagir successivement le chlorure
d'oxalyle, puis une amine R7-NH2, en opérant selon Pol. J.Chem., 58, 117
(1984) et dans le cas où L est C(S) il est particulièrement avantageux de
faire
réagir d'abord l'iodure de méthyle, puis une amine R7-NH2, en opérant selon
Eur. J. Med. Chem, 12, 365 (1977).
De manière plus spécifique et plus particulièrement avantageuse dans le
cadre de l'invention, des produits conformes à l'invention peuvent également
être préparés sur phase solide, selon le schéma réactionnel 6
(
R n W:~~ g~
O F F Y:V~ R2 OH O F F R2 R2- NH
~~N \ / OH -~ Q ~N \ / ~B.A-.Y-V:Y --~ Ri-N JN~ ~2
H F F DMAP H F F O ~~E ,~ DMF B=A
DMF ~~ (R~n 16h -E,.UJ~V
20h
WX'(Rs)n
(R~n~W:~:~, O F F
Y:V-%~,qB R2 ~N \ / p~0 ~ R1' ~ '~'
~!-OH H F F '~4YV~Y ,~',~YV:Y
O R2~~~ R2~B U,~~
E_3)n E. °" (HS)n
Schéma 6
Les méthodes générales de synthèse présentées, en particulier celles
décrites dans les schémas 1 à 6, illustrent, à titre non limitatif, les
préparations possibles des composés de l'invention. De nombreuses autres
voies de synthèse peuvent être utilisées, en particulier celles décrites dans
Comprehensive Heterocyclic Chemistry, par A. Katritsky et al.
(Pergamon Press) ;
Les exemples ci-dessous illustrent, à titre non limitatif, les produits de
l'invention. Les divers produits sont purifiés soit comme décrits dans les
exemples soit par LC/MS dans les conditions générales décrites ci-dessous
Purification par LC/MS:
Les produits ont été purifiés par LC/MS en utilisant un système Waters
FractionsLynx composé d'une pompe à gradient Waters modèle 600, d'une
pompe de régénération Waters modèle 515, d'une pompe de dilution Waters
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Reagent Manager, d'un auto-injecteur Waters modèle 2700, de deux vannes
Rheodyne modèle LabPro, d'un détecteur à barrette de diodes Waters
modèle 996, d'un spectromètre de masse Waters modèle ZMD et d'un
collecteur de fractions Gilson modèle 204. Le système était controlé par le
logiciel Waters FractionLynx. La séparation a été effectuée alternativement
sur deux colonnes Waters Symmetry (C18, 5NM, 19x50 mm, référence
catalogue 186000210), une colonne étant en cours de régénération par un
mélange eau/acétonitrile 95/5 (v/v) contenant 0,07 % (v/v) d'acide
trifluoroacétique, pendant que l'autre colonne était en cours de séparation.
L'élution des colonnes a été effectuée en utilisant un gradient linéaire de 5
à
95% d'acétonitrile contenant 0,07 % (v/v) d'acide trifluoroacétique dans l'eau
contenant 0,07 % (v/v) d'acide trifluoroacétique, à un débit de 10 mUmn. A la
sortie de la colonne de séparation, un millième de l'effluent est séparé par
un
LC Packing Accurate, dilué à l'alcool méthylique à un débit de 0,5 mUmn et
envoyé vers les détecteurs, à raison de 75 % vers le détecteur à barrette de
diodes, et les 25 % restants vers le spectromètre de masse. Le reste de
l'effluent (999/1000) est envoyé vers le collecteur de fractions où le flux
est
éliminé tant que la masse du produit attendu n'est pas détectée par le
logiciel
FractionLynx. Les formules moléculaires des produits attendus sont fournies
au logiciel FractionLynx qui déclenche la collecte du produit quand le signal
de masse détecté correspond à l'ion [M+H]+ et/ou au [M+Na]+. Dans certains
cas, dépendant des résultats de LC/MS analytique, quand un ion intense
correspondant à [M+2H]++ a été détecté, la valeur correspondant à la moitié
de la masse moléculaire calculée (MW/2) est aussi fournie au logiciel
FractionLynx. Dans ces conditions, la collecte est aussi déclenchée quand le
signal de masse de l'ion [M+2H]++ et/ou [M+Na+H]++ sont détectés. Les
produits ont été collectés en tube de verre tarés. Après collecte, les
solvants
ont été évaporés, dans un évaporateur centrifuge Savant AES 2000 ou
Genevac HT8 et les masses de produits ont été déterminées par pesée des
tubes après évaporation des solvants.
Les analyses LC/MS ont été réalisées sur un appareil Micromass modèle
LCT relié à un appareil HP 1100. L'abondance des produits a été mesurée à
l'aide d'un détecteur à barrette de diodes HP G1315A sur une gamme d'onde
de 200-600 nm et un détecteur à dispersion de lumière Sedex 65.
L'acquisition des spectres de masses Mass spectra a été réalisée sur une
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gamme de 180 à 800. Les données ont été analysées en utilisant le logiciel
Micromass MassLynx. La séparation a été effectuée sur une colonne Hypersil
BDS C18, 3 Nm (50 x 4.6 mm), en éluant par un gradient linéaire de 5 à 90
d'acétonitrile contenant 0,05 % (v/v) d'acide trifluoroacétique (TFA) dans
l'eau
contenant 0,05 % (v/v) TFA en 3,5 mn à un débit de 1 mUmn. Le temps total
d'analyse, incluant la période de rééquilibration de la colonne, est de 7 mn.
Exemple 1 : [4-(3-chloro-phényl)-pipérazin-1-yl]-(1-phényl-1-H-indol-2-yl)-
méthanone
Dans un tricot de 25 mL sous atmosphère d'argon, à une solution de 0,5 g
d'acide 1-phényl-indole-2-carboxylique, qui peut être préparé selon
Pharmazie (2002) 57, 238-42, dans 10 mL de dichlorométhane, on ajoute
successivement 217 pL de chlorure d'oxalyle et quelques gouttes de
diméthylformamide, on agite pendant 2 heures à température ambiante. La
solution ainsi obtenue est transférée dans une ampoule de coulée, et est
additionnée, goutte à goutte, à une solution, refroidie à 0°C sous
atmosphère
d'argon, de 431 mg de 1-(3-chlorophényl)pipérazine dans 5 mL de
dichlorométhane contenant 355 pL de triéthylamine. Après 20 heures
d'agitation à température ambiante, on ajoute 20 mL d'eau, la phase
organique est décantée, lavée à l'eau, séchée sur sulfate de magnésium et
concentrée sous pression réduite. Le résidu est purifié recristallisation dans
un mélange de méthanol et d'éthanol (20-80 en volumes). On obtient ainsi
400 mg de [4-(3-chloro-phényl)-pipérazin-1-yl]-(1-phényl-indol-2-yl)-
méthanone, sous forme de cristaux blancs, dont les caractéristiques sont les
suivantes
- point de fusion (Kofler = 168°C
- spectre de RMN 1 H (400 MHz, (CD3)2S0 d6, à une température de
353K, S en ppm) : 3,08 (mt : 4H) ; 3,61 (t, J = 5 Hz : 4H) ; 6,82 (dd, J =
8 et 1,5 Hz : 1 H) ; 6,86 (dd, J = 8 et 2 Hz : 1 H) ; 6,91 (mt : 2H) ; de
7,20 à 7,35 (mt : 3H) ; 7,35 (d large, J = 8 Hz : 1 H) ; de 7,40 à 7,50
(mt : 3H) ; 7,59 (t large, J = 7,5 Hz : 2H) ; 7,74 (d, J = 8 Hz : 1 H).
Exemple 2 : [4-(3-chloro-phényl)-pipérazin-1-yl]-(1-phényl-indazol-3-yl)-
méthanone
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Etape 1 : Dans un ballon de 25 mL, on dissout 114 mg d'ester méthylique de
l'acide 2-phényl-2-H-indazol-3-carboxylique, qui peut être préparé selon Acta
Chem. Scand. (1999), 53, 814-23, dans 5 mL d'éthanol, et on ajoute 0,94 mL
d'une solution 1 M d'hydroxyde de sodium, puis on agite 21 heures à
60°.
5 Après concentration sous pression réduite, le milieu réactionnel est repris
dans 3,5 mL d'eau, on ajoute 1,5 mL d'une solution aqueuse 1 M d'acide
chlorhydrique et on laisse cristalliser pendant 3 heures. Les cristaux sont
essorés, lavés 3 fois par 1 mL d'eau et séchés sous vide à 50°C. On
obtient
ainsi 100 mg d'acide 2-phényl-2-H-indazole-3-carboxylique, sous forme d'un
10 solide blanc, utilisé tel quel à l'étape suivante.
Etape 22 : Dans un tricot de 25 mL sous atmosphère d'argon, à une solution
de 50 mg d'acide 2-phényl-2-H-indazole-3-carboxylique dans 5 mL de
dichlorométhane, on ajoute 44,3 mg de chlorhydrate de 1-(3-
diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide (EDCI) et 2,8 mg d'hydrate de
15 1-hydroxybenzotriazole (HOBT). Après 10 minutes d'agitation à température
ambiante, sont ajoutés 45,4 mg de 1-(3-chloro-phényl)pipérazine, puis ce
mélange réactionnel est agité pendant 24 heures à température ambiante. Le
milieu réactionnel est dilué avec 15 mL de dichlorométhane et 5 mL d'eau. La
phase organique est lavée à l'eau, séchée sur sulfate de magnésium et
concentrée sous pression réduite. Le résidu huileux obtenu est recristallisé
dans 5 MI d'oxyde de diéthyle On obtient ainsi 50,5 mg de [4-(3-chloro-
phényl)-pipérazin-1-yl]-(2-phényl-2H-indazol-3-yl)-méthanone, sous forme de
cristaux blancs dont les caractéristiques sont les suivantes
- point de fusion (Kofler) : 181 °
Exemple 3 : [4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(2-phényl-2-H-indazol-
3-yl)-méthanone
On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 2, mais à partir de 50 mg d'acide
2-phényl-2-H-indazole-3-carboxylique dans 5 mL de dichlorométhane, de
44,3 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide
(EDCI), 2,8 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole (HOBT) et 51,3 mg de
1-(3,5-diméthoxy-phényl)pipérazine pendant 24 heures à température
ambiante. Après purification par flash-chromatographie sur gel de silice (70-
230 Mesh) en éluant par un mélange de dichlorométhane et d'éthanol (98-2
en volumes), on obtient 85 mg de [4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-
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(2-phényl-2H-indazol-3-yl)-méthanone, sous forme d'une meringue blanche
dont les caractéristiques sont les suivantes
- spectre de masse (El) : m/z = 442 (M+)
- spectre de RMN 1 H (400 MHz, (CD3)2S0 d6, à une température de
373K, 8 en ppm) : 3,04 (mf : 4H) ; 3,57 (mf : 4H) ; 3,74 (s : 6H) ; de
6,00 à 6,10 (mt : 3H) ; 7,04 (t large, J = 7,5 Hz : 1 H) ; 7,39 (dd large,
J = 8 et 7,5 Hz : 1 H) ; 7,45 (t large, J = 7,5 Hz : 1 H) ; 7,51 (t large, J =
7,5 Hz : 2H) ; 7,66 (d large, J = 8 Hz : 1 H) ; 7,82 (d large, J = 7,5 Hz
2H) ; 8,74 (d, J = 7,5 Hz : 1 H).
Exemple 4 : [4-(3-chloro-phényl)-pipérazin-1-yl]-(2-phényl-benzo[b]thiophèn-
3-yl)-méthanone
On opère comme à l'étape 2 de l'exemple 2, mais à partir de 100 mg d'acide
2-phényl-benzo[b]thiophène-3-carboxylique, qui peut être préparé selon
Monatsch Chem. (1969), 100, 899-904, dans 20 mL de dichlorométhane, de
82,9 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide
(EDCI), 10,6 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole (HOBT) et 77,3 mg de
1-(3-chloro-phényl)pipérazine pendant 24 heures à température ambiante.
Après purification par flash-chromatographie sur gel de silice (70-230 Mesh)
en éluant par un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle (80-20 en
volumes), on obtient 110 mg de [4-(3-chloro-phényl)-pipérazin-1-yl]-(2-phényl-
benzo[b]thiophèn-3-yl)-méthanone, sous forme d'une meringue blanche dont
les caractéristiques sont les suivantes
- spectre de masse (El) : m/z = 432 (M+)
- spectre de RMN 1 H (300 MHz, (CD3)2S0 d6, 8 en ppm) : à
température ambiante, on observe un mélange de rotamères. : 2,43
(mt : 1 H) ; 2,97 (mt : 1 H) ; de 3,00 à 3,20 (mt : 2H) ; de 3,15 à 3,45
(mt : 2H) ; 3,79 (mt : 1 H) ; 3,90 (mt : 1 H) ; de 6,75 à 6,85 (mt : 2H) ;
6,87 (t, J = 2 Hz : 1 H) ; 7,20 (t, J = 8 Hz : 1 H) ; de 7,40 à 7,55 (mt
3H) ; 7,53 (t large, J = 7,5 Hz : 2H) ; 7,63 (d large, J = 7,5 Hz : 2H) ;
7,70 (mt : 1 H) ; 8,09 (mt : 1 H).
Exemple 5 : [4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(8-phényl-indolizine-1-
yl)-méthanone
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Etape 1 : Dans un ballon de 25 mL, on dissout 359 mg d'ester éthylique de
l'acide 8-phényl-indolizine-1-carboxylique dans 15 mL d'éthanol, et on ajoute
6,7 mL d'une solution 1 M d'hydroxyde de sodium, puis on agite 21 heures au
reflux. Après concentration sous pression réduite, le milieu réactionnel est
repris dans 40 mL d'eau, on ajoute 1,7 mL d'une solution aqueuse 5M d'acide
chlorhydrique. On extrait le précipité formé avec 3 fois 25 mL d'acétate
d'éthyle, puis on sèche sur sulfate de magnésium et concentre sous vide. On
obtient ainsi 143 mg d'acide 8-phényl-indolizine-1-carboxylique, sous forme
d'une meringue beige kaki, utilisée telle quelle à l'étape suivante.
Etape 2 : Dans un tricot de 25 mL sous atmosphère d'argon, à une solution
de 115 mg d'acide 8-phényl-indolizine-1-carboxylique dans 10 mL de
dichlorométhane, on ajoute 102,2 mg de chlorhydrate de 1-(3-
diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide (EDCI) et 13,1 mg d'hydrate de
1-hydroxybenzotriazole (HOBT). Après 10 minutes d'agitation à température
ambiante, sont ajoutés 107,7 mg de 1-(3,5-diméthoxy-phényl)pipérazine, puis
ce mélange réactionnel est agité pendant 24 heures à température ambiante.
Le milieu réactionnel est dilué avec 15 mL de dichlorométhane et 5 mL d'eau.
La phase organique est lavée à l'eau, séchée sur sulfate de magnésium et
concentrée sous pression réduite. Le résidu est purifié par flash
chromatographie sur gel de silice (70-230 Mesh) en éluant par un mélange de
cyclohexane et d'acétate d'éthyle (80-20 en volumes). On obtient ainsi
117 mg de [4-(3-,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(8-phényl-indolizin-1-yl)-
méthanone, sous forme d'un solide beige dont les caractéristiques sont les
suivantes
- spectre de masse (El) : m/z = 441 (M+)
- spectre de RMN 1 H (400 MHz, (CD3)2S0 d6, à une température de
373K, 8 en ppm) : 3,04 (mf : 4H) ; 3,57 (mf : 4H) ; 3,74 (s : 6H) ; de
6,00 à 6,10 (mt : 3H) ; 7,04 (t large, J = 7,5 Hz : 1 H) ; 7,39 (dd large,
J = 8 et 7,5 Hz : 1 H) ; 7,45 (t large, J = 7,5 Hz : 1 H) ; 7,51 (t large, J =
7,5 Hz : 2H) ; 7,66 (d large, J = 8 Hz : 1 H) ; 7,82 (d large, J = 7,5 Hz
2H) ; 8,74 (d, J = 7,5 Hz : 1 H).
Exemple 6 : [4-(3,chloro-phényl)-pipérazin-1-yl]-(8-phényl-indolizine-1-yl)-
méthanone
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En opérant comme à l'étape 2 de l'exemple 5, mais à partir de 115 mg
d'acide 8-phényl-indolizine-1-carboxylique, de 102,2 mg de chlorhydrate de
1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide (EDCI), de 13,1 mg d'hydrate
de 1-hydroxybenzotriazole (HOBT) et de 95,3 mg de 1-(3-chloro-
phényl)pipérazine dans 15 mL de dichlorométhane, on obtient, après
purification par flash chromatographie sur gel de silice (70-230 Mesh) en
éluant par un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle (80-20 en
volumes), 117 mg de [4-(3,chloro-phényl)-pipérazin-1-yl]-(8-phényl-indolizine-
1-yl)-méthanone, sous forme d'un solide jaune-pâle dont les caractéristiques
sont les suivantes
- spectre de masse (El) : m/z = 415 (M+)
Exemple 7 : [4-(3-carboxamido-phényl)-pipérazin-1-yl]-(1-phényl-1-H-indol-2-
yl)-méthanone
En opérant comme à l'étape 2 de l'exemple 5, mais à partir de 237 mg
d'acide 1-phényl-1 H-indole-2-carboxylique, de 211 mg de chlorhydrate de
1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide (EDCI), de 13 mg d'hydrate de
1-hydroxybenzotriazole (HOBT) et de 306 mg de dichlorhydrate de 1-(3-
carboxamido-phényl)pipérazine dans 15 mL de dichlorométhane, on obtient,
après purification par flash chromatographie sur gel de silice (70-230 Mesh)
en éluant par un mélange de dichlorométhane et d'éthanol (97,5-2,5 en
volumes), 250 mg de [4-(3-carboxamido-phényl)-pipérazin-1-yl]-(1-phényl-1-
H-indol-2-yl)-méthanone, sous forme d'un solide blanc dont les
caractéristiques sont les suivantes
- spectre de masse (El) : m/z = 424 (M+)
Exemple 8 : [4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(1-phényl-1-H-indol-2-
yl)-méthanone
En opérant comme à l'étape 2 de l'exemple 5, mais à partir de 237 mg
d'acide 1-phényl-1 H-indole-2-carboxylique, de 211 mg de chlorhydrate de
1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide (EDCI), de 13 mg d'hydrate de
1-hydroxybenzotriazole (HOBT) et de 244 mg de 1-(3,5-diméthoxy-
phényl)pipérazine dans 15 mL de dichlorométhane, on obtient, après
purification par flash chromatographie sur gel de silice (70-230 Mesh) en
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éluant par un mélange de dichlorométhane et d'éthanol (98,5-1,5 en volumes)
suivie de recristallisation dans 10 mL d'oxyde de diéthyle, 350 mg de [4-(3,5-
diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(1-phényl-1-H-indol-2-yl)-méthanone, sous
forme de cristaux blancs dont les caractéristiques sont les suivantes
- spectre de masse (El) : m/z = 441 (M+)
- point de fusion (Kofler) = 146°C
Exemple 9 : [4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-méthoxy-1-phényl-
1-H-indol-2-yl)-méthanone
En opérant comme à l'étape 2 de l'exemple 5, mais à partir de 267 mg
d'acide 5-méthoxy-1-phényl-1 H-indole-2-carboxylique, de 211 mg de
chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide (EDCI), de
13 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole (HOBT) et de 244 mg de 1-(3,5-
diméthoxy-phényl)pipérazine dans 15 mL de dichlorométhane, on obtient,
après purification par flash chromatographie sur gel de silice (70-230 Mesh)
en éluant par un mélange de dichlorométhane et d'éthanol (98,5-1,5 en
volumes) suivie de recristallisation dans 15 mL d'oxyde de diéthyle, 400 mg
de [4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-méthoxy-1-phényl-1-H-indol-
2-yl)-méthanone, sous forme de cristaux beige-clairs dont les caractéristiques
sont les suivantes
- spectre de masse (El) : m/z = 471 (M+)
- point de fusion (Kofler) = 165°C
Exemple 10 : [4-(3-chloro-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-méthoxy-1-phényl-1-H-
indol-2-yl)-méthanone
En opérant comme à l'étape 2 de l'exemple 5, mais à partir de 267 mg
d'acide 5-méthoxy-1-phényl-1 H-indole-2-carboxylique, de 211 mg de
chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide (EDCI), de
13 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole (HOBT) et de 216 mg de 1-(3-
chloro-phényl)pipérazine dans 15 mL de dichlorométhane, on obtient, après
purification par flash chromatographie sur gel de silice (70-230 Mesh) en
éluant par un mélange de dichlorométhane et d'éthanol (98,5-1,5 en volumes)
suivie de recristallisation dans 15 mL d'oxyde de diéthyle, 450 mg de [4-(3-
chloro-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-méthoxy-1-phényl-1-H-indol-2-yl)-
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méthanone, sous forme de cristaux beiges dont les caractéristiques sont les
suivantes
- spectre de masse (El) : m/z = 445 (M+)
- point de fusion (Kofler) = 125°C
5 Exemple 11 : [4-(3-chloro-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-chloro-3-phényl-1-H-
indol-2-yl)-méthanone
En opérant comme à l'étape 2 de l'exemple 5, mais à partir de 100 mg
d'acide 5-chloro-3-phényl-1 H-indole-2-carboxylique, de 77 mg de
chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide (EDCI), de
10 54 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole (HOBT) et de 73 mg de 1-(3-
chloro-phényl)pipérazine dans 15 mL de dichlorométhane, on obtient, après
purification par flash chromatographie sur gel de silice (70-230 Mesh) en
éluant par un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle (50-50 en
volumes) suivie de cristallisation dans 3 mL d'oxyde de düsopropyle, 110 mg
15 de [4-(3-chloro-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-chloro-3-phényl-1-H-indol-2-yl)-
méthanone, sous forme d'un solide beige dont les caractéristiques sont les
suivantes
- spectre de masse (El) : m/z = 450 (M+)
- point de fusion (Kofler) = 188°C
20 Exemple 12 : [4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(2-phényl-
imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)-méthanone
A une solution de 500 mg d'acide 2-phényl-imidazo[1,2-a]pyridine-3-
carboxylique, qui peut étre preparé selon J. of Heterocyclic Chemistry (1989),
26(6), 1875-80, dans 70 mL de dichlorométhane sont ajoutés 466 mg de
1-(3,5-diméthoxy-phényl)pipérazine, 443 mg de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-
éthylcarbodümide (EDCI) et 312 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole
(HOBT). Après 20 heures d'agitation à température ambiante, le mélange
réactionnel est lavé avec de l'eau, séché sur sulfate de magnésium et
concentré sous pression réduite. Le résidu obtenu est purifié par flash
chromatographie sur gel de silice (60; 30-75 pM) en éluant avec un mélange
de dichlorométhane et de méthanol (99/1 en volumes), on obtient ainsi,
632 mg de [4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(2-phényl-imidazo[1,2-
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a]pyridin-3-yl)-méthanone sous forme d'une meringue blanche dont la
caractéristique est la suivante
- Spectre de masse (El) : m/z = 442 (M+)
Exemple 13: 3-[4-(2-phényl-imidazo[1,2-a]pyridine-3-carbonyl)-pipérazin-1-
yl]-benzamide
A une solution de 100 mg d'acide 2-phényl-imidazo[1,2-a]pyridine-3-
carboxylique, qui peut être preparé selon J. of Heterocyclic Chemistry (1989),
26(6), 1875-80, dans 30 mL de dichlorométhane sont ajoutés 117 mg de
dichlorhydrate de 1-(3-carboxamido-phényl)-pipérazine en présence de
177 NL de triéthylamine, 88,6 mg de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-
éthylcarbodümide (EDCI) et 62,4 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole
(HOBT). Après 20 heures d'agitation à température ambiante, le mélange
réactionnel est lavé avec de l'eau, séché sur sulfate de magnésium et
concentré sous pression réduite. Le résidu obtenu est purifié par flash
chromatographie sur gel de silice (60; 30-75 pM) en éluant avec un mélange
de dichlorométhane et de méthanol (98/2 en volumes), on obtient ainsi,
180 mg de 3-[4-(2-phényl-imidazo[1,2-a]pyridine-3-carbonyl)-pipérazin-1-yl]-
benzamide sous forme d'une poudre blanche dont la caractéristique est la
suivante
- Spectre de masse (El) : m/z = 425 (M+)
Exemple 14 : [4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-phényl-1 H-
pyrrolo[1,2-c]thiazol-6-yl)-méthanone
On opère comme à l'exemple 5, mais à partir d'une part de 150 mg d'acide
5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazole-6-carboxylique, qui peut être préparé
selon
Heterocycles (2001), 55(10), 1843-1857, et de 136 mg de 1-(3,5-diméthoxy-
phényl)pipérazine dans 20 mL de dichlorométhane, en présence de 129 mg
de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide (EDCI) et
91 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole (HOBT), sous agitation à
température ambiante pendant 24 heures. On obtient, après purification par
flash-chromatographie sur gel de silice (60; 30-75 NM) en éluant avec un
mélange de dichlorométhane et de méthanol (99/1 en volumes), 126 mg de
[4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazol-
6-
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yl)-méthanone, sous forme d'une poudre blanche dont les caractéristiques
sont les suivantes
- Spectre de masse (El) : m/z = 449 (M+)
- Point de fusion (Kofler) : 98°C
Exemple 15 : [4-(3-cyanophényl)-pipérazin-1-yl]-(5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-
c]thiazol-6-yl)-méthanone
On opère comme à l'exemple 5, mais à partir d'une part de 150 mg d'acide
5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazole-6-carboxylique, qui peut être préparé
selon
Heterocycles (2001), 55(10), 1843-1857, et de 159 mg de chlorhydrate de
1-(3-cyanophényl)pipérazine dans 15 mL de dichlorométhane, en présence
de 129 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide
(EDCI), 190 pL de triéthylamine et 91 mg d'hydrate de
1-hydroxybenzotriazole (HOBT), sous agitation à température ambiante
pendant 24 heures. On obtient, après purification par flash-chromatographie
sur gel de silice (60; 30-75 pM) en éluant avec un mélange de
dichlorométhane et d'acétate d'éthyle (80/20 en volumes), 185 mg de [4-(3-
cyanophényl)-pipérazin-1-yl]-(5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazol-6-yl)-
méthanone, sous forme d'une poudre blanche dont les caractéristiques sont
les suivantes
- Spectre de masse (El) : m/z = 414 (M+)
Exemple 16 : [4-(3-carboxamidophényl)-pipérazin-1-yl]-(5-phényl-1 H-
pyrrolo[1,2-c]thiazol-6-yl)-méthanone
On opère comme à l'exemple 5, mais à partir d'une part de 150 mg d'acide
5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazole-6-carboxylique, qui peut être préparé
selon
Heterocycles (2001), 55(10), 1843-1857, et de 170 mg de chlorhydrate de
1-(3-carboxamidophényl)pipérazine dans 20 mL de dichlorométhane, en
présence de 129 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-
éthylcarbodümide (EDCI) ), 190 NL de triéthylamine et 91 mg d'hydrate de
1-hydroxybenzotriazole (HOBT), sous agitation à température ambiante
pendant 24 heures. On obtient, après purification par flash-chromatographie
sur gel de silice (60; 30-75 NM) en éluant avec de l'acétate d'éthyle puis
recristallisation dans l'oxyde deüsopropyle, 40 mg de [4-(3-
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carboxamidophényl)-pipérazin-1-yl]-(5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazol-6-yl)-
méthanone, sous forme d'une poudre beige dont les caractéristiques sont les
suivantes
- Spectre de masse (El) : m/z = 432 (M+)
Exemple 17 : [4-(3-Hydroxyméthyl-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-méthyl-2-
phényl-2H-pyrazol-3-yl)-méthanone
Etaae 1 : A une solution de 850 mg de l'ester tert-butylique de l'acide 4-(3-
hydroxyméthyl-phényl)-pipérazine-1-carboxylique, qui peut étre obtenu selon
le brevet WO 00/015609, dans 4 mL de dioxanne, sont ajoutés goutte à
goutte 3,6 mL d'une solution d'acide chlorhydrique 4N dans le dioxanne.
Après 20 heures de réaction, le précipité formé est filtré puis lavé avec 20
mL
d'éther de pétrole. On obtient ainsi 770 mg de chlorhydrate de [3-(pipérazin-
1-yl)-phényl]-méthanol, sous forme d'un solide brun amorphe dont les
caractéristiques sont les suivantes
Spectre de masse (El) : m/z = 192 (M+)
Etaae 2 : On opère comme à l'exemple 5, mais à partir d'une part de 150 mg
d'acide 5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazole-6-carboxylique, qui peut être
préparé selon Heterocycles (2001), 55(i0), 1843-1857, et de 162 mg de
chlorhydrate de [3-(pipérazin-1-yl)-phényl]-méthanol dans 20 mL de
dichlorométhane, en présence de 129 mg de chlorhydrate de 1-(3-
diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide (EDCI) ), 190 NL de triéthylamine
et 91 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole (HOBT), sous agitation à
température ambiante pendant 24 heures. On obtient, après purification par
flash-chromatographie sur gel de silice (60; 30-75 NM) en éluant avec un
mélange de chlorométhane et de méthanol (97,5/2,5 en volumes) puis
recristallisation dans l'oxyde deüsopropyle, 165 mg de [4-(3-hydroxyméthyl-
phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazol-6-yl)-méthanone,
sous forme d'une poudre blanche dont les caractéristiques sont les
suivantes
Spectre de masse (El) : m/z = 419 (M+)
Exemple 18 : [4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-phényl-1 H-
pyrrolo[1,2-c]thiazoldioxy-6-yl)-méthanone
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et
Exemple 19 : [4-(3,5-diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-phényl-1 H-
pyrrolo[1,2-c]thiazoloxy-6-yl)-méthanone
Etape 1 : 277 mg d'acide 5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazole-6-carboxylique,
qui peut être préparé selon Heterocycles (2001), 55(10), 1843-1857, sont mis
en suspension dans 10 mL de méthanol à 0°C, puis on ajoute 1,13 g
d'oxone
dissous dans 5 mL d'eau et on agite 20 heures à température ambiante. On
ajoute alors 50 mL d'eau et on extrait la phase 3 fois avec 50 mL d'acétate
d'éthyle. Après séchage sur sulfate de sodium et concentration sous pression
réduite, on obtient 250 mg d'un mélange équimoléculaire d'acide 5-phényl-
1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazoledioxy-6-carboxylique et d'acide 5-phényl-1 H-
pyrrolo[1,2-c]thiazoleoxy-6-carboxylique, utilisé tel quel à l'étape suivante.
Etape 2 : On opère comme à l'exemple 5, mais à partir d'une part de 240 mg
d'un mélange équimoléculaire d'acide 5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]
thiazoledioxy-6-carboxylique et d'acide 5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazoleoxy-
6-carboxylique, obtenu à l'étape précédente, et de 192 mg de 1-(3,5-
diméthoxy-phényl)pipérazine dans 20 mL de dichlorométhane, en présence
de 182 mg de chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodümide
(EDCI) et 128 mg d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole (HOBT), sous
agitation à température ambiante pendant 24 heures. Après purification par
flash-chromatographie sur gel de silice (60; 30-75 pM) en éluant avec un
mélange de dichlorométhane et de méthanol (98/2 en volumes), on obtient en
recueillant la première fraction éluée 111 mg de [4-(3,5-diméthoxy-phényl)
pipérazin-1-yl]-(5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazoldioxy-6-yl)-méthanone, sous
forme d'une meringue orange dont les caractéristiques sont les suivantes
- Spectre de masse (El) : m/z = 481 (M+)
Et en recueillant la seconde fraction éluée, on obtient 110 mg de de [4-(3,5-
diméthoxy-phényl)-pipérazin-1-yl]-(5-phényl-1 H-pyrrolo[1,2-c]thiazoloxy-6-yl)-
méthanone, sous forme d'une meringue rose-orangée dont les
caractéristiques sont les suivantes
- Spectre de masse (El) : m/z = 465 (M+)
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Exemple 20 : [4-(3-hydroxymétyl-phényl)-pipérazin-1-yl]-(2-phényl-
imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)-méthanone
A une solution de 274 mg d'acide 2-phényl-imidazo[1,2-a]pyridine-3-
carboxylique, qui peut être preparé selon J. of Heterocyclic Chemistry (1989),
5 26(6), 1875-80, dans 25 mL de dichlorométhane sont ajoutés 265 mg de
chlorhydrate de 1-(3-hydroxyméthyl-phényl)pipérazine, qui peut être préparé
comme à l'étape 1 de l'exemple 17, 211 mg de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-
éthylcarbodümide (EDCI), 465 uL de dtriéthylamine et 148 mg d'hydrate de
1-hydroxybenzotriazole (HOBT). Après 20 heures d'agitation à température
10 ambiante, le mélange réactionnel est lavé avec de l'eau, séché sur sulfate
de
magnésium et concentré sous pression réduite. Le résidu obtenu est purifié
par flash chromatographie sur gel de silice (60; 30-75 NM) en éluant avec un
mélange de dichlorométhane et de méthanol (99/1 en volumes), on obtient
ainsi, 155 mg de [4-(3-hydroxyméthyl-phényl)-pipérazin-1-yl]-(2-phényl-
15 imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)-méthanone sous forme d'une meringue blanche
dont la caractéristique est la suivante
- Spectre de masse (El) : m/z = 412 (M+)
Exemple 21 : [4-(3-cyanophényl)-pipérazin-1-yl]-(2-phényl-imidazo[1,2-
a]pyridin-3-yl)-méthanone
20 A une solution de 275 mg d'acide 2-phényl-imidazo[1,2-a]pyridine-3-
carboxylique, qui peut être preparé selon J. of Heterocyclic Chemistry (1989),
26(6), 1875-80, dans 25 mL de dichlorométhane sont ajoutés 260 mg de
chlorhydrate de1-(3-cyanophényl)pipérazine, 211 mg de 1-(3-diméthyl-
aminopropyl)-3-éthylcarbodümide (EDCI), 309 pL de dtriéthylamine et 148 mg
25 d'hydrate de 1-hydroxybenzotriazole (HOBT). Après 20 heures d'agitation à
température ambiante, le mélange réactionnel est lavé avec de l'eau, séché
sur sulfate de magnésium et concentré sous pression réduite. Le résidu
obtenu est purifié par flash chromatographie sur gel de silice (60; 30-75 uM)
en éluant avec un mélange de dichlorométhane et de méthanol (99/1 en
volumes), on obtient ainsi, 280 mg de [4-(3-cyanophényl)-pipérazin-1-yl]-(2-
phényl-imidazo[1,2-a]pyridin-3-yl)-méthanone sous forme d'une meringue
blanche dont la caractéristique est la suivante
- Spectre de masse (El) : m/z = 407 (M+)
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Evaluation de l'inhibition de aolymérisation de tubuline
La tubuline est purifiée à partir de cerveaux de porc selon des méthodes
publiées (Shelanski et al., 1973, Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 70, 765-768.
Weingarten et al., 1975, Proc. Natl. Acad. Sci.USA, 72, 1858-1862).
Brièvement, les cerveaux sont broyés et centrifugés dans un tampon
d'extraction. La tubuline, contenue dans le surnageant de l'extrait subit deux
cycles successifs de polymérisation à 37°C et dépolymérisation à
4°C, avant
d'être séparée des MAPs (Microtubule Associated Proteins) par
chromatographie sur colonne de phosphocellulose P11 (Whatman). La
tubuline, ainsi isolée est pure à plus de 95 %. Elle est conservée dans un
tampon nommé RB/2 30 % glycérol, dont la composition est MES-NaOH
[acide 2-(N-morpholino)-éthanesulfonique] 50 mM, pH6.8 ; MgCl2 0.25 mM ;
EGTA 0.5 mM ; glycérol 30 % (v/v), GTP (guanosine-5'-tri-phosphate)
0.2 mM.
La polymérisation de la tubuline en microtubules est suivie par turbidimétrie
comme suit : la tubuline est ajustée à une concentration de 10 NM (1 mg/ml)
dans le tampon RB/2 30 % glycérol auquel on ajoute 1 mM GTP et 6 mM
MgCl2. La polymérisation est déclenchée par une augmentation de la
température de 6°C à 37°C dans une cuve de 1 cm de trajet
optique, placée
dans un spectrophotomètre UVIKON 931 (Kontron) équipé d'un porte cuve
thermostaté. L'augmentation de la turbidité de la solution est suivie à 350
nm.
Les produits sont mis en solution à 10 mM dans le DMSO et ajoutés à des
concentrations variables (0.5 à 10 NM) à la solution de tubuline avant
polymérisation. La ClSo est définie comme la concentration de produit qui
inhibe de 50 % la vitesse de polymérisation. On considère comme très actif
un produit dont la ClSO est inférieure ou égale à 25 NM.
Un produit conforme à l'invention pourra être utile pour inhiber la
prolifération
de cellules tumorales in vitro.
Test permettant de déterminer l'inhibition de prolifération de la lignée
tumorale humaine de colon HCT116
On évalue la prolifération des cellules HCT116 en mesurant l'incorporation de
['aC]_thymidine de la façon suivante. Les cellules HCT116 (issues de l'ATCC)
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sont cultivées dans un milieu DMEM (Gibco) qui contient 10 % de sérum de
veau foetal et des antibiotiques (pénicilline 1 %, streptomycine 1 %). Pour
effectuer le test de prolifération, on ensemence les cellules dans des
microplaques cytostar 96 puits (Amersham), à raison de 5000 cellules par
puits. On ajoute ensuite la ['4C]-thymidine (0.1 pCi/puits) et les produits à
évaluer. On utilise des concentrations variables de produits jusqu'à 10 pM ;
le
DMSO (solvant utilisé pour solubiliser les produits) ne doit pas excéder 0.5
dans le milieu. 48 heures après incubation à 37°C, on mesure la
radioactivité
incorporée dans les cellules par comptage de la plaque dans un compteur
TRI-LUX (Wallac). La ClSO est définie comme la concentration de produit qui
diminue de 50 % la radioactivité par rapport à un contrôle non traité. On
considère qu'un produit dont la ClSO est inférieure à 10 NM est cytotoxique
Résultats bioloaiaues
Inhibition de Inhibition de
Exemple Structure polymérisation prolifération
de la tubuline de HCT116
C150 M C150 M
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