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WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
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INDAZOLES SUBSTITUES, COMPOSITIONS LES CONTENANT,
PROCEDE DE FABRIC~TION ET UTILISATION
La présente invention concerne notamment de nouveaux composés
chimiques, particulièrement de nouveaux indazoles substitués, les
compositions les contenant, et leur utilisation comme médicaments.
Plus particulièrement, l'invention concerne de nouveaux indazoles
spécifiques présentant une activité anticancéreuse, via la modulation de
l'activité de protéines, en particulier des kinases.
A ce jour, la plupart des composés commerciaux utilisés en chimiothérapie
posent des problèmes importants d'effets secondaires et de tolérance par les
patients. Ces effets pourraient être limités dans la mesure où les
médicaments utilisés agissent sélectivement sur les cellules cancéreuses, à
l'exclusion des cellules saines. Une des solutions pour limiter les effets
indésirables d'une chimiothérapie peut donc consister en l'utilisation de
médicaments agissant sur des voies métaboliques ou des éléments
constitutifs de ces voies, exprimés majoritairement dans les cellules
cancéreuses, et qui ne seraient pas ou peu exprimés dans les cellules
saines.
Les protéines kinases sont une famille d'enzyme qui catalysent la
phospho "rylation de groupes hydroxyles de résidus spécifiques de protéines
tels que des résidus tyrosine, sérine ou thréonine. De telles phosphorylations
peuvent largement modifier la fonction des protéines ; ainsi, les protéines
kinases jouent un rôle important dans la régulation d'une grande variété de
processus cellulaires, incluant notamment le métabolisme, la prolifération
cellulaire, la différentiation cellulaire, la migration cellulaire ou la
survie
cellulaire. Parmi les différentes fonctions cellulaires dans lesquelles
l'activité
d'une protéine kinase est impliquée, certains processus représentent des
cibles attractives pour traiter les maladies cancéreuses ainsi que d'autres
maladies.
Ainsi, un des objets de la présente invention est de proposer des
compositions ayant une activité anticancéreuse, en agissant en particulier vis-
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à-vis de kinases. Parmi les kinases pour lesquelles une modulation de
l'activité est recherchée, Aurora2, CDK4, KDR et Tie2 sont préférées.
Les indazoles sont relativement peu représentés parmi les produits
pharmaceutiques commercialisés.
Les documents suivants proposent l'utilisation thérapeutique d'indazoles
substitués en position 3 par un amide et en position 6 par un aryle substitué:
La demande de brevet WO 03/078403 divulgue des indazoles substitués en
position 3 par des amides, utiles pour traiter de nombreuses pathologies,
particulièrement liées au système nerveux central. Une utilisation en
oncologie, bien que revendiquée, n'est pas démontrée. -
La demande de brevet WO 03/051847 divulgue des indazoles substitués en
position 3 par des- amides, utiles pour traiter de nombreuses pathologies,
particulièrement liées au système nerveux central. Une utilisation en
oncologie, bien que revendiquée, n'est pas démontrée.
Or, de façon surprenante, il a été trouvé que des indazoles substitués en
position 3 par un substituant NH-M-R3 avec M et R3 tels que définis plus loin,
et en position 6 par un substituant aromatique ou hétéroaromatique substitué,
présentaient une activité inhibitrice de kinases importante, en particulier à
l'encontre de KDR et de Tie2.
Un des mérites de l'invention est d'avoir trouvé que la substitution de
l'indazole en position 6 par un groupement approprié entraîne une inhibitiôn
importante des kinases KDR et Tie2. Un autre des mérites de l'invention est
d'avoir trouvé que la substitution de l'indazole en position 3 par un
substituant
NH-M-R3 avec M et R3 tels que définis plus loin, était déterminante pour
l'obtention d'une activité satisfaisante sur les deux kinases. Ainsi, le
changement de groupe fonctionnel en position 3 de l'indazole entraîne
systématiquement une chute de l'activité inhibitrice de KDR et de Tie2.
De plus, un autre des mérites de l'invention est d'avoir démontré que même
lorsque l'indazole est correctement substitué par un groupement approprié, il
est indispensable que l'azote en position 1 de l'indazole ne soit pas
substitué
afin de conserver une activité inhibitrice satisfaisante.
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Ces produits répondent à la formule (I) sûivante :
R3
R4 N-M
R5 ~
~ \N
AL '-Ar N
R7 H
Formule (I)
dans laquelle :
1) A est sélectionné dans le groupe constitué par : H, aryle,
hétéroaryle, ary(e substitué, hétéroaryle substitué ;
2) Ar est sélectionné dans le groupe constitué par: aryle,
hétéroaryle, aryle substitué, hétéroaryle substitué ;
3) L est sélectionné dans le groupe constitué par: liaison, CO, NH,
CO-NH, NH-CO, NH-SO, NH-S02, NH-CO-NH-SO2, SO2NH,
NH-CH2, CH2-NH, CH2-CO-NH, NH-CO-CH2, NH-CH2-CO, CO-
CH2-NH, NH-CO-NH, NH-CS-NH, NH-CO-O, O-CO-NH, CH2-
NH-CO-NH, NH-CO-NH-CH2;
4) M est sélectionné dans le groupe constitué par: liaison, CO,
NH, CO-NH, CS-NH, NH-CO, NH-SO, NH-S02, CO-NH-SO2,
NH-CH2, CH2-CO-NH, NH-CO-CH2, NH-CH2-CO, CO-CH2-NH;
5) R3 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué
par H, alkyle, aikylène, alkynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle,
hétérocyclyle, alkyle substitué, alkylène substitué, alkynyie
substitué, aryle substitué, hétéroaryle substitué, cycloalkyle
substitué, hétérocyclyle substitué, alkylène, alkylène substitué,
alkynyle substitué ;
6) R4, R5 et R7 sont indé.pendamment sélectionnés dans le
groupe constitué par: H, halogène, R2, CN, O(R2), OC(O)(R2),
OC(O)N(R2)(R1), OS(02)(R2), N(R2)(R1), N=C(R2)(R1),
N(R2)C(O)(R1), N(R2)C(O)O(R1), N(R6)C(O)N(R2)(R1),
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N(R6)C(S)N(R2)(R1), N(R2)S(02)(R1), C(O)(R2), C(O)O(R2),
C(O)N(R2)(Rl), C(=N(R1))(R2), C(=N(OR1))(R2), S(R2),
S(O)(R2), S(02)(R2), S(02)O(R2), S(02)N(R2)(Rl); dans lequel
chaque R2, R1, R6 est indépendamment sélectionné dans le
groupe constitué par H, alkyle, alkylène, alkynyle, aryle,
hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocyclyle, alkyle substitué, alkylène
substitué, alkynyle substitué, aryle substitùé, hétéroaryfe
substitué, cycloalkyle substitué, hétérocyclyle substitué,
alkylène, alkylène substitué, alkynyle substitué ; dans lequel,
lorsque R2 et R1 sont simultanément présents sur l'un des R4,
R5 et R7, ils peuvent être liés entre eux pour former un cycle.
Dans les produits de formule (I), Ar-L-A est avantageusement :
X4 X3
.._.. _. _ . _. _ , . _ . . _ ...
Xl-X2 A
,
dans lequel chaque Xl, X2, X3 et X4 est indépendamment choisi parmi N et
C-R11, dans lequel R11 est sélectionné dans le groupe constitué par: H,
halogène, R2, CN, O(R2), OC(O)(R2), OC(O)N(R2)(RI), OS(02)(R2),
N(R2)(R1), N=C(R2)(R1), N(R2)C(O)(R1), N(R2)C(O)O(RI),
N(R6)C(O)N(R2)(R1), N(R6)C(S)N(R2)(R1), N(R2)S(02)(R1), C(O)(R2),
C(O)O(R2), C(O)N(R2)(R1), C(=N(R1))(R2), C(=N(OR1))(R2), S(R2),
S(O)(R2), S(02)(R2), S(02)O(R2), S(02)N(R2)(R1) ; dans lequel chaque R2,
RI, R6 est indépendamment sélectionné dans le groupe constitué par H,
alkyle, alkylène, alkynyle, aryle, hétéroaryle, cycloalkyle, hétérocyclyle,
alkyle
substitué, alkyiène substitué, alkynyle substitué, aryle substitué,
hétéroaryle
substitué, cycloalkyle substitué, hétérocyclyle substitué, alkylène, alkylène
substitué, aikynyle substitué ; dans lequel, lorsque R2 et RI sont
simultanément présents sur R11, ils peuvent être liés entre eux pour former
un cycle.
Des substituants R11 sélectionnés dans le groupe constitué par H, F, CI,
méthyle, NH2, OCF3, et CONH2 sont préférés.
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R4, R5 et R7 sont avantageusement sélectionnés parmi H, F, Ci, Br et
méthyle.
R7 est, de préférence, sélectionné dans le groupe constitué par F, CI, Br et
méthyle, da,ns lequel F est plus particulièrement préféré. En effet, il a été
5 trouvé que la substitution de R7 par un atome de fluor apportait une
amélioration significative de l'activité biochimique, notamment en ce qui
concerne l'activité inhibitrice de kinase, en particulier Tie2, KDR.
L-A est avantageusement choisi parmi NH2, NH-A, NH-CO-NH-A et NH-S02-
A.
Un substituant A préféré est avantageusement sélectionné dans le groupe
constitué par phényle, pyridyle, pyrimidyle, thiényle, furyle, pyrrolyle,
oxazolyle, thiazolyle, isoxazolyle, isothiazolyle, pyrazolyle, imidazolyle,
indolyle, indazolyle, benzimidazolyle, tienzoxazolyle, et benzothiazolyle,
chacun des substituants précédents pouvant être éventuellement substitué.
Un substituânt A plus préféré est choisi parmi phényle, isoxazolyle, phényle
substitué, et isoxazolyle substitué.
A est, de préférence, substitué par un premier substituant sélectionné dans le
groupe constitué par alkyle, alkyle halogéné, alkylène, alkynyle, aryle, O-
alkyle, 0-Aryle, O-hétéroaryle, S-alkyle, S-Aryle, S-hétéroaryle, chacun étant
éventuellement substitué par un substituant choisi parmi (C1-C3)alkyle,
halogène, O-(C1-C3)alkyle.
A est, de préférence, substitué par un deuxième substituant sélectionné dans
le groupe constitué par F, CI, Br, I, OH, SH, SO3M, COOM, CN, NO2,
CON(R8)(R9), N(R8)(R9)CO(R8), (C1-C3)alkyle-OH, (C1-C3)alkyle-
N(R8)(R9), (C1-C3)alkyle-(R10), (C1-C3)alkyle-COOH, N(R8)(R9) ; dans
lequel R8 et R9 sont indépendamment choisis parmi H, (C1-C3)alkyle, (C1-
C3)alkyleOH, (Cl-C3)alkyleNH2, (C1-C3)alkyleCOOM, (C1-C3)alkyleSO3M ;
dans lequel lorsque R8 et R9 sont simultanément différents de H, ils peuvent
être liés pour former un cycle ; dans lequel M est H ou un cation de métal
alcalin choisi parmi Li, Na et K; et dans lequel RIO est H ou un hétérocycle
non aromatique éventuellement substitué par comprenant 2 à 7 atomes de
carbone, et 1 à 3 hétéroatomes choisis parmi N, 0 et S.
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Un substituant A particulièrement efficace pour l'obtention d'une inhibition
de
l'activité de kinases est choisi parmi phényle et isoxazolyle, chacun étant
substitué par au moins un substituant choisi parmi halogène, (C1-C4)alkyle,
(C1-C3)alkyle halogéné, O-(C1-C4)alkyie, S-(C1-C4)alkyle, O-(C1-C4)alkyle
halogéné, et S-(C1-C4)aikyle halogéné.
De plus, un substituant M préféré sera avantageusement sélectionné dans le
groupe constitué par lïaison, CO, CO-NH, et SOa.
R3 est, de préférence, sélectionné dans le groupe constitué par aryle,
hétéroaryle, aryle substitué, et hétéroaryle substitué. Un R3 plus
particulièrement préféré est hétéroaryle substitué. Parmi les hétéroaryles
substitués, thiényle, pyrrolyle, furyle, indolyle, oxazolyle, isoxazolyle,
thiazolyle, isothiazolyle, imidazolyle, indazolyle, pyridyle, pyrimidyle,
pyrazolyle, et-pyridazinyle.sont des hétéroaryles de choix.
R4 et R5 sont avantageusement H. En effet, il a été observé dans ce cas une
amélioration significative de l'activité vis-à-vis des kinases KDR et/ou Tie2,
et
généralement une amélioration de la solubilité.
Des produits acceptables, répondant aux conditions d'activité inhibitrice
requises, peuvent être choisis dans le groupe constitué par :
1-[4-(3-Amino-1 H-indazol-6-yl)-phényl]-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)
urée
N-{6-[4-(2,3-dichlorobenzènesulfonylamino)-phényl]-1 H-indazol-3-yl}-
(thiophèn-3-yl-carboxamide)
N-[4-(3-Amino-1 H-indazol-6-yl)-phényl]-2,3-dichlorobenzènesulfonamide.
D'autres produits acceptables, dans lesquels R7 est préférentiellement un
halogène, plus préférentiellement du fluor, répondant aux conditions
d'activité
inhibitrice requises, et présentant de fâit une activité supérieure à des
analogues dans lesquels R7 est différent d'un halogène, peuvent être chôisis
dans le groupe constitué par :
1-[4-(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phényl]-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-
phényi) urée
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1-(2-Fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-3-{4-[7-fluoro-3-(thiophèn-3-yl-
carbonylamino)-1 H-indazol-6-yl]-phényl}-urée
N-{6-[4-(2,3-dichlorobenzènesulfonylamino)-phényl]-7-fluoro-1 H-indazol-3-yl}-
(thiophèn-3-yi-carboxamide)
N-[4-(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phényl]-2,3-
dichlorobenzènesulfonamide
1-(2-FI uoro-5-trifluorométhyl-phényl)-3-{4-[4, 5, 7-trifl uoro-3-(th iophèn-3-
yi-
carbonylamino)-1 H-indazol-6-yl]-phényl}-urée
N-[6-(4-amino-phényl)-7-fluoro-1 H-indazol-3-yl]-(thiophèn-3-yl-carboxamide).
Un produit conforme à l'invention pourra se présenter sous forme :
1) non chirale, ou
2) racémique, ou
3) enrichie en un stéréoisomère, ou
4) enrichie en un énantiomère ;
et pourra être éventuellement salifié.
Un produit conforme à l'invention pourra être utilisé pour la fabrication d'un
médicament utile pour traiter un état pathologique, en particulier un cancer.
La présente invention concerne aussi les compositions thérapeutiques
comprenant un produit selon l'invention, en combinaison avec un excipient
pharmaceutiquement acceptable selon le mode d'administration choisi. La
composition pharmaceutique peut se présenter sous forme solide, liquide ou
de liposomes.
Parmi les compositions solides on peut citer les poudres, les gélules, les
comprimés. Parmi les formes orales on peut aussi inclure les formes solides
protégées vis-à-vis du milieu acide de l'estomac. Les supports utilisés pour
les formes solides sont constitués notamment de supports minéraux comme
les phosphates, les carbonates ou de supports organiques comme le lactose,
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les celluloses, l'amidon ou les polymères. Les formes liquides sont
constituées de solutions de suspensions ou de dispersions. Elles contiennent
comme support dispersif soit l'eau, soit un solvant organique (éthanol, NMP
ou autres) ou de mélanges d'agents tensioactifs et de solvants ou d'agents
complexants et de solvants.
Les formes liquides seront, de préférence, injectables et de ce fait auront
une
formulation acceptable pour une telle utilisation.
Des voies d'administration par injection acceptables incluent les voies
intraveineuse, intra-péritonéale, intramusculaire, et sous cutanée, la voie
intraveineuse étant habituellement préférée.
La dose administrée des composés de l'invention sera adaptée par le
praticien en fonction de la voie d'administration au patient et de l'état de
ce
dernier.
Les composés de la présente invention peuvent être administrés seuls ou en
mélange avec d'autres anticancéreux. Parmi les associations possibles on
peut citer:
= les agents alkylants et notamment le cyclophosphamide, le
meiphalan, l'ifosfamide, le chlorambucil, le busulfan, le thiotepa,
la prednimustine, la carmustine, la lomustine, la semustine, la
steptozotocine, la decarbazine, la témozolomide, la
procarbazine et l'hexaméthylmélamine
= les dérivés du platine comme notamment le cisplatine, le
carbopiatine ou l'oxaliplatine
= les agents antibiotiques comme notamment la bléomycine, la
mitomycine, la dactinomycine
= les agents antimicrotubules comme notamment la vinblastine, la
vincristine, la vindésine, la vinoreibine, les taxoïdes (paclitaxel et
docétaxel)
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= les anthracyclines comme notamment la doxorubicine, la
daûnorubicine, l'idarubicine, l'épirubicine, la mitoxantrone, la
losoxantrone
= les inhibiteurs de topoisomérases des groupes 1 et Il telles que
l'étoposide, le teniposide, l'amsacrine, l'irinotecan, le topotecan
et le tomudex
= les fluoropyrimidines telles que la 5-fluorouracile, l'UFT, la
floxuridine
= les analogues de cytidine telles que la 5-azacytidine, la
cytarabine, la gemcitabine, la 6-mercaptomurine, la 6-
thioguanine
= les analogues d'adénosine tels que la pentostatine, la
cytarabine ou le phosphate de fludarabine
= le méthotrexate et l'acide_foiinique
= les enzymes et composés divers tels que la L-asparaginase,
l'hydroxyurée, l'acide trans-rétinoique, la suramine, la
dexrazoxane, l'amifostine, l'herceptine ainsi que les hormones
oestrogéniques, androgéniques
= les agents antivasculaires tels que les dérivés de la
combretastatine ou de la colchicine et leurs prodrogues.
Il est également possible d'associer aux composés de la présente invention
un traitement par des radiations. Ces traitements peuvent être administrés
simultanément, séparément, séquentiellement. Le traitement sera adapté par
le praticien en fonction du malade à traiter.
Les produits de l'invention sont utiles comme agents inhibiteurs d'une
réaction catalysée par une kinase. KDR et Tie2 sont des kinases pour
lesquelles les produits de l'invention seront particulièrement utiles en tant
qu'inhibiteurs.
Les raisons pour lesquelles ces kinases sont choisies sont données ci-aprés :
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KDR
KDR (Kinase insert Domain Receptor) aussi appelée VEGF-R2 (Vascular
Endothelial Growth Factor Receptor 2), est exprimé uniquement dans les
cellules endothéliales. Ce récepteur se fixe au facteur de croissance
5 angiogénique VEGF, et sert ainsi de médiateur à un signal transductionnel
via l'activation de son domaine kinase intracellulaire. L'inhibition directe
de
l'activité kinase de VEGF-R2 permet de réduire le phénomène d'angiogénèse
en présence de VEGF exogène (Vascular Endothelial Growth Factor : facteur
de croissance vasculaire endothélial) (Strawn et al., Cancer Research, 1996,
10 vol. 56, p.3540-3545). Ce processus a été démontré notamment à l'aide de
mutants VEGF-R2 (Millauer et al., Cancer Research, 1996, vol. 56, p.1615-
1620). Le récepteur VEGF-R2 semble n'avoir aucune autre fonction chez
l'adulte que celle liée à l'activité angiogénique du VEGF. Par conséquent, un
inhibiteur sélectif de l'activité kinase du VEGF-.R2 ne devrait..démontrer que
peu de toxicité.
En plus de ce rôle central dans le processus dynamique angiogénique, des
résultats récents suggèrent que l'expression de VEGF contribue à la survie
des cellules tumorales après des chimio- et radio-thérapies, soulignant la
synergie potentielle d'inhibiteurs de KDR avec d'autres agents (Lee et al.
Cancer Research, 2000, vol. 60, p.5565-5570).
Tie2
Tie-2 (TEK) est un membre d'une famille de récepteurs à tyrosine kinase,
spécifique des cellules endothéliales. Tie2 est le premier récepteur à
activité
tyrosine kinase dont on connaît à la fois l'agoniste (angiopoïetine 1 ou Ang1)
qui stimule l'autophosphorylation du récepteur et la signalisation cellulaire
[S.
Davis et al (1996) Cell 87, 1161-11691 et l'antagoniste (angiopo'ietine 2 ou
Ang2) [P.C. Maisonpierre et al. (1997) Science 277, 55-60]. L'angiopoïetine 1
peut synergiser avec le VEGF dans les derniers stades de la néo-
angiogénèse [AsaharaT. Circ. Res.(1998) 233-240]. Les expériences de
knock-out et les manipulations transgéniques de l'expression de Tie2 ou de
Ang1 conduisent à des animaux qui présentent des défauts de
vascularisation [D.J. Dumont et al (1994) Genes Dev. 8, 1897-1909 et C. Suri
(1996) Cell 87, 1171-1180]. La liaison d'Angl à son récepteur conduit à
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l'auto p ho spho rylatio n du domaine kinase de Tie2 qui est essentielle pour
la
néovascularisation ainsi que pour le recrutement et l'interaction des
vaisseaux avec les péricytes et les cellules musculaires lisses ; ces
phénomènes contribuent à la maturation et la stabilité des vaisseaux
nouvellement formés [P.C. Maisonpierre et al (1997) Science 277, 55-60]. Lin
et al (1997) J. Clin. lnvest. 100, 8: 2072-2078 et Lin P. (1998) PNAS 95,
8829-8834, ont montré une inhibition de la croissance et de la vascularisation
tumorale, ainsi qu'une diminution des métastases de poumon, lors
d'infections adénovirales ou d'injections du domaine extracellulaire de Tie-2
(Tek) dans des modèles de xénographes de tumeur du sein et de mélanome.
Les inhibiteurs de Tie2 peuvent être utilisés dans les situations où une
néovascularisation se fait de façon inappropriée (c'est-à-dire dans la
rétinopathie diabétique, l'inflammation chronique, le psoriasis, le sarcome de
Kâpôsi,la néovascularisation chronique due à la dégénérescence maculaire,
l'arthrite rhumato'ide, l'hémoangiome infantile et les cancers).
CDK
La progression du cycle cellulaire est souvent gérée par des kinases cycline
dépendantes (CDK) qui sont activées par une interaction avec des protéines
appartenant à la famille des cyclines, activation qui se termine par la
phosphorylation de substrats et finalement par la division cellulaire. En plus
les inhibiteurs endogènes des CDK qui sont activés (famille des INK4 et
KIP/CIP) régulent de façon négative l'activité des CDK. La croissance des
cellules normales est due à une balance entre les activateurs des CDK (les
cyclines) et les inhibiteurs endogènes des CDK. Dans plusieurs types de
cancers, l'expression ou l'activité aberrante de plusieurs de ces régulateurs
du cycle cellulaire a été décrite.
La cycline E active la kinase Cdk2 qui agit ensuite pour phosphoryler la
protéine pRb (protéine du rétinoblastome) résultant en un engagement dans
la division cellulaire irréversible et une transition vers la phase S (PL
Toogood, Medicinal Research Reviews (2001), 21(6) ; 487-498. La kinase
CDK2 et peut être CDK3 sont nécessaires pour la progression dans la phase
G1 et l'entrée en phase S. Lors de la formation de complexe avec la cycline
E, elles maintiennenfi l'hyperphosphorylation de pRb pour aider la progression
de la phase G1 en phase S. Dans les complexes avec la Cycline A, CDK2
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joue un rôle dans l'inactivation de E2F et est nécessaire pour la réalisation
de
la phase S (TD. Davies et al. (2001) Structure 9, 389-3).
Le complexe CDK1/cycline B régule la progression du cycle cellulaire entre la
phase G2 et la phase M. La régulation négative du complexe CDK/Cjrcline B
empêche les cellules normale d'entrer en phase S avant que la phase G2 ait
été correctement et complètement réalisée. (K.K. Roy and E.A. Sausville
Current Pharmaceutical Design, 2001, 7, 1669-1687.
Un niveau de régulation de l'activité des CDK existe. Les activateurs de
cycline dépendantes kinases (CAK) ont une action positive de régulation des
CDK. CAK phosphôryle les CDK sur le résidu thréonine pour rendre l'enzyme
cible totalement active.
La présence de défauts dans les molécules intervenant sur le cycle cellulaire
entraîne l'activation des CDK et la progression du cycle, il est normal de
vouloir inhiber l'activité des enzymes CDK poùr blàquer la croissance
cellulaire des cellules cancéreuses.
Aurora
De nombreuses protéines impliquées dans la ségrégation des chromosomes
et l'assemblage du fuseau ont été identifiées dans la levure et la drosophile.
La désorganisation de ces protéines conduit à la non-ségrégation des
chromosomes et à des fuseaux monopolaires ou désorganisés. Parmi ces
protéines, certaines kinases, dont Aurora et Ipl1, provenant respectivement
de drosophile et de S. cerevisiae, sont nécessaires pour la ségrégation des
chromosomes et la séparation du centrosome. Un analogue humain de Ipl1
de levure a été récemment cloné et caractérisé par différents laboratoires.
Cette kinase, nommée aurora2, STK15 ou BTAK appartient à la famille des
kinases à sérine/thréonine. Bischoff et al. ont montré que Aurora2 est
oncogène, et est amplifié dans les cancers colorectaux humains (EMBO J,
1998, 17, 3052-3065). Cela a également été exemplifié dans des cancers
impliquant des tumeurs épithéliales telles que le cancer du sein.
Définitions
Le terme halogène fait référence à un élément choisi parmi F, CI, Br, et
I.
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Le terme alkyle fait référence à un substituant hydrocarboné saturé,
linéaire ou ramifié, ayant de 1 à 12 atomes de carbone. Les substituants
méthyle, éthyle, propyle, 1-méthyléthyl, butyle, 1-méthylpropyl,
2-méthylpropyle, 1,1-diméthyléthyle, pentyle, 1-méthylbutyle, 2-méthylbutyle,
3-méthylbutyle, 1,1-diméthylpropyle, 1,2-diméthylpropyle, 2,2-diméthyl-
propyle, 1-éthylpropyle, hexyle, 1-méthylpentyte, 2-méthylpentyle, 1-éthyl-
butyle, 2-éthylbutyle, 3,3-diméthyibutyle, heptyle, 1-éthylpentyle, octyle,
nonyle, décyle, undécyle, et dodécyle sont des exemples de substituant
alkyle.
Le terme alkylène fait référence à un substituant hydrocarboné (inéaire ou
ramifié ayant une ou plusieurs insaturations, ayant de 2 à 12 atomes de
carbone. Les substituants éthylènyle, 1-méthyléthylènyle, prop-l-ènyle, prop-
2-ènyle, Z-1-méthylprop-1-ènyle, E-1-méthylprop-l-ènyle, Z-1,2-diméfihyl-
prôp-1-ènylé;- E-1,2=diméthylprop,-1-ënyle, but-l;3-diényle, 1-rnéthylidènyl-
prop-2-ènyle, Z-2-méthy(but-1,3-diényle, E-2-méthylbut-1,3-diényle, 2-méthyl-
1-méthylidènylprop-2-ènyle, undéc-l-ènyle et undéc-10-ènyle sont des
exemples de substituant alkylène.
Lè terme alkynyle fait référence à un substituant hydrocarboné linéaire ou
ramifié ayant au moins deux insaturations portées par une paire d'atomes de
carbone vicinaux, ayant de 2 à 12 atomes de carbone. Les substituants
éthynyle; prop-1-ynyle; prop-2-ynyle; et but-1-ynyle sont des exemples de
substituant alkynyle.
Le terme aryle fait référence à un substituant aromatique mono- ou
polycyclique ayant de 6 à 14 atomes de carbone. Les substituants phényle,
napht-1-yle ; napht-2-yle ; anthracen-9-yi ; 1,2,3,4-tétrahydronapht-5-yie ;
et
1,2,3,4-tétrahydronapht-6-yle sont des exemples de substituant aryle.
Le terme hétéroaryle fait référence à un substituant hétéroaromatique
mono- ou polycyclique ayant de 1 à 13 atomes de carbone et de 1 à 4
hétéroatomes. Les substituants pyrrol-1-yle ; pyrrol2-yle ; pyrrol3-yle ;
furyle ;
thienyle ; imidazolyle ; oxazolyfe ; thiazolyle ; isoxazoiyle ; isothiazofy(e
;
1,2,4-triazolyle ;- oxadiazolyle ; thiadiazolyle ; tétrazolyle ; pyridyle ;
pyrimidyle ; pyrazinyle ; 1,3,5-triazinyle ; indolyle ; benzo[b]furyle ;
benzo[b]thiényle ; indazolyle ; benzimidazolyle ; azaindolyle ; quinoléyie ;
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isoquinoléyle ; carbazolyle ; et acridyle sont des exemples de substituant
hétéroaryle.
Le terme hétéroatome fait référence ici à un atome au moins divalent,
différent du carbone. N; O; S; et Se sont des exemples d'hétéroatome.
Le terme cycloalkyle fait référence à un substituant hydrocarboné cyclique
saturé ou partiellement insaturé ayant de 3 à 12 atomes de carbone. Les
substituants cyclopropyle; cyclobutyfe; cyclopentyle; cyclopentènyle;
cyclope ntad i ényle; cyclohexyle; cyclohexèny(e; cycloheptyle;
bicyclo[2.2.1 ]heptyle ; cyclooctyle; bicyclo[2.2.2]octyle ; adamantyle ; et
perhydronapthyle sont des exemples de substituant cycloalkyle.
Le terme hétérocyclyle fait référence à un substituant hydrocarboné
cyclique saturé ou partiellement insaturé ayant de 1 à 13 atomes de carbone
et de 1 à 4 hétéroatomes. De préférenée, le ' substituant h drôcârboné
cyclique saturé ou partiellement insaturé sera monocyclique et comportera 4
ou 5 atomes de carbone et 1 à 3 hétéroatomes.
Le terme substitué fait référence à un substituant différent de H, par
exemple halogène; alkyle; aryle; hétéroaryle, cycloalkyle ; hétérocyclyle ;
alkylène; aikynyle; OH ; O-alkyie; O-alkylène ; 0-aryle; 0-hétéroaryle; NH2;
NH-alkyle; NH-aryle; NH-hétéroaryle; SH ; S-alkyle; S-aryle; S(02)H ; S(02)-
alkyle; S(02)-aryle; SO3H ; S03-alkyle; S03-aryle; CHO ; C(O)-alkyie; C(O)-
aryle ; C(O)OH ; C(O)O-alkyle; C(O)O-aryle ; OC(O)-alkyle; OC(O)-aryle ;
C(O)NH2; C(O)NH-alkyfe; C(O)NH-ary(e ; NHCHO ; NHC(O)-alkyle; NHC(O)-
aryle ; NH-cycfoalkyle ; NH-hétérocyclyfe.
La présente invention a encore pour objet le procédé de préparation des
produits de formule (1).
Les produits selon l'invention peuvent être préparés à partir de méthodes
conventionnelles de chimie organique. Le schéma 1 ci-dessous est illustratif
d'une méthode utilisée pour la préparation de l'exemple 6. A ce titre, il ne
saurait constituer une limitation de la portée de l'invention, en ce qui
concerne
les méthodes de préparation des composés revendiqués.
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TfO,N,OTf B(OH)2
CN
~ CN CN Boc-NH I ~
~ F
HO (/ F TfO I F Boc ~/ F
N
F F H
O O
NH2 CI HN
NH2NH2,H20 \ \ N ~ S N s
JN N
Bo\N F Bo N F H
H H
O. , F. . O
HCI HN fF
NCO NH
N s F F \ ~
N
F H a F O H
H~N F N~N
HCI F H H
NHZ
HCI /EtOH 4 HCI
-~ (
F N
~
F NJ, N I/ F
F F H H
- Schéma 1 -
Il est entendu pour l'homme du métier que, pour la mise en o?uvre des
procédés selon l'invention décrits précédemment, il peut être nécessaire
5 d'introduire des groupements protecteurs des fonctions amino, carboxyle et
alcool afin d'éviter des réactions secondaires. Ces groupes sont ceux qui
permettent d'être éliminés sans toucher au reste de la molécule. Comme
exemples de groupes protecteurs de la fonction amino, on peut citer le
carbamate de tert-butyle qui peut être régénéré au moyen
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d'iodotriméthylsilane, l'acétyle qui peut être régénéré en milieu acide (acide
chlorhydrique par exemple). Comme groupes protecteurs de la fonction
carboxyle, on peut citer les esters (méthoxyméthylester, benzylester par
exemple). Comme groupes protecteurs de la fonction alcool, on peut citer les
esters (benzoylester par exemple) qui peuvent être régénérés en milieu acide
ou par hydrogénation catalytique. D'autres groupes protecteurs utilisables
sont décrits par T. W. GREENE et coli. dans Protective Groups in Organic
Synthesis, third edition, 1999, Wiley-Interscience.
Les composés de formule (I) sont isolés et peuvent être purifiés par les
méthodes connues habituelles, par exemple par cristallisation,
chromatographie ou extraction.
Les énantiomères, d iastéréo isomères des composés de formule (I) font
également partié de l'.invention. ., .
Les composés de formule (I) comportant un reste basique peuvent être
éventuellement transformés en sels d'addition avec un acide minéra( ou
organique, par action d'un tel acide au sein d'un solvant, par exemple
organique tel un alcool, une cétone, un éther ou un solvant chloré.
Les composés de formule (I) comportant un reste acide peuvent être
éventuellement transformés en sels métalliques ou en sels d'addition avec
des bases azotées selon les méthodes connues en soi. Ces sels peuvent être
obtenus par action d'une base métallique (alcaline ou alcalinoterreuse par
exemple), de l'ammoniac, d'une amine ou d'un sel d'amine sur un composé -
de formule (I), dans un solvant. Le sel formé est séparé par les méthodes
habituelles.
Ces sels font également partie de l'invention.
Lorsqu'un produit selon l'invention présente au moins une fonction basique
libre, des sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être préparés par
réaction entre 'ledit produit et un acide minéral ou organique. Des sels
pharmaceutiquement acceptables incluent les chlorures, nitrates, sulfates,
hydrogénosulfates, pyrosulfates, bisulfates, sulfites, bisulfites, phosphates,
monohydrogénophosphates, dihydrogénophosphates, métaphosphates,
pyrophosphates, acétates, propionates, acrylates, 4-hydroxybutyrates,
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caprylates, caproates, décanoates, oxalates, malonates, succinates,
glutarates, adïpates, pimélates, maléates, fumarates, citrates, tartrates,
lactates, phénylacétates, mandélates, sébacates, subérates, benzoates,
phtalates, méthanesulfônates, propanesulfonates, xylènesuifonates,
salicylates, cinnamates, glutamates, aspartates, glucuronates,
galacturonates.
Lorsqu'un produit selon l'invention présente au moins une fonction acide
libre,
des sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être préparés par
réaction entre ledit produit et une base minérale ou organique. Des bases
pharmaceutiquement acceptables incluent des hydroxydes de cations de
métaux alcalins ou alcalino-terreux tels que Li, Na, K, Mg, Ca, des composés
aminés basiques tels qu'ammoniac, arginine, histidine, pipéridine,
morpholine, pipérazine, triéthylamine.
Les produits selon l'invention qui sont préparés sous forme de sels,
notamment de chlorhydrate, peuvent être désalifiés par action d'une base
organique ou minérale selon des techniques connues.
L'invention est également décrite par les exemples suivants, donnés à titre
d'illustration de l'invention.
Les analyses LC/MS ont été réalisées sur un appareil Micromass modèle
LCT relié à un appareil HP 1100. L'abondance des produits aété mesurée à
l'aide d'un détecteur à barrette de diodes HP G1315A sur une gamme d'onde
de 200-600 nm et un détecteur à dispersion de lumière Sedex 65.
L'acquisition des spectres de masses Mass spectra a été réalisée sur une
gamme de 180 à 800. Les données ont été analysées en utilisant le logiciel
Micromass MassLynx. La séparation a été effectuée sur une colonne Hypersil
BDS C18, 3 pm (50 x 4.6 mm), en éluant par un gradient linéaire de 5 à 90%
d'acétonitrile contenant 0,05% (v/v) d'acide trifluoroacétique (TFA) dans
l'eau
contenant 0,05% (v/v) TFA en 3,5 mn à un débit de 1 mL/mn. Le temps total
d'analyse, incluant la période de rééquilibration de la colonne, est de 7 mn.
Les spectres MS ont été réalisés en électrospray (ES+) sur un appareil
Platform I1 (Micromass). Les principaux ions observés sont décrits.
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Les points de fusion ont été mesurés en capillaire, sur un appareil Mettier
FP62, gamme 30 C à 300 C, montée de 2 C par minute.
Purification par LC/MS:
Les produits peuvent être purifiés par LC/MS en utilisant un système Waters
FractionsLynx composé d'une pompe à gradient Waters modèle 600, d'une
pompe de régénération Waters modèle 515, d'une pompe de dilution Waters
Reagent Manager, d'un auto-injecteur Waters modèle 2700, de deux vannes
Rheodyne modèle LabPro, d'un détecteur à barrette de diodes Waters
modèle 996, d'un spectromètre -de masse Waters modèle ZMD et d'un
collecteur de fractions Gilson modèle 204. Le système était controlé par le
logiciel Waters FractionLynx. La séparation a été effectuée alternativement
sur deux colonnes Waters Symmetry (C18, 5pM, 19x50 mm, référence
catalogue 186000210), une colonne étant en cours de régénération par un
mélange eau/acétonitrile 95/5 (v/v) contenant 0,07 % (v/v) d'acide
trifluoroacétique, pendant que l'autre colonne était en cours de séparation.
L'élution des colonnes a été effectuée en utilisant un gradient linéaire de 5
à_
95 % d'acétonitrile contenant 0,07 % (v/v) d'acide trifluoroacétique dans
l'eau
contenant 0,07 %(v/v) d'acide trifluoroacétique, à un débit de 10 mL/mn. A la
sortie de la colonne de séparation, un millième de l'effluent est séparé par
un
LC Packing Accurate, dilué à l'alcool méthylique à un débit de 0,5 mL/mn et
envoyé vers les détecteurs, à raison de 75 % vers le détecteur à barrette de
diodes, et les 25 % restants vers le spectromètre de masse. Le reste de
l'effluent (999/1000) est envoyé vers le collecteur de fractions oü le flux
est
éliminé tant que la masse du produit attendu n'est pas détectée par le
logiciel
FractionLynx. Les formules moléculaires des produits attendus sont fournies
au logiciel FractionLynx qui déclenche la collecte du produit quand le signal
de masse détecté correspond à l'ion [M+H]+ et/ou au [M+Na]+. Dans certains
cas, dépendant des résultats de LC/MS analytique, quand un ion intense
correspondant à[M+2H]++ a été détecté, la valeur correspondant à la moitié
de la masse moléculaire calculée (MW/2) est aussi fournie au logiciel
FractionLynx. Dans ces conditions, la collecte est aussi déclenchée quand le
signal de masse de l'ion [M+2H]++ et/ou [M+Na+H]++ sont détectés. Les
produits ont été collectés en tube de verre tarés. Après collecte, les
solvants
ont été évaporés, dans un évaporateur centrifuge Savant AES 2000 ou
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Genévac HT8 et les masses de produits ont été déterminées par pesée des
tubes après évaporation des solvants.
Exemple 1
Chlorhydrate de 1-[4-(3-Amino-1 H-indazol-6-yl)-phényt]-3-(2-fluoro-5-
trifluorométhyl-phényl)-urée
NH2
CF3 1~ N CIH
O H
\ I ~ I /
N N
H H
F
Le chlorhydrate de 1-[4-(3-Amino-fluoro-1H-indazol-6-yi)-phényi]-3-(2-fluoro-
5-trifluorométhyl-phényi)-urée est obtenu par hydrolyse à l'acide
chlorhydrique à 37% (4,2 mL) dans l'éthanol au reflux pendant 24 heures de
0,4 g de 1-(4-{3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-
(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée. Le mélange réactionnel est concentré
sous pression réduite pour donner un résidu qui est agité avec 10 mL
d'acétonitrile puis recristailisé dans 7 mL de méthanol à chaud. Après
filtration et séchage sous vide, 70 mg de chlorhydrate de 1-[4-(3-Amino-lH-
indazol-6-yl)-phényl]-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée, dont les
caractéristiques sont les suivantes, sont obtenus:
Spectre IR (KBr) : 3413; 1656; 1550; 1442; 1340; 1117 & 816 cm"'
Spectre de R.M.N. 1 H(400 MHz, (CD3)ZSO, ô en ppm) : De 7,38 à 7,45 (m,
2H) ; de 7,49 à 7,56 (m, 2H) ; 7,60 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,70 (d large,
J
= 8,5 Hz, 2H) ; 7,90 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 8,65 (dd large, J = 2,5 et 7,5 Hz,
1 H)-; 8,98 (d large, J = 2,0 Hz, 1 H) ; 9,42 (s, 1 H) .
Spectre MS (ES+) : m/z = 430 [MH"]
1-(4-{3-[(Thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-fluoro-
5-firifluorométhyl-phényl)-urée.
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A une solution de 1,72 g de chlorhydrate de 6-(4-amino-phényl)-3-[(thiophèn-
3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazole, 0,65 mL de triéthylamine dans 7O mL de
tétrahydrofurane sont ajoutés lentement 0,67 mL de 2-fluoro-5-
trifluorométhylphénylisocyanate sous atmosphère d'argon. Le mélange
5 réactionnel est agité 3,5 heures à 24 C puis concentré sous pression
réduite.
Le résidu est purifié par flash-chromatographie sur colonne de silice (60 ; 35-
70 pM), en éluant par un mélange dichlorométhane, méthanol (97/3 en
volumes) pour donner 0,4 g de 1-(4-{3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-
indazoi-6-yi}-phényl)-3-(2-fluoro-5-firifluorométhyl-phényl)-urée dont les
10 caractéristiques sont les suivantes:
Spectre MS (ES+) : m/z=540 [MH+]
Chlorhydrate de 6-(4-amino-phényl)-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-
indazole
A une solution de 4,2 g de 6-(4-terbutoxy-carbonylamino-phényl)-1-[3-
15 (thiophèn-3-yl)-carbonylamino]- 1 H-indazole dans 30 mL de méthanol sont
ajoutés 12 mL de dioxane chlorhydrique 4N. Le mélange réactionnel est agité
pendant 14 heures à une température voisine de 20 C, puis est concentré
sous pression réduite. Le résidu solide est agité avec 25 mL d'éther
isopropylique, filtré et essoré pour donner 3,45 g de chlorhydrate de 6-(4-
20 amino-phényl)-1-[3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazole, dont les
caractéristiques sont les suivantes:
Spêctre MS (ES+) : m/z=335 [MH+]
6-(4-Terbutoxy-carbonylamino-phényl)-1-[3-(thiophèn-3-yl)-carbonyiamino]-
1 H-indazole
A une solution de 6 g de 6-bromo-l-[(thiophen-3-yl)carbonyl]-3-[(thiophen-3-
yf)carbonylamino]-indazole dans 350 mL de dioxane sont ajoutés, 4,93 g
d'acide 4-(terbutyloxycarbonylamino)-phényl boronique. Une solution de 4,12
g de carbonate de sodium dans 90 mL d'eau est ajoutée puis 1,93 g de
tétrakis triphényiphosphine palladium. Le mélange réactionnel est agité 4
heures à 90 C puis jetté dans 120 mL d'eau distillée. Après extraction à
l'acétate d'éthyle puis lavage avec une solution saturée de chlorure de
sodium, la phase organique est concentrée sous pression réduite pour
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donner 13,18 g d'un solide qui est purifié par flash-chromatographie sur
colonne de silice (60 ; 35-70 pM), en éluant par un mélange cyclohexane,
acétate d'éthyle (60/40 en volumes) pour donner 4,2 g de 6-(4-terbutoxy-
car6onylamino-phényl)-1-[3-(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazole, dont
les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre MS (ES+) : m/z=435 [MH+]
6-Bromo-1-[(thiophen-2-yl)carbonyl]-3-[(thiophen-2-yl)carbonylamino]-
indazole
A une solution de 10 g de 6-bromo-3-amino-1 H-indazole dans 250 mL de
pyridine, sont ajoutés 13,8 g de chlorure de l'acide thiophène-3-carboxylique.
Le mélange réactionnel est agité sous atmosphère d'argon pendant
16 heures à une température proche de 25 C, puis jeté dans 400 mL d'eau.
La suspension est alors filtrée, lavée avéc 2 x 80 mL d'eaù, essorée et'
séchée pour donner 19,27 g de 6-bromo-l-[(thiophen-2-yl)carbonyl]-3-
[(thiophen-2-yi)carbonylamino]-indazole dont les caractéristiques sont les
suivante :
Spectre MS (ES+) : m/z=433 [MH+]
6-Bromo-3-amino-1 H-indazole
A une solution de 10 g de 4-bromo-2-fluoro-benzonitrile dans 300 mL
d'éthanol sont ajoutés 7,29 mL d'hydrate d'hydrazine. Le mélange réactionnel
est agité pendant 22 heures au reflux puis concentré sous pression réduite.
Le résidu obtenu est agité pendant 30 minutes dans 200 mL d'eau distillée.
Le solide en suspension est filtré, lavé à l'eau et essoré. Après séchage sous
vide, 10 g de 6-bromo-3-amino-1 H-indazole sont obtenus dont les
caractéristiques sont les suivantes :
Spectre MS (ES}) : m/z=213 [MH}]
Point de fusion : 249 C
Exemple 2
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Chlorhydrate de 1-[4-(3-Amino-1 H-indazol-6-yl)-phényl]-2,3-
dichlorobenzènesulfonamide
NH2
I ~ ~ N CIH
N
O~~ O H
S', N
H
Cl
CI
Le chlorhydrate de 1-[4-(3-Amino-1 H-indazol-6-yl)-phényl]-2,3-
dichlorobenzènesuifonamide est obtenu par hydrolyse à l'acide chlorhydrique
à 37% (5 -mL) dans 40 mL d'éthanol au -reflux pendant 24 heures de .0,54 g
d'acide 3-thiophène carboxylique {6-[4-(2,3-dichloro-benzenesulfonylamino)-
phenyl]-1 H-indazol-3-yl}-amide. Le mélange réactionnel est concentré sous
pression réduite pour donner un résidu qui est agité avec 10 mL
d'acétonitrile.
Après filtration et lavage avec 10 mL d'éther isopropylique, 0,46 g de
chlorhydrate de 1-[4-(3-Amino-1H-indazol-6-yl)-phényl]-2,3-
dichlorobenzënesuifonamide sont obtenus, dont les caractéristiques sont les
suivantes,:
Spectre IR (KBr) : 3426; 3134; 2902; 2711; 1659; 1404; 1164; 924; 705 & 593
cm-'
Spectre de R.M.N. 1 H(400 MHz, (CD3)2S0, S en ppm) : 7,21 (d large, J =
9,0 Hz, 2H) ; 7,29 (d large, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,44 (s large, 1 H) ; 7,58 (t,
J =
7,5 Hz, 1 H) ; 7,62 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,85 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ;
7,93
(dd, J = 1,5 et 7,5 Hz, 1 H) ; 8,09 (dd, J = 1,5 et 7,5 Hz, 1 H) ; 10,95 (s
large,
1 H) ; de 11,9 à 12,4 (m très étalé, 1 H) .
Spectre MS (ES+) : m/z = 433 [MH+]
Exemple 3
Acide 3-thiophène carboxylique {6-[4-(2,3-dichloro-
benzenesuifonylamino)-phenyl]-1 H-indazol-3-yl}-amide
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O
H
N
N S
O~, ~O I \ H
S~N ~
H
cl
ci
A une. solution de 1,72 g de chlorhydrate de 6-(4-amino-phényl)-3-[(thiophèn-
3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazole dans 69 mL de pyridine sont ajouté à 0 C
une solution de 1,14 g de chlorure de 2,3-dichlorobenzènesuifonyle dans 23
mL de dichlorométhane. Le mélange réactionnel est agité pendant 3 heures à
une température voisine de 20 C, puis concentré sous pression réduite. Le
résidu sec est dilué dans l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau puis lavé avec une
solution saturée de chlorure de sodium et concentré sous.pression réduite. La
meringue obtenue est purifiée par flash-chromatographie en éluant par un
mélange dichlorométhane, méthanol, acétonitrile (96/2/2 en volumes) pour
donner 0,69 g d'acide 3-thiophène carboxylique {6-[4-(2,3-dichloro-
benzenesulfonylamino)-phenyl]-1 H-indazol-3-yl}-amide dont les
caractéristiques sont les suivantes:
Spectre IR (KBr) : 3388; 3274; .3107; 1656; 1528; 1404; 1268; 1167; 7.37; 705
& 598 cm-'
Spectre de R.M.N. 1 H(400 MHz, (CD3)2S0, ô en ppm) : 7,20 (d large, J
8,5 Hz, 2H) ; 7,29 (dd, J 2,5 et 9,0 Hz, 1 H) ; de 7,52 à 7,59 (m, 2H) ; 7,62
(d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,67 (dd, J = 2,5 et 5,0 Hz, 1H) ; 7,71 (dd, J =
1,5
et 5,0 Hz, 1 H) ; 7,78 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 7,92 (dd, J = 1,5 et 7,5 Hz, 1
H) ;
8,09 (dd, J = 1,5 et 7,5 Hz, 1 H) ; 8,44 (dd, J = 1,5 et 2,5 Hz, 1 H) ; 10,65
(s
large, 1 H) ; 10,9 (m étalé, 1 H) ; 12,8 (s large, 1 H).
Point de fusion : 196 C
Spectre MS (EI) : m/z = 542 [M+ ]
Exemple 4
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Chlorhydrate de 6-(4-amino-phényl)-7-fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-
carbonylamino]-1 H-indazole
O
H
N
Q
N CI
H ~ ~ H
H2N / F
A une solution de 0,63 g de 6-(4-terbutoxy-carbonylamino-phényl)-1-[3-
(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-7-fluoro-1 H-indazole dans 20 mL de méthanol
sont ajoutés 1,74 mL de dioxanne chlorhydrique 4N. Le mélange réactionnel
est agité pendant 14 heures à une température voisine de 20 C, puis est
concentré sous pression réduite. Le résidu solide est agité avec 10 mL
d'éther isopropylique, filtré et essoré pour donner 0,52 g de chlorhydrate de
6-(4-amino-phényl)-1-[3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-7-fluoro-1 H-indazole,
dont les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre IR (KBr)
2932; 1728; 1607; 1519; 1504; 1432; 1380; 1288; 1194; 1091; 914; 758 et
701 cm"'
Spectre de R.M.N. IH(400 MHz, (CD3)2S0, b en ppm) : 7,18 (dd, J = 7,5 et .
8,5 Hz, 1 H) ; 7,33 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; de 7,62 à 7,76 (m, 5H) ; 8,49
(m,
1 H) ; 10,9 (s, 1 H) ; de 13,3 à 13,6 (m très étalé, 1 H)
6-(4-Terbutoxy-carbonylamino-phényl)-1-[3-(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-7-
ffuoro-1 H -indazole
A unë solution de 0,54 g de 6-(4-terbutoxy-carbonylamino-phényl)-3-amino-7- -
fluoro-1 H-indazole dans 10 mL de pyridine sont ajoutés à 15 C, 0,23 g de 3-
chlorocarbonyithiophène. Le mélange réactionnel est agité 12 heures à une
température voisine de 20 C puis dilué dans 50 mL de dichlorométhane et
lavé avec 4 x 50 mL d'eau distillée. La phase organique est alors concentrée
sous pression réduite. Le résidu solide obtenu est agité avec 10 mL d'ether
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WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
isopropylique, filtré et essoré pour donner 0,63 g de 6-(4-amino-phényi)-1-[3-
[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-7-fluoro-1 H-indazole dont les
caractéristiques
sont les suivantes:
Spectre IR (KBr) : 3248; 2977; 1723; 1658; 1591; 1533; 1342; 1238; 1160;
5 1052 et 805 cm ' .
Spectre de R.M.N. 1H (400 MHz, (CD3)2S0, b en ppm) : 1,52 (s, 9H) ; 7,17
(dd, J = 6,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,56 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; de 7,59 à 7,65
(m,
3H) ; 7,70 (dd, J = 3,0 et 5,0 Hz, 1 H) ; 7,74 (dd, J = 1,5 et 5,0 Hz, 1 H) ;
8,50
(dd, J = 1,5 et 3,0 Hz, 1 H) ; 9,52 (s, 1 H) ; 10,8 (s, 1 H) ; 13,4 (s large,
1 H)
10 3-Amino-7-fluoro-6-(4-terbutoxy-carbonylamino-phényl)-1 H-indazole
A une solution de 0,8 g de 2,3-dif(uoro-4-(4-terbutoxycarbonylamino-phényl)-
benzonitrile dans 25 mL d'éthanol absolu sont ajoutés 0,35 mL -d'hydrate
d'hydrazine. Le mélange réactionnel est agité 19 heures au reflux du solvant
puis concentré sous pression réduite. Le résidu solide est agité avec 25 mL
15 d'eaû distillée, filtré et lavé avec 2x5 mL de dichlorométhane. Après
essorage, 0,54 g de 3-Amino-7-fluoro-6-(4-terbutoxy-carbonylamino-phényl)-
1 H-indazole sont obtenus, dont les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre IR (KBr) : 3422; 3374; 2981; 1732; 1612; 1530; 1368; 1222; 1159;
1050; 844 et 806 cm '
20 Spectre de R.M.N. 1H (400 MHz, (CD3)2S0, b en ppm) : 1,52 (s, 9H) ; 5,50
(s, 2H) ; 6,98 (dd, J = 6,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; de 7,48 à 7,61 (m, 5H) ; 9,48
(s,
1 H) ; 11,9 (s large, 1 H)
2,3-Difluoro-4-(4-terbutoxycarbonylamino-phényl)-benzonitrile
A une solution de 2,3-difluoro-4-trifluorométhylsulfonyloxy-benzonitrile dans
25 60 mL de dioxanne sont ajoutés, sous atmosphère d'argon, 1,24 g d'acide 4-
(terbutyloxycarbonylamino)-phényl boronique. Une solution de 1,03 g de
carbonate de sodium dans 15 mL d'eau est ajoutée puis 0,48 g de tétrakis
triphénylphosphine palladium. Le mélange réactionnel est agité 3 heures à
90 C puis jetté dans 80 mL d'eau distillée. Après extraction à('acétate
d'éthyle puis lavage avec une solution saturée de chlorure de sodium, la
phase organique est concentrée sous pression réduite pour donner 0,8 g de
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2,3-difluoro-4-(4-terbutoxycarbonylamino-phényl)-benzonitrile, dont les
caractéristiques sont les suivantes:
Spectre IR (KBr) : 3345; 2981; 2247; 1719; 1595; 1532; 1470; 1409; 1325;
1239; 1158; 1057; 898; 825; 665 et 522 cm"'
Spectre MS (ES+) : m/z=331 [MH+]
2,3-difluoro-4-trifluorométhylsulfonyioxy-benzonitrile
A une solution de 2 g de 2,3-difluoro-4-hydroxybenzonitrile dans 20 mL de
diméthylforrnâmide 'sont ajoutés 0,43 g d'hydrure de sodium par petites
quantités. Après 10 minutes d'agitation à température ambiante, 4,84 g de N-
phényltrifluorométhanesu(fonimide sont ajoutés. Après 10 heures d'agitation à
température voisine de 20 C, le mélange réactionnel est jeté dans 100 mL
d'eau distillée et extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique. est lavée
avec une solution saturée de chlorure de sodium puis est concentrée sous
pression réduite pour donner 3,68 g d'une huile qui est purifiée par flash-
chromatographie sur colonne de silice (60 ; 35-70 pM), en éluant par un
mélange de cyclohexane, acétate d'éthyle (92/8 en volumes), 0,52 g de 2,3-
dif(uoro-4-trifluorométhylsulfonyioxy-benzonitrile sont obtenus, dont les
caractéristiques sont les suivantes:
Spectre IR (KBr) : 2245; 1497; 1442; 1232; 1138; 1035; 960; 834 et 603 cm"'
Spectre MS (ES+) : m/z=288 [MH+]
Exemple 5
Acide 3-thïophène carboxylique {6-[4-(2,3-dichloro-
benzenesulfonylamino)-7-fluorophényl]-l H-indazol-3-yl}-amide
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O
H
N
/N S
O\~ /O H
SN F
I H
CI
CI
Une solution de chlorhydrate de 6-(4-amino-phényl)-7-fluoro-3-[(thiophén-3-
yl)-carbonylamino]-1 H-indazole dans 20 mL de pyridine est ajoutée à 0 C à
une solution de 0,315 g de chlorure de 2,3-dichlorobenzènesulfonyle dans 6,5
mL de dichlorométhane. Le mélange réactionnel est agité pendant 16 heures
à une température voisine de 20 C, puis concentré sous pression réduite. Le
résidu sec est dilué dans le dichlorométhane, lavé à l'eau et avec une
solution saturée de chlorure de sodium puis concentré sous pression réduite.
La meringue obtenue est purifiée par flash-chromatographie en éluant par un
mélange dichlorométhane, méthanol, acétonitrile (96/2/2 en volumes) pour
donner 0,2 g d'acide 3-thiophène carboxylique {6-[4-(2,3-dichloro-
benzenesulfonylamino)-7-fluorophényl]-1 H-indazol-3-yl}-amide dont les
caractéristiques sont les suivantes:
Spectre IR (KBr) : 3421; 1659; 1527; 1405; 1340; 1166; 1091; 913; 739; 705
& 598 cm''
Spectre de R.M.N. 1 H(400 MHz, (CD3)2S0, b en ppm) : 7,10 (dd, J = 6,5 et
8,5 Hz, 1 H) ; 7,21 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,51 (d large, J = 8,5 Hz, 2H)
; de
7,53 à 7,62 (m, 2H) ; 7,67 (dd, J = 2,5 et 5,0 Hz, 1H) ; 7,71 (dd, J=. 1,5 et
5,0
Hz, 1 H) ; 7,92 (d large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 8,10 (dd, J = 1,5 et 7,5 Hz, 1 H)
; 8,46
(dd, J= 1,5 et 2,5 Hz, 1 H) ; 10,75 (s large, 1 H) ; 11,0 (m étalé, 1 H) ;
13,35 (s
large, 1 H) .
Spectre MS (El): m/z = 560 [M+ ]
Exemple 6
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1-(4-{7-fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-
phényl)-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée
O
N
CF3
N S
O H
NN F
H H
F
A une solution de 0,88 g de chlorhydrate de 6-(4-amino-phényl)-7-fluoro-1-[3-
[(thiophen-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazole dans 80 mL de
tétrahydrofuranne, sorit ajoutés 0,46 g de 2-fluôro-5-trifluorométhyl-phényl-
isocyanate et 0,636 mL de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité
pendant 12 heures à une température voisine de 20 C, puis concentré sous
pression réduite. Après purification par flash-chromatographie sur colonne de
silice (60 ; 35-70 pM), en éluant par un mélange de dichlorométhane,
acétonitrile, méthanol (96/2/2 en volumes), 0,51 g de 1-(4-{7-fluoro-3-
[(thiophèn-3-yl)-carbonyiamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényi)-3-(2-fluoro-5-
trifluorométhyl-phény()-urée sont obtenus, dont les caractéristiques sont les
suivantes:
Spectre IR (KBr) : 3418; 1659; 1608; 1542; 1442; 1339; 1264; 1200; 1122;
741 et614cm'
Spectre de R.M.N. 1 H(400 MHz, (CD3)2S0, ô en ppm) : 7,20 (dd, J = 7,5 et
9,0 Hz, 1 H) ; 7,42 (m, 1 H) ; 7,53 (dd, J = 9,0 et 10,5 Hz, 1 H) ; de 7,60 à
7,72
(m, 6H) ; 7,74 (dd, J = 1,0 et 5,0 Hz, 1H) ; 8,49 (dd, J = 1,0 et 3,0 Hz, 1H)
;
8,65 (dd, J = 2,5 et 7,5 Hz, 1 H) ; 9,04 (m large, 1 H) ; 9,44 (s large, 1 H)
; 10,8
(s large, 1 H) ; 13,4 (s très large, 1 H).
Exemple 7
Chlorhydrate de 1-[4-(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phényl]-3-(2-
fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée
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NH2
CF3 I \ N CIH
~
O / H
N iII ~ N F
\ I I /
H H
F
Le chlorhydrate de 1-[4-(3-Amino-7-fiuoro-1 H-indazol-6-yl)-phényl]-3-(2-
fluoro-5-trifluorométhyi-phényl)-urée est obtenu par hydrolyse à l'acide
chlorhydrique à 37% (4,2 mL) dans l'éthanol au reflux pendant 24 heures de
la 1-(4-{7-fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-
3-
(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée. Le mélange réactionnel est concentré
sous pression réduite pour donner un résidu qui est agité avec 15 mL
d'acétonitrile. Après filtration et séchage sous vide, 0,38 g de chlorhydrate
de
1-[4-(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phényl]-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-
phényl)-urée, dont les caractéristiques sont les suivantes, sont obtenus:
Spectre IR (KBr) : 3327; 3168; 1653; 1601; 1544; 1443; 1342; 1322; 1187;
1117; 1070; 809 et 615 cm"'
Spectre de R.M.N. 1 H (400 MHz, (CD3)2S0, b en ppm) : 7,08 (dd, J = 6,5 et
8,0 Hz, 1 H) ; 7,42 (m, 1 H) ; de 7,49 à 7,65 (m, 6H) ; 8,65 (dd, J = 2,5 et
7,0
Hz, 1 H) ; 8,99 (d, J = 3,5 Hz, 1 H) ; 9,40 (s, 1 H) ; de 11,8 à 12,5 (m très
étalé),
1 H.
Exemple 8
Chlorhydrate de 1-[4-(3-amino-1 H-indazot-6-yt)-7-fluorophényl]-2,3-
dichlorobenzènesulfonamide
CA 02567744 2006-11-22
WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
NH2 CIH
cHN
'
O~~ s0 I \ H
S~1 N F
I H
CI
CI
Le chlorhydrate de 1-[4-(3-Amino-1 H-indazol-6-yl)-7-fluorophényl]-2,3-
dichlorobenzènesulfonamide est obtenu par hydrolyse à l'acide chlorhydrique
à 37% (1,36 mL) dans 11 mL d'éthanol au reflux pendant 16 heures de 0,15 g
5 d'acide 3-thiophène carboxylique {6-[4-(2,3-dichloro-benzenesulfonylamino)-
7-fluorophenyl]-1 H-indazol-3-yl}-amide. Le mélange réactionnel est concentré
sous pression réduite pour donner un " résidu qui est agité avec 5 mL
d'acétonitrile. Après filtration, 90 mg de chlorhydrate de 1-[4-(3-Amino-1H-
indazol-6-yl)-7-fluorophényl]-2,3-dichlorobenzènesuifonamide sont obtenus,
10 dont les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre IR (KBr) : 3435; 1656; 1507; 1404; 1164; 1139; 912; 704 & 593 cm-'
Spectre de R.M.N. 1 H(400 MHz, (CD3)2SO, b en ppm) : 7,00 (dd, J= 6,5
et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,22 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,50 (d (arge, J = 8,5 Hz,
2H) ; de 7,54 à 7,62 (m, 2H) ; 7,94 (dd, J = 1,5 et 7,5 Hz, 1 H) ; 8,10 (dd, J
15 = 1,5 et 7,5 Hz, 1 H) ; 11,0 (s large, 1 H).
Spectre MS (El): m/z = 450 [M+ ]
Exemple 9
1-(4-{4,5, 7-Trifl uo ro-3-[(th iop hè n-3-yl )-ca rbo nyla m i no]-1 H-i
ndazol-6-yl}-
phényl)-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée
CA 02567744 2006-11-22
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O
F N
CF3 F
p N s
/ I I \ H
NN F
H
F
A une solution de 0,175 g de chlorhydrate de 6-(4-amino-phényl)-4,5,7-
trifluoro-l-[3-[(thiophen-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazole dans 10 mL de
tétrahydrofuranne, sont ajoutés 84,5 mg de 2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl-
isocyanate et 58 L de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité
pendant 16 heures à une température voisine de 20 C, puis concentré sous
pression. -réduite. Le résidu obtenu est.agité dans 15 mL d'acétate d'éthyle
puis filtré et éssoré pour donner 29 mg de 1-(4-{4,5,7-trifluoro-3-[(thiophèn-
3-
yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-
phényl)-urée dont les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre IR (KBr)
3288; 1686; 1635; 1535; 1440; 1319; 1126 & 992 cm-'
Spectre de R.M.N. 1 H(400 MHz, (CD3)2S0, S en ppm) : 7,41 (m, 1 H) ; de
7,48 à 7,57 (m, 3H) ; de 7,60 à 7,70 (m, 4H) ; 8,41 (s large, 1 H) ; 8,63 (d
large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 9,01 (m large, 1 H) ; 9,43 (s Iarge, 1 H) ; 10,6 (m
étalé,
1 H) ; de 13,6 à 14,0 (m très étalé, 1 H)
Spectre MS (ES*) : m/z = 594 [MH+]
Chlorhydrate de 6-(4-amino-phényl)-4,5,7-trifluoro-1-[3-[(thiophen-3-yl)-
carbonylamino]-1 H-indazole
A une solution de 0,65 g de 6-(4-terbutoxy-carbonylamino-phényl)-1-[3-
(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-4,5,7-trifluoro-1 H-indazole dans 10 mL de
méthanol sont ajoutés 1,66 mL de dioxanne chlorhydrique 4N. Le mélange
réactionnel est agité pendant 48 heures à une température voisine de 20 C,
puis filtré et essoré pour donner 0,21 g de chlorhydrate de 6-(4-amino-
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phényl)-1-[3-[(thiophèn-3- yl)-carbonylamino]-4,5,7-trifluoro-1 H-indazole,
dont
les caractéristiques sont les suivantes :
Spectre MS (ES') : m/z=389 [MH']
6-(4-Terbutoxy-carbonylamino-phényl)-1-[3-(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-
4,5,7-trifluoro-1 H-indazole
A une solution de 0,5 g de 6-bromo-l-[3-[(thiophen-3-yl)carbonylamino]-
4,5,7-trifluoro-1-H-indazole dans 40 mL de dioxane sont ajoutés, 0,31 g
- d'acide 4-(terbutyloxycarbonylamino)-phényl boronique. Une solution de 0,42
g de carbonate de sodium dans 5 mL d'eau est ajoutée puis 0,184 g de
tétrakis triphénylphosphine palladium. Le mélange réactionnel est agité 42
heures à 90 C puis versé dans 40 mL d'eau distillée. Après extraction au
dichlorométhane puis lavage avec une solution saturée de chlorure de
sodium, la phase organique est côncentrée sous pression rédûite pôur
donner un solide qui est purifié par flash-chromatographie sur colonne de
silice (60 ; 35-70 pM), en éluant par un mélange cyclohexane, acétate
d'éthyle (50/50 en volumes) pour donner 0,65 g de 6-(4-terbutoxy-
carbonyiamino-phényi)-1-[3-(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-4,5,7-trifluoro-1 H-
indazole, dont les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre MS (ES+) : m/z=489 [MH+]
6-Bromo-l-[3-[(thiophen-3-yl)carbonylamino]- 4,5,7-trifluoro-1-H-indazo(e
Une solution de 1,8 g de 6-bromo-l-[(thiophen-3-yl)carbonyl]-3-[(thiophen-3-
yl)carbonylamino]-4,5,7-trifiuoroindazole dans 130 mL de dioxane est ajoutée
à 1,1 g de carbonate de sodium en solution dans 45 mL d'eau. Le mélange
réactionnel est chauffé 4 heures à 90 C puis concenté sous pression réduite
pour donner un solide qui est purifié par flash-chromatographie sur colonne
de silice (60 ; 35-70 pM), en éluant par un mélange cyclohexane, acétate
d'éthyle (85/15 en volumes) pour donner 0,32 g de 6-bromo-1-[3-[(thiophen-
3-yl)carbonylamino]- 4,5,7-trifluoro-1-H-indazole, dont les caractéristiques
sont les suivantes:
Spectre MS (ES{) : m/z=377 [MH{]
CA 02567744 2006-11-22
WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
33
6-Bromo-1-[(thiophen-3-yl)carbonyl]-3-[(thiophen-3-yl)carbonylamino]-4,5,7-
trifluoroindazole
A une solution de 3 g de 6-bromo-3-amino-4,5,7-1 H-indazole dans 60 mL de
pyridine, sont ajoutés 3,3 g de chlorure de l'acide thiophène-3-carboxylique.
Le mélange réactionnel est agité sous atmosphère d'argon pendant 16
heures à une température proche de 25 C, puis jeté dans 120 mL d'eau. La
suspension est lavée avec 2 x 100 mL de dichiorométhane puis filtrée,
essorée et séchée pour donner 1,85 g de 6-bromo-1-[(thiophen-3-
yl)carbonyl]-3-[(thiophen-3-yl)carbonylamino]-4,5,7-trifluoroindazole dont les
caractéristiques sont les suivantes :
Spectre MS (ES+) : m/z=487 [MH+]
Le 6-Bromo-3-amino-4,5,7-1 H-indazole
A une solution de 5 g de 4-bromo-2,3,5,6-tétrafluoro-benzonitrile dans 90 mL
d'éthanol sont ajoutés 9,7 mL d'hydrate d'hydrazine. Le mélange réactionnel
est agité pendant 17 heures au reflux puis concentré sous pression réduite.
Le résidu obtenu est agité pendant 30 minutes dans 80 mL d'eau distillée. Le
solide en suspension est filtré, lavé à l'eau et essoré puis trituré dans 200
mL
d'éther éthylique et filtré pour donner, 1,03 g de 6-bromo-3-amino-4,5,7-1H-
indazole dont les caractéristiques sont les suivantes :
Spectre MS (ES+) : m/z=267 [MH{]
Exemple 10
1-(4-{3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-
fiuoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée
O
H
N
CF3
N S
O H
NN 1 ~
H H
F
CA 02567744 2006-11-22
WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
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En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 1, le 1-(4-{3-
[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-fluoro-5-
trifluorométhyl-phényl)-urée est obtenu sous la forme d'un solide jaune dont
les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre IR (KBr) : 3406; 1656; 1536; 1441; 1339; 1265; 1118 & 808 cm"'
Spectre de R.M.N. 1H (400 MHz, (CD3)2S0, ô en ppm) : 7,39 (dd, J = 1,5 et
9,0 Hz, 1 H) ; 7,41 (m partiellement masqué, 1 H) ; 7,51 (dd, J = 8,5 et 11,0
Hz, 1 H) ; de 7,55 à 7,78 (m, 7H) ; 7,71 (d, J = 9,0 Hz, 1 H) ; 8,47 (dd, J =
1,5
et 3,0 Hz, 1 H) ; 8,63 (dd, J= 2,5 et 7,5 Hz, 1 H) ; 8,98 (m étalé, 1 H) ;
9,35 (m
étalé, 1 H) ; 10,7 (s large, 1 H) ; 12,8 (m étalé, 1 H) .
Spectre MS (ES+) : m/z = 540 [MH+]
Exenypie 11
1-(4-{7-fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-2-
fluorophényl)-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée
O
H /
N
F F
F S
N
OI H
\ + J~ / F
N N
H H
F F
A une solution de 0,610 g de chlorhydrate (7-fluoro-6-{3-fluoro-4-
aminophenyl}-1 H-indazol-3-yl)-thiophene-3-carboxamide dans 30 mL -de
tétrahydrofuranne, sont ajoutés 0.3g de 2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl-
isocyanate et 0,211 mL de triéthylamine. Le mélange réactionnel est agité
pendant 12 heures à une température voisine de 20 C, puis concentré sous
pression réduite. Après purification par flash-chromatographie sur colonne de
silice en éluant par un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle (50/50
en volumes) on obtient après évaporation des solvants 0.287g d'une poudre
jaune qui est recristallisée dans l'acétate d'éthyle. On obtient 0.154 g de 1-
CA 02567744 2006-11-22
WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
(4-{7-fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-2-
fluorophényl)-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényi)-urée sous la forme d'un
solide blanc dont les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre RMN 1 H à 300 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DPX-300
5 avec les déplacements chimiques (S en ppm) - dans le solvant
diméthylsuifoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
7,21 (dd, J 6,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,41 (m, 1 H) ; 7,50 (t, J 9,0 Hz,.1 H) ;
7,59
(d large, J 12,0 Hz, 1 H); 7,63 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,69 (dd, J = 2,5 et
5,0
Hz, 1 H) ; 7,72 (dd, J = 1,5 et 5,0 Hz, 1 H) ; 8,32 (t, J = 8,5 Hz, 1 H) ;
8,48 (m.
10 large, 1 H) ; 8,67 (dd, J = 2,5 et 7,5 Hz, 1 H) ; 9,34 (m étalé, 1 H) ;
9,46 (m
étalé, 1 H) ; 10,8 (m très étalé, 1 H) ; 13,45 (m très étalé, 1 H).
Spectre IR (KBr) : 3435; 1706; 1547; 1442; 1341; 1265; 1200; 1127 & 822
Cm1
Spectre MS (ES): m/z = 576 [MH+]
15 (7-fluoro-6-{3-f(uoro-4-aminophenyl}-1 H-indazol-3-yl)-thiophene-3-
carboxamide :
A une solution de 0.99 g de (7-fluoro-6-{3-fluoro-4-tert-
butyloxycarbonylaminophenyl}-1 H-indazol-3-yl)-thiophene-3-
carboxamide dans 30 mL de méthanol on ajoute à température ambiante
20 2.63 mL de solution 4N d'acide chlorhydrique dans le dioxane. Le mélange
réactionnel est chauffé 4h à 40 C, puis concentré à sec sous pression
réduite. Le solide obtenu est trituré dans l'éther isopropylique, filtré.
Après
sêchage sous vide on obtient 0.99g (7-fluoro-6-{3-fluoro-4-aminophenyl}-1 H-
indazol-3-yl)-thiophene-3-carboxamide sous la forme d'un solide jaune dont
25 les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre MS (El): m/z=370 [M+-]
(7-fluoro-6-{3-fluoro-4-tert-butyloxycarbonylaminophenyl}-1 H-indazol-3-yl)-
thiophene-3-carboxamide :
A une solution de 1.5 g de [4-(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-2-fluoro-
30 phenyl]-carba mate de tertio-butyle dans 34 mL de pyridine on ajoute à 15 C
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0.61g de chlorure de thiophène-3-carbonyle. Le mélange réactionnel est agité
18h, puis versé sur de l'eau distillée, extrait par de l'acétate d'éthyle. La
phase organique est lavée plusieurs fois à l'eau distillée, puis par une
solution
aqueuse saturée en chlorure de.sodium, séchée sur sulfate de magnésium,
puis concentré à sec sous pression réduite. On obtient 1.58 g de (7-fluoro-6-
{3-fluoro-4-tert-butyioxycarbonylaminophenyl}-1 H-indazol-3-yl)-thiophene-3-
carboxamide sous la forme d'un solide crème dont les caractéristiques sont
les suivantes:
Spectre MS (El): m/z=470 [M+-]
[4-(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-2-fluoro-phenyl]-carbamate de tertio-
butyle :
A une solution de 1.49 g de (4'-Cyano-3,2',3'-trifluoro-biphenyl-4-yl)-
carbamâte de tertio-butylé dans 40 mL d'éthanol ôn ajoute 2.14 g d'hydrate
d'hydrazine, puis on chauffe au reflux pendant 18h. Le milieu réactionnel est
concentré à sec sous pression réduite, repris par de l'eau distillée, le
solide
ainsi obtenu est filtré puis séché. On obtient 1.5 g de [4-(3-Amino-7-fluoro-1
H-
indazol-6-yl)-2-fluoro-phenyl]-carbamate de tertio-butyle sous la forme d'un
solide blanc dont les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre MS (EI) : m/z=360 [M+-]
(4'-Cyano-3,2',3'-trifluoro-biphenyl-4-yl)-carbamate de tertio-butyle:
A une solution de 3.75 g de trifluoro-méthanesulfonate de 4-cyano-2,3-
difluoro-phényle dans 220 mL de dioxane on ajoute à température ambiante
5 g d'acide N-Boc 4-Amino-3-fluorophénylboronique, 3.87 g de carbonate de
sodium en solution dans 56 mL d'eau distillée, puis 1.81 g de tétrakis
triphénylphosphine palladium. Le mélange réactionnel est chauffé 3 h au
reflux, puis versé après refroidissement sur de l'eau distillée. Ce mélange
est
extrait par de l'acétate d'éthyle, la phase organique est décantée, lavée
plusieurs fois à l'eau distillée, puis par une solution aqueuse saturée en
chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium, puis concentré à sec
sous pression réduite. Le solide obtenu est chromatographié sur colonne de
. silice (éluant cyclohexane / acétate d'éthyle 90/10 en volumes). Après
évaporation à sec sous pression réduite des fractions contenant l'attendu, on
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obtient 0.75 g de (4'-Cyano-3,2',3'-trifluoro-biphenyl-4-yl)-carbamate de
tertiô-
butyle sous la forme d'un solide rose pâle dont les caractéristiques sont les
suivantes:
Spectre MS (EI) : m/z=348 [M+*]
Trifluoro-méthanesulfonate de 4-cyano-2,3-difluoro-phényle:
A une solution de 5 g de 2,3-difluoro-4-hydroxybenzonitrile dans 60 mL de
diméthylformamide on ajoute à température ambiante 1.05 g d'hydrure de
sodium à 75%, puis 12.09 g de N-phényl trifluorométhane suifonimide. Le
mélange réactionnel est agité 18 h à température ambiante, puis versé sur
de l'eau distillée. Ce mélange est extrait par de l'acétate d'éthyle, la phase
organique est décantée, lavée plusieurs fois à l'eau distillée, puis par une
solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchée sur sulfate de
magnésium, puis concentré à sec sous pression réduité. Le solide obténû est
chromatographié sur colonne de silice (éluant cyclohexane / acétate d'éthyle
80/20 en volumes). Après évaporation à sec sous pression réduite des
fractions contenant l'attendu, on obtient 3.34 g de Trifluoro-méthanesulfonate
de 4-cyano-2,3-difluoro-phényle sous la forme d'une huile mobile dont les
caractéristiques sont les suivantes:
Spectre MS (E!) : m/z=287 [M+-]
Exemple 12
1-(4-{7-Fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-
phényl)-3-phényl-urée
O
H /
N
N S
N
O
1 F H
N N
H H
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En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 6, on obtient la 1-(4-
{7-fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yt}-phényl)-3-phényl-
urée sous la forme d'un solide jaune dont les caractéristiques sont les
suivantes:
Spectre RMN 1 H à 300 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DPX-
300 avec les déplacements chimiques (b en ppm) - dans le solvant
diméthylsulfoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
6,99 (t large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,19 (dd, J = 6,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,30 (t
large, J
= 7,5 Hz, 2H) ; 7,49 (d large, J = 7,5 Hz, 2H) ; de 7,52 à 7,65 (m, 5H). ;
7,69
(dd, J = 3,0 et 5,0 Hz, 1 H) ; 7,72 (d large, J 5,0 Hz, 1 H) ; 8,48 (m large,
1 H) ; 8,83 (s large, 1 H) ; 8,95 (s large, 1 H) ; 10,8 (s large, 1 H) ; 13,35
(s
large, 1 H) .
Spectre IR (KBr) : 3396; 1650; 1597; 1532; 1498; 1234; 742 & 693 cm"' -
Spectre MS (ES+) : m/z = 472 [MH+]
Exemple 13
1-(4-{7-fiuoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-
phényl)-3-(5-tert-butyl-isoxazol-3-yl )-urée
0
NH
\N S
i
O N
H
ON N'J~ N F
H H
En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 6, on obtient la 1-(4-
{7-fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yi}-phényl)-3-(5-
tert-
butyl-isoxazol-3-yl)-urée sous la forme d'un solide jaune dont les
caractéristiques sont les suivantes:
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Spectre RMN *1 H à 300 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DPX-300
avec les déplacements chimiques (S en ppm) - dans le solvant
diméthylsuifoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
1,30 (s, 9H) ; 6,52 (s, 1 H) ; 7,18 (t large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; de 7,52 à
7,64 (m,
5H) ; 7,68 (dd, J = 3,0 et 5,0 Hz, 1 H) ; 7,72 (d large, J = 5,0 Hz, 1 H) ;
8,48 (m
large, 1 H) ; 9,19 (m étalé, 1 H) ; 9,72 (m étalé, 1 H) ; 10,8 (s large, 1 H)
; 13,35
(m étalé, 1 H).
Spectre IR (KBr) : 3434; 1607; 1531; 1277; 803 & 741 cm-'
Spectre MS (ES+) : m/z = 519 [MH+]
Exemple 14
1-(4-{7-Fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-y1}-
phényi)-3-(2-fluoro-phényl)-urée
O
H
N
N S
r p I \ / H
\ I
N J, N F
H H
F
En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 6, on obtient la 1-(4-
{7-fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényi)-3-(2-
fluoro-phényl)-urée sous ]a forme d'un solide jaune dont .les caractéristiques
sont les suivantes:
Spectre RMN 1 H à 300 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DPX-
300 avec les déplacements chimiques (5 en ppm) - dans le solvant
diméthylsulfoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
7,02 (m, 1 H) ; de 7,10 à 7,30 (m, 3H) ; de 7,52 à 7,65 (m, 5H) ; 7,68
(dd, J = 3,0 et 5,0 Hz, 1 H) ; 7,72 (d large, J = 5,0 Hz, 1 H) ; 8,18 (dt, J =
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2,0 et 8,5 Hz, 1 H) ; 8,47 (m large, 1 H) ; 8,65 (m large, 1 H) ; 9,30 (s
large, 1 H) ; 10,8 (m étalé, 1 H) ; 13,35 (m étalé, 1 H) .
Spectre IR (KBr) : 3267; 1650; 1598; 1532; 1455; 1249; 1184 & 746 cm-,
Spectre MS (ES+) : m/z = 490 [MH+]
5 Exemple 15
1-(4-{7-Fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-
phényl)-3-(5-trifluorométhyl-phény!)-urée
O
H
//
/
~N S
.. . ._ . ,. . ..\.. ~._ .
O \ H
FF ~ I / F
N N
H H
F
En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 6, on obtient la 1-(4-
10 {7-fluôro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-y(}-phényl)-3-(5-
trifluorométhyl-phényl)-urée sous la forme d'un solide blanc dont les
caractéristiques sont les suivantes:
Spectre RMN 1 H à 300 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DPX-300
avec les déplacements chimiques (8 en ppm) - dans le solvant
15 diméthyisuifoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
7,19 (dd, J 6,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,31 (d largé, J 7,5 Hz, 1 H) ; 7,52 (t, J
7,5 Hz, 1 H) ; de 7,55 à 7,68 (m, 6H) ; 7,68 (dd, J 3,0 et 5,0 Hz, 1 H) ; 7,72
(dd; J = 1,5 et 5,0 Hz, 1H) ; 8,04 (s large, 1H) ; 8,48 (dd, J = 1,5 et 3,0
Hz,
1 H) ; 9,28 (s large, 1 H) ; 9,42 (s large, 1 H) ; 10,8 (s large, 1 H) ; 13,35
(s
20 large, 1 H).
Spectre IR (KBr): 3334; 1691; 1644; 1534; 1341; 1114; 807 & 699 cm-'
Spectre MS (ES+) : m/z = 540 [MH+]
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WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
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Exemple 16
1-(4-{7-Fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-
phényl)-3-(5-tert-butyl-2-p-tolyl-2H-pyrazol-3-yl)-urée
O
H
N
N S
~ \ \
O N
N/ H
N N N F
H H
En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 6, on obtient la 1-(4-
{7-fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(5-
tert-
butyi-2-p-tolyl-2H-pyrazol-3-yl)-urée sous la forme d'un solide jaune dont les
caractéristiques sont les suivantes:
Point de fusion : 196-197 C
Spectre RMN 1 H à 300 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DPX-300
avec les déplacements chimiques (S en ppm) dans le solvant
diméthylsulfoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
1,29 (s, 9H) ; 2,39 (s, 3H) ; 6,37 (s, 1 H) ; 7,16 (m, 1 H) ; 7,32 (d large, J
= 8,5
Hz, 2H) ; 7,42 (d large, J 8,5 Hz, 2H) ; 7,56 (s large, 4H) ; 7,61 (d, J= 8,5
Hz, 1 H) ; 7,68 (m large, 1 H) ; 7,72 (dd, J = 1,5 et 5,0 Hz, 1 H) ; 8,47 (m
large,
1 H) ; 8,67 (m étalé, 1 H) ; 9,42 (m étalé, 1 H) ; 10,75 (s large, 1 H) ;
13,45 (m
étalé, 1 H).
Spectre IR (Kbr) : 3435; 1646; 1533; 1410; 1202; 823 & 741 cm"'
Spectre MS (ES') : m/z = 608 [MH+]
Exemple 17
CA 02567744 2006-11-22
WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
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1-(4-{7-Fluoro-3-[(furan-2-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yi}-phényl)-3-
(2-fi uoro-5-trifl uorométhyl-phényl)-urée
O
N
O
N
F O H,
FF N i~ N F
H H
F
A une solution de 223.7 mg de 1-[4-(3-amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-
phényl]-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényi)-urée (obtenue selon. le mode
opér.atoire. décrit à l'exemple 7) dans 5 mL de pyridine on ajoute à
température ambiante 65.3 mg de chlorure de 2-furoyie. Le mélange
réactionnel est agité 48 h à température ambiante, puis versé sur.de l'eau
distillée. Ce mélange est extrait par de l'acétate d'éthyle, la phase
organique
est décantée, lavée plusieurs fois à l'eau distillée, puis par une solution
aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium,
puis concentré à sec sous pression réduite. Le solide obtenu est
chromatographié sur colonne de silice (éluant cyclohexane / acétate d'éthyle
50150 en volumes). Après évaporation à sec sous pression réduite des
fractions contenant l'attendu, on obtient 72 mg d'un solide blanc qui est à
nouveau purifié par LCMS. On obtient 22.7 mg de 1-(4-{7-fluoro-3-[(furan-2-
yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-
phényl)-urée sous la forme d'un solide jaune pâle dont les caractéristiques
sont les suivantes:
Point de fusion : 152-153 C
Spectre RMN 1H à 400 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-400
avec les déplacements chimiques (S en ppm) - dans le solvant
diméthylsulfoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
6,72 (dd, J = 2,0 et 3,5 Hz, 1 H) ; 7,19 (dd, J = 6,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,40
(m,
1 H) ; de 7,47 à 7,54 (m, 2H) ; de 7,58 à 7,65 (m, 5H) ; 7,98 (m large, 1 H) ;
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8,62 (dd, J= 2,5 et 7,5 Hz, 1 H) ; 9,02 (d large, J = 2,0 Hz, 1 H) ; 9,41 (s
large,
1 H) ; 10,85 (s large, 1 H) ; 13,4 (s large, 1 H) .
Spectre IR (K13r) : 3435; 1669; 1603; 1545; 1442; 1341; 1122; 711 & 614 cm '
Spectre MS (EI) : m/z = 541 [M+ ]
Exemple 18
1-(4-{7-Fluoro-3-[phényl-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-
fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée
O
H /
N
F
N
O
e
FF F
N N
H H
F
A une solution de 223.7 mg de 1-[4-(3-amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-
phényl]-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée (obtenue selon le mode
opératoire décrit à l'exemple 7) dans 5 mL de pyridine on, ajoute à
température ambiante 70 mg de chlorure de benzoyle. Le mélange
réactionnel est agité 48 h à température ambiante, puis versé sur de l'eau
distillée. Ce mélange est extrait par de l'acétate d'éthyle, la phase
organique
est décantée, lavée plusieurs fois à l'eau distillée, puis par une solution
aqueuse saturée en chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium,
puis concentré à sec sous pression réduite. Le solide obtenu est
chromatographié sur colonne de silice (éluant cyclohexane / acétate d'éthyle
50/50 en volumes). Après évaporation à sec sous pression réduite des
fractions contenant l'attendu, on obtient 115 mg d'un solide gris beige qui
est
à nouveau purifié par LCMS. On obtient 46 mg de 1-(4-{7-fluoro-3-[phényl-
carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-
urée sous la forme d'un solide jaune pâle dont les caractéristiques sont les
suivantes:
CA 02567744 2006-11-22
WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
44
Point de fusion : 206-207 C
Spectre RMN 1 H à 400 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-400
avec les déplacements chimiques (S en ppm) - dans le solvant
diméthylsuifoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
7,19 (t large, J = 7,5 Hz, 1 H) ; 7,40 (m, 1 H) ; de 7,47 à 7,67 (m, 9H) ;
8,09 (d
large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 8,62 (dd, J = 2,0 et 7,5 Hz, 1 H) ; 9,19 (s large, 1
H) ;
9,60 (s large, 1 H) ; 10,9 (s large, 1 H) ; 13,4 (m étalé, 1 H).
Spectre IR (KBr) : 3419; 1669; 1599; 1552; 1443; 1342; 1190; 1118; 804; 760
&614cm"'
Spectre MS (EI) : m/z = 551 [M+ ]
-Exempte 19
1-[4-(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yi')-phenyl]-3-(3-trifluoromethyl-
phenyl)-urée
NH2
N
,
F O N
II H
F F
N N
H H
F
A une solution de 150 mg de 6-(4-amino-phenyl)-7-fluoro-1 H-indazol-3-
ylamine dans 7 mL de tétrahydrofurane anhydre on ajoute à température
ambiante 128.7 mg de 3-trifluorométhylphénylisocyanate. Le mélange
réactionnel est agité 18 h à température ambiante, puis concentré à sec sous
pression réduite. Le solide obtenu est purifié par LCMS. On obtient 84 mg de
1-[4-(3-amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phenyl]-3-(3-trifluoromethyl-phenyl)-
urée sous la forme d'un solide blanc dont les caractéristiques sont les
suivantes:
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WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
Spectre RMN 1 H à 300 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-300
avec les déplacements chimiques (S en ppm) - dans le solvant
diméthylsulfoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
5,47 (s large, 2H) ; 6,99 (dd, J = 6,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,30 (d large, J 7,5
Hz,
5 1 H) ; de 7,47 à 7,69 (m, 7H) ; 8,04 (s large, 1 H) ; 9,60 (m étalé, 1 H) ;
9,78 (m
étalé, 1 H) ; 11,85 (s large, 1 H).
Spectre IR (KBr): 3403; 1658; 1605; 1533; 1448; 1338; 1125; 798 & 698 cm-,
Spectre MS (ES{) : m/z = 430 [MH+]
6-(4-Amino-phenyl)-7-fluoro-1 H-indazol-3-ylamine :
10 A une suspension de 3 g [4-(3-amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phenyl]-
carbamate de tertio-butyle dans. 60 mL de dichlorométhane on ajoute à
température ambiante 6 mL d'acide trifluoroacétique. Le mélange réactionnel
est agité 18 h à température ambiante, concentré à sec sous pression
réduite. Le solide obtenu est repris dans l'acétate d'éthyle, la solution est
15 traitée par une solution aqueuse de soude 4N, puis décantée. La phase
organique est ensuite lavée par de l'eau distillée, puis par une solution
aqueuse saturée de chlorure de sodium, séchée sur sulfate de magnésium,
filtrée puis concentrée à sec sous pression réduite. Le solide jaune obtenu
(2.08g ) est chromatographié sur colonne de silice (éluant acétate d'éthyle).
20 Après évaporation à sec sous pression réduïte des fractions contenant
l'attendu, on obtient 1.88 g de 6-(4-âmino-phenyl)-7-fluoro-1 H-indazol-3-
ylamine sous la forme d'un solide jaune dont les caractéristiques sont les
suivantes:
Spectre MS (El) : m/z=242 [M+-]
25 [4-(3-amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phenyl]-carbamate de tertio-butyle
Une suspension de 7.89 g de (4'-cyano-2',3'-difluoro-biphenyl-4-y!)-carbamate
de tertio-butyle dans 50 mL d'isopropanol est chauffée à 50 C, puis on lui
ajoute à cette température 5.8 mL d'hydrate d'hydrazine. Le mélange
réactionnel est agité pendant 18 h à reflux, puis versé après refroidissement
30 sur 500 mL d'eau distillée. Le précipité blanc formé est filtré et séché
sous
vide à 50 C. On obtient 8.39 g de [4-(3-amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-
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WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
46
phenylj-carbamate de tertio-butyle sous la forme d'un solide jaune dont les
caractéristiques sont les suivantes:
Spectre MS (ES) : m/z=343 [MH+]
(4'-cya no-2', 3'-d ifl uo ro-b iph enyl-4-yl)-ca rba mate de tertio-butyie :
A une solution de 7 g de trifiuoro-méthanesuifonate de 4-cyano-2,3-difluoro-
phényle dans 400 mL de dioxane on ajoute à température ambiante 8.67 g
d'acide N-Boc 4-Amino-3-fluorophénylboronique, 7.235 g de carbonate de
sodium en solution dans 100 mL d'eau distillée, puis 3.38 g de tétrakis
triphénylphosphine palladium. Le mélange réactionnel est chauffé 3 h à 90 C,
puis concentré à sec sous pression réduite. Le solide obtenu est repris à
l'acétate d'éthyle, cette phase organique est lavée plusieurs fois à l'eau
distillée, puis par une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium,
séchée sür sulfate de mâgnésium, pûis '*concentré à sec sous pression
réduite. Le solide obtenu est chromatographié sur colonne de silice (éluant
cyclohexane / acétate d'éthyle 90/10 en volumes). Après évaporation à sec
sous pression réduite des fractions contenant l'attendu, on obtient 7.89 g de
(4'-cyano-3,2',3'-trifiuoro-biphényl-4-yl)-carbamate de tertio-butyle sous la
forme d'un solide blanc crème dont les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre MS (El): m/z=330 [M+ ]
Exemple 20
1-[4-(3-Am i no-7-fluoro-1 H-i ndazol-6-yl)-phe nyl]-3-phényl-urée
NH2
N
aN' OHN
F
H H
En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 19, on obtient la 1-[4-
(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phényl]-3-phényi-urée sous la forme d'un
solide blanc dont les caractéristiques sont les suivantes:
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Spectre RMN 1 H à 300 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-
300 avec les déplacements chimiques (S en ppm) - dans le solvant
diméthylsuifoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
5,46 (s large, 2H) ; 6,98 (m, 2H) ; 7,29 (t large, J = 8,0 Hz, 2H) ; de 7,45 à
7,61 (m, 7H) ; 8,93 (m étalé, 1 H) ; 9,03 (m étalé, 1 H) ; 11,85 (s large, 1
H) .
Spectre IR (KBr) : 3415; 1646; 1598; 1532; 1443; 1316; 1234; 752 & 693 cm-'
Spectre MS (EI) : m/z = 361 [M+ ]
Exemple 21
1-[4-(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phenyl]-3-(5-tert-butyl-isoxazol-3-
yl)-urée
NHz
N
,
p H
O
N N ~ N I .i F
H H
En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 19, on obtient la 1-[4-
(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phenyl]-3-(5-tert-butyl-isoxazol-3-yl)-
urée
sous la forme d'un solide blanc dont les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre RMN 1 H à 300 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-300
avec les déplacements chimiques (8 en ppm) - dans le solvant
diméthylsulfoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
1,30 (s, 9H) ; 5,47 (s large, 2H) ; 6,52 (s, 1 H) ; 6,98 (dd, J = 6,5 et 8,5
Hz,
1 H) ; de 7,50 à 7,61 (m, 5H) ; 9,22 (m étalé, 1 H) ; 9,79 (m étalé, 1 H) ;
11,85
(s large, 1 H).
Spectre IR (KBr) : 3414; 1696; 1607; 1530; 1431; 1317; 1202; 912 & 800 cm"'
Spectre MS (El): m/z = 408 [M+ ]
Exemple 22
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48
1-[4-(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phenyl]-3-(2-fiuoro-phenyl)-urée
NH2
p N
Ç)__ p I \ N
N \N~ / XF
H H
F
En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 19, on obtient la 1-[4-
(3-amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phenyl]-3-(2-fluoro-phenyl)-urée sous la
forme d'un solide blanc dont les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre RMN 1 H à 300 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-300
avec les déplacements chimiques (S en ppm) - dans le . solvant -
diméthylsulfoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
5,47 (s large, 2H) ; 6,98 (dd, J = 6,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,03 (m, 1 H) ; 7,15
(t
large, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 7,24 (ddd, J = 2,0 - 8,5 et 12,0 Hz, 1 H) ; de 7,50
à
7,61 (m, 5H) ; 8,16 (dt, J = 2,0 et 8,5 Hz, 1 H) ; 8,65 (m étalé, 1 H) ; 9,27
(s
large, 1 H) ; 11,85 (s large, 1 H)
Spectre IR (KBr) : 3347; 1655; 1603; 1533; 1457; 1251; 1193; 797 & 752 cm-,
Spectre MS (El): m/z = 379 [M+ ]
Exemple 23
1-(4-{7-Fluoro-3-[(thiophèn-3-yi)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-2-
méthyl-phényl)-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée
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H / O
N
F F S
F N
O N
II H
\ I h / F
N N
H H
F
En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 11, on obtient la 1-(4-
47-ffuoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-2-méthyl-phényl)-
3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée sous la forme d'un solide jaune
pâle
dont les caractéristiques sont les suivantes:
Point de fusion : 312-313 C ,
Spectre RMN 1 H à 400 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-400
avec les déplacements chimiques (S en ppm) - dans le solvant
diméthylsulfoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
2,37 (s, 3H) ; 7,18 (dd, J = 6,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,39 (m, 1 H) ; de 7,43 à
7,54
(m, 3H) ; 7,62 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 8,68 (dd, J 3,0 et 5,0 Hz, 1 H) ; 7,72
(dd,
J = 1,5 et 5,0 Hz, 1 H) ; 8,03 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 8,47 (m large, 1 H) ;
8,62 (s,
1 H) ; 8,69 (dd, J = 2,5 et 7,5 Hz, 1 H) ; 9,41 (s large, 1 H) ; 10,8 (s
large, 1 H) ;
13,4 (m étalé, 1 H).
Spectre IR (KBr) : 3301; 1660; 1542; 1442; 1339; 1263; 1126; 819; 742 & 619
c171 i
Spectre MS (CI) : m/z = 572 [MH*]
Exemple 24
1-(5-{7-Fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-
pyridin-2-yl)-3-(2-fiuoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée
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WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
O
N
F F ~
F N \, S
H
O IYÇF
N N N
H H
F
En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 11, on obtient la 1-(5-
{7-fluoro-3-[(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-pyridin-2-yl)-3-
(2-
fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée sous la forme d'un solide dont les
5 caractéristiques sont les suivantes:
Spectre RMN 1 H à 400 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-400
avec les déplacements chimiques (8 en ppm) - dans le solvant
diméthylsuifoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
7,24 (dd, J = 6,5 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,45 (m, 1 H) ; 7,55 (dd, J= 8,5 et 11,0
Hz,
10 1 H) ; de 7,63 à 7,70 (m, 3H) ; 7,73 (dd, J 1,5 et 5,0 Hz, 1 H) ; 8,11 (dm,
J
8,5 Hz, 1 H) ; 8,47 (m, 1 H) ; 8,58 (m, 1 H) ; 8,69 (dd, J = 2,5 et 7,5 Hz, 1
H) ;
10,1 (s, 1 H) ; 10,8 (s, 1 H) ; 11,6 (s large, 1 H) ; 13,5 (m étalé, 1 H).
Spectre MS (ES+) : m/z = 559 [MH+]
Exemple 25
15 1-[4-(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phenyl]-3-(5-tert-butyl-2-p-tolyi-
2H-pyrazol-3-yl)-urée
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51
NHZ
N
.
O H
N F
N N N
H H
.~ ~
En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 19, on obtient la 1-[4-
(3-Amino-7-fluoro-1 H-indazol-6-yl)-phenyl]-3-(5-tert-butyl-2-p-tolyl-2H-
pyrazol-
3-y!)-urée sous la forme d'un solide blanc dont les caractéristiques sont les
suivantes:
Spectre RMN 1 H à 400 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-400
avec les déplacements chimiques (â en ppm) - dans le solvant
diméthylsuifoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
1,29 (s, 9H) ; 2,38 (s, 3H) ; 5,48 (s, large, 2H) ; 6,38 (s, 1 H) ; 6,97, (m,
1 H) ;
7,34 (d large, J. 8,5 Hz, 2H) ; 7,41 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; de 7,48 à
7,57
(m, 5H) ; 8,40 (s large, 1 H) ; 9,17 (s large, 1 H) ; 11,85 (m étalé, 1H).
Spectre MS (ES+) : m/z = 498 [MH+]
Exemple 26
1-(4-{7-Fl uoro-3-[(L-pyrrolidi n-2-yl)-carbonylamino]-1 H-i ndazol-6-yl}-
phényl)-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée
O
H
I H
N
F F
F
N
O~~ H
N N F
H H
F
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52
A une solution de 0.23 g de 1-(4-{7-fluoro-3-[(N-Boc-L-pyrrolidin-2-yl)-
carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-
urée dans 20 mL de dioxane on ajoute à température ambiante 1 mL de
solution aqueuse 4N d'acide chlorhydrique. Le mélange réactionnel est agité
3 h à 50 C, puis concentré à sec sous pression réduite. Le solide obtenu est
repris dans le dichlorométhane, le précipité est filtré. Le solide obtenu
(96mg)
est purifié par LCMS. On obtient 16 mg de 1-(4-{7-fluoro-3-[(L-pyrrolidin-2-
yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-
phényl)-urée sous la forme d'un solide beige dont les caractéristiques sont
les
suivantes:
Spectre IR (KBr ): 3271; 1703; 1625; 1538; 1442; 1341; 1257; 1198; 1117 &
807 cm"'
Spectre MS (EI) : m/z = 544 [M+ ]
1-(4-{7-Fluoro-3-[(N-Boc-L-pyrrolidin-2-yl)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-
phényl)-3-(2-fluoro-5-trif(uorométhyl-phényl)-urée :
En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 17, on obtient la 1-(4-
{7-fluoro-3-[(N-Boc-L-pyrrolidin-2-yi)-carbonylamino]-1 H-indazol-6-yl}-
phényl)-
3-(2-fluoro-5-trifluorométhyl-phényl)-urée sous la forme d'un solide jaune vif
dont les caractéristiques sont les suivantes:
Spectre MS (ES) : m/z=645 [MH+]
Exemple 27
1-(4-{7-Fluoro-3-acétylamino-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-fluoro-5-
trifluorométhyl-phényl)-urée
0
H //
F N \\
F F 'N
C H
F
N ~ N
F H H
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En opérant selon le mode opératoire décrit à l'exemple 17, on obtient la 1-(4-
{7-fluoro-3-acétyiamino-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-fluoro-5-
trifluorométhyl-
phényl)-urée sous la forme d'un solide jaune vif dont les caractéristiques
sont
les suivantes:
Spectre RMN 1 H à 400 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-400
avec les déplacements chimiques (5 en ppm) - dans le solvant
diméthylsulfoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
2,11 (s, 3H) ; 7,14 (m, 1 H) ; 7,40 (m, 1 H) ; 7,50 (dd, J = 8,5 et 11,0 Hz, 1
H) ;
de 7,55 à 7,64 (m, 4H) ; 7,67 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ; 8,62 (dd, J= 2,5 et 7,5
Hz,
1 H) ; 9,11 (s large, 1 H) ; 9,50 (s large, 1 H) ; 10,5 (s large, 1 H) ; 13,2
(s large,
1 H).
Spectre IR (KBr) : 3422; 1710; 1670; 1604; 1550; 1442; 1341; 1125; 818 &
614 cm"'
Spectre MS (ES+) : m/z = 490 [MH+]
Exemple 28
1-(4-{7-Fluoro-3-formylamino-1 H-indazol;6-yl}-phényl)-3-(2-fluoro-5-
trifluorométhyl-phényl)-urée
O
H
N
F F H
N
F ,
OII H
N~N F
H H
F
Une solution de 0.633 mL d'anhydride acétique et de 0.253 mL d'acide
formique est chauffée à 50 C pendant 2h, puis on lui ajoute goutte à goutte
une solution de 300 mg de 1-[4-(3-amino-7-fluoro-1H-indazol-6-yl)-phényl]-3-
(2-fluorô-5-trifluorométhyl-phényl)-urée (obtenue selon le mode opératoire
décrit à l'exemple 7) dans 7 mL de pyridine. Le mélange réactionnel est agité
24 h à température ambiante, puis versé sur de l'eau distillée. Ce mélange
CA 02567744 2006-11-22
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est filtré, puis le solide obtenu (256 mg) est purifié par LCMS. On obtient 34
mg de 1-(4-{7-fluoro-3-formylamino-1 H-indazol-6-yl}-phényl)-3-(2-fluoro-5-
trifluorométhyl-phényl)-urée sous la forme d'un solide beige dont les
caractéristiques sont les suivantes:
Spectre RMN 1 H à 300 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DPX-300
avec les déplacements chimiques (8 en ppm) - dans le solvant
diméthylsulfoxide - d6 (DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm après addition d'une
goutte d'acide acétique -d4 (CD3COOD) :
On obsérve un mélange 60%-40% des deux formes iminoalcool du
produit attendu :
7,19 (m, 1 H) ; 7,40 (m, 1 H) ; 7,51 (m, 1 H) ; de 7,55 à 7,65 (m, 4H) ; 7,69
(d, J
= 8,5 Hz, 0,6H) ; 7,77 (d, J 8,5 Hz, 0,4H) ; 8,32 (s, 0,4H) ; 8,65 (dd, J =
2,5
et 7,5 Hz, 1 H) ; 8,98 (s, 0,6H) .
Spectre I R(KBR): 3372; 3308; 1680; 1604; 1551; 1443; 1341; 1263; 1118;
812&614cm"'
Spectre MS (EI) : m/z = 475 [M+ ]
Exemple 29
N-[6-(4-Amino-phényl)-7-fluoro-1 H-indazol-3-yl]-thiophène-3-
carboxamide
O
H
N
N S
H
\
H2N C F
A une solution de 1,46 g de 6-(4-terbutoxy-carbonylamino-phényl)-1-[3-
(thiophèn-3-yl)-carbonylamino]-7-fluoro-1 H-indazole dans 20 mL de
CA 02567744 2006-11-22
WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
dichloromethane sont ajoutés 10 mL d'acide trifluoroacétique et 1 mL d'eau.
Le mélange réactionnel est agité pendant 16 heures à une température
voisine de 20 C, puis est concentré sous pression réduite. Le résidu solide
est repris par de l'acétate d'éthyle et lavé par une solution saturée de
5 bicarbonate de sodium jusqu'à obtention d'une phase aqueuse à pH 9, puis
lavé par de l'eau. La phase organique est concentrée sous pression réduite
pour donner 1,02 g de N-[6-(4-Amino-phényl)-7-fluoro-lH-indazol-3-yl]-
thiophène-3-carboxamide, avec un rendement en poids de 91 %.
Les caractéristiques sont les suivantes:
10 Analyse LCMS : [M+H]+=353.2 ; temps rétention : 2.92 min
La synthèse du 6-(4-terbutoxy-carbonylamino-phényl)-1-[3-(thiophèn-3-yl)-
carbonylamino]-7-fluoro-1 H-indazole est décrite dans l'exemple n 4.
Exemples 30 à 39
A une solution de 100 mg (0,284 mmol) de N-[6-(4-Amino-phényl)-7-fluoro-
15 1 H-indazol-3-yl]-thiophène-3-carboxamide dans 4,5 mL de pyridine sont
ajouté à 0 C des solutions de 0,284 mmol de chlorures de suifonyles dans 1
mL de dichlorométhane. Les mélanges réactionnels sont agités pendant 72
heures à une température voisine de 20 C, puis concentrés sous pression
réduite. Les résidus secs sont repris dans du méthanol, et concentrés sous
20 pression réduite. Les résidus secs sont repris dans 1.5 mL d'un mélange
méthlol / acide acétique / dimethylsulfoxyde et purifiés par LC/MS
préparative.
Les analyses RMN sont réalisées comme suit : Spectre RMN 1 H à 400 MHz
sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-400 avec les déplacements
25 chimiques (S en ppm) - dans le solvant diméthylsulfoxide - d6 (DMSO-d6)
référencé à 2,50 ppm :
Les produits sont décrits dans le tableau suivant :
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56
N Structure nom précurseur Quantité Analyses
exemple Sulfonyi
chloride
Rende-
ment
N Thiophene-3- oi\S~ 99 mg spectre IR: KBr
1~ ~ I carboxylic acid ~ 3404; 1659; 1530; 1338; 1161;
30 F N N N ~ {7-fluoro 6-[4- 1134 & 769 cm -'
IN
(naphthaiene-1- 64 % RMN :
sulfonylamino)- 7,03 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz, 1 H) ;
phenyl]-1 H- 7,17 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ;
indazol-3-yl]- 7,45 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ;
amide 7,55 (d, J = 8,5 Hz, 1 H) ;
de 7,63 à 7,71 (m, 4H) ;
7,76 (t large, J 8,0 Hz, 1H) ;
8,09 (d large, J 8,0 Hz, 1 H) ;
8,24 (d large, J 8,0 Hz, 1 H) ;
8,30 (d large, J 8,0 Hz, 1 H) ;
8,45 (d large, J 2,5 Hz, 1 H) ;
8,76 (d large, J 8,5 Hz, 1 H) ;
10, 75 (s, 1H)
10,9 (s large, 1H) ; 13,3 (s, 1H) .
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Thiophene-3- 0_ l' Spectre IR : KBr
S
carboxylic acid O 113 mg 3425; 1650; 1528; 1340; 1159;
~
31 F I~ N, js {7-fluoro-6-[4- S 729 & 593 cm ~
/
N (thiophene-2- 80 %
sulfonylamino)- RMN :
phenyl]-1 H- De 7,10 à 7,16 (m, 2H) ;
indazol-3-yl}- 7,28 (d large, J= 9,0 Hz, 2H) ;
amide 7,57 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ;
de 7,59 à 7,64 (m, 2H) ;
7,67 (dd, J = 3,0 et 5,0 Hz, 1H) ;
7,71 (d large, J= 5,0 Hz, 1H) ;
7,93 (d large, J = 5,5 Hz, 1H) ;
8,47 (d large, J = 2,5 Hz, 1H) ;
10,65 (s large, 1H) ;
10,8 (s, 1 H) ; 13,4 (s, 1 H
o
= Thlophene-3- 121 mg spectre IR : KBr
N C1~ i
carboxylic acid 3360; 3174; 1652; 1541; 1529;
32 F N, s [6-(4- 1341; 1159; 913;
N-N
benzenesulfonyl ~ 87 % 687 & 580 cm-'
amino-phenyl)- RMN :
7-fluoro-lH- 7,10 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz, 1H) ;
indazol-3-yl]- 7,24 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ;
amide 7,52 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ;
de 7,56 à 7,65 (m, 4H) ;
7,67 (dd, J = 3,0 et 5,0 Hz, 1H) ;
7,71 (d large, J = 5,0 Hz, 1H);
8,84 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ;
8,46 (d large, J = 2,5 Hz, 1H) ;
10,5 (s, 1 H) ; 10,8 (s large, 1 H) ;
13,35 3 lar e, 4 H
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58
o O
~~~ s=o Thiophene-3- ~ci 19 mg LC/MS :
33 carboxylic acid
F N-N N ~~ {6-[4-(4- - - 1 [M-rH]+=550.2
0 12%
acétylamino- temps rétention 3,58 min
benzenesulfonyl HNy
amino)-phenyi]-
7-fluoro-1 H-
indazol-3-yl]-
amide
F N N O ~
'o N Thiophene-3- 82 mg Spectre IR : KBr
carboxylic acid Ci/ ~ 3362; 1646; 1529; 1332; 1149;
34 [7-fluoro-6-(4- 67 % 971; 542 & 507 cm'
methanesulfonyl
amino-phenyl)- RMN :
1H-indazol-3-yl]- 3,06 (s, 3H) ;
amide 7,16 (dd, J= 7,0 et
8,5 Hz, 1 H) ;
7,34 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ;
7,63 (d large, J= 9,0 Hz, 3H) ;
7,68 (dd, J = 3,0 et 5;0 Hz,
1H);
7,72 (d large, J = 5,0 Hz, 1H) ;
8,47 (d large, J = 2,5 Hz, 1H) ;
9,93 (s large, 1 H) ;
10,8 (s, 1 H; 13,4 (s large, 1 H.
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0
01 C1\ / Thiophene-3- 122 mg spectre IR : KBr
carboxylic acid ô/ 3425; 1659; 1528; 1339; 1157;
s=o 913; 741 & 593 cm-'
35 N i I {6-[4-(3,4-
\ RMN:
dichloro
N 4,63 (s, 2H) ;
F
' 75 %
N-N phenylmethanes C1 7,17 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz, 1H) ;
0
ulfonylamino)- de 7,27 à 7,33
phenyl]-7-fluoro- (m partiellement masqué, 1H) ;
7,31 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ;
1 H-indazol-3-yl}-
7,55 (d, J = 2,0 Hz, 1 H) ;
amlde de 7,59 à 7,66 (m, 4H) ;
7,68 (dd, J = 3,0 et 5,0 Hz, 1H) ;
7,73 (d large, J = 5,0 Hz, 1 H) ;
8,48 (d large, J = 2,5 Hz, 1 H) ;
10,1 (s, 1H) ; 10,8 (s, 1H) ;
13,4 (s large, 1H)
N-o Thiophene-3- 101 mg spectre IR : KBr
carboxylic acid o-s-o 3351; 3175; 1642; 1528; 1332;
36 F [6-(4- 1299; 1268; 1137; 911 & 702 cm
N--N ~
/1 cyclopropanesui 78 %
fonylamino- RMN:
phenyl)-7-fluoro- De 0,93 à 1,03 (m, 4H) ;
1 H-indazol-3-yl]- 2,71 (m, 1 H) ; 7,17
amide (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz, 1 H) ;
7,38 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ;
7,59 à 7,64 (m, 3H) ;
7,68 (dd, J= 3,0 et 5,0 Hz,
1 H) ; 7,72 (d large, J = 5,0 Hz,
1H);
8,48 (d large, J = 2,5 Hz, 1H) ;
9,91 (s, 1H) ; 10,8 (s, 1H) ;
13,4 (s, 1H)
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ci o
9 c Thiophene-3- 107 mg spectre IR : KBr
87 N\ ~ carboxylic acid ci 3351; 1660; 1527; 1339; 1162;
S {6-[4-(2-chloro- 1044; 913; 748 & 588 cm'
I~ l
F ~ N
N-N obenzenesulfonyi 71 % RMN :
amino)-phenyl]- 7,09 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz,
7-fluoro-1H- 1H); 7,23 (d large, J = 9,0 Hz,
indazol-3-yl}- 2H) ; 7,52 (d large, J = 9,0 Hz,
amide 2H) ; de 7,53 à 7,60 (m, 2H) ;
de 7,62 à 7,68 (m, 3H) ;
7,71 (d large, J = 5,0 Hz, 1 H) ;
8,12 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ;
8,46 (d large, J = 2,5 Hz, 1 H) ;
10,75 (s, 1H); 10,85 (s, 1H);
13,35 (s, 1 H
ci 0
b o Thiophene-3- 1I~o 137 mg spectre IR : KBr
o a-
N carboxylic acid 3424; 1652; 1528; 1340; 1163;
38 {6-[4-(3-chloro- I 914; 679 & 594 cm"'
F
ri-r~i benzenesulfonyl ci 92 % RMN :
0
amino)-phenyl]- 7,11 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz,
7-fluoro-lH- 1 H) ;
indazol-3-yl)- 7,24 (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ;
amide 7,56 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ;
de 7,58 à 7,65 (m, 2H) ; 7,67
(dd, J= 3,0 et 5,0 Hz, 1 H) ;
7,71 (d large, J = 5,0 Hz, 1H) ;
7,74 (d large, J = 8,0 Hz, 1H) ;
7,78 (d large, J = 8,0 Hz, 1H) ;
7,83 (t, J 1,5 Hz, 1H); 8,47
(d large, J 2,5 Hz, 1 H) ; 10,6
(s, 1H) ; 10,8 (s, 1H) ; 13,4 (s
lar e, 1H .
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ci
Thiophene-3- ~ j 94 mg Spectre IR: KBr
~\ N S
N-O
\ ~ carboxylic acid 0 N 3420; 1657; 1529; 1341; 1159;
~
39 i~ s {7-fluoro-6-[4-(1- 1120; 913; 695; 624 & 548 cm'
F ~ N' ~1
N methyl-lH-
o
imidazole-4- 67 RMN:
sulfonylamino)- 3,67 (s, 3H) ;
phenyl]-1H- 7,11 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz, 1H)
indazol-3-yl}- 7,28 (d large, J = 9,0 Hz, 2H)
amide 7,51 (d large, J = 8,5 Hz, 2H)
7,60 (d, J= 8,5 Hz, 1 H) ;
7,67 (dd, J = 3,0 et 5,0 Hz, 1H)
7,71 (d large, J 5,0 Hz, 1 H)
7,76 (s large, 1 H) ;
7,89 (s large, 1H) ;
8,47 (d large, J 2,5 Hz, 1H)
10,4 (s, 1H) ;
10,8 (s, 1 H; 13,35 (s large, 1 H
Exemples 40 à 48 :
Dans des tubes pour micro-onde Emrys Optimizer, des solutions de chacun
des exemples 30 à 39 dans 1.78 mL de méthanol et 0.22 mL d'une solution
d'acide chlorhydrique à 37 % sont mises en réactions sous agitation au four
micro-ondes 30 minutes à 120 C. Les solutions sont concentrées sous
pression réduite, reprises dans 1 mL de dimethylsuifoxide et purifiés par
LC/MS préparative. Les analyses RMN sont réalisées comme suit : Spectre
RMN 1 H à 400 MHz sur spectromètre BRUKER AVANCE DRX-400 avec les
déplacements chimiques (8 en ppm) - dans le solvant diméthylsulfoxide - d6
(DMSO-d6) référencé à 2,50 ppm :
Les produits sont décrits dans le tableau suivant :
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N Structure nom précurseur Quantité Analyses
exemple
Quantité Rende-
ment
~F Naphthalene-1- Exemple 30 27 mg spectre IR : KBr
1~ N~ I F sulfonic acid [4-(3- 3414; 1659; 1202; 1160; 1133; 912;
40 amino-7-fluoro-lH- 803; 770 & 588 cm'
N
N-r; indazol-6-yi)-phenyl]- 38 mg RMN :
amide; compound 71 % 6,87 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz, 1 H) ; 7,14
with trifluoro-acetic (d large, J = 9,0 Hz, 2H) ; 7,40 (d
acid large, J= 8,5 Hz, 2H) ; 7,50 (d, J
8,5 Hz, 1 H) ;
de 7,63 à 7,71 (m, 2H) ;
7,75 (t large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 8,09 (d
large, J = 8,0 Hz, 1 H) ; 8,24 (d large,
J = 8,0 Hz, 1 H) ; 8,29 (d large, J=
8,0 Hz, 1H); 8,75 (d large, J = 8,0
Hz, 1 H) ; 10,9 (s, 1H) ; de 11,7 à
12,2 (m très étalé, 1H) .
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0 o spectre IR : KBr
F Thiophene-2-sulfonic Exemple 26 Img
3440; 3395; 3361; 1658; 1527;
N~ F F acid [4-(3-amino-7- 31 1333; 1205; 1154; 1018; 800; 726 &
41 fluoro-lH-indazol-6- 589 cm"
RMN:
N-N yl)-phenyl]-amide; 40 mg 74 % 6,97 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz, 1H) ;
compound with 7,14 (dd, J= 4,0 et 5,0 Hz, 1H);
trifluoro-acetic acid 7,26 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,52
(d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,56 (d, J
= 8,5 Hz, 1 H) ;
7,62 (dd, J = 1,5 et 4,0 Hz, 1H) ;
7,92 (dd, J = 1,5 et 5,0 Hz, 1H) ;
10,6 (s, 1H) ; de 11,8 à
12,2 (m très étalé, 1 H
N-[4-(3-Amino-7- Exemple 13 mg spectre IR : KBr
~ F 3392; 1659; 1202; 1159; 1090 &
N i F F fluoro-lH-indazol-6 32 590 cm'
RMN :
42 -yl)-phenyl]- -
6,92 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz, 1H) ;
F
benzenesulfonamide; 30 mg 37 % 7,21 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,47
compound with (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,53 (d, J
trifluoro-acetic acid = 8,5 Hz, 1 H) ;
de 7,55 à 7,66 (m, 3H) ;
7,83 (d large, J= 8,5 Hz, 2H) ; 10,5
(s, 1H) ;
de 11,8 à 12,1 (m étalé, 1 H) .
F N-[4-(3-Amino-7- Exemple 21 mg spectre IR : KBr
~FF N-N 3382; 1659; 1336; 1200; 1154; 981;
F I fluoro-1H-indazol-6- 34 811; 727 & 515 cm"'
N
43 N yl)-phenyl]- RMN :
3,05 (s, 3H) ; 7,02 (dd, J = 7,0 et 8,5
methanesulfonamide; 33 mg 69 % Hz, 1H) ; 7,32 (d large, J = 8,5 Hz,
compound with 2H) ; 7,58 (d large, J = 8,5 Hz, 3H) ;
trifluoro-acetic acid 9,90 (s, 1H) ; de 11,7 à 12,5 (m très
étalé, 1 H ,
kpi ci N-[4-(3-Amino-7- Exemple 29 mg spectre IR : KBr
3358; 3192; 1678; 1611; 1471;
o fluoro-1 H-indazol-6 35 1339; 1205; 1140; 946; 806; 726 &
F
44 0 -yi)-phenyl]-C-(3,4- 600 cm ~
N RMN :
\ \ dichloro-phenyl)- 42 mg 72 % 4,62 (s, 2H) ;
methanesulfonamide; 7,01 (dd, J 7,0 et 8,5 Hz, 1H);
r N-N N compound with 7,29 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; de
7,53 à 7,59 (m, 5H) ;
trifluoro-acetic acid 7,64 (d, J = 8,5 Hz, 1H) ;
10,05 (s, 1 H) ;
de 11,7à 12,2 m étalé, 1H .
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0
sl o ~F Cyclopropanesulfonic Exemple 30 mg Spectre IR : KBr
N~ I F acid [4-(3-amino-7- 36 3396; 1660; 1200; 1148; 913; 809 &
F
\
45 fluoro-lH-indazol-6- 724 cm'
F N
N_N yl)-phenyl]-amide; 55 mg 93 % RMN :
compound with De 0,95 à 1,00 (m, 4H) ;
trifluoro-acetic acid 2,69 (m, 1 H) ;
7,02 (dd, J= 7,0 et 8,5 Hz, 1H) ;
7,35 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; de
7,54 à 7,60 (m, 3H) ;
9,88 (s, 1 H) ;
de 11,8 à 12,3 m très étalé, 1H .
ci
o N-[4-(3-Amino-7- Exemple 25 mg spectre IR : KBr
F 3414; 3254; 1657; 1532; 1344;
N Y F fluoro-IH-indazol-6 37
F 1190; 1163; 1044; 759 & 587 cm'
46 I \ -yl)-phenyl]-2-chloro
RMN:
F N_~ " benzenesulfon 42 mg 67 % 6,92 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz, 1H) ;
amide; compound with 7,20 (d large, J= 8,5 Hz, 2H) ; 7,47
trifluoro-acetic acid (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,52 (d, J
= 8,5 Hz, 1 H) ;
7,55 (m, 1 H) ;
de 7,62 à 7,68 (m, 2H) ;
8,11 (d large, J= 8,0 Hz, 1H) ; 10,8
(s, 1 H ) ;
de 11,7 à 12,2 m très étalé, 1 H.
N-[4-(3-Amino-7- Exemple 15 mg spectre IR: KBr
I I-~O o F fluoro-1 H-indazol-6 38 3379; 1672; 1529; 1337; 1202;
N F F 1163; 912; 800; 679; 595 & 577 csn
47 -yl)-phenyl]-3-chloro-
F N benzenesulfon RMN :
N-N amide; compound with 6,94 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz, 1H) ; 7,
trifluoro-acetic acid large, J= 8,5 Hz, 2H) ;
7,51 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,54 (
8,5 Hz, 1 H) ;
7,62 (t, J = 8,0 Hz, 1 H) ;
7,72 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ;
7,76 (d large, J = 8,0 Hz, 1 H) ;
7,81 (s large, 1H) ;
10,6 (s, 1H);
de 11,6 à 12,4 (m très étalé, 1H .
CA 02567744 2006-11-22
WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
0F 1-Methyl-1H- Exemple 25 mg spectre IR : KBr
N ~-o o F 3397; 3132; 1659; 1337; 1200; 1157;
N F imidazole-4-sulfonic 39
1118; 810;
48 acid [4-(3 amino-7- 725 &624 cm-'
F fluoro-lH-indazol- RMN :
N-N 6-yl}phenyl]-amide; 3,66 (s, 3H) ;
compound with 6,98 (dd, J = 7,0 et 8,5 Hz, 1H) ;
trifluoro-acetic acid 7,26 (d large, J = 8,5 Hz, 2H) ; 7,47
(d large, J= 8,5 Hz, 2H) ; 7,56 (d, J
= 8,5 Hz, 1H) ;
7,76 (d, J = 1 Hz, 1H) ;
7,88 (d, J = 1 Hz, 1H) ;
10,4 (s, 1 H) ; '
de 11,55 à 12,7 m très étalé, 1H .
Détermination de l'activité des composés - Protocoles expérimentaux
1. KDR
L'effet inhibiteur des composés est déterminé dans un test de
5 phosphorylation de substrat par l'enzyme KDR in vitro par une technique de
scintillation (plaqûe 96 puits, NEN).
Le domaine cytoplasmique de l'enzyme KDR humaine a été cloné sous forme
de fusion GST dans le vecteur d'expression baculovirus pFastBac. La
protéine a été exprimée dans les cellules SF21 et purifiée à environ 60 %
10 d'homogénéité.
L'activité kinase de KDR est mesurée dans 20 mM MOPS, 10 mM MgC12, 10
mM MnCI2, 1 mM DTT, 2.5 mM EGTA, 10 mM b-glycérophosphate, pH = 7.2,
en présence de 10 mM MgCI2, 100 pM Na3VO4, 1 mM NaF. 10 pI du
composé sont ajoutés à 70 pl de tampon kinase contenant 100 ng d'enzyme
15 KDR à 4 C. La réaction est lancée en ajoutant 20 pI de solution contenant
2 pg de substrat (fragment SH2-SH3 de la PLC y exprimée sous forme de
protéine de fusion GST), 2 pCi y 33P[ATP] et 2 pM ATP froid. Après 1 heure
d'incubation à 37 C, la réaction est stoppée en ajoutant 1 volume (100 pl) de
200 mM EDTA. Le tampon d'incubation est retiré, et les puits sont lavés trois
20 fois avec 300 pl de PBS. La radioactivité est mesurée dans chaque puits en
utilisant un compteur de radioactivité Top Count NXT (Packard).
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Le bruit de fond est déterminé par la mesure de la radioactivité dans quatre
puits différents contenant l'ATP radioactif et le substrat seul.
Un contrôle d'activité totale est mesuré dans quatre puits différents
contenant
tous les réactifs (y33P-[ATP], KDR et substrat PLCy) mais en l'absence de
composé.
L'inhibition de l'activité KDR avec le composé de l'invention est exprimée en
pourcentage d'inhibition de l'activité contrôle déterminée en l'absence de
composé.
Le composé SU5614 (Calbiochem) (1 pM) est inclus dans chaque plaque
comme contrôle d'inhibition.
2. Tie2
La séquence codante de Tie2 humain correspondant aux acides aminés du
domaine intracellulaire 776-1124 a été générée par PCR en utilisant le cDNA
isolé de placenta humain comme modèle. Cette séquence a été introduite
dans un vecteur d'expression baculovirus pFastBacGT sous forme de
protéine de fusion GST.
L'effet inhibiteur des molécules est déterminé dans un test de
phosphorylation de PLC par Tie2 en présence de GST-Tie2 purifiée à environ
80 % d'homogénéité. Le substrat est composé des fragments SH2-SH3 de la
PLC exprimée sous forme de protéine de fusion GST.
L'activité kinase de Tie2 est mesurée dans un tampon MOPS 20mM pH 7.2,
contenant 10 mM MgCl2, 10 mM MnCI2, 1 mM DTT, 10 mM de
glycérophosphate. Dans une plaque 96 puits FlashPlate maintenue sur glace,
on dépose un mélange réactionnel composé de 70 pI de tampon,kinase
contenant 100 ng d'enzyme GST-Tie2 par puits. Ensuite 10 pl de la molécule
à tester diluée dans du DMSO à une concentration de 10 % maximum sont
ajoutés. Pour une concentration donnée, chaque mesure est effectuée en
quatre exemplaires. La réaction est initiée en ajoutant 20 IaI de solution
contenant 2 pg de GST-PLC, 2 pM d'ATP froid et 1 pCi d'33P[ATP]. Après
1 heure d'incubation à 37 C, la réaction est stoppée en ajoutant 1 volume
(100pI) d'EDTA à 200 mM. Après élimination du tampon d'incubation, les
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puits sont lavés trois fois avec 300 pl de PBS. La radioactivité est mesurée
sur un MicroBeta1450 Wallac.
L'inhibition de l'activité Tie2 est calculée et exprimée en pourcentage
d'inhibition par rapport à l'activité contrôle déterminée en l'absence de
composé.
3. Auroral et Aurora2
L'effet inhibiteur de composés vis-à-vis des kinases Auroral et Aurora2 est
déterminé par un test enzymatique utilisant une détection de radioactivité.
L'activité kinase de Aurora 1 et Aurora 2 est évaluée par la phosphorylation
du substrat Numa-histidine en présence d'ATP radiomarqué ([33P]ATP) en
utilisant des plaques 96 puits Fiashplate où le nickel-chelate est fixé à la
sûrface de la microplaque. La quantité de phosphate 33P incorporé au
substrat NuMA est proportionnelle à l'activité de l'enzyme Auroral ou
Aurora2.
Protéines :
Les protéines sont produites dans le laboratoire de production de protéines
du groupe Sanofi-Aventis.
Aurora 1: complexe recombinant Aurora-B/INCENP-C3, purifié à environ
50% dont l'extrémité N-terminale de Aurora-B a été marquée à l'histidine.
Aurora 2: protéine recombinante entière comprenant une queue histidine en
N-terminal, a été exprimée dans E.coli et purifiée à plus de 82 %.
NuMA (protéine Nucléaire qui s'associe avec l'appareil mitotique) : fragment
de 424 acides amines, exprimé dans E.coli dont l'extrémité N-terminale a été
marquée à l'histidine et utilisé comme substrat pour les deux enzymes
Aurora.
Protocole :
Les microplaques utilisées sont des plaques Flash-Plate, 96 puits, nickel
chélate ( Perkin Elmer, modèle SMP107).
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Les produits à évaluer sont incubés dans un volume réactionnel de 100 pL
par puits, en présence de 10 nM de Aurora 1 ou Aurora 2, 500 nM de substrat
NuMA dans un tampon composé de 50 mM de Tris/HCI ( pH 7.5), 50 mM
NaCI, 5 mM MgC12 ( Aurora-B) ou 10 mM MgC12 ( Aurora=A) et 1 mM de
DTT, à 37 C.
Dans chaque puits, 80 pL du tampon d'incubation enzyme/substrat sont
distribués puis 10 pL du produit à évaluer, en concentrations variables. La
réaction est initiée par addition de lpM d'ATP final contenant 0.2 pCi de
[33P]ATP ( 10 pL). Après 30 minutes d'incubation, la réaction est arrêtée par
simple élimination du tampon réactionnel et chaque puits est lavé deux fois
avec 300 pi du tampon Tris/HCI. La radioactivité est alors mesurée dans
chaque puits à l'aide d'un appareil à scintillation, modèle Packard, Top
count.
L'activité enzymatique contrôle d'Aurora est exprimée par le nombre de, coup
par minute obtenu en 30 minutes après déduction du bruit de fond ( mélange
réactionnel ne contenant pas l'enzyme). L'évaluation des divers produits
testés est exprimée en pourcentage d'inhibition de l'activité Aurora par
rapport au contrôle.
4. CDK4/cycline Dl
Purification du complexe CDK4-HA/Cycline D1-(His)6 par IMAC (Immobilized
Metal Affinity Chromatography) :
Deux baculovirus recombinants portant les séquences humaines codant
respectivement pour CDK4-HA (fusion C terminale avec le tag
Hémaglutinine) et pour la Cycline D1-(His) 6 sont utilisés pour co-infecter
des
cellules d'insecte Sf9. Soixante heures après le début de la co-infection, les
cellules sont récoltées par centrifugation, puis congelées à-20 C jusqu'à leur
utilisation. Après décongélation dans le tampon A (HEPES 200 mM pH 7.0,
NaCI 50 mM, MgC12 2 mM, imidazole 25 mM, TCEP 1 mM, glycérol 10 %
(p/v), NaF 1 mM, Na3VO4 1 mM), agitation 1 h à 4 C, et centrifugation, le
complexe présent dans le surnageant de lyse est purifié par chromatographie
d'affinité sur Nickel (IMAC) et conservé à-80 C.
Essai Flashplate CDK4/CyclineDl en format 96 puits.
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Un essai en plaque "Flashpiate" (plaque à scintillation) de 96 puits
recouverts
de streptavidine est utilisé pour évaluer l'inhibition du complexe kinase
CDK4/cycline D1 par les produits de l'invention. Pour réaliser cet essai, le
substrat peptidique biotinylé, fragment de la protéine pRb, (Biotinyl-
RPPTLSPIPHIPRSPYKFPSSPLR-amide) est solubilisé à la concentration de
2 mM dans du tampon kinase (HEPES/NaOH 50 mM, NaCI 1 mM, MgCi2 5
mM, PH=7,5) afin de constituer une solution stock conservée à-20 C sous
forme d'aliquotes de 110 pl. Le jour de l'expérience, un aliquote de cette
solution est décongelé et dilué dans du tampon kinase contenant 1 mM de
dithiothréitol, ajouté extemporanément, de manière à obtenir une
concentration finale de peptide de 2.571 pM. Soixante-dix pI de cette solution
sont déposés dans chaque puits de la plaque Flashplate afin d'obtenir une
concéntration finale en substrat de 1.8 pM lors de la réaction enzymatique
conduite dans un volume final de 100 pi (cf. ci-après). Des dilutions
intermédiaires d'inhibiteurs (produits de I'invention) â_ différentes
concentrations sont préparées dans le DMSO à partir de solutions stock à 10
mM dans des tubes séparés. On réalise ainsi des dilutions à 1000 pM, 333,3
pM, 111,1 pM, 37,03 pM, 12,35 pM, 4711 pM et 1,37 pM. Un pi de chacune
de ces solutions (ou 1pl de DMSO pour les contrôles) est ensuite transféré
dans les puits de la plaque de test. Dans chaque puits, sont ensuite ajoutés
19 pI d'une solution d'un mélange d'adénosinetriphosphate (ATP) et
d'ATPy33P dans le tampon kinase à la concentration de 5,26 pM d'ATP total
et de 78.9 pCi/ml de 33P. La réaction enzymatique est déclenchée par
l'addition de 10 pI par puits d'une -solution de complexe CDK4/Cycline Dl à
250 nM dans le tampon kinase contenant 1 mM de dithiothréitol (ou 10 pl de
tampon kinase contenant 1 mM de dithiothréitol pour les blancs réactionnels).
A l'issue des différentes additioris le volume final dans chaque puits est de
100 pI, la concentration finale de substrat est de 1.8 pM, les concentrations
finales en inhibiteurs sont de 10 pM, 3,33 pM, 1,11 pM, 0,37 pM, 0,123 pM,
0,041 pM et 0,014 pM (selon la concentration de la dilution intermédiaire), la
concentration finale en ATP est de 1pM, la quantité finale de 33P est de
1.5pCi/puits, la concentration finale de complexe CDK4/Cycline Dl est de 25
nM.
Après l'additions de tous les réactifs, la plaque de test incubée à 30 C sous
agitation orbitale à 650 rpm. Après l'incubation, la plaque est lavée trois
fois
par 300 pI par puits de tampon PBS (Phosphate Buffered Saline, pH=7.4
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sans calcium ni magnésium, référence 10010-015, Gibco BRL).
L'incorporation de 33P au peptide substrat est mesurée par comptage par
scintillation avec un appareil Packard Topcount.NXT. L'activité inhibitrice
des
produits de l'invention est évaluée par détermination de la concentration
5 d'inhibiteur provoquant une diminution de 50 % de l'activité enzymatique
(IC50).
Résultats : Tableau 1 :
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IC 50 (nM)
Structure Exemple
KDR TIE2 Aurora2 CDK4
NHz
CF3 \N
o H 1 33 1785 113 nd
\ I ~ I i
N N
H H
F
NHZ
\ I H N 2 1000 15 200 132
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H
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H
N
I\ ~ N \ s 4 133 145
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0
H
N
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I ~ / H
F
HZN
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72
0 1873 2 37 55
H
\N S
CI H 5
CI F
S~N /
H
0 8 9 36 nd
H
N
1~\ S
CF3 'ÇF \ N
p H 6
H H
F
NHz 122 51 172 nd
CF3 \ \ N
p ~D~);F H 7 NN H H
F
NH2 6585 10 87 117
\
N
CI
O\\ -;_O H 8
CI N I F
H
0 693 46 1751 nd
F H
N
CF3 F I\ \ N \ S
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LN~N F
H H
F
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73
0 166 18 171 nd
H
N
CF3 I \ \ N ' S
N 10
N N
H H
F
H N0 37 11 185 nd
F F
F I / \N \/S 11
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H H
F F
H O 2771 36 14 nd
N
12
I\ H 2
~=/~ i~ / F
N N
H H
0 29 31 65 nd
NH
\N \ S
~ p I \ / H 13
O\N N II N F
H H
0
H 4216 50 23 nd
N
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\ N 14
Y H
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N / F
H H
F
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74
H N40 20 28 nd
N zs
/ \ \ N 15
II H
F F \ I N O J~N F
H H
F
0 19 3 142 nd
H
N
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H
N/ F 16
N N N
H H
N~j 29 8 60 nd
0
F O' \ I/ N' 17
II H
F F \ I NJ~N I i F
H H
F
H 77 26 346 nd
~
N
\ , ~J
F 0 NN 18
Il H
F NJ~N F
H H
F
NH2 329 231 92 nd
I \ ~
N
F/ ~ ~I H 19
F~ ~. NJ~N F
H H
F
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NH2 1000 502 63 nd
~N 0
p H 20
N lf, N F
J-
H H
NH2 85 174 68 nd
I \ ~
N
0 H 21
O ~ F
N N N
H H
NH2 1944 5850 143 nd
N
1 ~ \
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N' J-~ N F
H H
F
0 15 16 296 nd
H
N
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0 N' 23
II H
NJ~N F
H H
F
0 1000 229 10000 nd
N
F F - 0
F I \ ~ \ S
N /
O N' 24
N N NNN F
H H
F
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WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
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NH2 11 17 94 nd
N
'
N/ H
j r I/ F
N N N 25
H H
r
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0 1055 626 3378 nd
H
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H
NrN F
H H
F
H 0 79 143 335 nd
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H
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NrN F
H H
F
0 164 176 520 nd
Nr
F F H
I
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N~N F
H H
F
Voir composé 4 29 164 799 465 nd
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nd nd nd
0 490
si =o
HN
H
F N ~%
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nd nd nd
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F N S
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nd nd nd
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HN
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H
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33
F N / S
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nd nd nd
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F N-N O
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N ' H
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nd nd nd nd
ci
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il
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F H_N N
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nd nd nd
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HN
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nd nd nd
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\ ~ \ 37
F N S
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H
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b-sz=o
HN
38
Hi
F N S
H-N
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WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
79
nd nd nd
N 3647
~O
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HN
39
H
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H
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H-N
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HN
42
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H-N
CF3COOH
nd nd nd nd
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HN
43
F NHZ
H-N
CF3COOH
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nd nd nd nd
H
F N-N
1-S~ NH2 44
N
H CF3COOH
nd nd nd nd
ci ci
O
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HN 45
F NH2
H-N
CF3COOH
nd nd nd nd
..
s=o
HN
46
F ~ I NHZ
H-N
CF3COOH
nd nd nd nd
ci
si :=o
HN
47
F NH2
H-N
CF3COOH
nd nd nd nd
ci
~o
~ s=o
HN /
\ 48
I\ .
F NH2
N-N
CF3COOH
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WO 2006/003276 PCT/FR2005/001335
81
nd nd nd nd
~-
Pl
N S:=O
HN
49
F NH2
H-N
CF3COOH
is: intermédiaire de synthèse
nd: non déterminé
