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CA 02574345 2007-01-18
WO 2006/021647 PCT/FR2005/001826
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UTILISATION D'UN ACIDE GRAS POUR LA PRÉPARATION D'UNE.
COMPOSITION TOPIQUE DESTINÉE A L'APAISEMENT DES REACTIONS
INFLAMMATOIRES DUES AUX PIQURES D'HYMENOPTERES A VENIN
La présente invention a pour objet l'utilisation d'un acide gras pour la
préparation d'une composition topique destinée à l'apaisement des réactions
inflammatoires dues aux piqûres d'hyménoptères.
Les insectes secrétant des substances nocives pour les êtres humains
sont assez nombreux dans nos régions. Entre les guêpes, les frelons, les
bourdons, les fourmis et les abeilles les risques de piqûre ne sont pas
négligeables. Ces insectes sont appelés hyménoptères. Leur piqûre peut
provoquer des réactions locales ou générales non allergiques ou encore des
réaction allergiques locales ou généralisées.
Les réactions locales non allergiaues sont dues à une réaction
inflammatoire non spécifique. Une réaction habituelle après une piqûre
d'hyménoptère est constituée d'une douleur immédiate associée à une rougeur,
une démangeaison et un Cedème sur plusieurs centimètres. L'évolution de la
réaction est variable. Cette dernière peut durer quelques heures (trois en
moyenne) et ne dure en général pas plus d'un jour. Il existe dans ce type de
réactions des cas particuliers. Des piqûres entraînant des réactions non
allergiques sur des sites précis peuvent avoir des conséquences dramatiques.
Des piqûres dans la cavité buccale et en particulier au fond de la gorge
peuvent
entraîner des troubles respiratoires par l'intermédiaire d'un oedème local.
Enfin
des piqûres au niveau de 1'oril, sur la cornée, peuvent engendrer des
complications immédiates comme des abcès oculaires ou des perforations du
globe. Certaines complications peuvent apparaître plus tard : des cataractes
ou
des glaucomes.
Les réactions générales non allergigues se rencontrent lors
d'envenimation massive en cas de piqûres multiples. Ces réactions se
présentent sous forme de troubles digestifs avec diarrhées et vomissements,
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chute de tension parfois associée à des palpitations, des convulsions non
constantes et une atteinte des muscles pouvant entraîner une insuffisance
rénale (dans le cadre d'une rabdomyolyse). Ces réactions apparaissent
généralement après plus d'une trentaine de piqûres.
Les réactions allergiques concernent approximativement 1% de la
population. Elles peuvent être locales, régionales, généralisées ou retardées.
Elles sont généralement classées en plusieurs stades en fonction du degré de
gravité : réaction locale (réaction élargie par rapport à la réaction normale
mais
limitée à un membre) réaction régionale (réaction atteignant les articulations
du
membre piqué), réaction générale (cutanées à distance, manifestations
respiratoires, cedème de Quincke, asthme, manifestations digestives,
palpitations), choc anaphylactique (chute de tension s'ajoutant aux signes
décrits spontanément mortels).
Les hyménoptères regroupent de nombreuses espèces dont les
abeilles, les guêpes, les frelons, les fourmis. Bien que la majorité des
piqûres
de ces hyménoptères ne provoquent qu'une douleur modérée et une réaction
limitée et temporaire, elles peuvent se révéler dangereuses voire mortelles si
elles sont multiples, si elles se produisent dans la bouche, dans la gorge, ou
au
niveau des yeux, ou encore si le sujet piqué déclenche une réaction de type
allergique. Le sujet piqué ressent tout d'abord une douleur plus ou moins vive
en fonction du type d'insecte et de la quantité de venin injectée. La peau
autour
de la piqûre devient rouge et enflée. Le sujet ressent des démangeaisons plus
ou moins intenses.
Des travaux récents ont montré que le venin d'insecte et notamment le
venin d'abeille est une substance complexe comprenant un grand nombre de
composés actifs parmi lesquels l'histamine, la melittine, l'hyaluronidase et
la
phospholipidase A. La sensibilité à ces protéines du venin pourrait expliquer
certaines des réactions exposées ci-dessus.
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La demanderesse a ainsi trouvé de façon surprenante que ces acides
gras en particulier en C12-C24 diminuent considérablement la réaction
inflammatoire qui fait suite à une piqûre d'hyménoptère.
C'est pourquoi la présente invention concerne l'utilisation d'un acide
gras pour la préparation d'une composition topique ou injectable destinée à
l'apaisement des réactions inflammatoires dues aux piqûres d'hyménoptères.
Les acides gras utilisés dans la présente invention sont de préférence
les acides gras naturels, c'est-à-dire pouvant être obtenus à partir de
produit
naturels tels que les huiles, mais également des acides gras de synthèse
identiques ou non aux acides gras naturels.
En outre, les acides gras utilisables peuvent être des acides gras
saturés ou insaturés. On peut également envisager d'utiliser les sels ou
dérivés
pharmaceutiquement acceptables de ces acides gras qui sont compris dans la
dénomination acide gras.
Parmi les acides gras utilisés dans le cadre de la présente invention on peut
notamment citer les acides en C12 à C24, l'acide Laurique (n-Dodecanoïque),
Myristique (n-Tetradecanoïque), Palmitique (n-Hexadecanoïque), Stearique (n-
Octadecanoïque), Arachidique (n-Eicosanoïque), Behenique (n-Docosanoïque),
Lignocerique (n-Tetracosanoïque), Palmitoleique (cis-A9-Hexadecenoïque),
Oleique (cis- A9-Octadecenoïque), Linoleique (cis, cis- ~à9-, A12-
Octadecadienoïque), Linolenique (all-cis- O9-, 012- A15-Octadecatrienoïque),
Arachidonique (alI-cis- A5- O8- 0"- A14-Eicosatetraenoïque)
On préfère les acides gras polyinsaturés et l'acide linoléique et oléique
sont particulièrement actifs dans l'utilisation objet de l'invention.
Les acides gras ont été testés in vitro pour leur capacité à inhiber
l'activité de certains des composants pro-inflammatoires du venin d'abeille,
et in
vivo chez le rat dans des modèles d'oedèmes induits par du venin d'abeille.
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Les résultats de ces essais montrent que les acides gras peuvent être
utilisés pour la fabrication de compositions destinées au traitement local des
inflammations faisant suite aux piqûres d'hyménoptères à venin.
Dans le cas présent, la composition dont l'utilisation est l'objet de
l'invention peut en outre comprendre d'autres principes actifs notamment un
anesthésiant et/ou un antibiotique et/ou une substance anti-allergique ou anti-
inflammatoire.
Les acides gras peuvent être formulés sous toutes les formes adaptées
à l'administration topique, en association avec des excipients appropriés pour
permettre une administration d'une dose de 0,01 à 50 mg par piqûre
d'hyménoptère à venin. La dose pourra bien entendu varier en fonction de la
quantité de venin absorbée, du nombre de piqûres ou encore du type d'insecte.
Parmi les formulations galéniques qui peuvent être adaptées pour la
mise en ceuvre de l'invention on peut citer les pommades, les crèmes, les
gels,
les patchs, les poudres, les sprays ou encore les lotions. Une application
grâce
à un stick peut s'avérer particulièrement avantageuse pour les piqûres uniques
sur un membre par exemple. Si les muqueuses ou encore les yeux sont atteints
on préfère respectivement une formulation sous forme d'un spray ou d'un
collyre.
Dans certains cas on préférera administrer la composition faisant l'objet
de la présente invention par voie d'injection locale. Les substances actives
des
compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être dissoutes ou
mises en suspension dans un liquide injectable stérile pharmaceutiquement
acceptable, tel que l'eau stérile, un solvant organique stérile ou un mélange
de
ces deux liquides pour une administration par voie locale, pour permettre une
administration d'une dose de 0,001 à 1 mg par piqûre d'hyménoptère à venin.
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L'invention sera mieux comprise à la lecture des exemples qui suivent et
qui se réfèrent aux figures ci-après :
Fig. 1: illustre le pourcentage d'inhibition de l'activité PLA 2 du venin
5 d'abeille en fonction de la concentration en acide qui est utilisé pour:
1.A - L'acide linoléique (exemple 1)
1.B - L'acide oléique (exemple 1)
Fig. 2: illustre l'effet de l'acide oléique et linoléique sur l'augmentation
du volume de la patte de rat dans un modèle d'inflammation, en fonction du
temps après injection du venin d'abeille (exemple 2- expérience 1).
Fig. 3: illustre l'effet de l'acide oléique et linoléique l'augmentation du
volume de la patte de rat dans un modèle d'inflammation, en fonction du temps
après injection du venin d'abeille (exemple 2 - expérience 2)
Fig. 4: illustre l'effet de l'acide oléique et linoléique l'augmentation du
volume de la patte de rat dans un modèle d'inflammation, en fonction du temps
après injection du venin d'abeille (exemple 2 - expérience 3)
Exemple I: Effets inhibiteurs in vitro de l'acide linoléique et de l'acide
oléique sur l'activité phospholipase A2 de venin d'abeille (PLA2),
composante inflammatoire majeure de ce venin :
L'effet de l'acide linoléique et oléique sur l'activité PLA2 est mesuré selon
la
méthode d'extraction à l'hexane décrite par Katsumata, M. Gupta, G. and
Goldman AS., (1986), Anal. Biochem. 154 (2), 676-681. L'activité PLA2 est
déterminée en utilisant un substrat radioactif, le L-a-dipalmitoyl-[2,9,10 (N)-
3H-
palmitoyl]-phosphatidylcholine. La réaction est réalisée dans 1 mi de tampon
glycine/NaOH, pH 9, contenant 2.2 mM de désoxycholate, 0.11 pCi de
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dipalmitoyl-PC et 32 mU/ml de PLA2 de venin d'abeille. Après 20 minutes
d'incubation, la réaction est arrêtée en ajoutant 0.2 ml d'une solution Triton
X-
100/EDTA, puis le produit de la réaction, l'acide paimityque radiomarqué, est
extrait par une solution d'hexane contenant 0.1% d'acide acétique et 0.7g/mI
de Na2SO4. La radioactivité des extraits est déterminée à l'aide d'un compteur
à scintillation liquide. Les résultats représentent la moyenne SEM des
valeurs
en CPM obtenues dans deux expériences indépendantes.
Les figures 1A et 1B illustrent le pourcentage d'inhibition de l'activité PLA2
(axe
vertical) en fonction de la concentration d'acide gras utilisé (axe
horizontal).
Ces résultats démontrent que l'acide linoléique et oléique inhibent de manière
dose dépendante l'activité enzymatique de la PLA2 de venin d'abeille.
Exemple II :
Activité de l'acide oléique et linoléique dans un modèle d'ordème
inflammatoire provoqué par le venin d'abeille chez le rat (Rabinovich,
GA.Sotomayor CE., Riera, CM., Bianco I. and Correa SG. (2000), Eur. J.
Immunol. 30, 1331-1339; Chen, J., Luo C., Li, HL. And Chen HS, (1999), Pain,
83, 67-76)
Expérience 1 :
Le venin d'abeille (20pg/mi dans NaCI 0.9%) est incubé, à température
ambiante, en présence ou non d'acide linoléique (32 M). 30 minutes
après le début de l'incubation, les solutions (25p1) sont injectées par voie
sous cutanée à des rats Sprague Dawley (110-140g), au niveau de la
face supérieure du pied. L'oedème est mesuré à l'aide d'un
pléthysmomètre 5 - 10 - 15 - 20 - 30 - 60 et 90 minutes après
l'injection. Les résultats représentent la moyenne SEM de 5 animaux.
Les comparaisons statistiques sont réalisées par un test de t, dont le
groupe témoin est constitué par les animaux ayant reçut le venin seul.
* P< 0.05, *** P< 0.005. Les résultats sont représentés en figure 2.
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Expérience 2 :
120 et 30 minutes avant l'injection du venin d'abeille (20pg/mI dans NaCI
0.9%) des rats Sprague Dawley (110-140g) sont traités ou non, sur le
dessus du pied, par application topique d'acide linoléique. L'oedème est
mesuré à l'aide d'un pléthysmomètre 5 - 10 - 15 - 20 et 30 minutes
après l'injection sous cutané du venin d'abeille au niveau de la face
supérieure du pied de l'animal. Les résultats (figure 3) représentent la
moyenne SEM de 20 animaux. Les comparaisons statistiques sont
réalisées par un test de t, dont le groupe témoin est constitué par les
animaux traités par le véhicule (acétone).
* P< 0.05, ** P< 0.01, *** P< 0.005
Expérience 3 :
120 et 30 minutes avant l'injection du venin d'abeille (20iag/ml dans NaCI
0.9%) des rats Sprague Dawley (110-140g) sont traités ou non, sur le
dessus du pied, par application topique d'acide oléique. L'oedème est
mesuré à l'aide d'un pléthysmomètre 5 - 10 - 15 et 20 minutes après
l'injection sous cutané du venin d'abeille au niveau de la face supérieure
du pied de l'animal. Les résultats (figure 4) représentent la moyenne
SEM de 5 animaux. Les comparaisons statistiques sont réalisées par un
test de t, dont le groupe témoin est constitué par les animaux traités par
le véhicule (acétone). * P< 0.05.
