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UTILISATION DE LA FUMAGILLINE ET DE SES DERIVES POUR
AUGMENTER LA BIODISPONIBILITE DES LACTONES
MACROCYCLIQUES
-------------------------------------------------------------------------------
------------------
L'invention concerne l'utilisation de la fumagilline, et de ses dérivés
analogues, en
tant qu'inhibiteurs des transporteurs cellulaires, tels que les transporteurs
ABC, et plus
particulièrement de la P-glycoprotéine, afin d'augmenter la biodisponibilité
de principes
actifs susceptibles d'être utilisés dans le traitement de pathologies telles
que les cancers ou
les maladies parasitaires, et en particulier afin d'augmenter la
biodisponibilité des lactones
macrocycliques.
Les lactones macrocycliques ou LM, telles que les avermectines et
milbemycines,
sont des molécules antiparasitaires à usage vétérinaire très performantes
(actives contre les
endo et ectoparasites, longue rémanence, faible toxicité).
Les avernlectines sont les composés de formule générale suivante :
o1~
R2 ,, O
O ,,0
H H
O ~ -
H ~O
I 0
IoH
o ~
H OH
L'ivermectine Bla est le composé de formule précédente avec X-CH2CH2- et
R1= CH(CH3)CH2CH3 ;
l'abamectine Bia est le composé de formule précédente avec X-CH=CH- et R1=
CH(CH3)CHaCH3 ;
la doramectine est le composé de formule précédente avec X-CH=CH- et R1=
cyclohéxyle ;
l'éprinomectine est le composé de formule précédente avec X=-CH=CH-, R1=
CH(CH3)CH2CH3, et R2 = NHCOCH3.
Une autre avermectine, la sélamectine, est le composé de formule suivante :
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o0I la
Ho~,
CHJ ~Ctia
II~C O ~~Oi, 0
HaG~'' (
0
oti -
0 ~ C~,t3
li
NoH
Les milbemycines constituent une autre famille de LM. Parmi les milbemycines,
la
némadectine est le composé de formule suivante :
O
H
O
H O
O
O
O HI
H
O
et la moxidectine est le composé de formule suivante
H O
\ _O
H N
~' -
O O
O
O
O HI
H
0
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Les avantages des LM sont à l'origine d'une large utilisation chez de nombreux
mammifères (bovins, ovins, câprins, porcs, équins, chiens et chats).
L'iverinectine 'est
aussi tttilisée en médecine hlunaine pottr le traitement de l'Oncochercose (de
Silva et al.,
1997). La place des lactones macrocycliques dans le marché des médicaments
vétérinaires
est économiquement importante.
Cependant, en raison d'un usage non adapté (utilisation de posologie ou de
voies.
non préconisées et / ou utilisation chez des espèces pour lesquelles' il
n'existe pas
d'autorisation de mise sur le marché), des phénomènes de résistance
parasitaire sont
apparus chez de nombreuses espèces. En raison de l'absence de développement de
nouvelles molécules, il est primordial d'optimiser l'utilisation des lactones
macrocycliques (LM) en respectant leur sécurité d'usage. L'activité
antiparasitaire de ces
composés est directement liée à la concentration de principe actif dans
l'organisme
animal. Ainsi, l'optimisation de leur efficacité passe par l'augmentation de
la quantité de
médicainent chez l'animal hôte après administration.
Des méthodes physiologiques et pharmacologiques ont été utilisées pour
augmenter la biodisponibilité des LM telles que la diminution de la ration
alimentaire
chez le mouton (Ali and Hennessy, 1996), la mise à jeun chez des chevaux
(Alvinerie et
al., 2000), la co-administration de médicaments (Lifschitz et al., 2002) ou de
composé
naturel (Dupuy et al., 2003).
Parmi les nombreux facteurs pouvant moduler la biodisponibilité des LM, la P-
glycoprotéine ou Pgp est reconnue comme un des éléments majeurs aussi bien sur
des
cellules (Dupuy et al., 2001b), chez l'animal entier (Alvinerie et al., 1999;
Dupuy et al.,
2003; Lifschitz et al., 2002) que chez les parasites (Xu et al., 1998). En
effet, ce
transporteur membranaire de la famille des e< ATP binding cassette
transporters ,
impliqué dans les mécanismes, de polychimiorésistances (résistances
multidrogues ou
MDR), contrôle l'efflux actif de nombreux composés dont l'ivermectine et la
moxidectine. Cette Pgp est présente au niveau de la barrière hémato-méningée
où elle
protége le système nerveux central de la neurotoxicité de l'ivermectine
(Roulet et al.,
2003; Schinkel et al., 1994). L'implication de la Pgp dans l'élimination des
LM par les
voies biliaires et intestinales, voies majeures d'élimination, a été démontrée
(Laffont et
al., 2002).
Les hépatocytes de rat en culture primaire ont été utilisés pour évaluer
l'aptitude
de différents composés à augmenter la quantité intracellulaire de 14C
moxidectine. Dans ce
modèle, le verapamil (inhibiteur reconnu de la Pgp) ou la quercetine (un
flavonoïde
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naturel qui interfère avec la Pgp) augmentent de manière significative la
quantité de 14C
moxidectirie dans les hépatocytes de rat (Dupuy et al., 2001b; Dupuy et al.,
2003). De
même, le kétoconazole majore de façon importante la quantité intracellulaire
de 14C
moxidectine, effet à relier à son action inhibitrice concomitante sur les Pgp
et les
cytochromes P450, deux systèmes présents dans les hépatocytes.
De plus, la modulation de la Pgp est également utile pour augmenter la
biodisponibilité de principes actifs différents des LM. La modulation de la
Pgp est par
exemple utile dans le cadre du traitement du cancer, afin d'augmenter la
biodisponibilité
de principes actifs anticancéreux.
Ainsi, plusieurs agents modulateurs de la Pgp ont été utilisés récemment pour
traiter des leucémies aiguës myéloblastiques (LAM) et des leucémies aiguës
lymphoblastiques (LAL) chez l'homme (Roos 2004), comme cela est résuiné dans
le
tableau 1 ci-dessous
Tableau 1= utilisation de composés modulant l'activité de la Pgp pour traiter
des
leucémies aiguës myéloblasti ues (LAM) et des leucémies ai ug ës
lymphoblastiques
(LAL) chez l'homme (Roos 2004)
Type de cancer Traitement composés modulant l'activité Pgp
LAM Daunorubicine Cyclosporine
LAM Etoposide, mitoxantrone Cyclosporine
LAM Etoposide, daunorubicine Valspodar (PSC 833)
LAM, LAL Mitoxantrone Quinine
De façon surprenante, les inventeurs ont découvert que la fumagilline et ses
dérivés permettent d'augmenter la biodisponibilité des LM, ce qui apporte une
solution
technique nouvelle au problème décrit ci-dessus.
La fumagilline est produite par le champignon Aspergillus fianaigatus, active
in
vivo sur la microsporidiose des abeilles et in vitro sur les spores
d'Enterocytozoon
Bieneusi (Fumidil B - CEVA Santé Animale). Chez l'homme, la fumagilline est
utilisée
depuis quarante ans pour traiter l'amibiase intestinale et est actuellement
prescrite en
application locale pour la kératoconjonctivite à microsporidie. De plus, la
fum.agilline et
ses analogues sont des inhibiteurs de l'angiogénèse par inhibition de la
prolifération
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cellulaire endothéliale (Pyun et al., 2004). En raison de leurs propriétés
antiangiogéniques,
ces composés sont utilisés en médecine humaine pour le traitement des cancers.
L'invention a principalement pour but de fournir des compositions permettant
d'augmenter la biodisponibilité de principes actifs dans l'organisme humain et
animal, et
5 ainsi d'améliorer les traitements existants, notamment dans le cadre des
maladies
parasitaires ou cancéreuses.
L'invention a plus particulièrement pour but de fournir des compositions
permettant d'augmenter la biodisponibilité des lactones macrocycliques et des
agents anti-
tumoraux.
L'invention concerne principalement l'utilisation d'au moins un composé de
formule générale (I) suivante :
O RI R3
R2
p (1)
R&
R5
dans lequel :
- Rl est H ou un alkyle en C1_8linéaire ou ramifié ;
- R2 est H, un alkyle en C1_4, un aryle, un aryle alkyle en C1_4, un
cycloalkyle, un
cycloalkyle alkyle en C1_4, ou un groupe alcényle de 1 à 10 atomes de carbone
tel qu'un groupe CH2R6, dans lequel R6 est un 2-méthyl-1-propényle ou un
isobutyle éventuellement substitué par un groupe hydroxyle, amino, (alkyle en
Cl_3)-amino ou di(alkyle en C1-3)-amino
- R3 est un atome H, un alkyle en C1_4, ou un aryle en C5_8 qui est
éventuellement
substitué par un ou plusieurs halogènes, tel que F, Cl, I, Br, un alcoxyle en
C1_4
ou un alkyle en Cl_4 ;
- R4 est un atome H, un OH ou un alcoxyle en C1_4 ;
- R5 est de la forme OR7, auquel cas la liaison
représente une liaison simple, ou R5 est de la forme N
R8 Rg
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auquel cas la liaison
représente une liaison en a ou (3 ;
- R7 est choisi parini le groupe composé de :
= l'atome H,
= un groupe alcanoyle ou alcènoyle en C1_ lo, saturé ou insaturé, qui
peut être substitué notamment par un à trois substituants choisis
parmi amino, (alkyl en C1_6)-amino, di-(alkyl en C1_6)-amino, nitro,
halogéno, hydroxy, alcoxy en C1_6, cyano, carbamyle, carboxyle,
(alcoxy en C1_6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy en CI_6), phényle
éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parini
les atomes d'halogène, les alkyles en C1_6, les alcoxy en C1_6 les
alkyles halogénés et nitro), et les groupes hétérocycliques
aromatiques,
= un groupe aroyle qui peut être substitué par un atome d'halogène
ou par un alkyle en C2_6, amino, hydroxy, alcoxy en C1_6, cyano,
carbamyle ou carboxyle,
= un hétérocyle-carbonyle qui peut être substitué par un atome
d'halogène ou par un alkyle en C2_6, amino, hydroxy, alcoxy en
C1_6, cyano, carbamyle ou carboxyle,
= un carbamyle, qui peut être substitué par un ou deux substituants
choisis parmi les groupes alkyles en C1_6, eux-mêmes pouvant être
substitués par un groupe mono- ou di-(alkyle en C1_6)-amino,
alcanoyle en C1_6, chloroacétyle, dichloroacétyle,
trichloroacétyle, (alcoxy en C1_6) - carbonyle - méthyle, carboxy-
méthyle, phényle éventuellement substitué (par un à cinq
substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en
C1_6, les alcoxy en C1_6 les alkyles halogénés et nitro), naphtyle ou
benzoyle,
. un alkyle en C1_I0 à chaîne droite ou ramifiée, qui peut
éventuellement être époxydé et / ou substitué notamment par un à
trois substituants choisis parmi amino, (aikyl en C1_6)-amino, di-
(alkyl en C1_6)-amino, nitro, halogéno, 'hydroxy, alcoxy en C 1_6,
cyano, carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1_6)-carbonyle, carboxy-
(alcoxy en C1_6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq
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substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les all(yles en
C1_6, les alcoxy en C1_6 les alkyles halogénés et nitro), et les
groupes hétérocycliques aromatiques,
= un alcényle en C1_lo à chaîne droite ou ramifiée,
= un alcynyle en CI_lo à chaîne droite ou ramifiée,
= un résidu d'hydrocarbure cycloaliphatique,
= tu1(ainine cyclique)-carbonyle,
= un benzène-sulfonyle, qui peut éventuellement être substitué par un
à trois substituants choisis parmi les allcyles en C1_6 et les atomes
d'halogène,
= un C1_to alkyle-sulfonyle, qui peut éventuellement être substitué par
un à trois substituants choisis parmi amino, (allcyl en C1_6)-amino,
di-(alkyl en C1_6)-amino, nitro, halogéno, alcoxy en C1_6, cyano,
carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1_6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy
en C1_6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq
substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en
C1.6, les alcoxy en C1_6 les alkyles halogénés et nitro), et les
groupes hétérocycliques aromatiques,
= un sulfamyle, qui peut éventuellement être substitué par un ou deux
substituants choisis parmi les alkyles en Cl_6 et un phényle
éventuellement substitué (par un à cinq substituants choisis parmi
les atomes d'halogène, les alkyles en C1.6, les alcoxy en C1_6 les
alkyles halogénés et nitro),
= un alcoxy-carbonyle, qui peut éventuellement être substitué par un
à trois substituants choisis parmi amino, (alkyl en C1_6)-amino, di-
(alkyl en C1_6)-amino, ni.tro, halogéno, alcoxy en C1_6, cyano,
carbamyle, carboxyle, (alcoxy en C1_6)-carbonyle, carboxy-(alcoxy
en Ci_6), phényle éventuellement substitué (par un à cinq
substituants choisis parmi les atomes d'halogène, les alkyles en
C1_6, les alcoxy en C1_6 les alkyles halogénés et nitro), et les
groupes hétérocycliques aromatiques,
= un phénoxycarbonyle, qui peut éventuellement être substitué par un
à trois substituants choisis parmi les atomes d'halogène et les
alkyles en C1_6,
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= C(O)-NH-C(O)-CH2-Cl;
- R8 et R9 représentent chacun un atome H, un groupe hydrocarboné
éventuellement substitué ou un groupe acyle éventuellement substitué, ou bien
R8 et Rg peuvent constituer un cycle conjointement avec l'atome d'azote
adj acent ;
en tant qu'adjuvant pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la
biodisponibilité de principes actifs, notainment de principes actifs
antiparasitaires ou
anticancéreux, et donc de potentialiser leurs effets, ces principes actifs
étant susceptibles
d'être reconnus et de se lier à des transporteurs cellulaires pour être
transportés hors de ces
cellules sans pouvoir atteindre leur cible thérapeutique intracellulaire,
lesdits transporteurs
étant présents dans les cellules de l'organisme huinain ou animal auquel sont
administrés
lesdits principes actifs, et, le cas échéant, dans les cellul'es des parasites
contre lesquels ces
principes actifs sont administrés.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de
composés de formule (I) choisis parmi les composés de formule (Ia) suivante :
O R1 Rs
O R2
Ra O (Ia)
O \ \ \ \
OH
O
dans laquelle Rl, R2, R3, et R4 sont tels que définis ci-dessus.
L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée de
composés de formule (I) choisis parmi les composés de formule (Ib) suivante :
O Ri
O R2
OCH3 O (Ib)
O \ \ \ \
OH
O
dans laquelle :
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- Rl est H ou un alkyle en C1_$ linéaire ou ramifié ;
- R2 est H, un alkyle en C1_4, ou un groupe alcényle de 1 à 10 atomes de
carbone
tel qu'un groupe CH2R6, dans lequel R6 est un 2-méthyl-1-propényle.
L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée du
composé de formule (I) ci-dessus correspondant à la fumagilline de forinule
(II) suivante :
O CH3
C O
(II)
OCH3 O
O \ \ \
1-1 1.11 OH
O
Par adjuvant on entend un composé qui entre dans une composition
pharmaceutique pour un médicament, afin de potentialiser , c'est à dire de
renforcer et /
ou rendre possible et / ou de rendre plus rapide l'action du composé de base,
ledit
composé de base étant encore appelé ici principe actif .
Par biodisponibilité d'un principe actif on entend la quantité de principe
actif
effectivement présente dans un organisme humain ou animal, et / ou la quantité
de
principe actif effectivement présente dans une partie déterminée d'un
organisme humain
ou animal, en particulier dans un ou des organe(s) déterminé(s) d'un organisme
humain ou
animal, et en particulier dans un sous-ensemble de cellules d'un ou plusieurs
type(s)
déterminé(s) d'un organisme humain ou animal. La biodisponibilité peut
également
désigner la proportion du principe actif administré à un organisme humain ou
animal qui
est effectivement active ou susceptible d'activité dans ledit organisme.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée des
composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (Ia),
(Ib), et de
la fumagilline de formule (II), pour la préparation d'un médicament destiné à
augnienter la
biodisponibilité de principes actifs, plus particulièrement de principes
actifs
antiparasitaires, susceptibles d'être reconnus et de se'lier à des
transporteurs cellulaires
ATP dépendants, encore désignés transporteurs ABC (ATP Binding Cassette) ou
transporteurs à séquences de liaison à l'ATP, ces transporteurs étant décrits
notamment
dans Dean et al. (2001), Genome Research, 11 : 1156-1166, et Dean et al.
(2001), Journal
of Lipid Research, 42 :1007-1017.
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L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée des
composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (la),
(Ib), et de
la fiunagilline de formule (II), pour la préparation d'un médicament destiné à
augmenter la
biodisponibilité de principes actifs, plus particulièrement de. principes
actifs
5 antiparasitaires, susceptibles d'être reconnus et de se lier à des
transporteurs ABC choisis
parini la P-glycoprotéine (Pgp, encore désignée ABCB1), les transporteurs ABCC
(ABCC1 à 8, encore désignés MRP1 à 8), ou les transporteurs ABC G2.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée des
composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (la),
(Ib), et de
10 la fitmagilline de formule (II), en tant qu'inhibiteurs de la fonction de
transport des
transporteurs cellulaires par interaction entre ces composés et ces
transporteurs, pour la
préparation d'un médicament destiné à augmenter la biodisponibilité de
principes actifs,
plus particulièrement de principes actifs antiparasitaires, susceptibles
d'être reconnus et de
se lier à ces transporteurs.
L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée des
composés de formule (I) ci-dessus, et notamment des composés de formule (la),
(Ib), et de
la fumagilline de formule (II), en tant qu'inhibiteurs de la fonction de
transport de la Pgp
par interaction entre ces composés et la Pgp, pour la préparation d'un
médicament destiné
à augmenter la biodisponibilité de principes actifs, plus particulièrement de
principes
actifs antiparasitaires, susceptibles d'être reconnus et de se lier à la Pgp.
De manière avantageuse, les composés de formule (I) susmentionnée, sont
utilisés
en tant qu'adjuvants pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter
la
biodisponibilité de principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux choisis
parmi les
substrats des transporteurs cellulaires, et plus particulièrement des
substrats des ABC,
transporteurs définis ci-dessus, notamment de la Pgp, dans le cadre du
traitement de
pathologies parasitaires ou cancéreuses.
Avantageusement les composés de formule (I) susmentionnée utilisés en tant
qu'adjuvants pour la préparation d'un médicament destiné à augmenter la
biodisponibilité
de principes actifs antiparasitaires ou anticancéreux dans le cadre du
traitement de
pathologies parasitaires ou cancéreuses sont choisis parmi les composés de
formule (Ia),
(Ib), et la fumagilline de formule (II).
De préférence, le composé de formule (I) susmentionnée utilisé en tant
qu'adjuvant
pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de pathologies
parasitaires ou
cancéreuses est la fumagilline de formule (II).
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De manière avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de forinule
(I)
ci-dessus, et plus particulièrement des composés de formule (la), (Ib), et de
la fiunagilline
de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs
antiparasitaires sont choisis
parmi les lactones macrocycliques, telles que les avermectines et les
milbemycines.
De manière avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de formule
(I)
ci-dessus, et plus particulièrement des composés de formule (Ia), (Ib), et de
la fiunagilline
de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs
antiparasitaires sont choisis
parmi' les avermectines, telles que l'ivermectine, l'abainectine, la
doramectine,
l'éprinomectine ou la sélamectine, dans le cadre du traitement des maladies
parasitaires
endoparasitaires et ectoparasitaires.
De manière avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de formule
(I)
ci-dessus, et plus particulièrement des composés de forinule (la), (Ib), et de
la fitmagilline
de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs
antiparasitaires sont choisis
parmi les milbemycines, telles que la moxidectine ou la némadectine, dans le
cadre du
traitement des maladies parasitaires endoparasitaires ou ectoparasitaires.
Les maladies endoparasitaires concernent les affections par parasites
internes,
tandis que les maladies ectoparasitaires concernent les affections par
parasites externes.
Parmi les maladies parasitaites avantageusement traitées par les LM et
entraint
donc dans le cadre de l'invention on compte notamment :
- les strongyloses gastro-intestinales (adulte et larve L3 ou L4) :
Haemonchus,
Ostertagia, Trichostrongylus, Cooperia, Oesophagostonum, Nematodirus,
Bunostonum ;
- les strongyloses pulmonaires : Dictyocaulus viviparus ;
- les hypodermoses (tous les stades larvaires) : Hypoderma bovis et lineatum ;
- les gales sarcoptiques et psoroptiques ;
- les phtyrioses ;
- la filariose ;
- l'onchocercose.
De manière également avantageuse, l'utilisation susmentionnée des composés de
formule (I) ci-dessus, et plus particulièrement des composés de formule (Ia),
(Ib), et de la
fumagilline de formule (II), est caractérisée en ce que les principes actifs
anticancéreux
sont choisis parmi les substrats des transporteurs cellulaires, et plus
particulièrement des
substrats des ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment de la Pgp, dans
le cadre du
traitement des cancers, et plus particulièrement des cancers résistants aux
chimiothérapies.
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Par cancers résistants aux chimiothérapies on entend cancers qui en
réponse
aux traitements chimiques surexpriment des transporteurs celhilaires, tels que
les ABC-
transporteurs, notainment la P-gp. En effluant le principe actif hors de la
cellule, ces
transporteurs diminuent ou neutralisent l'effet thérapeutique attendu.
Les principes actifs ' anticancéreux qui sont des substrats des transporteurs
cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement de la Pgp, sont notamment
:
- les antibiotiques antitumoraux de type anthracycline, et notamment :
* la daunurubicine et la doxorubicine (utilisées dans le.traitement des
leucémies aiguës, des leucémies myéloïdes chroniques en
transformation aiguë, des lymphomes hodgkiniens et non
hodgkiniens),
* la mitomycine C (utilisée dans le traitement des cancers du sein, de
l'estomac, de l' sophage, de la vessie),
* la mitoxantrone (utilisée dans le traitement de la leucémie myéloïde
ou lymphocytaire aiguë, du cancer du sein, de la prostate, de
l'ovaire),
* l'adriamycine (utilisée dans le traitement des leucémies aiguës, des
leucémies myéloïdes chroniques en transformation aiguë, des
lymphomes hodgkiniens et non hodgkiniens),
* l'actinomycine D (utilisée dans les mêmes cas que l'adriamycine),
- les taxanes, et notamment :
* le docétaxel (utilisé dans le traitement des lymphomes, du cancer du
sein, de I'Cesophage, de l'estomac, de la vessie, de la prostate, de
l'utérus),
* le paclitaxel (utilisé dans le traitement du cancer de l'ovaire, du
poumon, du sarcome de Kaposi lié au SIDA),
- les alcaloïdes, et notamment :
* la vinblastine (utilisée dans le traitement du cancer du sein, de la
vessie, des testicules et des lymphomes),
* la vincristine (utilisée dans le traitement de la leucémie, des
lymphomes, des sarcomes, du cancer du poumon, de l'utérus, du
cerveau),
- les épipodophyllotoxines, et notamment :
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* l'étoposide (utilisé dans le traitement du cancer des testicules et de
certains types de cancer du poumon),
* l'irinotécan (utilisé dans le traitement du cancer colorectal),
* le téniposide (utilisé dans le traitement du cancer du poumon, du
cerveau, du sein),
* le topotécan.
Un atitre aspect de l'invention concerne une composition pharinacetttique
caractérisée en ce qu'elle comprend au moins tin composé de formule (I) tel
que défini ci-
dessus en association avec un ou plusieurs principes actifs susceptibles
d'être reconnus et
de se lier à des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus
particulièrement à des
ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment à de la Pgp, pour être
transportés hors
des cellules de l'organisme humain ou animal.
L'invention a plus particulièrement pour objet une composition pharmaceutique
telle que définie ci-dessus, comprenant au moins un composé de formule (I)
choisi parmi
les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus.
Selon un mode de réalisation préféré, ladite composition pharmaceutique est
caractérisée en ce que les principes actifs en association avec un composé de
formule (I)
tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement avec un composé de formule
(Ia), (Ib), ou
la fumagilline de formule (II), sont des principes actifs antiparasitaires ou
anticancéreux.
Selon un mode de réalisation plus particulier, ladite composition
pharmaceutique
est caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de formule (I) tel
que défini
ci-dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou la
fumagilline de
formule (II), en association avec des principes actifs antiparasitaires
choisis parmi les
lactones macrocycliques, telles que les avermectines et les milbemycines.
Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, ladite composition
pharmaceutique est caractérisée en ce que les principes actifs
antiparasitaires sont choisis
parmi les avermectines, telles que l'ivermectine, l'abamectine, la
doramectine,
l'éprinomectine ou la sélamectine.
Selon un autre mode de réalisation particulièrement préféré, ladite
composition
pharmaceutique est caractérisée en ce que les principes actifs
antiparasitaires sont choisis
parmi les milbemycines, telles que la moxidectine ou la némadectine.
De manière avantageuse, la composition pharmaceutique susmentionnée est
caractérisée en ce qu'elle contient au moins un composé de formule (I) tel que
défini ci-
dessus, et plus particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou la
fumagilline de
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formule (II), à un dosage approprié pour tule administration journalière
d'environ 0,2 à
environ 2 mg/kg.
De manière avantageuse, la composition pharmaceutique susmentionnée est
caractérisée en ce que le principe actif antiparasitaire, et le composé de
formule (I) tel que
défini ci-dessus, et plus particulièrement le composé de formule (Ia), (Ib),
ou la
fumagilline de formule (II), sont présents dans rapport en poids compris entre
environ 1:1
et environ 1:100, en particulier entre environ 1:1 et environ 1:20.
En général le composé de formule (I) tel que défini ci-dessus,, et plus
particulièrement le composé de formule (Ia), (Ib), ou la fumagilline de
formule (II), doit
en effet être dosé en excès par rapport au principe actif, car son affinité
pour les
transporteurs cellulaires susmentionnés, notamment la Pgp, est inférieure à
celle du
principe actif.
L'invention concerne plus particulièrement une composition pharmaceutique
telle
que définie ci-dessus, comprenant de la fumagilline de formule (II)
susmentionnée, en
association avec un ou plusieurs principes actifs antiparasitaires tels que
définis ci-dessus.
Selon un autre mode de réalisation préféré, la composition pharmaceutique
susmentionnée est caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un composé de
formule
(I) tel que défini ci-dessus en association avec des principes actifs
anticancéretix choisis
parmi les substrats des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus
particulièrement
des substrats des ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment de la Pgp ;
de
préférence cette composition pharmaceutique comprend au moins un composé de
formule
(I) choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus
; cette
composition est caractérisée de façon particulièrement avantageuse en ce
qu'elle contient
au moins un composé de formule (I), (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus à un
dosage
approprié pour une administration journalière d'environ 0,2 à environ 2 mg/kg
; et de
manière encore plus avantageuse, cette composition pharmaceutique est
caractérisée en ce
que le principe actif anticancéreux, et le composé de formule (I), (Ia), (Ib)
ou (II) définis
ci-dessus, sont présents dans un rapport en poids compris entre environ 1:1 et
environ
1:100 et en particulier entre environ 1:1 et environ 1:20.
L'invention a plus particulièrement pour objet une composition pharmaceutique
comprenant au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et
plus
particulièrement un composé de formule (I), (Ia), (Ib), ou la fiimagilline de
formule (II),
en association avec au moins un antibiotique antitumoral de type anthracycline
et / ou un
taxane et / ou un alcaloïde et / ou une épipodophyllotoxiné tels que
mentionnés ci-dessus.
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L'invention concerne plus particulièrement une composition pharmaceutique
telle
que définie ci-dessus, comprenant de la ftimagilline de formule (II)
susmentionnée, en
association avec un ou plusieurs principes actifs anticancéreux tels que
définis ci-dessus.
Dans leurs divers modes de réalisations, les compositions pharmaceutiques
selon
5 l'invention sont en outre caractérisées de façon avantageuse en ce qu'elles
se présentent
sous une forme administrable par voie parentérale, ou orale.
Un autre objet de l'invention concerne des produits de combinaison pour une
utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie,
notamment
antiparasitaire ou anticancéreuse, utilisant un principe actif susceptible
d'être reconnu et
10 de se lier à des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus
particulièrement à des
ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment à de la Pgp, pour être
transporté hors des
cellules de l'organisme humain ou animal, caractérisés en ce qu'ils
contiennent au moins
un principe actif tel que défini ci-dessus, et au moins un composé de formule
(I) tel que
défini ci-dessus, et plus particulièrement de la fumagilline de formule (II).
15 Avantageusement, le composé de formule (I) dans les produits de combinaison
est
choisi parmi les composés de formule (Ia), (Ib) ou (II) définis ci-dessus.
De manière préférée, les produits de cômbinaison selon l'invention sont
caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif susceptible
d'êtrë reconnu
et de se lier à des transporteurs cellulaires susmentionnés, et plus
particulièrement à des
ABC transporteurs définis ci-dessus, notamment à de la Pgp, et au moins un
composé de
formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement un composé de
formule (Ia),
(Ib), ou de la fumagilline de formule (II), dans un rapport en poids d'environ
1:1 à environ
1:100 et en particulier d'environ 1:1 à environ 1:20.
Plus particulièrement, les produits de combinaison selon l'invention, pour une
utilisation simultanée, séparée =ou étalée dans le temps, en thérapie
antiparasitaire, sont
caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif
antiparasitaire, et au moins
un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement
un composé
de formule (Ia), (Ib), ou de la fumagilline de formule (II).
De manière avantageuse, les produits de coinbinaison selon l'invention sont
caractérisés en ce que les principes actifs antiparasitaires sont choisis
parmi les lactones
macrocycliques, telles que les avermectines et les milbemycines.
Dans un mode de réalisation plus particulier, les produits de combinaison
selon
l'invention sont caractérisés en ce que les principes actifs antiparasitaires
sont choisis
parmi. les avermectines, telles que l'ivermectine, l'abamectine, la
doramectine,
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l'éprinomectine ou la sélamectine, dans le cadre du traitement des maladies
parasitaires
endoparasitaires et ectoparasitaires.
Plus particulièrement, lesdits produits de combinaison sont caractérisés en ce
que
les principes actifs antiparasitaires sont choisis parmi les milbemycines,
telles que la
moxidectine ou la némadectine, dans le cadre du traitement des maladies
parasitaires
endoparasitaires ou ectoparasitaires.
De manière avantageuse, lesdits produits de combinaison sont caractérisés en
ce
qu'ils contiennent au moins un principe actif antiparasitaire, et au moins un
composé de
formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement de la
fumagilline de formule
(II), dans un rapport en poids d'environ 1:1 à environ 1:100 et en particulier
d'environ 1:1
à environ 1:20.
L'invention a plus particulièrement pour objet les produits de combinaison
pour
une utilisation simultanée, =séparée ou étalée dans le temps, en thérapie
antiparasitaire,
caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif
antiparasiiaire tel, que
défini ci-dessus, et la fumagilline de formule (II) telle que susmentionnée.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, les produits de combinaison
selon
l'invention, pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps,
en thérapie
cancéreuse, sont caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe
actif
anticancéreux, et au moins un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus,
et plus
particulièrement un composé de formule (Ia), (Ib), ou de la fum.agilline de
formule (II).
De manière préférée, lesdits produits de combinaison sont caractérisés en ce
que
les principes actifs anticancéreux sont choisis parmi les substrats des
transporteurs
cellulaires susmentionnés, et plus particulièrement des substrats des ABC
transporteurs
définis ci-dessus, notamment de la Pgp, dans le cadre du traitement des
cancers et plûs
particulièrement des cancers résistants aux chimiothérapies, et sont plus
particulièrement
choisis parmi les antibiotiques antitumoraux de type anthracycline, les
taxanes, les
alcaloïdes et les épipodophyllotoxines tels que mentionnés ci-dessus.
De manière particulièrement préférée, lesdits produits de combinaison sont
caractérisés en ce qu'ils contiennent au moins un principe actif
anticancéreux, et au moins
un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus, et plus particulièrement
un composé
de formule (Ia), (Ib), ou de la fumagilline de formule (II), dans un rapport
en poids
d'environ 1:1 à environ 1:100 et en particulier d'environ 1:1 à environ 1:20.
L'invention a plus particulièrement pour objet les produits de combinaison
pour
une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie
anticancéréuse,
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caractérisés en ce qu'ils contiemient au moins un principe actif anticancéreux
tel que
défini ci-dessus, et la fumagilline de formule (II) telle que susmentionnée.
Description dës figures
La figure 1 représente l'aire sous la courbe (AUC) de la 14C moxidectine après
deux traitements distincts : en blanc, le témoin (moxidectine) ; en noir : le
traitement avec
la ftimagilline. L'axe des ordomiées est en g.mL.1f 1. On a p<0,01 pour le
traitement avec
la fumagilline (résultat significativement différent du témoin).
La figure 2 représente l'effet de différents composés sur l'accumulation de
rhodamine 123 dans des cellules LLCPK1 transfectées avec la Pgp murine. En
abscisse :
la concentration du composé ; en ordonnée, le pourcentage d'accumulation de
Rho 123
par rapport au témoin (Rho 123 / contenu protéique). En blanc, l'ivermectine ;
en gris uni,
le valspodar ; en hachuré, la fumagilline.
La figure 3 représente l'accumulation de Rho 123 dans des cellules Mdrla LLC-
PK1 après traitement par la fumagilline. En abscisse, la concentration de
fumagilline en
M ; en ordonnée, le pourcentage d'effet par rapport à l'effet du valspodar
(modélisation
selon le modèle de Hill).
Partie expérimentale
Dans cette partie expérimentale, on démontre d'abord la capacité de la
fumagilline
a augmenter la concentration intracellulaire de la 14C moxidectine dans les
hépatocytes de
rat (exemple 1). Ensuite on évalue sa capacité à interférer avec la fonction
Pgp sur des
cellules épithéliales de rein de porc transfectées avec la Pgp murine (Mdr la-
LLCPK1),
comme cela est résumé dans l'exemple 2. La fonction de transport de la Pgp est
évaluée
par l'accumulation intracellulaire de la rhodamine 123, substrat avéré de la
Pgp. Ce
modèle est particulièrement adapté pour la détection de composés interagissant
avec la
Pgp (Hamada et al., 2003).
Composés chimiques et milieux
La solution standard de 14C moxidectine (radiopureté = 98,2%, pureté chimique
>
99%, activité spécifique = 14,8 Ci/mg) a été fournie par Fort-Dodge Santé
Animale
(Tours, France). La fiunagilline a été fournie par CEVA Santé Animale
(Libourne,
France). Le valspodar (VSP) a été gracieusement fourni par Novartis (Basel,
Suisse). Le
diméthyl-sulfoxide (DMSO), le sodium dodécyl sulfate (SDS), le collagène, la
rhodamine
123 (Rholz3), la trypsine-EDTA et l'ivermectine ont été achetés chez Sigma
Chimie
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(Saint-Quentin Fallavier, France). Le milieu 199, le tampon phosphate salin
(PBS 10X), le
sértun de veau fortal, la solution saline de Hanks' (HBSS) sans rouge phénol,
la
pénicilline, la streptomycine et la géniticine (G418) proviennent d'InVitrogen
(Cergy
Pontoise, France). Les boîtes de culture sont de cliez chez Nunclon (Roskilde,
Danemark),
les flasques de culture et les plaques de culture cellulaire 24 puits de chez
Sarstedt France
(Orsay, France). Le kit acide bicinchoninic provient de chez Interchim
(Montltiçon,
France). L'acétonitrile et le méthanol (qualité RS pour la chromatographie
Liquide Haute
performance) ont été achetés chez Carlo Erba (Milan, Italie). L'eau utilisée
lors de cette
étude était de qualité ultrâ.-pure (appareil MilliQ A10, Millipore SA, Saint-
Quentin,
France).
Isolement des héiiatocxtes mise en culture et traitements
L'isolement et la mise en culture des hépatocytes de rat ont été décrits
précédemment (Dupuy et al., 2001b). Les hépatocytes sont répartis dans des
boîtes de
culture et maintenus à 37 C pendant 12 heures (étuve 5% C02). Les cellules
sont cultivées
en présence de 5 M de 1~C moxidectine (témoin) +/- 100 M de fumagilline.
Après 0, 6,
24, 48 et 72 h les incubations sont stoppées (n = 3 pour chaque traitement),
les milieux
collectés et les hépatocytes récoltés par dissociation mécanique dans du
tampon phosphate
salin (PBS IX). Les milieux et les hépatocytes sont stockés à-20 C jusqu'à
analyse par
Chromatographie Liquide Haute Performance (HPLC).
Mdrla-LLCPKI et accumulation intracellulaire de rhodamine 123 (Rho123)
Les cellules transfectées avec la Pgp murine (Mdrla-LLCPKI) ont été cultivées
dans du milieu 199 supplémenté en pénicilline (100 unités/ml) et streptomycine
(100
g/ml), 10% de sérum de veau fcetal et de la géniticine sulfate (G418, 400
g/ml) comme
agent de sélection de la Pgp. Les cellules à confluence sont repiquées par
trypsinisation
chaque semaine et le=milieu renouvelé 2 fois par semaine. Elles sont
maintenues à 37 C en
atmosphère contrôlée à 5% de C02. Afin de suivre la fonction de transport via
la Pgp dans
les cellules Mdrla-LLCPKI, l'accumulation intracellulaire de Rho123 est
mesurée. Les
cellules Mdrla-LLCPKI sont réparties sur des plaques de culture cellulaire (24
puits) à
raison de 1.5.105 cellules/puits. Elles sont cultivées 48 heures à 37 C pour
atteindre la
confluence dans 1 ml de milieu sans G418. Le milieu est éliminé et les
cellules lavées
avec 0.5 ml de PBS 1X. Les cellules sont cultivées 2 heures à 37 C avec 0.2 ml
de milieu
HBSS contenant 10 M de Rho123 (HBSS/DMSO, 50/50, v/v) +/- 5 M de VSP (dans
DMSO) +/- 10 M d'IVM (dans DMSO) +/- 1, 5, 10, 50 et 100 M de fumagilline
(dans
DMSO). Après 2 heures, le milieu de culture est éliminé, les cellules lavées
avec 0,5 ml
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de PBS 1X pour éliminer l'excès de Rho123. Les cellules sont lysées par
l'addition de 0,3
ml de PBS 1X/ 0.5 % sodium dodécyl sulfate (50/50, v/v) dans chaque puits.
Après 10
minutes à température ambiante, 0,3 ml de PBS 1X est ajouté dans chaque puits
puis le
lysat total (0,6 ml) est transféré dans un tube plastique de 2 ml et stocké à-
20 C jusqu'à
son analyse par spectrofluorimétrie.
Quantification et analyse des données : 14C moxidectine daiis les hépatoc es
en
culture
La 14C moxidectine est quantifiée dans le milieu et les hépatocytes par une
technique HPLC couplée à une détection de radioactivité en ligne (Dupuy et
al., 2001b).
Cette technique permet de détecter et de quantifier la 14C moxidectine et son
métabolite
majeur (C29 monohydroxymethyl moxidectine) dans les hépatocytes de rat. La
radioactivité est mesurée par comptage en scintillation liquide (compteur
Kontron Beta
V). La radioactivité initiale totale du milieu initial à 5 M de 14C
moxidectine +/- 100 M
de fumagilline correspondait à la valeur 100%. Grâce à la concentration de
moxidectine
détectée dans les hépatocytes (ng.ml"1) et au pourcentage de radioactivité
initiale
introduite, les aires sous la courbe temps-concentrations sont calculées du
premier au
dernier point expérimental en utilisant la méthode des trapèzes (Gibaldi and
Perrier,
1982).
Quantification et analyse des données : accumulation de la Rho 123 dans Mdrla-
LLCPKI
La fluorescence de la Rho123 est mesurée à l'aide d'un fluorimètre (Perkin
Elmer
LS50B, ~õaX excitation = 507 nin ;I,,,a,, emission = 529 nm) puis normalisée
avec le
contenu protéique de chaque puits (dosage par réaction colorimétrique, kit
BCA).. Les
résutats sont exprimés en pourcentage d'accumulation de Rho 123 dans les
cellules
traitées (VSP ou IVM ou fumagilline) par rapport aux cellules témoins
contenant de la
IZho123 seule. Afin de comparer les différentes molécules, le VSP est défini
comme le
composé pour lequel l'accumulation de Rho123 est maximale et correspond donc à
une
inhibition de 100% de la Pgp. Les résultats obtenus ont été modélisés selon le
modèle de
Hill (logiciel Scientist, Micromath research, Saint Louis, USA).
Analyse statistique
La moyenne et la déviation standard ont été déterminées pour tous les
paramètres
étudiés. Toutes les données ont été soumises à un test de Fischer (PLSD
Fischer test) via
le logiciel Statview (Abacus Concept, Berkeley, USA). Dans tous les cas, une
valeur, de p
< 0.05 est considérée comme significative.
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Exemple 1: hépatoçytes de rat
La viabilité des cultures d'hépatocytes de rat (exclusion du bleu trypan) est
supérieure à 80% et aucun changement morphologique n'est observé lors des 72 h
de
culture, quel que soit le traitement. Le composé principal détecté est la
moxidectine et les
5 quantités intracellulaires sont rapportées dans le tableau 2 ci-dessous. Le
métabolite
majeur correspondant au C29 monohydroxymethyl déjà décrit lors d'une étude
précédente
(Dupuy et al., 2001b), ne représente que 4% (valeur maximale) du principe
parental. La
fumagilline augmente significativement la quantité de moxidectine
intracellulaire avec un
maximum à 6 h chez les témoins et après 24 h chez les cellules traitées par la
fumagilline.
10 La diminution de la concentration en moxidectine dans les hépatocytes est
plus rapide
dans les témoins (6 heures post-traitement) que dans ceux traités par la
fumagilline (24
heures post-traitement). La concentration du métabolite majeur augmente à
partir de 6 h
pour atteindre sa valeur maximale 24 h après traitement et sa cinétique de
production n'est
pas affectée. L'exposition des cellules à la moxidectine est quantifiée par
l'aire sous la
15 courbe temps-concentration calculée sur la durée de l'expérimentation
(Figure 1). La
fumagilline augmente significativement de 65 % la quantité de moxidectine dans
les
hépatocytes sur la période de 72 h.
Tableau 2: quantité de 14C moxidectine dans les hépatocytes de rat en culture
a
20 a-près traitement par la moxidectine +/- fumâ illine 100 I~M)
Durée de culture Moxidectine +
(heure) Moxidectine fumagilline
0 4,5 1,25 7,05 0,24
6 72,95 9,98 79,29 1,01
24 52,60 5,94 82,94 14,97**
48 22,19 4,00 27,88 2,67
72 11,98 1,30 16,22 1,21
a Les valeurs représentent la moyenne .+ écart type de 3 boîtes de culture
différentes.
** significativement différent des cellules traitées par la moxidectine. P <
0.01
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Exemple 2 : Mdrla-LLCPK1
L'accumulation intracellulaire de la Rho123 a été suivie pour évaluer l'effet
de la
ftimagilline sur l'activité de la Pgp dans les cellules Mdrla-LLCPK1. Ce
modèle a été
validé à l'aide de 2 composés reconnus comme agents interféraut avec la Pgp :
l'IVM et le
VSP. Les résultats de fluorescence ont été norinalisés par rapport à la
quantité protéique.
L'effet induit par le VSP (10 M) est considéré comme la valeur maximale
(100%)
d'acciunulation de Rho 123 dans les cellules (figure 2). L'IVM à 5 M a une
puissance
inhibitrice très prôche du VSP puisqu'elle génère un effet représentant 95% de
l'effet
VSP. La fumagilline (10 à 100 M) a permis d'augmenter la quantité de Rho 123
intracellulaire. Les résultats ont été alors exprimés en pourcentage
d'accumulation par
rapport au VSP et ont été modélisés à l'aide du modèle de Hill. Une courbe
sigmoïde a été
ainsi générée (figure 3).. L'effet maximal (Emax), défini comme la quantité
maximale de
Rho123 dans les cellules en présence de fumagilline, est atteint à des
concentration de 50
M de fumagilline et représente 43,7% de l'effet obtenu en présence de VSP.
L'EC50,
concentration nécessaire pour atteindre 50% de l'effet maximal, est obtenu en
présence de
10 gM pour la fumagilline et représentait 21,8% de l'effet VSP.
Discussion sur les expériences
En médecine vétérinaire, les LM restent les composés antiparasitaires les plus
efficaces en raison notamment de leur large spectre d'action et de leur
mécanisme unique
d'action. Pour assurer la pérennité de ces composés il est urgent d'optimiser
leur
utilisation. Une des stratégies consiste à augmenter la biodisponibilité du '
composé,
puisque l'efficacité des LM est directement liée à la présence du médicament
dans la
circulation systémique pendant une durée de temps suffisante. Les méthodes
pharmacologiques avec administration de composés chimiques ou naturels (Dupuy
et al.,
2003; Lifschitz et al., 2002) sont principalement basées sur l'implication de
transporteurs
actifs tels que la Pgp, qui modulent la biodisponibilité des LM chez l'animal
et chez les
parasites. Grâce à l'utilisation d'inhibiteurs de la Pgp la biodisponibilité
de l'IVM chez le
rat (Alvinerie et al.,1999) et de la moxidectine chez le mouton (Dupuy et al.,
2003) a pu
être augmentée. De plus, l'efficacité antiparasitaire a été accrue par la co-
administration
de LM et d'agents interférant avec la Pgp chez des souches de parasites
résistants à
l'ivermectine et à la moxidectine. Ceci montre que la Pgp pourrait jouer un
rôle dans la
résistance des nématodes aux LM (Molento and Prichard, 1999).
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Des études précédentes ont montré que les hépatocytes de rat en culture
primaire
représentent un outil particulièrement adapté à l'étude de la fonction de la
Pgp et des
interactions Pgp/cytochrome P450 3A (Dupuy et al., 2001b ; Hirsch-Ernst et
al.,'2001). En
effet, la Pgp est exprimée dans les hépatocytes et son expression est
augnientée avec le
temps (Hirsch-Ernst et al., 1998). Ici la capacité de la fiimagilline,
médicament utilisé en
médecine vétérinairé et humaine, à auginenter la quantité de moxidectine
intracellulaire
dans les hépatocytes de rat a été évaluée. De manière surprenante, la
fumagilline a induit
une accumulation intracellulaire de la moxidectine. Par comparaison aux
résultats
précédemment obtenus avec ce modèle cellulaire, l'accumulation intracellulaire
de
moxidectine obtenue avec la fumagilline (100 M) est comparable à celle
obtenue avec la
quercétine avec un effet maximal 24 heures après le traitement (Dupuy et al.,
2003). La
diminution en fonction du temps de la concentration de moxidectine dans les
hépatocytes
(témoins, traités par la fumagilline) et aussi notée avec la quercétine peut
être attribuée à
l'activité des cytochromes P450 qui est à l'origine de la production de
métabolites qui
sont rapidement expulsé hors des hépatocytes. Ces résultats montrent que la
fumagilline
peut moduler l'accumulation intracellulaire de moxidectine dans le système
cellulaire
utilisé ici. L'effet obtenu avec le vérapamil ou la quercétine met
certainement en jeu
l'implication de la Pgp dans l'accumulation de moxidectine dans le modèle
hépatocytes
puisque ces composés sont connus pour interférer avec la Pgp.
L'influence de la fumagilline sur l'accumulation intracellulaire de Rho123
dans
des cellules Mdrla-LLCPK1 (Sch.inkel et al., 1995) a égaleinent été étudiée.
Ces cellules
surexpriment la Pgp murine et possèdent peu ou pas d'autres transporteurs de
la même
famille (ABC-transporteurs) ou de cytocliromes P450. Une étude récente a
montré que
différents LM permettaient de moduler l' efflux de la Rho 123 et
l'accumulation de calcéïne
dans des cellules tumorales (Korystov et al., 2004). Dans notre modèle, la
fi.unagilline a
permis d'augmenter la quantité de Rho123 d'une manière dépendant de la dose,
ce qui
implique une interaction avec la Pgp. La modélisation de l'effet de la
fumagilline a permis
de corréler le pourcentage d'accumulation de Rho123 par rapport à un l'effet
induit par un
inhibiteur reconnu (VSP) de la Pgp. L'effet maximal obtenu avec 100 M de
fiimagilline
correspond à 43% de l'effet VSP. Or aucune donnée n'existait jusqu'ici sur
l'interaction
entre la fumagilline et la Pgp ou d'autres ABC-transporteurs. Ces résultats
montrent que
l'augmentation de moxidectine observée dans les hépatocytes de rat en présence
de
fumagilline est associée à un effet inhibiteur de ce composé sur la fonction
Pgp.
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A ce titre la fumagilline acquiert un intérêt nouveati dans le domaine de la
médecine vétérinaire, comme agent régulateur de la Pgp. En raison de
l'émergence de
résistance aux lactones macrocycliques dans de nombreuses espèces et de
l'absence de
développement de notiveaux principes antiparasitaires performants à moyen
terme, il est
urgent de développer des stratégies qui visent à faire perdurer l'efficacitë
des LM. La
fumagilline permet ainsi d'accroître l'efficacité des LM vis-à-vis des
parasites en majorant
la quantité de médicament au sein des parasites résistants.
Une telle approche de potentialisation de l'action d'un composé efflué par la
Pgp
par la co-administration d'une substance pour palier aux phénomènes de
résistance est
utilisée en chimiothérapie cancéreuse humaine. Des essais cliniques sont
actuellement
conduits chez des patients atteints de cancer et développant des résistances
aux
anticancéreux. L'utilisation de molécules inhibitrices de la fonction Pgp en
association
avec un anticancéreux permet de majorer la quantité de médicament chez ces
patients afin
d'avoir une efficacité thérapeutique accrue (List et al., 2001). Récemment, il
a été
démontré que les avermectines pouvaient majorer la quantité de médicaments
antitiunoraux dans des cellules cancéreuses (Korystov et al., 2004). Il est
donc
envisageable d'utiliser des lactones macrocycliques en chimiothérapie
cancéreuse.
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