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KIT DESTINÉ AU TRAITEMENT DU SEPSIS ET/OU DE TOUTE HYPER-
INFLAMMATION GÉNÉRALISÉE (SIRS) OU CELLULAIRE
DOMMAGEABLE
DOMAINE DE L'INVENTION
La présente invention concerne notamment le traitement du sepsis, de
l'inflammation
aigue généralisée (SIRS, systemic inflammatory response syndrome) et plus
particulièrement du choc septique et des états de SIRS donnant des tableaux
similaires
nécessitant le recours aux catécholamines après un remplissage ou lors de
phase rapide
de remplissage en cas d'aggravation très brutale. La présente invention
concerne
également un traitement des leucémies (pour les éléments circulants). En
particulier, la
présente invention concerne une association en kit d'une protéine séléniée et
d'un
composé sélénié pour le traitement de ces syndromes et maladies. La présente
invention
concerne également une méthode d'administration qui permet d'administrer des
doses
.. efficaces de composés séléniés toxiques pour les cellules hyperactives
circulantes et les
pathogènes (bactéries, virus, champignon et parasites) mais bénéfiques au
total pour
l'ensemble de l'organisme. Enfin, dans un autre aspect, l'invention concerne
un
dispositif d'administration.
.. ÉTAT DE LA TECHNIQUE
Le sepsis correspond à une réponse inflammatoire généralisée excessive de
l'organisme
en réaction à une infection bactérienne, le plus souvent, mais aussi
parasitaire, virale ou
fongique. Dans l'état de l'art actuel, le sepsis est un syndrome et non une
maladie. Le
sepsis sévère est défini par la présence d'une ou plusieurs dysfonctions ou
défaillances
d'organes et de signes d'hypo-perfusion périphérique, tandis que le choc
septique est
défini par la présence d'une hypotension persistante malgré un remplissage
adéquat
associé le plus souvent à des défaillances multi-viscérales. Par adéquat, on
retient
généralement un remplissage de 20 à 30 mg/kg. Dans les deux cas, une réponse
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complexe de l'organisme excessive ou inadaptée, nécessite la mise en oeuvre de
suppléances des grandes fonctions en réanimation pour éviter le décès. Ce
déploiement
complexe d'assistances de grandes fonctions permet à des personnes qui
décèderaient
de survivre au sepsis ; toutefois malgré ces suppléances coûteuses, les taux
de mortalité
de ces patients, 28 jours après le début de l'épisode, sont respectivement
d'environ 20 à
30% et 40 à 50%. De plus, le nombre de lits de réanimation disponibles pour
les traiter
efficacement est limité. Le sepsis entraîne ainsi un nombre de décès très
important,
légèrement supérieur à ceux causés par l'infarctus du myocarde, et est la
première cause
de décès à l'hôpital et représente plus de 5% des dépenses hospitalières (0,5%
du PIB).
II s'agit d'une des principales causes de mortalité dans le monde et serait la
première en
cas de pandémie où les structures de réanimations seraient totalement
débordées. Il
correspond à l'une des principales causes de dépenses de santé dans le monde
en
pratique courante. Par ailleurs, il serait une cause de mortalité importante
en cas de
situation de pandémie ¨ le sepsis est à l'origine des décès dans le cas des
épidémies de
pestes par exemple ¨, de désastre (associé aux syndromes d'écrasement), de
bioterrorisme ou de guerre. Dans ce dernier cas, il sera volontiers associé à
une autre
cause d'inflammation généralisée que constituent les brûlures étendues qui
représenteraient plus de 30% des victimes. L'inflammation aigue est également
un
événement majeur chez les victimes d'irradiation qui ne décèderaient pas
immédiatement.
Actuellement, le traitement de cette urgence médicale consiste en
l'administration dans
l'heure d'antibiotiques, associée à un remplissage, à une oxygénation, à
l'introduction
de catécholamines et à la prise en charge en réanimation en l'absence de
traitement
spécifique. Par ailleurs, le patient peut se voir administrer des corticoïdes
à faible dose
.. mais cela reste très controversé et d'efficacité ¨ s'il y a lieu ¨ limitée.
Des
recommandations ont été établies au niveau mondial dans le cadre de la
surviving sepsis
campaign, travail collaboratif au niveau mondial comprenant les principales
sociétés de
réanimation dont américaines et européennes. Néanmoins, il n'existe pas à
l'heure
actuel de traitement spécifique de cette réaction excessive de défense de
l'organisme et
l'essentiel des traitement proposés est d'essayer de permettre à l'organisme
de survivre
à cette situation d'auto-agression par la mise en place la plus judicieuse
possible de
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suppléance en attendant la fin de cette réaction, tout en ayant traité
l'origine de ce qui a
déclenché celle-ci (activation des toll-récepteurs) infectieuse dans le cadre
du sepsis
(PAMPS), dégâts cellulaires dans le cadre des syndromes inflammatoires aigus
généralisés (DAMPS).
Au niveau de la microcirculation, l'interaction des cellules phagocytaires et
de
l'endothélium, succédant à la mise en alerte très rapide des cellules de la
réponse innée
secondaire à l'activation des récepteurs Toll, participe à la modification de
l'endothélium (flip-flap) passant d'un endothélium non-adhérent, non
inflammatoire et
non coagulant à un endothélium adhérent, inflammatoire et coagulant puis lésé
avec
abrasion de l'endothélium surface layer (ES L), formation de dérivée réactif
nitro-
oxygéné ¨ comme le peroxynitrite par l'action conjointe des polynucléaires
adhérents
(émission d'anion surperoxyde) et des cellules endothéliales activée (émission
de NO),
émission de microparticules, et ouverture des jonctions serrées et souffrance
de
l'endothélium. Ce dysfonctionnement de la microcirculation et cette souffrance
de
l'endothélium sont considérés comme un ou l'élément majeur dans la survenue
des
défaillances viscérales secondaires au sepsis sévère et au choc septique. Ces
défaillances viscérales peuvent conduire au décès malgré les suppléances en
réanimation qui permettent à des sujets qui auraient dû décéder de survivre
transitoirement ou non, et conduisent au décès en l'absence de ces soins de
réanimation.
On a pu considérer (modélisation mathématique appliquée à la biologie) que
cette
situation consistait en une situation de chaos.
L'objectif de la réanimation est alors de ramener le sujet, une fois l'épisode
aigu passé,
vers l'attracteur de l'homéostasie en le libérant progressivement des
attracteurs de
survie liés aux suppléances. Cet état hyper-inflammatoire entraîne le plus
souvent une
défaillance immunitaire acquise qui va faire le lit de nouvelles infections,
éventuellement avec des pathogènes non dangereux chez un sujet non-
immunodéprimé
et pouvant entraîner de nouveau une réaction de sepsis. L'évolution risque
fort de se
faire alors de choc septique en choc septique vers un épuisement du sujet dans
un
tableau de marasme et de dénutrition majeure conduisant le plus souvent à une
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limitation thérapeutique devant une situation dépassée où le retour à une
situation sans
suppléance ne semble plus possible et correspond à de l'acharnement.
Les dérivés réactifs de l'oxygène (métabolisme oxydatif (respiratory burst)
des
polynucléaires, hyperactivation des cellules endothéliales avec la synthèse de
NO,
phénomènes d'ischémie-reperfusion et souffrance mitochondriale) générés par la
lutte
contre les agents infectieux ont un rôle majeur dans la dysfonction
endothéliale,
première étape vers les défaillances multi-viscérales et le décès. Le sélénium
est un
atome bivalent en physiopathologie. Sur le plan physicochimique, il appartient
à la
colonne VI à qui est celle de l'oxygène (famille chimique des chalcogènes). De
fait, sur
le plan chimique et biochimique, les petits composés séléniés sont souvent des
molécules oxydantes toxiques.
Ainsi le sélénite de sodium est l'un des composés séléniés les plus toxiques
et sa
toxicité est similaire à celle des sels d'arsenic. Une concentration de 101-
1mol/L entraîne
une destruction cellulaire pour des cellules détachées (Stewart MS, Free Radic
Biol
Med. 1999 Jan;26(1-2):42-8). Une concentration en sélénium de 18 1J mol/L est
observée dans les cas d'intoxication mortelle (Nuttall KL, Ann Clin Lab Sci.
2006
Autumn ; 36(4):409-20). La dose létale chez l'homme semble être de l'ordre de
1,5 à 3
mg/kg. Le sélénite de sodium va réagir préférentiellement avec les ponts
disulfures. Sa
toxicité est plus importante sur les cellules libres, que sur les tapis
cellulaires, et
également beaucoup plus importante sur les cellules hyper-activées que sur les
cellules
quiescentes. In vitro, on a démontré son activité cytotoxique particulièrement
sur des
cellules cancéreuses pour des concentrations au-delà de 2 à 5 1-1mol/L de
sélénium sous
forme de sélénite de sodium. La toxicité du sélénite de sodium semble
s'exercer
principalement au niveau de la mitochondrie particulièrement chez les cellules
en
hyperactivité.
Incorporé dans les protéines séléniées, le sélénium ¨ comme celui inclus dans
la
molécule du sélénite de sodium ¨ permet à celles-ci d'être un élément clef de
la défense
anti-oxydante chez les mammifères. De ce fait, les cas d'empoisonnement aigu
par des
composés séléniés sont complètement réversibles quand ils ne sont pas mortels,
le
sélénium une fois incorporé dans ces protéines séléniées ayant une action anti-
oxydante
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opposée à celle des composés séléniés oxydants comme le sélénite. Dans le
cadre de
l'amélioration de leur défense anti-oxydante (et de leur régulation du
potentiel redox
intra-cellulaire modulant toute l'activité cellulaire), les mammifères et les
oiseaux ont
acquis un acide aminé particulier, la sélénocystéine, où le sélénium remplace
le souffre
5 dans la cystéine. Ce remplacement est contrôlé génétiquement, avec la
modification de
la signification du codon stop UGA du fait de la présence d'une structure
voisine et
nécessite de l'énergie sous forme d'ATP. La présence de cet acide aminé au
niveau du
site actif des enzymes séléniées va permettre à ceux-ci d'avoir une action
anti-oxydante
plus rapide et plus robuste que leur précurseur à fer et le remplacement de la
sélénocystéine par la cystéine au niveau du site actif diminue par un facteur
1000
l'efficacité de ces enzymes. Les protéines séléniées sont des enzymes anti-
oxydantes
majeures chez les mammifères. La carence en sélénium est mortelle chez l'homme
et le
modèle knock-out pour la sélénocystéine est létal.
Au niveau plasmatique on observe deux protéines séléniées, la sélénoprotéine-
P,
protéine très conservée entre les espèces et exception parmi les enzymes
séléniées du
fait qu'elle comporte 9 acides aminés sélénocystéine (tandis que les autres
n'ont qu'un
seul acide aminé sélénocystéine) et la glutathion peroxydase plasmatique. La
sélénoprotéine-P (Sel-P) représente 60% du sélénium plasmatique. Elle assure
le
transport du sélénium biologiquement actif (sélénocystéine) entre le foie et
les tissus et
participe directement à la protection anti-oxydante de l'endothélium par une
action
enzymatique, probable détoxifiante, de l'ion peroxynitrite. Il a été montré
qu'elle a un
rôle de stabilisation de membrane limitant l'émission de microparticules.
Du fait de l'appréhension de la toxicité du sélénite de sodium,
l'administration de ce
sélénite a été faite en continu ou encore avec des bolus sur 30 minutes, comme
décrit
dans Angstwurm MW, (Crit Care Med. 2007 Jan;35(1):118-26) qui observe une
tendance à la diminution de la mortalité avec une administration de 1000 g de
sélénium sous forme de sélénite de sodium (14 p g/kg) poursuivi d'une
administration
d'une même dose en continu sur 24h, poursuivie pendant 15 jours, mais dont les
résultats n'ont pu être reproduit à l'heure actuelle (Angstwurm MW, Crit Care
Med.
2007 Jan;35(1):118-26). La dose maximum de 1000 1tg/jour est recommandée par
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Heyland DK (Crit Care. 2007;11(4):153), une dose de 4000 1tg/jour (55 p g/kg)
administrée en continu n'ayant pas eu d'effet bénéfique en raison selon lui
d'effet
négatifs. L'administration de 2000 g (80 p g/kg) en bolus chez le mouton
s'est
accompagné d'effets positifs, contrairement à l'administration d'une même dose
en
continu, néanmoins ne permettait pas de conclure sur l'intérêt d'une
administration en
bolus (Wang Z et al. Shock. 2009 Aug;32(2):140-6). De fait, l'intérêt de cette
administration en bolus reste très discuté (Alhazzani, W.et al. Crit Care Med.
2013
Jun;41(6):1555-64). Actuellement, les recommandations de la société européenne
de
nutrition (ESPEN) sont de ne pas dépasser 750 à 1000 1-1g/jour en raison des
risques de
toxicité (Singer P et al. Clin Nutr. 2009 Aug;28(4):387-400), ceci correspond
à la
NOAEL No Adverse Effect Level déterminé en nutrition (800 p g, soit 11 1-1g/kg
et par
jour). Quant à la société américaine de nutrition ASPEN, elle recommande un
apport
optimum entre 500 et 7501-1g/jour. Au vu des différents résultats des études,
l'intérêt de
l'administration de sélénium chez les patients de réanimation en sepsis n'est
pas
recommandé dans Dellinger RP et al. (Crit Care Med. 2013 Feb;41(2):580-637) ni
dans
Casaer MP et al. (N Engl J Med. 2014 Mar 27;370(13):1227-36).
Toutefois, la Demanderesse est restée convaincue que l'administration de
composés
contenant du sélénium (ou sélénite) est une réponse adaptée pour gérer les
éléments
circulants toxiques dans le cadre du sepsis et de la leucémie.
Dans cette voie, la Demanderesse s'est interrogée sur la manière d'optimiser
l'administration de composés contenant du sélénium, tout en protégeant
l'organisme de
leurs effets toxiques. A ce jour, et à sa connaissance, ce problème technique
n'est pas
résolu. Et en tout état de cause, il existe un besoin très fort de moyens
permettant de
diminuer significativement le taux de mortalité élevé chez des sujets atteints
de sepsis et
de leucémie.
RÉSUMÉ
L'objet de l'invention est de proposer une solution à ce problème technique,
et propose
un traitement qui cible les phagocytes, en particulier les polynucléaires
neutrophiles. au
moyen d'une administration, en deux temps, de composés, de préférence
séléniés, de
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natures différentes, dans un premier temps d'une protéine anti-oxydante, de
préférence
une protéine séléniée, puis dans un deuxième temps, d'un composé oxydant, de
préférence un composé sélénié, en administration ultra-rapide (également
appelée
administration flash), et de préférence en quelques flashs répétés, et non en
bolus.
L'invention protège directement et indirectement les cellules endothéliales,
limite
l'adhésion des polynucléaires neutrophiles aux cellules endothéliales tout en
permettant
d'inhiber l'hyper-activation des phagocytes et en particulier des
polynucléaires
neutrophiles circulants immatures. Elle peut également participer à
l'antibiothérapie,
lorsque le sujet est soumis à une antibiothérapie, par un effet cytotoxique
sur les agents
.. pathogènes circulants, y compris lorsque le sujet est résistant à
l'antibiothérapie.
DÉFINITIONS
Dans la présente invention, les termes ci-dessous sont définis de la manière
suivante :
- "Traitement", "traiter" ou "soulager" sont des termes relatifs au traitement
thérapeutique, et signifient retarder l'installation d'un syndrome ou d'une
maladie,
stopper le syndrome ou la maladie, ou faire régresser le syndrome ou la
maladie.
Dans un mode de réalisation, le syndrome est le sepsis ; les sujets concernés
par
l'invention incluent donc les sujets à la phase initiale du sepsis,
diagnostiqués
notamment par une diminution de la sélénoprotéine-P circulante ou par tout
autre
biomarqueur du sepsis, et/ou les sujets chez lesquels le sepsis est déjà
diagnostiqué
ou avéré. Un sujet est considéré comme efficacement traité d'un sepsis s'il
montre
une diminution observable et/ou mesurable de production d'oxyde d'azote et/ou
de
lactate, et/ou une diminution notable du taux de mortalité ainsi qu'une
diminution
de la gravité des défaillances viscérales (pouvant être mesurées par le score
SOFA).
Ces paramètres d'évaluation d'un traitement efficace sont facilement
mesurables par
des procédures de routine connues du médecin. Dans un autre mode de
réalisation,
la maladie est un cancer, circulant ou à tumeur solide ; les sujets concernés
par
l'invention incluent donc les sujets atteints d'un cancer.
- Un
"excipient" désigne, dans la présente invention, toute substance autre que le
principe actif présent dans une composition lui conférant des propriétés de
stabilité,
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de forme (liquide, solide, gélule, etc... suivant le mode d'administration),
de goût,
de dissolution (par exemple dissolution ciblée dans l'estomac ou le tube
digestif),
de couleur, etc... Un "excipient pharmaceutiquement acceptable" désigne plus
spécifiquement un excipient qui n'induit pas de réaction allergique ou non-
souhaitée lors de son administration. Cette définition inclut notamment tous
les
solvants et milieux de dispersion pharmaceutiquement acceptables.
- La "quantité efficace" (ou "quantité thérapeutiquement efficace") pour le
traitement du sepsis se réfère à une quantité nécessaire ou suffisante pour,
sans
causer d'effets secondaires significatifs et défavorables pour le sujet, (1)
retarder ou
stopper un sepsis, (2) apporter des améliorations à un sepsis, (3) réduire la
sévérité
ou l'incidence d'un sepsis, (4) stopper ou soigner un sepsis ; en ce qui
concerne
l'administration de la protéine anti-oxydante, de préférence séléniée,
administrée en
premier lieu, selon l'invention, la quantité efficace est celle capable de
protéger
l'endothélium contre l'inflammation et l'hyperoxydation induite par le sepsis,
mais
aussi contre la toxicité du sélénite de sodium ou d'un autre composé sélénié
oxydant
susceptible d'être administré ultérieurement ; une quantité efficace de
protéine anti-
oxydante, de préférence séléniée, peut être administrée avant l'apparition du
sepsis,
pour une action prophylactique ou préventive ; de façon alternative ou
additionnelle,
une quantité efficace de protéine séléniée peut être administrée après
l'apparition du
sepsis, pour une action thérapeutique ; en ce qui concerne le composé sélénié,
la
quantité efficace de composé sélénié ne doit être administrée qu'après
l'administration de la quantité efficace de protéine anti-oxydante, de
préférence
séléniée protectrice, et est comprise entre 50 et 600 1tg/kg d'équivalent
sélénium
administrée à une concentration cytotoxique de manière à atteindre une
concentration plasmatique du composé sélénié oxydant d'environ 2 à 40 1J
mol/L,
préférentiellement de 10 à 20 1J mol/L. la quantité efficace en composé
sélénié est
celle nécessaire ou suffisante pour réduire l'hyper-activation des cellules
phagocytaires ou polynucléaires neutrophiles, et contrôler l'hyper-
inflammation,
l'état d'hyper-oxydation et stopper la situation de chaos par une action
cytotoxique
ciblée et transitoire.
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- Une
administration "ultra-rapide" ou "en flash" selon l'invention se réfère à une
administration à une vitesse de plus de 2 à 15 mL/sec, de préférence de 3 à
mL/sec, plus préférentiellement de 4 à 5 mL/sec.
- Une
administration "en flash répétés" ou "fractionnée" correspond à la succession
5 à brève
échéance, environ 5 à 20 minutes, préférentiellement environ 10 minutes,
d'une à 10, de préférence 2 à 5, très préférentiellement 3 administrations en
flash.
- Le terme "administration lente" selon l'invention se réfère à une quantité
de
protéine séléniée administrée à une vitesse d'environ un quart à deux ou cinq
fois la
sélénoprotéine-P totale du sujet. La détermination de la quantité de Sel-P
totale est
10 en
particulier décrite dans le brevet européen : EP1393078 ou le brevet US
7,635,491. La vitesse d'administration est calculée pour que l'administration
dure
d'environ 10 min à une heure, de préférence environ 30 minutes. Soit par
exemple,
pour un homme de 70 kg avec un volume plasmatique d'environ 3000 mL,
d'environ 2 à 90 mg de sélénoprotéine-P en 10 min à une heure et
préférentiellement en 30 minutes, soit une vitesse de 2 à 540 mg/heure, de
préférence 50 à 400 mg/heure, très préférentiellement de 80 à 200 mg/heure. La
quantité de sélénoprotéine-P totale variant selon les sujets et le praticien
saura
déterminer la vitesse d'administration adaptée à chacun. Cette injection peut
être
répétée une à trois fois dans la journée, particulièrement la première journée
toutes
les 4, 6 8 ou 12 heures (soit une à quatre administrations/jour de
traitement).
- "Environ", placé devant un nombre, signifie plus ou moins 20% de la valeur
nominale de ce nombre.
- "sujet", au sens de la présente invention fait référence à un mammifère ou
un
oiseau. Le mammifère peut être un humain (patient), un primate non humain,
souris,
rat, chien, chat, cheval, ou vache, mais n'est limité à ces exemples. Un sujet
peut
être mâle ou femelle. Un sujet peut être un adulte, un enfant ou un
nourrisson. Un
sujet est un patient diagnostiqué avec un syndrome, notamment le sepsis, ou
une
maladie, notamment la leucémie. Un sujet selon l'invention peut également être
un
organe ou un greffon.
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- Le terme sepsis correspond à la définition du sepsis 2016 et est
définie comme
une dysfonction d'organe mettant en jeu la vie et causée par une réponse
dérégulée à
une infection. La dysfonction d'organe peut être évaluée par une augmentation
du
SOFA de 2 points (ou plus) qui est associé avec une moralité de plus de 10%.
Le
5 terme choc septique doit être défini comme des sujets en sepsis où il
existe une
défaillance circulatoire particulièrement prononcée, avec des anomalies
cellulaires
et métaboliques qui sont associées à une mortalité plus élevée que dans le
sepsis
seul (Singer M et JAMA. 2016;315(8):801-810).
10 DESCRIPTION DÉTAILLÉE
Ainsi, dans un premier aspect, l'invention concerne un kit comprenant : un
premier
container comprenant une composition comprenant une protéine anti-oxydante, de
préférence une protéine séléniée ; et au moins un second container comprenant
au moins
une composition comprenant au moins un composé oxydant, de préférence un
composé
sélénié.
Selon un mode de réalisation, la protéine séléniée anti-oxydante est
sélectionnée dans le
groupe comprenant ou constitué par: la sélénoprotéine P, la gluthatione
peroxydase, la
thioredoxine réductase, la iodothyronine déiodinase, la formate
déshydrogénase, la
méthionine sulfoxide réductase, la sélénophosphase synthétase, la
sélénoprotéine Pa
(SelPa), sélénoprotéine W (Se1W), la sélénoprotéine T (SelT), la
sélénoprotéine R (Se1R
ou SelX), la sélénoprotéine de 15 kDa (5e115), la sélénoprotéine N (SelN), la
sélénoprotéine T (SelT2), la sélénoprotéine M (SelM), la sélénoprotéine G-rich
(G-
rich), la sélénoprotéine W2 (Se1W2), la sélénoprotéine BthD (BthD), la
sélénoprotéine
H (SelH), la sélénoprotéine I (SelI), la sélénoprotéine K (SelK), la
sélénoprotéine 0
(Se10), la sélénoprotéine R (Se1R), la sélénoprotéine S (SelS) et la
sélénoprotéine Pb
(SelPb). Suivant un mode de réalisation, la composition du premier container
comprend
une protéine séléniée telle que décrite ci-dessus, en association avec tout
excipient
pharmaceutiquement acceptable. Dans un mode de réalisation, la protéine
séléniée anti-
oxydante est la sélénoprotéine P sous sa forme complète ou sous des formes
tronquées,
sous une isoforme à 51 kDa ou une isoforme à 61 kDa, d'origine humaine ou d'un
autre
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mammifère ou oiseau, ou une gluthation peroxydase, dont la glutathion
peroxydase
plasmatique. Dans un mode de réalisation, le premier container comprend en
outre des
protéines du groupe des protéines liant l'héparine (HBP), de préférence de
l'antithrombine III (AT III).
Selon un mode de réalisation, le composé sélénié oxydant est sélectionné dans
le groupe
comprenant ou constitué par: sélénite de sodium, sélénodiglutathion,
sélénométhyl
sélénocystéine, diméthyl sélinoxyde, sélénocystamine, ou des dérivés de
synthèse
chimique contenant un ou plusieurs atomes de sélénium, un sélénium hybride,
sel de
sélénium fluoré, sel de sélénium chloré, sel de sélénium bromé, sel de
sélénium iodé, un
sélénoxyde, un sel de sélénium sulfuré, sel de sélénium tellurié, sel de
sélénium de
potassium, sel de sélénium de germanium, sel de sélénium de barium, sel de
sélénium
de plomb, sel de sélénium de zinc ou un sel de sélénium nitrogéné, atonimy
(III),
sélénide (5b25e3), arsenic (III), sélénide (AS2Se3), bismuth (III) sélénide
(Bi2Se3),
cadmium sélénide (CdSe), cobalt (II) sélénide (CoSe), de mercure (II) (HgSe),
sélénium
.. oxychloride, sélényl chloride (C120Se), sélénium sulfide, sélénium
disulfide (SeS2),
sélénide d'argent (I) (Ag2Se), sélénide d'indium (III) (In2Se3), sélénide de
strontium
(SeSr), acide sélénié (H204Se), le dioxyde de sélénium (025e), sélénium (Se),
acide
sélénieux , acide sélénieux (H203Se), sélénoglutathion.
Selon un autre mode de réalisation, le composé sélénié oxydant est un dérivé
méthylé
du sélénium. Selon un autre mode de réalisation, le composé sélénié oxydant
est un
acide aminé contenant du sélénium. Selon un autre mode de réalisation, le
composé
sélénié oxydant est un composé organique sélénié (contenant du sélénium)
compris dans
le groupe des composés organiques séléniés comprenant mais n'étant pas limités
à des
composés alkyl, alicyclique, cyclanes, terpéniques, aromatiques et
hétérocycliques,
notamment la méthionine de sélénium, la sélénourée, ou le
diéthyledithiocarbamate de
sélénium.
Selon un autre mode de réalisation, le composé sélénié oxydant est un sélénium
hybride
de la formule Se(x)H(y) ou x et y indépendamment sont un entier compris entre
1 et 10,
de préférence x est 1 et y est 2.
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Selon un mode de réalisation, le composé sélénié oxydant est du sélénite de
sodium
(Na2Se03), de préférence sous une forme non-pentahydratée. Selon un mode de
réalisation, le composé sélénié est la sélénocystéine.
Suivant un mode de réalisation, la composition du second container comprend un
composé sélénié oxydant tel que décrit ci-dessus, en association avec tout
excipient
pharmaceutiquement acceptable.
Selon un autre mode de réalisation, le kit selon l'invention comprend un
troisième
container anti-oxydant comprenant de la vitamine C à faible dose (anti-
oxydante), de la
vitamine E, un précurseur du glutathion, des sels de fer, des sels d'or, des
sels de cuivre
à faible dose (anti-oxydante), et/ou des sels de zinc.
Selon un autre mode de réalisation, le kit selon l'invention comprend un
quatrième
container oxydant, comprenant de la vitamine C à forte dose (dose oxydante,
supérieure
à 20 mg), des sels de fer, des sels d'or, des sels de cuivre à forte dose,
et/ou des
composés telluriés.
Dans un mode de réalisation le kit selon l'invention comprend :
a. un premier container, comprenant une composition comprenant une protéine
anti-oxydante, de préférence séléniée ;
b. un, deux ou au moins trois second containers, chacun des seconds
containers comprenant au moins une composition comprenant au moins un
composé oxydant, de préférence sélénié, de préférence du sélénite de
sodium ou de la sélénocystéine ; dans un mode de réalisation, tous les
seconds containers comprennent la même composition ;
c. optionnellement au moins un troisième container de composés oxydants
comprenant de la vitamine C, de la vitamine E, un précurseur du glutathion,
des sels de zinc, des sels d'arsenic, des sels de cuivre (en faible
concentration) et/ou des protéines du groupe des protéines liant l'héparine
(HBP), de préférence de la vitamine E;
d. optionnellement au moins un quatrième container de composés anti-
oxydants comprenant de la vitamine C à forte concentration (supérieure à 20
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mg/L), des sels de fer, des sels d'or, des sels de cuivre, et/ou des composés
telluriés.
Selon un mode de réalisation, un container est une unité de dosage. De
préférence, le
premier container contenant une protéine anti-oxydante, de préférence
séléniée, a une
capacité de 5 à 100 mL, de préférence 20 à 50 mL. De préférence, le second
container
contenant le composé sélénié a une capacité de 0,05 à 10 mL, de préférence 4
mL.
Dans un mode de réalisation, la composition incluse dans le premier ou le
second
container inclut au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Les
excipients
pharmaceutiquement acceptables selon l'invention comprennent l'eau, le sérum
physiologique, la solution de Ringer, une solution de dextrose et des
solutions d'éthanol,
le glucose, le saccharose, le dextrane, le mannose, le mannitol, le sorbitol,
le
polyéthylène glycol (PEG), le phosphate, l'acétate, de la gélatine, des huiles
collagène,
Carbopol , des légumes, et analogues. On peut en outre inclure des
conservateurs
appropriés, des stabilisants, des antioxydants, des agents antimicrobiens et
des agents
tampons, tels que, par exemple, le hydroxyanisole butylé (BHA), le
hydroxytoluène
butylé (BHT), l'acide citrique, la tétracycline, et similaires.
D'autres exemples d'excipients pharmaceutiquement acceptables qui peuvent être
utilisés dans l'invention comprennent, mais ne sont pas limités à, des
échangeurs d'ions,
l'alumine, le stéarate d'aluminium, la lécithine, des protéines sériques,
telles que
l'albumine sérique humaine, des substances tampons comme des phosphates, la
glycine,
l'acide sorbique, le sorbate de potassium, des mélanges de glycérides partiels
d'acides
gras végétaux saturés, l'eau, des sels ou des électrolytes, comme le sulfate
de protamine,
l'hydrogénophosphate disodique, l'hydrogénophosphate de potassium, le chlorure
de
sodium, des sels de zinc, la silice colloïdale, le trisilicate de magnésium,
la
polyvinylpyrrolidone, les substances à base de cellulose, la
carboxyméthylcellulose
sodique, des polyacrylates, des cires, des polymères séquences polyéthylène
polyoxypropylène, polyéthylène glycol et la graisse de laine.
D'autres exemples d'excipients pharmaceutiquement acceptables qui peuvent être
utilisés dans l'invention comprennent, mais ne sont pas limités à, des
tensioactifs (par
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exemple l'hydroxypropylcellulose); des supports appropriés, tels que, par
exemple, les
solvants et les milieux de dispersion contenant, par exemple, l'eau,
l'éthanol, un polyol
(par exemple glycérol, propylène glycol et polyéthylène glycol liquide, et
analogues),
des mélanges appropriés de ceux-ci, et les huiles végétales, telles que par
exemple,
l'huile d'arachide et l'huile de sésame; des agents isotoniques, tels que, par
exemple, des
sucres ou du chlorure de sodium; les agents d'enrobage, tels que, par exemple,
la
lécithine; des agents retardant l'absorption, tels que, par exemple, le
monostéarate
d'aluminium ou la gélatine; des conservateurs, tels que, par exemple, le
chlorure de
benzalkonium, le chlorure de benzéthonium, le chlorobutanol, le thimérosal et
analogues; des tampons, tels que, par exemple, l'acide borique, le bicarbonate
de sodium
ou de potassium, les borates de sodium ou de potassium, les carbonates de
sodium ou de
potassium, l'acétate de sodium, le biphosphate de sodium et analogues; des
agents de
tonicité, tels que, par exemple, le dextrane 40, le dextrane 70, le dextrose,
la glycérine,
le chlorure de potassium, le propylène glycol, le chlorure de sodium; des
antioxydants et
des stabilisants, tels que, par exemple, le bisulfite de sodium, le
métabisulfite de
sodium, le thiosulfite de sodium, la thiocarbamide et analogues; des agents
mouillant
non ionique ou des agents clarifiants, tels que, par exemple, le polysorbate
80, le
polysorbate 20, le poloxamère 282 et le tyloxapol; des agents modifiant la
viscosité, tels
que, par exemple l'hydroxyéthylcellulose, hydroxméthylpropylcellulose, la
lanoline, la
méthylcellulose, le pétrolatum, le polyéthylène glycol, l'alcool
polyvinylique, la
polyvinylpyrrolidone, la carboxyméthylcellulose; et analogues.
Selon un mode de réalisation, les compositions incluses dans le kit selon
l'invention
sont adaptées à une administration par injection, telle que, par exemple, par
injection
intraveineuse, intrathécale, intradermale, intramusculaire ou épidurale. Dans
un mode
de réalisation, l'administration est intraveineuse. Dans un autre mode de
réalisation, le
kit est adapté pour l'administration par intraveineuse, de préférence
périphérique. Dans
un autre mode de réalisation, le kit est adapté pour l'administration par un
cathéter
veineux central (par exemple via la veine jugulaire, sous-clavière ou
fémorale), un
cathéter artériel pour un effet local ou dans une situation de chaos. Selon un
mode de
réalisation de l'invention, les compositions incluses dans le kit de
l'invention sont
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adaptées à une administration de préférence par un cathéter central multivoies
de façon
à éviter les réactions avec d'autres médicaments.
Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le cathéter utilisé est un
cathéter
imprégné d'antiseptique, et/ou antibiotique.
5 Selon un mode de réalisation, les compositions incluses dans le kit selon
l'invention
sont adaptés à une administration par injection dans un dispositif de
circulation
extracorporelle.
Des exemples de formulations adaptées à une administration par injection
incluent, mais
ne sont pas limitées à, une solution injectable ou une émulsion injectable
(telle que, par
10 exemple, une émulsion huile dans eau, une émulsion eau dans huile, une
émulsion
anhydre, une émulsion solide ou une microémulsion).
Dans un second aspect, l'invention concerne le kit tel que ci-dessus décrit,
pour son
utilisation dans une méthode d'administration séquentielle, à un sujet qui en
a besoin,
ledit sujet pouvant être un patient, des compositions incluses dans les
différents
15 containers du kit. Cette méthode est décrite ci-après.
Dans un troisième aspect, l'invention concerne une méthode pour
l'administration
séquentielle des compositions contenues dans le kit de l'invention, à un sujet
qui en a
besoin, d'une quantité thérapeutiquement efficace des compositions incluses
dans les
différents containers du kit décrit ci-dessus, selon un mode séquentiel, à
savoir en
premier lieu l'administration d'une quantité efficace de la composition du
premier
container, à savoir une composition comprenant une protéine anti-oxydante, de
préférence une protéine séléniée, en continu, puis l'administration en flash
d'une
quantité efficace de la composition du second container, à savoir une
composition
comprenant un composé sélénié oxydant. Dans un mode de réalisation,
l'administration
flash de la composition du second container est une administration en flash
répétés une
à cinq fois. Dans un mode de réalisation l'administration flash de la
composition est
constituée de trois administrations flash successives de la composition du
second
container.
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Dans un quatrième aspect, l'invention concerne une méthode pour
l'administration
séquentielle des compositions contenues dans le kit de l'invention, à un sujet
qui en a
besoin, d'une quantité thérapeutiquement efficace des compositions incluses
dans les
différents containers du kit décrit ci-dessus, selon un mode séquentiel, à
savoir en
premier lieu l'administration d'une quantité efficace de la composition du
premier
container, à savoir une composition comprenant une protéine anti-oxydante, de
préférence une protéine séléniée, en continu, optionnellement complétée par
l'administration de la composition du troisième container puis
l'administration en flash
d'une quantité efficace de la composition du second container, optionnellement
complétée par l'administration de la composition du quatrième container. Dans
un mode
de réalisation, l'administration flash de la composition du second container
est une
administration en flash répétés une à cinq fois. Dans un mode de réalisation
l'administration flash de la composition est constituée de trois
administrations flash
successives de la composition du second container.
Selon un autre mode de réalisation, la méthode de l'invention comprend une
étape
préliminaire de détermination du moment opportun pour débuter l'administration
des
compositions contenues dans le kit de l'invention. Selon un mode de
réalisation,
l'administration selon l'invention est débutée de façon précoce avant les
lésions de
l'endothélium et après le début de l'hyper-inflammation. Selon un autre mode
de
réalisation, la détermination du moment opportun pour débuter l'administration
comprend la détection et la quantification de la Sel-P dans le plasma d'un
sujet. Dans un
mode de réalisation, le début du traitement est décidé lorsque le sujet montre
une
diminution plasmatique de la moitié aux trois-quarts du taux de référence de
la Sel-P,
qui est d'environ 5 mg/L : en d'autres termes, si le sujet a une concentration
plasmatique en Sel-P de 1 à 2,5 mg/L, le début de traitement peut être décidé.
La
détermination de la quantité de Sel P est en particulier décrite dans le
brevet européen :
EP 1 393 078 ou le brevet US 7,635,491 incorporés ici par référence.
L'augmentation
du lactate est également un bon indicateur pour le début du traitement.
Selon un mode de réalisation de l'invention, la protéine séléniée anti-
oxydante selon
l'invention doit être ou est administrée au sujet à une quantité susceptible
de la faire
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revenir à un taux plasmatique moyen chez l'homme. L'homme possède en effet une
concentration plasmatique de Sel-P d'environ 5 mg/L. Pour revenir à un niveau
normal
de Sel-P dans le plasma se rapprochant de environ 5 mg/L chez un sujet atteint
de sepsis
ou d'inflammation généralisée aigüe par exemple, la quantité de sélénoprotéine-
P
administrée est, dans un mode de réalisation, de 2 à 90 mg de préférence 2 à
30 mg, très
préférentiellement 4 à 30 mg de sélénoprotéine-P administrée lentement, c'est-
à-dire à
pendant environ 10 min à environ une heure et préférentiellement environ 30
minutes.
Selon un autre mode de réalisation de l'invention, la protéine séléniée selon
l'invention
doit être ou est administrée au sujet 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 fois par jour pendant
1, 2, 3 ou 4
jours, de préférence 3 jours.
Selon un autre mode de réalisation, le composé sélénié doit être ou est
administré en
flash de sorte à obtenir une concentration de l'élément sélénium dans le
plasma
d'environ 2 à 40 1J mol/L, préférentiellement de 10 à 20 1J mol/L. Selon un
mode de
réalisation, l'administration flash est l'injection d'une composition de
composé sélénié,
de préférence sélénite de sodium ou sélénocystéine, de concentration de 0,1
mg/mL à
10 mg/mL, de préférence 0,2 à 5 mg/mL ou suivant un autre mode de réalisation
d'environ 1,5 mg/mL à 30 mg/mL, de préférence 5 mg/mL à 15 mg/mL, exprimé en
équivalent sélénium, en un temps d'environ 0,1 à 4 secondes, de préférence
environ 0,5
à 1 seconde. Suivant un mode de réalisation particulier, la concentration en
équivalent
sélénium administrée flash est d'environ 0,05 à environ 0,6 mg/kg de masse
corporelle,
de préférence 0,05 à environ 0,3 mg/kg de masse corporelle, très
préférentiellement
d'environ 0,1 à 1 mg/kg, d'environ 0,2 à 0,5 mg/kg, de préférence d'environ
0,25 à
0,35 mg/kg, de préférence d'environ 0,23 mg/kg.
La vitesse d'injection est de préférence d'environ 1 à 10 mL/sec ou 2 à 10
mL/sec, de
préférence environ 3 à 4 mL/sec ou 4 à 5 mL/sec. L'administration peut être
réalisée par
cathéter central ou par administration intra-veineuse.
Suivant un mode de réalisation, le schéma thérapeutique s'étend sur plusieurs
jours, de
préférence 1, 2, 3 ou 4 jours et la composition comprenant la protéine anti-
oxydante, de
préférence séléniée, est administrée toutes les 4, 6, 8 ou 12 heures, en
continu pendant
10 minutes à 1 heure, ladite administration étant suivie, entre 10 min à deux
heures (de
préférence 10 à 20 minutes) après la fin de l'administration de la protéine
séléniée de un
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à trois flash de composition comprenant le composé sélénié oxydant, les flash
étant
réalisés de 5 à 20 minutes d'intervalle entre eux. Suivant un mode de
réalisation, la
composition comprenant la protéine anti-oxydante, de préférence séléniée, est
administrée pendant 30 minutes, puis après un temps d'attente de 10 minutes,
la
composition comprenant le composé sélénié est administrée en trois injections
flash
espacées de 10 minutes ; l'ensemble est répété au bout de 4, 6, 8 et/ou 12h.
Dans un mode de réalisation, le contenu du troisième container (de préférence,
la
Vitamine E) est administré en continu avant l'administration des flashs de la
composition comprenant le ou les composés séléniés, de préférence sur 10
minutes à 2h,
de préférence pendant l'administration de la composition de la composition de
protéine
séléniée.
Dans un mode de réalisation, le contenu du quatrième container (de préférence,
la
Vitamine C à forte concentration) est administré en continu en commençant dans
l'espace de temps d'administration des flashs de composés séléniés, et de
préférence
.. pendant 10 minutes à 2h.
Selon un mode de réalisation de l'invention, l'administration pourra être
répétée, avec
des injections itératives suivies de rinçage par une solution neutre type
sérum
physiologique ou glucosé, selon les modalités de ce qui est réalisé pour les
injections de
produit de contraste lors des scanners. Cette modalité d'administration avec
des
injections flash permet l'obtention de concentrations cytotoxiques,
particulièrement sur
les cellules inflammatoires hyper activées, les polynucléaires neutrophiles et
ainsi l'effet
thérapeutique en limitant la quantité de produit administré et donc sa
toxicité en
particulier pulmonaire et/ou cardiaque.
L'administration en flash mimant un injecteur rapide de type de ceux utilisé
en imagerie
a été choisie pour optimiser le pic de concentration cytotoxique du composé
sélénié
selon l'invention. De plus la répétition des doses, à un intervalle court ou
administration
fractionnée, a permis d'optimiser l'effet cytotoxique sur les cellules
phagocytaires
hyper-activées et l'administration préalable de sélénoprotéine-P de protéger
l'endothélium. De plus la dose administrée au total sur les trois injections
en flash est
bien supérieure à celles administrée jusqu'à présent. La dose ainsi
fractionnée permet
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ainsi d'obtenir des pics très élevés transitoires et répétés du produit actif
tout en limitant
le risque d'une toxicité pulmonaire et/ou cardiaque.
Dans un mode de réalisation, le composé sélénié oxydant du second container
est inclus
dans un moyen de transport ou vectorisé pour cibler les cellules phagocytaires
ou de la
réponse innée. Selon un mode de réalisation, le composé sélénié oxydant est
vectorisé
ou inclus dans un moyen de transport pour cibler en particulier les
polynucléaires
neutrophiles circulants immatures. Selon un autre mode de réalisation, le
composé
sélénié oxydant inclus dans un moyen de transport ou vectorisé selon
l'invention
exprime des récepteurs spécifiques des cellules phagocytaires ou de la réponse
innée
.. comme par exemple, le récepteur CD64, CD36. Selon un autre mode de
réalisation, le
composé sélénié oxydant inclus dans un moyen de transport ou vectorisé exprime
des
récepteurs spécifiques des polynucléaires neutrophiles circulants immatures ou
de
cellules cancéreuses ou de bactéries ou de virus ou de parasites ou d'agents
fongiques.
Selon un autre mode de réalisation, le moyen de transport selon l'invention
est un
.. globule rouge fantôme. La préparation des globules rouges fantômes est
décrite dans
Dodge JT et al. Arch Biochem Biophys. 1963 Jan; 100: 119-30; Shaillender M. et
al.
International Journal of Pharmaceutics 415 (2011) 211¨ 217. Le globule rouge
fantôme
est utilisé comme moyen de transport et de présentation du composé sélénié ;
il permet
d'éviter les effets secondaires systémiques des composé séléniés oxydants dont
on
.. connaît la gravité (létal) ; il permet également d'agir à des
concentrations très élevées de
composé sélénié au niveau des cellules cibles en l'occurrence les cellules
phagocytaires
et plus particulièrement les polynucléaires neutrophiles circulants immatures
au niveau
de la microcirculation et de protéger directement et indirectement
l'endothélium tout en
diminuant l'hyperactivation, les cellules cancéreuses, les bactéries, les
virus ou les
.. parasites ou d'agents fongiques.
Au sein de la cellule ciblée, les cibles privilégiées sont les mitochondries
pour diminuer
l'activation des polynucléaires hyperactivés ou autres cellules hyperactives
ou le noyau
de façon à bloquer la fixation du NFKB sur l'ADN et donc de ce fait de
limiter, ou
bloquer la réaction inflammatoire généralisée.
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Selon un autre mode de réalisation, le moyen de transport ou vecteur selon
l'invention
est une nanoparticule. Des exemples de nanoparticules selon l'invention sont
décrits
dans l'article de Vergaro V. et al. Drug-loaded polyelectrolyte microcapsules
for
sustained targeting of cancer cells. Adv Drug Deliv Rev. 2011 Aug 14; 63(9):
847-64.
5 Par exemple, les nanoparticules selon l'invention incluent mais ne sont
pas limitées à:
une nanoparticule lipidique solide, un transporteur lipidique nanostructuré,
un
dendrimère, une nanoparticule magnétique, un fullerène, un nanotube de
carbone, un
nanotube halloysite, un colloïde, un colloïde recouverts de polyélectrolytes,
un
nanocolloïde, des microcapsules de polyélectrolytes.
10 Selon un autre mode de réalisation, le moyen de transport ou vecteur
selon l'invention
est une capsule. De préférence, la capsule selon l'invention est un sac
capsulaire.
Selon un mode de réalisation, le moyen de transport ou vecteur selon
l'invention est un
liposome. Selon un mode de réalisation, le vecteur selon l'invention est un
liposome
cationique. Des liposomes connus de l'homme du métier incluent mais ne sont
pas
15 .. limités à RPR209120/DOPE. Selon un autre mode de réalisation, le vecteur
selon
l'invention est un liposome cationique mannosylé pour cibler spécifiquement
les
polynucléaires neutrophiles. Des liposomes permettant de cibler des
polynucléaires
neutrophiles sont décrits par exemple dans Kelly C. et al. (Targeted liposomal
drug
delivery to monocytes and macrophages. J Drug Deliv. 2011; 2011: 727241). Des
20 formulations pour cibler les phagocytes sont bien connues de l'homme du
métier.
Selon un autre mode de réalisation, le sujet de l'invention est atteint d'un
cancer,
notamment de leucémie, lymphome ou cancer à tumeur solide. Dans un mode de
réalisation particulier, le sujet est atteint de leucémie ou de lymphome. Des
exemples de
leucémies incluent mais ne sont pas limitées à: leucémie aiguë, leucémie
chronique,
Leucémies de la lignée lymphoïde, leucémies de la lignée myéloïde, leucémie
aiguë
lymphoblastique, leucémie lymphoïde chronique, leucémie aiguë myéloblastique,
leucémie myéloïde chronique. Des exemples de lymphomes incluent mais ne sont
pas
limitées à : lymphome, hodgkinien et non hodgkinien.
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Selon un mode de réalisation, le sujet est atteint d'une tumeur solide. Les
tumeurs
solides comprennent les carcinomes et les sarcomes. Des exemples de carcinomes
incluent mais ne sont pas limitées à: cancers du sein, des poumons, de la
prostate, de
l'intestin. Des exemples de sarcomes incluent mais ne sont pas limitées à:
cancers de
l'os, du cartilage.
La présente invention concerne également un dispositif adapté à un mode
d'administration biphasique du kit selon l'invention.
Selon un mode de réalisation, le dispositif comprend un mode d'administration
flash.
Selon un autre mode de réalisation, le dispositif comprend un mode
d'administration
lente.
Le dispositif d'administration ne peut être réalisé avec les pompes à
perfusions
habituellement utilisées et nécessite une injection avec un niveau de pression
très élevé
allant jusqu'à 8 bar et permettant l'injection jusqu'à 10 mL/secondes. Chez
les gros
mammifères et à fortiori chez l'homme, le dispositif comprend une pompe à
haute
pression automatisée de type de celle utilisée en imagerie permettant des
débits très
élevés notamment dans des cathéters centraux.
Selon un autre mode de réalisation, le dispositif comprend un dispositif de
circulation
extracorporelle. De préférence, ce dispositif de circulation extracorporelle
permet une
atteinte des éléments figurés du sang sans toxicité pour 1' endothélium.
Selon un mode de réalisation, le dispositif selon l'invention fournit une
source d'énergie
pour générer une pression et/ou un débit fluidique, tout en offrant à
l'utilisateur une
rétroaction tactile et/ou audible de la pression fluidique générée, ce qui
permet à
l'utilisateur de moduler la pression et/ou l'écoulement du fluide. Le système
d'injection
de la présente invention est capable de fournir à la fois un mode
d'administration à
faible débit et/ou basse pression précise tout comme un mode d'administration
à haut
débit et/ou haute pression.
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Selon un mode de réalisation, le système d'injection du dispositif selon
l'invention
comprend un module de commande de fluide en liaison active avec un injecteur
connecté à une seringue. La seringue est en connexion fluidique avec une vanne
automatique du module de commande de fluide, qui est également en
communication
fluidique avec une source de contraste par l'intermédiaire d'une chambre
d'écoulement
intermédiaire. La chambre compte-gouttes comprend de préférence un mécanisme
de
détection du niveau de fluide. Une valve de préférence automatisée est
également en
communication avec un premier orifice d'entrée d'une lumière d'une vanne
d'isolement
de pression. La valve empêche les fluides salins et/ou contaminés de pénétrer
dans la
seringue et permet au module de commande d'arrêter l'écoulement du fluide de
la
seringue rapidement à toute pression et/ou à tout débit. Cette capacité
d'arrêter
immédiatement l'écoulement du fluide d'injection à toute pression et tout
débit
supprime sensiblement les effets de la conformité du système et permet à la
fois une
administration lente d'un composé et à la fois une administration flash d'un
autre
.. composé.
L'invention concerne aussi un kit tel que décrit ci-dessus, pour son
utilisation dans le
traitement du sepsis et/ou de l'inflammation aigue généralisée (SIRS, systemic
inflammatory response syndrome), du sepsis sévère, du choc septique, d'un
cancer
(notamment leucémie, lymphome ou cancer à tumeur solide), ladite utilisation
mettant
en oeuvre la méthode d'administration décrite ci-dessus. Dans un mode de
réalisation, le
sujet traité peut être en état de choc septique. Dans un mode de réalisation,
le sujet traité
peut être en état de défaillance multi-viscérale.
La présente invention concerne en particulier un kit pour son utilisation dans
le
traitement du sepsis et/ou de l'inflammation aigue généralisée (SIRS, systemic
inflammatory response syndrome) comprenant d'une part une protéine sélénié
anti-
oxydante, et d'autre part un composé sélénié, la protéine séléniée anti-
oxydante étant
destinée à être administrée lentement avant l'administration du composé
sélénié, qui est
destiné à être administré après la protéine séléniée de manière ultra-rapide,
de
préférence en flash répétés.
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Les termes de sepsis et de SIRS tels qu'utilisés dans l'invention peuvent
correspondre à
un choc septique et des états de SIRS donnant des tableaux similaires
nécessitant le
recours aux catécholamines après un remplissage ou lors de phase rapide de
remplissage
en cas d'aggravation très brutale. Le sepsis sévère peut être indiqué par la
présence
d'une ou plusieurs dysfonctions ou défaillances d'organes et de signes d'hypo-
perfusion
périphérique. Le sepsis sévère correspond à une réponse systémique
inflammatoire à
une infection associée à une défaillance viscérale, une hypo-perfusion ou
hypotension
incluant l'acidose lactique, l'oligurie ou une altération du statut mental. Le
choc
septique peut être révélé par la présence d'une hypotension persistant malgré
un
remplissage adéquat. Par adéquat, on retient généralement un remplissage de 20
à 30
mg/kg. Le de choc septique est souvent caractérisé par une réponse systémique
inflammatoire à une infection associée à un collapsus (hypotension) de plus
d'une heure
malgré un remplissage adapté et en l'absence d'autre cause d'hypotension.
(L'hypotension est plus tardive chez l'enfant et d'autres signes doivent être
pris en
compte en pédiatrie). L'hypotension est définie comme une: pression artérielle
systolique < 90 mmHg, pression artérielle moyenne < 60 mmHg, ou diminution
> 40 mmHg chez l'adulte ou +/- 2 DS en dessous de celle de référence chez
l'enfant).
Le sepsis sévère, tout comme le choc septique, est un syndrome basé sur le
reflet
clinique de la (des) défaillance(s) viscérale(s), elle-même(s) conséquence de
la réponse
métabolique à l'agression.
La réponse systémique inflammatoire (SIRS) est un terme descriptif utilisé
pour décrire
la présence d'une réponse inflammatoire généralisée indépendamment de sa
cause, et
est reconnue par un ensemble de signes complexes. Selon la dernière conférence
de
consensus, selon la "2001 SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS International Sepsis
Definitions Conference", ces signes sont actuellement définis comme suit :
= Paramètres généraux :
¨ Fièvre ou hypothermie (< 36 ou > 38,3 C),
¨ Tachycardie > 90 bpm (beats per minutes) ou +/- 2 déviation standard
(DS) par rapport à la valeur de référence pour l'âge,
¨ Tachypnée > 30 bpm,
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¨ Trouble du statut mental,
¨ CEdèmes ou balance hydrosodée positive (>20 ml/kg sur 24h).
= Paramètres inflammatoires :
¨ Hyperleucocytose ou leucopénie (> 12.000 ou < 4000/0),
¨ Présence de> 10% de formes immatures,
¨ C reactive Protein plasmatique (CRP) +/- 2 DS des valeurs de référence,
¨ Procalcitonine plasmatique (PCT) +/- 3 DS des valeurs de référence.
= Paramètres hémodynamiques :
¨ Hypotension artérielle (pression artérielle systolique < 90 mmHg,
pression artérielle moyenne,
¨ <70 mmHg, ou diminution > 40 mmHg chez l'adulte ou +/- 2 DS en
dessous de celle de référence chez l'enfant).
¨ Saturation en oxygène du sang veineux mêlé (Sv02) > 70% (non
utilisable chez l'enfant),
¨ Index cardiaque > 3,5 L/min.m2 (non utilisable chez l'enfant).
= Dysfonction d'organe :
¨ Hypoxémie artérielle (Pa02/Fi02 < 300),
¨ Oligurie (aigue) (diurèse < 0,5 ml/kg/h ou 45 ml pendant 2 dernières
heures),
¨ Augmentation de la créatininémie > 0,5 mg/dl,
¨ Anomalies de la coagulation (temps de thromboplastine activée> 60 s ou
> 1,5 du pourcentage normalisé international),
¨ Iléus (silence abdominal à l'auscultation),
¨ Trombocytopénie < 100,000/0,
¨ Hyperbilirubinémie (bilirubinémie totale > 4 mg/dl ou 70 mmol/L).
= Paramètres de perfusion tissulaire :
¨ Hyperlactatémie > 3 mmol/L,
¨ Augmentation du temps de reperfusion capillaire,
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Le terme de défaillance multi-viscérale tel qu'utilisé dans l'invention
correspond à un
syndrome clinique caractérisé par une dysfonction aigue et potentiellement
réversible
d'un organe ou d'une grande fonction, non directement impliqué dans le
processus
pathologique initial. La défaillance multi-viscérale est généralement associée
à une
5 hypotension (pression artérielle systolique < 90 mmHg ou réduction > 40 mmHg
à
partir de la valeur initiale en l'absence d'autre cause).
Les défaillances multi-viscérales sont volontiers basées sur le score de SOFA
(Sepsis
Related Organ Failure Assessment) (Tableau 1), les deux premiers grades
s'associent à
des dysfonctions, les deux derniers à des défaillances. Ils s'associent alors
le plus
10 souvent à la nécessité de mise en oeuvre de suppléance pour maintenir le
sujet en vie. Il
peut s'agir notamment (i) de la ventilation par un appareil pour assister la
respiration,
(ii) de la perfusion et l'administration de catécholamines pour maintenir une
tension
satisfaisante et un bon débit du sang, (iii) de la dialyse pour remplacer les
reins, (iv) de
la transfusion de sang et de plaquettes. Ces suppléances, et leur
surveillance, vont avoir
15 un impact très important dans le coût du traitement des sujets en état
de choc septique.
Pas de
Fonctions 1 2 3 4
défaillance(0)
Respiratoire <200 et <
100 et
>400 <400 <300
(Pa02/Fi02 en mmHg) ventilé
ventilé
Coagulation
>150. <150 <100 <50 <20
(plaquettes en 10 /mm)
Hépatique
<20 >20 >33 >102 >204
(bilirubine enlimol/L)
Dopa > 5 Dopa > 15
Cardiovasculaire Dopamine <
Adré. ou
Adré. ou
(Pression artérielle > 70 <70 5 ou
Noradré. < Noradré. >
moyenne) Dobutamine
0,1 0,1
Système nerveux central
15 13-14 10-12 6-9 <6
(score de Glasgow)
Rénal >300 >440
ou
<110 >110 >171
(Créatininémie) ou
diu < 500 diu < 200
Tableau 1 (score de SOFA de 0 à 20) (Dopa pour Dopamine, Adré pour Adrénaline,
Noradré pour Noradrénaline, diu pour diurèse en ml/j.) Le score de SOFA
(Sepsis
Related Organ Failure Assessment) est un des scores de défaillances les plus
utilisés.
20 La définition du sepsis a été modifiée en 2016 et est définie comme une
dysfonction
d'organe mettant en jeu la vie et causée par une réponse dérégulée à une
infection. La
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dysfonction d'organe peut être évaluée par une augmentation du SOFA de 2
points (ou
plus) qui est associé avec une moralité de plus de 10%. Le choc septique doit
être défini
comme des sujets en sepsis où il existe une défaillance circulatoire
particulièrement
prononcée, avec des anomalies cellulaires et métaboliques qui sont associées à
une
mortalité plus élevée que dans le sepsis seul (Singer M et JAMA.
2016;315(8):801-
810).
Les marqueurs permettant de surveiller l'évolution d'un sepsis sont connus de
l'homme
du métier. La concentration plasmatique en lactate et son évolution est un
marqueur
tardif mais communément retenu de la survenue d'un sepsis et de la
surveillance de
l'efficacité de la prise en charge d'un choc septique (ou d'un sepsis sévère),
Les autres
marqueurs reconnus sont ceux de la surveillance des défaillances viscérales
tels que
listées dans la conférence de consensus de 2001 et dans le score de SOFA.
D'autres
marqueurs comme l'oxyde d'azote NO, des cytokines, des facteurs de croissance
en
particulier de l'endothélium, des microparticules, des dosages de récepteurs
sont utilisés
mais dans le cadre de la recherche. Le dosage de la sélénoprotéine-P a été
proposé
comme marqueur précoce du sepsis et de sa gravité.
Selon un mode de réalisation, le sujet de l'invention est un sujet atteint de
sepsis et/ou
d'inflammation aigue généralisée.
Selon un autre mode de réalisation, le sujet de l'invention est atteint d'un
sepsis à la
.. phase précoce.
Selon un mode de réalisation, le sujet de l'invention est un sujet ayant subi
un arrêt
cardiaque ou une ischémie reperfusion.
Selon un mode de réalisation, le sujet de l'invention est sous traitement
antibiotique ou
est atteint d'une infection bactérienne notamment résistante aux antibiotiques
ou est
atteint d'une infection virale.
Selon un mode de réalisation, le sujet de l'invention est un organe et la
méthode selon
l'invention est implémentée avant le prélèvement d'organe, dans le cadre d'une
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préparation de greffon, dans la cadre d'une greffe et/ou dans la cadre d'un
rejet de
greffe.
Des pathologies préexistantes peuvent rendre le sujet plus à risque de faire
un sepsis
(selon la définition du document, sepsis sévère et choc septique) au décours
d'une
.. infection: une hépatopathie alcoolique, une cirrhose, une anorexie, une
dénutrition, une
malnutrition, un diabète, un cancer, une hémopathie, une maladie de système,
un sujet
atteint du syndrome d'immunodéficience acquise (SIDA) ou une pathologie
inflammatoire chronique, notamment intestinale, et la survenue préalable
récente d'un
épisode de sepsis, la présence de nombreux cathéters. Suivant un mode de
réalisation, le
sujet de l'invention est atteint d'une de ces pathologies.
L'inflammation aigue est également un événement majeur chez les victimes
d'irradiation qui ne décèderaient pas immédiatement. Elle concerne également
les
syndromes de détresse respiratoire aigüe par exposition aux gaz suffocants,
vésicants et
irritants, et aux autres atteintes d'organes par inflammation aigüe.
L'inflammation aigue
est par ailleurs un évènement secondaire à l'exposition à des armes à effet
par ondes
électromagnétiques.
L'inflammation aigüe se réfère également aux états de choc allergiques ou les
formes
graves d'allergies telles que l' oedème de Quincke .
L'inflammation aigüe est également la conséquence d'une revascularisation
tardive
levée d'une ischémie aigüe quel qu'en soit le territoire (cérébral, cardiaque,
des
membres inférieurs), crush syndrome, revascularisation après arrêt cardiaque,
de
pancréatites aigües sévères infectées ou non, un neuro-paludisme (accès
pernicieux),
poussée aigüe de lymphome ou de vascularite.
L'inflammation aigüe concerne également les conséquences de la défaillance
.. immunitaire à l'occasion d'infections nosocomiales avec des agents
pathogènes de plus
en plus opportunistes.
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Selon un autre mode de réalisation, le sujet de l'invention est atteint d'un
sepsis grave.
Un sepsis grave au sens de la présente invention est un sepsis avec
dysfonction aiguë
d'un ou de plusieurs organes ("défaillance multi-viscérale").
Selon un autre mode de réalisation, le sujet de l'invention est atteint d'un
choc septique.
Selon un mode de réalisation, le sujet de l'invention est un sujet sain en
apparence, ce
qui signifie que le sujet n'a pas été antérieurement diagnostiqué ou
identifiés comme
ayant ou souffrant d'un état septique, ou qui est en train de développer un
état septique
ou SIRS de sévérité similaire.
Selon un mode de réalisation, le sujet peut être un sujet asymptomatique d'un
état
septique. Tel qu'utilisé ici, un sujet asymptomatique fait référence à un
sujet qui ne
présente pas les symptômes classiques d'un état septique.
Selon un autre mode de réalisation, le sujet peut être à risque d'avoir ou de
développer
un état septique, tel que défini par des indices cliniques tel que par exemple
: l'origine
ethnique, l'âge, une comorbidité, l'abus d'alcool, la pauvreté, un bas statut
socio-
économique, ou la saison (le sepsis est plus fréquent en hiver dans les
régions où il
existe).
Selon un autre mode de réalisation, le sujet présente au moins deux des
symptômes
suivants : température supérieure à 38,2 C (ou hypothermie inférieure à 36 C),
tachypnée supérieure ou égale à 30 mouvements par minute (min), tachycardie
supérieure à 120 battements par min, pression artérielle systolique inférieure
à
110 mmHg.
Selon un autre mode de réalisation, le sujet présente au moins deux des
symptômes
suivants : température supérieure à 38,2 C (ou hypothermie inférieure à 36 C),
tachypnée supérieure ou égale à 22 mouvements par minute (min), syndrome
confusionnel ; tachycardie supérieure à 120 battements par min, pression
artérielle
systolique inférieure à 100 mmHg.
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Selon un mode de réalisation, le sujet est un nourrisson ou un enfant
présentant des
facteurs favorisant le développement des états septiques. Les facteurs
favorisant le
développement d'un état septique chez le nourrisson comprennent mais ne sont
pas
limités à: immunocompétence (purpura fulminans), immunodéficience (déficits
immunitaires congénitaux ou acquis), comorbidité (malformations cardiaques ou
urinaires), grands brulés, polytraumatisés, ou hospitalisés en réanimation.
Selon un autre un mode de réalisation, le sujet est un enfant présentant des
facteurs
favorisant le développement d'un sepsis. Des exemples d'infections à l'origine
d'un
sepsis comprennent mais ne sont pas limitées à: des méningites, des
septicémies, des
infections focales, des infections respiratoires, des bactériémies primitives,
des
infections génito-urinaires, abdominales, des tissus mous, du système nerveux
central,
des endocardites. Des exemples d'infections focales comprennent mais ne sont
pas
limitées à : pneumonie, otite, épiglotitte, conjonctivite, arthrite, urétrite,
péricardite.
Selon un autre mode de réalisation, le sujet de l'invention présente des
facteurs
favorisant une évolution rapide vers une réaction inflammatoire aigue et qui
comprennent de manière non-limitative : a) sepsis : une septicémie, une
infection
pulmonaire (telle que la pneumonie), une infection intra-abdominale, une
infection
grave de purpura, des lésions nécrotico-bulleuses de fasciite nécrosante, des
infections
nosocomiales, des péritonites, des méningites ou des septicémies bactériennes,
b) SIRS,
une pancréatite, une brûlure étendue, l'asthme aigu grave, un polytraumatisme,
une
irradiation massive, l'asthme aigu grave, les fumées d'incendie, les gaz (de
combat)
irritant, les ischémies reperfusions comme lors de syndromes d'écrasement et
les
excitations moléculaire des armes non létales.
Selon un autre mode de réalisation, le sujet de l'invention a subi une
intervention
chirurgicale lourde, une intervention chirurgicale avec clampage (ischémie-
reperfusion),
une intervention chirurgicale avec circulation extra-corporelle.
Ainsi, l'invention a pour objet une méthode selon l'invention, dans laquelle
le sujet est
un patient atteint de sepsis et/ou d'inflammation aigue généralisée, et/ou de
sepsis au
stade précoce, et/ou d'un sepsis grave, et/ou d'un choc septique, et/ou de
défaillances
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multi-viscérales, et/ou présente au moins deux des symptômes suivants :
température
supérieure à 38,2 C (ou hypothermie inférieure à 36 C), tachypnée supérieure
ou égale
à 30 mouvements par minute (min), de préférence supérieure ou égale à 22
mouvements
par minute (min), (tachycardie supérieure à 120 battements par min), pression
artérielle
5 systolique inférieure à 100 mm Hg, syndrome confusionnel ; et/ou est un
sujet, en
particulier un nourrisson ou un enfant présentant des facteurs favorisant le
développement des états septiques ou du sepsis ou des facteurs favorisant une
évolution
rapide vers une réaction inflammatoire aigue a subi une intervention
chirurgicale lourde,
une intervention chirurgicale avec clampage (ischémie-reperfusion) ou
circulation
10 extra-corporelle.
Dans un cinquième aspect, l'invention concerne un kit tel que décrit ci-
dessus, pour son
utilisation dans le traitement des cancers. Selon un mode de réalisation,
l'invention
concerne un kit tel que décrit ci-dessus, pour son utilisation dans le
traitement des
leucémies, de préférence des formes aigües de leucémies, ladite utilisation
mettant en
15 oeuvre la méthode d'administration selon l'invention décrite ci-dessus.
De préférence, la
méthode et le kit selon l'invention sont utilisés en traitement d'appoint pour
le
traitement des leucémies, de préférence des formes aigues de leucémies. En
particulier,
le kit selon l'invention est utilisée en traitement d'appoint notamment lors
de chirurgie
pour limiter la prolifération de cellules cancéreuses dont les modes de
fixation à
20 1' endothélium présentent des similitudes avec les polynucléaires
hyperactivés.
Selon un mode de réalisation, l'invention concerne un kit tel que décrit ci-
dessus, pour
son utilisation dans le traitement des tumeurs solides.
Dans un sixième aspect, l'invention concerne un kit tel que décrit ci-dessus,
pour son
utilisation pour réduire la production de peroxynitrite ou d'autres dérivés
réactifs nitro-
25 oxygénés (e.g. anion superoxyde 02¨, oxygène singulet 02, peroxyde
d'hydrogène
H202, ou encore de l'ozone 03) chez un sujet qui en a besoin, ladite
utilisation mettant
en oeuvre la méthode d'administration selon l'invention décrite ci-dessus.
Dans un septième aspect, l'invention concerne un kit tel que décrit ci-dessus,
pour son
utilisation pour réduire l'hyper-inflammation chez un sujet qui en a besoin,
ladite
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utilisation mettant en oeuvre la méthode d'administration selon l'invention
décrite ci-
des sus.
Dans un huitième aspect, l'invention concerne un kit tel que décrit ci-dessus,
pour son
utilisation pour réduire la quantité de bactéries, ou de virus, ou de
parasites ou d'agents
fongiques chez un sujet qui en a besoin, ladite utilisation mettant en oeuvre
la méthode
d'administration selon l'invention décrite ci-dessus.
BREVE DESCRIPTION DES FIGURES
Figure 1 est une photographie montrant l'aspect des poumons d'un rat décédé
avec le
traitement complet (Sel P + Na2Se03). L'aspect pulmonaire est sensiblement
normal.
Figure 2 est une photographie montrant l'aspect des poumons d'un rat n'ayant
reçu que
de la Sel-P. L'aspect pulmonaire est peu altéré.
EXEMPLES
La présente invention se comprendra mieux à la lecture des exemples suivants
qui
illustrent non-limitativement l'invention.
Exemple 1 : composition selon l'invention
Composition A est une solution de composé sélénié oxydant : sélénite de sodium
de
concentration 0,2 mg/mi en équivalent Se.
Composition A2 est une solution témoin d'eau pour préparation injectable
(ppi).
Composition B est une solution de protéines plasmatiques enrichie en Sel-P et
contenant
0,05 mg/mi de Sel-P. Dans un mode de réalisation préféré, cette solution
purifiée
comprend des protéines de liaison à l'héparine (HBP) dont l'AT III.
Composition B2 est une solution témoin d'albumine à 4% diluée au 20ème.
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Exemple 2 : inclusion du composé sélénié selon l'invention dans un globule
rouge
fantôme
Dans un mode de réalisation, le composé sélénié oxydant selon l'invention est
inclus
dans un globule rouge fantôme, permettant la libération du composé sélénié
oxydant au
niveau de la microcirculation et du site spécifique de l'adhésion des cellules
phagocytaires ou de la réponse immune innée avec les cellules endothéliales.
Ceci
permet une action cytotoxique limitant l'hyper-inflammation et limitant
l'adhésion des
cellules phagocytaires ou de la réponse immune innée avec les cellules
endothéliales,
adhésion qui fait intervenir des ponts disulfures et de protéger directement
ou
indirectement l'endothélium.
Exemple 3 : dispositif selon l'invention
L'invention comprend en outre un dispositif selon l'invention qui administre
la protéine
séléniée (dans cet exemple, sélénoprotéine P) lentement puis le composé
sélénié (dans
cet exemple, sélénite de sodium) en flash.
Par exemple, le dispositif d'administration peut être le système de Swiss
Medical Care :
Computed Tomography (CT) Exprès III 134 Contrast Media Delivery System (CMDS),
ou CT Premica TM CMDS décrit dans les demandes de brevet : EP1713528,
EP2298382, EP2477677.
Par exemple, le dispositif d'administration peut aussi être le système de
Medrad Inc.
décrit dans la demande internationale : W02005104687, ou la demande
US2004242996.
Exemple 4 : kit selon l'invention
Le kit selon l'invention comprend au moins deux containers distincts, l'un
contenant le
composé A et l'autre comprenant le composé B :
Container de la composition A: 0,15 ml d'une solution de sélénite de sodium à
la
concentration de 0,2 mg/mi en équivalent Sélénium (Se).
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Container de la composition B : 1 mL d'une solution de plasma enrichi en Sel-P
à une
concentration de 0,05 mg/mL.
Exemple 5 : Effet des administrations successives de Sel-P et Na2Se03
Matériel et Méthodes
Rats
La prise en charge des animaux et les procédures expérimentales ont été
approuvées par
le comité d'éthique et validé selon la procédure en vigueur avec le ministère.
Les expérimentations seront conduites avec des rats mâles TOPS Han Ico Wistar
de
12 semaines. (Charles River, L'Arbresle, France). Les animaux ont de ce fait
un poids
compris entre 380 et 400 g au moment de l'expérimentation. Ils seront gardés
dans des
cages individuelles en polystyrène thermoformées en accord avec les standards
du
Ministère de l'Agriculture et de l'Environnement et gardés à une température
de 21
1 C, avec une humidité relative de 55% et une alternance de 12h du cycle
nycthéméral
(jour/nuit). Ils auront un accès libre à une alimentation adaptée et un accès
libre à l'eau
correspondant à un apport adéquat en sélénium. Une acclimatation d'une semaine
sera
réalisée pour limiter le stress expérimental. Les animaux manifestement
malades au
début des expérimentations seront exclus.
Groupes d'animaux :
= Groupe 1 : Témoins malades LPS seul : aucune intervention.
= Groupe 2: Témoins perfusion sur 30 min : administration de la solution
témoin
B2 sur 30 minutes (min.), attente 10 min. puis administration de Na2Se03 (A)
sur 30 min (perfusion).
= Groupe 3 : Témoins des compositions B et A : administration de la
solution
témoin B2 sur 30 min, attente 10 min. puis administration de la solution
témoin
A2 en 3 injections flash toutes les 10 min.
= Groupe 4: Action de la composition A seule : administration de la
solution
témoin B2 sur 30 min, attente 10 min, puis administration de Na2Se03 (A) en 3
injections flash toutes les 10 min.
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= Groupe 5 : Action de la composition B seule : administration de Sel-P (B)
sur 30
min, attente 10 min. puis administration de la solution témoin A2 en 3
injections
flash toutes les 10 min.
= Groupe 6 : Action en synergie des compositions B et A: administration de
Sel-P
(B) sur 30 min, attente 10 min. puis administration de Na2Se03 (A) en 3
injections flash toutes les 10 min.
Le critère principal est la concentration plasmatique en lactate tel qu'il a
été indiqué au
comité d'éthique.
Solutions
= LPS: LPS Salmonella typhimurium Serotype LG511, Sigma L-6511 (Lot
12K4090).
= Composition A (sélénite de sodium) : La solution de travail est à la
concentration de 0,2 mg/m1 en équivalent Se. Injection à H 3h40 après
l'injection de LPS dans la veine jugulaire interne par le cathéter central de
la
quantité de la solution de travail à faire entre deux traits (correspondant à
0,2
mg/mi) de façon à délivrer 0,1 mg/kg d'équivalent sélénium sous forme de
sélénite de sodium. Perfusion maintenue par du sérum physiologique à minima
0,1 ml/h (NaCl).
= Composition A2: Eau pour préparation injectable (ppi) qui sera à injecter
selon
les mêmes modalités et rinçage selon les mêmes modalités.
= Composition B: la solution du plasma humain enrichie en sélénoprotéine-P
à
raison de 0,05 mg/ml, avec une purification d'environ 8% avec une
concentration en protéine de 2 g/L. Injection de 2,5 ml en 30 minutes à chaque
animal.
= Composition B2: Albumine à 4% humaine à diluer au 20ème - Injection de 1 ml
de la solution diluée au 20ème aux animaux sur 30 min à la vitesse de 2 ml/h.
Protocole expérimental :
- HO: Déclenchement du choc septique par l'administration intra-péritonéale de
LPS
à 50 mg/kg à HO. 4 rats témoins ont eu initialement une dose de 50 mg/kg de
LPS.
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- H1, les rats sont anesthésiés et appareillés. L'anesthésie est
effectuée sous penthotal
et fentanyl, les animaux sont ensuite trachéotomisés puis un cathéter est mis
en
place dans la jugulaire. La perfusion est maintenue par du sérum physiologique
à
minima 0,1 ml/h (NaCl).
5 - Intervention à H3 : Perfusion continue de la Sel-P (B) (1 ml) ou du
témoin B2 (1 ml)
sur 30 min. Attente de 10 minutes. La perfusion continue est maintenue pour
limiter
les pertes de la composition B (ou B2).
- Intervention à H 3h40, 3 injections ultra rapides ou flash en 0,5 sec
de 0,15 ml de la
composition A (sélénite de sodium) ou composition A2 (témoin) toutes les 10
min.
10 et rinçage de la perfusion avec 0,15 ml de sérum physiologique.
L'injection est
réalisée directement au niveau du cathéter jugulaire interne.
Une anesthésie générale est maintenue par une administration d'une demi-dose
de
penthotal en intrapéritonéal toutes les heures ou en cas de début de signe de
réveil.
- Prélèvements à H 6h30:
15 Prélèvement et euthanasie : prélèvement terminaux et euthanasie à 6 h30
après
l'injection de LPS, ou prélèvement immédiat si décès de l'animal durant le
protocole
expérimental.
Prélèvement d'un gaz du sang et prélèvement d'un tube d'EDTA et d'héparinate
de
lithium lors de l'euthanasie des rats.
20 Un échantillon des poumons a été prélevé pesé et mis au congélateur de
façon à pouvoir
déterminer, au moins, le ratio sec/humide comme indicateur de l'oedème
pulmonaire.
- Paramètres mesurés :
Dosage immédiat du lactate, des gaz du sang en veineux, du ionogramme sanguin,
de la
glycémie et du taux d'hémoglobine et de l'hématocrite de la créatininémie.
D'autres
25 mesures seront réalisées sur les échantillons mis en congélation sur
tubes EDTA et
Héparinate de lithium.
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Résultats
Effet du traitement sur la concentration en lactate :
Les groupes témoins comprennent : groupes 1 ; 2 et 4 avec sélénite de sodium
en
administration continue ou administration flash, groupe 3 avec injection
d'albumine et
injection d'eau et groupe 5 avec administration de Sel-P.
Taux de
Groupe
lactate
1 4,78
1 3,76
1 5,45
Témoins 1 7,36
2 8,75
3 6,78
3 8,45
Traitement : 5 3,35
Sel-P 5 4,79
6 2,2
Traitement en _________________________________________
6 2,63
synergie
6 2,02
Tableau 2.
Les animaux issus du groupe 4 ne survivent pas à l'administration de sélénite
de sodium
seul. Par conséquent aucune valeur n'est indiquée dans le tableau 2.
Sur l'ensemble du groupe 6, la concentration en lactate est significativement
abaissée
chez les rats de ce groupe comparé aux rats des groupes témoins. La
concentration en
lactate est de 2,28 0,31 vs 6,48 1,88 mmol/L (p=0.017 test de Mann
Whitney)
(Tableau 2).
Ceci est lié à la valeur normalisée de la concentration en lactate et à la
très fiable
variation entre les concentrations en lactate dans ce groupe dans un modèle de
LPS très
sévère (50 mg/kg de LPS) et une euthanasie à 6h30 après l'administration de
LPS.
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Par ailleurs les trois rats du groupe 6 (B : sélénoprotéine-P sur 30 minutes
et 3 injections
flash de A: sélénite de sodium non hydraté à la dose de 0,1 mg/kg par
injection flash)
ont des constantes biologiques proches des valeurs de référence malgré
l'administration
6h30 avant d'une dose mortelle de LPS à 50 mg/kg.
Effet du traitement sur les gaz du sang :
Les gaz du sang ont été mesurés en veineux chez des animaux euthanasiés
(Tableau 3).
Dans le groupe 6 : la saturation en sang veineux mêlé central est haute ce qui
témoigne
de l'absence ou de la faible souffrance métabolique, ainsi que du débit
cardiaque adapté.
Par ailleurs, la glycémie est dans les valeurs de référence, et le pH peu
modifié. Au
niveau rénal, il y a peu d'élévation de la concentration de la créatinémie.
On constate par ailleurs au niveau pulmonaire un aspect macroscopique
pratiquement
normal très différent de l'aspect macroscopique des rats témoins qui dans ce
modèle très
sévère ont un aspect hépatisé témoin d'un syndrome de détresse respiratoire
aigüe très
important (Figure 1).
Dans le groupe 2: le tableau montre qu'un rat ayant reçu de l'albumine dilué
et du
sélénite de sodium à la dose de 3 x 0,1 mg/kg = 0,3 mg/kg de sélénium sur 30
minutes
présente des paramètres biologiques très différents par rapport au groupe 1 de
rats
témoins avec une souffrance très importante, pré-létale: on constate une
augmentation
du lactate majeure, un pH abaissé, une glycémie effondrée et une augmentation
de la
créatininémie. La Scv02 s'est effondré du probablement à très bas débit
cardiaque
imposant aux cellules une extraction maximale en oxygène malgré la situation
de sepsis.
Dans le groupe 5 : chez les rats n'ayant reçu que de la sélénoprotéine-P, on
constate une
amélioration incomplète. Les valeurs du pH sont abaissées et la fonction
rénale est peu
altérée ainsi que la valeur de la glycémie par rapport à ce qui est observé
chez le rat
précédent (groupe 2), correspondant à ce qui est observé chez la plupart des
rats
témoins. La Scv02 reste aussi dans des valeurs moins altérées que chez le rat
précédent.
On constatera également une moindre altération de l'aspect pulmonaire qui n'a
pas
l'aspect hépatisé constaté chez les rats témoins (Figure 2).
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Groupe 1 1 1 1 2 3 3 5 5 6 6 6
pH
7,44 7,270 7,43 6,74 6,906 7,240 7,210 7,357 7,346 7,400 7,491 7,313
Pa02
387 33,7 40,9 59,6 16 37,9 33,7 55,3 34 51,5 40,4 47,8
mmHg
PCO2
mmHg 20'1 83'4 33'2 44'9 97 39,9 56,5 44,7 45,4 48,7 34,1 54,3
CO3H- 13,7 37,8 23,3 6,1 19,6 18,6 22,2 25,1 27,7 31 26,6 28,3
Scv02 ou
100 54 79,3 58,3 8,9 65 51,2 86,9 64,5 85,9 80,7 79,3
Sa02
Lactate
artériel 4,78 5,45 7,36
probable
Lactate
3,76
8,75 6,78 8,45 3,35 4,79 2,2 2,63 2,02
veineux
Na 139 143 141 155 144 105 132 140 143 145 144 142
K 4,5 5,8 4,2 5 7,5 >12 9,9 4,6 5,2 6,4 5,2 6,1
Cl 116 104 105 133 116 81 103 107 105 107 108 106
Ca
1,01 1,16 1,08 0,62 1,21 0,57 0,71 1,12 1,17 1,12 1,14 1,22
AgapK 14 7 17 21 16 ND 17 13 16 13 15 14
Ht 40 48 38 <10% 35 45 50 38 41 35 38 35
cHb 13,5 16,4 12,9 NA 12,1 15,4 17 13 14
11,8 13 11,9
Gly 1,1 1,01 1,2 1,21 0,27 0,52 0,67 1,16 1,25 1,14 1,23 1
Creat 77 180 113 44 156 132 215 52 94 100 78 113
Tableau 3.
