Note: Descriptions are shown in the official language in which they were submitted.
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
1
Souches de Lactobacillus stimulant la croissance
La présente invention concerne de nouvelles souches bactériennes susceptibles
de
favoriser la croissance d'un sujet, et plus particulièrement la croissance
juvénile des
animaux d'élevage, et leurs utilisations en tant que probiotiques. Elle
concerne également
des compositions alimentaires ou pharmaceutiques comprenant lesdites souches,
ainsi que
leurs utilisations, notamment pour augmenter les performances de croissance
des animaux
d'élevage.
ARRIERE-PLAN TECHNOLOGIQUE DE L'INVENTION
Définis en 2001 par l'Organisation mondiale de la Santé (OMS) et
l'Organisation
des Nations Unies pour l'alimentation et l'agriculture (FAO), les probiotiques
sont des
micro-organismes vivants, qui, lorsqu'ils sont ingérés en quantité suffisante,
exercent des
effets positifs sur la santé, au-delà des effets nutritionnels traditionnels
.
Les probiotiques ont été commercialisés et utilisés dans l'alimentation des
animaux
d'élevage à partir des années 1960 et ont été l'objet d'un intérêt croissant
notamment en
raison de la réduction progressive de l'usage des antibiotiques comme
promoteurs de
croissance puis leur interdiction décrétée en 2006 en Europe.
De nombreuses espèces microbiennes ont été utilisées en tant qu'agents
probiotiques. Ces micro-organismes appartiennent essentiellement aux bactéries
du genre
Bacillus, Bifidobacterium, Enterococcus, Lactobacillus, Streptococcus et
Pediococcus, et
aux levures du genre Saccharomyces ou Kluyveromyces. Certains de ces
microorganismes
font habituellement partie de la communauté microbienne intestinale (ou
microbiote
intestinal) alors que d'autres n'en sont pas des hôtes habituels. Décrit comme
un organe
additionnel , ce microbiote joue un rôle clé bénéfique pour l'hôte en
exerçant de
nombreuses fonctions biologiques, telles que l'aide à l'efficacité de la
digestion, le
métabolisme des substrats, la lutte contre les pathogènes, ou encore la mise
en place et
l'homéostasie des réponses immunitaires. L'utilisation de souches probiotiques
permet
donc d'influencer la composition ainsi que l'activité de ce microbiote afin de
renforcer son
action bénéfique.
Selon les probiotiques utilisés, leurs effets résultent soit d'un effet
nutritionnel
direct ou d'un effet lié au renforcement des défenses naturelles de l'hôte.
Ils peuvent ainsi
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
2
concerner différents aspects tels que la performance animale mesurée par des
paramètres
zootechniques ou le bien-être animal.
Afin de faire face à la demande toujours croissante de production animale, la
recherche de probiotiques démontrant une capacité importante à influer sur les
paramètres
zootechniques et capables de remplacer efficacement les antibiotiques en tant
que facteurs
de croissance est plus que jamais d'actualité.
RESUME DE L'INVENTION
Les inventeurs ont identifié de nouvelles souches bactériennes capables de
stimuler
de manière particulièrement efficace la croissance animale.
Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention concerne une souche de
Lactobacillus plantarum sélectionnée dans le groupe constitué de la souche
Lactobacillus
plantarum IGFL1 déposée le 19 Juillet 2017 à la CNCM (Collection Nationale de
Cultures
de Micro-organismes - Institut Pasteur) sous le numéro 1-5217, et de la souche
Lactobacillus plantarum IGFL2 déposée le 19 Juillet 2017 à la CNCM (Collection
Nationale de Cultures de Micro-organismes - Institut Pasteur) sous le numéro 1-
5218.
Selon un second aspect, elle concerne également une composition comprenant une
souche de Lactobacillus plantarum selon l'invention, en particulier une
composition
probiotique.
La composition selon l'invention peut être une composition alimentaire, de
préférence un complément alimentaire ou un additif alimentaire, ou une
composition
pharmaceutique.
De préférence, la composition selon l'invention comprend entre 105 et 1012
cellules
formant des colonies d'une souche de Lactobacillus plantarum selon
l'invention.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne également une souche de
Lactobacillus plantarum selon l'invention pour une utilisation en tant que
médicament,
ainsi que l'utilisation d'une souche de Lactobacillus plantarum selon
l'invention pour
préparer une composition selon l'invention.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne une souche de
Lactobacillus
plantarum ou une composition selon l'invention pour une utilisation dans le
traitement
d'un retard de croissance chez un sujet.
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
3
Selon un autre aspect, la présente invention concerne une souche de
Lactobacillus
plantarum ou une composition selon l'invention pour une utilisation visant à
favoriser la
croissance d'un sujet.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne une utilisation non
thérapeutique d'une souche de Lactobacillus plantarum ou d'une composition
selon
l'invention pour augmenter les performances de croissance d'un animal.
Le sujet peut être un humain ou un animal, de préférence un animal d'élevage.
Selon certains modes préférés, le sujet est un sujet juvénile.
Selon certains modes particuliers, le sujet est une volaille, en particulier
une volaille
à un stade prénatal, i.e. in-ovo.
Le sujet peut notamment être soumis ou avoir été soumis à une carence
nutritionnelle, de préférence une carence en protéines.
BREVE DESCRIPTION DES DESSINS
Figure 1: Quantification de l'activité promotrice de la croissance animale de
souches de Lactobacillus plantarum. Les données de taille sont représentées
sous forme
de boîtes à moustaches avec indication des valeurs minimales et maximales, de
la médiane
et des 50 percentiles autour de la médiane.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
Lors de travaux précédents, notamment décrits dans la demande internationale
de
brevet WO 2015/173386, les inventeurs ont identifié différentes souches de
Lactobacillus
présentant un effet plus ou moins marqué sur la croissance des animaux. La
présente
invention s'inscrit dans la poursuite de ces travaux et concerne de nouvelles
souches
bactériennes aux propriétés améliorées et capables notamment d'induire
fortement la
croissance. Ces nouvelles souches, à savoir Lactobacillus plantarum IGFL1 et
IGFL2, ont
été isolées respectivement à partir de variant naturels des souches L.
plantarum WJL et
NIZ02877.
Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention concerne une souche de
Lactobacillus capable de stimuler de manière particulièrement efficace la
croissance, en
particulier la croissance squelettique, d'un sujet auquel elle est
administrée.
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
4
Tel qu'utilisé ici, le terme sujet se réfère à un humain ou un animal. Le
sujet
peut être un sujet à un stade prénatal (embryon ou foetus), un sujet juvénile,
c'est-à-dire un
humain prépubère (de la naissance à la puberté) ou un animal sevré mais
n'ayant pas
atteint la maturité sexuelle, ou un adulte. De préférence, le sujet humain est
un humain
prépubère ou un adulte. L'animal peut être en particulier un animal de
compagnie,
d'élevage ou de sport. De préférence, l'animal est sélectionné parmi les
chiens, chats,
bovins, ovins, lapins, porcs, caprins, équidés, rongeurs, primates non-humains
et volailles.
Selon un mode de réalisation préféré, le sujet est un animal d'élevage, de
préférence
sélectionné parmi les bovins, ovins, lapins, porcs, caprins, équidés et
volailles. Selon un
mode de réalisation plus particulièrement préféré, le sujet est une volaille.
Les souches selon l'invention sont plus particulièrement indiquées pour
favoriser la
croissance juvénile des sujets. Ainsi, selon certains modes de réalisation, le
sujet est un
sujet à un stade prénatal (embryon ou foetus) ou un sujet juvénile. De
préférence, le sujet
est un sujet juvénile.
Selon un autre mode de réalisation particulier, le sujet est une volaille à un
stade
prénatal.
Selon certains modes de réalisation préférés, le sujet présente ou a été
soumis à une
carence nutritionnelle, et en particulier une carence en protéines. En effet,
les souches
selon l'invention se sont révélées particulièrement indiquées pour favoriser
la croissance,
et notamment la croissance juvénile, de tels sujets. Ces sujets peuvent être
identifiés par un
poids, une taille et/ou un taux sérique d'IGF-1 ou facteur de croissance
analogue dans
l'espèce cible, inférieurs à ceux rencontrés chez des sujets de même espèce,
même âge et
même sexe et soumis à une alimentation non carencée.
Tel qu'utilisé ici, le terme croissance se réfère à la prise de poids et/ou
la
croissance squelettique (aussi appelée croissance linéaire dans le cas où
l'animal est
dépourvu de squelette, par exemple chez la drosophile) d'un sujet. La
croissance
squelettique d'un sujet peut être aisément évaluée en mesurant, sur une
période donnée, la
taille des individus et/ou la taille de leurs os, en particulier de leurs
fémurs. Selon des
modes de réalisation préférés, le terme croissance se réfère à la
croissance squelettique
(ou linéaire) d'un sujet.
L'effet d'une souche de microorganisme sur la croissance d'un sujet peut être
évalué par tout méthode connue de l'homme du métier, et notamment par les
méthodes
décrites dans la demande internationale de brevet WO 2015/173386. En
particulier, l'effet
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
d'une souche peut être évalué par un test sur la croissance linéaire de larves
de Drosophila
melanogaster.
Brièvement, lors de ce test, des larves de drosophile, de préférence axéniques
c'est-
à-dire dépourvues de flore intestinale, sont placées sur des boîtes de pétri
avec un milieu
5
nutritionnel supplémenté avec une suspension de la souche à tester. Les larves
sont
incubées durant plusieurs jours, par exemple 7 jours, avant de mesurer leurs
caractéristiques phénotypiques, à savoir leur poids et/ou leur taille. Les
résultats obtenus
peuvent ensuite être comparés aux résultats obtenus avec des larves incubées
sur milieu
nutritionnel en l'absence de souche microbienne. Les souches pour lesquelles
la prise de
poids et/ou de taille est significativement supérieure à celle obtenue en
l'absence de souche
microbienne, sont considérées comme ayant un effet sur la croissance. En
particulier, les
souches présentant un effet positif significatif (de préférence avec une
valeur de p
inférieure ou égale à 0,01 dans le test statistique non-paramétrique de Mann-
Whitney ou
Kruskal-Wallis) sur l'augmentation de la taille larvaire sont considérées
comme ayant un
effet positif sur la croissance squelettique. Alternativement, les résultats
obtenus peuvent
être comparés aux résultats obtenus avec des larves incubées sur milieu
nutritionnel en
présence d'une souche de référence dont l'effet positif sur la croissance est
connu. Dans ce
cas, les souches sélectionnées peuvent être celles présentant une effet
équivalent ou
supérieur à la souche de référence.
Les milieux nutritionnels conventionnels utilisés en laboratoire comprennent
généralement a minima une farine végétale, typiquement de maïs, des levures
inactivées,
typiquement Saccharomyces cerevisiae, de l'agar et de l'eau. Alternativement,
le milieu
peut être un milieu carencé, c'est-à-dire à teneur réduite en levures
inactivées. Ce milieu
carencé ne permet pas le développement post-embryonnaire (c'est-à-dire
juvénile) optimal
des larves de drosophiles (Storelli et al., Cell Metabolism 14, 403-414, 2011)
et peut donc
être utilisé pour tester la capacité des souches à stimuler la croissance en
condition de
carence nutritionnelle.
Dans la demande internationale de brevet WO 2015/173386, les inventeurs ont
montré que les souches de Lactobacillus plantarum WJL, G821 et NIZO 2877
avaient un
effet positif sur la croissance, et en particulier sur la croissance
squelettique. Comme
démontré dans la partie expérimentale de la présente demande, les inventeurs
ont à présent
identifié de nouvelles souches de Lactobacillus plantarum, à savoir
Lactobacillus
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
6
plantarum IGFL1 et IGFL2, dont l'effet sur la croissance, et en particulier
sur la croissance
squelettique (ou linéaire), surpasse celui des souches précédemment décrites.
La présente invention concerne donc une souche de Lactobacillus plantarum
sélectionnée dans le groupe constitué de la souche Lactobacillus plantarum
IGFL1
déposée le 19 Juillet 2017 à la CNCM (Collection Nationale de Cultures de
Micro-
organismes - Institut Pasteur) sous le numéro 1-5217, et de la souche
Lactobacillus
plantarum IGFL2 déposée le 19 Juillet 2017 à la CNCM (Collection Nationale de
Cultures
de Micro-organismes - Institut Pasteur) sous le numéro 1-5218.
Selon un mode de réalisation préférée, la souche de Lactobacillus plantarum
est la
souche Lactobacillus plantarum IGFL1.
Il est entendu que la présente invention concerne également toute bactérie
issue
d'une souche de Lactobacillus plantarum selon l'invention, en particulier les
bactéries
issues d'une souche de Lactobacillus plantarum selon l'invention et présentant
des
modifications génétiques introduites naturellement lors des divisions
cellulaires ou par
l'utilisation d'outils d'ingénierie génétique. De préférence, les bactéries
issues d'une
souche de Lactobacillus plantarum selon l'invention ont un effet sur la
croissance d'un
sujet au moins équivalent à celui de la souche Lactobacillus plantarum IGFL1
ou IGFL2,
de préférence à celui de la souche Lactobacillus plantarum IGFL1. Cet effet
sur la
croissance peut être évalué par toute méthode connue par l'homme du métier,
plus
particulièrement par un test sur la croissance linéaire de larves de
Drosophila melanogaster
tel que détaillé ci-dessus ou dans la partie expérimentale.
Selon un second aspect, la présente invention concerne une composition
comprenant une souche de Lactobacillus plantarum selon l'invention. Elle
concerne
également l'utilisation d'une souche de Lactobacillus plantarum selon
l'invention pour la
préparation d'une composition selon l'invention. Elle concerne plus
particulièrement
l'utilisation d'une souche de Lactobacillus plantarum selon l'invention en
tant que
probiotique.
La composition selon l'invention peut comprendre une ou plusieurs souches
selon
l'invention, à savoir Lactobacillus plantarum IGFL1, Lactobacillus plantarum
IGFL2 ou
un mélange de Lactobacillus plantarum IGFL1 et Lactobacillus plantarum IGFL2.
Elle peut également comprendre une ou plusieurs souches additionnelles de
microorganismes, notamment des microorganismes utilisés comme probiotiques. A
titre
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
7
d'exemples, la composition peut comprendre une ou plusieurs souches
additionnelles de
microorganisme choisies dans le groupe constitué de Bacillus, Bifidobacterium,
Enterococcus, Streptococcus, Pediococcus, Saccharomyces, Kluyveromyces, et/ou
Lactobacillus telles que Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus plantarum,
Lactobacillus
fermentum, Lactobacillus casei, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus
rhamnosus. En
particulier, la composition peut comprendre une ou plusieurs souches
additionnelles de
Lactobacillus choisies dans le groupe constitué de L. plantarum WJL (Kim et
al., Genome
Announc. 21 novembre 2013), L. plantarum G821 (déposée à la CNCM sous le
numéro
CNCM 1-4979 le 11 mai 2015), L. plantarum NIZO 2877, L. casei ATCC 393, L.
casei
L919 (Koryszewska-Baginska A et al., Genome Announc, 26 septembre 2013), L.
paracasei ATCC 25302, L. paracasei shirota (Yuki N et al., Int J Food
Microbiol. 1 er avril
1999;48(1) :51-7), L. fermentum ATCC 9338, L. rhamnosus L900 (Aleksandrzak-
Piekarczyk T. et al., Genome Announc, 15 août 2013), L. rhamnosus L908
(Koryszewska-
Baginska A. et al., 20 février 2014, Genome Announc.), L. rhamnosus GG
(Kankainen M.
et al., Proc Natl Acad Sci USA, 6 octobre 2009).
Selon un mode de réalisation particulier, la composition comprend une ou
plusieurs
souches additionnelles de Lactobacillus plantarum, de préférence choisies dans
le groupe
constitué de L. plantarum WJL, L. plantarum G821 et L. plantarum NIZO 2877.
La ou les souches contenues dans la composition peuvent être vivantes ou
inactivées. De préférence, la ou les souches contenues dans la composition
sont sous forme
vivante. Elles peuvent notamment être sous une forme hydratée, lyophilisée,
congelée ou
toute autre forme leur permettant d'être administrées vivantes au sujet. Dans
le cas où les
souches sont sous forme lyophilisée, celles-ci peuvent être administrées
telles quelles ou
après reprise dans un véhicule approprié, par exemple dans de l'eau ou tout
autre boisson.
De la même façon, lorsque les souches sont sous forme congelée, celles-ci sont
de
préférence décongelées avant administration.
La composition selon l'invention est de préférence une composition
probiotique.
Tel qu'utilisé ici, le terme composition probiotique se réfère à une
composition
comprenant une ou plusieurs souches de microorganismes probiotiques, c'est-à-
dire une ou
plusieurs souches vivantes qui, lorsqu'elles sont administrées au sujet, de
préférence par
voie orale, exercent au moins un effet positif sur la santé du sujet, par
exemple stimule sa
croissance. Lorsque plusieurs souches probiotiques sont utilisées, celles-ci
peuvent avoir
des effets similaires ou différents. A titre d'exemple, la composition selon
l'invention peut
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
8
comprendre une souche selon l'invention qui a un effet sur la croissance du
sujet et une
autre souche de microorganisme qui a un effet stimulant sur le système
immunitaire.
La composition selon l'invention peut être sous toute forme adaptée à son
administration au sujet. Selon certains modes de réalisation, la composition
selon
l'invention est sous une forme adaptée à l'administration par voie orale ou
rectale. Selon
d'autres modes de réalisation, la composition selon l'invention est sous une
forme adaptée
à l'administration prénatale, en particulier par injection in-ovo .
La composition selon l'invention peut notamment être sous forme de poudre, de
solides, semi-solides ou liquides. Selon les applications envisagées et la
nature de la
composition, celle-ci peut ainsi être par exemple sous forme de comprimés,
capsules,
gélules, granulats, poudre, suspensions, émulsions, solutions ou
suppositoires. De
préférence, la composition est sous une forme orale gastro-résistante
permettant aux
bactéries contenues dans la composition, et plus particulièrement aux
bactéries selon
l'invention, de passer l'estomac et d'être libérées dans l'intestin.
La composition selon l'invention est de préférence une composition alimentaire
ou
pharmaceutique.
Selon un mode de réalisation, la composition selon l'invention est une
composition
alimentaire. Tel qu'utilisé ici, le terme composition alimentaire inclut
toute
composition non pharmaceutique destinées à être administrée/utilisée/consommée
par un
sujet par voie orale. La composition peut être destinée à l'alimentation
humaine ou
animale. Ces compositions peuvent être en particulier des additifs
alimentaires, des
compléments alimentaires, des aliments solides ou liquides, en particulier des
jus ou des
produits laitiers tels que des boissons lactées, des yaourts, des fromages ou
des crèmes
glacées.
Selon un mode de réalisation préféré, la composition selon l'invention est un
additif
alimentaire ou un complément alimentaire. Tel qu'utilisé ici, le terme
additif
alimentaire se réfère à une composition qui est destinée à être mélangée avec
un ou
plusieurs autres aliments avant d'être administrée à un sujet. Plus
particulièrement, la
composition selon l'invention peut être un additif alimentaire probiotique, en
particulier un
additif probiotique tel qu'autorisé par la directive européenne 70/524/EC ou
le règlement
1831/2003/EC. Le terme complément alimentaire se réfère à une composition
qui est
formulée et administrée séparément d'autres aliments et a pour but de
complémenter les
apports nutritionnels d'un sujet.
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
9
Selon un mode de réalisation particulier, la composition selon l'invention est
un
aliment, complément alimentaire ou additif alimentaire destiné à
l'alimentation des
animaux, et plus particulièrement à l'alimentation des animaux d'élevage.
Selon un autre mode de réalisation, la composition selon l'invention est une
composition pharmaceutique. Elle peut être destinée à un usage en médecine
humaine ou
un usage vétérinaire. De préférence, la composition pharmaceutique selon
l'invention est
une composition destinée à une administration par voie orale, rectale ou à une
administration prénatale, plus particulièrement par injection in-ovo. Selon
certains modes
de réalisation, la composition pharmaceutique selon l'invention est une
composition
destinée à une administration par voie orale. Selon certains autres modes de
réalisation, la
composition pharmaceutique selon l'invention est une composition destinée à
une
administration prénatale, plus particulièrement par injection in-ovo.
La composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre tout excipient
et/ou véhicule pharmaceutiquement acceptable, en particulier tout excipient
et/ou véhicule
adaptés à une administration par voie orale ou par injection in-ovo. Les
excipients et
véhicules pharmaceutiquement acceptables susceptibles d'être utilisés sont
bien connus de
l'homme du métier (cf. par exemple Remington's Pharmaceutical Sciences, l8
edition, A.
R. Gennaro, Ed., Mack Publishing Company [1990]; Pharmaceutical Formulation
Development of Peptides and Proteins, S. Frokjaer and L. Hovgaard, Eds.,
Taylor &
Francis [2000]; et Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd edition, A.
Kibbe, Ed.,
Pharmaceutical Press [2000]).
La composition selon l'invention contient de préférence entre 105 à 1012,
notamment de 106 à 1012,
de préférence de 108 à 1012 cellules formant des colonies (CFU),
de préférence de cellules d'une souche selon l'invention, par gramme de
composition. Le
terme CFU signifie colony forming units selon l'expression technique
anglaise. Par
gramme de composition, on entend de préférence la composition selon
l'invention
comprenant les bactéries selon l'invention, et les co-ingrédients, excipients
ou véhicules
appropriés. Comme mentionné ci-dessus, les co-ingrédients peuvent être
notamment des
aliments et/ou d'autres souches de microorganismes.
La présente invention concerne également une souche de Lactobacillus plantarum
selon l'invention pour une utilisation en tant que médicament. Elle concerne
en particulier
une composition pharmaceutique comprenant une souche de Lactobacillus
plantarum
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
selon l'invention en tant que principe actif. La composition pharmaceutique
peut être telle
que définie ci-dessus.
La présente invention concerne également
5 -
une souche de Lactobacillus plantarum selon l'invention ou une composition
selon l'invention, de préférence une composition pharmaceutique, pour une
utilisation dans
le traitement d'un retard de croissance chez un sujet ;
- l'utilisation d'une souche de Lactobacillus plantarum selon l'invention
ou d'une
composition selon l'invention, pour la préparation d'un médicament destiné au
traitement
10 .. d'un retard de croissance chez un sujet ; et
- une méthode de traitement d'un retard de croissance chez un sujet
comprenant
l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace d'une souche de
Lactobacillus
plantarum selon l'invention ou d'une composition selon l'invention, de
préférence une
composition pharmaceutique, audit sujet.
Selon certains modes de réalisation, le sujet est un sujet juvénile et
l'administration
de la souche ou de la composition selon l'invention se fait préférentiellement
par voie
orale.
Selon certains autres modes de réalisation, le sujet est à un stade prénatal,
en
particulier une volaille à un stade prénatal, et l'administration de la souche
ou de la
composition selon l'invention se fait par injection in-ovo.
Un sujet présentant un retard de croissance peut être identifié par un poids,
une
taille et/ou un taux sérique d'IGF-1 inférieurs à ceux rencontrés chez un
sujet de même
espèce, même âge et même sexe. Ce retard de croissance peut avoir différentes
causes
telles que par exemple une carence nutritionnelle, en particulier une carence
en protéines.
Cette carence peut être liée à une sous-nutrition chronique ou aigüe, ou à une
dénutrition
physiopathologique liée à une condition pathologique du patient. Cette
condition
pathologique peut être notamment un handicap moteur, l'anorexie, une
pathologie de
l'ingestion et/ou de l'assimilation, la cachexie ou la sarcopénie.
La présente invention concerne en particulier
- une souche de Lactobacillus plantarum ou une composition selon l'invention
pour
une utilisation visant à favoriser la croissance d'un sujet, de préférence un
sujet juvénile,
soumis ou ayant été soumis à une carence nutritionnelle, de préférence une
carence en
protéines ;
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
11
- l'utilisation d'une souche de Lactobacillus plantarum selon l'invention ou
d'une
composition selon l'invention, pour la préparation d'un médicament destiné à
favoriser la
croissance d'un sujet, de préférence un sujet juvénile, soumis ou ayant été
soumis à une
carence nutritionnelle, de préférence une carence en protéines ; et
- une méthode pour promouvoir la croissance d'un sujet, de préférence un sujet
juvénile, soumis ou ayant été soumis à une carence nutritionnelle, de
préférence une
carence en protéines, comprenant l'administration d'une quantité suffisante
d'une souche
de Lactobacillus plantarum selon l'invention ou d'une composition selon
l'invention, de
préférence une composition pharmaceutique, audit sujet.
De préférence, ledit sujet présente un retard de croissance induit par cette
carence
nutritionnelle.
La quantité thérapeutiquement efficace ou suffisante d'une souche de
Lactobacillus
plantarum selon l'invention ou d'une composition selon l'invention, est une
quantité
permettant d'obtenir l'effet recherché à savoir un effet positif (une
augmentation) sur la
croissance du sujet.
La quantité et la fréquence d'administration dépendront du type de sujet,
humain ou
animal, de l'âge et de l'état physiologique du sujet notamment de son niveau
de retard de
croissance et/ou de son niveau de carence nutritionnelle.
La souche de Lactobacillus plantarum ou la composition selon l'invention peut
être
administrée en une ou plusieurs fois, c'est-à-dire sous la forme d'une dose
unique ou de
doses multiples. En particulier, la souche ou composition selon l'invention
peut être
administrée sous la forme de plusieurs doses échelonnées sur la période de
croissance du
sujet, de préférence jusqu'à la puberté ou la maturité sexuelle.
De préférence, la souche ou composition selon l'invention est administrée au
sujet à
une fréquence comprise entre une dose par jour et une dose par mois.
Typiquement, la
fréquence d'administration est comprise entre une dose par jour et une dose
par semaine,
en particulier une dose tous les 2, 3, 4, 5, 6 ou 7 jours. Alternativement, la
fréquence
d'administration peut être comprise entre plusieurs doses par jour, par
exemple 2, 3, 4 ou 5
doses par jour, et une dose par semaine.
Une dose peut représenter plusieurs grammes à plusieurs dizaines de gramme de
composition selon l'invention. Typiquement, une dose représente entre 1 et
100g de
composition selon l'invention, de préférence entre 1 et 50g de composition
selon
l'invention, et de manière plus particulièrement préférée entre 1 et 10g de
composition
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
12
selon l'invention. De manière alternative, une dose peut représenter entre 105
et 1013 CFU,
de préférence entre 106 et 1012 CFU, de Lactobacillus plantarum selon
l'invention.
Selon l'âge du sujet ou son état physiologique, les doses journalières peuvent
être
fractionnées pour faciliter l'administration, par exemple avec une
administration le matin
et une autre le soir.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation non
thérapeutique
d'une souche ou d'une composition selon l'invention pour augmenter les
performances de
croissance d'un animal. Elle concerne également une méthode pour augmenter les
performances de croissance d'un animal comprenant l'administration d'une
quantité
suffisante d'une souche ou d'une composition selon l'invention pour obtenir un
effet
positif sur la croissance de l'animal.
Cet effet positif peut se traduire notamment par un gain de poids et/ou une
augmentation de la croissance squelettique (ou linéaire) de l'animal
supérieurs au gain de
poids ou à la croissance squelettique (ou linéaire) dudit animal non traité
avec la souche ou
composition selon l'invention.
De préférence, l'animal est un animal de sport ou d'élevage, et de manière
plus
particulièrement préférée d'un animal d'élevage.
Selon certains modes de réalisation, l'animal est un sujet juvénile et
l'administration de la souche ou de la composition selon l'invention se fait
préférentiellement par voie orale. La souche ou composition selon l'invention
est de
préférence administrée à l'animal en même temps que sa ration alimentaire
normale. En
particulier, la composition selon l'invention peut être un additif alimentaire
ajouté à
l'alimentation de l'animal ou un complément alimentaire vétérinaire.
Selon certains autres modes de réalisation, le sujet est à un stade prénatal,
en
particulier une volaille à un stade prénatal, et l'administration de la souche
ou de la
composition selon l'invention se fait par injection in-ovo.
Toutes les références citées dans cette description sont incorporées par
référence
dans la présente demande. D'autres caractéristiques et avantages de
l'invention apparaîtront
mieux à la lecture des exemples suivants donnés à titre illustratif et non
limitatif.
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
13
EXEMPLES
Matériels et méthodes
J-1 : des drosophiles adultes (D. melanogaster souche yw) axéniques ont été
placées
dans des cages de ponte comportant un fond (type boîte de Pétri) sur lequel
est disposé un
milieu nutritionnel conventionnel (pour 1 litre de milieu, de 7,14 g d'agar,
80 g de farine
de maïs et 50 g de levure inactivée, le milieu est cuit dans l'eau bouillante
pendant 10 min,
puis refroidit); la ponte est assurée par le maintien de la population
d'adultes dans la cage 1
nuit à 25 C.
JO : 6 pièces du milieu nutritionnel ont été découpées de manière à recueillir
6 fois
40 embryons. Chacune de ces pièces a été placée sur un milieu nutritionnel
carencé
contenu dans une boîte de Pétri (milieu comprenant 6g de levure inactivé par
litre au lieu
des 50g par litre dans le milieu conventionnel). Trois boîtes ont été
inoculées avec une
suspension de 108 CFUs (Unité formant colonies) de la bactérie à tester dans
du PBS lx.
Trois autres boîtes (contrôles) ont été inoculées avec du PBS lx stérile.
Ces boîtes ont
été incubées 7 jours à 25 C.
J7 : Les larves qui se sont développées ont été récupérées à partir de chaque
boîte
(l'expérience étant exploitable à partir de 20 larves par boîte, les groupes
utilisés ci-après
comprennent donc plus de 60 individus). Les larves ont subit un traitement
thermique choc
afin de les sacrifier (5 secondes sur une plaque chauffée à 100 C), avant de
mesurer la
taille des larves (mesure linéaire de l'extrémité antérieure à l'extrémité
postérieure).
Ce protocole a été appliqué à différentes souches de Lactobacillus plantarum
(IGFL1, IGFL2, NIZ02877, WJL et G821) et les résultats sont résumés dans la
Figure 1.
Résultats
Le test Drosophile décrit ci-dessus a été réalisé avec 5 souches de bactéries
Lactobacillus plantarum (IGFL1, IGFL2, NIZ02877, WJL et G821) comprenant 3
souches précédemment décrites dans la demande de brevet WO 2015/173386 pour
avoir un
effet plus ou moins marqué sur la croissance linéaire de larves de Drosophile,
à savoir les
souches NIZ02877, WJL et G821).
CA 03073105 2020-02-14
WO 2019/034826 PCT/FR2018/052070
14
Comme illustré dans la Figure 1, les souches de Lactobacillus plantarum
NIZ02877, WJL, G821, IGFL1 et IGFL2 présentent toutes une activité promotrice
de la
croissance dans le test in vivo de croissance de larves de drosophile. Ce test
permet la
mesure de l'effet promoteur de croissance d'isolat bactériens en se basant sur
la mesure de
la longueur de larves (en mm) de drosophile associées à l'isolat bactérien
testé par rapport à
la taille d'individus contrôles non associés à des bactéries (c'est-à-dire
axéniques). Les
souches NIZ02877 et IGFL2 présentent des effets similaires. En revanche, la
souche
IGFL1 présente un effet quantitatif statistiquement plus important que toutes
les souches
testées et notamment plus important que la souche G821 (p<0,0067, test de
Kruskal-Wallis
avec correction de comparaisons multiples de Dunn) qui avait déjà été
démontrée comme
ayant un effet particulièrement important sur la croissance (cf. la demande de
brevet WO
2015/173386).
