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NOUVELLE SOUCHE PROBIOTIQUE DE LACTOBACILLUS BRE VIS
La présente invention concerne une nouvelle souche probiotique de
Lactobacillus brevis,
isolée à partir de pulque, dotée de propriétés anti-cancéreuses, ainsi que des
compositions
comprenant ladite souche.
Selon la définition actuellement admise, les probiotiques sont des
microorganismes vivants
qui, lorsqu'ils sont ingérés en quantité suffisante, exercent des effets
positifs sur la santé .
Les organismes probiotiques utilisés en alimentation humaine sont généralement
des bactéries
lactiques, appartenant principalement aux genres Lactobacillus et
Bifidobacterium. Les effets
bénéfiques des bactéries probiotiques ne sont toutefois pas communs à
l'ensemble des
bactéries d'un même genre, ni même d'une même espèce, et ne se rencontrent, le
plus
souvent, que chez certaines souches. En outre, les effets observés peuvent
varier d'une souche
probiotique à l'autre, y compris à l'intérieur d'une même espèce.
Actuellement, le potentiel
probiotique des bactéries lactiques isolées à partir de produits fermentés
traditionnels suscite
un fort intérêt, en particulier dans les pays en développement où l'accès aux
probiotiques est
limité et où le développement de nouveaux produits et compléments alimentaires
pourrait
permettre de lutter contre certaines maladies (Vinderola et al., LWT-Food Sci
Technol
41:1678-1688, 2008).
Le pulque est une boisson alcoolique traditionnelle mexicaine, issue de la
fermentation de la
sève de divers agaves, qui contient une grande diversité de bactéries
lactiques, en particulier
des lactobacilles et des leuconostoques (Escalante et al., Int J Food
Microbiol 24:126-134,
2008). De récentes études suggèrent que certaines cultures préhispaniques du
Mexique
pratiquaient des lavements en utilisant le pulque pour combattre les maladies
et les troubles
du système digestif (Lemus-fuentes, Temas de Ciencia y Tecnologfa 102:143-150,
2006). Il a
d'ailleurs été démontré expérimentalement que certaines souches de
lactobacilles (notamment
des souches de Lactobacillus san franciscensis, Lactobacillus plantarum et
Lactobacillus
composti) isolées à partir de pulque possèdent des propriétés anti-
inflammatoires
potentiellement bénéfiques pour le traitement des maladies inflammatoires
intestinales
(Torres-Maravilla et al., Appl Microbiol Biotechnol 100:385-396, 2015).
Dans ce contexte, les Inventeurs sont parvenus à isoler une nouvelle souche de
Lactobacillus
brevis possédant des propriétés anticancéreuses. De manière surprenante et
inattendue, les
Inventeurs ont ainsi montré que ladite souche est capable de réduire la
prolifération de lignées
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cellulaires tumorales et de modifier l'expression de certains gènes pro-
apoptotiques ou
certains gènes impliqués dans le développement tumoral.
La présente invention a ainsi pour objet cette souche de Lactobacillus brevis,
déposée selon le
Traité de Budapest, auprès de la CNCM (Collection Nationale de Cultures de
Microorganismes, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paris Cedex 15) le 30 Mai 2018
sous le
numéro 1-5321.
La souche CNCM 1-5321 a été identifiée comme appartenant à l'espèce L. brevis
à l'aide d'un
test API 50 CHL et par séquençage de l'ARN 16S.
AGCCAAGTCTGATGGAGCATGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGT
TTCGGCTCGTAAAACTCTGTTGTTAAAGAAGAACACCTTTG
Séquence partielle de
AGAGTAACTGTTCAAGGGTTGACGGTATTTAACCAGAAAGC
l'ARN 16S de la souche CACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGT
CNCM 1-5321
GGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCA
(SEQ ID NO: 1)
GGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTTAACC
GGAGAAGTGCATCGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGA
GGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATTA
Table 1. Séquence partielle de l'ARN 16S de la souche CNCM 1-5321.
Cette souche présente les caractéristiques morphologiques et biochimiques
suivantes :
- Morphologie : Micro-organisme à Gram positif, forme de bacille,
- Métabolisme : Catalase (-), hétérofermentaire,
- Fermentation des sucres : L-arabinose (+), ribose (+) D-xylose (+), D-
glucose (+), D-
fructose (+), D-mannose (+), A-methyl-deglucoside (+), N acetyl glucosamine
(+), esculine
(+), cellobiose (+), maltose (+), mélibiose (+), gluconate (+), ceto-gluconate
(+).
Elle possède d'autre part des propriétés anti-cancéreuses, se traduisant par
une capacité à
inhiber la prolifération de lignées cellulaires tumorales et à modifier
l'expression de certains
gènes pro-apoptotiques ou certains gènes impliqués dans le développement
tumoral.
Comme montré dans les exemples, les propriétés anti-cancéreuses de la souche
CNCM 1-5321
sont indépendantes de son état de viabilité. Par conséquent, la présente
invention englobe la
souche CNCM 1-5321 quel que soit son état de viabilité, non seulement sous
forme vivante,
mais également sous forme morte, sous forme inactivée ou encore sous forme de
lysat
bactérien.
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En particulier, la souche CNCM 1-5321 peut être en phase de croissance
exponentielle ou
stationnaire, de préférence en phase exponentielle.
Dans la présente invention, une bactérie est considérée comme vivante si celle-
ci est capable
de se multiplier. A l'inverse, une bactérie est considérée comme morte ou
inactivée
lorsqu'elle a perdu sa capacité à se multiplier. Les techniques permettant
d'inactiver des
bactéries sont bien connues de l'homme de l'art. De manière non limitative, la
souche CNCM
1-5321 peut être inactivée par exposition à un rayonnement ultra-violet ou par
chauffage. Par
exemple, la souche CNCM 1-5321 peut être inactivée selon la méthode décrite
dans Neyzi et
al., In Vitro Cell. Dey. Biol.-Animal 53:12-19, 2017. Brièvement, la culture
bactérienne est
centrifugée pendant 10 min, puis le culot cellulaire est resuspendu dans du
PBS et exposé au
rayonnement UV pendant 15 minutes afin d'inactiver la bactérie. Pour s'assurer
que la
bactérie n'est plus capable de se multiplier, une culture contrôle est
réalisée dans du MRS
après le traitement aux UV.
La présente invention englobe également les souches susceptibles d'être
obtenues par
mutagénèse ou par transformation génétique de la souche CNCM 1-5321. Les
procédés
permettant de muter ou de transformer la souche CNCM 1-5321 sont bien connus
de l'homme
du métier et correspondent aux méthodes utilisées en routine pour modifier le
génome des
bactéries lactiques, en particulier des bactéries appartenant à l'espèce
Lactobacillus brevis. De
manière non limitative, de telles méthodes incluent la mutagénèse aléatoire
(par exemple à
l'aide de rayonnement UV ou d'un agent chimique mutagène), la mutagénèse
dirigée ou la
recombinaison homologue.
De préférence, ces souches conservent au moins les propriétés anti-cancéreuses
de la souche
CNCM 1-5321. Il peut s'agir de souches dans lesquelles un ou plusieurs des
gènes de la
souche CNCM 1-5321 a (ont) été muté(s), par exemple de afin de modifier
certaines
propriétés métaboliques (e.g. la capacité de cette souche à résister à
l'acidité, à résister au
transit intestinal, à métaboliser certains sucres, ...). Il peut s'agir
également de souches
résultant de la transformation génétique de la souche CNCM 1-5321 par un ou
plusieurs
gène(s) d'intérêt, permettant par exemple de conférer à ladite souche des
caractéristiques
physiologiques supplémentaires ou d'exprimer des protéines d'intérêt que l'on
souhaite
administrer par l'intermédiaire de ladite souche.
La présente invention a également pour objet une fraction cellulaire pouvant
être obtenue à
partir de la souche CNCM 1-5321.
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En particulier, il peut s'agir d'une préparation de paroi bactérienne obtenue
à partir d'une
culture de ladite souche. Plus particulièrement, il peut s'agir d'une
préparation de
peptidoglycane obtenue à partir de ladite souche. Il peut également s'agir de
surnageants de
culture ou de fractions de ces surnageants.
Les fractions cellulaires peuvent être préparées selon les méthodes connues de
l'homme de
l'art. De manière non-limitative, ces méthodes comprennent généralement une
étape de lyse
des bactéries obtenues après culture et une étape de séparation des fractions
contenant les
membranes desdites bactéries du lysat total obtenu après l'étape de lyse,
notamment par
centrifugation ou filtration. Par exemple, les fractions cellulaires peuvent
être préparées par
sonification selon la méthode décrite dans Tiptiri-Kourpeti et al., PLOS one
11(2): e0147960,
2016.
Dans un autre aspect, la présente invention concerne la souche L. brevis CNCM
1-5321 ou
une fraction cellulaire de ladite souche pour son utilisation comme
médicament.
De préférence, la souche CNCM 1-5321 ou une fraction cellulaire de la souche
CNCM 1-5321
est ingérée par voie orale ou administrée par voie muqueuse, en particulier
par voie
intranasale.
Dans un mode de réalisation, la souche L. brevis CNCM 1-5321 ou une fraction
cellulaire de
celle-ci est administrée quotidiennement au patient.
Dans un mode de réalisation, la souche L. brevis CNCM 1-5321 ou une fraction
cellulaire de
celle-ci est administrée au moins une fois par jour.
Dans un mode de réalisation, la souche L. brevis CNCM 1-5321 ou une fraction
cellulaire de
celle-ci est administrée au moins une fois par semaine.
Dans un autre aspect, la présente invention concerne la souche L. brevis CNCM
1-5321 ou
une fraction cellulaire de ladite souche pour son utilisation dans la
prévention et/ou le
traitement du cancer, en particulier du cancer de l'intestin, plus
particulièrement du cancer
colorectal, mais aussi d'autres types de carcinomes tels que le cancer du
sein, du poumon, du
foie, etc.
Comme montré dans les exemples, les Inventeurs ont mis en évidence que la
souche de
l'invention inhibe la prolifération des lignées cellulaires tumorales, en
particulier les lignées
humaines HT29, HTC116 et Caco2 dérivées de cellules d'adénocarcinome
colorectal.
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Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne la souche L.
brevis CNCM I-
5321 ou une fraction cellulaire de ladite souche pour son utilisation telle
que définie
précédemment, dans laquelle ladite souche inhibe la prolifération des cellules
cancéreuses.
Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne la souche L.
brevis CNCM I-
5321 ou une fraction cellulaire de ladite souche pour son utilisation telle
que définie
précédemment, dans laquelle ladite souche ou la fraction cellulaire de ladite
souche augmente
l'expression d'au moins un gène pro-apoptotique chez lesdites cellules
cancéreuses.
De préférence, ledit gène pro-apototique est choisi parmi le groupe de gènes
comprenant
CASP8, CASP9, BCL2, BAX et BCL-XL.
Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne la souche L.
brevis CNCM I-
5321 ou une fraction cellulaire de ladite souche pour son utilisation telle
que définie
précédemment, dans laquelle ladite souche ou la fraction cellulaire de ladite
souche diminue
l'expression d'au moins un gène impliqué dans le développement d'une tumeur.
De préférence, ledit gène impliqué dans le développement d'une tumeur est
choisi parmi le
groupe de gènes comprenant erbB2, erbB3 et PKM2.
Dans un autre aspect, la présente invention concerne une méthode de traitement
chez un sujet
en ayant besoin comprenant l'administration de la souche L. brevis CNCM 1-5321
ou d'une
fraction cellulaire de ladite souche audit sujet.
La présente invention concerne également une méthode de traitement du cancer
chez un sujet
en ayant besoin comprenant l'administration de la souche L. brevis CNCM 1-5321
ou d'une
fraction cellulaire de ladite souche audit sujet.
Dans un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation de la
souche L. brevis
CNCM 1-5321 ou d'une fraction cellulaire de ladite souche pour la préparation
d'un
médicament.
La présente invention concerne également l'utilisation de la souche L. brevis
CNCM 1-5321
ou d'une fraction cellulaire de ladite souche pour la préparation d'un
médicament destiné au
traitement du cancer.
Dans un autre aspect, la présente invention a pour objet une composition
comprenant la
souche L. brevis CNCM 1-5321 ou une fraction cellulaire de celle-ci.
De manière non-limitative, une composition selon l'invention peut être liquide
ou solide et se
présenter sous différentes formes, comme par exemple une gélule, une pastille,
un comprimé,
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une pilule, un suppositoire, un sachet de poudre, un flacon de liquide, une
ampoule de liquide,
etc...
Dans un mode de réalisation, une composition selon l'invention peut contenir
un enrobage,
notamment un enrobage gastro-résistant ou un enrobage permettant une
libération entérique
de la souche CNCM 1-5321.
Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une composition
telle que définie
précédemment, ladite composition étant un produit pharmaceutique ou un produit
alimentaire,
en particulier un complément alimentaire.
Selon l'invention, le terme "complément alimentaire" désigne un produit
alimentaire
fournissant un complément de nutriments ou de substances ayant un effet
nutritionnel ou
physiologique (tels que des vitamines, des minéraux, des acides gras ou des
acides aminés)
manquants ou en quantités insuffisantes dans le régime alimentaire normal d'un
individu.
Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une composition
telle que définie
précédemment, ladite composition comprenant également au moins un élément
choisi parmi
le groupe comprenant les vitamines, les minéraux, les acides gras et les
acides aminés.
De manière non limitative, les vitamines utilisées dans la fabrication des
compléments
alimentaires sont généralement les vitamines A, D, E, K, Bi, B2, B6, B12 et C,
la Niacine,
l'Acide pantothénique, l'Acide folique et la Biotine.
De manière non limitative, les minéraux utilisés dans la fabrication des
compléments
alimentaires sont généralement choisis parmi le Calcium, le Magnésium, le Fer,
le Cuivre,
l'Iode, le Zinc, le Manganèse, le Sodium, le Potassium, le Sélénium, le
Chrome, le
Molybdène, le Fluorure, le Chlorure, le Phosphore.
Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une composition
telle que définie
précédemment, ladite composition comprenant également au moins un excipient.
Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une composition
telle que définie
précédemment, ladite composition comprenant également au moins un arôme.
Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une composition
telle que définie
précédemment, ladite composition étant une boisson.
Lorsque ladite souche est présente sous forme de bactéries vivantes, celles-ci
sont de
préférence présentes à raison d'au moins 105 ufc par gramme de produit,
avantageusement au
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moins 106 ufc par gramme, plus avantageusement au moins 107 ufc par gramme, et
encore
plus avantageusement au moins 108 ufc par gramme.
Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une composition
telle que définie
précédemment, dans laquelle la souche CNCM 1-5321 est en association avec un
autre
organisme probiotique, de préférence une bactérie lactique.
Les exemples suivants décrivent certains modes de réalisation de la présente
invention.
Cependant, les exemples ne sont présentés qu' à titre illustratif et ne
limitent en aucun cas la
portée de l'invention.
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LEGENDES DES FIGURES
Figure 1. Effet anti-prolifératif de la souche CNCM 1-5321 sur les lignées
cellulaires
tumorales. Les cellules HT29, HTC116 et Caco2 sont incubées en présence de PBS
(contrôle
négatif), de 5-FU (5 Fluorouracile) (contrôle positif), de la souche CNCM 1-
5321, de la
souche L. casei BL23 et de la souche L. casei ATCC334. * indique une
différence
significative par rapport au contrôle négatif (P <0,05).
Figure 2. Effet anti-prolifératif de la souche CNCM 1-5321 inactivée par UV
sur les lignées
cellulaires tumorales. Les cellules HT29, HTC116 et Caco2 sont incubées en
présence de PBS
(contrôle négatif), 5-FU (5 Fluorouracile) (contrôle positif), de la souche
CNCM 1-5321, du
surnageant de culture de la souche CNCM 1-5321 (milieu MRS) et de la souche
CNCM I-
5321 inactivée par UV. * indique une différence significative par rapport au
contrôle négatif
(P <0,05).
Figure 3. Effet anti-prolifératif du culot cellulaire de la souche CNCM 1-5321
après
sonication sur les lignées cellulaires tumorales. Les cellules HT29, HTC116 et
Caco2 sont
incubées en présence de PBS (contrôle négatif), 5-FU (5 Fluorouracile)
(contrôle positif), de
la souche CNCM 1-5321 et du culot cellulaire de la souche CNCM 1-5321 après
sonication. *
indique une différence significative par rapport au contrôle négatif (P
<0,05).
Figure 4. Effets pro-apoptotiques de la souche CNCM 1-5321 sur les lignées
cellulaires
tumorales. Les cellules HT29 et HTC116 sont incubées 24h avec la souche CNCM 1-
5321. La
viabilité des lignées cellulaires a été déterminée par coloration avec de
l'annexine V-FITC et
de l'iodure de propidium (PI) suivie d'une analyse par cytométrie de flux.
Figure 5. Expression des gènes erbB2, erbB3, Casp8, Casp9, BCL-XL, BCL2, BAX
et PKM2.
Les valeurs ont été calibrées par rapport à l'expression de la b-actine
utilisée comme contrôle
génique endogène. Les résultats sont présentés sous forme d'expression de gène
relative (dR)
par rapport à l'expression du gène en présence de PBS (contrôle négatif).
Figure 6. Spécificité de l'effet anti-prolifératif de la souche CNCM 1-5321
sur les lignées
tumorales. Les cellules de cancer du côlon (lignée HT29) sont incubées en
présence de PBS
(contrôle négatif), 5-FU (contrôle positif) et de la souche CNCM 1-5321. Les
cellules de côlon
non-cancéreuses (lignée FHC) sont incubées en présence de PBS (contrôle
négatif), 5-FU
(contrôle positif) et de la souche CNCM 1-5321. * indique une différence
significative par
rapport au contrôle négatif (P <0,05).
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EXEMPLES
Matériels et méthodes
Bactéries
Les lactobacilles ont été cultivés dans du milieu Man-Rogosa-Sharpe (MRS)
(Difco
Laboratories) pendant une journée à 37 C.
Pour la préparation des fractions cellulaires, le culot a été lavé deux fois
avec du PBS et un
extrait cellulaire a été obtenu par sonication (10 cycles entre 40 et 60 watts
d'amplitude). Les
composants solubles et insolubles ont été séparés par centrifugation, la
teneur en protéines a
été quantifiée par Bradford.
Pour la préparation d'un surnageant de culture, le surnageant a été obtenu par
centrifugation
après une nuit de culture, puis stérilisation par filtration (0,45 1.1m).
Pour l'inactivation des bactéries, les bactéries ont été tuées par exposition
aux rayonnements
UV pendant 15 min. L'inactivation a été confirmée par incubation sur des
boites de Pétri.
Lignées cellulaires
Toutes les lignées cellulaires ont été achetées auprès de l'ATCC. Des lignées
cellulaires
cancéreuses, HT29, HTC116 et Caco2 ont été cultivées dans du milieu Eagle
modifié par
Dulbecco riche en glucose (DMEM) additionné de 10% (vol/vol) de sérum bovin
foetal (FBS),
de 2mM de L-glutamine, de 50 mg/mi de pénicilline et de 50 mg/mi de
streptomycine dans
une atmosphère humidifiée contenant 5% de CO2. La lignée cellulaire non-
cancéreuse FHC a
été cultivée dans du milieu DMEM/F12 additionné de 10% (vol/vol) de FBS, 2mM
de L-
glutamine, 50 mg/mi de pénicilline et de 50 mg/mi de streptomycine, de 0.005
mg/mi
insuline, 0.005 mg/mi transferrine, 0.00067 mg/mi hydrocortisone, 20ng/m1 de
facteur de
croissance épidermique humain (EGF) dans une atmosphère humidifiée contenant
5% de
CO2.
Test de prolifération
24 h avant la stimulation, les cellules ont été ensemencées sur des
microplaques 96 puits à
raison de 2 x 104 cellules par puit. La co-culture avec une bactérie (2 x 106
cellules) a été
réalisée ensuite pendant 24 et 48 h. Les cellules ont été fixées dans de
l'acide trichloroacétique
à 5% (TCA) pendant 1 heure à 4 C et lavées quatre fois dans de l'eau
distillée. Les
microplaques ont été colorées avec 100 ILI1/puit de 0,057% (poids/volume) de
poudre de
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sulforhodamine (SRB)/eau distillée, lavées 4 fois dans de l'acide acétique à
0,1% et re-
déshydratées à température ambiante. Les cellules colorées ont été lysées dans
du tampon Tris
mM et la densité optique (DO) a été mesurée à 510 nm.
5 Coloration à l'annexine V et propidium iodure (PI)
24 heures avant la stimulation, les cellules HT-29 ont été ensemencées à
raison de 1 x 106
cellules/mi et laissées en fixation pendant une nuit à 37 C dans un incubateur
à CO2. La co-
culture avec une bactérie (1 x 108 cellules) a été réalisée pendant 24 h. Les
cellules ont été
récoltées (tripsination) et lavées deux fois avec du PBS froid, puis remises
en suspension dans
10 du tampon de liaison 1X à une concentration de 1 x 106 cellules/ml. Les
cellules ont été
incubées avec 5 lui de Annexine V-FITC et 5 lui de PI pendant 15 min à
température ambiante
(25 C) en conditions d'obscurité. 400 lui de tampon de liaison 1X ont été
ajoutés à chaque
tube et les cellules ont été analysées par cytométrie de flux. Les contrôles
utilisés sont (i) des
cellules non traitées, et des cellules colorées avec (ii) de l'annexine V-FITC
uniquement, (iii)
de l'IP uniquement, et (iv) à la fois de l'annexine V-FITC et du PI.
Tests qPCR
Des co-cultures ont été réalisées comme indiqué ci-dessus. L'ARN a été extrait
en utilisant le
kit RNeasy Mini de Qiagen. La qualité et la concentration de l'ARN ont été
examinées par
électrophorèse sur gel d'agarose coloré au bromure d'éthidium et par analyse
spectrophotométrique. La matrice d'ADNc a été synthétisée à partir de 1 pg
d'ARN avec le kit
de transcription inverse High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Applied
Biosystems). La réaction de RT-qPCR a été réalisée dans un volume réactionnel
de 25 !al
(TakyonTm Rox SYBR MasterMix dTTP blue) avec les amorces suivantes: B-actine,
Caspas8, Caspas9, ErbB2, ErbB3, BCL2, BCL-XL dans le premier cycle thermique
qPCR.
Les valeurs d'expression ont été quantifiées et normalisées par la méthode
ACt, en utilisant la
moyenne géométrique Ct de la13-actine comme gène de référence endogène.
Résultats
Un test de l'activité antiproliférative de la souche CNCM 1-5321 a été réalisé
sur différentes
lignées cellulaires de cancer du côlon, HT-29 (adénocarcinome du côlon humain,
type II),
HTC116 (cancer colorectal humain), et Caco-2 (adénocarcinome colorectal). La
souche
CNCM 1-5321 est capable d'arrêter la prolifération cellulaire des lignées
épithéliales
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intestinales humaines à un niveau comparable à celui du 5-fluorouracile (5-
FU), médicament
anticancéreux utilisé ici en tant que contrôle positif (Figure 1).
Pour déterminer le mécanisme impliqué dans l'effet anti-prolifératif de la
souche CNCM I-
5321, le surnageant de culture (MRS), les cellules inactivées par UV, les
cellules lysées par
ultrasons et les cellules vivantes ont été testés. Le surnageant ne montre pas
d'effet anti-
prolifératif (Figure 2). Cependant, les cellules inactivées par UV et les
cellules traitées par
ultrasons ont maintenu un effet antiprolifératif indiquant que la souche CNCM
1-5321
conserve un effet antiprolifératif indépendamment de sa viabilité (Figures 2
et 3).
La souche CNCM 1-5321 est également capable d'augmenter de 25% les niveaux
d'annexine
V+/PI+ (cellules apoptotiques tardives, Figure 4) et d'induire la mort
cellulaire apoptotique
via l'activation et suppression de l'expression des gènes anti-apoptotiques
ErbB2, ErbB3 (via
Casp8), deux gènes initiateurs de l'apoptose médiée par le TNF-a, et en
modulant l'expression
des gènes BAX et PKM2 impliqués dans le métabolisme cellulaire (Figure 5).
Pour déterminer si l'effet anti-prolifératif de la souche CNCM 1-5321 est
spécifique des
lignées tumorales, un test de l'activité antiproliférative a été réalisé sur
la lignée tumorale
HT29 (adénocarcinome du côlon humain, type II) et sur la lignée non-cancéreuse
FHC
(cellules de colon humain foetal). La souche CNCM 1-5321 inhibe la
prolifération cellulaire de
la lignée tumorale, mais n'a aucun effet significatif sur la croissance des
cellules non-
cancéreuses (Figure 6).
