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WO 2021/156104
PCT/EP2021/051734
Description
Titre de l'invention : PROCEDE D'OBTENTION D'UN
EXTRAIT AQUEUX DE LAVANDE, COMPOSITIONS
COMPRENANT UN TEL EXTRAIT ET LEURS UTILISATIONS
COSMETIQUES
Domaine technique
[1] L'invention concerne le domaine de la cosmétique et plus particulièrement
des
ingrédients actifs d'origine naturelle entrant dans la préparation de
formulation
cosmétique pour améliorer l'aspect de la peau ou la protéger.
[2] L'invention concerne un procédé d'obtention d'un extrait aqueux de lavande
ainsi
que l'extrait enrichi en petits ARN, en sucres, en composés phénoliques, en
acides organiques obtenus par le procédé, les compositions cosmétiques
comprenant de tels extraits et leurs utilisations cosmétiques pour le soin de
la
peau, du cuir chevelu et des phanères et plus particulièrement pour protéger
la
peau des agressions externes et de l'oxydation, lutter contre les signes du
vieillissement cutané, augmenter la photoprotection, éclaircir la peau,
améliorer
l'hydratation de la peau, renforcer la fonction barrière, apaiser la peau ou
encore
pour améliorer les mécanismes biologiques associés à la réparation de la peau
pendant la nuit.
Arrière-plan technique de l'invention
[3] Les plantes du genre Lavandula, communément appelées lavandes, forment un
groupe de 47 espèces. Parmi les espèces les plus connues et utilisées on
trouve
Lavandula angustifolia, aussi appelée lavande vraie, une espèce sauvage
originaire de Provence (sud-est de la France), ou encore le lavandin, un
hybride
issu du croisement de la lavande vraie et de la lavande aspic.
[4] La lavande vraie est largement utilisée pour la production d'huiles
essentielles en
Europe, en Afrique du Nord, au Moyen-Orient et en Asie, en particulier pour
l'industrie du parfum.
[5] L'huile essentielle (HE) est généralement obtenue par hydrodistillation.
Les fleurs
préalablement séchées sont soumises à un courant de vapeur d'eau qui entraine
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les constituant volatils ou solubles puis est ensuite recondensé pour obtenir
un
hydrolat (ou eau florale) et un surnageant comprenant les parties lipidiques
de la
plante et constituant l'huile essentielle.
[6] Les HE de lavande sont très parfumées et comprennent majoritairement des
monoterpènes volatils comme le linalol et l'acétate de linalyle. Dans l'HE de
lavande vraie, tous deux sont présents à environ 30%. L'HE de lavande est
particulièrement reconnue pour ses propriétés sédatives, antalgiques,
analgésiques, anti-inflammatoires, antiseptiques et antibactériennes. Elle est
également antispasmodique et décongestionnante et indiquée pour apaiser les
affections cutanées et favoriser la cicatrisation. L'HE de lavande est
également
indiquée pour améliorer les troubles du sommeil et les tensions diverses
(anxiété,
stress, etc.).
[7] Les eaux florales de lavande contiennent moins de quelques pour cent de
composés volatils organiques semblables à ceux de l'huile essentielle, ainsi
que
les composés hydrosolubles de la plante. L'eau florale a les mêmes propriétés
que l'huile essentielle de lavande, mais plus atténuées à cause des
concentrations plus faibles en composés terpéniques.
[8] L'utilisation très limitée en cosmétique des huiles essentielles et eaux
florales de
lavande est en partie due à la présence majoritaire de molécules terpéniques
connues pour leurs effets irritants sur la peau. Le linalol a par exemple été
reconnu comme potentiellement allergisant et l'utilisation d'huile essentielle
de
lavande est déconseillée aux femmes enceintes et aux enfants de moins de 12
ans.
[9] La plupart des autres méthodes d'extraction de lavande décrites dans l'art
antérieur utilisent des solvants organiques de type apolaire qui permettent
d'extraire principalement les composés odorants volatiles (CN10338583,
JP11199469) ou un fluide supercritique (KR2015042999). Dans ce dernier cas,
l'extrait obtenu est riche en polyphénols et flavonoïdes, mais ne contient pas
d'autres composés d'intérêt comme les acides aminés, les acides organiques ou
les protéines. De plus, les acides phénoliques ne sont pas extraits par ce
type de
technique, en effet ces molécules sont principalement extraites dans un
solvant
polaire et idéalement avec de l'eau.
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[10] Les consommateurs de produits cosmétiques souhaitent utiliser des
formules
aussi naturelles que possibles, tout en présentant une efficacité aussi
importante
voire meilleure que les produits synthétiques.
[11] Malgré les différents produits cosmétiques anti-âge déjà sur le
marché, le
besoin de nouveaux ingrédients cosmétiques efficaces d'origine naturelle est
de
plus en plus fort.
[12] Un problème que se propose de résoudre l'invention est de proposer un
nouvel extrait aqueux de lavande répondant à l'exigence du marché cosmétique
actuel concernant les critères de naturalité et présentant néanmoins une
efficacité biologique remarquable.
[13] Un autre problème que se propose de résoudre l'invention est de proposer
un
nouvel extrait aqueux de lavande ne représentant pas les défauts des extraits
actuellement connus, à savoir une forte odeur, une instabilité des HE dans les
formules pour application topique, ou encore un caractère irritant ou
allergénique
due à la présence de molécules terpéniques telles que le linalol.
[14] Un problème que se propose encore de résoudre l'invention est de proposer
un nouvel extrait aqueux de lavande enrichi en composés connus pour leur
efficacité sur la peau comme les petits ARN, les sucres, les composés
phénoliques et les acides organiques.
[15] Les inventeurs ont développé un nouvel extrait de fleur de lavande
spécifiquement enrichi en petits ARN, en sucres, en composés phénoliques et en
acides organiques, et ne présentant pas les inconvénients des procédés de
l'art
antérieur cité, comme par exemple l'utilisation de détergents et de solvants
potentiellement toxiques en cosmétique.
[16] L'extrait ainsi obtenu peut être utilisé en cosmétique pour le soin de
la peau,
du cuir chevelu et des phanères et plus particulièrement pour protéger la peau
des agressions externes et de l'oxydation, lutter contre les signes du
vieillissement cutané, augmenter la photoprotection, éclaircir la peau,
améliorer
l'hydratation de la peau, renforcer la fonction barrière ou encore apaiser la
peau.
Résumé de l'invention
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[17] L'invention a pour premier objet un procédé d'obtention d'un extrait
aqueux de
parties aériennes de lavande, comprenant les étapes suivantes:
a) on met en présence les parties aériennes de lavande avec de l'eau ;
b) on ajoute de l'acide phytique à une concentration comprise entre 1 et 10 mM
dans le mélange obtenu en a) à un pH compris entre 10 et 11 ;
c) on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu en b) à une valeur comprise entre
6 et 8;
d) on purifie le mélange obtenu en c) de manière à éliminer la matière
végétale
solide résiduelle et obtenir un extrait brut aqueux purifié ; et
e) on contrôle le pH et on le réajuste si nécessaire à une valeur comprise
entre 6
et 8, préférentiellement entre 6 et 6,5.
[18] De plus, l'invention a pour deuxième objet un extrait aqueux
de parties
aériennes de lavande enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150
nucléotides, en sucres, en composés phénoliques et en acides organiques,
dépourvu d'ADN, susceptible d'être obtenu par le procédé de l'une des
revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend en poids du poids total
de
l'extrait, 10 à 30 g/kg de poids sec, contenant 2 à 10 g/kg de sucres, 100 à
1500
mg/kg d'acides organiques, 500 à 2000 mg/kg de composés phénoliques et 40 à
200 mg/kg d'ARN de petits poids moléculaires d'une longueur d'au maximum 150
nucléotides.
[19] L'invention a pour troisième objet une composition cosmétique comprenant,
en tant qu'ingrédient actif, une quantité efficace de l'extrait de l'une des
revendications 6 ou 7, et un milieu physiologiquement acceptable.
[20] L'invention a pour quatrième objet l'utilisation cosmétique
de la composition
de l'invention, pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères, plus
particulièrement pour protéger la peau des agressions externes et de
l'oxydation,
lutter contre les signes du vieillissement cutané, augmenter la
photoprotection,
éclaircir la peau, améliorer l'hydratation de la peau, renforcer la fonction
barrière,
apaiser la peau, ou encore pour améliorer les mécanismes biologiques associés
à la réparation de la peau pendant la nuit.
Brève description des dessins
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[21] L'invention et les avantages qui en découlent seront mieux compris à la
lecture de la description et des modes de réalisation non limitatifs qui
suivent,
illustrés au regard des figures annexées dans lesquelles :
[22] [Fig. 1] Caractérisation des acides organiques par analyse HPLC-MS
[23] [Fig. 2] Analyse des ARN de petits poids moléculaires par le Bioanalyseur
2100. A: extrait de lavande obtenu selon le procédé de l'invention - B:
extrait
conventionnel de lavande.
Description détaillée de l'invention
Définitions
[24] Tous les termes utilisés dans la présente description ont le sens le plus
largement connus sauf mention contraire. Pour les besoins de l'invention les
termes suivants sont définis comme suit :
[25] On entend par lavande toutes les espèces du genre Lavandula, ainsi
que
leurs hybrides (tel que le lavandin).
[26] On entend par parties aériennes les tiges et fleurs de lavande. Les
graines sont comprises dans les parties aériennes au sens de l'invention.
[27] Dans le cours de la présente description, les termes parties aériennes
et
fleurs seront utilisés indifféremment pour désigner les fleurs et les tiges
les
plus fines portant les fleurs.
[28] Par petits ARN ou ARN de petits poids moléculaires , ou petits
ARN
d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides on entend des ARN (acides
ribonucléiques) non codants, de petit poids moléculaire, d'une longueur d'au
maximum 150 nucléotides, tels que tous types de petits ARN non messagers,
simples et/ou doubles brins, par exemple les micro-ARN, les ARN interférents,
les introns, les petits ARN nucléaires ou encore tout fragment d'ARN.
L'analyse
par électrophorèse montre que les petits ARN présents dans l'extrait de
lavande
de l'invention ont des poids moléculaires variés compris approximativement
entre
30 et 150 nucléotides.
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[29] Par acides organiques on entend les acides a-hydroxylés (ou AHA),
c'est-
à-dire des acides carboxyliques dérivés de sucres de fruits ou de plantes,
tels
que les acides glycolique, malique, citrique, tartrique, succinique et
uronique.
[30] Par composés phénoliques (ou polyphénols) on entend les molécules
d'origine végétale qui possèdent un cycle aromatique portant un ou plusieurs
groupements hydroxyles, tels que les acides phénoliques, les flavonoïdes ou
leurs dérivés. Les composés polyphénoliques sont reconnus pour être de
puissantes molécules antioxydantes.
[31] Par sucres on entend les monosaccharides et plus particulièrement le
glucose et le fructose ainsi que les oligo et polysaccharides.
[32] Par phytomolécules d'intérêt , on entend l'ensemble des molécules
présentes dans l'extrait de lavande de l'invention et notamment, les petits
ARN
d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, les sucres, les composés
phénoliques et les acides organiques.
[33] Quand une gamme de valeur est décrite, les bornes de cette gamme doivent
être comprises comme incluant explicitement toutes les valeurs intermédiaires
de
la gamme. Par exemple, une gamme de valeur comprise entre 1% et 10% doit
être comprise comme incluant 1 %, 2 %, 3 A, 4 c>/o, 5 %, 6 A, 7 %, 8 A, 9
A, et
%, ainsi que toutes les valeurs décimales entre 1 A et 10 %.
[34] Les valeurs numériques en pourcentage sont des pourcentages en poids,
c'est-à-dire le poids d'un composé par rapport au poids total du mélange
envisagé, sauf spécifié autrement.
[35] Les compositions décrites dans la présente demande peuvent
comprendre , consister en ou consister essentiellement en , les
composés essentiels ou les ingrédients optionnels.
[36] Consister essentiellement en signifie que la composition ou le
composant
peut inclure des ingrédients additionnels, mais seulement si les ingrédients
additionnels ne modifient pas les caractéristiques de bases ou les nouvelles
caractéristiques de la composition ou de l'utilisation décrite dans la
présente
demande.
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[37] Un milieu physiologiquement acceptable désigne un véhicule adapté
pour
une mise en contact avec les couches externes de la peau ou des muqueuses,
sans toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaire ou réaction
d'intolérance, et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable.
[38] Par application topique on désigne le fait d'appliquer ou d'étaler
l'extrait
aqueux enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, en
sucres, en composés phénoliques et en acides organiques selon l'invention, ou
une composition le contenant, à la surface de la peau ou d'une muqueuse.
[39] Peau désigne la peau du visage, notamment le contour des yeux et la
bouche, le nez, le front, le cou, les mains, mais aussi la peau de l'ensemble
du
corps.
[40] Cuir chevelu désigne la peau recouvrant le crâne, incluant les
follicules
pileux et les espaces cutanés inter-folliculaires.
[41] Phanères désigne chez les produits des follicules pileux (cheveux et
poils)
ainsi que les ongles, riches en kératine
[42] On entend par renforcer la fonction barrière que les propriétés de
protection de la peau vis-à-vis des agressions extérieures (radiations UV,
lumière
visible ou infrarouge, pollution, microorganismes, etc.) sont améliorées.
[43] On entend par apaiser la peau diminuer les réactions d'irritation qui
se
manifestent par une sensation d'inconfort, pouvant s'accompagner de rougeurs.
[44] Eclaircir la peau signifie diminuer l'intensité de la couleur de
la peau liée
au contenu en mélanine de l'épiderme, soit de manière homogène, soit de
manière localisée en agissant sur des désordres pigmentaires, tels que les
tâches de senescence ou lentigo séniles.
[45] Par quantité efficace on désigne la quantité minimum d'extrait
selon
l'invention qui est nécessaire pour obtenir au moins une des activités
biologiques
recherchées, en particulier pour présenter une activité antioxydante vis-à-vis
des
espèces réactives de l'oxygène, augmenter la mélatonine ou diminuer la
mélanine, ou tout autre marqueur biologique étudié, sans que cette quantité
soit
toxique.
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[46] Par hydratation de la peau , on entend le contenu et la répartition en
eau
des couches supérieures de l'épiderme.
[47] On entend par amélioration de l'hydratation cutanée , toutes
améliorations
des modifications de l'aspect extérieur de la peau dues à la déshydratation
comme, par exemple, la sécheresse, les tiraillements et l'inconfort, que cet
état
soit lié à des facteurs internes ou externes, tels que des conditions
environnementales défavorables.
[48] Par signes du vieillissement cutané on entend toutes modifications de
l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement comme, par exemple, les
rides et ridules, les crevasses, les poches sous les yeux, les cernes, le
flétrissement, la perte d'élasticité, de fermeté et/ou de tonus de la peau,
mais
également toutes modifications internes de la peau qui ne se traduisent pas
systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple,
l'amincissement de la peau, ou toutes dégradations internes de la peau
consécutives à des stress environnementaux tels que la pollution et les
rayonnements solaires incluant les UV.
[49] Par signes du vieillissement cutané on entend également les désordres
pigmentaires tels que le lentigo sénile ou lentigo solaire.
[50] Par agressions externes on entend les rayonnements solaires, incluant
la
lumière visible, les rayonnements UV et infrarouges, la pollution, pouvant
provenir de l'atmosphère ambiante à l'extérieur ou à l'intérieur des
habitations et
incluant des particules de différentes tailles (10 pm pour les PM10, 2,5 pm
pour
les PM 2,5, ou inférieur à 100 nm pour les particules ultrafines) ainsi que
plusieurs éléments chimiques (composés organiques volatils, hydrocarbures
aromatiques polycycliques, métaux lourds...).
[51] On entend par améliorer l'aspect de la peau que le grain de la peau
apparaît plus fin, la luminosité plus intense et le teint plus homogène.
[52] II est bien entendu que l'invention concerne les mammifères et plus
particulièrement l'être humain.
Procédé d'extraction
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[53] Les protocoles d'extraction des acides ribonucléiques (ARN) classiquement
décrits utilisent des solvants inadaptés à un usage cosmétique (Zumbo, P. 2014
"Phenol-chloroform Extraction", 2014). Ces méthodes visent à obtenir des
acides
nucléiques (ARN ou ADN ou petits ARN) complètement purifiés, c'est-à-dire
exempts de toute autre molécule d'intérêt tels que les métabolites
secondaires,
vitamines, sucres, peptides, etc. qui peuvent avoir des effets bénéfiques pour
la
peau et présentent donc un intérêt cosmétique.
[54] On connait également le document FR2831168 qui décrit un procédé
d'obtention d'un extrait de plante riche en acides nucléiques (ADN et/ou ARN).
Le procédé utilise des enzymes cellulolytiques.
[55] On connait encore de l'art antérieur les documents de brevet EP1723958 et
W003101376 qui décrivent une composition pour application topique
comprenant un oligonucléotide d'ARN double brins de synthèse d'une longueur
de 12 à 40 nucléotides, de séquence connue ayant une fonction de siARN (
short interfering ).
[56] On connait encore le document FR 1502361 (également publié sous le
numéro W02017084958) qui décrit un procédé d'obtention d'un extrait aqueux
de plantes, enrichi en acides ribonucléiques (ARN) de petit poids moléculaire,
pour préparer des compositions cosmétiques. Le procédé utilise de l'EDTA à une
concentration comprise entre 2 et 15 mM.
[57] L'utilisation d'acide phytique au lieu de l'EDTA présente les
avantages
suivants : Contrairement à l'EDTA, l'acide phytique est une molécule naturelle
présente dans l'enveloppe des graines, comme les céréales et les légumineuses.
De ce fait, l'utilisation d'acide phytique permet d'obtenir un extrait de
lavande
100 `)/0 d'origine naturelle tout en maintenant une bonne efficacité
d'extraction des
phytomolécules contenues dans la plante. L'efficacité d'extraction des petits
ARN
ainsi que celles des autres composés présents dans les fleurs de lavande tels
que les sucres, les composés phénoliques, ou des acides organiques comme
l'acide tartrique, malique ou citrique.
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[58] L'invention a ainsi pour premier objet un procédé d'extraction mis en
oeuvre
pour l'obtention d'un extrait aqueux des parties aériennes, séchées ou
fraîches
de lavande.
[59] Le procédé d'extraction de l'invention permet d'obtenir un extrait
riche en
phytomolécules d'intérêt cosmétique tels que les petits ARN d'une longueur
d'au
maximum 150 nucléotides, les sucres, les composés phénoliques et les acides
organiques, en évitant l'utilisation de solvants qui ne sont pas considérés
comme
des solvants cosmétiques.
[60] Le procédé de l'invention présente un impact réduit sur
l'environnement.
[61] Dans une première étape a) du procédé selon l'invention, on mélange les
parties aériennes de lavande avec de l'eau. L'eau utilisée est une eau
distillée,
déminéralisée ou encore une eau riche en sels minéraux et/ou oligo-éléments.
L'eau préférentiellement utilisée est de l'eau distillée.
[62] De préférence les parties aériennes de lavande sont les fleurs de lavande
et
les petites tiges portant les fleurs.
[63] De préférence l'espèce de lavande utilisée est Lavandula angustifolia ou
lavande vraie.
[64] De préférence les parties aériennes de lavande sont sous forme sèche.
[65] Préférentiellement, les parties aériennes de lavande sont broyées sous
forme
de poudre avant d'être mise en présence d'eau dans l'étape a). Le broyage les
parties aériennes de lavande est une action mécanique qui permet une meilleure
extraction. Le broyage mécanique pour obtenir la matière végétale sous forme
de
poudre, suivi d'une lyse alcaline en présence d'acide phytique favorise la
complète déstructuration des membranes cellulaires et notamment de la
membrane nucléaire. Préférentiellement, les parties aériennes de lavande
préalablement broyées sous forme de poudre, sont mélangées avec de l'eau, à
l'étape a) dans un rapport matière végétale / eau de 3 à 20 ')/0 en
poids/poids,
plus préférentiellement dans un rapport entre 3 et 10 %, par exemple dans un
rapport de 3 %, 5 % ou 10 % (poids/poids).
[66] On ajoute ensuite dans une étape b) de l'acide phytique dans le mélange
obtenu en a). Le pH à cette étape doit être basique, à une valeur comprise
entre
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et 11 et doit donc être ajusté, si besoin, par l'ajout de soude (NaOH). Lors
de
l'étape b) il est essentiel que le pH soit basique, compris entre 10 et 11. De
préférence, le pH est ajusté à une valeur comprise entre 10,5 et 11. En effet,
ce
niveau de pH, associé à l'action de l'acide phytique, provoque la
déstructuration
de la membrane cellulaire, y compris la membrane nucléaire, la lyse des
cellules
et la dénaturation de l'ADN (les 2 brins de la double hélice sont
séparés).L'acide
phytique fragilise et déstructure les membranes pecto-cellulosiques des
cellules
végétales en séquestrant par complexation les ions divalents tels que les ions
calcium qui forment des ponts ioniques entre les molécules de pectines
entourant
les microfibrilles de cellulose. Ceci a pour conséquence de favoriser la
libération
du contenu cellulaire au cours de l'extraction. L'étape de traitement par
l'acide
phytique est essentielle pour enrichir l'extrait en ARN de petits poids
moléculaires
et plus généralement assurer un meilleur rendement d'extraction des autres
phytomolécules d'intérêt ; à savoir les sucres, les composés phénoliques et
les
acides organiques.
[67] Le contrôle du pH montre que celui-ci reste basique et se stabilise entre
9 et
11 à la fin de l'étape b).
[68] Le procédé d'extraction permet d'enrichir l'extrait final en ARN de
petit poids
moléculaires grâce à l'utilisation d'une solution aqueuse d'extraction
contenant
notamment un agent chélatant naturel tel que l'acide phytique. L'acide
phytique
est une molécule naturellement présente dans l'enveloppe des graines, comme
les céréales et les légumineuses. L'acide phytique est présent sous forme de
sels de calcium ou parfois de magnésium, et il joue un important rôle pour la
plante, par exemple, c'est la source principale de phosphore.
[69] De manière préférée, l'acide phytique utilisé est une poudre d'acide
phytique
sous forme de sel de sodium à une concentration préférentiellement comprise
entre 1 et 10 mM, préférentiellement entre 1 et 5 mM et plus
préférentiellement la
concentration est de 3 mM.
[70] L'invention fonctionne particulièrement bien pour une concentration
d'acide
phytique comprise entre 2 et 3 comme décrit dans le tableau 1 ci-dessous. On
observe ainsi que pour seulement 2,25 mM d'acide phytique on obtient les
mêmes résultats qu'avec l'EDTA à 10 mM en termes de concentration de petits
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ARN, ainsi qu'un rendement global d'extraction similaire. Une concentration de
3
mM permet un rendement d'extraction optimum des ARN de petits poids
moléculaires. La concentration de 3 mM est également optimale pour avoir un
meilleur rendement des autres composés d'intérêt comme les sucres, les
composés phénoliques et les acides organiques. Avec une concentration d'acide
phytique de 4,5 mM le rendement d'extraction des ARN de petits poids
moléculaires est encore plus élevé, mais le rendement d'extraction global
baisse.
[71] [Tableau 1]
Concentration Acide Concentration ARN de Rendement
Phytique (mM) petits poids d'extraction
global (%)
moléculaires (mg/L)
Acide phytique 4,5 mM 60 35
Acide phytique 3 mM 58 45
Acide phytique 2,25 mM 55 38
EDTA tétrasodique 10 mM 56 40
Tableau 1 : Rendement en ARN de petits poids moléculaire et rendement
d'extraction global en fonction de la concentration en acide phytique
[72] L'étape b) de traitement par l'acide phytique dure préférentiellement
au moins
1h, à une température comprise entre 20 et 80 C. Pendant cette étape, le
mélange obtenu en a) est avantageusement mis sous agitation.
[73] De manière avantageuse, il est possible à la fin de l'étape b)
d'ajouter des
terres de diatomée afin de faciliter ultérieurement la séparation entre la
matière
végétale résiduelle solide et l'extrait (fraction soluble) à l'étape suivante.
[74] Dans une étape c), on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu en b) à une
valeur comprise entre 6 et 8.
[75] Le pH peut être ajusté par ajout d'une solution d'acide chlorhydrique
(HCI) ou
tout autre acide équivalent, compatible avec une utilisation cosmétique.
L'acidification provoque la renaturation brutale de l'ADN (ré-appariement des
brins de la double hélice). Toutefois l'ADN chromosomique, très long, ne
parvient
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pas à se réapparier complètement et forme des enchevêtrements insolubles. Au
contraire, les petits ARN restent en solution. L'ADN et les petits ARN sont
ainsi
séparés en deux phases distinctes ; une phase solide contenant entre autres
l'ADN chromosomique, et une phase liquide contenant, entre autres, les petits
ARN. L'étape d'ajustement du pH à l'étape d) du procédé selon l'invention est
une étape indispensable à l'extraction optimale des ARN de petit poids
moléculaire, ainsi que autres phytomolécules d'intérêt ; à savoir les sucres,
les
composés phénoliques et les acides organiques.
[76] Dans une étape d) on purifie le mélange obtenu en c) de manière à
éliminer
les parties aériennes de lavande solide résiduelle et récupérer la partie
soluble
qui constitue l'extrait brut aqueux selon l'invention. Toute méthode connue
par
l'homme du métier pourra être utilisée. Par exemple, le mélange obtenu en c)
peut être filtré sur des filtres de porosité supérieure à 30 prn de façon à
récolter le
filtrât. Préférentiellement le mélange obtenu en c) est centrifugé à faible
vitesse,
par exemple pendant au moins 10 min à 4000 g, de manière à sédimenter la
matière végétale résiduelle dans le culot et récupérer l'extrait brut aqueux
dans le
surnageant.
[77] Dans une étape e) on contrôle le pH et on le réajuste à une valeur
comprise
entre 6 et 8. Préférentiellement le pH est réajusté à une valeur comprise
entre 6
et 6,5, encore plus préférentiellement à une valeur de 6,5. Le pH est réajusté
par
l'ajout d'une solution d'acide chlorhydrique (HCI) ou encore n'importe quel
acide
équivalent compatible avec une utilisation cosmétique.
[78] En effet, un pH inférieur à 6 peut entraîner la précipitation des
acides
nucléiques en général, donc celle des ARN de petit poids moléculaire d'une
longueur d'au maximum 150 nucléotides. L'étape d'ajustement du pH à l'étape e)
du procédé selon l'invention est une étape indispensable pour avoir une
stabilité
optimale des ARN de petit poids moléculaire dans l'extrait.
[79] A la fin de l'étape e) on obtient un extrait brut concentré.
[80] Avantageusement le réajustement du pH de l'étape e) est précédé par au
moins une filtration de l'extrait brut aqueux obtenu en d). Préférentiellement
des
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filtrations successives seront réalisées en abaissant le seuil de filtration
de 20 à
50 pm jusqu'à une filtration stérilisante de 0,1 - 0,3 pm.
[81] L'extrait obtenu à l'étape e) peut ensuite être dilué dans un solvant
physiologiquement acceptable pour un usage cosmétique, de telle sorte que le
poids sec soit compris entre 4 et 20 g/kg d'extrait sec par rapport au poids
total
de l'extrait dilué. Cette étape améliore la stabilité de l'extrait dans le
temps.
[82] L'invention a pour deuxième objet un extrait aqueux de parties aériennes
de
lavande enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, en
sucres, en composés phénoliques, en acides organiques et dépourvu d'ADN,
susceptible d'être obtenu par le procédé décrit ci-dessus. Cet extrait ne
contient
pas d'ADN (acide désoxyribonucléique).
[83] L'invention a encore pour objet un extrait aqueux de parties aériennes de
lavande enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, en
sucres, en composés phénoliques et en acides organiques, directement obtenu
par le procédé décrit ci-dessus. Cet extrait ne contient pas d'ADN (acide
désoxyribonucléique).
[84] En utilisant le procédé de l'invention selon les étapes a) à e) on
obtient un
extrait brut concentré aqueux de lavande de couleur ambre à ambre foncé ayant
un poids sec de 10 à 30 g/kg, contenant 2 à 10 g/kg de sucres, 100 à 1500
mg/kg d'acides organiques, 500 à 2000 mg/kg de composés phénoliques et 40 à
200 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150
nucléotides. Néanmoins, pour des parties aériennes, en particulier la fleur de
lavande de l'espèce Lavandula angustifolia, les extraits obtenus peuvent
présenter une variabilité importante en fonction de facteurs tels que le lieu
ou
l'année de récolte, la saison, les conditions climatiques, le stress biotique,
etc.
[85] L'extrait ainsi obtenu peut ensuite être dilué dans un solvant
physiologiquement acceptable pour un usage cosmétique, de telle sorte que la
concentration de l'extrait est alors ajustée à un poids sec compris entre 4 et
20
g/kg d'extrait sec par rapport au poids total de l'extrait dilué.
[86] A titre d'exemples illustratifs et non limitatifs de solvants
physiologiquement
acceptables, on peut citer l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propanediol ainsi
que sa
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version naturelle appelée Zemea issue du maïs, le butylène glycol, le
dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols
cycliques ou
tout mélange de ces solvants.
Ainsi l'extrait obtenu peut être dilué pour obtenir une concentration finale
de 50 %
de butylène glycol dérivé de plante, ou 50 % de propanediol dérivé de plante
ou
encore 30 ')/0 de glycérine dérivée de plante.
[87] Préférentiellement, l'extrait obtenu par le procédé selon l'invention
est dilué
dans du butylène glycol de telle sorte que l'extrait dilué comprenne une
concentration finale en butylène glycol de 50 %.
[88] Cet extrait dit dilué comprend en poids du poids total de l'extrait de 4
à 20
g/kg d'extrait sec, 0,5 à 10 g/kg de sucres, 50 à 700 mg/kg d'acides
organiques,
50 à 1500 mg/kg de composés phénoliques et 10 à 100 mg/kg d'ARN de petit
poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides.
[89] A titre d'exemple non limitatif, on peut citer un extrait dilué de
Lavandula
angustifolia contenant plus particulièrement des sucres à une concentration de
1,7 g/kg, des acides organiques à un teneur de 570 mg/kg, 620 mg/kg de
composés phénoliques et 45 mg/kg d'ARN de petits poids moléculaires d'une
longueur d'au maximum 150 nucléotides.
[90] Au contraire, l'eau florale et l'huile essentielle de lavande
contiennent
principalement des molécules odorantes de nature terpénique et ne contiennent
pas d'ARN de petits poids moléculaires d'une longueur d'au maximum 150
nucléotides, ni de sucres, ni de composés phénoliques ou d'acides organiques.
[91] L'extrait de l'invention comprend ainsi une large gamme de phytomolécules
pouvant présenter des effets bénéfiques sur la peau, sans présenter de risque
d'irritation cutanée ou autre dommage pour la santé.
[92] Par exemple les sucres participent activement à l'hydratation des couches
épidermiques, et ce faisant à la résistance aux agressions extérieures, sans
présenter aucun effet indésirable. L'extrait de lavande de l'invention
contient plus
particulièrement des mono- et des polysaccharides, qui ne sont présents ni
dans
l'eau florale ni dans l'huile essentielle de lavande.
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[93] La lavande vraie fait partie de la famille des Lamiaceae qui possède un
métabolisme particulier dit CAM pour Crassulacean Acid Metabolism. La plante
stocke les acides organiques et plus particulièrement l'acide malique, l'acide
citrique et l'acide tartrique à l'intérieur de ses cellules. Le procédé décrit
dans
l'invention permet d'extraire ces acides organiques ou AHA. Appliqués sur la
peau ces AHA diminuent la cohésion cellulaire entre les cornéocytes,
provoquent
la desquamation des couches cornées et stimulent ainsi le renouvellement
cellulaire.
[94] L'extrait de lavande selon l'invention est également enrichi en composés
phénoliques, tels que les acides phénoliques. Ces molécules hydrosolubles
connues pour leur activité antioxydante contribuent au potentiel antioxydant
et
protecteur de l'extrait de lavande de l'invention.
[95] Un troisième aspect de l'invention est une composition cosmétique
comprenant une quantité efficace d'un extrait aqueux enrichi en petits ARN
d'une
longueur d'au maximum 150 nucléotides, en sucres, en composés phénoliques
et en acides organiques obtenu selon l'invention, en tant qu'ingrédient actif,
et un
milieu physiologiquement acceptable.
L'extrait aqueux enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150
nucléotides, en sucres, en composés phénoliques et en acides organiques,
obtenu selon l'invention est avantageusement utilisé pour la préparation de
compositions cosmétiques, à titre d'ingrédient actif.
[96] Avantageusement, l'extrait de parties aériennes de lavande selon
l'invention
est ajouté dans la composition à une concentration de 0,05 à 5 % en poids par
rapport au poids total de la composition, préférentiellement à une
concentration
de 0,1 à 2,5 % en poids par rapport au poids total de la composition et encore
plus préférentiellement à une concentration de 0,1 à 1,0 (:)/0 en poids par
rapport
au poids total de la composition.
La composition utilisable selon l'invention pourra être appliquée par toute
voie
appropriée, notamment orale, ou topique externe, et la formulation des
compositions sera adaptée par l'homme du métier.
[97] Préférentiellement, les compositions selon l'invention se présentent
sous une
forme adaptée à l'application par voie topique. Ces compositions doivent donc
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contenir un milieu physiologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec
la
peau et les phanères, sans risque d'inconfort lors de leur application et
couvrent
toutes les formes cosmétiques adaptées.
[98] Les compositions pour la mise en oeuvre de l'invention pourront notamment
se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse,
d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples ; elles
peuvent aussi se présenter sous forme de suspensions, ou encore poudres,
adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, les lèvres et/ou les
cheveux.
[99] Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir également
l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un
gel, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme
solide, comme un stick ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol.
A titre de milieu physiologiquement acceptable communément utilisé dans le
domaine d'application envisagé, on peut citer par exemple des adjuvants
nécessaires à la formulation, tels que des solvants, des épaississants, des
diluants, des antioxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents
auto-
bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des
absorbeurs d'odeur, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras
essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc.
[100] Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants
ainsi
que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux
propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces
adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à 0,01 à 20 % du poids total de
la
composition. Lorsque la composition selon l'invention est une émulsion, la
phase
grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en
poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-
émulsionnants utilisés dans la composition sont choisis parmi ceux
classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent
être
utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 cYc, en poids par rapport au
poids total
de la composition.
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[101] Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait
aqueux
de lavande de l'invention peut être encapsulé ou inclus dans un vecteur
cosmétique tels que les liposomes ou toute autre nano capsule ou microcapsule
utilisée dans le domaine de la cosmétique ou adsorbé sur des polymères
organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites.
[102] Avantageusement, la composition selon l'invention peut comprendre, outre
l'ingrédient actif selon l'invention, au moins un autre agent actif présentant
des
effets cosmétiques similaires et/ou complémentaires à ceux de l'invention.
[103] Par exemple, le ou les agents actifs additionnels peuvent être choisis
parmi :
les agents anti-âge, raffermissants, éclaircissants, hydratants, drainants,
favorisant la microcirculation, exfoliants, desquamants, stimulant la matrice
extracellulaire, activant le métabolisme énergétique, antibactériens,
antifongiques, apaisants, anti-radicalaires, anti-UV, anti-acné, anti-
inflammatoires, anesthésiques, procurant une sensation de chaleur, procurant
une sensation de fraicheur, amincissants.
[104] De tels agents actifs additionnels peuvent être choisis dans les groupes
comprenant :
- la vitamine A et notamment l'acide rétinoïque, le rétinol, le rétinol
propionate, le
rétinol palmitate ;
- la vitamine B3 et plus particulièrement le niacinamide, le nicotinate de
tocophérol ;
- la vitamine B5, la vitamine B6, la vitamine B12, le panthénol ;
- la vitamine C, notamment l'acide ascorbique, l'ascorbyl glucoside,
l'ascorbyl
tétrapalmitate, magnésium et sodium ascorbyl phosphate ;
- les vitamines E, F, H, K, PP, le coenzyme Q10;
- les inhibiteurs de métalloprotéinase, ou un activateur des TI MP ;
- la DHEA, ses précurseurs et dérivés ;
- les acides aminés tels que l'arginine, ornithine, hydroxyproline,
hydroxyproline
dipalmitate, palmitoylglycine, hydroxylysine, méthionine et ses dérivés,
composés
acides aminés N-acylés ;
- les peptides naturels ou de synthèse, incluant les di-, tri-, tetra-,
penta- et
hexapeptides et leurs dérivés lipophiles, isomères et complexés avec d'autres
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espèces telles qu'un ion métal (par exemple cuivre, zinc, manganèse,
magnésium, et autres). A titre d'exemples, on peut citer les peptides
commercialement connus sous les noms de MATRIXYLO, ARGIRELINEO,
CHRONOGENTM, LAMINIXYL ISTM, PEPTIDE Q1OTM, COLLAXYL TM (brevet
FR2827170, ASHLANDO), PEPTIDE VINCI 01TM (brevet FR2837098,
ASHLANDO), PEPTIDE VINCI O2TM (brevet FR2841781, ASHLANDO),
ATPeptide TM (brevet FR2846883, ASHLANDO) ou encore le peptide de synthèse
de séquence Arg-Gly-Ser-NH2, commercialisé sous le nom ATPeptide TM par
AS HLANDC, ;
- l'extrait d'Artémia sauna, commercialisé sous le nom GP4GTM (FR2817748,
AS HLANDO) ;
- les extraits peptidiques végétaux tels que les extraits de lin
(Lipigénine TM ,
brevet FR2956818, ASHLANDO), les extraits de soja, d'épeautre, de vigne, de
colza, de lin, de riz, de maïs, de pois ;
- les extraits de levures, par exemple le Dynagen TM (brevet FR2951946,
ASHLANDO) ou l'ActopontineTM (brevet FR2944526, ASHLANDO) ;
- l'acide déhydroacétique (DHA) ;
- les phystostérols d'origine synthétique ou naturelle ;
- l'acide salicylique et ses dérivés, les alpha- et bêta-hydroxyacides, les
silanols ;
- les sucres aminés, glucosamine, D-glucosamine, N-acetyl glucosamine, N-
acetyl-D-glucosamine, mannosamine, N-acetyl mannosamine, galactosamine, N-
acetyl galactosamine ;
- les extraits de polyphénols, isoflavones, flavonoïdes, tels que les
extraits de
raisin, les extraits de pin, les extraits d'olive ;
- les lipides tels que les céramides ou les phospholipides, les huiles
d'origine
animale, telles que le squalène ou le squalane ; les huiles végétales, telles
que
l'huile d'amande douce, de coprah, de ricin, de jojoba, d'olive, de colza,
d'arachide, de tournesol, de germes de blé, de germes de maïs, de soja, de
coton, de luzerne, de pavot, de potiron, d'onagre, de millet, d'orge, de
seigle, de
carthame, de passiflore, de noisette, de palme, de noyau d'abricot, d'avocat,
de
calendula ; les huiles végétales éthoxylées, le beurre de karité ;
- tous écrans UV et filtres solaires ;
- l'AMP cyclique et ses dérivés, les agents activateurs de l'enzyme
adénylate
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cyclase et les agents inhibiteurs de l'enzyme phosphodiestérase, l'extrait de
Centella asiatica, l'asiaticoside et l'acide asiatique, les méthyls xanthines,
la
théine, la caféine et ses dérivés, la théophylline, la théobromine, la
forskoline,
l'esculine et l'esculoside, les inhibiteurs d'ACE, le peptide Val-Trp,
l'inhibiteur du
neuropeptide Y, l'enkephaline, l'extrait de Ginkgo biloba, l'extrait de
dioscorea, la
rutine, l'extrait de yerba mate, l'extrait de guarana, les oligosaccharides,
les
polysaccharides, la carnitine, l'extrait de lierre, l'extrait de fucus,
l'extrait
hydrolysé de Prunelle vulgaris, l'extrait hydrolysé de Celosia cristata,
l'extrait
d'Anogeissus leiocarpus, l'extrait de feuilles de Manihot utilissima, la
palmitoylcarnitine, la camosine, la taurine, l'extrait de sureau, les extraits
d'algue
tel que l'extrait de Palmaria Palmata.
[105] L'invention a pour quatrième objet l'utilisation cosmétique d'une
composition
comprenant l'extrait de lavande de l'invention pour le soin de la peau, du
cuir
chevelu et des phanères, plus particulièrement pour protéger la peau des
agressions externes et de l'oxydation, lutter contre les signes du
vieillissement
cutané, augmenter la photoprotection, éclaircir la peau, améliorer
l'hydratation de
la peau, renforcer la fonction barrière, apaiser la peau, ou encore pour
améliorer
les mécanismes biologiques associés à la réparation de la peau pendant la
nuit.
[106] La peau est un organe composé de plusieurs couches (derme, épiderme et
stratum comeum), qui recouvre toute la surface du corps et assure des
fonctions
protectrices vis-à-vis des agressions externes, sensitives, immunitaires,
métaboliques, thermorégulatrices ou encore de barrière limitant la
déshydratation.
[107] En particulier, le stratum comeum assure un rôle de barrière physique
protectrice, communément nommé fonction barrière de la peau . Cette
fonction revêt une importance majeure dans l'homéostasie tissulaire et dans la
protection vis-à-vis de l'environnement extérieur.
[108] L'aspect de la peau peut être modifié par des altérations internes
(vieillissement intrinsèque, maladies et changements hormonaux tels que la
grossesse) ou externes (facteurs environnementaux, tels que la pollution, la
lumière du soleil, les pathogènes, les variations de température, etc.).
Toutes ces
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altérations affectent non seulement la peau, mais aussi les annexes
kératiniques
telles que les poils, les cils, les sourcils, les ongles et les cheveux.
[109] L'extrait de parties aériennes de lavande de l'invention a été testé sur
les
principaux marqueurs biologiques associés aux mécanismes de réparation de la
peau pendant la nuit. Les mécanismes qui siègent dans la peau pendant la nuit
incluent l'augmentation de la réparation de l'ADN, du taux de prolifération
cellulaire, de la température cutanée, du flux sanguin cutané, de l'incidence
des
démangeaisons, ainsi que de la perméabilité de la barrière cutanée, conduisant
à
une perte d'hydratation (Matsui M.S. et al, Biological rhythms in the skin,
Int. J.
Mol. Sci. 2016, 17,801). L'extrait de parties aériennes de lavande de
l'invention a
été en particulier évalué sur le taux de réparation des dimères de pyrimidines
(CPD pour Cyclobutane Pyrimidine Dimers). Le rythme jour/nuit perçu au niveau
du système nerveux central, comprend la production de mélatonine par la glande
pinéale (Slominski A.T. et al, Melatonin : A cutaneous perspective on its
production, metabolism, and functions. J Invest Dermatol, 2018 March ;
138(3) :490-499). La mélatonine est également produite localement dans la peau
à partir du tryptophane. Ces fonctions contribuent à diminuer le taux
d'espèces
réactives de l'oxygène et de l'azote (ROS et RNS, pour reactive oxygen species
et reactive nitrogen species, respectivement). En effet, en plus de son rôle
direct
de piégeur de radicaux libres, la mélatonine stimule la production d'enzymes
antioxydantes telles que la catalase et la superoxide dismutase et intervient
dans
la réparation de l'ADN. En optimisant le fonctionnement de la mitochondrie, la
mélatonine contribue aussi à augmenter le taux d'ATP produit par la cellule.
L'effet de l'extrait de parties aériennes de lavande de l'invention a été
évalué sur
le taux de mélatonine de la peau et sur l'expression de l'enzyme AANAT
(Aralkylamine N-Acetyltransferase ou sérotonine N-acétyl transférase ou
timezyme) qui catalyse la N-acétylation de la sérotonine en N-
acetylserotonine,
ultime étape de la synthèse de la mélatonine. De plus, l'application topique
de
mélatonine exogène a montré un effet sur la perte des cheveux associée à
l'alopécie androgénétique (Fisher TVV, Topical melatonin for treatment of
androgenetic alopecia, Int J Trichology, 2012 Oct-Dec, 4(4) :236-245).
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[110] L'extrait de parties aériennes de lavande de l'invention a démontré son
efficacité pour augmenter la production de mélatonine dans des biopsies de
peau
en culture.
[111] Des altérations de la fonction barrière résultent d'agressions externes
telles
que les UV. Les conséquences sont majeures au niveau de la perte de la
cohésion cellulaire et de l'intégrité mécanique. Certaines enzymes impliquées
dans les phases terminales de la différenciation kératinocytaire jouent un
rôle clé
dans la protection face aux UV. Des modifications de l'expression et/ou de
l'activité de ces enzymes ont des conséquences importantes sur l'intégrité de
la
fonction barrière et l'homéostasie de la peau.
[112] L'extrait de parties aériennes de lavande de l'invention a démontré son
efficacité pour renforcer la fonction barrière et ainsi améliorer la
protection de la
peau vis-à-vis des agressions extérieures (radiations UV, pollution,
microorganismes, etc.).
[113] L'extrait de parties aériennes de lavande de l'invention a démontré son
efficacité pour diminuer le taux de mélanine dans des biopsies de peau, et
ainsi
induire un effet éclaircissant.
Exemples
[114] A titre illustratif, des exemples de mode de réalisation du procédé
selon
l'invention sont décrits ci-dessous.
[115] Exemple 1: Préparation d'un extrait de lavande (Lavandula angustifolia)
de la famille des Lamiaceae, enrichi en petits ARN
Procédé d'extraction
[116] Les fleurs de lavande de l'espèce Lavandula angustifolia sont
préalablement
séchées dans un endroit ventilé, à l'abri de la lumière. Dans une première
étape,
3 % de fleurs séchées de lavande et de tiges portant les fleurs sont broyées
sous
forme de poudre à une granulométrie allant de 500 pm à 1 mm préférentiellement
à 800 pm, soit l'équivalent de 30 g de poudre de fleurs de lavande séchées
dans
968 g d'eau distillée. Puis on ajoute 2 g/L soit 3 mM d'acide phytique. Le pH
est
ajusté à 10,8 pour un enrichissement optimal de l'extrait en ARN de petits
poids
moléculaires.
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[117] Le mélange est ensuite chauffé 1h à 80 C sous agitation.
Après cette heure d'extraction, on ajoute à ce mélange des terres de diatomée
afin de faciliter la séparation ultérieure entre la matière végétale
résiduelle solide
et l'extrait (fraction soluble).
[118] Le mélange est ensuite filtré à l'aide de filtres de porosité de 30 pm,
pour ôter
la matière solide. Le pH est ensuite ajusté à pH 7,5 à l'aide d'une solution
d'HCI.
Des filtrations séquentielles sur filtres de porosité décroissante sont alors
réalisées afin de clarifier l'extrait végétal jusqu'à une filtration
stérilisante à 0,2
pm.
[119] A l'issue de cette étape, le pH est contrôlé, puis il est ajusté à 6,3
avec une
solution d'HCI. 6 et 6,5 et préserver les petits ARN de l'extrait.
On obtient un extrait aqueux ayant un poids sec de 12,6 g/kg.
Caractérisation de l'extrait de lavande
[120] L'extrait obtenu à un poids sec de 12,6 g/kg.
L'analyse physico-chimique montre que l'extrait obtenu présente une
concentration de 3,7 g/kg de sucres totaux, 1160 g/kg d'acides organiques
totaux, 1270 mg/kg de composés phénoliques totaux et 118 mg/kg d'ARN de
petits poids moléculaires d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides.
L'extrait est ensuite dilué avec un solvant cosmétique physiologiquement
acceptable et permettant de garantir une meilleure stabilité et une meilleure
conservation de l'extrait dans le temps.
[121] La dilution est réalisée avec du butylène glycol dérivé de plante de
manière à
obtenir une concentration finale de 50 Vo de butylène glycol et 50 Vo
d'extrait de
lavande. L'extrait ainsi dilué possède alors un poids sec de 6 g/kg, et
présente
une concentration de 1,7 g/kg de sucres totaux, 570 mg/kg d'acides organiques
totaux, 620 mg/kg de composés phénoliques totaux et 45 mg/kg d'ARN de petits
poids moléculaires d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides.
Méthodes de dosage utilisées pour déterminer la quantité des différents
composés contenus dans l'extrait final de lavande :
[122] La teneur totale en sucres de l'extrait a été déterminée par dosage
spectrophotométrique issu d'une adaptation du dosage décrit par Dubois et al.
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(1956) (Dubois et al., "Méthode calorimétrique pour la détermination des
sucres
et des substances apparentées", Anal. Chem., 1956, 28 (3), 350-356). Cette
analyse consiste en la dissolution de la matière première dans l'acide
sulfurique
concentré puis en réagissant avec du phénol pour former un complexe coloré.
L'absorbance du complexe est lue sur le spectrophotomètre à 490 nm. La teneur
en sucre est déterminée à l'aide d'une courbe standard de glucose. Une analyse
CCM a permis de mettre en évidence que les sucres majoritaires présents dans
l'extrait de l'invention sont les molécules de glucose et fructose ainsi que
des
sucres de hauts poids moléculaires (oligo et polysaccharides).
[123] La teneur totale en polyphénols de l'extrait de lavande a été déterminée
par la
méthode de dosage spectrophotométrique de Folin-Ciocalteu (Singleton et al.,
Analyse des phénols totaux et d'autres substrats d'oxydation et antioxydants
au
moyen du réactif Folin-Ciocalteu, 1999, 299: 152). Les composés de type
polyphénols présents dans l'échantillon réagissent avec le réactif de Folin-
Ciocalteu, l'oxydation du réactif donne une couleur bleue. L'absorbance de
l'échantillon est lue sur le spectrophotomètre à 760 nm. Le contenu est
exprimé
en équivalents d'acide gallique à l'aide d'une courbe standard d'acide
gallique.
[124] La caractérisation des acides organiques a été effectuée sur l'extrait
de
Lavande de l'exemple 1, une eau florale et une huile essentielle de référence.
Une analyse chromatographique liquide haute performance, couplée à un
détecteur de masse a été utilisée. Tous les échantillons ont été séparés sur
une
colonne EC 150 /4,6 Nucleoshell RP 18plus-5pm (150x4,6 mm) (Macherey
Nagel: 763236.46) par un système HPLC Agilent 1260 (Agilent Technologies). Le
débit était de 0,3 ml / min. La phase mobile consistait en une solution
d'acide
formique (HCOOH) à 0,01 % (A) et d'acétonitrile (B). Le programme de gradient
a facilité l'élution tel que décrit dans le tableau 2.
[125] [Tableau 2]
A
Temps 0,01 %
Acetonitrile
(min) HCOOH
(ACN) (%)
(%)
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0 100 0
9 100 0
13 5 95
14 5 95
15 100 0
20 100 0
[126] La température de la colonne a été maintenue à 25 C et le volume
d'injection
était de 5 pL. La détection a été effectuée par un détecteur de spectromètre
de
masse ACQUITY Qda (WATERS) avec une source d'ions électrospray en mode
négatif. La source a été réglée à une tension capillaire de 0,8 kV et à une
température de sonde de 600 C.
M/z et la tension au cône ont été ciblés pour chaque composé tel que décrit
dans
le tableau 3.
[127] [Tableau 3]
Masse Cone
Composés
(m/z) voltage (V)
Acide tartrique 149,0 10
Acide malique 132,9 3
Acide citrique 191,0 10
Acide lactique 88,9 5
Acide succinique 116,95 15
Acide uronique 193 10
[128] L'identification des acides organiques a été réalisée en comparant les
temps
de rétention et les pics spectraux de masse de l'échantillon avec un étalon.
L'estimation quantitative des acides organiques a été réalisée sur la base de
la
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surface maximale des concentrations de l'échantillon comparée à la surface
maximale des étalons.
[129] L'analyse HPLC-MS qui permet de quantifier et d'identifier les acides
organiques contenus dans l'extrait, montre que seul l'extrait de lavande
contient
différents types d'acides organiques, principalement acide citrique, malique
et
tartrique, tels que présentés sur la figure 1. L'analyse HPLC-MS montre que
ces
acides organiques ne sont présents ni dans l'eau florale de lavande vraie ni
dans
l'huile essentielle de lavande vraie.
[130] La quantification des ARN de bas poids moléculaires a été réalisée par
une
technique d'électrophorèse miniaturisée sur des puces microfluidiques
spécifiques de l'analyse des acides nucléiques telle que celle des ARN de
petits
poids moléculaires (Bioanalyseur 21000, Agilent). Cette méthode permet de
déterminer la taille et la concentration d'acides nucléiques contenues dans un
extrait à partir de quelques microlitres. Le résultat se présente sous forme
d'un
graphique avec en ordonnée une unité arbitraire de fluorescence (FU) et en
abscisse le nombre de nucléotides (nt). Un marqueur interne est ajouté à
chaque
analyse (pic à 25 nt sur la figure 2), et sert de contrôle interne pour
valider le bon
déroulement de l'analyse.
[131] La figure 2 représente l'analyse des ARN de petits poids moléculaire par
le
Bioanalyseur 2100. A: extrait de lavande selon l'exemple 1. B : extrait
conventionnel de lavande selon exemple 2.
[132] L'analyse par bioanalyseur montre que le procédé décrit dans la présente
invention permet d'extraire les ARN de petits poids moléculaires de la
lavande,
tel qu'illustré sur la figure 2A. La figure 2A montre que les ARN présents
dans
l'extrait de lavande de l'invention ont des poids moléculaires répartis entre
plus
de 25 et environ 150 nucléotides.
[133] Un procédé d'extraction conventionnelle telle que la macération décrit
ci-
dessous dans l'exemple 2 ne permet pas d'extraire les ARN de petits poids
moléculaires (figure 2B). L'analyse a permis également de démontrer qu'il n'y
a
pas non plus ces molécules ni dans l'eau florale ni dans l'huile essentielle.
De
plus cette analyse permet de démontrer l'absence d'ADN dans l'extrait.
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[134] L'analyse des composés volatiles odorants (VOC) a été effectuée sur
l'extrait
de Lavande selon l'invention, l'eau florale et l'huile essentielle par GO-FI
D. Tous
les échantillons ont été séparés sur une colonne GO OPTIMA 5HT de 30 mx 250
pm x 0,25 pm (Macherey-Nagel 726106.30) par une chromatographie gazeuse
Agilent GO / FID 7890A (Agilent Technologies). 3 pL de produits échantillons
ont
été injectés sur la colonne à un flux de 1,3 ml / min, en utilisant de
l'hélium
comme gaz vecteur sur un four programmé qui monte de 75 C à 320 C en 40
min.
[135] Les molécules ont été détectées sur un détecteur à ionisation de flamme
à
230 C, en utilisant de l'hydrogène (30 ml! min) et de l'air (400 ml! min) pour
la
flamme. L'identification des VOC se fait par comparaison des temps de
rétention
des composés.
[136] Pour les échantillons aqueux une extraction liquide/liquide dans
l'hexane
(1 :1) est réalisée préalablement à l'injection. Du sulfate de magnésium est
ajouté
à la phase organique afin d'éliminer toute trace d'eau.
[137] [Tableau 4]
Molécules odorantes
volatiles (VOC) LD (ppm) Extrait de lavande
Eucalyptol 5 <LD
Thujones 3 <LD
Linalol 4 <LD
Camphre 2 <LD
Borneol 3 <LD
Acétate de lynalyle 3 <LD
Tableau 4: Détermination des composés volatils odorants dans l'extrait de
lavande
[138] Les résultats de l'analyse par GC-FID du tableau 4 permettent de mettre
en
évidence que l'extrait de lavande de l'exemple 1 ne contient aucune molécule
odorante, de nature terpénique, contrairement à l'eau florale et l'huile
essentielle
de lavande connues pour contenir majoritairement ces molécules.
[139] Exemple 2 préparation d'un macérat de lavande
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[140] Afin de comparer une extraction dite classique à l'extrait de
l'invention, un
macérat de lavande a été réalisé, en engageant la même quantité de fleurs
séchées de lavande de l'espèce Lavandula angustifolia que dans l'exemple 1
soit
3 A de fleurs de lavande séchées broyées mises dans de l'eau distillée. Le
mélange est ensuite chauffé 1 h à 8000, puis le mélange est filtré par une
première filtration à large porosité de 30 pm afin d'ôter la matière végétale
résiduelle solide de la partie liquide puis par filtration séquentielle de
porosité
décroissante jusqu' à 0,2 pm. Ce procédé a pour but de préparer un extrait
contrôle pour obtenir des données analytiques comparatives par rapport à
l'extrait de lavande obtenu par le procédé de l'invention. Les résultats
obtenus
sont illustrés dans la figure 2B et dans le texte de la demande.
[141] Exemple 3 : Evaluation de l'extrait de Lavandula angustifolia de
l'exemple 1 sur les espèces oxygénées réactives après application d'un
stress de lumière visible sur des kératinocytes humains normaux :
[142] Principe :
Le but de cette étude est de montrer l'effet de l'extrait de lavande préparé
selon
l'exemple 1 sur la diminution des espèces oxygénées réactives générées par un
stress de lumière visible. Ce type de lumière entre 400 et 700 nm a pour but
de
mimer la lumière du jour. Les espèces oxygénées réactives sont impliquées dans
différents mécanismes d'altération des protéines et de l'ADN, en lien avec le
vieillissement cutané.
[143] Protocole :
Des kératinocytes humains normaux sont traités par l'extrait de l'exemple 1
pendant une nuit. Les cellules sont ensuite exposées à la lumière visible
générée
par un spot de 24 Watt et de 5000 Kelvin, permettant de mimer la lumière du
jour. Cette exposition est répétée 4 fois pendant 10 minutes, au cours de la
journée. Le traitement est de nouveau appliqué pendant la nuit, puis les
cellules
sont de nouveau soumises au même stress de lumière visible. A l'issue de ce
stress, les espèces réactives de l'oxygène sont détectées par la sonde
mitochondriale MitoSOXTM Red (ThermoFisher scientific).
[144] Résultats :
L'application du stress de lumière du jour a entrainé une augmentation des
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espèces réactives de l'oxygène (ER0s) de +43 % par rapport aux cellules non
exposées. Lorsque les cellules ont été traitées par l'extrait de l'exemple 1 à
0,1 A
(dilution volume/volume), les EROs sont diminuées de façon hautement
significative de -12 A par rapport aux cellules non traitées. Un macérat de
lavande obtenu selon l'exemple 2 est testé dans les mêmes conditions a permis
une diminution plus faible de -5 %.
[145] Conclusion :
L'extrait de lavande a montré une activité antioxydante, dirigée contre les
espèces réactives de l'oxygène au niveau mitochondrial. Cette activité s'est
révélée supérieure à celle obtenue avec un extrait de lavande issu d'une
macération classique.
[146] Exemple 4: Evaluation de l'extrait de l'exemple 1 sur les dommages de
l'ADN dans des mélanocytes humains normaux exposés à un stress UVB:
[147] Principe :
L'instabilité génomique peut être définie comme l'ensemble des modifications
chimiques de l'ADN, intervenant lors de différents processus et pouvant
s'accumuler au cours du temps. Les altérations de l'ADN représentent une
composante majeure du photo-vieillissement. Dans la présente étude, nous nous
sommes intéressés aux dommages créés par les UVB dans les mélanocytes.
Les dimères de pyrimidine résultent d'un effet direct des UVB sur les bases
pyrimidiques de l'ADN. Il y a formation de dimères cyclobutaniques de
pyrimidine
(ou CPD pour Cyclobutane Pyrimidine Dimer) qui sont les dommages de l'ADN
les plus fréquemment induits par les UVB. Dans les mélanocytes, les CPDs
continuent à être générés plus de 3 heures après l'exposition aux UVB. Ils
sont
appelés dark CPDs et sont dus à la chemiexcitation de la mélanine,
conduisant à un transfert d'énergie à l'ADN.
Dans cette étude, la capacité de l'extrait de l'exemple 1 à réduire la
formation des
dark CPDs dans les mélanocytes a été évaluée.
[148] Protocole :
Des mélanocytes extraits de l'épiderme humain sont traités par l'extrait de
l'exemple 1 à 0,1 % (dilution volume/volume) pendant la nuit, puis irradiés
par
des UVB à 60 mJ/cm2 et de nouveau traités une nuit par l'extrait de lavande.
Le
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lendemain matin, les dimères de pyrimidines sont détectés par immunomarquage
avec un anticorps dirigé contre les CPDs (Cyclobutane Pyrimidine Dimers Mouse
Monoclonal, Euromedex). Après une heure et demie d'incubation suivie de
rinçages, les cellules sont incubées en présence de l'anticorps secondaire
anti-
souris couplé à un fluorophore (Alexa Fluor 488, Invitrogen). Les cellules
sont
ensuite examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M
microscope). La présence des CPDs est alors observée et quantifiée par analyse
d'image (Volocity image analysis software, Improvision).
[149] Résultats :
Dans les conditions non irradiées, les mélanocytes ne présentent pas de CPDs.
Leur formation est induite à la suite du stress UVB. L'application de
l'extrait de
l'exemple 1 sur les mélanocytes a permis de réduire l'induction des dark
CPDs par les UVB de ¨37 % (hautement significatif d'après le test t de
Student
par rapport aux cellules irradiées non traitées). Dans les mêmes conditions et
à
la concentration égale de 0,1 %, le macérat de lavande obtenu selon l'exemple
2
n'a pas eu d'effet significatif.
[150] Conclusion :
L'extrait de l'exemple 1 a diminué les dark CPDs produits dans les
mélanocytes par un stress UVB. Par cette activité, l'extrait de lavande a
montré
un bénéfice sur la réduction des dommages de l'ADN, contribuant aux
mécanismes de réparation de la peau pendant la nuit.
[151] Exemple 5 : Evaluation de l'extrait de l'exemple 1 sur la voie de
synthèse
de la mélatonine dans des biopsies de peau ex vivo et des follicules pileux
humains :
[152] Principe :
Le but de cette expérience est de démontrer un effet de l'extrait de de
l'exemple
1 sur la synthèse de mélatonine dans des biopsies de peau humaine en culture.
Cette évaluation inclut deux marqueurs : 1 - l'enzyme AANAT (Aralkylamine N-
Acetyltransferase ou sérotonine N-acétyl transférase ou timezyme) qui catalyse
la N-acétylation de la sérotonine en N-acetylserotonine, ultime étape de la
synthèse de la mélatonine, 2 - l'évaluation de la mélatonine elle-même.
L'enzyme
AANAT contrôle le rythme jour/nuit de production de la mélatonine au niveau de
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la glande pinéale. La mélatonine étant aussi synthétisée localement au niveau
de
la peau, nous avons voulu suivre sa synthèse en réponse à l'application de
l'extrait de lavande.
[153] Protocole :
L'enzyme AANAT et la mélatonine sont évaluées par immunofluorescence
indirecte sur des biopsies de peau, traitées au préalable par application
topique
de l'extrait de lavande pendant 48 heures (2 fois par jour). De plus,
l'extrait de
l'exemple 1 dilué à 0,5 % (dilution volume/volume) dans le milieu de culture a
été
mis au contact de follicules pileux humains, isolés à partir de biopsies de
cuir
chevelu. Des biopsies contrôles incubées en parallèle dans les mêmes
conditions, ainsi que des follicules pileux contrôles sans addition de
l'extrait de
lavande, reçoivent le placebo (Phosphate Buffer Saline, PBS). Au terme de
l'incubation, les biopsies et les follicules pileux sont fixés et inclus en
paraffine
pour la réalisation de coupes histologiques. La détection de l'enzyme AANAT et
de la mélatonine est réalisée par incubation avec les anticorps respectifs :
anti-
AANAT (Invitrogen) et anti-mélatonine (Abnova, Cliniscience). Après une heure
et demie d'incubation suivie de rinçages, les coupes sont incubées en présence
de l'anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorophore (Alexa Fluor
488,
Invitrogen). Les coupes sont ensuite examinées au microscope à Epi-
fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L'expression de collagène I est
alors observée et quantifiée par analyse d'image (Volocity image analysis
software, Improvision).
[154] Résultat :
L'évaluation de l'enzyme AANAT et de la mélatonine a montré une augmentation
de +20 % et de +51 %, respectivement dans les biopsies de peau traitées avec
l'extrait de l'exemple 1 à 0,5% (hautement significatif d'après le test t de
Student,
comparé aux biopsies recevant le placebo). Le macérat de lavande obtenu selon
l'exemple 2 a donné un résultat équivalent en ce qui concerne l'AANAT, mais a
conduit à une plus faible augmentation pour la mélatonine (+34 %, hautement
significatif d'après le test t de Student, comparé aux biopsies recevant le
placebo). Dans les follicules pileux en culture, l'extrait de l'exemple 1 à
0,5 % a
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entraîné une augmentation de la production de mélatonine de l'ordre de +23 %,
observée dans la gaine épithéliale externe des follicules.
[155] Conclusion :
L'extrait de l'exemple 1 a montré une activité sur la production de la
mélatonine
dans les biopsies de peau ex vivo et dans les follicules pileux. Cette
augmentation est liée à une augmentation de l'enzyme AANAT, dont l'expression
est augmentée dans la glande pinéale au cours de la transition du jour à la
nuit.
Les propriétés de la mélatonine sont liées à des activités de réparation des
dommages cellulaires, notamment au niveau de l'ADN et en raison de son
activité antioxydante. L'augmentation de la mélatonine dans la peau par
l'extrait
de lavande apparait donc bénéfique pour les processus de réparation des
dommages de la peau pendant la nuit. L'augmentation de la mélatonine dans le
follicule pileux indique un effet bénéfique sur la physiologie du follicule
pileux, la
mélatonine étant associée à la phase de croissance du cheveu.
[156] Exemple 6 : Evaluation du potentiel éclaircissant de l'extrait de
l'exemple 1 sur des biopsies de peau ex vivo :
[157] Principe :
Le but de cette étude est d'évaluer le potentiel éclaircissant de l'extrait de
l'exemple 1 sur des biopsies de peau ex vivo, en utilisant la coloration
histologique de la mélanine Fontana-Masson, basée sur la réduction d'une
solution de nitrate d'argent ammoniacal en argent métallique. La coloration
obtenue révèle le contenu en mélanine et est quantifiée par analyse d'images.
[158] Protocole :
Des biopsies de peau humaine ex vivo sont mises en culture et traitées par
l'extrait de l'exemple 1 à 0,5 `)/0 (dilution volume/volume) et 1 `)/0
(dilution
volume/volume) pendant 48 heures. Après traitement, les biopsies sont fixées
pour analyse histologique et incluses en paraffine. Après déparaffinage, les
coupes sont incubées avec la solution de nitrate d'argent ammoniacal, à 60 C
pendant 10 minutes. Après rinçage, elles sont traitées par le Sodium
Thiosulfate
A pendant 2 minutes, puis rincées à nouveau et montées pour l'examen au
microscope Eclipse E600 (Nikon). Les photos sont prises avec la camera
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Qlmaging Retiga 2000R Fast1394 et analysées par le logiciel Q-Capture Pro 7
(Qlmaging).
[159] Résultats et conclusion :
Sur des biopsies de peau ex vivo, une diminution du contenu en mélanine de
moins 551% et de moins 721%, a été observée après application de l'extrait de
l'exemple 1 à 0,5 % (dilution volume/volume) et 1 % (dilution volume/volume)
respectivement (hautement significatif par le test t de Student par rapport
aux
biopsies placebos), tandis que le macérat de lavande obtenu selon l'exemple 2
n'a pas montré de diminution à 0,5 %, et une diminution plus faible (de -47 %)
à
1%.
[160] Ce test a donc permis de conclure à un potentiel effet éclaircissant de
l'extrait
de l'exemple 1 de Lavandula angustifolia sur les biopsies de peau ex vivo.
[161] Exemple 7 : Formule d'une crème riche
[162] [Tableau 5]
Ingrédients (Nom de marque) INCI c/o
w/w
Phase A
Eau purifiée Aqua Qsp 100
OptiphenTM Plus preservative Phenoxyethanol (and) Caprylyl Glycol (and) 1,50
1Sorbic Acid
Phase B
StabilezeTM QM polymer PVM/MA Decadiene Crosspolymer 0,15
Phase C
Glyceryl Stearate (and) Behenyl Alcohol (and)
Palmitic Acid (and) Stearic Acid (and) Lecithin
ProLipidTM 141 lamellar gel 5,00
(and) Lauryl Alcohol (and) Myristyl Alcohol
(and) Cetyl Alcohol
CeraphylTM 494 ester Isocetyl Stearate
4,00
CeraphylTM SLK ester Isodecyl Neopentanoate
4,00
DC 580 Wax Stearoxytrimethylsilane (and) Stearyl
Alcohol 2,00
EmulsyntTM GDL ester Glyceryl Dilaurate
3,00
Phase D
Gransil DM-5 Dimethicone (and) Polysilicone-11
3,00
Phase E
Hydroxyde de sodium I Sodium Hydroxide
0,04
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Eau purifiée I Aqua
0,50
Phase F
PF Bois Précieux Parfum/Fragrance
0,30
Cl 77491 (Iran oxides) (and) Isopropyl
Unipure* Red LC 381 ADT-C Titanium Triisostearate (and)
Bis- 0,03
Hydroxyethoxypropyl Dimethicone (and)
PEG-2-Soyamine (and) Isophorone
Phase G
Extrait selon l'exemple 1
Butylen glycol (and) Lavandula Angustifolia 3,00
Flower Extract
Ronaflair Balance Gold
Cl 77891 (Titanium Dioxide) (and) Mica (and) 0,30
Tin Oxide
Covabead Velvet 10 Polymethyl Methacrylate
1,00
Ronaflair Balance Red
Cl 77891 (Titanium Dioxide) (and) Mica (and) 1,20
Tin Oxide
Phase H
Eau purifiée Aqua
15,00
NatrosolTM Plus 330 OS Cetyl Hydroxyethylcellulose
0,50
[163] Procédé de préparation :
1. Homogénéiser la phase A dans le récipient principal et commencer à chauffer
à 75-80 C;
2. A 30 C, saupoudrer dans la Phase B et homogénéiser tout en chauffant ;
3. Dans un bécher à part, préparer la phase C, chauffer à 75-80 C jusqu'à
homogénéité ;
4. A 75 C, ajouter la phase C dans le récipient principal et homogénéiser
pendant 10 minutes ;
5. Laisser refroidir la température et ajouter la phase D à 65 C. Bien
mélanger
pour homogénéiser pendant 10 minutes ;
6. Prémélanger la phase E avant de l'ajouter dans le récipient principal ;
7. Ajouter la phase E à 60 C. Bien mélanger pour homogénéiser pendant 10
minutes ;
8. A 35 C, prémélanger la phase F avant de l'ajouter et de bien mélanger ;
9. Prémélanger la phase G avant de l'ajouter dans le récipient principal ;
10. Ajouter la phase G à 35 C. Bien mélanger pour homogénéiser ;
11. Dans un bécher à part, préparer la phase H : saupoudrer NatrosolTM dans
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l'eau à température ambiante et homogénéiser tout en chauffant à 60 C;
12. Ajouter la phase H à 30 C. Bien mélanger pour homogénéiser ;
13. Arrêter à 25 C.
[164] La composition se présente ainsi sous forme d'une crème beurre rose,
avec
un pH compris entre 4,90 et 5,40 et une viscosité (DO) de 160000 ¨ 210000 cps
(Brookfield RVT/Spindle D/5 RPM/1 minute/25 C).
[165] Exemple 8 : Formule d'un masque anti-âge
[166] [Tableau 6]
Ingrédients (Nom de marque) INCI %
w/w
Phase A
Qsp
Eau purifiée Aqua
100
EDTA tétrasodique Tetrasodium EDTA
0,05
Phase B
N-HanceTM HP4OS guar Hydroxypropyl Guar 0,10
Phase C
Glycerin (and) Glyceryl Acrylate/Acrylic Acid
LubrajelTM DV Free hydrogel 6,00
Copolymer
Phase D
Si-TecTm GF 3096 silicone Dimethicone (and) Dimethiconol
12,00
Sodium Polyacrylate (and) Hydrogenated
RapiThixTm A-60 polymer
2,40
Polydecene (and) Trideceth-6
Phase E
Phenoxyethanol (and) Caprylyl Glycol (and)
Optiphen TM Plus preservative
1,50
Sorbic Acid
Phase F
Surfin* 96 Alcohol Denat.
3,50
PF Cucumber & Aloe Parfum/Fragrance
0,50
Phase G
Extrait selon l'exemple 1 Butylen glycol (and) Lavandula
Angustifolia
1,00
Flower Extract
Achromaxyl TM ISR VVater/Aqua (and) Glycerin (and)
Hydrolyzed
biofunctional 3,00
Brassica Napus Seedcake Extract
Mica (and) Cl 77891 (Titanium Dioxide) (and)
Xirona Carribean Blue
1,00
Silica (and) Tin Oxide
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[167] Procédé de préparation :
1. A 25 C, homogénéiser la phase A dans le récipient principal ;
2. A 25 C, saupoudrer dans la phase B et bien mélanger jusqu'à homogénéité ;
3. A 25 C, ajouter la phase C et bien mélanger jusqu'à homogénéité ;
4. Prémélanger la phase D dans un bécher à part et ajouter dans le récipient
principal à 25 C;
5. A 25 C, ajouter la phase E dans le récipient principal et bien mélanger ;
6. Prémélanger la phase F et l'ajouter lentement. Bien mélanger jusqu'à
homogénéité ;
7. Prémélanger la phase G dans un bécher à part et ajouter dans le récipient
principal jusqu'à homogénéité ;
8. Arrêter à 25 C.
[168] La composition se présente ainsi sous forme d'un gel crème avec des
effets
vert scintillant, avec un pH compris entre 5,30 et 5,80 et une viscosité (DO)
de
70000- 100000 cps (Brookfield RVT/Spindle C/5 RPM/1 minute/25 C).
[169] Exemple 9 : Formule d'un Sérum
[170] [Tableau 7]
Ingrédients (Nom de marque) INCI (:)/0
w/w
Phase A
Eau déminéralisée Aqua 87,40
Sodium Hyaluronate Sodium Hyaluronate 0,20
Sodium Polyacrylate (and)
RapiThix¨ A-60 polymer Hydrogenated Polydecene (and) 0,40
Trideceth-6
Glycerin (and)
Glyceryl
Lubrajel¨ DV hydrogel Acrylate/Acrylic Acid Copolymer 6,00
(and) Propylene Glycol
Glycerin (and)
Glyceryl
Acrylate/Acrylic Acid Copolymer
Lubrajel¨ Oil hydrogel 1 00
(and) Propylene Glycol (and) '
PVM/MA Copolymer
VVacker-Belsil* DM 100 Dimethicone -2,00
CA 03164351 2022- 7- 11
WO 2021/156104
PCT/EP2021/051734
37
Cyclopentasiloxane NF Cyclopentasiloxane 0,50
Extrait selon l'exemple 1 Butylen glycol (and) Lavandula
1,00
Angustifolia Flower Extract
Phenoxyethanol (and) Caprylyl
Optiphen TM preservative 1,50
Glycol
[1711 Procédé de préparation :
1. Ajouter de l'eau dans le récipient principal et commencer le mélange avec
une
pale d'hélice hi-10;
2. Ajouter le reste des ingrédients, l'un après l'autre tout en mélangeant
entre
chaque addition.
[172] La composition se présente ainsi sous forme d'un sérum lisse, semi-
opaque,
avec un pH compris entre 5,75 et 6,25 et une viscosité (DO) de 1,100 ¨ 1,400
cps
(Brookfield RVT/spindle 3/20 rpm/25 C/1 minute).
CA 03164351 2022- 7- 11
