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Titre : DERIVES HYDROXYBISPHOSPHONIQUES DE MELOXICAM POUR TRAITEMENT DES
MALADIES
INFLAMMATOIRES OSTEOARTICULAIRES
L'invention se rapporte au domaine des traitements ciblés des maladies
inflammatoires
ostéoarticulaires. Pl us particulièrement, l'invention
concerne de nouveaux dérivés
hydroxybisphosphoniques hydrosolubles de Méloxicam, leur utilisation en tant
que médicament,
notamment pour le traitement des maladies inflammatoires ostéoarticulaires,
une composition
pharmaceutique les contenant et leur procédé de synthèse.
Domaine de l'invention
Le tissu osseux est un tissu conjonctif composé d'une fraction minérale
constituée de phosphate de
calcium sous forme de cristaux d'hydroxyapatite et d'une fraction organique
contenant une matrice
extracellulaire et des cellules spécialisées. Le tissu osseux est en perpétuel
remaniement grâce a un
processus appelé remodelage osseux . Il se caractérise par une phase
d'apposition due à l'activité
des ostéoblastes qui synthétisent une nouvelle matrice organique et induisent
sa minéralisation (Owen
et al., Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 1998, 7, 363) et une phase de
dégradation assurée par les
ostéoclastes qui résorbent la matrice organique et dissolvent le minéral
(Roodman et al., Endocr. Rev.
1996, 17, 308). Ce processus physiologique permet de maintenir l'homéostasie
phosphocalcique et la
masse osseuse (Manologas et al., Endocriv. Rev. 2000, 21, 115) et de s'adapter
aux contraintes
mécaniques. Le dérèglement de cet équilibre lié à l'inflammation peut amener à
l'apparition de
pathologies ostéocondensantes ou ostéolytiques. Chez l'homme comme chez
l'animal ces atteintes
osseuses causent des douleurs chroniques (lombalgie) et fragilisent l'ossature
des patients entrainant
des fractures. La pathologie peut alors évoluer vers l'immobilisation
temporaire ou permanente du
patient. Le traitement de ces atteintes nécessite une administration chronique
de molécules anti-
inflammatoires.
Les produits non stéroïdiens anti-inflammatoires (AINS) sont les traitements
de référence des états
inflammatoires et douloureux, y compris des pathologies ostéoarticulaires
chroniques que sont
l'arthrite et l'arthrose. Pour une meilleure efficacité, l'administration
régulière et fréquente est
souvent nécessaire. Cependant, en administration prolongée ces produits
peuvent provoquer des
effets secondaires rénaux et gastro-intestinaux sérieux, ce qui représente un
véritable problème.
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Pour limiter les effets secondaires, il a été proposé de conjuguer les AINS à
des molécules
bisphosphoniques. Les molécules bisphosphoniques sont connues pour leur
affinité envers
l'hydroxyapatite (HA) de l'os et peuvent être utilisées comme molécules de
ciblage, ce qui permet de
limiter les effets systémiques des AINS. De plus, ces molécules de ciblage
peuvent être clivées au
niveau osseux pour libérer le principe actif ; cette libération in situ à
proximité de l'os peut
s'accompagner d'une activation de la molécule dont l'activité était
jusqu'alors inhibée. Cette activation
en deux temps est également intéressante pour limiter les effets secondaires
systémiques à distance.
Les pathologies inflammatoires ostéoarticulaires provoquent à la fois des
atteintes ostéolytiques en
libérant la surface osseuse et ostéocondensantes en induisant des
excroissances osseuses. Ces deux
types de modifications osseuses sont attrayantes pour des molécules
bisphosphoniques, ce qui permet
d'augmenter la sélectivité de ciblage d'articulation pathologique par rapport
à l'os normal. Une des
variétés des bisphosphonates (BP) sont les hydroxybisphosphonates (HBP) connus
pour leur affinité
supérieure pour l'os.
Des études sporadiques rapportent des essais de conjugaison de molécules
antiinflammatoires avec
des bisphosphonates (BP). L'objectif de cette approche est d'utiliser les BP
comme molécule de ciblage
du principe actif anti-inflammatoire au niveau du tissu osseux, limitant la
dispersion systémique des
AINS. De plus, un clivage local du principe actif permet une action ciblée. A
titre d'exemple, une
première étude rapporte la conjugaison de cortisone à des dérivés
bisphosphoniques (Guervenou et
al., Phosphorus Sulfur and Silicon, 1994, 88, 1-13) mais elle ne confirme pas
la capacité de libération
du principe actif et aucun effet anti-inflammatoire n'est documenté. Une
deuxième étude présente
l'utilisation de dérivés bisphosphoniques d'un AINS, le diclofénac ; les
résultats montrent une
concentration du diclofénac au niveau de site osseux et puis la libération du
principe actif, permettant
une diminution de la dose efficace accompagnée d'une disparition des effets
secondaires gastro-
intestinaux classiques des AINS (H. Hirabayashi et al. ,Journal of Controlled
Release 70, 2001, 183 ¨
191; H. Hirabayashi et al., Pharmaceutical Research, 18(5), 2001, 646-651). Ce
travail confirme l'intérêt
de la stratégie de ciblage localisé par des molécules BP, cependant le choix
du diclofenac reste
contestable à cause de son risque de toxicité gastrointestinale plus élevée
que celui d'autres AINS
comme le Méloxicam (C Hawkey et al., British Journal of Rheumatology, 1998,
37, 937-945). De plus,
dans cette étude, le vecteur BP utilisé présente une affinité moindre pour
l'os que celle des dérivés
HBP.
Enfin, une étude publiée récemment décrit l'utilisation de dérivés HBP d'un
autre AINS, l'ibuprofène.
Cependant, la capacité de libération de l'ibuprofène in situ ainsi que
l'efficacité anti-inflammatoire ne
sont pas mentionnées (Aoun et al., Synthesis 2019, 51, A¨K).
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A part ces quelques études, le domaine de vectorisation des molécules anti-
inflammatoires au moyen
de vecteurs bisphosphoniques n'a pas été réellement exploré et les données
relatives à l'efficacité de
ces molécules dans le traitement de l'ostéoarthrite et de l'arthrose font
défaut.
Le Méloxicam est un AINS couramment utilisé en médecine vétérinaire. Il est
aussi utilisé chez l'homme
(Mobic) pour soulager les poussées aigues d'arthrose, de polyarthrite
rhumatoïde et de
spondylarthrite ankylosante, mais avec la formulation actuelle, le traitement
doit être de courte durée
et la dose la plus faible possible, du fait des effets secondaires systémiques
qu'il provoque.
Parallèlement, la conjugaison de molécules anticancéreuses et antibactériennes
à des dérivés
bisphosphoniques a été plus largement explorée, tant de point de vue de la
synthèse des conjugués
que de l'activité biologique de ces derniers (Farrell et al., Bone Reports 9,
2018, 47-60; Xing et al.,
Bone 138, 2020, 115492).
A ce jour, le besoin de disposer de traitements anti-inflammatoires des
maladies ostéoarticulaires qui
soient efficaces et dénués d'effets secondaires sur le long terme n'est pas
satisfait.
Exposé de l'invention
Les molécules anti-inflammatoires objets de la présente invention consistent
en une vectorisation d'un
produit non stéroïdien antiinflammatoire (AINS), le Méloxicam (MLX) - un
inhibiteur préférentiel de
COX-2 - par un vecteur hydroxybisphosphonique (HBP) ciblant le tissu osseux.
Ces molécules
bifonctionnelles sont proposées pour le traitement de l'inflammation
ostéoarticulaire et sont
constituées de trois parties : (i) un vecteur HBP (HBP Vector) qui cible l'os
et y amène le principe actif,
(ii) le principe actif, le Méloxicam (MLX) et (iii) un adaptateur (Linker)
reliant entre elles les parties HBP
et MLX, capable d'assurer la libération du MLX.
Ainsi, l'invention concerne de nouveaux dérivés hydroxybisphosphoniques de
Méloxicam de formule
(I) telle que définie ci-après, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de
ceux-ci.
L'invention concerne également l'utilisation d'un dérivé
hydroxybisphosphonique de Méloxicam de
formule (I) en tant que médicament et plus particulièrement pour le traitement
des maladies
inflammatoires ostéoarticu la ires.
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L'invention concerne aussi un procédé de synthèse de dérivés
hydroxybisphosphoniques de
Méloxicam de formule (I), ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ceux-ci.
Enfin, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant un
dérivé d'acide
hydroxybisphosphonique de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable
de celui-ci, et au
moins un excipient.
Avantages de l'invention
La présente invention ouvre de nouvelles perspectives dans le traitement des
maladies inflammatoires
ostéoarticulaires grâce à une approche innovante de ciblage efficace des AINS
au niveau de la zone
osseuse inflammée. Cette approche consiste en une vectorisation des AINS, ici
le Méloxicam, grâce à
des dérivés HBP.
Grâce au ciblage du MLX sur la zone ostéarticuliare, la concentration locale
du MLX peut être
augmentée sans induire d'effets secondaires systémiques. L'efficacité anti-
inflammatoire est
améliorée. Cette stratégie a ainsi pour avantage d'élargir la fenêtre
thérapeutique du MLX et d'offrir
un soulagement de la douleur d'origine inflammatoire à la fois plus fort et
plus durable après
administration grâce au relargage progressif de Méloxicam. Le traitement peut
également être
envisagé à long terme, avec des administrations répétées, grâce à une moindre
toxicité systémique.
De plus, le relargage progressif permet de bénéficier de l'effet
antiinflammatoire pendant au moins 2
semaines alors qu'avec le Méloxicam seul une administration quotidienne est
nécessaire pour soulager
la douleur. On améliore ainsi significativement le traitement de
l'inflammation (diminution des effets
secondaires et efficacité accrue) en proposant des administrations espacées
dans le temps et dont les
effets délétères sont significativement atténués.
La stratégie de vectorisation peut être adaptée en fonction de l'approche
thérapeutique envisagée
grâce au choix du linker.
Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, le MLX est relié au
vecteur HBP par un linker
clivable. La molécule HBP-MLX se trouve alors sous la forme d'une prodrogue
qui sera convertie en
molécule active sur le site pathologique par clivage et libération du MLX.
Dans un autre mode de réalisation, les molécules HBP-MLX ne sont pas
clivables. Ceci entraine une
moindre efficacité du MLX mais ouvre une possibilité d'administration par voie
orale. En effet, dans ce
cas, les molécules doivent être stables dans le milieu extrêmement acide de
l'estomac.
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Le vecteur hydroxybisphosphonique (HBP Vector) associé au Méloxicam dans la
présente invention est
décrit dans le brevet (W02016079327) où il était utilisé pour vectoriser la
molécule anticancéreuse
Doxorubicine en formant, avec son groupement cétone, une liaison imine. Ici,
le Méloxicam (MLX) est
5 lié au vecteur HBP par un linker ; ce linker forme un pont entre, d'un
côté le MLX par l'intermédiaire
d'une liaison pouvant être clivable et, de l'autre côté le vecteur par
l'intermédiaire d'une liaison imine
stable. Cette stratégie facilite la synthèse, permettant d'additionner le
vecteur (HBP Vector) pendant
la dernière étape. Les dérivés HBP libres sont très polaires, hydrophiles,
chélatants et majoritairement
insolubles dans les solvants organiques classiques, l'eau étant le meilleur
solvant. Pour cette raison, la
meilleure stratégie est d'introduire ce groupement à la fin de la synthèse, ce
que permet la stratégie
imine choisie dans la présente invention. Les brevets W02012130911 et
W02016079327 exemplifient
une approche équivalente utilisant d'autres vecteurs ; cette approche permet
de vectoriser des
molécules polyfonctionnelles complexes, ce qui serait plus compliqué, voire
impossible, par des voies
de synthèses linéaires, comme décrit dans la demande de brevet FR 2 926 081.
Ainsi, le procédé de
synthèse proposé ici est plus universel, économique, écologique et
transposable que les procédés
linéaires.
Enfin, la partie HBP confère aux molécules finales une bonne solubilité dans
l'eau tandis que MLX y est
très peu soluble. La vectorisation participe donc à améliorer la
biodisponibilité du principe actif.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION
Un premier objet de l'invention concerne un dérivé hydroxybisphosphonique de
Méloxicam de
formule générale (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci,
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0
ci) CL
R2 R1 ¨X
0\j)H
0 0" N-0 -01-1
S N ( OH
H P-OH
_1\1 (1101
-S 00H
o
00
(I)
dans laquelle l'un et seulement un des radicaux R1 et R2 représente un
groupement H (hydrogène) ou
est absent et
- lorsque R2 est absent alors X est choisi parmi les groupements
R1-A, R1-B et R1-C suivants :
0
=
(R1-A)
_
0
= fs
0 (R1-B)
0
*
OH
* (R1-C)
- lorsque R1 = H alors X est choisi parmi les groupements R2-D, R2-E, R2-F,
R2-G et R2-H
suivants :
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- (R2-D)
" (R2-E)
= 1 / \O .
' (R2-F)
...."..70y,...,,..71
0 (R2-G)
=
(R2-H)
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, les dérivés d'acide
hydroxybisphosphonique
décrits précédemment peuvent se présenter sous leur forme tautomérique et sont
représentés par la
formule générale (II)
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8
C.)
G.) 03 CL t
CO e)
>
R2 -X OH
0 OH %,\ 0 ^ un
õ,õ
N 1110 \-EOH
P¨OH
00H
0"0
(Il)
dans laquelle R2 est choisi parmi les groupements R2-D, R2-E, R2-F, R2-G et R2-
H tels que décrits
précédemment.
Les molécules correspondantes sont dans l'ordre de présentation des composés :
A (18A166), B
(19A143), C (19A115), D (18A135), E (18A184), F (18A182), G (19A4) et H
(19A22). Ces molécules sont
représentées ci-après.
Les sels pharmaceutiquement acceptables de ces composés sont obtenus par
association avec des
bases organiques ou minérales. Dans un mode de réalisation préférée de
l'invention, il s'agit de sels
sodiques ou de sels méglumiques
Un deuxième objet de l'invention concerne l'utilisation d'un dérivé
hydroxybisphosphonique de
Méloxicam tel que décrit précédemment en tant que médicament.
Ce médicament peut être utilisé en médecine vétérinaire et humaine. Du fait de
son action ciblée au
niveau des zones ostéoarticulaires, la fréquence d'administration du produit
peut être réduite à seule
injection avec un effet prolongé grâce au relargage progressif de Méloxicam
(pendant une durée
minimale de 2 semaines). Il peut être administré sur le long terme ou de
manière répétée en limitant
les effets secondaires systémiques.
Le vecteur HBP ayant un tropisme pour l'os et le MLX présentant des propriétés
anti-inflammatoires,
les dérivés hydroxybisphosphoniques de Méloxicam selon l'invention peuvent
être avantageusement
utilisés dans le traitement des maladies inflammatoires ostéoarticulaires. Il
est particulièrement
adapté au traitement de la douleur liée aux maladies inflammatoires
ostéoarticulaires chroniques
telles que l'arthrose et l'arthrite. Dans un mode de réalisation préféré de
l'invention, les dérivés
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hydroxybisphosphoniques de Méloxicam sont utilisés dans le domaine
vétérinaire, en particulier chez
le chien et le chat. Ce traitement est néanmoins adapté aux animaux souffrant
de maladies
inflammatoires ostéoarticu la ires.
Dans un mode de réalisation préféré, le linker X permet un clivage du MLX au
niveau ostéoarticulaire.
La molécule de formule (I) se présente alors sous la forme d'une prodrogue
activable par le clivage du
MLX. Dans cette configuration, X est choisi parmi les groupements R1-A, R1-B
et R1-C, R2-E, et R2-G. Au
contraire, les molécules intégrant les groupements R2-D et R2-F sont non
clivables, celle intégrant le
groupement R2-H est théoriquement cliva ble in vivo.
Dans un mode de réalisation tout à fait préféré, la molécule HBP-MLX est le
composé C (19A115) ou le
composé E (18A184).
Un troisième objet de l'invention concerne un procédé de synthèse d'un dérivé
hydroxybisphosphonique de Méloxicam de formule (I) tel que défini précédemment
comprenant les
étapes de:
- Couplage du Méloxicam à un linker X choisi parmi les groupements R1-A, R1-
B et R1-C, R2-D, R2-
E, R2-F, R2-G et R2-H tels que définis précédemment ;
- Couplage du dérivé HBP à l'extrémité opposée du linker par rapport au
Méloxicam.
Dans ce procédé, le couplage du Méloxicam au linker se fait via une liaison
potentiellement et
préférentiellement clivable, alors que le couplage du linker au HBP se fait
via une liaison résistante au
clivage de type d'imine -C=N- stable.
Les composés obtenus peuvent être purifiés par chromatographie ou par
précipitation. Le procédé de
purification sera choisi par l'homme du métier en fonction de l'efficacité de
chaque approche pour
chaque molécule et selon sa forme. En particulier, on notera par exemple que
le composé E (18A184)
peut être obtenu par une purification chromatographique sous forme de sel
sodique et par
précipitation sous forme des sels sodique et méglumique. Le nombre
d'équivalents de base peut être
variable de 0, ce qui correspond aux acides hydroxybisphosphoniques libres, à
4 et même à 5 pour la
molécule C (19A115). Dans un mode de réalisation préféré, il s'agit de 2 à 3
équivalents de base.
La stratégie de synthèse des molécules selon l'invention consiste d'abord en
synthèse de Méloxicam-
Linker à partir de Méloxicam, puis en son couplage avec le vecteur afin
d'obtenir le produit final suivant
= 35
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Méloxicam + Linker ¨> Méloxicam-Linker ¨[+HBP Vector]¨> Composés A, B, C, D,
E, F, G ou H.
Les composés A, B, C, D, E, F, G et H sont tels que représentés ci-dessous :
5
oH s% OH /O
Na0 ¨P1.--PeONa
HO 0
0
N
0=S =0
0 6
s N
H
--s
d"b (A)
Na0
H 0 -\p"
,P-ONa
'&1
0=s=0
0 O
S N
H
s
%)
(B)
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11
0 OH
o 0
HO ¨ P JO Na
a
Nad 0
o...-
.....11
fel
0
0 =11-0Na
____C_N 0
O
/ ,I,,
H
N
..-= `
On?) (C)
Et des tautomères pour les composés suivants :
NaO 0, 1,
Na0, y
HO.-P OH
-H
HOP Oje.... _ONa -
ON a
Is'µ P-7 (3µ011
N' ,,, OH N
'
1110 11101
1-1'
_el 0 0 OH -
... 3... 4N 0 OH--- 1
-F H* S---"*.eN ...--- glji
SN ,' Ilei
H N
N
...- -s crb crb (D)
HO HO
HO,H0 1,_.0Na HOHo i ONa
,p =.: 0
Na0-P-= N20 -P --\S
0 0
N / N
/
7. dle
+H+
0 0
0 0
) )
7,-r 0 OH 0 OH
...--...N 1111
S N ..,"*. S
411/
H N
N5 , ..--. .-5
....-=
d, .b d, t
(E)
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lede ,N _0 H Os -a -N-0 ' "
FIC),?N0a ,.0 P --U
I
0
_.._..1'.. \--E0H
( OH r .- P
p,i2,-, ...'ON a -H' 0 OH - P
H0
OH .-"' s=ONa
_CLO 0 ,...
+H. S---1/4-A1 ./ .
H ,N ,s
..,N
o"b (F)
HO HO
H 0 HO ii õ,0Nla 1
H01-1 ,0 ONa
Na0- 0
,P-- Na0 -,P--NS
0' 0'
0 0
1
_,
0 _
+H*
o-CD
0
)
0 OH
H
N
.-- -s ---N -s
d, ssd d, ss0
(G)
110 HO
õDNa 1 õON a
HOµHy,o
1 10* HO 1-.11 05p ,
N a0-P NaO-F
Cr 0'
0 0
I=I i\I
0 -H.
41
-FH+
0 0
) )
4 CN cD 0 OH
S N --" = S ....N ,''' 1111
H
,NI,s
,S
oe % 00
(H)
Un quatrième objet de l'invention concerne une composition pharmaceutique
comprenant un dérivé
hydroxybisphosphonique de Méloxicam tel que défini précédemment ou un sel
pharmaceutiquement
acceptable de celui-ci et au moins un excipient. Les sels peuvent être choisis
parmi ceux obtenus soit
avec des bases minérales comme les sels sodiques, et ceux obtenus avec des
bases organiques comme
les sels méglumiques.
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Le dérivé hydroxybisphosphonique d'une telle composition est
préférentiellement choisi parmi les
composés A, B, C, D, E, F, G et H.
Dans un mode de réalisation tout à fait préféré, la composition comprend le
composé C (19A115) ou
le composé E (18A184) sous forme d'acide libre ou de sels, tels que les sels
sodiques ou méglumiques.
Cette composition peut être formulée de manière à permettre son
administration, notamment, par
voie sous-cutanée, intraveineuse, per os, intramusculaire ou transdermique,
c'est-à-dire de préférence
sous forme d'une solution injectable ou sous forme d'un patch, et destinée à
l'homme et à l'animal.
La posologie sera adaptée en fonction de l'individu (poids, âge...) et de la
maladie.
Les composés selon l'invention peuvent être utilisés à des doses comprises
entre 0,01 mg et 100 mg
par jour, données en une seule dose une fois par jour ou administrés en
plusieurs doses, à raison par
exemple de deux doses équivalentes. La dose administrée par jour est
avantageusement comprise
entre 5 mg et 100 mg, encore plus avantageusement entre 10 mg et 200 mg. Il
peut être nécessaire
d'utiliser des doses sortant de ces gammes, l'homme du métier saura évaluer ce
besoin.
La présente invention sera mieux comprise à la lecture des exemples qui
suivent, fournis à titre
d'illustration et ne devant en aucun cas être considérés comme limitant la
portée de la présente
invention.
DESCRIPTION DES FIGURES
Figure 1 : Synthèse du composé A : préparation du composé 2 intermédiaire à
partir du composé 1 et
du Méloxicam
Figure 2 : Synthèse du composé A: préparation du composé A à partir du composé
2 et du vecteur
HBP
Figure 3: Synthèse du composé B: préparation du composé 5 intermédiaire
comprenant le
Méloxicam
Figure 4 : Synthèse du composé B: préparation du composé B à partir du composé
5 et du vecteur HBP
Figure 5: Synthèse du composé C : préparation du composé 7 intermédiaire à
partir du composé 6
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Figure 6: Synthèse du composé C: préparation du composé 9 intermédiaire à
partir du composé 7 et
du Méloxicam
Figure 7 : Synthèse du composé C: préparation du composé C à partir du composé
9 et du vecteur HBP
Figure 8: Synthèse du composé D : préparation du composé 11 intermédiaire
Figure 9: Synthèse du composé D : préparation du composé 12 intermédiaire à
partir du composé 11
Figure 10: Synthèse du composé D : préparation du composé 13 intermédiaire à
partir du composé
12 et du Méloxicam
Figure 11 : Synthèse du composé D : préparation du composé D à partir du
composé 13 et du vecteur
HBP
Figure 12 : Synthèse du composé E: préparation du composé 16 intermédiaire
Figure 13: Synthèse du composé E: préparation du composé 17 intermédiaire à
partir du composé
16 et du Méloxicam
Figure 14: Synthèse du composé E : préparation du composé E à partir du
composé 17 et du vecteur
HBP
Figure 15 : Synthèse du composé F: préparation du composé 20 intermédiaire à
partir des composés
18 et 19
Figure 16: Synthèse du composé F: préparation du composé 21 intermédiaire à
partir du composé
20 et du Méloxicam
Figure 17: Synthèse du composé F: préparation du composé F à partir du composé
21 et du vecteur
HBP
Figure 18: Synthèse du composé G : préparation du composé 23 intermédiaire à
partir des composés
15 et 22
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Figure 19: Synthèse du composé G : préparation du composé 24 intermédiaire à
partir du composé
23 et du Méloxicam
5 Figure 20: Synthèse du composé G : préparation du composé G à partir du
composé 24 et du vecteur
HBP
Figure 21: Synthèse du composé H : préparation du composé 25 intermédiaire à
partir du composé
11
Figure 22: Synthèse du composé H : préparation du composé 26 intermédiaire à
partir du composé
25 et du Méloxicam
Figure 23 : Synthèse du composé H : préparation du composé H à partir du
composé 26 et du vecteur
HBP
Figure 24 : Evaluation in vitro de la capacité de fixation des molécules HBP-
Méloxicam à
l'hydroxyapatite
Figure 25: Evaluation de la capacité de relargage du Méloxicam par les
molécules HBP-Méloxicam
clivables
Figure 26: Analyse par ELISA de l'activité anti-00X2 des molécules HBP-
Méloxicam sur chondrocytes
Figure 27: Évaluation de toxicité des molécules HBP-Méloxicam sur l'estomac,
le duodénum et les
reins après administration chez le rat
Figure 28: Effet thérapeutique des composés HBP-Méloxicam sur le gonflement de
genou provoqué
par une arthrite.
Figure 29 : Effet thérapeutique des composés HBP-Méloxicam sur la boiterie
provoquée par une
arthrite.
EXEMPLES
Le vecteur HBP est synthétisé selon le procédé décrit dans le document
W02016/079327.
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EXEMPLE 1 : Synthèse du composé A (18A166)
La synthèse du composé A est représentée aux Figures 1 et 2.
Le composé 1 (1.088 g, 4.98 mmol, 1.17 eq) a été ajouté à une solution de
Méloxicam (1.5 g, 4.27
mmol, 1 eq) et de triethanolamine (TEA) (0.75 ml, 5.4 mmol, 1.26 eq) dans du
dichlorométhane DCM
(6 m1). Le mélange réactionnel a été agité pendant 2 h à température ambiante.
Le solide formé a été
centrifugé, lavé avec du DCM (2x7 ml) et sécher sous vide à température
ambiante. Le composé 2 a
été obtenu (un solide claire jaune, 1.867 g, 3.5 mmol, rdt 82%, UPLC-MS : 100%
et caractérisé par des
spectres 1H NMR, MS et UV (Figure 1).
Une solution de composé 2 (1.5 g, 2.81 mmol, 1 eq) et vecteur HBP (70%mass, 1
g, 2.95 mmol, 1.05
eq) dans 5%TFA/DMS0 (15 ml) a été agitée pendant 16 h à TA. Puis une solution
aqueuse de NaHCO3
(0.5M, 46 ml) a été ajoutée suivie de 350 ml d'eau. La solution colloïde
obtenue a été introduite dans
une colonne C18 (4 x 40 g) et éluée dans un gradient 3% Et0H jusqu'à 50% Et0H.
Les fraction (H PLC
>90%) ont été regroupées. Et0H a été évaporé sous vide et la solution obtenue
a été lyophilisée.
Composé A (18A166) a été obtenu (un solide claire jaune, 1.11 g, 1.39 mmol,
rdt 50%), HPLC : 95% et
caractérisé par des spectres 1H NMR, 31P NMR, MS et UV (Figure 2).
EXEMPLE 2 : Synthèse du composé B (19A143)
Le principe est le même que pour le composé A.
La synthèse du composé B est représentée aux Figures 3 et 4.
Le méloxicam (1 eq., 686 mg, 1.95 mmol) a été solubilisé dans du DCM (3 ml) et
Et3N (1.3 eq., 350 !IL,
2.54 mmol) sous argon avec la formation de solution jaune. Puis du 3-
acetylbenzenesulfonyl chloride
(4) (1.17 eq., 500 mg, 2.29 mmol) a été ajouté et le mélange réactionnel a été
agité pendant 15 min à
température ambiante. Le mélange réactionnel a été évaporé sous vide avec un
gel de silice, introduit
dans une colonne (gel de silice) et élué dans un gradient 9/1 à 5/5
cHex/Et0Ac. Les fractions ont été
évaporées sous vide, CCM : 4/6 cHex/Et0Ac. Un composé 5 a été obtenu (un
solide jaune, 530 mg,
79% UPLC-MS, rdt 40%). UPLC-MS : 60-80% et caractérisé par des spectres 1H
NMR, MS et UV (Figure
3).
Le composé 5 (1 eq., 530 mg, 0.785 mmol) a été ajouté à la solution de vecteur
HBP (1.25 eq., 314 mg,
0.994 mmol) dans 1%TFA/DMS0 (4 m1). Le mélange réactionnel a été agité pendant
4 h à température
ambiante sous argon et suivi par une chromatographie HPLC. La solution de 0,5M
NaHCO3 a été
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ajoutée sur le mélange réactionnel jusqu'à atteindre un pH neutre
(précipitation) suivi d'ajout de
Me0H. Le solide a été filtré, lavé avec du Me0H et séché sous vide à
température ambiante. Le solide
jaune obtenu a été solubilisé dans l'eau MilliQ et purifié sur colonne C18 en
gradient de 3% Et0H à
30% Et0H. Les fractions HPLC>90% ont été regroupées et lyophilisées. Le
composé C (19A143) a été
obtenu (un solide jaune, 226 mg, rdt 36%), HPLC : 95% et caractérisé par des
spectres 1H NMR, 31P
NMR, MS et UV (Figure 4).
EXEMPLE 3 : Synthèse du composé C (19A115)
Le principe est le même que pour le composé A.
La synthèse du composé C est représentée aux Figures 5, 6 et 7.
La solution de TEA (5.7 ml, 41 mmol, 1 eq) dans du DCM (10 ml) a été ajoutée
goutte-à-goutte à la
solution de composé 6 (5 g, 41 mmol, 1 eq) et de P0CI3 (38 ml, 408 mmol, 9.96
eq) dans du DCM (100
ml) à O C pendant 8 min, une formation de précipité a lieu. Le mélange
réactionnel a été agité pendant
1 h à 0 C, puis concentré sous vide. L'éther (50 ml) a été ajouté, le solide
a été filtré et la solution
obtenue a été concentrée sous vide pdt 5 h. Composé 7 brut a été obtenu (une
huile orange visqueuse,
8.5 g, 35.6 mmol, rdt 87%) et caractérisé par des spectres 1H NMR, 31P NMR, MS
et UV (Figure 5).
Le composé 7 (1.5 g, 6.28 mmol, 2.21 eq) a été ajoutée à la solution de
Méloxicam (1 g, 2.85 mmol, 1
eq) et TEA (1 ml, 7.19 mmol, 2.53 eq) dans DCM (8 ml) à température ambiante.
Le mélange
réactionnel a été agité pendant 45 min à température ambiante et puis ajouté
au mélange
pentane/0.5M HCI, secoué, filtré, le solide a été lavé avec 0.5M HCI et séché
sous vide. Un composé 9
a été obtenu (un solide jaune 1.84 g, pureté 81%, rdt 92% pour le composite
pur) et caractérisé par
des spectres 1H NMR, 31P NMR, MS et UV (Figure 6).
Le composé 9 (2.84 g, 4.97 mmol, 1 eq) a été ajouté à la solution de HBP
Vector (1.8 g, 5.47 mmol, 1.1
eq) dans 5%TFA/DMS0 (8 ml) et la solution visqueuse obtenue a été agitée et
vortexée pendant 20
min à température ambiante Puis le mélange réactionnel a été solubilisé dans
un tampon phosphate
avec la formation de solution colloïde, qui a été introduite dans une colonne
C18 et éluée en gradient
de 3% Et0H à 20% Et0H. Les fractions HPLC>90%, ont été regroupées et
lyophilisées. Le composé C
(19A115) a été obtenu (un solide claire jaune, 1.205 g, rendement 34%), H PLC
: 98% et caractérisé par
des spectres 1H NMR, 31P NMR, MS et UV (Figure 7).
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EXEMPLE 4: Synthèse du composé D (18A135)
Le principe est le même que pour le composé A.
La synthèse du composé D est représentée aux Figures 8, 9, 10 et 11.
Du 1,4-Phthalaldehyde 10 (4 eq., 10 g, 74.6 mmol) a été solubilisé dans du DCM
(25 ml) et Me0H (25
ml) à 40 C avec la formation de solution jaune. La solution obtenue a été
refroidie dans un bain avec
de l'eau froide, et du NaBH4 (1 eq., 0.705g, 18.6 mmol) a été ajoutée pendant
5 min. La solution jaune
opaque a été obtenue. La réaction a été immédiate. Un contrôle CCM, DCM: 100%.
Silica gel (20 g) a
été ajouté, le solvant a été complètement évaporé sous vide, et le mélange a
été élué sur colonne avec
silica gel en gradient de 100% DCM à10% Me0H/DCM. Les fractions pures ont été
concentrées sous
vide. Le produit 11 est obtenue 5.3 g, une huile jaune qui se cristallise (rdt
52%, UPLC-MS: 100%) et
caractérisé par des spectres 11-1 NMR, MS et UV (Figure 8).
Du 4-(Hydroxymethyl)benzaldehyde 11 (1 eq., 1.0 g, 7.34 mmol) a été solubilisé
dans du toluène (7
m1). Puis du HBr 48 wt.% dans H20 (3.3 eq., 4.0 g, 2.7 ml, 24.24 mmol) a été
ajouté et le mélange
réactionnel a été mis au reflux pendant 3 h. Réaction a été suivie par UPLC-
MS. La réaction a été
complète. Du chloroforme (60 ml) a été ajouté et la solution obtenue a été
extraite avec une solution
aqueuse de NaHCO3 jusqu'à neutralisation complète d'acide. La phase organique
a été séchée avec
du Na2SO4 anhydre et concentrée à la pression réduite. Les cristaux beiges de
composé 12 ont été
obtenus, 1.69 g (rdt 100%, UPLC-MS: 97%) et caractérisés par des spectres 1H
NMR, MS et UV. (Figure
9)
Le Méloxicam (1.1 eq., 0.50 g, 1.42 mmol) a été solubilisé dans DMF (20 ml)
sous argon. Puis du NaH
(2.3 eq., 0.13 g, 3.25 mmol) a été ajouté et le mélange réactionnel a été
agité pendant 5-10 min à
température ambiante. Le mélange réactionnel a été refroidi avec un bain de
glace et 4-
bromomethylbenzaldehyde 12 (1 eq., 0.255 g, 1.2 mmol) a été ajouté. La
réaction a été inhibée
(quenchée) durant 5-10 min par du NH4C1(aq) avec la formation d'un précipité.
Après l'extraction de
mélange réactionnel avec Et0Ac la phase organique a été a lavée avec
NaCI(sat), séchée avec du
Na2SO4 anhydre, concentrée à la pression réduite et utilisée dans l'étape
suivante. Le produit 13 a été
caractérisé par des spectres 1H NMR, MS et UV (Figure 10).
Le vecteur HBP (1 eq., 0.35 g, 1.11 mmol) a été solubilisé dans du DMSO (20
ml) avec quelques gouttes
de TFA. A ce mélange incolore le produit brut 13 de l'étape précédente (1 eq,
1.20 g, 1.11 mmol) a été
ajouté. La solution jaune obtenue a été agitée à température ambiante pendant
1 h. La solution
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aqueuse de 0.5M NaHCO3 (30 ml) a été ajoutée suivi de Me0H, le solide a été
filtré, lavé avec du Me0H
et séché sous vide. Le solide jaune obtenu (500 mg) a été solubilisé dans
l'eau MilliQ et purifié sur une
colonne C18: gradient à 20 mi/min (3%-> 25 % Et0H), les fractions H PLC >90%
(H PLC, UV à 360 nm)
ont été concentrées sous vide et lyophilisées. Le composé D (18A135) a été
obtenu, 150 mg (un solide
jaune, rendement 20%) et caractérisé par des spectres 1H NMR, 31P NMR, MS et
UV (Figure 11).
EXEMPLE 5 : Synthèse du composé E (18A184)
Le principe est le même que pour le composé A.
La synthèse du composé E est représentée aux Figures 12, 13 et 14.
Le composé 15 (1.31 ml, 12.73 mmol, 1.21. eq) a été ajouté à la solution de
composé 14 (1.58 g, 10.52
mmol, 1 eq), tetrabutylammonium hydrosulfate (0.353 g, 1.04 mmol, 0.1 eq) et
NaHCO3 (3.53 g, 42
mmol, 4 eq) dans un mélange d'eau (22 ml) et de DCM (22 ml) sous agitation
intense à température
ambiante. Après 3 h et extraction avec DCM/0.5M NaHCO3 suivie d'eau, la phase
organique a été
séchée avec du Na2SO4 anhydre et concentrée. Un composé 16 a été obtenu (une
huile claire qui
solidifie à +4 C avec la formation d'un solide incolore, 2.12 g, 10.67 mmol,
rdt 100%) et a été utilisé
dans l'étape suivante sans purification supplémentaire. Le produit a été
caractérisé par UPLC et des
spectres 1H NMR, MS et UV (Figure 12).
Le composé 16 (2.12 g, 10.67 nnmol, 1.25 eq) a été ajouté à la solution de
Méloxicann (3g, 8.54 mmol,
1 eq) et de TEA (2.4 ml, 17.27 mmol, 2 eq) dans du DCM (12 m1). Le mélange
réactionnel a été agité
pendant 3 jours à température ambiante. Après l'extraction avec une solution
DCM/Me0H/H20, la
phase organique a été séchée avec du Na2SO4 anhydre et concentrée sous vide.
Un composé 17 a été
obtenu (un solide jaune, 4.44 g, 8.65 mmol, rdt 100%, UPLC-MS : 100%) et
caractérisé par des spectres
1H NMR, MS et UV. (Figure 13)
La solution de composé 17 (1.66 g, 3.23 mmol, 1 eq), le vecteur H BP (78%,
1.11 g, 3.66 mmol, 1.13 eq)
et TFA (0.1 ml, 1.35 mmol, 0.42 eq) dans DMSO (15 ml) ont été agitées pendant
20 min à température
ambiante. Puis la solution aqueuse de 0.5M NaHCO3 a été ajoutée suivie d'eau.
La solution colloïde
obtenue a été introduite dans une colonne C18 et éluée dans un gradient de 3%
Et0H à 50% Et0H. Les
fractions H PLC>90% ont été regroupées, le Et0H a été évaporé sous vide et la
solution obtenue a été
lyophilisée. Le composé E (18A184) a été obtenu (un solide jaune, 0.78 g, 1
mmol, rdt 31%), HPLC :
98% et caractérisé par des spectres 1H NMR, 31P NMR, MS et UV. (Figure 14)
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EXEMPLE 6: Synthèse du composé F (18A182)
Le principe est le même que pour le composé A.
La synthèse du composé F est représentée aux Figures 15, 16 et 17.
5
La solution de 3-hydroxybenzaldehyde (composé 18) (1 eq., 2.0 g, 16.38 mmol),
1,3-dibromopropane
(composé 19) (4 eq., 6.6 ml, 65.51 mmol) et K2CO3 (1.3 eq., 2.9 g, 21.29 mmol)
dans l'ethylene glycol
(15 ml) a été agitée pendant 5 h à 80 C. La réaction a été suivie par UPLC-
MS. Le mélange réactionnel
a été dilué avec l'eau et un extrait avec de l'éther. La phase organique a été
séchée avec Na2SO4 et
10 concentrée sous vide à 40 C. L'huile incolore obtenue (UPLC-MS 69%)
a été purifiée sur une colonne
avec silica gel, élution en gradient 100% cHex ¨> 6% Et0Ac/cHex, CCM:
cHex/Et0Ac = 9/1. Le solvant
a été évaporé sous pression réduite. Le composé 20 a été obtenu, 1 g (rdt 26%)
et caractérisé par des
spectres 1H NMR, MS et UV (Figure 15).
15 Le Méloxicam (1 eq., 0.5 g, 1.42 mmol) a été solubilisé dans du DMF
(25 ml) sous argon. Puis NaH (4.4
eq., 0.15 g, 6.25mm01) et Nal (1 eq., 0.21 g, 1.42 mmol) ont été rajoutés. Le
mélange réactionnel a été
agité à température ambiante pendant 5-10 min. Le composé 20 (2 eq., 0.7 g,
2.88 mmol) a été ajouté
et après 1h, une solution de NH4C1(sat) a été ajoutée. Après l'extraction avec
Et0Ac la phase organique
a été a lavée avec du NaCI(sat), séchée avec Na2SO4 et concentrée sous vide à
40 'C. Le composé 21
20 a été obtenu, 1.65 g, rdt 65% et caractérisé par des spectres MS et
UV (Figure 16).
Le vecteur BP (1 eq., 0.45 g, 1.42 mmol) a été solubilisé dans du DMSO (10 ml)
avec quelques gouttes
de TFA. A la solution incolore obtenue, le composé 21 (1 eq., 1.65 g, 1.42
mmol) a été ajouté et la
solution jaune a été agitée à température ambiante pendant 1h. Du NaHCO3 0.5M
(20 ml) a été ajouté
suivi de Me0H, le solide a été filtré, lavé avec Me0H et séché sous vide. Le
solide jaune obtenu (1 g) a
été solubilisé dans l'eau MilliQ et purifié sur une colonne C18 en gradient de
3% Et0H à 25% Et0H, les
fractions HPLC>90% ont été concentrées sous vide et lyophilisées. Le composé F
(18A182) a été
obtenu, 350 mg (un solide jaune, rendement 30%), HPLC :95% et caractérisé par
des spectres 1H NMR,
31P NMR, MS et UV (Figure 17).
EXEMPLE 7 : Synthèse du composé G (19A4)
Le principe est le même que pour le composé G.
La synthèse du composé G est représentée aux Figures 18, 19 et 20.
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Le composé 15 (1.81 ml, 17.58 mmol, 1 eq) a été ajoutée à la solution de
composé 22 (2.92 ml, 28.42
mmol, 1.62 eq), tetrabutylammonium hydrosulfate (0.78 g, 2.3 mmol, 0.13 eq) et
NaHCO3 (7.84 g, 93
mmol, 5.3 eq) dans un mélange d'eau (50 ml) avec DCM (50 ml) sous agitation
intense à température
ambiante. Après 3 h et extraction avec du DCM/0.5M NaHCO3, la phase organique
a été séchée avec
Na2SO4 anhydre et concentrée sous vide. Un composé 23 a été obtenu, une huile
incolore, 2.68 g,
16.28 mmol, rdt 93%, a été utilisé dans l'étape suivante sans purification
supplémentaire et caractérisé
par un spectres 1H NMR (Figure 18).
Le composé 23 (2.3 g, 14 mmol, 1.4 eq) a été ajouté à la solution de Méloxicam
(3.5 g, 10 mmol, 1 eq)
et TEA (2.8 ml, 20.14 mmol, 2 eq) dans DCM (14 m1). Le mélange réactionnel a
été agité pendant 48 h
à température ambiante, introduit dans une colonne avec un gel de silice et
élué dans un gradient
cHex----> EA, CCM: DCM/EA=3/1. Le solvant a été évaporé sous pression réduite.
Un composé 24 a été
obtenu (un solide jaune, 1.782 g, 3.716 mmol, rdt 37%), UPLC-MS : 85% et
caractérisé par des spectres
1H NMR, MS et UV (Figure 19).
Le composé 24 (1.66 g, 3.46 mmol, 1 eq) a été ajouté à la solution de vecteur
HBP (1.11 g, 3.65 mmol,
1.06 eq) et TFA (0.1 ml, 1.35 mmol, 0.39 eq) dans du DMSO (15 ml) et a été
agité pendant 24 h à
température ambiante. Puis la solution aqueuse de 0.5M NaHCO3 solution a été
ajoutée suivie de
l'eau. La solution colloïde obtenue a été introduite dans une colonne C18 et
éluée en gradient de 3%
Et0H à 50% Et0H. Les fractions HPLC>90% ont été regroupées, l'Et0H a été
évaporé sous vide et la
solution obtenue (-100 ml) a été lyophilisée. Le composé G (19A4) a été obtenu
(un solide jaune, 0.82
g, 1.1 mmol, rendement 32%), HPLC : 95% et caractérisé par des spectres 1H
NMR, 31P NMR, MS et
UV (Figure 20).
EXEMPLE 8: Synthèse du composé H (19A22)
Le principe est le même que pour le composé A.
La synthèse du composé H est représentée aux Figures 21, 22 et 23
Le mélange de composé 11 (4.08 ml, 30 mmol, 1 eq), de paraformaldéhyde (0.9 g,
30 mmol, 1 eq) et
de TMSCI (1.5 ml, 117 mmol, 3.92 eq) a été agité à température ambiante
pendant 50 min et
concentrée sous vide à température ambiante pendant 50 min. Le produit 25 brut
obtenu (une huile
brune, 5.53 g, -100%) a été utilisée tout de suite dans l'étape suivante
(Figure 21).
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Le composé 25 (5.53 g, 30 mmol, 1.63 eq) a été rajouté à la solution de
Méloxicam (6.45 g, 18.36 mmol,
1 eq) et TEA (6 ml, 43.17 mmol, 2.35 eq) dans du DCM (30 ml). Le mélange
réactionnel a été agité
pendant 150 min à température ambiante, puis introduit dans une colonne avec
de gel de silice et élué
avec un gradient cHex ---> cHex/Et0Ac = 2/3, CCM: DCM/Et0Ac=3/1. Un composé 26
a été obtenu :
solide jaune, 1.73 g, 3.46 mmol, yield 19%, UPLC-MS : 81% et caractérisé par
des spectres 1H NMR, MS
et UV (Figure 22).
Un composé 26 (1.727 g, 3.46 mmol, 1 eq) a été rajouté à la solution de
vecteur HBP (1.27 g, 4.18
mmol, 1.21 eq) et de TFA (0.1 ml, 1.35 mmol, 0.39 eq) dans du DMSO (15 ml) et
le mélange obtenu a
été agité pendant 20 min à température ambiante, puis versé dans la solution
de NaHCO3, soniqué
pendant 5 min. La solution trouble obtenue colloïde a été introduite dans une
colonne C18 et éluée en
gradient: 3% Et0H à 50% Et0H. l'Et0H des HPLC>90% a été évaporé sous vide et
la solution aqueuse a
été lyophilisée. Le composé H (19A22) a été obtenu, 1.314g, solide jaune,
rendement 50%, HPLC: 94-
95% et caractérisé par des spectres 1H NMR, 31P NMR, MS et UV (Figure 23).
EXEMPLE 9: Evaluation de la capacité de fixation des molécules HBP-Méloxicam à
l'hydroxyapatite
Les solutions des molécules A, B, C, D, E, F, G et H ont été mises en présence
d'hydroxyapatite (1 ml à
1 mM avec 10 mg de HA) et le taux de fixation a été estimé après 30 minutes
d'agitation à température
ambiante par HPLC; les tests ont été effectués en triplicat.
Les molécules obtenues se fixent rapidement sur l'hydroxyapatite (HA), comme
illustré à la Figure 24.
EXEMPLE 10 : Evaluation de la capacité de relargage du Méloxicam par les
molécules HBP-Méloxicam
clivables
Les molécules obtenues ont des capacités différentes de libération de
Méloxicam en solution. Les
composés en solution à 37 C dans du sérum de rat ou dans 3 tampons à pH 7.4; 5
et 3 ont été analysés
par HPLC. La quantité de MLX relarguée en 48 h est représentée à la Figure 25.
EXEMPLE 11 : Evaluation in vitro de l'activité anti-inflammatoire des
molécules HBP-Méloxicam
Les molécules obtenues ont été testées pour leur capacité à inhiber l'activité
de l'enzyme pro-
inflammatoire COX2 sur des chondrocytes articulaires primaires de rat.
L'activité COX2 a été induite
par stimulation des chondrocytes pendant 24 h avec du LPS à une concentration
de 1 pg/mL. Lors de
la stimulation LPS, les chondrocytes ont été cultivés dans du milieu DMEM sans
sérum avec 25 mM
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d'HEPES et 0,5% de BSA. Les molécules 18A135, 18A166, 18A182, 18A184, 19A4,
19A22, 19A115,
19A143 ou le Méloxicam ont été ajoutés pendant 24 h en même temps que le LPS à
des concentrations
de 0.1 p.M, 0.5 M, 1 M, 5 M ou 10 M.
Les molécules HBP-Méloxicam ont été solubilisées dans de l'eau stérile et le
Méloxicam a été solubilisé
dans du PBS avec 10% de DMSO (0.1% DMSO au final au contact des cellules).
L'activité COX2 a été
mesurée par analyse ELISA. Les résultats sont présentés à la Figure 26.
Les molécules clivables 18A166, 18A184, 19A4, 19A115 et 19A143 montrent une
activité inhibitrice de
COX2 similaire au Méloxicam. Les molécules non clivables montrent une activité
inhibitrice COX2
inférieure aux molécules clivables et au Méloxicam mais présente.
EXEMPLE 12 : Evaluation de la dose maximale tolérable et de toxicité chez le
rat
Ces tests ont été réalisés à travers deux études différentes. Les molécules
18A135,18A166, 18A182,
18A184, 19A22, 19A115 et 19A143 ont été solubilisées dans du glucose 5% puis
administrées par
injection intraveineuse unique (veine caudale, infusion de 5 min, volume de 10
mL/kg) à des rats de
souche Sprague Dawley mâles et femelles âgés au minimum de 16 semaines. Les
molécules HBP-
Méloxicam ont été administrées aux doses 30, 45, 67.5 et 101.25 mol/kg. La
toxicité aiguë des
molécules a été déterminée en suivant l'évolution pondérale pendant 7 jours.
La dose était considérée
comme tolérable si l'animal ne présentait pas de perte de poids continue
pendant 7 jours ou de perte
de poids en dessous de 90% de son poids le jour du traitement, pendant 3
jours.
En contrôle de la toxicité du Méloxicam dans la deuxième étude, un rat mâle et
un rat femelle ont été
traités avec du Méloxicam par voie orale quotidiennement pendant 28 jours à la
dose 1 mg/kg - 2.85
mol/kg, soit une dose cumulée de 79.8 mol/kg.
La valeur de la dose maximale tolérée (MTD) de chaque molécule est indiquée
dans le Tableau 1 ci-
après :
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WO 2022/229576 PCT/FR2022/050830
24
Imbleemmomeolltteeeolomm
18A135 67,5
18A166 67,5
18A182 45
18A184 45
19A4 45
19A115 45
19A143 45
Tableau 1: Valeurs de la dose maximale tolérée pour chacune des molécules HBP-
Méloxicam
Les molécules 18A135 et 18A166 présentent les valeurs de MTD les plus hautes
(67.5 mol/kg) tandis
que les autres molécules présentent une MTD de 45 mol/kg.
Les animaux ayant reçu leur dose MTD (3 mâles et 3 femelles) ont été sacrifiés
4 semaines après
l'administration. Les organes caractéristiques de la toxicité du Méloxicam
(estomac, duodénum, reins)
ont été prélevés, fixés en formol, préparés en histologie et analysés par un
pathologiste vétérinaire
pour évaluer la toxicité globale sur ces organes (échelle de 0 à 12.5 dans la
première étude et 0 à 13.5
dans la seconde étude).
Les analyses histologiques correspondant à chaque étude sont présentées à la
Figure 27. La valeur
médiane est représentée par la barre horizontale.
Les molécules HBP-Méloxicam à leur dose MTD présentent des valeurs de toxicité
identiques
(molécule 18A166) ou inférieures (molécules 18A135, 18A182, 18A184, 19A4,
19A115 et 19A143) au
Méloxicam administré quotidiennement.
EXEMPLE 13 : Evaluation de l'efficacité anti-inflammatoire des molécules HBP-
Méloxicam dans un
modèle de monoarth rite chez le rat.
Une monoarthrite a été induite chez des rats (mâles, souche Sprague Dawley,
âgés de 14 semaines)
par injection intra-articulaire (genou) de 100 g de mBSA après deux
sensibilisations préalables (2 et 3
semaines avant l'induction) par injection sous cutanée d'une émulsion de CFA
contenant 500 g de
rn MA. La répartition a été réalisée à J2, 24 h après induction, en fonction
de l'intensité du gonflement
afin d'obtenir une homogénéité entre les groupes. Après répartition des
animaux, les traitements ont
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WO 2022/229576
PCT/FR2022/050830
été administrés avec les molécules 18A184 et 19A115 par injection
intraveineuse unique (veine caudal,
infusion de 5 min, volume de 10 mL/kg) à une dose identique de 30 mol/kg. Les
molécules HBP-
Méloxicam étaient solubilisées dans du glucose 5%. En contrôle, les animaux
pathologiques (mBSA)
ont reçu une injection unique (veine caudal, infusion de 5 min, volume de 10
mL/kg) de glucose 5%.
5 En traitement de référence, les animaux ont reçu une administration orale
journalière de Méloxicam
pendant 28 jours à la dose NOEL de 0.2 mg/kg - 0.57 mol/kg, soit une dose
cumulée de 15.96 mol/kg.
L'évolution de l'arthrite a été suivie en mesurant le gonflement du genou
pathologique ainsi que la
boiterie des animaux.
10 La Figure 28 montre l'évolution du gonflement après administration des
traitements à J2.
Les molécules 18A184 et 19A115 montrent une efficacité sur la phase aiguë de
l'arthrite (première
semaine) meilleure que le Méloxicam administré quotidiennement.
La molécule 18A184 montre une efficacité prolongée en comparaison à la
molécule 19A115.
15 La Figure 29 montre l'évolution de la boiterie depuis l'induction de
l'arthrite à J1 et après
l'administration des traitements à J2.
Les molécules 18A184 et 194115 montrent une efficacité sur la phase aiguë de
l'arthrite (première
semaine) meilleure que le Méloxicam administré quotidiennement.
Cette efficacité est détectable plus précocement : arrêt boiterie 24 h après
traitement 19A115 ou 48
20 h après traitement 18A184 contre 9 jours après traitement Méloxicam.
La molécule 18A184 montre une efficacité prolongée en comparaison à la
molécule 194115.
CA 03217161 2023- 10- 30
