Note : Les descriptions sont présentées dans la langue officielle dans laquelle elles ont été soumises.
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Nanoparticules de statine
La présente invention vise à proposer de nouveaux dérivés de statine, en
particulier sous une forme nanoparticulaire hydrodispersible, des compositions
les
contenant et leurs utilisations thérapeutiques.
Les statines appartiennent à la classe thérapeutique des
hypocholestérolémiants. Elles abaissent en particulier le LDL-cholestérol
(pour Low
Density Lipoprotein Cholesterol ) et sont, à ce titre, particulièrement
utiles pour traiter
ou prévenir certaines maladies cardiovasculaires (Journal of the American
Medical
Association, 251, No.3, 351-374 (1984)). En effet, de très nombreuses études
médicales
ont fait apparaître que le dosage du LDL-Cholestérol était le mieux corrélé à
la survenue
d'accidents cardiovasculaires. En outre, le LDL-cholestérol représente le type
de lipides
le plus responsable de la formation de plaques d'athérome.
Plus précisément, les statines diminuent la biosynthèse du cholestérol au
niveau du foie en inhibant l'enzyme HMG-CoA réductase qui contrôle l'étape
limitante de
la synthèse du cholestérol par voie mévalonique en transformant le 3-hydroxy-3-
méthylglutaryl-coenzyme A en acide mévalonique, précurseur des stérols. On
prescrit
l'usage de statines si le taux de LDL-cholestérol dépasse 2,4 mmol/l chez des
patients
coronariens.
Le traitement médicamenteux des maladies cardiovasculaires a ainsi été
bouleversé par l'arrivée des statines dont l'effet sur la baisse du taux de
cholestérol
sanguin est souvent spectaculaire. En effet, les statines peuvent faire
baisser de 20 à 50 %,
la concentration de cholestérol total, de 25 à 60 %, la concentration du LDL-
cholestérol et
de 15 à 30 %, la concentration des triglycérides.
Toutefois, les contre-indications et effets secondaires des statines sont
souvent
lourds et peuvent par exemple se manifester par une hypersensibilité à l'un
des
constituants du médicament, une myopathie, pouvant parfois conduire à une
insuffisance
rénale sévère, une affection hépatique évolutive et/ou une élévation prolongée
des
transaminases (Armitage J., Lancet 2007 ; 370 :1781-1790). Ces effets sont
notamment
dus à une distribution tissulaire et /ou cellulaire inadéquate.
Il est donc nécessaire d'ajuster au mieux la dose et le mode d'administration
des statines.
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Dans l'industrie pharmaceutique, l'amélioration de la biodisponibilité de
principes actifs, destinés à être administrés par voie orale est une grande
préoccupation
pour les galénistes.
En particulier, la formulation de statines, molécules, généralement
lipophiles,
pose de réels problèmes, dus principalement à leur faible solubilité dans les
excipients
pharmaceutiques liquides aqueux, à leur propension à précipiter ou
recristalliser en
solution aqueuse et à leur faible solubilité dans les liquides du tractus
gastro-intestinal à
partir desquels ils doivent être absorbés.
La biodisponibilité d'un principe actif est en outre fonction de sa
concentration
dans le fluide gastro-intestinal, celle-ci dépendant elle-même de la
libération du principe
actif. En particulier, plus un principe actif est lipophile, moins il a
tendance à migrer dans
les fluides digestifs.
Afin d'augmenter la biodisponibilité des principes actifs lipophiles, il a été
envisagé dans WO 95/24893 de les formuler à l'aide d'huiles digestibles et de
tensioactifs
hydrophiles et lipophiles. Ce type de formulation permet de maintenir le
principe actif en
solution durant son passage dans le tractus digestif et ce jusqu'à son
absorption intestinale.
La digestion des ingrédients huileux de ce type de formulations présente
souvent l'avantage de solubiliser le principe actif au sein de micelles mixtes
constituées de
sels biliaires et de produits de la lipolyse des triglycérides de l'huile
digestible utilisée.
Toutefois, la présence de tensioactifs peut inhiber la lipolyse, ce qui
nécessite
l'évaluation préalable in vitro de la digestibilité des huiles d'une
formulation donnée.
D'autre part, les quantités d'huiles digestibles qu'il faut parfois utiliser
pour éviter la
recristallisation du principe actif in vivo sont trop importantes pour
permettre la
fabrication d'une capsule commercialisable.
La présente invention vise précisément à pallier aux inconvénients précités et
à
fournir des formulations adaptées aux statines.
Les inventeurs de la présente invention ont mis en évidence qu'il s'avérait
possible de formuler les statines à l'état de nanoparticules en suspension
dans un milieu
aqueux et de tailles réduites, notamment compatibles pour une administration
par voie
injectable ou orale, sous réserve de les coupler de manière covalente à au
moins un
radical hydrocarboné de nature squalénique.
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Ainsi, la présente invention concerne selon un premier aspect, un complexe
formé d'au moins une molécule de statine ou dérivé, couplée de manière
covalente à au
moins un radical hydrocarboné comprenant au moins 18 atomes de carbone et
contenant
au moins une unité figurée par la formule qui suit :
encore appelée 2-méthyl-buta-2-ène.
Selon un autre objet, l'invention vise un complexe tel que défini
précédemment, dans lequel le composé hydrocarboné comprend de 18 à 40 atomes
de
carbone, de préférence de 18 à 32 atomes de carbone.
Avantageusement, les deux entités formant le complexe défini précédemment
sont couplées par une liaison covalente de type ester, éther, thioéther,
disulfure, phosphate
ou amide et de préférence ester.
Un autre objet de la présente invention vise des nanoparticules d'un complexe
tel que décrit précédemment.
Certes, WO 2006/090029 et Couvreur et al., Nano Lett. 2006, 6, pp. 2544-25
48, décrivent déjà l'aptitude d'une molécule contenant au moins un radical
hydrocarboné
tel que défini précédemment, tel que par exemple le squalène, à former
spontanément des
nanoparticules d'une centaine de nanomètres en milieu aqueux, lorsqu'il est
couplé de
manière covalente à un dérivé nucléosidique tel que la gemcitabine. Toutefois,
pour des
raisons évidentes, la gemcitabine est très différente des dérivés considérés
selon
l'invention.
Il est également connu que l'administration de squalène, en tant que tel,
conduit à sa concentration après administration orale ou intraveineuse, dans
les LDL et
VLDL (pour vert' low density lipoprotein ) (Strandberg et al., J Lipid
Research, 31,
1637, 1999 et H. Relas et al., J Lipid Research, 42, 988, 2001).
Comme indiqué précédemment, la formulation des actifs thérapeutiques
considérés selon la présente invention, à l'état de nanoparticules conformes à
la présente
invention constitue une alternative avantageuse au regard des formulations
déjà
existantes, à plusieurs titres.
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Tout d'abord, l'état nanoparticulaire des statines permet avantageusement
d'améliorer la distribution tissulaire et/ou cellulaire, permettant notamment
de s'affranchir
des effets secondaires des statines et ainsi d'adapter au mieux les modes et
doses
d'administration.
Avantageusement, la taille moyenne de ces nanoparticules varie de 30 à
500 nm, en particulier de 50 à 250 nm, voire de 100 à 400 nm.
La présente invention concerne également un procédé de préparation desdites
nanoparticules comprenant au moins la dispersion du complexe selon la présente
invention,
dans au moins un solvant organique, à une concentration suffisante pour
obtenir, lors de
l'ajout du mélange résultant, sous agitation, à une phase aqueuse, la
formation instantanée
de nanoparticules dudit complexe en suspension dans ladite phase aqueuse, et,
le cas
échéant, l'isolement desdites nanoparticules.
Avantageusement, ledit procédé peut comprendre en outre une étape de
lyophilisation, particulièrement adaptée pour accéder à une mise en forme
solide.
Ainsi, la présente invention concerne en outre un lyophilisat comprenant au
moins un complexe et/ou au moins des nanoparticules tels que décrits
précédemment.
Selon un autre objet, la présente invention vise un complexe et/ou des
nanoparticules tels que définis précédemment, éventuellement sous la forme
d'un
lyophilisat tel que défini précédemment, pour la préparation d'une composition
pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention d'hyperlipémie,
d'hypercholestérolémie, et en particulier destinée au traitement et/ou à la
prévention de
maladies cardiovasculaires, d'obésité, de dyslipidémie et/ou à la prévention
d'un accident
cardiovasculaire.
En d'autres termes, la présente invention a pour objet un complexe et/ou des
nanoparticules, éventuellement sous forme de lyophilisat, tels que définis
selon la présente
invention, pour le traitement et/ou la prévention d'hyperlipémie,
d'hypercholestérolémie,
et en particulier pour le traitement et/ou la prévention de maladies
cardiovasculaires,
d'obésité, de dyslipidémie et/ou la prévention d'un accident cardiovasculaire.
On entend par maladies cardio-vasculaires , l'athérosclérose (plaques
d'athérome), attaques cérébrales ou accident vasculaire cérébral ou cardiaques
(infarctus),
artérite des membres inférieurs, les maladies des coronaires telles que
l'angor (ou angine
de poitrine) ou encore les infarctus tels que l'infarctus du myocarde, les
ischémies, les
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thromboses et maladies thrombo-emboliques, les maladies des vaisseaux, telles
que les
anévrismes, l'artériopathie oblitérante des membres inférieurs, la dissection
aortique aiguë,
l'hypertension artérielle pulmonaire, les maladies thrombo-emboliques, les
crises
cardiaques, la cardiopathie congénitale.
5 L'hypercholestérolémie résulte généralement d'un dérèglement de la
biosynthèse du cholestérol et/ou est due à un taux de cholestérol circulant
anormal.
Par ailleurs, il a récemment été démontré le rôle préventif des statines sur
la
survenue de cancers de localisations variées (cancers du poumon, de la
prostate, du sein,
du pancréas, de l'oesophage ou du côlon) dans Médecine Thérapeutique, Corcos
L. et al.,
Vol. 13, n 1, 22-9, janvier-février 2007. Les statines s'avèrent en outre
utiles en tant
qu'adjuvants des thérapies anticancéreuses actuelles.
Ainsi, la présente invention a également pour objet les complexe et/ou
nanoparticules selon l'invention, éventuellement sous forme de lyophilisat,
pour le
traitement et/ou la prévention de cancers, notamment du poumon, de la
prostate, du sein,
du pancréas, de l'oesophage ou du côlon ou en tant qu'adjuvants des thérapies
anticancéreuses actuelles.
La présente invention s'étend également à une composition pharmaceutique, en
particulier un médicament, comprenant au moins un complexe et/ou des
nanoparticules,
lesdits complexes et/ou nanoparticules étant éventuellement sous forme d'un
lyophilisat,
tels que décrits précédemment, en association avec au moins un véhicule
pharmaceutique
acceptable.
La présente invention vise également ladite composition pour son utilisation
comme médicament pour le traitement et/ou la prévention des maladies et/ou
troubles
précités.
Une telle composition peut s'avérer tout particulièrement utile comme
médicament pour le traitement et/ou la prévention des maladies et troubles
précités chez
des patients dits à risque , c'est-à-dire chez des patients ayant une
pression sanguine
élevée et présentant d'autres facteurs de risque cardiovasculaires comme le
tabagisme,
une surcharge pondérale, un antécédent familial de maladie cardiaque ou un
diabète,
notamment un diabète de type II. En effet, la présence de tels facteurs de
risque chez un
patient augmente son risque de survenue d'accidents cardiovasculaires.
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Composé ou radical hydrocarboné à structure squalénique
Au sens de la présente invention, un composé ou radical à structure
squalénique
ou squalénoyle, est un composé ou radical comprenant au moins une unité 2-
méthyl-buta-
2-ène, telle que définie précédemment.
Plus précisément, un composé ou radical hydrocarboné à structure squalénique
ou squalénoyle comprend au moins 18 atomes de carbone et contenant au moins
une unité
2-méthyl-buta-2-ène, à l'image d'un radical squalène.
Il est à noter que dans la présente invention, on parle selon le cas de
composé ou radical à structure squalénique ou squalénoyle. Le terme
composé
s'attache plus précisément à définir un composé à structure squalénique ou
squalénoyle,
qui, lorsqu'il réagit avec une molécule d'actif forme un complexe, alors que
le terme
radical définit plus précisément la partie squalénique ou squalénoyle du
complexe
formé.
Au sens de la présente invention, un radical hydrocarboné à structure
squalénique peut être figuré par la formule (I) qui suit :
Mi m
2
(I)
dans laquelle :
- mi = 1, 2, 3, 4, 5 ou 6,
- m2=0, 1,2,3,4,5ou6;et
- représente la liaison vers la molécule de statine ou dérivé,
étant entendu que lorsque m2 représente 0, alors mi représente au moins 2.
Plus précisément, lorsque l'on parle du composé squalénoyle ou l'un de ses
dérivés, entité de départ ayant servi au couplage, ce composé ou l'un de ses
dérivés peut
être figuré par le composé de formule (Ibis)
\ \ \ \ Y
Ml m
2
(Ibis)
dans laquelle :
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Y représente un atome d'hydrogène ou un groupe -L2-X' dans lequel X'
représente une fonction de type alcool, acide carboxylique, thiol, phosphate,
amine,
carboxamide ou cétone et L2 représente une liaison covalente simple ou un
groupe C1-C4
alkylène ; et
mi et m2 sont tels que définis pour le radical de formule (I).
Le radical hydrocarboné comprend au moins 18 atomes de carbone, en
particulier de 18 à 40 atomes de carbone et de préférence de 18 à 32 atomes de
carbone.
Plus précisément, un composé utile pour la formation d'un complexe selon la
présente invention est le squalène (encore appelé spiracène ou sirprène), qui
est un
intermédiaire essentiel de la biosynthèse du cholestérol. Chimiquement, il est
encore
appelé (E) 2, 6, 10, 15, 19, 23-Hexaméthyl-2, 6, 10, 14, 18, 22-
tétracosahexène) de formule
qui suit
Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le dérivé squalénique
présent dans un complexe selon la présente invention est un radical de formule
(I) dans
laquelle mi = 1 et m2 = 2.
Avantageusement, le dit complexe est un radical de formule (I) dans laquelle
m1=1etm2=3.
Selon un mode de réalisation préféré de la présente invention, le dérivé
squalénique présent dans un complexe selon la présente invention est un
radical de formule
(I') qui suit, correspondant à un radical de formule (I) précédent dans lequel
m2 = 0
mi
(I')
Dans ce cas, mi = 2, 3, 4, 5 ou 6.
A titre illustratif de composés hydrocarbonés aptes à former un complexe selon
la présente invention, on peut plus particulièrement citer l'acide squalénique
et ses dérivés
tel que l'acide 1, l', 2-tris-norsqualénique, la 1, l', 2-tris-
norsqualénamine, le 1, l',
2-tris-norsqualénol, le 1, l', 2-tris-norsqualéthiol, l'acide squalénacétique,
le
squalényléthanol le squalényléthanethiol, la squalényléthylamine
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Un complexe selon la présente invention comprend au moins un radical
hydrocarboné figuré par un radical de formule (I) tel que défini précédemment.
En particulier, un complexe selon la présente invention pourra contenir au
moins un radical issu d'une molécule d'acide 1, 1', 2-tris-norsqualénique.
Alternativement, un complexe selon la présente invention comprend au moins
deux radicaux hydrocarbonés tels que définis selon la présente invention et en
particulier,
figurés par le composé de formule (I) précité.
Comme les inventeurs l'ont constaté, un composé hydrocarboné tel que défini
précédemment, manifeste spontanément, lorsqu'il est mis en présence d'un
milieu polaire
et plus particulièrement l'eau, une conformation compactée.
De manière inattendue, les inventeurs ont constaté que cette aptitude demeure
lorsqu'un tel radical est associé et notamment lié de manière covalente à une
molécule de
statine ou l'un de ses dérivés. Il s'en suit la génération d'une architecture
compactée à
l'état de nanoparticules dans laquelle figurent au moins en partie une entité
molécule de
statine et au moins un radical hydrocarboné.
La molécule de statine peut en effet n'être qu'en partie ou en totalité à
l'état
compacté dans les nanoparticules formées.
Généralement au moins un radical hydrocarboné précité est lié de manière
covalente à une molécule de statine. Toutefois, le nombre de molécules de
dérivé
hydrocarboné susceptible d'interagir avec ladite molécule peut être supérieur
à 1.
Statine
Structurellement, les statines ou dérivés ont en commun un système
4-hydroxy-6-oxo-2H-pyrane, qui peut aussi se présenter sous forme
dihydroxyacide qui
interagit avec le site actif de la HMG-CoA réductase, enzyme impliquée dans la
synthèse
du cholestérol et une partie lipophile se présentant notamment comme un
système
hexahydronaphtalénique polysubstitué mais peut aussi être remplacé par un
système
hétéroaromatique polysubstitué comme dans l'atorvastatine ou la fluvastatine.
Les principales statines connues sont : simvastatine, lovastatine,
pravastatine,
atorvastatine, fluvastatine et rosuvastatine.
Ces statines sont généralement de nature lipophile (WO 02/053131). Par
exemple, la simvastatine possède un log P = 4,68 et la lovastatine un log P =
4,04.
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La lipophilie d'un principe actif peut être déterminée en fonction de son
coefficient de partage (P) entre l'octanol et l'eau qui correspond au rapport
concentration
du principe actif dans l'octanol (Coct)/concentration du principe actif dans
l'eau (CEau).
Lorsque le rapport P est supérieur à 1, cela signifie que Coct est supérieure
à
CE,,,,, et que par conséquent le principe actif est lipophile (log P > 0). On
peut donc en
déduire que plus le log P d'un principe actif est élevé et plus celui-ci
présente un caractère
lipophile prononcé.
Plus précisément, au sens de la présente invention, on entend par statine ou
dérivé, un composé figuré par la formule (IIa), (IIb) ou (IIc) qui suit :
O
HO HO C02H HO H O
Ra
Ra
Ma IIb
OH OH
Ra C02H
IIc
dans lesquelles
- Ra représente un groupe aryle, hétéroaryle, éventuellement substitué par un
ou plusieurs
groupe(s) R ;
- R représente indépendamment un groupe hydroxyle, un groupe C1-C6 alkyle,
C1-C6 alkoxy, un groupe -O-C(O)C1-C6 alkyle, un phényle, un groupe -NR1R2, un
groupe
-C(O)NR1R2, un groupe -C(O)OR3, lesdits groupes alkyle et phényle étant
éventuellement
substitués par un ou plusieurs atomes d'halogène ou par un ou plusieurs
groupes
hydroxyle ;
- R1 et R2 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome
d'hydrogène, un groupe C1-C6 alkyle, -S02-C1-C6 alkyle, un phényle, lesdits
groupes
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C1-C6 alkyle et phényle étant éventuellement substitués par un ou plusieurs
atomes
d'halogène ou par un ou plusieurs groupes hydroxyles ;
- R3 représente un atome d'hydrogène, un C1-C6 alkyle éventuellement
substitué par un ou plusieurs atomes d'halogènes ou par un ou plusieurs
groupes
5 hydroxyles.
Au sens de la présente invention, on entend par
- un atome d'halogène : un atome de fluor, un atome de chlore, un atome de
brome ou un atome d'iode ;
- un groupe hydroxyle : un groupe -OH ;
10 - un alkyle : un groupe aliphatique saturé, linéaire ou ramifié. A titre
d'exemple on peut citer le méthyle, l'éthyle, le propyle, l'isopropyle, le
butyle, l'isobutyle,
le sec-butyle, le ter-butyle ;
- un alcoxy : un radical -O-alkyle où le groupe alkyle est tel que défini
précédemment, par exemple le méthoxy, l'éthoxy, le propoxy, l'isopropoxy, le
butoxy,
l'isobutoxy, le sec-butoxy, le tert-butoxy ;
- un groupe aryle : un groupe aromatique pouvant être partiellement insaturé
monocyclique ou bicyclique comprenant de 6 à 10 atomes de carbone. A titre
d'exemple
de monocycle on peut citer le phényle. A titre d'exemple de bicycle, on peut
citer le
naphtyle, ledit naphtyle pouvant être partiellement insaturé, tel que le
1,2,6,7,8,8a-
hexahydronaphtyle ;
- un groupe hétéroaryle : un groupe aryle précité comprenant en outre au
moins un hétéroatome choisi parmi un azote, un soufre ou un oxygène. A titre
d'exemple
de monocycle on peut citer le furanyl, le thiophényle, le thiényle, le
pyrrolyle, le
thiazolyle, l'imidazolyle, le pyrazolyle, l'isoxazolyle, le thiadiazolyle, le
pyridinyle, le
pyrimidyle, le pyrazinyle. A titre d'exemple de bicycle, on peut citer
l'indolyle,
l'isoindolyle, l'indolizinyle, le benzofuranyle, le benzimidazolyle, la
quinolyle,
l'isoquinolyle, le phtalazyle.
Les composés de formule générale (IIa), (IIb) ou (IIc) peuvent comporter un ou
plusieurs carbones asymétriques. Ils peuvent donc exister sous forme
d'énantiomères ou de
diastéréoisomères. Ces énantiomères, diastéréoisomères, ainsi que leurs
mélanges, y
compris les mélanges racémiques, font partie de l'invention.
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Les composés de formules précités peuvent exister à l'état de bases ou de sels
d'addition à des acides. De tels sels d'addition font partie de l'invention.
Ces sels sont avantageusement préparés avec des acides pharmaceutiquement
acceptables, mais les sels d'autres acides utiles, par exemple, pour la
purification ou la
séparation des composés de formules précitées font également partie de
l'invention.
Les composés de formule générale (Ha), (IIb) ou (He) peuvent, en outre, se
trouver sous forme d'hydrates ou de solvates, à savoir sous forme
d'associations ou de
combinaisons avec une ou plusieurs molécules d'eau ou avec un solvant. De tels
hydrates
et solvates font également partie de l'invention.
Parmi les statines de formule (Ha) convenant à la présente invention, on peut
citer par exemple, la pravastatine et l'atorvastatine.
Parmi les statines de formule (IIb) convenant à la présente invention, on peut
citer par exemple, la simvastatine et la lovastatine.
Parmi les statines de formule (IIc) convenant à la présente invention, on peut
citer par exemple, la fluvastatine et la rosuvastatine.
Une statine convenant tout particulièrement à la mise en oeuvre de la présente
invention est représentée par un composé de formule (Ha).
Avantageusement, selon la présente invention, on peut mettre en oeuvre dans
les complexes
et/ou nanoparticules selon l'invention la simvastatine, la lovastatine, la
pravastatine,
l'atorvastatine, la fluvastatine ou la rosuvastatine et tout particulièrement,
la pravastatine.
Complexe radical hydrocarboné/statine
La conjugaison d'une molécule de statine avec un dérivé hydrocarboné
conforme à l'invention, et plus particulièrement avec le 1,1',2-tris-
norsqualénol, confère à
la molécule de statine des caractéristiques physico-chimiques suffisantes pour
lui conférer
une aptitude à former des particules par nanoprécipitation, particules dont la
taille s'avère
compatible avec tout mode d'administration, en particulier intraveineux et
oral.
Au sens de la présente invention, une telle conjugaison conduit à la formation
d'un complexe ou conjugué statine/radical hydrocarboné selon la présente
invention, c'est-
à-dire une entité comportant un radical issu d'une molécule de statine, lié de
manière
covalente, à un radical hydrocarboné tel que défini précédemment.
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Au sens de la présente invention, on utilisera donc indifféremment les termes
complexe ou conjugué pour désigner une telle entité.
Ainsi, la présente invention concerne un complexe caractérisé en ce qu'il
possède l'aptitude à s'organiser spontanément à l'état de nanoparticules
lorsqu'il est en
présence d'un milieu aqueux.
La formation du complexe statine/radical hydrocarboné selon l'invention
nécessite que les deux entités du complexe portent des fonctions susceptibles
de former
une liaison covalente et/ou un bras de liaison, tels que définis ci-dessous.
Ces fonctions
peuvent ou non être présentes sur les deux entités de départ. Dans la
négative, l'/les
entité(s) de départ devra/devront subir une modification, préalablement à la
réaction de
couplage.
Plus précisément, le composé hydrocarboné selon l'invention est généralement
porteur d'une fonction susceptible de réagir avec une fonction présente sur la
molécule de
statine considérée, de manière à établir un lien covalent entre les deux
entités, par exemple
de type ester, éther, thioéther, disulfure, phosphate ou amide, formant ainsi
un complexe
covalent.
Avantageusement, il peut s'agir d'une fonction ester. Auquel cas, le composé
hydrocarboné à structure terpénique est le 1,1',2-tris-norsqualénol ou l'un de
ses dérivés et
en particulier le bromoacétate de 1,1',2-tris-norsqualénol.
Selon une variante de réalisation, le lien covalent existant entre les deux
types
de molécules peut être figuré par un espaceur ou encore bras de liaison. Un
tel bras peut
notamment s'avérer utile pour augmenter la force de l'interaction
statine/radical
hydrocarboné selon l'invention ou encore pour faciliter l'activation du
conjugué après son
administration par les enzymes de l'organisme (estérases, cathepsines par
exemple) et
permettre ainsi la libération contrôlée de la molécule de statine.
Un tel bras permet précisément d'introduire via chacune des deux extrémités
de son squelette les fonctions adéquates, c'est-à-dire possédant
respectivement l'affinité
réactionnelle attendue, l'une pour la fonction présente sur le dérivé à
structure
hydrocarbonée selon l'invention et l'autre pour la fonction présente sur la
molécule de
statine considérée.
On peut également envisager que ce bras de liaison possède en outre au niveau
de son squelette une fonction labile, propice ultérieurement à la séparation
du composé à
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structure hydrocarbonée de la molécule de statine considérée. Il peut par
exemple s'agir
d'un motif peptidique reconnaissable par une enzyme.
Les motifs de type bras de liaison sont bien connus de l'homme de l'art et
leur
mise en oeuvre relève clairement de ses compétences.
A titre représentatif des bras de liaison envisageables selon l'invention, on
peut
notamment citer les chaînes alkylène telles que définies précédemment, les
motifs
(poly)aminoacides, polyols, saccharidiques, et polyéthylèneglycol
(polyétheroxides).
Au sens de la présente invention on entend par :
- motif saccharidique , un radical comprenant au moins un radical choisi
parmi les trioses (glycéraldéhyde, dihydroxyacétone), tétroses (érythrose,
thréose,
érythrulose), pentoses (arabinose, lyxose, ribose, désoxyribose, xylose,
ribulose,
xylulose), hexoses (allose, altrose, galactose, glucose, gulose, idose,
mannose, talose,
fructose, psicose, sorbose, tagatose, heptoses (mannoheptulose,
sedoheptulose), octose
(octolose, 2-céto-3-désoxy-manno-octonate), isonoses (sialose), et
- motif (poly)aminoacide , un motif ayant au moins une unité :
O
11
C-CH -N
H
R'
dans laquelle n est supérieur ou égal à 1, et R' représente un atome
d'hydrogène, un groupe
C1.6 alkyle, éventuellement substitué par un ou plusieurs hydroxyles, un C1.6
alcoxy.
Ainsi, au sens de la présente invention, un lien covalent figure de
préférence une liaison covalente notamment telle que précisée ci-dessus, mais
couvre
également un lien covalent figuré par un bras de liaison tel que défini
précédemment.
Ainsi, le complexe covalent selon la présente invention peut être figuré par
le
composé de formule (III) qui suit :
OH O
L~ L,
O/ \X/
m2 m1
Ra OH
(III)
dans laquelle
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- X représente une liaison covalente simple ou une fonction de type ester,
éther,
thioéther, disulfure, phosphate ou amide ;
- L1 et L2 représentent indépendamment l'un de l'autre une liaison covalente
simple ou un groupe CI-C4 alkylène et ;
- Ra est tel que défini pour le composé de formule (Ha) (11b) ou (He) , et mi
et
m2 sont tels que définis précédemment pour le composé de formule (I) ; et
- représente la présence éventuelle d'un centre d'insaturation.
Au sens de la présente invention, on entend par un groupe CI-C4 alkylène, un
groupe alkyle divalent pouvant comprendre de 1 à 4 atomes de carbone. A titre
d'exemple,
on peut citer le méthylène, le propylène, l'isopropylène, le butylène.
La présente invention concerne plus particulièrement un complexe, figuré par
le composé de formule (IIIa) ou (IIIb) qui suit
HO O
,,.C
CIO
O OH m1
O'I2-CH2 m2
H
O
HO"
(IIIa)
C-_ 0
OH Ml
O
F 2-CH 2 / r2j
O
N O
HN\ (IIIb)
dans lesquelles
m1 et m2 sont tels que définis pour le composé de formule (I) et L2 est tel
que défini pour le
composé de formule (III).
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En particulier, on met en oeuvre selon la présente invention un complexe de
formule (IIIa) ou (IIIb), de préférence le complexe de formule (IIIa).
Un objet de la présente invention vise donc un complexe conforme à
l'invention, pouvant être figuré par les formules (III), (IIIa) ou (IIIb),
telles que définies
5 précédemment.
Procédé de préparation du complexe
La réaction nécessaire à l'établissement d'au moins une liaison covalente
entre
au moins une molécule de statine considérée et au moins un radical
hydrocarboné
10 conformes à la présente invention, peut être effectuée selon des conditions
standards et sa
réalisation relève donc clairement des connaissances de l'homme de l'art.
Plus particulièrement la liaison entre la statine et le radical hydrocarboné
est
réalisée par substitution nucléophile avec le bromoacétate de 1,1',2-tris-nor-
squalényle.
Cette réaction est généralement réalisée en solution dans un solvant polaire
en présence et
15 en excès d'au moins un composé hydrocarboné considéré selon la présente
invention par
rapport à la molécule de statine mise en oeuvre selon l'invention, par exemple
à raison de
deux équivalents, selon les conditions standards requises pour faire interagir
les deux
fonctions spécifiques portées par chacune des deux entités.
Comme indiqué précédemment, l'établissement de la liaison covalente entre les
deux entités à considérer selon l'invention, nécessite, le cas échéant, que
chacun des
groupements devant réagir porte des fonctions aptes à réagir l'une avec
l'autre telles que
par exemple une fonction carboxyle avec une fonction hydroxyle pour former une
liaison
ester ou encore une fonction amine avec une fonction carboxyle pour former une
liaison
amide.
Ainsi, si nécessaire, l'une ou les deux entités, la molécule de statine d'une
part,
et le composé hydrocarboné d'autre part, sont modifiées préalablement à la
réaction de
couplage afin de leur procurer la fonction adéquate pour leur conférer la
réactivité
nécessaire à la formation d'une liaison covalente entre elles. De préférence,
chacune des
deux molécules est modifiée afin d'établir une liaison amide ou esters entre
elles.
De préférence, un composé hydrocarboné de départ pour la synthèse d'un
complexe selon l'invention est un dérivé squalénique, tel que par exemple le
1, l', 2-tris-norsqualénol, tel qu'illustré à l'étape 1.1 de l'exemple 1.
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Nanoparticules selon l'invention
Comme précisé précédemment, le couplage covalent d'au moins une molécule
de statine considérée selon l'invention avec au moins un composé hydrocarboné
selon
l'invention est de nature à conférer à la molécule de statine ainsi complexée,
une aptitude à
s'organiser sous une forme compactée dans un milieu solvant polaire,
conduisant ainsi à la
formation de nanoparticules.
D'une manière générale, les nanoparticules ainsi obtenues possèdent une taille
moyenne variant de 30 à 500 nm, et en particulier de 50 à 250 nm, voire de 100
à 400 nm
mesurée par diffusion de la lumière à l'aide du nanosizer Coulter N4MD,
Coulter
Electronics, Hialeah, USA.
Un objet de l'invention vise des nanoparticules conformes à l'invention dont
la
taille moyenne varie de 30 à 500 nm, en particulier de 50 à 250 nm, voire de
100 à
400 nm.
Un autre objet de la présente invention concerne des nanoparticules de 4-(N)-
squalénoylpravastatine. L'obtention de telles nanoparticules est illustrée en
exemple 2.
Avantageusement, les nanoparticules selon la présente invention, en
particulier
sous la forme de lyophilisat, sont particulièrement avantageuses pour une
administration
destinée à la voie orale.
Procédé de préparation des nanoparticules
La formation de nanoparticules à partir du complexe décrit précédemment peut
être réalisée selon des techniques conventionnelles dans la mesure où elles
impliquent la
mise en présence d'un complexe avec un milieu aqueux dans des conditions
propices à son
agglomération à l'état de nanoparticules. Il peut notamment s'agir de méthodes
dites de
nanoprécipitation ou émulsion/évaporation de solvant.
Les nanoparticules selon la présente invention peuvent de préférence être
obtenues de la façon suivante.
Préliminairement, on forme un complexe statine/composé hydrocarboné, par
couplage d'au moins un composé hydrocarboné selon l'invention à au moins une
molécule
de statine selon l'invention, tel que décrit précédemment.
Ledit complexe obtenu est ensuite dispersé dans au moins un solvant
organique (par exemple un alcool comme l'éthanol, ou l'acétone) à une
concentration
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suffisante pour obtenir, lors de l'ajout du mélange résultant, sous agitation,
et
généralement au goutte-à-goutte, à une phase aqueuse, la formation instantanée
de
nanoparticules selon l'invention en suspension dans ladite phase aqueuse. Le
cas échéant,
on procède à l'isolement desdites nanoparticules selon les techniques bien
connues par
l'homme du métier.
La réaction peut généralement être réalisée à température ambiante. Quelle
qu'elle soit, la température de réaction ne doit pas affecter l'activité de la
molécule de
statine considérée. Le procédé de préparation des nanoparticules selon
l'invention est
particulièrement avantageux dans la mesure où il ne requiert pas
obligatoirement la
présence de tensioactifs, mais peut néanmoins s'avérer nécessaire dans le cas,
par exemple,
où l'on met en oeuvre de la pravastatine.
Cette propriété est particulièrement appréciable dans la mesure où un grand
nombre de tensioactifs ne s'avèrent pas compatibles avec une application in
vivo.
Toutefois, il est entendu que l'usage de tensioactifs, généralement
avantageusement dénués de toute toxicité, est envisageable dans le cadre de
l'invention. Ce
type de tensioactifs peut par ailleurs permettre d'accéder à des tailles
encore plus réduites
lors de la formation de nanoparticules. A titre illustratif et non limitatif
de ce type de
tensioactifs susceptibles d'être utilisés dans la présente invention, on peut
notamment citer
des copolymères de polyoxyéthyléne-polyoxypropyléne, des dérivés
phospholipidiques et
des dérivés lipophiles du polyéthylène glycol.
Comme dérivé lipophile du polyéthylène glycol, on peut mentionner par
exemple le polyéthylène glycol cholestérol, le polyéthylène glycol squalène.
Comme
exemple de copolymères bloc polyoxyéthylène-polyoxypropylène, on peut
particulièrement citer les copolymères triblocs polyoxyéthylène-
polyoxypropylène-
polyoxyéthylène, encore appelés poloxamires , pluronics ou synperonics et qui
sont
commercialisés, notamment, par la société BASF.
Apparentés à ces familles de copolymères, les poloxamines, qui sont
constituées de segments hydrophobes (à base de polyoxypropylène), de segments
hydrophiles (à base de polyoxyéthylène) et d'une partie centrale dérivant du
motif éthylène
diamine peuvent également être employés.
Les nanoparticules selon l'invention sont bien entendu susceptibles de porter
en surface une multitude de fonctions réactives, à l'image des fonctions
hydroxyle ou
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amine par exemple. Il est donc envisageable de fixer à ces fonctions toutes
sortes de
molécules, notamment par des liaisons covalentes.
A titre illustratif et non limitatif de ce type de molécules susceptibles
d'être
associées aux nanoparticules, on peut notamment citer les molécules de type
marqueur, les
composés susceptibles d'assurer une fonction de ciblage, ainsi que tout
composé apte à leur
conférer des caractéristiques pharmacocinétiques particulières. En ce qui
concerne ce
dernier aspect, on peut ainsi envisager de fixer en surface de ces
nanoparticules des dérivés
lipophiles du polyéthylène glycol, comme par exemple le conjugué polyéthylène
glycol/cholestérol, le polyéthylène glycol-phosphatidyléthanolamine ou mieux
encore le
polyéthylène glycol/squaléne. En effet, compte-tenu de l'affinité naturelle
des résidus de
squalène entre eux, le conjugué polyéthylène glycol/squalène s'associe, en
l'espèce, avec
les nanoparticules selon l'invention, et conduit ainsi à la formation de
nanoparticules
revêtues en surface de polyéthylène glycol. Par ailleurs, et comme mentionné
précédemment, le conjugué polyéthylène glycol/squaléne agit avantageusement
lors du
processus de formation des nanoparticules selon l'invention, comme tensioactif
du fait de
son comportement amphiphile et stabilise donc la solution colloïdale,
réduisant ainsi la
taille des nanoparticules formées. Un enrobage de surface à base de tels
composés et en
particulier le polyéthylène glycol ou le conjugué polyéthylène glycol
/cholestérol ou le
conjugué polyethyléneglycol/squaléne, est en effet avantageux pour conférer
une
rémanence vasculaire accrue en raison d'une réduction significative de la
capture des
nanoparticules par les macrophages hépatiques.
Selon un mode de réalisation avantageux, les nanoparticules selon l'invention
sont formulées à l'état de dispersion aqueuse.
Selon un autre mode de réalisation particulier, cette dispersion aqueuse
contient moins de 5 % en poids, voire moins de 2 % en poids et plus
particulièrement est
dénuée de tensioactif ou analogue tels que par exemple les polyéthylène
glycols, le
polyglycérol et leurs dérivés, tels les esters par exemple.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, cette dispersion aqueuse
contient moins de 5 % en poids, voire moins de 2 % en poids en alcool en C2 à
C4 tel que
par exemple l'éthanol.
Ainsi, la formulation en milieu aqueux de la statine considéré à l'aide de
l'acide squalénique à l'état de nanoparticules hydrodispersibles permet,
avantageusement,
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d'obtenir une suspension de nanoparticules sans autre additif que le dextrose
5
nécessaire pour obtenir l'isotonie de la suspension injectable.
Selon un autre mode de réalisation avantageux, les nanoparticules selon
l'invention sont sous forme de lyophilisat.
Comme indiqué précédemment, la présente invention vise également
l'utilisation d'au moins une nanoparticule selon l'invention dans des
compositions
pharmaceutiques.
Un autre aspect de l'invention concerne donc une composition pharmaceutique
comprenant au moins, au titre de matière active, un complexe conforme à la
présente
invention notamment sous la forme de nanoparticules. Les complexes conformes à
la
présente invention peuvent y être associés avec au moins un véhicule
pharmaceutiquement
acceptable.
A titre d'exemples de formulations pharmaceutiques compatibles avec les
compositions selon l'invention, on peut notamment citer :
- les injections ou perfusions intraveineuses ;
- les solutions salines ou d'eau purifiée ;
- les compositions pour inhalation ;
- les capsules, dragées, cachets et sirops incorporant notamment à titre de
véhicule, de l'eau, du phosphate de calcium, des sucres, tels que lactose,
dextrose ou
mannitol, du talc, de l'acide stéarique, de l'amidon, du bicarbonate de sodium
et/ou de la
gélatine.
Lorsque les complexes et/ou nanoparticules sont utilisés en dispersion dans
une
solution aqueuse, ils peuvent être associés à des excipients de type agent
séquestrant ou
chélatant, antioxydant, agents modifiant le pH et/ou agents tampons.
Outre les composés précités, les compositions pharmaceutiques selon
l'invention peuvent contenir des agents de type conservateurs, des agents
mouillants, des
agents solubilisants et des agents de coloration.
Elle peut cependant contenir d'autres actifs dont il peut être bénéfique de
tirer
profit sur le plan thérapeutique, conjointement à l'effet des statines.
A titre représentatif de ces matières actives susceptibles d'être combinées
aux
complexes et/ou nanoparticules conformes à la présente invention, on peut
notamment citer
les actifs destinés à réduire l'hypertension artérielle, comme les
antihypertenseurs ou
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hypotenseurs ou encore d'autres composés à activité hypolipémiante. On compte
parmi
eux les diurétiques, tels que les thiazidiques, les diurétiques de l'anse de
Henlé comme par
exemple le furozémide, les anti-aldostérones, ou encore les (3-bloquants tels
que
l'acébutolol, l'aténolol, le bétaxolol, le bisoprolol, l'esmolol, le
métoprolol, le nébivolol, le
5 nadolol, l'oxprénolol, le propranolol, le pindolol, le sotalol, le
carvédilol, le labétalol, le
lévobunolol, le timolol, les inhibiteurs de l'enzyme de conversion (IECA, IEC)
tels que
benazepril, captopril, cilazapril, enalapril, fosinopril, imidapril,
lisinopril, moexipril,
perindopril, quinapril, ramipril, spirapril, trandolapril, les antagonistes
des récepteurs de
l'angiotensine II tels que le candésartan, candésartan cilexétil, éprosartan,
irbésartan,
10 losartan et son sel potassique, olmésartan, olmésartan médoxomil,
telmisartan, valsartan,
les inhibiteurs calciques tels que l'amlodipine, le gallopamil, le vérapamil,
l'amlodipine, le
barnidipine, la félodipine, l'isradipine, le lacidipine, le lercanidipine, la
nicardipine, la
nifédipine, la nimodipine, la nisoldipine, la nitrendipine, le diltiazem, les
antihypertenseurs
centraux, les alpha-stimulants tels que la prazosine, la térazosine,
l'alfuzosine, la
15 doxazosine, la tamsulosine, les alpha-bloquants périphériques, les
vasodilatateurs.
On peut également citer d'autres agents hypolipémiants choisis parmi:
fénofibrate, bézafibrate, cipofibrate, colestipol, ézétimibe, tiadénol,
gemfibrozil, acides
gras oméga-3 poly-insaturés, triglycérides d'acides oméga-3, benfluorex, alpha-
tocophérol
(vitamine E), colestyramine.
20 Les complexes et/ou nanoparticules conformes à la présente invention
peuvent
être administrés par toutes les voies conventionnelles. Toutefois, comme
précisé
précédemment, compte tenu de la faible taille de leurs particules, ils sont
administrables
sous la forme d'une suspension aqueuse par voie intraveineuse et donc
compatibles avec la
microcirculation vasculaire.
Pour des raisons évidentes, les quantités en complexe et/ou nanoparticule
selon
l'invention susceptibles d'être mis en oeuvre sont susceptibles de varier
significativement
selon le mode d'utilisation et la voie retenue pour leur administration.
En revanche, pour une administration topique, on peut envisager de formuler
au moins un complexe et/ou nanoparticule conforme(s) à la présente invention à
raison de
0,1 à 10 % en poids, voire plus, par rapport au poids total de la formulation
pharmaceutique considérée.
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Les exemples qui suivent illustrent la présente invention sans pour autant y
être
limitée.
Les spectres infrarouges sont obtenus par mesure sur un solide ou un liquide
pur en utilisant un spectromètre de Fourier (Transform Bruker Vector 22).
Seules les
absorptions significatives sont relevées. Les rotations optiques ont été
mesurées à l'aide
d'un polarimètre Perkin-Elmer 241, à une longueur d'onde de 589 nm. Les
spectres RMN
'H et 13C ont été enregistrés en utilisant un spectromètre Bruker ARX 400 (à
400 MHz et
100 MHz, respectivement pour 'H et13C) ou Bruker Avancé 300 (à 300 MHz et 75
MHz,
respectivement pour 'H et 13C). Les spectres de masse ont été enregistrés en
utilisant un
appareil Bruker Esquire-LC . L'analyse de chromatographie sur couche mince a
été
réalisée sur des plaques de silice 60F254 (couche de 0,25 mm). La colonne de
chromatographie a été réalisée sur gel de silice 60 (Merck, 230-400 mesh
ASTM). Toutes
les réactions mettant en oeuvre des composés sensibles à l'air ou à l'eau ont
été conduites
sous atmosphère d'azote.
IPD = Indice de Polydispersité
Exemple 1: Préparation du complexe (N)-squalénoylpravastatine
(SQprava)
Etape 1.1 : (4E,8E,12E,16E)-4,8,13,17,21-Pentaméthyldocosa-4,8,12,16,20-
pentaen-1-ol:
L'aldéhyde squalénique est réduit en squalénol. Pour ce faire, à 1,15 g (3
mmol) d'aldéhyde squalénique dissous dans 6 mL d'éthanol sont ajoutés, à
0 C, par petites portions 106 mg (0,9 équiv., 2,7 mmol) de borohydrure de
sodium. Le
mélange est agité sous atmosphère d'azote à température ambiante pendant 15
min, puis le
mélange réactionnel est neutralisé à l'aide d'une solution de HC12N. Ensuite,
le solvant est
distillé sous pression réduite. Le résidu est dissous dans 10 mL d'eau et
extrait par l'acétate
d'éthyle (3 fois 20 mL) et les phases organiques réunies sont lavées par une
solution
aqueuse saturée en NaC1 (10 mL), séchées sur MgS04, puis le solvant est
distillé sous
pression réduite pour conduire à une huile jaune pâle.
IR (pur, cm) v: 3060-2840, 1667 (faible), 1445, 1381.
RMN 1H (300 MHz, CDC13) 8: 5,16-5,09 (m, 5H), 3,62 (t, J= 6,4, 2H), 2,13-
1,94 (m, 21H), 1,61 (s, 3H), 1,53 (s, 15H).
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MS (APCI+, MeOH), m/z(%) : 387 ([M+ H]+ (100)).
Etape 1.2.: Bromoacétate de (4E,8E,12E,16E)-4,8,13,17,21-
pentaméthyldocosa-4,8,12,16,20-pentaen-l-yl.
A 500 mg (1,3 mmol) de squalénol dissous dans 6 mL de CH2C12 anhydre sont
ajoutés, 216 mg (1,55 équiv., 2,01 mmol) d'acide bromoacétique et quelques mg
de
DMAP. Le mélange est refroidi à 0 C, puis on ajoute par petites portions, 317
mg (1,5
équiv., 1,95 mmol) de DCC dissous dans 2 mL de CH2C12. Après addition totale
le
mélange est agité sous atmosphère d'azote à température ambiante pendant 18 h
puis filtré
sur célite. Le filtrat est concentré sous pression réduite. Le résidu est
chromatographié sur
gel de silice à l'aide d'un mélange AcOEt/Cyclohexane : 1/4 pour donner 55 mg
d'une
huile incolore
IR (pur, cm) v: 2960-2850, 1737, 1668 (faible), 1450, 1382, 1276, 1381
RMN 'H (300 MHz, CDC13) 8: 5,18-5,07 (m, 5H), 4,14 (t, J = 6,4, 2H), 3,82
(s, 2H), 2,16-1,98 (m, 18H), 1,81-1,71 (m, 2H), 1,68 (s, 3H), 1,53 (s, 15H);
13C (75 MHz, CDC13) 8: 167,2 (C), 135,0 (C), 134,8 (2C), 133,2 (C), 131,2 (C),
125,3
(CH), 124,4 (2 CH), 124,2 (2 CH), 65,9 (CH2), 39,7 (2 CH2), 39,6 (CH2), 35,5
(CH2), 28,2
(2 CH2), 28,7 (CH2), 26,6 (CH2), 26,5 (2 CH2), 25,6 (CH2), 25,6 (CH3), 17,6
(CH3),
16,0 (3 CH3), 15,8 (CH3).
Etape 1.3: 2-Oxo-2-{[(4E,8E,12E,16E)-4,8,13,17,21-pentamethyldocosa-
4,8,12,16,20-pentaen-l-yl]oxy}ethyl (3R,5R)-3,5-dihydroxy-7-((1S,2S,6R,8S,8aR)-
6-
hydroxy-2-methyl-8-{ [(2S)-2-methylbutanoyl] oxy}- 1,2,6,7,8,8a-
hexahydronaphthalen-
1-yl)heptanoate
A 50 mg (0,11 mmol) de pravastatine dissous dans 0,4 mL de DMSO anhydre
sont ajoutés 111 mg (2 équiv., 0,22 mmol) de bromoacétate de squalényle. Le
mélange est
chauffé sous atmosphère d'azote à 40 C pendant 5 h, puis le solvant est
distillé sous
pression réduite. Le résidu est chromatographié sur gel de silice à l'aide
d'un mélange
AcOEt/Cyclohexane : 1/1 pour donner 55 mg de pravastatine-SQ sous la forme
d'un solide
blanc amorphe.
[a]D = 77,7 (c = 2,4, CHC13) ;
IR (pur, cm) v: 3500-3200, 2924, 1728, 1448, 1375, 1264, 1182, 1151.
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RMN 'H (CDC13, 400 MHz) 6 : 5,99 (d, J = 9,7 Hz, 1H, H-4), 5,89 (dd, J =
9,7 ; 6,0 Hz, 1H, H-3), 5,56 (s, 1H, H-5), 5,42 (s, 1H, H-8), 5,20-5,05 (m,
5H, HC=C(Me)),
4,72 (d, J = 15,8 Hz, 1H, OCH2O00), 4,61 (d, J = 15,8 Hz, 1H, OCH2O00), 4,46-
4,36
(m, 1H, H-6), 4,38-4,22 (m, 1H, H-3'), 4,15 (t, J= 6,9 Hz, 2H,
OCH2CH2CH2C(Me)), 3,91
(s large, 1 H, OH), 3,83-3,78 (m, 1H, H-5'), 3,53 (s large, 1 H, OH), 2,65-
2,55 (m, 3H, 2H-
2', H-1), 2,46-2,35 (m, 1H, H-2), 2,35-2,28 (m, 2H, HC(Me)(Et)C02), 2,12-1,92
(m, 18 H,
=C(Me)CH2CH2), 1,75 (quint, J = 8,0 Hz, 2H, OCH2CH2CH2C(Me)), 1,68 (s, 3H,
=C(CH3)2), 1,69-1,50 (m, 21H, 5 =C(CH3), H-7, H-4', 1 H CH3CH2CH(Me)CO2, 1 H
6'),
1,49-1,35 (m, 2 H, 1 H CH3CH2CH(Me)CO2, 1 H-7'), 1,16 (m, 1H, 1 H-6'), 1,11
(d, J=
6,8 Hz, 3H, (CH3)(Et)CHCO2), 0,90 (d, J = 7,6 Hz, 3H, C-2(CH3)), 0,88 (d, J =
7,6 Hz,
3H, (CH3)(CH2CH3)CHCO2) ;
RMN '3C (CDC13, 100 MHz) 8: 176,3 (CO), 171,3 (CO), 168,3 (CO), 136,1
(CH), 135,6 (C), 135,1 (C), 134,9 (2C), 133,3 (C), 131,2 (C), 127,3 (CH),
125,9 (CH),
125,4 (CH), 124,4 (2CH), 124,3 (2CH), 72,2 (CH), 69,5 (CH), 69,2 (CH), 65,6
(CH2), 65,1
(CH), 60,6 (CH2), 42,35 (CH2), 42,30 (CH2), 41,6 (CH), 39,7 (CH2), 39,6 (CH2),
37,7
(CH), 36,8 (CH2), 36,6 (CH), 35,6 (CH2), 34,6 (CH2), 30,9 (CH), 28,3 (2CH2),
26,8 (CH2),
26,65 (3CH2), 26,60 (2CH2), 25,7 (CH3), 23,8 (CH2), 16,8 (CH3), 16,0 (4CH3),
15,8 (CH3),
13,6 (CH3),11,8 (CH3) ;
MS (ESI+, MeOH, DMSO), m/z(%) : 874 ([M+ Na]+ (100)).
Exemple 2 : Préparation de nanoparticules de pravastatine
Préparation des nanoparticules constituées de 4-(N)-sgualénoylpravastatine
Les nanoparticules sont obtenues par la méthode précipitation/évaporation de
solvant, par analogie avec la méthode décrite dans Fessi H. et al, Int. J.
Pharm., 55 ; 1989,
RI-R4.
4 mg de SQpravastatin sont dissous dans 0,5 mL d'éthanol dans un pilulier.
Dans un autre flacon on dissout 2 mg de SQ-PEG dans 0,2 mL de l'acétone et 0,1
mL
d'éthanol, dans l'ordre mentionné. Les deux solutions sont alors mélangés et
la solution
obtenue est ajoutée goutte à goutte, sous agitation (500 tr / min) à 1 mL
d'une solution
aqueuse à 5 % dextrose. La précipitation des nanoparticules est immédiate. Le
flacon
contenant la solution de SQpravastatin est rincé et la solution de rinçage
ajoutée à la
suspension de nanoparticules. Après 2 ou 3 minutes d'agitation, la suspension
de
CA 02742181 2011-04-28
WO 2010/049900 PCT/IB2009/054781
24
nanoparticules est transférée dans un ballon taré et concentrée sous pression
réduite au
rotavapor (50-100 mbar à 20 C pendant 10 min puis à 37 C pendant environ 3-5
minutes)
jusqu'à un poids de à 0,8 - 0,9 g. La solution est alors complétée jusqu'à 1 g
en utilisant soit
une solution de à 5 % de dextrose soit de l'eau stérile. La taille des
nanoparticules
l'obtenues, mesurée avec un nanosizer de Malvern (Zetasizer) est de 146 nm.
Les nanoparticules ont une taille moyenne, compatible avec tout mode
d'administration, ainsi qu'une une bonne stabilité en solution aqueuse.
Elles possèdent un indice de polydispersité de 0,08.
L'indice de polydispersité a été déterminé selon les méthodes bien connues de
l'homme du métier (par exemple, par analogie avec la méthode décrite dans
Couvreur et
al., Nanoletters, vol. 6, n l1, pages 2544-2548, 2006).
