Note : Les descriptions sont présentées dans la langue officielle dans laquelle elles ont été soumises.
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WO 2014/079938
PCT/EP2013/074399
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Procédé d'élimination de biofilms pour le nettoyage d'instruments
médicaux, en particulier pour lutter contre les maladies
nosocomiales
La présente invention se rapporte à un procédé d'élimination
de biofilms pour le nettoyage d'instruments médicaux, en particulier pour
lutter contre les maladies nosoconniales.
Un biofilm est une pellicule visqueuse qui se développe sur
toutes les surfaces, suite à l'adhésion de microorganismes sur ces
surfaces et à la sécrétion par ceux-ci de polymères qui les recouvrent et
facilitent leur adhésion. Les biofilms constituent ainsi une couche de
protection autour des microorganismes et représentent une source
récurrente de contamination du milieu environnant qui pose des problèmes
majeurs en termes de santé, par exemple dans les milieux hospitaliers.
Les biofilms se retrouvent dans de nombreux environnements, par
exemple dans les circuits d'eau, les tours de refroidissement, sur tout
matériel immergé (coque bateau, ...) mais aussi sur les dents (plaque) ou
dans les intestins et tout particulièrement sur les instruments médicaux
utilisés en milieu hospitalier.
L'accumulation des polymères sécrétés par les bactéries
(protéines et polysaccharides principalement) crée une matrice qui protège
ces microorganismes des agressions extérieures et qui présente une très
forte résistance aux procédures de nettoyage et de désinfection
conventionnels. Les microorganismes s'y développent et contaminent le
milieu environnant. Les biofilms constituent dès lors une source de
contamination critique car ils sont présents partout, représentant ainsi un
haut risque de contamination puisqu'ils sont très difficiles à éliminer.
On observe malheureusement que cette matrice est très
résistante et peut constituer une barrière protégeant les bactéries des
agents qui agiraient contre les microorganismes. Les traitements
classiques à base de soude et/ou comportant différents biocides
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n'agissent pas de manière suffisamment efficace car ils ne pénètrent pas
le biofilm dans toute son épaisseur ou sont inhibés par certaines
molécules composant cette matrice. Le traitement n'est alors que
=
partiellement efficace sur la surface supérieure du biofilm.
Or, de nos jours, l'hygiène est devenue une problématique
de première importance dans l'industrie alimentaire. En effet, les
problèmes de contamination sont en augmentation alors que les moyens
de désinfections utilisés sont de plus en plus puissants. Par ailleurs,
cette problématique doit être adressée par une approche globale,
notamment en ce qui concerne le phénomène de résistance.
On connait du document W02012/048757 une composition
et un procédé d'élimination des biofilms pour le nettoyage des sols et
des surfaces dans les industries agro-alimentaires. Plus particulièrement,
la composition divulguée dans ce document est destinée aux traitements
et aux nettoyages d'installations dans le domaine de l'industrie
alimentaire où des bactéries propres à ce secteur d'activité sécrètent des
biofilms protecteurs responsables d'une source récurrente de
contamination des aliments et/ou des installations des industries agro-
alimentaires.
Une problématique similaire est observée en milieu
hospitalier où se développent de nombreux microorganismes
responsables de la formation de biofilms qui sont détectés en de
nombreux endroits, tant au niveau des patients (prothèses, plaies,
système respiratoire, ...) qu'au niveau de l'environnement (salle
d'opération, matériel chirurgical, équipements de maintenance de ce
matériel, endoscopes, sondes urinaires, cathéters, équipement médical,
appareil de dialyse ou de ventilation assistée des patients, ...) et des
surfaces (sols, murs, chambres, lits, matelas, ...).
Dans le domaine de l'industrie alimentaire mais de façon
encore plus conséquente en milieu hospitalier, la problématique de la
présence de biofilms est double. Premièrement, ceux-ci représentent
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une source de contamination permanente et très difficile à éliminer par
des moyens conventionnels, même les plus agressifs. En effet, les
désinfectants classiques sont inefficaces car ils ne parviennent pas à
atteindre les microorganismes qui sont protégés par le biofilm. Leur
élimination incomplète entraîne et accélère des transferts de
contamination de patients à patients dès lors qu'ils sont pratiquement
invisibles. Pourtant, à la suite de chocs ou de frottements, des pellicules
de biofilms peuvent se détacher et libérer des bactéries qui y étaient
logées. En effet, ces bactéries cachées sont par exemple libérées suite à
un choc ou à un frottement d'un outil chirurgical sur un chariot ou suite
au frottement d'un lit contre une porte, ce qui permet un libre transfert
des bactéries à un patient souvent en condition fragile. Cette
problématique est une des causes des maladies nosoconniales
problématiques. Dans le cas d'outil comme des râpes orthopédiques,
cette problématique est encore plus criante dès lors que l'utilisation
conventionnelle de l'outil provoque l'abrasion et le détachement de
pellicules de biofilms. Par conséquent, les bactéries sont libérées
directement dans le corps humain qui représente un incubateur vivant
parfait pour leur prolifération. Ces microorganismes emprisonnés dans
les biofilms, grâce à la résistance et à la protection que leur apporte le
biofilm, représentent donc un risque très élevé de contamination des
= patients suivants.
Deuxièmement, un biofilm est mixte. C'est-à-dire que,
développé par certaines souches, un biofilm peut abriter d'autres
'1 25
souches, qui vivent et se développent alors en colonies. Ces colonies
favorisent la communication entre bactéries et, entre autre, l'échange de
gènes. La propagation des gènes de résistance portés par certaines
bactéries est ainsi facilitée au sein des biofilms qui sont alors encore plus
difficiles à éliminer. A ce sujet, les hôpitaux constituent un environnement
particulièrement propice à ces échanges de gènes puisque de
nombreuses bactéries y cohabitent, par exemple dans les chambres,
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.=
dans les salles d'opérations mais aussi sur les instruments médicaux
(râpes orthopédiques, alésoirs, canules, endoscopes, ...). Dans les
biofilms, le problème est encore accentué car ces souches ne sont
même pas atteintes par les désinfectants, protégées par le matrice du
biofilm.
C'est pourquoi, de par la source de contamination
persistante qu'ils représentent et de par leur présence répandue, il est
estimé que les biofilms sont responsables de 65% des maladies
nosocomiales (maladies contractées dans un établissement de santé).
Leur impact sur cette problématique très critique en milieu hospitalier est
donc élevé, en parallèle avec leur participation au développement de
phénomènes de résistance.
Malheureusement, les techniques de nettoyage et de
désinfection classiques appliquées actuellement en milieu hospitalier
montrent certaines limites quant à l'élimination des biofilms pour lutter
contre les maladies nosocomiales. Ceci est principalement lié à leur
inaptitude à attaquer la matrice de polymères qui protège les
microorganismes. En effet, les détergents classiques ne permettent
pas de décoller cette matrice et les oxydants puissants ne la dissolvent
que partiellement. Les désinfectants et/ou biocides utilisés à posteriori
sont dès lors inefficaces car ils ne peuvent pas atteindre les
microorganismes. De plus il a été démontré que les bactéries sécrètent
des substances qui ont un impact sur l'efficacité des biocides, ce qui
limite d'autant plus l'action de ces derniers.
Actuellement, il est donc particulièrement difficile d'éliminer
les biofilms pourtant en grande partie responsable des maladies
nosocomiales en milieu hospitalier. Il existe donc un réel besoin de
mettre au point une composition et un procédé d'élimination des biofilms
de surfaces telles que par exemple celles des instruments médicaux,
particulièrement pour lutter contre les maladies nosocomiales puisque
les techniques de nettoyage actuelles ne sont pas suffisamment
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efficaces.
L'invention a pour but de pallier ces inconvénients en
procurant un procédé tel qu'indiqué au début, caractérisé en ce qu'il
= comprend une étape de traitement de surface pendant une période de
5
temps prédéterminée avec une composition comprenant au moins un
=
composant détergent et au moins un composant enzymatique et une
étape de rinçage et/ou de séchage de ladite surface.
Avantageusement, suivant l'invention, ledit composant
détergent comprend un agent mouillant et un agent dispersant.
De préférence, suivant l'invention, ledit composant
détergent comprend en outre un agent séquestrant.
Préférentiellement, suivant l'invention, ledit au moins un
= composant enzymatique contient par exemple au moins une protéase,
au moins une laccase et au moins une polysaccharidase.
Avantageusement, selon la présente invention, ledit agent
mouillant et ledit agent dispersant forment un prémix et sont donc
mélangés ensemble.
Dans le cadre de la présente invention, il a été montré qu'un
tel traitement avec une telle composition selon l'invention permet aux
= 20 enzymes (protéases, laccases, polysaccharidases) de dégrader
efficacement et de manière polyvalente les polymères organiques de
différentes natures constituant la matrice des biofilms formés par une
multitude de microorganismes différents responsables directement ou
indirectement des maladies nosocomiales. Sous l'action des enzymes et
= 25 conjointement à l'action du composant détergent, la matrice du
biofilm est
fragilisée et gonflée, ce qui permet de l'éliminer de la surface traitée. Par
ailleurs, de façon surprenante, il a également été montré que le procédé
selon l'invention n'est pas spécifique à un microorganisme particulier et
donc à un type de biofilm particulier mais qu'il est adapté à de nombreuses
=
30 souches bactériennes, les enzymes agissant sur les polymères des
matrices des biofilms formés par n'importe quel microorganisme, L'action
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détergente de la composition selon l'invention permet en outre d'assurer
l'efficacité de la composition suivant l'invention. A cette fin, il est prévu
suivant l'invention une base détergente qui soit compatible et qui puisse
agir de manière synergique avec l'activité enzymatique du composant
enzymatique. En outre, suivant l'invention, il est prévu une base
détergente qui permette d'améliorer significativement la rapidité et
l'efficacité de l'élimination du biofilm. C'est pour ces raisons que la
présente invention associe un agent mouillant et un agent dispersant et
éventuellement un agent séquestrant. Les actions conjointes de ces
agents du composant détergent de la composition selon l'invention permet
d'éliminer la partie superficielle du biofilm, de mouiller et de gonfler les
structures organiques du biofilm favorisant donc de cette façon
l'accessibilité du composant enzymatique qui fragilise et dégrade à son
tour la matrice du biofilm.
De façon tout aussi inattendue, il a été déterminé, dans le
cadre de la présente invention, qu'un tel traitement agit efficacement sur
les microorganismes responsables des maladies nosocomiales et
spécifiquement retrouvés en milieu hospitalier. Contre toute attente, il a
été montré que le traitement suivant l'invention permet d'obtenir des
résultats nettement et significativement supérieurs en termes
= d'élimination des biofilms par rapport aux techniques de traitement
actuellement appliquées en milieu hospitalier.
De préférence, selon le procédé suivant l'invention, ladite
étape de traitement de surface pour lutter contre les maladies
nosocomiales comprend une étape d'élimination des biofilms permettant
de réaliser un abattement des microorganismes responsables des
maladies nosocomiales. En effet, selon la présente invention, il est
considéré qu'une réduction (ou abattement) logarithmique d'au moins 1
Log des microorganismes protégés par les biofilms est significative pour
permettre de lutter contre les maladies nosocomiales, ce qui correspond
à un pourcentage de réduction d'au moins 90% des microorganismes
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protégés par les biofilms.
Cette réduction logarithmique est calculée en convertissant
la charge microbienne en log 10, en soustrayant le résultat de
l'échantillon test de l'échantillon témoin (contrôle), c'est-à-dire en
soustrayant la charge microbienne présente dans un environnement
donné (par exemple à la surface d'un outil médical ou à la surface d'un
sol) avant une étape de traitement de surface suivant l'invention de la
charge microbienne présente dans le même environnement suite à une
= étape de traitement de surface suivant l'invention.
Il est bien entendu que toute autre technique bien connue
de l'homme de métier et permettant de déterminer les quantités de
microorganismes donnant lieu à la formation de biofilms avant et après
traitement d'une surface peut également être utilisée dans le cadre de la
présente invention.
De préférence, selon le procédé suivant l'invention, ladite
étape de traitement de surface est réalisée par trempage pendant une
période de temps prédéterminée comprise entre 20 minutes et 24 heures
dans une solution de trempage comprenant ladite composition et une
phase aqueuse de dilution préalablement formée. Un traitement par
trempage est particulièrement indiqué pour nettoyer des surfaces ou des
outils médicaux (râpes orthopédiques, alésoirs, canules, endoscopes...)
dès lors que ces surfaces ou ces outils peuvent être plongés dans un
conteneur (cuve, bassin, ...) rempli avec ladite solution de trempage. Par
exemple, les outils médicaux peuvent séjourner plus ou moins
longtemps, par exemple quelques minutes, quelques heures ou quelques
jours dans la solution de trempage sans entraver la mise en uvre
d'autres interventions médicales. Dans le cas des endoscopes, ladite
solution de trempage peut être injectée dans les tuyaux des endoscopes
pour en assurer le nettoyage.
Avantageusement, selon l'invention, ladite étape de
traitement de surface par trempage est associée à une étape d'abrasion
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mécanique de ladite surface avec ladite solution de trempage, par
exemple par brossage mécanisé ou manuel ou par traitement aux
ultrasons. Une étape d'abrasion mécanique additionnelle permet à la
solution de trempage comprenant ladite composition en phase aqueuse
d'agir sur les différentes couches des biofilms mais aussi de participer
mécaniquement à la déstructuration de la matrice polymère et ainsi ôter
des pellicules de la surface des biofilms pour que les enzymes et les
autres composants de ladite composition atteignent encore mieux les
différentes couches des biofilms, ce qui assure un traitement optimal des
surfaces afin d'éliminer efficacement les biofilms.
De préférence, selon le procédé suivant l'invention, le pH
de ladite solution de trempage est ajusté à une valeur de pH comprise
entre 7 et 8.
De préférence, selon l'invention> le procédé comprend en
outre une étape supplémentaire ultérieure de traitement de ladite surface
à l'aide d'un biocide. Un traitement biocide désinfectant additionnel> suite
à l'action de la solution enzymatique lors de l'étape de traitement de
surface par trempage, permet d'assurer la destruction des bactéries
rendues libres en fin de traitement de ladite surface.
Eventuellement, cette étape de traitement à l'aide d'un
agent biocide peut être suivie par une étape de stérilisation, par exemple
par un passage à l'autoclave.
D'autres formes de réalisation du procédé suivant l'invention
sont indiquées dans les revendications annexées.
La présente invention porte également sur une nouvelle
utilisation d'une composition comprenant au moins un composant
détergent et au moins un composant enzymatique, pour lutter contre les
1
maladies nosocomiales par élimination de biofilms. Une élimination des
biofilms par trempage dans la composition diluée permet de lutter
efficacement contre les maladies nosocomiales puisque les composants
enzymatiques de la solution aqueuse de trempage permettent de
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déstructurer et d'éliminer les biofilms des surfaces traitées de telle sorte
que les biofilrns, en grande partie responsables des maladies
nosocomiales, sont éliminés. Cette action des enzymes est favorisée par
le fait qu'elle a lieu en synergie avec l'action du composant détergent de la
composition selon l'invention, lequel permet d'éliminer la partie
superficielle du biofilm, de mouiller et de gonfler les structures organiques
du biofilm et de favoriser ainsi l'accessibilité du composant enzymatique
qui fragilise et dégrade à son tour la matrice du biofilm.
De préférence, selon l'invention, ledit composant détergent
de la composition utilisée comprend un agent mouillant et un agent
dispersant.
Avantageusement, selon l'invention, ledit composant
détergent de la composition utilisée comprend en outre un agent
séquestrant.
De préférence, selon l'invention, ledit composant
enzymatique de la composition utilisée contient par exemple au moins une
protéase, au moins une laccase et au moins une polysaccharidase.
Plus particulièrement, la présente invention porte sur une
utilisation d'une composition comprenant au moins un composant
détergent comprenant un agent mouillant et un agent dispersant et
éventuellement un agent séquestrant, et au moins un composant
enzymatique contenant au moins une protéase, au moins une laccase et
au moins une polysaccharidase, pour l'élimination de sources de
contamination comprenant Staphylococcus aureus et/ou Escherichia coui
et/ou Pseudonrionas aeruginosa. Ces bactéries se développent
particulièrement bien en milieu hospitalier et sont responsables de
nombreuses infections. A titre d'exemple, le staphylocoque doré, retrouvé
chez 15 à 30% des individus sains, est très résistant et se transmet dès
lors très rapidement d'un patient à l'autre non seulement par transmission
directe via le personnel soignant mais aussi par transmission indirecte via
des objets (outils médicaux, ...) et même la poussière. Avec les bacilles,
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Staphylococcus aureus est considéré comme étant la principale bactérie
responsable des infections hospitalières et il convient donc de contrôler sa
dissémination responsable, en grande partie, des maladies nosoconniales
entrainant la mort du patient.
=
5
L'invention porte aussi sur une utilisation d'une composition
comprenant au moins un composant détergent et au moins un composant
enzymatique, pour le traitement de surfaces, d'outils médicaux ou de sols
afin de lutter contre les maladies nosocomiales par trempage.
De préférence, ledit composant détergent de ladite
10 composition utilisée comprend un agent mouillant et un agent dispersant.
Avantageusement, ledit composant détergent de ladite
composition utilisée comprenant en outre un agent séquestrant.
Préférentiellement, ledit composant enzymatique de ladite
composition utilisée contient par exemple au moins une protéase, au
15 moins une laccase et au moins une polysaccharidase.
D'autres formes de réalisation d'utilisation d'une composition
par trempage suivant l'invention sont indiquées dans les revendications
annexées.
= Le composant détergent comprenant un agent mouillant et
20 un agent dispersant et éventuellement un agent séquestrant agit tout
d'abord en éliminant une partie superficielle du biofilm et en mouillant
et/ou en gonflant les structures organiques du biofilm.
Le composant détergent favorise donc l'accessibilité du
composant enzymatique en déstructurant la matrice du biofilm. Le
25 composant enzymatique agit ensuite en synergie avec le composant
détergent et fragilise et dégrade à son tour la matrice du biofilm. Cette
action combinée des trois types d'enzyme et du composant détergent,
parfaitement compatible avec une action correcte des enzymes, favorise
l'accessibilité à la composition des couches plus profondes et permet un
30 détachement rapide et optimal de tout type de biofilm tout en préservant
le substrat. Une telle composition suivant l'invention réduit en outre
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l'apport de composés extérieurs dans les installations lors de l'étape de
nettoyage et simplifie donc les procédures de validation des étapes de
nettoyage. Ainsi, le composant détergent permet aux enzymes d'agir
rapidement sur l'ensemble des structures des biofilms, ce qui, en milieu
hospitalier où les outils, les chambres et les salles d'opération doivent
pouvoir être réutilisées très rapidement suite à une intervention,
représente un avantage certain.
L'agent dispersant du composant détergent permet
d'améliorer la séparation des particules d'une suspension afin de
prévenir l'agglutination, l'agrégation et/ou la décantation. Ledit agent
dispersant peut être un polymère soluble ou partiellement soluble dans
l'eau tel que par exemple le polyéthylène glycol, les dérivés de la
cellulose ou un polymère comprenant au moins un motif acide acrylique
ou ester acrylique. Préférentiellement, l'agent dispersant est un polymère
comprenant au moins un motif acide acrylique ou ester acrylique de
formule générale ¨(CH2-CH-COOR)- dans lequel R représente un groupe
hydrogène, alkyle ou alkyle substitué, aryle ou aryle substitué. En
particulier l'agent dispersant est un polymère ayant un poids moléculaire
moyen Mw compris approximativement entre 500 et 10000.
Plus préférentiellement, l'agent dispersant est un polymère
de l'acide acrylique. En particulier, l'agent dispersant peut être un
hompolynière de l'acide acrylique ayant un poids moléculaire moyen
compris approximativement entre 2000 et 6000.
Dans une variante avantageuse selon l'invention, le
composant détergent comprend une proportion l'agent dispersant
comprise entre 1 et 10% en poids par rapport au poids total du
composant détergent.
Plus particulièrement, selon la présente invention, ledit
agent dispersant dudit composant détergent est l'alkylglucoside en C6.
La présence d'un agent dispersant dans la composition
suivant l'invention pour éliminer les biofilms et lutter contre les maladies
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nosocomiales permet d'éviter toute agrégation de particules bactériennes
lors du nettoyage de surfaces, ce qui assure une élimination optimale
des particules de biofilms détachées d'un support sous l'action des
enzymes. En effet, plutôt que de s'agréger, ces particules restent
5 séparées
dans une suspension, ne se redéposent pas et ne ré-adhèrent
pas sur le support nettoyé.
L'agent mouillant du composant détergent est une
substance chimique amphiphile, ou une composition comprenant ladite
substance chimique amphiphile, qui modifie la tension superficielle entre
10 deux
surfaces. L'agent mouillant a pour avantage de favoriser l'étalement
d'un liquide sur un solide mais aussi d'accentuer le contact entre deux
surfaces. Plus particulièrement, l'agent mouillant favorise un contact
entre le composant détergent et une surface et, par conséquent, entre
=
les enzymes et leur substrat. Or, en milieu hospitalier, les surfaces à
15 traiter
sont souvent en inox ou en un matériau sur lequel l'application
d'un liquide donne lieu à la formation de gouttelettes. Cette
caractéristique des surfaces à traiter rend difficile une application
homogène d'une composition sous forme liquide pour lutter contre la
présence de biofilms. C'est pourquoi, l'agent mouillant est un constituant
20 particulièrement avantageux de ladite composition selon l'invention
puisqu'il permet, même sur des surfaces de type inox, un étalement
homogène de la composition et ainsi sa répartition parfaite sur les
surfaces à décontaminer, par exemple sur les outils chirugicaux et les
sols.
25 L'agent
mouillant peut être anionique, cationique, non-
ionique ou zwitterionique. Préférentiellement, l'agent mouillant peut être
un mouillant anionique ou non-ionique, c'est-à-dire que la partie
hydrophile est chargée négativement ou ne comporte aucune charge
nette, ou peut être une composition comprenant un mouillant anionique.
30 Plus
particulièrement, l'agent mouillant peut être un ester de saccharose
ou une composition comprenant un alkyle sulfate de sodium et un alcool.
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Avantageusement, et de préférence, dans le composant
détergent selon l'invention, ledit agent mouillant est non moussant à
chaud et est de préférence choisi dans le groupe des sulfates d'alkyle
sodique en C6 à C10, des sulfates d'alcool éthérés en C6 à Cio et des
5 sulfonates d'alkylearyles en C6 à C10.
Plus particulièrement, selon la présente invention, ledit
agent mouillant dudit composant détergent est le 2-éthylhexanol
éthoxylé.
Le fait que l'agent mouillant soit non moussant à chaud
10 permet
une utilisation de la composition suivant l'invention pour le
traitement d'outils médicaux présentant des tuyaux, comme par exemple
les endoscopes. En effet, l'agent mouillant étant non moussant, ceci
permet d'éviter la formation de mousse, sans altérer, bien au contraire,
les performances tensioactives et/ou émulsionnantes de la composition
15 selon l'invention. Il est bien entendu que l'apport d'une solution
détergente efficace sans génération de mousse limite les étapes de
rinçage, ce qui est particulièrement souhaitable, surtout pour les outils
médicaux présentant des tuyaux qui peuvent ainsi être réutilisés
rapidement pour une nouvelle intervention.
20 Dans une
forme de réalisation selon l'invention, le
composant détergent comprend une proportion d'agent mouillant
comprise entre 1 et 15% en poids par rapport au poids total du
composant détergent.
L'agent séquestrant est une substance chimique ayant la
25 capacité
à former des complexes avec des ions minéraux qu'il fixe sous
une forme empêchant leur précipitation par les réactions habituelles. A
=,
titre d'exemple, l'agent séquestrant peut être l'acide éthylène-diamine-
tétraacétique, le giucono-delta-lactone, le gluconate de sodium, le
gluconate de potassium, le gluconate de calcium, l'acide citrique, l'acide
30
phosphorique, l'acide tartrique, l'acétate de sodium, le sorbitol, un
composé comportant un atome de phosphore. Préférentiellement, l'agent
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séquestrant peut être un oxyde de phosphore tel qu'un phosphonate, un
phosphinate ou un phosphate ou leur mélange, ou un sel de celui-ci, une
amine ou un oxyde d'amine portant au moins, dans sa structure, un
groupement fonctionnel phosphine, oxyde de phosphine, phophinite,
phosphonite, phosphite, phosphonate, phosphinate ou phosphate, seul
ou en combinaison, ou un sel de ceux-ci.
Avantageusement, l'agent séquestrant est une substance
chimique compatible avec les substances utilisables dans les hôpitaux,
par exemple, l'agent séquestrant est préférentiellement un agent non
toxique pour la santé humaine.
Plus préférentiellement, l'agent séquestrant peut être un
phosphonate ou un sel de celui-ci, une amine ou un oxyde d'amine
comportant au moins, dans sa structure, un groupement fonctionnel
phosphine, oxyde de phosphine, phosphinite, phosphonite, phosphite,
phosphonate, phosphinate ou phosphate, seul ou en combinaison, ou un
sel de ceux-ci. A titre d'exemple non limitatif, le phosphonate peut être
de formule générale Ri(R20)(R30)P=0 dans lequel R1, R2 et R3
représentent indépendamment un groupe hydrogène, alkyle, alkyle
substitué, alkyle-amino substitué ou non, aminoalkyl substitué ou non,
aryle ou aryle substitué. A titre d'exemple non limitatif, l'amine ou l'oxyde
d'amine peuvent comporter un, deux ou trois substituant(s) de formule
générale CR4R5VV dans laquelle R4 et R5 représentent indépendamment
l'un de l'autre un groupe hydrogène, alkyle, alkyle substitué, alkyle-amino
substitué ou non, aminoalkyl substitué ou non, aryle ou aryle substitué, et
W représente un groupe phosphonate, phosphinate ou phosphate.
L'agent séquestrant peut être sous la forme d'un sel de
sodium, calcium, lithium, magnésium ou potassium ; préférentiellement,
l'agent séquestrant peut être sous la forme d'un sel de sodium, calcium
ou potassium.
De préférence, l'agent séquestrant est un agent qui peut
être utilisé sans danger lors d'interventions médicales, c'est-à-dire que
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l'agent séquestrant ne présente aucun danger pour la santé, seul ou en
association avec d'autres composants utilisés en milieu hospitalier.
Plus particulièrement, suivant l'invention, ledit agent
séquestrant dudit composant détergent est un sel de potassium à base
5 d'acide phosphonique modifié (N-oxyde ATMP).
Dans une forme de réalisation avantageuse selon
l'invention, ledit au moins un composant détergent comprend une
proportion d'agent séquestrant comprise entre 1 et 10% en poids par
rapport au poids total du composant détergent, ce qui représente un
10 optimum entre efficacité, stabilité et coût.
De préférence, ledit au moins un composant enzymatique
comprend une proportion de protéase(s) comprise entre 10 et 50%, une
= proportion de laccase(s) comprise entre 5 et 35% et une proportion de
polysaccharidase(s) comprise entre 5 et 20% en poids par rapport au
15 poids total du composant enzymatique, les 100% du composant
enzymatique étant éventuellement atteints à l'aide d'un excipient ou
solvant conventionnel, par exemple un alcool.
Le composant enzymatique selon l'invention présente
l'avantage d'être polyvalent, c'est-à-dire qu'il peut agir simultanément sur
20 diverses souches bactériennes, ce qui est particulièrement avantageux
en milieu hospitalier où de nombreuses souches bactériennes différentes
se développent simultanément.
Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le
composant enzymatique peut contenir entre 1 et 10 protéases,
25 préférentiellement entre 1 et 5 protéases, plus préférentiellement il
peut
contenir 2, 3, 4 ou 5 protéases.
Des exemples non limitatifs d'enzymes protéases
appartenant à la classe EC 3.4 et susceptibles d'être utilisées dans
l'invention sont les amino-peptidases (EC 3.4.11), les dipeptidases (EC
30 3.4.13), les dipeptidyl-peptidases et tripeptidyl-peptidases (EC
3.4.14),
les peptidyl-dipeptidases (EC 3.4.15), les sérine carboxypeptidases (EC
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3.4.16), les métallo carboxypeptidases (EC 3.4.17), les cystéine
carboxypeptidases (EC 3.4.18), les oméga peptidases (EC 3.4.19), les
sérine endopeptidases (EC 3.4.21), les cystéine endopeptidases (EC
3.4.22), les aspartique endopeptidases (EC 3.4.23), les métallo
endopeptidases (EC 3.4.24), les thréonine endopeptidases ((EC 3.4.25),
et les endopeptidases appartenant à la classe EC 3.4.99.
Préférentiellement, les protéases appartiennent à la classe
EC 3.4.21. Les protéases sont disponibles commercialement et sous
différentes formes incluant les poudres, les granulés, les suspensions,
les solutions liquides.
=
Les laccases utilisées dans l'invention appartiennent à la
classe EC 1.10.3.2. Les laccases sont des enzymes contenant du cuivre
et ont pour fonction d'oxyder un substrat en présence d'oxygène. Plus
spécifiquement, les laccases sont des oxydoréductases qui fonctionnent
avec l'oxygène moléculaire comme accepteur d'électrons.
La au moins une polysaccharidase utilisée dans l'invention
est une enzyme ayant pour fonction de briser des liaisons au sein des
= polysaccharides. Préférentiellement, la au moins une polysaccharidase
peut être une alpha-amylase, cellulase, hemi-cellulase, glucosidase,
beta-glucanase ou pectinase.
Plus préférentiellement, la au moins une polysaccharidase
peut être une alpha-amylase appartenant à la classe EC 3.2.1.1, ayant
pour fonction de briser des liens (1-4)-alpha-glycosidiques dans des
polysaccharides contenant trois unités ou plus alpha-(1-4)-D-glucose.
Préférentiellement, le composant enzymatique peut
= comprendre une proportion de laccase(s) approximativement de 30%,
une proportion de protéase(s) approximativement de 30%, une
proportion d'alpha-amylase(s) approximativement de 10% en poids par
rapport au poids total du composant enzymatique, les 100% du
composant enzymatique étant éventuellement atteints à l'aide d'un
= excipient ou solvant conventionnel.
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Selon un autre mode de réalisation préféré, si le composant
enzymatique comprend 2 protéases, la proportion de laccase(s) peut être
approximativement de 30%, la proportion totale de protéases
approximativement de 30%, la proportion d'alpha-amylase(s)
approximativement de 10% en poids par rapport au poids total du
composant enzymatique, les 100% du composant enzymatique étant
éventuellement atteints à l'aide d'un excipient ou solvant conventionnel.
Par exemple, le rapport entre chaque protéase peut être
compris entre 1:2 et 2:1, préférentiellement le rapport entre chaque
protéase peut être de 1:1. Les enzymes présentes dans le composant
enzymatique ont une action complémentaire sur le biofilm. Par exemple,
la laccase présente une grande efficacité sur les souillures non
attaquées par l'alpha-amylase ou les protéases. Comme mentionné plus
haut, le composant enzymatique, de par la présence simultanée d'au
moins trois types de d'enzymes, est polyvalent et peut agir en même
temps sur divers types de biofilms produits par diverses souches
bactériennes, ce qui est essentiel en milieu hospitalier.
Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le
composant enzymatique peut être une solution ou sous forme solide.
Préférentiellement, le composant enzymatique est une
solution dont le pH peut être compris approximativement entre 8 et 10.
Préférentiellement, te composant enzymatique est une solution aqueuse
dont le pH peut être compris approximativement entre 8,5 et 9,5; plus
préférentiellement le pH peut être approximativement de 9,0, et ceci pour
préserver au maximum l'intégrité des enzymes.
Alternativement, le composant enzymatique peut être sous
forme solide tel que par exemple sous forme d'un lyophilisat, de poudres,
de granulés ou sous tout autre forme permettant la solubilisation dudit
composant dans un solvant, puis il sera ultérieurement dissous dans ledit
solvant. Le solvant peut être de l'eau ou une solution aqueuse, acide,
basique, alcoolique, tamponnée ou neutre. Le composant enzymatique
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solubilisé pourra alors dans ce cas être ultérieurement dilué dans une
solution aqueuse contenant éventuellement un ou plusieurs composés
tels que par exemple des détergents pour former la solution de
nettoyage.
5 Comme
pour le composant enzymatique, le composant
détergent peut être sous forme solide à dissoudre dans un solvant et/ou
dans une phase aqueuse ou sous forme liquide.
Lorsqu'il est sous forme solide, il peut soit être mis
directement en solution dans la solution formée par le composant
10
enzymatique éventuellement déjà dilué dans la phase aqueuse, soit être
mis en solution dans un solvant, préalablement à sa dilution dans la
solution formée par le composant enzymatique et la phase aqueuse, ou
dans la phase aqueuse directement, avant la dilution du composant
enzymatique.
15 Lorsque
le composant détergent est sous forme liquide, les
100% du composant détergent sont éventuellement atteints
généralement à l'aide d'eau et, préalablement à l'application sur le
biofilm, il sera dilué dans une phase aqueuse, contenant éventuellement
déjà le composant enzymatique.
20
Eventuellement, selon le procédé de la présente invention,
le pH de ladite solution est ajusté à une valeur de pH comprise entre 6,5
et 7,5, plus particulièrement autour de 7.
Alternativement, ladite composition peut être sous forme
solide puis être dissoute avant utilisation dans un solvant afin d'obtenir,
25
lorsqu'elle sera diluée dans une phase aqueuse avant application sur un
biofilm, une solution dont le pH est compris approximativement entre 7 et
8. Dans une variante avantageuse selon l'invention, la composition est
= une solution prévue pour, lorsqu'elle est diluée dans une phase aqueuse
avant application sur le biofilm, former une solution présentant un pH
30 compris approximativement entre 6,5 et 7,5, plus particulièrement
d'environ 7. De cette façon, le pH de la solution de la composition est
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particulièrement approprié à l'action du composant enzymatique, en
= particulier de la laccase.
Alternativement, ladite composition peut être sous forme
solide puis être dissoute avant utilisation dans un solvant afin d'obtenir
5 une
solution qui sera ensuite diluée dans une phase aqueuse pour
obtenir une solution de nettoyage dont le pH est compris
approximativement entre 6,5 et 7,5, de préférence d'environ 7.
Selon le procédé de la présente invention, l'entièreté de la
matrice des biofilms est éliminée, le traitement de surface selon
10
l'invention ne laissant subsister que des bactéries nues , c'est-à-dire
des bactéries dépourvues de toute protection et qui peuvent ainsi être
facilement éliminées en totalité lors d'une utilisation ultérieure d'un
biocide, comme expliqué ci-après après rinçage de la composition.
Comme mentionné plus haut, la composition suivant
15
l'invention comprend un composant détergent qui favorise l'action des
enzymes en leur permettant d'atteindre rapidement les couches
inférieures des biofilms et pas uniquement leur couche supérieure. Les
enzymes peuvent donc agir très rapidement sur l'ensemble de la
structure des biofilms et ainsi mettre toutes les bactéries à nu non
1 20
seulement à la surface des biofilms mais aussi au niveau des couches
inférieures qui les constituent.
Les figures la à lf illustrent les colorations obtenues (les
zones entourées sont des zones présentant une coloration bleue) lors de
l'utilisation d'un kit de détection de la présence de biofilm pour évaluer
25
l'efficacité des techniques de nettoyage sur des râpes à pores étroits
après pré-nettoyage (la), après nettoyage dans une solution
d'Aniosyme (lb) et après nettoyage dans une solution de trempage
suivant l'invention (1c) mais aussi pour des râpes à pores larges après
pré-nettoyage (1d), après nettoyage dans une solution d'Aniosyme (le)
30 et après
nettoyage dans une solution de trempage suivant l'invention
(1f).
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Les figures 2a à 2f illustrent les colorations obtenues (les
zones entourées sont des zones présentant une coloration bleue) lors de
=.
l'utilisation d'un kit de détection selon le brevet EP 2537601 de la
présence de biofilm pour évaluer l'efficacité des techniques de nettoyage
5 sur des râpes après pré-nettoyage (2a), après nettoyage dans une
solution de trempage suivant l'invention (2b), après nettoyage dans une
solution de trempage suivant l'invention et brossage (2c), après
nettoyage dans une solution d'Aniosyme0 (2d), après nettoyage dans
une solution d'Aniosyme0 et brossage (2e) et après nettoyage dans une
10 solution
d'Aniosymee et brossage puis nettoyage dans une solution de
trempage suivant l'invention et brossage (2f).
1
Exemples
Exemple 1 - Nettoyage d'instruments médicaux par trempage dans une
15 solution de trempage suivant l'invention ¨ analyses ATP-métriques
Des essais ont été réalisés afin de déterminer si le procédé
suivant l'invention permet d'éliminer efficacement les biofilms présents sur
des instruments médicaux par trempage dans une solution aqueuse de
trempage suivant l'invention.
20 Cette
solution aqueuse de trempage a été préparée par
dilution d'un premier produit comprenant un composant détergent
comprenant un agent séquestrant, un agent mouillant et un agent
dispersant et d'un deuxième produit comprenant un composant
enzymatique comprenant au moins une protéase, au moins une laccase et
25 au moins
une polysaccharidase, dans de l'eau de distribution à 45 C de
telle sorte que la solution aqueuse de trempage comprend une
concentration de 0,25% (v/v) dudit premier produit et une concentration de
0,1% (v/v) dudit deuxième produit.
Préalablement au trempage des instruments dans la solution
30 de
trempage, ces derniers ont été lavés au laveur-désinfecteur de telle
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sorte à être prêts à l'emploi selon les procédures et les normes
d'application dans les hôpitaux.
Des analyses ATP-métriques, afin de mesurer la présence
d'Adénosine TriPhosphate, ont été effectuées pour déterminer :
- la quantité de molécules d'ATP sur la surface des instruments
médicaux avant nettoyage avec la solution aqueuse de trempage
=
suivant l'invention,
- la quantité de molécules d'ATP dans la solution aqueuse de
trempage directement suite à l'immersion des instruments
médicaux (c'est-à-dire avant le nettoyage par trempage à
proprement parlé) dans la solution aqueuse de trempage, et
- la quantité de molécules d'ATP dans la solution aqueuse de
trempage après 30 minutes de trempage des instruments médicaux
dans la solution aqueuse de trempage.
La quantité de molécules d'ATP à la surface des instruments
médicaux a été déterminée par écouvillonnage de la surface des
instruments avant d'appliquer le protocole d'analyse de la méthode ATP
Testing proposée par 3M-rm (3M Clean-Trace). Cette technique d'analyse
permet de mesurer une quantité de lumière produite (URL) qui est
directement proportionnelle à la quantité d'énergie biologique présente
dans la solution analysée, c'est-à-dire à la quantité (concentration) de
microorganismes dans la solution analysée. La mesure de la quantité de
lumière émise permet donc de mettre en évidence et de quantifier la
présence de molécules d'ATP et donc de déterminer la quantité
= 25 (concentration) de microorganismes dans la solution analysée
(puisque
l'ATP est une molécule essentielle à la vie microbienne). Par conséquent,
cette technique d'analyse permet de déterminer dans quelle mesure la
solution aqueuse de trempage suivant l'invention permet d'éliminer les
biofilms pour permettre un accès aux microorganismes dont la quantité est
mesurée par ATP-métrie.
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=
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Les résultats obtenus ont été interprétés sur base du tableau
1 suivant et sont présentés au tableau 2.
Tableau 1
Quantité de Interprétation
lumière produite
(URL)
<500 URL Pas d'action requise : peu de bactéries
>500 URL et Action à entreprendre si zone à haut
risque :
<999 URL bactéries présentes
>1000 URL Action à entreprendre : nombreuses
bactéries
présentes
Tableau 2
ATP en
ATP en
solution dans
solution dans
la solution
ATP sur la la solution
aqueuse de
surface avant aqueuse de
trempage
nettoyage trempage
après
(URL) suite à
nettoyage par
l'immersion
trempage
(URL)
(URL)
Canule d'aspiration pour
309
non mesuré non mesuré
coelioscopie
Alésoir 1576 14
185
Râpe orthopédique pour
235
non mesuré non mesuré
hanches
Râpe orthopédique pour
7
non mesuré non mesuré
hanches : le pertuis
Canule de colonne non mesuré non mesuré
non mesuré
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23
Canule ORL non mesuré non mesuré non mesuré
Les analyses ATP-métriques ont permis de déterminer une
quantité importante de biofilms (molécules d'ATP) pour l'alésoir avant
nettoyage par trempage (1576 URL) tandis que de faibles niveaux
d'encrassement (contamination par la présence de biofilms) ont été
relevés pour les autres instruments médicaux qui n'ont par conséquent
pas fait l'objet d'un nettoyage par trempage dans la solution aqueuse de
trempage suivant l'invention. Les résultats obtenus avec l'alésoir
permettent de constater que le niveau d'ATP mesuré directement après
l'immersion de l'alésoir dans la solution de trempage est très faible (14
URL) mais que ce niveau augmente de façon significative après 30
minutes de trempage dans la solution de trempage. Ceci indique
clairement qu'un trempage dans la solution de trempage suivant l'invention
permet de décrocher les biofilms de la surface des instruments médicaux,
en l'occurrence de l'alésoir dans le cas présent, ce qui permet d'accéder
aux microorganismes.
Exemple 2 - Essais comparatifs de nettoyage d'instruments médicaux par
trempage dans une solution de trempage suivant l'invention et par
autoclavage ¨ analyses par utilisation d'un kit de détection
Des essais comparatifs ont été réalisés pour comparer, en
terme d'élimination de biofilms, un nettoyage réalisé par trempage durant
minutes dans une solution aqueuse de trempage suivant l'invention
(telle que décrite à l'exemple 1) à un nettoyage réalisé par autoclavage à
25 134 C durant 90 minutes (technique actuellement d'application en milieu
hospitalier).
Préalablement à ces deux types de nettoyage, les
instruments médicaux ont d'abord été pré-nettoyés dans un nettoyeur-
désinfecteur de telle sorte à être prêts à l'emploi selon les procédures et
30 les normes d'application dans les hôpitaux.
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= WO 2014/079938
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Pour mesurer l'efficacité de chacun de ces nettoyages, un kit
de détection a été utilisé sur les surfaces des instruments médicaux pour
mettre en évidence la présence ou l'absence de biofilnns :
- avant nettoyage,
5 - après
nettoyage par trempage dans une solution aqueuse de
trempage suivant l'invention, et
- après nettoyage par passage à l'autoclave.
Le kit de détection est composé de deux produits, un réactif
de coloration et un réactif de nettoyage. Le colorant bleu présent dans le
réactif de coloration adhère spécifiquement aux EPS (Ddracellular
Polymeric Substances) formant la matrice protective du biofilm. La surface
à analyser est aspergée avec la solution de coloration. Après 5 minutes
d'action sur la surface, l'excédent de la solution est absorbé. Ensuite la
surface est rincée à l'aide de fa solution nettoyante qui requiert un temps
15 de pose
de cinq minutes. La surface est enfin rincée à l'eau et est
analysée. La présence ou l'absence de biofilm est démontrée par une
couleur bleue plus ou moins foncée selon la quantité de biofilm existant
sur la surface. Une coloration bleu intense indique une présence
importante de biofilm.
20 Les
résultats obtenus, en terme de coloration à la surface
des instruments analysés, sont présentés au tableau 3 ci-dessous pour les
instruments médicaux testés.
Tableau 3
Après trempage
Après pré-
,
dans la solution
nettoyage au Après
de trempage
nettoyeur-autoclavage
suivant
désinfecteur
l'invention
Alésoir coloration bleue absence de coloration bleue
intense coloration bleue
moyenne
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Canule
coloration bleue absence de
d'aspiration pour non mesuré
intense coloration bleue
coelioscopie
Râpe coloration bleue absence de coloration bleue
orthopédique intense coloration bleue moyenne
Canule ORL coloration bleue faible coloration
non mesuré
intense bleue
Il ressort de ces essais que les instruments pré-nettoyés par
passage dans un nettoyeur-désinfecteur comportent tous des biofilms
(coloration bleue intense) et donc que cette technique actuelle de
5 nettoyage d'application dans les hôpitaux laisse subsister des biofilms
sur
les instruments médicaux. Par contre, ces résultats indiquent clairement
qu'un trempage dans une solution aqueuse de trempage suivant
l'invention permet d'éliminer très significativement les biofilms à la surface
des instruments médicaux, ce qu'un autoclavage ne permet pas
10 puisqu'une coloration bleue est toujours relevée suite à ce type de
nettoyage.
Exemple 3 - Essais comparatifs de nettoyage d'instruments médicaux par
trempage dans une solution de trempage suivant l'invention, par trempage
15 dans une solution aqueuse d'Aniosyme0 et par autoclavage ¨ analyses
ATP-métriques
Des essais comparatifs ont été réalisés pour comparer, en
terme d'élimination de biofilms, un nettoyage réalisé par trempage durant
minutes dans une solution aqueuse suivant l'invention (telle que décrite
20 et préparée à l'exemple 1), à un nettoyage réalisé par trempage durant
15
minutes dans une solution aqueuse d'Aniosyme0 (solution prétendant
éliminer les biofilms) à 0,5% préparée selon les prescriptions du fabricant
et à un nettoyage réalisé par autoclavage à 134 C durant 90 minutes.
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Préalablement à ces trois types de nettoyage, les
instruments médicaux ont d'abord été pré-nettoyés dans un nettoyeur-
. désinfecteur de telle sorte à être prêts à l'emploi selon les
procédures et
les normes d'application dans les hôpitaux.
Suite aux trempages soit dans une solution aqueuse suivant
l'invention, soit dans une solution aqueuse d'Aniosyme suivant les
prescriptions du fabricant, les instruments médicaux ont été rincés à l'eau
claire mais également autoclavés.
Des analyses ATP-métriques, selon le
protocole d'analyse de la méthode ATP Testing proposée par 3M-rm (3M
Clean-Trace), ont été effectuées pour mesurer :
- la quantité de molécules d'ATP à la surface des instruments
médicaux avant nettoyage,
- la quantité de molécules d'ATP à la surface des instruments
médicaux après 30 minutes de trempage dans la solution de
trempage suivant L'invention et après autoclavage,
- la quantité de molécules d'ATP à la surface des instruments
médicaux après 15 minutes de trempage dans la solution aqueuse
d'Aniosyme et après autoclavage, et
- la quantité de molécules d'ATP à la surface des instruments
médicaux après autoclavage à 134 C durant 90 minutes.
= Les résultats obtenus ont été interprétés selon
les critères mentionnés au tableau 1 et sont présentés au tableau 4 ci-
dessous.
Tableau 4
ATP après ATP après ATP après
pré- trempage trempage
ATP après
nettoyage dans la dans une
autoclavage
au solution de solution
(URL)
nettoyeur- trempage d'Aniosyme
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désinfecteur suivant et
(URL) l'invention et
autoclavage
autoclavage (URL)
(URL)
Alésoir 14
non mesuré non mesuré non mesuré
Canule 1 418,5 non mesuré 15
non mesuré
Canule 2 476,5
non mesuré non mesuré non mesuré
Canule 3 non mesuré non mesuré
10
Râpe 14
non mesuré non mesuré non mesuré
Pince à dents large
231
non mesuré non mesuré non mesuré
droite
Pince à dente
437
non mesuré non mesuré non mesuré
penchée
Canule 2 (extérieur) 522
non mesuré non mesuré non mesuré
Canule ORL large 569,5 " 12
non mesuré non mesuré
Canule ORL fine 400 non mesuré 32
non mesuré
Canule d'aspiration
2487,5 9
non mesuré non mesuré
pour coelioscopie
Une valeur ATP très élevée (2487,5 URL) est observée pour
la canule d'aspiration pour coelioscopie avant les nettoyages. Ceci indique
=
une grande quantité de biofilms résiduels après un pré-nettoyage dans un
nettoyeur-désinfecteur et donc que les instruments censés être prêts à
l'emploi comportent malgré tout encore des biofilms protégeant des
microorganismes potentiellement responsables des maladies
nosocomiales.
Par contre, après le trempage dans la solution de trempage
suivant l'invention, le niveau ATP (ou quantité de molécules d'ATP)
descend à un niveau très bas (9 URL), indiquant un niveau de propreté
élevé, correspondant à une réduction logarithmique de 1,6 Log des
microorganismes protégés par les biofilms et responsables des maladies
=
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nosocomiales, c'est-à-dire à un pourcentage de réduction supérieur à 90%
des microorganismes protégés par les biofilms. Des résultats similaires
=
sont obtenus pour la canule ORL large pour laquelle une réduction
logarithmique de 2,44 Log est notée, ce qui correspond à un pourcentage
5 de
réduction supérieur à 90% des microorganismes protégés par les
==
biofilms. Les autres instruments analysés présentent des valeurs ATP
faible à moyenne avant les nettoyages et n'ont donc pas été soumis à un
nettoyage avec la solution de trempage suivant l'invention.
10 Exemple 4-
Essais comparatifs de nettoyage d'instruments médicaux par
trempage dans une solution de trempage suivant l'invention et par
trempage dans une solution aqueuse d'Aniosvme0 ¨ analyses par
utilisation d'un kit de détection
Des essais comparatifs ont été réalisés pour comparer, en
15 terme
d'élimination de biofilms, un nettoyage réalisé par trempage durant
30 minutes dans une solution aqueuse suivant l'invention (telle que décrite
et préparée à l'exemple 1), à un nettoyage réalisé par trempage durant 15
minutes dans une solution aqueuse d'Aniosymee (solution prétendant
éliminer les biofilms) à 0,5% préparée selon les prescriptions du fabricant.
Préalablement à ces deux types de nettoyage, les
instruments médicaux ont d'abord été pré-nettoyés dans un nettoyeur-
désinfecteur de telle sorte à être prêts à l'emploi selon les procédures et
les normes d'application dans les hôpitaux.
25 Un
rinçage à l'eau claire des instruments a été effectué suite
aux nettoyages par trempage.
Pour mesurer l'efficacité de chacun de ces nettoyages, un kit
de détection tel que décrit à l'exemple 2 a été utilisé sur les surfaces des
instruments médicaux :
30 - avant nettoyage,
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-
après nettoyage par trempage durant 30 minutes dans une solution
de trempage suivant l'invention, et
=
- après nettoyage par trempage durant 15 minutes dans une solution
= de trempage d'Aniosyrne0 selon les prescriptions du fabricant.
5 La
présence ou l'absence de biofilm est démontrée par une
couleur bleue plus ou moins foncée selon la quantité de biofilm existant
sur la surface. Une coloration bleu intense indique une présence
importante de biofilm.
Les résultats obtenus sont présentés au tableau 5 ci-
10 dessous pour les instruments médicaux testés.
Tableau 5
Après trempage Après trempage
Après pré-
= dans la
solution dans une
nettoyage au
de trempage
solution
nettoyeur-
suivant
d'Aniosyme
désinfecteur
['invention
Râpe coloration
bleue faible coloration coloration bleue
orthopédique à intense bleue
intense
pores étroits (figure la) (figure 1c)
(figure lb)
Râpe coloration
bleue faible coloration coloration bleue
orthopédique à intense bleue
intense
pores larges (figure 1d) (figure lf)
(figure le)
Pince coloration bleue faible
coloration coloration bleue
d'orthodontie intense bleue
intense
Canule
coloration bleue faible
coloration coloration bleue
= d'aspiration pour
intense bleue
intense
coelioscopie
Canule ORL coloration
bleue faible coloration coloration bleue
(embout large) intense bleue
intense
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Il ressort de ces essais, et comme illustré aux figures la à 1f,
que les instruments pré-nettoyés par passage dans un nettoyeur-
désinfecteur comportent tous des biofilms (coloration bleue intense) et
donc que cette technique actuelle de nettoyage d'application dans les
5 hôpitaux laisse subsister des biofilms sur les instruments médicaux. Par
contre, ces résultats indiquent clairement qu'un trempage dans une
solution aqueuse de trempage suivant l'invention permet d'éliminer très
significativement les biofilms à la surface des instruments médicaux, ce
qu'un trempage dans une solution aqueuse d'Aniosyrne ne permet qu'en
10 une moindre mesure.
Exemple 5: Essais comparatifs de nettoyage d'instruments médicaux
(râpes) par trempage dans une solution de trempage suivant l'invention et
par trempage dans une solution aqueuse d'Aniosyme associés à une
15 étape de brossage manuel ¨ analyses par utilisation d'un kit de
détection
Des essais comparatifs ont été réalisés pour comparer, en
terme d'élimination de biofilms, un nettoyage réalisé par trempage durant
30 minutes dans une solution aqueuse de trempage suivant l'invention
20 (telle que décrite à l'exemple 1) et associé à une étape de brossage
manuel à un nettoyage réalisé par trempage durant 15 minutes dans une
solution aqueuse d'Aniosyme (solution prétendant éliminer les biofilms) à
0,5% préparée selon les prescriptions du fabricant et associé à une étape
de brossage manuel.
25 Préalablement à ces deux types de nettoyage, les
instruments médicaux (râpes) ont d'abord été pré-nettoyés dans un
nettoyeur-désinfecteur de telle sorte à être prêts à l'emploi selon les
procédures et les normes d'application dans les hôpitaux.
Pour mesurer l'efficacité de chacun de ces nettoyages, un kit
30 de détection tel que décrit à l'exemple 2 a été utilisé sur les surfaces
des
râpes :
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- avant nettoyage,
- après nettoyage par trempage durant 30 minutes dans une solution
de trempage suivant l'invention,
- après nettoyage par trempage durant 30 minutes dans une solution
de trempage suivant l'invention et brossage manuel,
- après nettoyage par trempage durant 15 minutes dans une solution
de trempage d'Aniosyme selon les prescriptions du fabriquant,
- après nettoyage par trempage durant 15 minutes dans une solution
de trempage d'Aniosynne selon les prescriptions du fabriquant et
brossage manuel, et
- après un premier nettoyage par trempage durant 15 minutes dans
une solution de trempage d'Aniosyme selon les prescriptions du
fabriquant et brossage manuel suivi d'un deuxième nettoyage par
trempage dans une solution de trempage suivant l'invention et
brossage manuel.
Les résultats obtenus sont présentés au tableau 6 ci-
dessous.
La présence ou l'absence de biofilm est démontrée par une
couleur bleue plus ou moins foncée selon la quantité de biofilm existant
sur la surface. Une coloration bleu intense indique une présence
importante de biofilm.
Tableau 6
(a) (b) (c) (d) (e) (f)
Après pré- Après (b) + Après (d) (c)+
(e)
nettoyage trempage brossage trempage
suivant dans une brossage
l'invention solution
d'Aniosyme
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=
32
Râpes coloration faible absence coloration coloration absence
pores bleue coloration de bleue
bleue de
larges moyenne
bleue coloration moyenne moyenne coloration
Râpes coloration faible absence coloration coloration absence
pores bleue coloration de bleue
bleue de
étroits intense
bleue coloration intense moyenne coloration
(figure 2a) (figure 2b) (figure 2c) (figure 2d)
(figure (figure 2f)
2e)
I
Ces résultats ainsi que les figures 2a à 2f montrent qu'un
pré-nettoyage supposé fournir des râpes prêtes à l'emploi laisse subsister
des biofilms (coloration moyenne à intense selon la taille des pores des
râpes).
Par ailleurs, il ressort de ces essais qu'un nettoyage par
trempage dans une solution aqueuse d'Aniosyme0 ne permet pas non
plus d'éliminer tout le biofilm présent (coloration moyenne à intense)
même lorsqu'un brossage manuel est effectué (coloration moyenne).
10 Par
contre, un trempage dans une solution de trempage
suivant l'invention permet d'éliminer significativement les biofilms
puisqu'une faible coloration bleue est observée suite à ce nettoyage.
De plus, si le trempage dans une solution de trempage
suivant l'invention est associé à une étape de brossage manuel, le
15 nettoyage selon l'invention permet d'éliminer totalement les biofilms de
la
surface des râpes. Le même constat peut être uniquement établi si un
nettoyage avec une solution d'Aniosyme associé à un brossage manuel
est suivi d'un nettoyage par trempage dans une solution suivant l'invention
associé à un brossage manuel.
20 Le fait
que, sans l'étape de brossage manuel, le trempage
dans une solution de trempage suivant l'invention laisse subsister une
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faible coloration bleue s'explique par l'action de la solution de trempage qui
déstructure le biofilm mais sans toutefois le décoller totalement des
surfaces. C'est pourquoi une étape de brossage manuel est
particulièrement indiquée.
Exemple 6: Nettoyage d'endoscopes avec une solution de trempage
suivant l'invention
Des endoscopes propres mais déclassés (non utilisés depuis
plusieurs années) et non stérilisés ont été utilisés pour déterminer
l'efficacité de la solution de trempage suivant l'invention pour le nettoyage
des endoscopes.
= Une première étape a consisté à réaliser une mise à blanc
des endoscopes dans un lave endoscope selon un protocole et une
procédure connue avec les solutions commerciales Soluscope E (solution
enzymatique) à 0,5% et Soluscope D (solution désinfectante à base de
glutaraldéhyde) selon les prescriptions du fabricant.
Une deuxième étape a porté sur la mise à blanc du lave
endoscope avec une solution suivant l'invention (telle que décrite à
l'exemple 1) en suivant le programme de lavage prévu à cet effet par le
fabricant (cycle de 30 minutes : désinfection ¨ rinçage ¨ désinfection ¨
vidange ¨ rinçage ¨ séchage).
Une troisième étape a porté sur le nettoyage des
endoscopes dans le lave endoscope avec une solution suivant l'invention
(telle que décrite à l'exemple 1) et avec une solution désinfectante
commerciale (Soluscope D) suite aux deux étapes précédentes. Ce
nettoyage dans le lave endoscope consiste en un cycle de 35 minutes
comprenant les étapes séquentielles suivantes : test d'étanchéité ¨ pré-
nettoyage ¨ nettoyage ¨ rinçage ¨ désinfection ¨ rinçage ¨ séchage.
a) analyses de la présence de biofilm suite à la première éta_pe
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Suite à la mise à blanc des endoscopes par nettoyage standard dans
un lave endoscope, les analyses suivantes ont été réalisées :
= 5
- analyse bactériologique de l'intérieur de la canule de biopsie de
l'endoscope par écouvillonnage à l'aide d'une brosse à endoscope
plongée ensuite dans de l'eau peptonée jusqu'à analyse au
laboratoire par étalement sur milieu de culture non sélectif et par
mesures Bart Test selon les recommandations du fabricant.
10 Ces
analyses de l'endoscope mis à blanc ont permis de montrer
que le nettoyage standard au lave endoscope ne donne pas lieu au
développement de microorganismes sur les milieux de culture.
Cependant, les Bart Test ont réagi positivement, ce qui indique
quand même la présence de microorganismes vivants et donc de
15 bactéries susceptibles de former des biofilms.
- analyse bactériologique du lave endoscope (grille d'évacuation,
goulot d'évacuation, filtre) par écouvillonnage, les écouvillons
obtenus étant conservés dans de l'eau peptonée jusqu'à analyse
au laboratoire par étalement sur milieu de culture non sélectif, par
20 analyse
ATP-métrique (comme décrite aux exemples précédents)
=
et par mesures Bart Test.
Les comptages des bactéries se développant sur boites de pétri ont
permis de mettre en évidence une forte présence de
microorganismes au niveau du goulot d'évacuation du lave
25 endoscope
(colonies de couleur rouge) ainsi qu'au niveau de la
grille d'évacuation (colonie jaune-dorée) et du filtre (colonie rouge).
Les analyses ATP-métriques ont quant à elles révélés une faible
présence de microorganismes sur ces mêmes zones du lave
endoscope (valeurs URL inférieures à 500).
30 Un
repiquage des colonies se développant sur le milieu de culture
non sélectif sur des milieux spécifiques (Petrifilnri Staph Express
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= 35
3M) a permis de déterminer que ces colonies sont formées par
Staphylococcus aureus.
Les mesures Bart Test ont réagi positivement pour les
prélèvements effectués au niveau de la grille d'évacuation et du
filtre du lave endoscope.
Il ressort donc de ces analyses que tant les endoscopes mis à
blanc que le lave endoscope utilisé pour réaliser cette mise à blanc
selon les procédures actuelles comportent toujours des
microorganismes susceptibles de former du biofilm et donc que ces
procédures ne sont pas optimales.
b) analyses de la présence de biofilm suite à la deuxième étape
Suite à la mise à blanc du lave endoscope avec une solution de
trempage suivant l'invention, une analyse bactériologique de l'eau de
rinçage du lave endoscope a été réalisée par étalement sur milieu de
culture et par mesures Bart Test.
Des colonies bactériennes ont été dénombrées sur le milieu de culture
non sélectif (28 CFU/150p1) puis repiquées sur un milieu sélectif pour la
croissance des staphylocoques, ce qui a permis d'établir la présence
de Staphylococcus aureus dans les eaux de rinçage du lave
endoscope suite au nettoyage avec la solution de trempage suivant
l'invention. Les mesures Bart Test ont confirmé cette présence de
bactéries dans les eaux de rinçage du lave endoscope.
Ces essais permettent de conclure que la solution de trempage suivant
l'invention assure le décrochage des bactéries dans le lave endoscope,
ce qui permet d'assurer, par la suite, un meilleur nettoyage des
endoscopes, le lave endoscope ne constituant plus une source de
contamination.
c) analyses de la présence de biofilm suite à la troisième étape
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Suite au nettoyage avec la solution de trempage suivant l'invention,
des endoscopes préalablement mis à blanc (selon !a première étape)
dans un lave endoscope préalablement mis à blanc (selon la deuxième
5 étape) et
à une désinfection (Soluscope D), des analyses
bactériologiques de l'eau de rinçage du lave endoscope et des
endoscopes ont été réalisées par étalement sur milieu de culture et par
mesures Bart Test.
Des colonies bactériennes ont été dénombrées dans l'eau de rinçage
10 suite au
nettoyage des endoscopes avec la solution selon l'invention
(colonies rouges, 32 CFU/150p1). Les bactéries formant ces colonies
ont été identifiées comme étant des Staphylococcus aureus. Les
mesures Bart Test ont également indiqué la présence de bactéries
dans l'eau de rinçage.
15 Ceci
indique que la solution de trempage suivant l'invention permet de
décrocher des bactéries encore présentes dans les endoscopes et/ou
dans le lave endoscope même lorsqu'ils ont été préalablement mis à
blanc.
L'analyse des endoscopes, par écouvillonnage et étalement des
20
écouvillons obtenus sur boites de pétri, n'a pas permis de mettre en
évidence la présence de bactéries. Par contre, les mesures Bart Test
:==
ont révélé la présence de bactéries au niveau des endoscopes même
après lavage avec la solution de trempage suivant l'invention.
Il est bien entendu que la présente invention n'est en aucune
25 façon
!imitée aux formes de réalisations décrites ci-dessus et que bien des
modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre des
revendications annexées.
