Sélection de la langue

Search

Sommaire du brevet 2088379 

Énoncé de désistement de responsabilité concernant l'information provenant de tiers

Une partie des informations de ce site Web a été fournie par des sources externes. Le gouvernement du Canada n'assume aucune responsabilité concernant la précision, l'actualité ou la fiabilité des informations fournies par les sources externes. Les utilisateurs qui désirent employer cette information devraient consulter directement la source des informations. Le contenu fourni par les sources externes n'est pas assujetti aux exigences sur les langues officielles, la protection des renseignements personnels et l'accessibilité.

Disponibilité de l'Abrégé et des Revendications

L'apparition de différences dans le texte et l'image des Revendications et de l'Abrégé dépend du moment auquel le document est publié. Les textes des Revendications et de l'Abrégé sont affichés :

  • lorsque la demande peut être examinée par le public;
  • lorsque le brevet est émis (délivrance).
(12) Demande de brevet: (11) CA 2088379
(54) Titre français: SYSTEMES BIOLOGIQUES COMPORTANT DES GENES INDUCTIBLES PAR LE STRESS ET PROTEINES DECELABLES POUR LA BIOSURVEILLANCE ET LA TOXICOLOGIE ENVIRONNEMENTALE
(54) Titre anglais: BIOLOGICAL SYSTEMS INCORPORATING STRESS-INDUCIBLE GENES AND REPORTER CONSTRUCTS FOR ENVIRONMENTAL BIOMONITORING AND TOXICOLOGY
Statut: Morte
Données bibliographiques
(51) Classification internationale des brevets (CIB):
  • C12Q 1/68 (2006.01)
  • A01K 67/033 (2006.01)
  • C07K 14/435 (2006.01)
  • C12M 1/34 (2006.01)
  • C12Q 1/18 (2006.01)
  • C12Q 1/34 (2006.01)
(72) Inventeurs :
  • JONES, DONALD (Canada)
  • CANDIDO, EDWARD PETER MARIO (Canada)
  • STRINGHAM, EVE GABRIELLE (Canada)
(73) Titulaires :
  • UNIVERSITY OF BRITISH COLUMBIA (Canada)
(71) Demandeurs :
  • JONES, DONALD (Canada)
  • CANDIDO, EDWARD PETER MARIO (Canada)
  • STRINGHAM, EVE GABRIELLE (Canada)
(74) Agent: SMART & BIGGAR
(74) Co-agent:
(45) Délivré:
(22) Date de dépôt: 1993-01-29
(41) Mise à la disponibilité du public: 1994-07-30
Licence disponible: S.O.
(25) Langue des documents déposés: Anglais

Traité de coopération en matière de brevets (PCT): Non

(30) Données de priorité de la demande: S.O.

Abrégés

Abrégé anglais


Abstract
A method and kit for detecting toxins and pollutants is
disclosed. The kit includes a transgenic organism having a
stress-inducible control region linked to a gene encoding a
detectable protein wherein said control region regulates the
expression of said detectable protein; exposing said organism to
said sample; and determining the amount of detectable protein
produces. Exposure of this organism to a toxin or pollutant
induces the production of the detectable protein which can be
easily measured. This invention provides a rapid and reliable
system for testing samples for the presence of toxins or
pollutants.

Revendications

Note : Les revendications sont présentées dans la langue officielle dans laquelle elles ont été soumises.



THE EMBODIMENTS OF THE INVENTION IN WHICH AN EXCLUSIVE
PROPERTY OR PRIVILEGE IS CLAIMED ARE DEFINED AS FOLLOWS:

1. A method of detecting toxins or pollutants in a sample
comprising:
- providing a transgenic organism having a stress-inducible
control region linked to a gene encoding a detectable protein,
wherein said control region regulates the expression of said
detectable protein;
- exposing said organism to said sample; and
- determining the amount or detectable protein produced.

2. The method according to claim 1 wherein said organism is
a nematode.

3. The method according to claim 1 wherein said organism is
a member of the genus Caenorhabditis.

4. A method according to claim 1 wherein said organism is
Caenorhabditis elegans.

5. A method according to claim 4 wherein said
Caenorhabditis elegans is selected from the group consisting of
PC71, PC72 and PC73.

6. The method according to claim 1 wherein said control
region includes a stress-inducible promoter derived from a heat
shock gene.

7. A method according to claim 6 wherein said heat shock


gene is hsp 16.


8. The method according to claim 1 wherein said second gene
consists of E. coli lacZ gene.


9. The method according to claim 1 wherein said sample is
an environmental sample selected from the group consisting of
water, soil and sludge.


10. A kit for detecting toxins or pollutants in a sample
comprising
(a) a test chamber containing at least one transgenic
organism having a stress-inducible control region linked to a gene
encoding a detectable protein, wherein said control region
regulates the expression of said detectable protein; and
(b) means for detecting the detectable protein.


11. The kit according to claim 10 wherein said organism is a
nematode.


12. The kit according to claim 10 wherein said organism is a
member of the genus Caenorhabditis.


13. The kit according to claim 10 wherein said organism is
Caenorhabditis elegans.



14. The kit according to claim 13 wherein said
Caenorhabditis elegans is selected from the group consisting of
PC71, PC72 and PC73.


15. The kit according to claim 10 wherein said control
region includes a stress-inducible promoter derived from a heat
shock gene.

16. The kit according to claim 15 wherein said heat shock
gene is hsp 16.

17. The kit according to claim 10 wherein said second gene
consists of E. coli lacZ gene.

18. The kit according to claim 10 wherein said sample is an
environmental sample selected from the group consisting of water,
soil and sludge.

19. A transgenic organism having a stress-inducible a
control region linked to a gene encoding a detectable protein
wherein said control region regulates the expression of said
detectable protein.

20. The transgenic organism according to claim 19 wherein
said organism is a member of the genus Caenorhabditis.

21. The transgenic organism according to claim 19 wherein
said organism is selected from the group consisting of PC71, PC72
and PC73.

Description

Note : Les descriptions sont présentées dans la langue officielle dans laquelle elles ont été soumises.


J~N.29 '9~ 17:35 613-Z32-8440 P.~5
do ot ~1.
2088379

TtTL13: Biological ~gLenn~ IncorpDr~ rtre~ln~ueible eenos and r~porltr
ee~lrucl- fer onvi~onn~onl~l blon~o~ ln~ ~n~ ~ol~lcolo~r.
YENTO~S:
rt Po~or ~l~r~ C~dido
31~3 ~r. 281h ~v-nue
V~
V6L IX~
C~n~-

To~:~6o~ 6 og9l
Evo t:obriel1e ~l~in~b~m
2-97~ Rln,~woot AY~UO
Y~uveJr, 1
VSV 217
C~n~t-
Tol:(604~-8~6-8034
Don~ld Jonor
S-6630 SUtlo~ Al~enuo
~by, ~.C.
VSH 3C6
C~n~
T~ 6~4~-437 4S93
FI~LD; rho effecl~ o~ onvlrol~mo~ ondiliorl~ or toxieolo~lc~ ent~ on
C~llu~r or~n~ a . ~ y ~O-l~ b~ O~.pO~IA~ 5t orSIln~m ~
bto~oni~or~ O nvlronm n~ ot eon~ on or in~uC~ Ihen ~nrlyrln~ ro~
btolo~lccl p~temet-r uch ~r vl~bill~y, roptodueliYe ~uccon. Ot ~he level of oo00
moubolllo o~ en~y~o. ~ltorn-tlYoly, îho run~ p~ mour~ y bo nlo~r~re~ OD
nclun1 o~ mC olro~ ptWCoL In ~o onv1lro~enl. ~ucb s~o~monl~ typ/C~
cro CO~PIOA~ bn~t~t~ ~nd Irborlo~; tho cuJlurl~e, oxpo-~ro cod o~Jc~em o~ tho
~cr~ or~anl~m rCquiro~ m~ny ~nlpllblion~ tvon~lo~ deacrlbos~ h~ U~C Or
U~onic o~ rm~ to ~vnlto- r~viro~n~l ~oou or îw~;ci~y: 2) ltcn~pnlc
rlnirl~ of 1~0 ~ctn~od~. C~elw~ tc~a~J. ~vhlch ro~pond to oetvironmcntcl
contllloor ~ prodllcln~ ~n cerily ~ooruro~ protol~ produ~l; 3) ~ ho~ ~nd
compo~ o~ rOr o~po~n~ th~ O~rJ~i~m ~o ~c~l Juhrl~ncor; ~) mothod- ~nt
coo~od~ionr lor roctout ~ o ~onl-m' ---pon~.
. B~CKOROUND;
T~c n~d ~or In4tho~ of ~ dn~ tho impltct of enviro~nenl~I poIlu~^~nt~ on
ocolo~o~I ~g~lom~ h~ Ic~ LO ~C ~C~Iopmcn~ or ptOCOtUIOJ ~hlch utlll~e 11 vin~
or~nr~a~ co bJolo~lc~l mon~ton. r~o ~Implc~t ~nd mo~ convenlel~t o~ îho-e ~y~t~
".n,~ o~ leroofp~ s. ~ir o- lllcy uo mo~ e~ y n~-lntomod ~nd
monl~ulolod,
Urlic~ cr or~nl~m~, ho~vovcr, uo ~dcqu~ m~d~l~ fos o~i~otin~ Ih~
pote~licl ~b o~ polly~ntJ OD complu~ lo-11ul~ ~nlD~o. cl Ihcy do ~
Ih~ oblllly ~o curr ou~ hlolr~nJform-l103~ lot~n~tormo~lon~ or cben~1c~1
coal~ound~ hy ~ullloolJulu osp~ ltlcont ~clo~ In dotcrrnlnl~ Ih~
o~ot~ ici~y of ~pnu ~o wb)oh ~hcy ~ onpo-~d. Thi~ o~ J~im~l4~d Ih-
Jc~rcll ~Or ~dol or~ol~ ]1~ t~o lotto~ o~lopry w~lch co~lId ~orvo l~ bJomonllors-
Th ~o~to~lc. Cac~ o~d~ t~OJo~ J ~PCcomc ~ wi~ uKd om~d yJtom hr
lc ~nd ~noloo~Jlur blolo~lcol r~ud~c~, ~r~d Ib~ e ~ cu~ nd h~n~ing ~ lh-iC
or~o~rm h~ ~4 lo ~ propwodi we Or ~hl~ ~n~i rol~oa ~po~o~ ~u blD nllon in
~elou~ opplo~do~, ~o~o ~lo~ ~rum Ih~ rc~ oroluro oro:




.
: . ~ ....

JRN.29 '93 17:36 613-232-8440 P.06
2 C'and~d~ ot d.
2088379
1. Wllli~cl ~,L, ~enbery, D.B., "Vsi~ ~h~ nom-~do C~norh~dltl,~
~c~a~lJ to prodlcl man~1c~ y to rnot~llic J~l1S." Tol~lcol. Illt, Heallh
4~4)~ 469~8. ~489.
2. WilliJm~, P.L. ~nt I~io~bcrry, ~ ptom1Jln~ ic~,lor o~
Dol~robo~lor~ cl~y ~in~ the nomuodo Cotnorh~ anJ a~ computor
u~¢~in~''. Toxlcol. ~;u. Ho~ f3-4), 42S~0, 1990.
3. W111ioms, r.L. u~ Du~on~ry, D.B., "~q~ ~tlc tos~oity ~cs~in~ u~lng Ibo
ncm~tod~. Ca~l~or~abdl~l~ el~e~. En~ . Tcxlco1. Chc~ SL- 128S-12gO, 19~0.
. 9~ 0ilo~, ~i,, ''Tho nen~to~io tOJUC]~ J~o~ ucln~ ~anoJr~ r~dl~ w",
~tlXiC. ~-Ct-. 2l.3~- 309~ . 1990.
~ . ~'~ Ko~Jel~ W.~ rocctoc Z~ibor~ R.W, ~r,a ~olnon~ W. "~ S13
o~vlrotu~cnt~l pDllu~n~ on ~ol1 o~pni~nu; ~ dmpl~ c~ o in~ o tollloity
o~ cnvlronn~t~ul pollul~n~ oll org~nl~m~, U~De o~dA~lum ohloti~e ~d
non~ co~ itot. an~i~n. S-~. ~2), 1~1-190, 1989.
C~r ~ n 15 yc~n ot ~v, It h~ bo-n U b~iJ~d ~t 411 or~ u ro~n4 to
hcU ~treU un~ t~ ~ v~rlo~y or chon~c~1 UCJ~C~ b~ 5s~o~cln~ rp~clnD pro~in~ ~blch
~ro n~d- dthor ~ n~h lo~cr lc~ol- or ~ot t c11 uod-t norm~t cn~tltlonr. Thl3
ro~l~clioo bnr lo~ t~ propo~cl~ ~ ~onllorln~ ~hn onvllonmcn~ by ~c~-url~ th
lov~1~ o~ Ihe~c prOIcih~ In v~rio~r orpolcm~ (1,2.3). ThC~C ~ppro~c~or irlvobo
c~ on oS ~ pto~elnc ~nt ~cc~"-en~nl o~ rhelr bvolr, l~c~clly u~ln~ ~nLibodbr.
'rb~ in~r~Pdoo to~crlt~t ~ordn lltlJIcu ~ ~iiftcton~ ~pprouh, I,e. ~o hvo Itnl~od
tno conuol ~o~ion~ whlch re~ul~ pr~t*~n pto~ lon lo ~ hloh
produc~c c rodily mcc~ur~lc . c~.yn-c ~C '~tcpo~ no ~ repor~cr ~ene h~
~o~ ul ~i ~to ~he chromo o~o~ or C. ~ a~ o pro~uGo ~-anr~onic c~lr~
~hlch ror~oDt to clns~ ropotl~r ~ nc. TO cnmploto the biomoll~tor
tyctor~, mothodo heYo boon de~l~no~ for ~cpitily ~ oonvenlently ~euin~ ~hn
nu~ ~ ot the op~r~r ~vytlu ~cu-~lt~, u ~oll ~1~ it~ tilluc 10catlon k~
nomc~od~ c to~om~inm~ lUcinc. ~c~hCt wi~ ~ho o~s~y mc~ho~olo~y, con
eon~itut- ~ ~lo~onllori~ 1t" wnlch c~ bo uud ~u dctcol Ihe IcYel ot c~re~r
l~o~c4 on ~t otpn4m b~ e~o~-C lo ~ator ~mp1O~ t~ or ~o~h ~cr~ Udp~,
oll~"dl a~rocu, pe~icldu, o~c
1~. S~b1M ~RY OF T~E INVENTIO~
1, Tbe r-porter ~e~t--,
Th~ nrc~ lo n Jorlo~ of rtre-~ ~cnc-nporl~r co~Jtrutn~ currontly In uu con~l~t
ot ~ oll ~one~ JacZ, couPlod to ~ oc~-ln~uclblo prP~Ier dt.tl~ed from ~c
p1~ pno of ~ n~nuuo~ C~orh~bdt~f~ J~t. L~CZ onCC~C~ ~e enrym~, p-
g~c~dtr~, W ~ ~ hbl~ ~n nen~t~o~c ccll~. cn~ rO~ whleh ~onJluYo h~lo1o~
p~clrophotomolrlc U~ ol~dy oX~
~ n odvon~p of tbo-o TO~W~rli 1~ ~h~ît ~ romolcTl ItO tl~htl~ u1elod, i.t.
lluio o~ ~o ~ooo ectlolly lo praenl unl~n Ihc ~1 1~ b~a ~l~ucd In ~or~ ~cy,
~ tl~o ncmolo~o pOJ~cu~ o p~ ocl~o ~tllvl~r or ll- o~n. lhi~ 0e~ h~l
b~cl~o~ld nc~ r in ~ ~y~ rornoly low, ~ e ~ y 1~ 1~0tr
ro~ v~ ~ .oSol~.tlo al.~-~ o~ ~peclflc ropo~ur ~co wh~ch h~le ~oo~
con~r~ n h P~,uro 1. NLS, o rucbor loc Ibotlon ~l~ul, br~ o ~
o~oc~ to ~ho nuoleu~ in~ iaOn~irio~l~on Or ~e cu~ c~ n~ uo
~poc ~ouib~o, H~ e he~l dlock or ~ISol- ~uolblo ropbtory olomon~. l~o
vcclon b~ve ~n deocribod in ~Irin pl~m U~ ). 1~ oomphl4 ~oquonce- o~ ~he
h~ oror ro tor~lbo~ ~ ~4uuu~ C~L (S) od JoneJ 9
C~bcr typc~ ot ~or~r~ ~ic~ ~Ol~ty lho ~bo~o etlletlu cr~ ~Irio eon~ Onl ~i~
~hl~ motho~olo~y. ~o~ In~t~noo, ~ec~er~l ot tlrot~y lucltoruo ~i~hl ~e u-otprovl~e c ~oo~lllvo SCI~y b-x~ at~ pholo~ r~ ny ~er~e prad~ t rot which
l~e s~b~nc~o~ ~D di~o IUo ~e rre~ e soll~ ~ ~e pr~ccdure oo~crlh~d bolo~
~OUI~ bo CoNnp~ wlth ~1~ blome~lor cyJ~m~ Othu pmnuNel~. whieh re~pond




. ~ .
.:
.'~ ` .

,

J~N.29 '9:3 17:37 613-~2-E3440 P.07
0 8 ~3 3 7 9
~ on~ c~e~ Or o~re~sors or contl~lon~, conld ~Is~ bo u-cd in con,iunc~lon ~vi~h ~
vu~o~l~ ropo~or pno~l c ~ mol~llo~ion~n o~ cy~ochroms P450 prcm3t~r~, or o~har
ho~t bl~OCl~ ptomolor-,
Det~lled delcrlption o~ streu~r-portor l~e~e ~onftroct~lon~ (Al~o soc ~4~
Thc voctor pPC~I. Illuo~aecd in Pi~utC I bO IhC hc~16~48/1 ts~u~lallonal fuolon
co~n~lclo, w~ aor~No~ by inicrllnlt 3~00 bp Hindllr~ fra~g~cat ancom~sslDg
~o loc~ ~c~4 ~nucleolldo~ 18 lo 3~J~ of ~hC oJ~pre~lor~ vcce~r pPDI~.~3 ~8~ In~ O~e J~a I
~lu ~nuclooll~lo 356S of Iho j~ cqu~) o~ Ih~ hlp~ pnc. pPC~1 con~in
co~ bt~ pl~U4~/J scno ~lr e~teodlo~ ~n n Bo~ t nuclooeldo 2280 ~ ~ 4a ~ ~It
nucleotldo 418~ irl t~o pUb11~1lca iellueDce ~S). Pl~mi~ p~X16.~1 Npre~en~- Ihc
eo~p~o~4 ~r~n~l~tionsl ru~lon bo~wco~ Z cnd tho Jl~p~.4tl2 eo~e p/llr, w~Job u~
con~ cted by 1n~orl;ng tacZ 05 ~ 3200 bp XD~ WI fr~l~m~a~ lnto ~ ~p~ 0~ htP-~-
2 (n~ lto 169G, t6)). ~h~ ter wu oo~aine~ in 4~ co ~l t~uclooli~e 5~0~ to M~o I
(mlclouLi~ 2~701 ~rugrn~t ~ncomp~ ~g Ih~ ~spt4-~J2 IP p~is,
Pl08~ni~ pPCI6.48 1. ~kl~b corrupondo ~ u~nJl~tion o~lon 1 Swlon o~ thc hJp~
~rJ yo~ lr lo ~acZ, wa~ cons~llctot by ln~u~ln~ ~ S~u 3~ ~ro~mone ~ endln~ from
r~ucl~DllJo~ 9111 tD 1440 ~ O 010 JaJA Nl ~110 or ~ cm4lodo olcplffsi~n ~cwr ~P~16.~1
u&h Ihu Ih~ isp~6~ promo~cJ wu ptoxlrn~1 to l~cZ, p~C16.1~48 cont~ the ~a~ 3A
rto~tho In~e~e orl~to~lon ~uch ~n~ pJ~ t promo~et i~ clo~o~ ~o JaoZ . A
S~u 3A fill~70nt o~c~inu ~ clootlde~ 1l21 ~o ~S61 ur ~ho hspl ~ locu~ w~
cb~od In~o ~ ~onl H1 6it~ ot ~PD16.~ ~R~) ruch IhCt tho ~Jp 15~J1 promotor w~
a lacZ, ~,onor~tln~ pl3~Aljd pHS1~.2S ~illUtltCICt 0~ ~ho tnn~ loml1 c~.on I ~urlon of 1he
pt6~411a ~e~o p~lr).
Plumlt pPC16,48~ o ~sc~ tlon~ lon COJ~ y oJ an ll~nl ~ rt~cnt
~n~ colidc~ 3a1~S lo 3~62) of ;ho h,rp~ ptomotcr clo~ed InLo Ibo Jl~ncr~ ~ito ot Ihe
pPD16.51 p~ . pPcto~ s~ o uon~crlptloD~I h~ n consi~o~ oS ~ T~ ~mos
cx~en~iAS rrom nucle~ 6g ~o ~409 in thc ~o~ SCne In~or~d ~ ~ Acc I ~ilc o~
~I'DI~.51, All ol t~ onc cunr~ction~ uo do~crlbcd In ~tringhm or ~ 4~.

2. ThC c~rl~lnr
Inltl~lly, tr~n~cniC sttlin~ c~rr~lln~ o~trachromo~onul arr~ys o~ the l~sp.l 5-
~cZ tranr~ono~ ~c~c~ibcd ~ Ibo proccdi- 1~ eoc~on 9~ oro con~ruc~cd ~n~ entc~l~
oharhc~rlzc~ wllh ro~pCC~ 10 ~hclr lntuc~io3 by hoa~ ~ocl~ ~4), In ~hese ~rain~.
thc ~lrod~eod U~ cl~ic DN~ w~ no~ in~o~to~C~ In~o ~he ho~ rlom~ talb.Or
wC~ oosti~ c.~;~tllchrotnoiom-l a~oy~ ob ~Ot- n~t ~u~O~ tc h~ ne~
pnu~tlon wl~ 100 ~ nd~ y ~4). Whi1c Ihcw ~ralm~ prod~lcod l~r~p amo~ o~ ~
~oclWI~U in r~rpo~o IC hoo~ ~tre~r, no on~ymll~io ~o~ivi~y ~ dctoc~od ~ftcr lhc
e~n~e1~ h~ cn c~po~c~ tO c~dmlun~ ~4). T~u-. wo co~lndc~ o tlm~ t~l ~e
~pt~ p~- ~oto ~ol mot~l induci~o Ileno- ~4).
rhe ~ enlc no~lo~o rtr~lns cunoD.~ly in usc wcrc produc~d by Inte~r~
bovo reporter ~ o l~o ptlO1116 ~ oxpoctodly. ~he~o ~ullnl prod~cc
bo~o~ o In ro~po~N to ~ Yrt~ y or Aucnor~ Includin~ e~tn~lurn, ~nd he~
~uo~ (10,11), Th~lc ~tt~lne ~ o~o~lcol1y ~Ih~le. ~lld wct~ derl~od t o~ ~ho
c~ nn~b~c ~tnli~U dc1c~l~ed ~ tlD~h~m el ~ 4), b~ m- Irr~dlulon uld
~otlo ~clec~loD ~'or llnlm~ w1~ich p~l~ed o~ Iho u~eno ~n IOOS ot t~Ir
ony ~ cno~ blli~ v~rils~oou~ ~o~tUro C( tb~ nv4nlion~ h~
~llion ~o ~o s~os~cr ~o~ ol Intetort, ~-- p~dcul~.r ~Lre~nJ ~lo cur~ ot
~-ru whlC~ ro~ul~ in ~ c~ orn o~ moYcr~nl of ~ho3c ~ nn~
ai~Lins~ bo~ lrom a~e ~lld-typo orpr~i~r.~. s~ind P~71 ~nt PC:72 c~rr,y ~hc
comp1eto ul~nl~ iom~ ~u3ton Jito~vn o~ ~h4 ~o~ ot Pl~.l. S~rllin Pt::73 c~trlos thc
hc~ 4~1 ~r~ îtor~ on I tu~lon bo~n ~n ~ho m~d~l- o~ Pig. 1. The c~py

J~N.29 '93 17:38 ~13-232-8440 P.0B
Candido e~ ~ 2 0 8 8 ~
~ ber of ~hcJc r~orler tt~Ju~l~nel i~ el~lm~lod ~t ~5~50 per haploid ~enom~
(Y~u~ 2~.

3. E~po~ure o~ thc l~ns~nic oro~nl~m~ to tcit n~t~rl~ (Rehr ~o
Fi~ur- S ~o~ Rcrer~nc~ 1I tor ~etatl~d mo~ho0~.
1. U~o ~o~ too~ lub~l or mulli~ell dirht~.
rhou6~nal Or ~n4p~ie L2 or L3 ~t~8od l4rveo c~n bo culturoa ~nd oxpo~et to
~pl~r In mul~i~vcll ~luu4 culture dirho~ h ~ p ~d~um conlainl~
~uA~n ot ~, co~l u ~ rood ~ Jt~ 3). ~ b~bn. numcrou~ mplu oan
~c~tc0 ~imull~noo~ly, ~ tho conccntr~tlon o- llmo o~ o~po~un ~o lhc ~e~ subr~nc~v~od. Tblc ptooo~uro ~eo ~1lDW~ ~onlto,rlD~ or Ibo pnonl he~l~h ot ~o ~nl~l~
turln~ ~ courJo ot r prlm ~ ~ obrav~do~ o til~uctln~; miclo~Copo. .~t
~he onmplotbn of ~o oxporuro lo ~he Icr~ rub~t~ th~ alo ~oo IraNl~o~rod u) J,
Ie-t luho, ~ollotod by eo3trl~u~LlOn. ~hot brlo~ly ~ h ~ lllo~ ~t~,
po~mo~bill~ wl~h .cetaae ~ld e~yo~i ht p-$~ oJlduo ~etivlt~l by one Or Ihe ~wo
n~lhodr dc-edh-d brlow ~PI~uro 3). Al~onn~ivOly. ~ ue culturc di~ho~ col~lolnln~
poruu~ romov~blo In~or~o whieh oro leotono lo~ t~ln~ wo~rl~ ollm~ ny
roqulrem~ h~ lo~ tubo~ on~fi Ip~lo~,
olublo uuy. ~IAelo~idu~ eloo~o- ~o coloorl4-- ~ub~l~r~o ONPG to ~clc~C rolu~loyollow i~To~luel, orlho~ to~hcnol, whle4 h~ or~ r~ne~ mA~ t ~20 rrn~ undor
b~io contltlon~. Uri.~4 ~hlr oDprol~oh ~ho m~,~nitu~e or rh~ on~o o~n ho qu~ntjlhd
~po~l~opho~ lc 11~. ~ItorTI~ti;oly, ~ ion Or ~hc hllltoc~tlc~l ~ub~r~le ~cl ro~ull~
in Lho otn~tioll oi ~ l~o1~h blue prcclpit-~ in ~Itl~, lhu~ provldln~ qu~ o
Worm~llo~ ~ Io tl~o t~ e ti~ltib~lion ot ~è tollpn~o (~ e 3).

. ~oii t-~Lir~.
The obovè ~rocc~ure ~ st o~ly i~e modlJ~ol ~lly~tly ~o tUI ~oil ~ sodimont
samplc~. A ~ioncc ~h~rty cont~ini~ c ncm~ o~ lac- ~rdrl ~r E. cofi fb ooidod
to 12 ~ ot ~oll or ~ed)mont ~vhloh lo con~a~t w~hin ~ ~oll o~ ~ t~R~Uo oul~uro di~h
0~ clnllll^llon ~d~l Ui~ co~pl~tion ot thc e~ ule, thllllCd wolor 1~ ~dti~d to
~oU ~ he l~nimcl~ tloot ~o IhC lOp h- IO~DV~L Tho ro~ri~vc~ ~nl~lo ero
~n~ d. no~l~d on ~0 ~6 ~ucto~t to rcmo~c rom~lnkt~ roll ~no bE c~orl~ ~l 2).
Y~ ~0~ i3~ ololid~ or to~ ;bed ~ovo.
co~1n~d ~ApO~ n~ t~ c~b~ ~sre)~
~ ch~bor ~ ~4eA ~rolopod Jn ~vhlc~ ~ enlm~l- can bo ~tolcd, &~a50d to
o~t ~u~l~ct, ~ uoyed ~llhou~ ~ no~ tot pl~o~Ln~ w wnlrifu~ ion. Thl~
~to~lly um~iine~ ~bc ~ro40duro, ~nt ~y m~o i~ ~oulblo lo ule th~ i~lomonl~o- ~n
uun o~ ono pol~lbio rd~etrdon of t~e loYt chl~ml~ct 1~ ~own
ln R~uto ~. Thl~ dl~un lo ptovi~e~ u ~ r~hct ~uJto u~ tho prec~i~ionet o~
ordlo~ry ic~ n tko r~. ~DC'i ~o ~ot ~o bo ~o~tluod ~ ventbo In u~

Mol-tiel ~oifio~tior~l:
Tho bu~rol ~O ~houl~ ~o Iran~p~ronl ~olcrr p~ c or ~JctJ)~ ll~i Ito~lly
~rr~ c~d In mlIIIl;~o~i ~ rll~-r o~ ~ 04d o~ ~o barrt~ h~uld ~ ~in
nemo~Ddo~ fro~ e-rl~ Iorv~l ~lC~O~ onv1or~ bU~ ~IIow Fesc~o o~ ~Iq~ldr ond ~
p~rUclc~ ch ~r b~ctorl~ tO m~cron muh i~ ~u~ blo~ nu~ri~l~ chould bc
ro~l~t-nc ~o oceto~o u~ r rdvon~.
Punctionlnc of lhc te~ ch~mb~r~

J~N.29 '93 1~:39 613-~32-R440 P.03
S C~ ct~l. 2~379
~ rhe ,~c~4~bly ~ o oyrl~gP - ~h- pl~tor~ o~n be drc~n upw~rds or
d~wn~ut-, lo ~, In ot C~ l llquld~, ~ospoc~iv61y. To ~ up ~o ~stom, ncn~todc-
3te edded ~ tbo b~rol llnd ~o pl~ton 1~ ~d pu~h~d do~ to ~h~ lowl of ~ho
gtOp ~4). Tho ~ni~nolJ CUI bo hrt~ in ~hb ~ocombl~ in ~A~'ioU5 ~orm~ bcto~
umll u~od. ThC ch~nbc-~ ~o lo-~ uprl~ lull~bb ~lt t~J l~ Uch ~
~mctGtc~ uub cn tho nulh ~n~ ~hc~ob~l u~ In clo~ con~c1 Wilh oxy~en in ~o ~Ir,
ublch 1~ cuc~ o m~nlcln Iholr vl~
T~ oxpooo 1~ n~6~dc~ liquld b~l t~mplc. IbO clllturo Ill~Lid iY c~sollod, ud
IhO ~a~pio l~ dr~nvn in, pC-b~p~ rn;~ ol~ t~vlco wllh th~ ~plc. Th~
dc~lrcd ~ol~lm~ Or Ihc b~ o~nplo 4 ~ n kl, n t tllc Acm81Ddo~ bu~
lh4 d~lro~ ~U14~ D- tlmo,.
Rr~t~out of IhC lo~ol ol we~ ducod onzy~o ~CIiVity ~ c~ried ollt in tho ~om~
cpplr3t~s, b~ ox~ t~llt ulDlple CDd t-owi~ 1~ ~h~ ~ro~Jl-tc ~S~Jy
solul~ Ln ~ ~r ~ co~orl~olrl6 ~ y, colDr In~n~l~y C~n b~ u~ tcd ~hroullh
~o tr~n-p~rorlt b~rroJ. or tho ~uy iolutlon crll bo oxpollod rO. mo~ure0~nl i~
~peclro~ho~o~e~c-,
Mclbod o~ O~er~tt~n~
T~o t~U c41~nbe~ .4~ cont~ir~ ~ pro-toto~ n~mber D~ r~em~lodc3 al 9
~pc~iflc I-p or dovolopmen~ ~.~B. Ll, L~l, L3, L~" douorlc~ or ~d~t) in ~, nu~ri~nl
mo~lum ~S~or-go ~uiiu~, SM).
~ ?lc~, C~D,ds~in~ ot w~r ~mp~u o~ ucou~ extrsct~ o~ w11~. clc. gro
i2~ lxo~ lh o c~no~r~lod 5~ oluliD~I ot Sl~ lC ~ d~r~
fiu~l ~onccnk~llOn ~ ~hc ~cdlum.
2. Tho u~mplo i~ ~ jr~ ~ao chcmb~r, u~ the ch~mbor is incub~le~ ~or tbo
te~iro4 2imo el ~ ad~rd to~poroluro, u~u~lly be~ n lS ~h~ 2aoc.
3. I'ho ~unplo 1~ ollod, th- ~hmbor 1~ rln~od wilh ~ lli~pb Jcl~ modll~m w
tor. ~nd tho rlncc co~ n i~ ox~e~lcd, ~'ho nom~todc~ ~-¢ tc~inod ln Iho
ch~mbo~ by tb~ potoo~ filttr or mcrh.
4. The non~-~o~c~ ~so moto perme~blo ~o thc ~JI~y com~o~onts. A tul~blo
rc~unoDl Ir ~O dro~ ~n ~cetono ~d Ir.cubu~o ~t llrnb~cl~l lcmpet~turo tor 1~ fc~v
5Ut~.
~ . T110 cotono 1~ pol~od and tho C~,SUy ro1utloD i~ d~ inlo Ih~ c~mbor.
b. 1~ ulr~y ro~ulu ~c ro~ ~n~r ~ ~uJ~blo In~ lon llmo, t~nein~ trom -
~ow mlnule~ to overrdgh~ C ~ o~ture t~nJL~ J~am unblorl ~D 37~. Two lypC-
oi~ unlly hovo beon ~mployGd: u 4uulit~liv- hi-~oob~nlic~ s~y ~4hich Indicoto~
~hi~h ~le~uo~ t~vo unter~onc ~hc ~Irou r~pon-o, und o qu~nlil~ c 301ublo ~r~y
~h~h provWu ~ colo~r chlmp 70~10atln~ ~hc lCvCl Or ~ItOU~ uC~d eo2ymc in Ih~
whol- ull~l.

111. DlST~ Q D~SCItlrT101~1 OF SPU:I~IC EM~ODIME~TS OF THE
~IOMONI'rORINC ~YSTISi~
Provlou~ blcm~nllo-in~ ~y~tom~ ~o~/o ton~i~lod i~ n~o~i~oring so~o
phy~lolo~lc~l ~orc~o~ot o~ vtld-~ypo o~s~nIun cuch u e microot~ni-m, en
Invorlebr~l4 (m~ ol~, cl-m-, Depbnle) or ~ vortobr~to (~ y ~ h ~Ip~c~iO-
~durin~ ot ~ftcr o~ ur~ to ~omo ~ cotdillon. The ent-~olnt ot tihe ~r~y i~ ohc~
loth11ly, .~. th~ L~S0 o~ ~ tut Nb~ noo I~ dolenn5n-d ~13,14). O~ CJ~ b~v~
olvo~ tom nl- o~ bth~ ueh ~ nwv-mont o~ 11 cw~,~ rrom lc~t ~mplo~
~15), or tr~~ y of pura~l~ In b~,n~ ucl~ ~- ml~nol~ ); lu Ih~-e cc~,
c~mp1~ nd oxpon~livo cloclro~Ie oquIpmon~ ~orm~ p~rt ot ~hc ~y~
~Itor~tlv-ly, ~Dd maro rocon~ly, ~c 1~v~ of ~pocitIc biomoiGculoJ, ucull11y
pro~ol~, io ti~o ~o~ pcclo~ h~vo boe~ mul-ur~d, ~ t ~bc curten~ int~c~t In
mcP~ o~ o~ pro~oi~ (17), Thc Icll CU~yJ, whilc uslD~ ro~ iwl~ y1c
C~ip~oJlt~ novor~h-lo-~ ar~ vory ~,ime~col~amin~. Involve m~ny ~nlpul~lloul,
md ~tq~lre ox~onclYo u~i~ in~ ~d oxporl~nce. They uo nol sulted co ~9C in IhO
~lt.




.

- .
. ~ . -
:

J~N.29 '93 17:40 613-232-8440 P.10
C~didoetaL 2088379
~ ho pr~on~ ~p ~o~oh u~ zoJ ~ecl~lly desi,~nod ~r~n~l~cni~ or~ ms vrb~ch
re-pon~ lo ur~s~or~ gy protucln~ ~n c~ qu~tlnct en~ymo ~vhlc~ i~ nol norm~lly
~rDdu~od by ~hor4 or~ni~m~ r~hormoro, ~y ~Itili~in~ IhO Im~ll, oaslly
n~ni~ul~ed n~ t~d~, C ,rle~ , r~out ~f ~ tos~tr con bo c~rrie~ o~t ra~ldly
ond limply in ~ho In~Ac~ org~n~, wltbout ~ho ~occ~ o~ di~-uptl~ o~ Juu or
oxuac~lo~ ~ tho nry~u ~ bo lncul~ot r~ ~ray U D be pcrformcd e~rll~ la th~
l~buLl~ry or In ~o Held, by ~or~o~nol with ~1~ nlnin~
~ dvonto~t~ of Ibe ~stom:
~ . Q~an~tlv~ or q~udlbliv~ ~B~U~9 Of ~res~ in ~ul~lcollul~r
a. Ie ro~onJivO ~o boO~ nlc ~Ad Inor~cDlc stns~ors
G Cell bo uod on ~11 Iy~U ot ~mples: rr~h or ~Cll wa~t ~mplc~, mill
omues~ C-C~IOr. slud~o~, soll OIU~IC~, wll~ OJ ~otimon~ poclrlc chomlc~lls or
~I)IXIut~l ot oh4n~io-1~
1~, Moy ~oc corrlcd out In t~ bor~tol~r or i~ ~ fiel~,
~ . ~o~dout requitec ~Inlmcl qulpmoM snt cons~ of ~n o~olly ob~on~blc.
s~blo colour ch~n~e.
F, ~ollow~n~ oxpo~u~o ot tho otpniunr to Iho tost ~mplc, ~c~ulla of tho ~tro~
~J~oy ~se e~oiI~blc wilhin ~Jr~uIo~ îo hou--. dopondln~ on ~hc m~nilude o~ lho
im~o~ot Jt-O-J-
O. ~- ~o~ c~ bo cu lod o~t ~ Ie Yol~ncJ~ l,e, lo~ ~n 2 mL.
H. Tho ~ort or,pnl-m ~r cho~p ~o ~row l~nd r~im~in,
1. ~ylllom c~ bo YUt fo~ ~no~iloria~ ~olb cluol~lc ~n~ ~cuto ~oxici~y.
~ . Sy~ ~oro ~ondtivo ~b4n currcn~ Iclb~llty îats usln~ ~ild~ c
no~ oto~.
K. ~y~l~ provlee~ Inform~tio~ on ti~c ~eclticit~ of Ihe s~ros~ ro3pon3e.
~ t~racc ot th~ n~metoto~:
Thtoo mcl~odr o~ storop of Ihc r~oo~todo- dlr~olly 1~ ~hc les~ cbomb~r ~ro
po~d~lo~ ub ~y ~o Itop~ In ~ re~r~t~r ~ncllr 4'C) ht Je~4r~1 d~y~
bchr~ u~, u th~ ~t~pt~d~tO Clutly ~IOWJ ~lr do~olopnx~l. Ii~ C. ~ J i~
st~ tto ~tucrb~v~, whiCh tons~ whcn cu1mt~- ~re Jt rvod, Tb tNor~
tocs no~ ~e~, cnd wn ~ur~lY for uP ~o Ibreo mon~h~ o~t tOtD~ tUto~ t~ea
roru~o 1~9 d4vcl~pm4n~ wllcn ~ cnlc~[ wi~h rodl ThU~ ~hc biomonioor otr~ coldd
bo olorod ~ tibo ~oet c~mbaJ u d~ul~Yeo for ~p ~o tiuo~ monlh~ un~ll urot; Iho
onlm~t~ colld b~ ~cd ~or 8 ~ o ~o con~,crl Ihcm ~o ~on~l L4 luv-o prior to uu
b ~UI~ ) C. ~ nr Ll ~ ~ lorv~o 0UI b no~:Cn ~ In~c~inllol~ ~I dry
loo oo 11quJd nJl~o~on lomporol~o~. Tboy ooult Ihorohro bo ~torod tro~on ~n~
~hlppod ~Ircolly i~ IhC lo~ eh~oer~: 11 woul~ ~n only ~o nocou-ry t~ cb~n
medll~m ~ tood tho nomocoder ~or o to~ ~o~n p~loJ 10 th~lT u~ in ~cr~
Ir. 5XJ~MtL11 6:
'rhe Imr~tlon e~ hstllCt ~0 u~ldou~ood by rero~e~c~ l~ l.hs ~ollowin~
oY~plc~, Thc e~-~mplo- ~-c~¢n~ be1ow crc provj~cd r- ~ futlhor ~uid- ~o ~h~
pr~to~ o~ o~tin~sy ~kl rt, cnd o~ not ~ ~o conJ~r~d o~ ho
Iru~0~DD ~ ~ny w-y. ~bo ox~mplo~ u~ tlvl~ qu~lit~vo ~ y; ~) ~C
qu~tl~dv~ U~Cy; o~ Wo ot Ple ~olrcou~ chuob~: t) mhor u~y-.
~ ~u~ll~dvo L~ y-. T~ X~ tc~ny ptocod~e 1~ d4-c~b-t ~n Pirc e~
1. ~0. ~omn,to~cl ~etC ~DO~ 10 tho r~tCuin~ ohcmio~l in ~ ubc~ ~r In multl~oll
~i~poJ~bl~ pl~tb di~)lo~ rlnod wllh Iho bi~lolo~ n, X-pl, ollo~
p~r~ tl~ wllh Jcolono, ~o ~rd reroronce ~ues~ wAditloll. e ho~t thocl~
~ 33~, wC~ cu~bd o~ wi~b ~h~ ~imeJ~ OD ~ Y~ki pl~U conl-lnln~ nUt~io~
c~r. ~ho dnuo ~L~ioln$ p~l~orn ~ Corvo¢i l~nt~ ~ Iow powo~ bl~oc~
mlo~o~co~o. .~ ot ~ ~ho~ ~ ~imC ~ 15 ~ 1 33~C o~Jo~ cl~olo~Jd~o




'
:

.

,
,

J~N.29 '93 17:41 613-232-~440 P.ll
7 Cl~ndido et ~- 2 0 ~ 8 3 7 9
~ e n~Qd~ tn mo~ uo~ of ~c ~lmsh t4). In ~ddi~io~ r6rioU~ chomlc~ rcJIior~.
lncludin~ ho~y n~ ]o ~uch ~ ~r~cnllo, ~dmlum, cop~or, lo~d. noroury ~n~ sln~.
s1~d Ibo hcrblcldc. purAqu~t. ~oro toun~ ~o oc~lvu~ ~ho roport~ ~pn~ .ner cxposu~
of JO~t~l ~ou~ td ~ dJIyo ~ll. Pi~ur~ S). Iho~ ont~ yhlt dll~Ycrcnl tl~uo plltlO~
or t~ro~ Jn~uc~loD.: ~orouYy ~m~ p~,~q~ Induoo only ~n~ntln~ rer~lon, lo~t
clr~tr ph~rn~o~l mwcle, up~cl~lly ~ IhO ba~o o~ thl~ tertnlD~I ~ulb. coppu
h~ucc~ in nowonr ~nt muJc1o ~t tho cn~ori~ ont Dl th~ p~uyn~ n~ c~dmlum
~hrou~houl tho ph~ry~x or OCCE~IOA-lly ln th~ ImcJ~ioc, Arscnlt~ O~pO3u~0
~roducco ou tlrru4 p~ I tlt~ro~lo~ nAor rominbcon~ ot ClBsriC h~trhcek iD~oc~oe\. Tho~ to~cI~J, ~llu~ o~ In ~lotro S, rui3gerl ~ut ~luolno~tlon Of
U ~onto ~ complo~ t~r n~y bo ~ u~efl~ ~orJtwo o~ ~hls gio~ool~orln
~y~tel~L It b i~onan~ lo no~ ln~ e~n ill no~~ whlch ~ro no~
o~oud U~ c~ ucr~fi culturo modlum (1~.
i~3 Q~-r~ iVo ~)Oy~ o~o u~porlm~tY, r~ ode~ ~vCr~ oxpo~ed to ~c
~tto~ot C~ i~ 0~, the~ per~lk~d ~i o~oyod u-in~ ONPCi to~ r~Ph-~y~
S~lw~opr~noJ~t~ d~c~ldo~o ub~tretr whloh yloldl ~ ol~blc y-llow prod~ct
~potl re~cLion wIth ~hc onzyme. Ono v~rCIon Or ~ nt~r~ obotoJi c UlOy 5-
~o~¢rlbod i'~y ~DUnth~] (t8~, ~nd i~ p~viow u~o wilh c~ tt~ lJ by P1ro (19). ~aeh
~euly l~So~ ~ppso-xîm~ly 200.1~ to~o~, dop~n~ln~ on ~hc OXpO~I~llODt.
~ o dct~rmln~ ir ~h~ onYymo ~cti~ y produco~ ~c~ proporljol~l 10 Iho ~u~nlludo
ot ho ~uo~, oll4uot~ of n~m~todu ~voro ho~ hocllot ~t 33~C ~ t10u~ tin~. Thc
ptol ~ In Pl~uro 6 I~D~10W~n~S thCt tho on~y-no ~CliYil3' Inducd w~ line~r wi~
t~po¢~ 00 ~o bn~ of ~bo ho~ c~ to~ 30 ml~ o the o~ of IhO oxpcrlmo~ t
90 min. Tl~l~ o~pclt~n~n~ tnllic~cl ~hu ~b,o ~o1uWc O~ Aully i~ g~ ioLo~
~eoJItlv~ end p~Yldc~ qum~tlt ~ mu~ o of ho~t tlrctC.
Su~oquon~ ox~crir~n~ u~d thl~ a~a~Y ~o mea~uo tho o~cc~ o~ chcmic~l
r~rn~or~ . Tho rc~lt of u~ oxporlm~n~ in ~ich nc~otodcs ~ore e~tporoa ~0
o~ lum cltlo-l~c rO~ v~1n~ pcrlod- o~ tlme 10 ~hown In E~uro 7.
c) Tbo ~c-f~con~ineC tc~t ch-n~b-r ~9TC). rrototypo STC~ woro cor~uc~ f~om
t~oJ~I~ plO~liC l~ngc~, or r.O~ a q~ se pl~er sad t tocllon Or ~ tU~i~S
c tho bàrsel. So~ l hundrod ncmclo~c~ ~c-5 pl~oot ~Ite, Ibo plun~er repl~cc~.
he wholo ~nbly w~o ~ub~cc~ ~o o hccl ~hocl~ a coal-ol SSC w~ ept llt room
~ompon~uso. ~r~o~ tho IncubaslDrl, ell ~pr o~ ~ho Ol~JrO ~c~ were curied ou~
dlroc~y Ic thl~ IISC. Ths; sor,~lt ~U ~1~ to ~ oon ~hon thc uJay- woro tono In
14b~ or woll~: room tompe~hro conlrolc showc~ no co~our dcvolopme~h whilo lltC
boot rboclcod -~p1~ t~volopul ~ Inte~ec ~ollow col~ur wi~hin ~ O n~ln, ~o re~elc
hour~ ndln~ upon t~ xbnt ot tb~ hc~ ~hool~ ho number ot o~lr u-~.
d) O~ o~y~. S~cc ~ho nen~todc~ C~a be ~d~ nccblo lo llm~ll enoloculcs
In ~ ucl by t~a~ wllh co.t~lln llolvon~r ~uch ~ occ~onc. Ibo~r~tlc~lly rny
o~y~o pro~o~l In Ihe olmolr, u~ ~hlch c~ nuuJed url~ lo-~ molocul~r
w~l~ht ~u~trll~e~, could bc ucot h ~ho ~bovo upplic~on~. Por ox~mplo.
dohy~ros~-o ~uch ~ o~rophollph-t- dohydro~en~o, notn~ ,ororc~e In
wlld-~ypo C. ~ cY~ ~oo~ m~urod ud~ o hblwhemi~ t~in ~ccl~lo far
ccoh on~y~o, u ~bown In ~i~urc ~. rhorororo IhO oppu~n~c ond c y In~tho
d~crlbed hcro co~ld bo uJod to dclCCt o~c~r potonll~l rcpo~ot onzy~ UI~Cbly
o~lnH;rod tran~p~lc ~tr~ln~, or ovon o~r~lly o;ccurrlo~ no~rtodo on~ytno~. Ihe
oc~tvl~ ot w~loh o~hl b~ IrltkJtw~ o~ onvl ocrnont~ condilion-.
~ olocubJ s~ch - b~C~t~l ot tlrc~y luclror~ oo~lt bo U~d ~ rcpor~rr
cornbltullo~ wl~h tho ~pl~ prDmotor~ (7). O~r pot~n~a~ ro~ tory oq~encol
~l~h~ jnol~do ~romo~cr~ l~duclblo by hc~y mo~ ucb u tho~o of the
m~ hlo~olrt pno~, tho cylochJu~ P4SO pro ~ ~or, or pro~ot~rs rcspon~lve w
o~ vo ~tto~ ~ to ~ c ~u~n~.




. :
~, . ~ - , -
.
-- .
.
.
.
,

~ .
J~N.29 '93 17:41 613-232-13440 P. lZ
C~nditO et al~ 2 0 ~ g 3 7 9

CONCLUglONI
~ ir pplic~tlon do~crib~ ~ ~ystem ror moslilOti1lg Yl~e~ livin~ or~hl~m.
Thr, 0y~l~ c~lcl- of:
1. ~r~nr~nio ~in~ ol the ne~todol Cacleo-haO~ o~o,~a/~ hi~h ~o~po~d to
cor~ onvlro~mo~al ~ond~llon~ by ~yn~ l~ ro~dily ~c~oc~blo enzymo~l;
2. t~Ielho~ ond compo~ition~ tor okpocl~l ~ht ~ni~ Ib ~rl~llr ~IqueOul
wlollon4. ~I~.rin, ~oib ~n~ ~lud~
3. ~tu~ nt comporitlooo r"- mo~riD~ thc enzymu ~Ir~lly in ~ nlm~l.
v~nu~es of Ih4 ~yr~om o~or o~er C~d~dr o ~ blc bio~nonlsor- ~ro it~
i~plicily. r~iPl~y, rtl~llvoly low CD~ of qucn1it~llo~ t~ uo ~ oity or
~ho rol~ponco, il~ ro~ nso lo ~ublcth~ ion~ J cclc~tlYI~ ~or c~r~in llreuor~ ~d 11~ po~l~blll~y.
A wmbu ol lo~clll o~odo~- ol ~hic Iy~lem c~ b- nviu~d:
O~r rep~l~ n ~ bo~ he ~ lKIo~ldo~c u~od to doto. co~ld ~e urod ~o
~tv~ to in ~o c~mc way, t~d tho~o co~ld bo oolrollc~ by ~y ~ulre~ pto~no~c-.
. ~noy~c~ olre~ty ~r~ont In tho ~olu~ d typc ot~nl~ eould b~ mo~uro~,
iS ~o~ r~ round ~ lr u~ tod or prodllcot in ~on~o Lo c~ng or ir~
~n~lronmo~vl conti~on~.
Ott~:t ~rcc~ rln~ to~c s~c~lo~, wGh a~ C~norho~d~lis b~ sac cr
~na~ t~lVlVI~ coul~l~oo u~e~; t'. r~ft~fvu~ Ir/. F~r~lc~ r r~f~h~ pr~r~rA wrt~itl
cdvont~ uc~ ~ lo~vor o~y~on roq~tomcm~ tn~ J~owlb or ourvl~l. or ~re~
o~ o~
I:lre~lio~ of ~e l~tlnel Itonogtnlc or~D~ to~ othet ph~ oing slre---
uci~lo plomo~cr~ ~nc re~otlot p~e ~oquoncor.
Vuri~tiot~ o d~ D ol ~ t~l~¢otltoinca ~p~ot~l~ mlllht IDCI~de ~ ~4t;0nbulb ~or oo~ tln~ ~plos ~lo ~be chsm~or, ~nol-~d Or ~ ; l10w-~-ou~h cell~
wi~b ~ tCU~ o~h Or porolU ~ l ~oh ond. ~r pl~ccm-~ in llowln~ nt~r;
mul~ Or In ~hlch ~h~ Du~oo~odos re tot-l~od in ~ uo~ by an ovcrlyln~
potoue ~ r or n~c~h.




. .,~ . . ,
.


. . .

J~N.29 '93 17:4Z 613-Z3Z-8440 P.13
9 C~ndido ~t ~1.
2~379
rerenc~
1. S~n~cr~, B.M. "~hc rolo of ~osr p~atoln r~rpo~e in phy~lologlo~l dd~pullon of~Ino mollu-c ". ~u. ~3n~ e~. 24, 207-~lO ~1988),
. S9ndot-, B.~. "SU~ pro~ poten~bl ~ ;t~ biomarl~ors. I~ ~iolo~lc~l
m~rl~orll o~ onvironmonl~l conu~L~tion", ~. J. McC~tby ~nd L. 3hu~rt. CRC
Plu~ ur, lloc~ RJcon, Florld~l, 135~ lg90~.
3, S~n~err, ~.iM., M~lr~, L.~" Nel~on, W.o., Pholp~, 4.E~. ~4 ~oh, W. ~R41~lion~hip~
botwoen ~ccunwl~tlon or ~ 6~ r~te~ prototr~ uld ~opc~tor~grow~h n ~yll~
J~ e~ ot lo ~ e of oo,~por concor~r~lor~ ". M~r. Elnvirun. Ro~, 31,111-97
~99~).
4. ghin~h~m, ~.a.. Di~o~, D.K., loner, D. aut C~n~ito, ~.~.M. ~om~r-l ~n~ Sp~t
~prorl~lor~ P~crn~ Or ~he gm~ll Hoet S~cc~ 6) G~n~r In Tr-n~cnic
Cw~orh~bdlll~ tl~a~lJ''. MDIOO. ~1. C~ 233 ~191~2).
S. ~u-~r~ t.H. ~nd ~entldo, ~.P.M. "Locur cncodin~ y of sm~ll hc~t Jbocl~
~nol in Cae~lor~d~ n~: IWlI ~0~ dupllc~ ror~ 3.~ lDbu~ Invetlc~
r, ~SOI. C~ lol. ~6). ~8-1278 ~l9as).
6. Jo~e~, D., Rus~n~, R.H., ~, 2.1. r~nt C~lndido, ~.P.M. "SltUCtUre, oxpr~ on, ~nd
4volutlo~ or ~ ho~t ~hoc~ SC-~O IOC~ In C~ o~labt~r~ c~a~ nl~ke~ by
~Jtlvo ob~". J. ~iol. Chcm. ~(2~), 1200C-120~5 ~lg8~).
. Boylun, !l., ~ellelicr. J. ~ Sei~hen, ~.A. "~u~d ~t4~l~l tu&ife~so subunlts
CeUlb~ li~ht Olll~ Orl in el~kuyol~l ~t pro~eryote~ J. Biol. t~b~m. ~, 1915-l!~t8
(lg89).
. F~ ., YVhib H~ o~ 5. o~t ch~n~ mod~ lo~ ot ~-~olaclo~ld~o fu~ion
vecto~ fo- J~udrlr~ ~on- r~l,pro~ion ~n C~nor/~Ddl~t cl-RanJ. C;u~ i89
( 1990).
rin~m, ElØ u,a Cand ~0, ~.P.~q, "T~ elo~ sln~le ocl~ in~cli~n ot p~o
producl- 1~ Ca~or~bdl~lJ ~ an~ ~ nc~ ~ot rOt ae~lap~ UU~ie~", J, exp.
Zool., 1~ pro~.
10. gl~in~h~, e.o. ~nd ctodldO, ~.P.M. "~ of U~ ~C ~ o~ ~e ~on~o
arh~ cl-~o~J ~ ~lolo~lc~l ~ot~ton Or onv~u~ont-l J~cn"~ ~b~CI- lo
~T~C .~ p,10 (1~g2~, C~1n~, O~,
11. S~i~8h~, E.~. ~ad ~l~di~o. ~.P.~ T~U~enjC A~o~6 IccZ Jlrctns of ~C rDil
~o~tota C~norllabdi~ a~ blolo~lo~l m~ni~or~ ~t ~nvironn cnl~l ~rrou"~
~U~mlllCa.
I~. SallloD, ~F, ~n~ l~rc~t, S, Tht DN~ o~ Ca~n~orh~d~lw ~ a~ erlclic~
10~ (197~)-

13. Hclel~-y-mc, ~., Shir~l~hl, H. cn~ Su~ , Y. "~onltorl~ ol Ihc ov-r-ll
pc~iold~ IOaiOi-y ar rivor ~lcl lo ~9L~lic or~obrn~ n~ ~toJhw~tol ~hrtn~,
Pu4tye co~ o imp~Ylu", Cbo~oa~erc 2~. 229-23~ (~991~.
14. ~lo~y, ~.P., ~o~lu, C.J., O~ , Rl. o~ ~leluy, M.CI, "~enthic InvortcO
bi~eu~y~ ~ilh toxi~ sedin~ nd pre ~IOr~. ~nviron. T~xicol. Chon- ~ 233~24
(~ 990~.




. . . :

. . : .

J~N.29 '93 17:43 613-Z32-~440 P.14
~ C) C~do et ~1, 2 0 8 ~ 3 ~ 9

15 B~borowsSi, M Rac~ho~v61~i, U ~ ~wch-~, H "Molbot ~Ind app~r~ for
~o~rminlnB ~JIar ~oxlolly ~y lhe tc~ ion Jn tho Ien~lh or ~ h ll~y 1~ tho
~ut Ocr~un p~tonI DD 2~85
ycz~nov. ~ Y Kr~l~yui~ov~, ~ N a~t V~ze~O, A C; "D~vloo tor b~1~ic-1
e~tiln~tion o~ c to~icity" So~b~ p~tom 5U ~46027,
17. "S~ble~l blw~sa,Y for ~uYi~oamcnul g~ ", World Pa~o~t No wO ~013023
1~, R~onthd, N L~ "Method~ ~D E~ymology", S~. ~or~a ~nd AR KirNne1. et~,
Ac~t~mic Pro -. L~ 704 7~0 (19~7~
19. FIJO, ~, ~'lnte~ti~ mn~orm~tlon or C~lorh~dl~lJ ~l~g~ns" ~l~O ~ ~,
2673-26~0 (l9~6)




. . :. :
;
~' . ' :'' : .
- : . ... , . -
- - . - . . .. .. . -

Dessin représentatif
Une figure unique qui représente un dessin illustrant l'invention.
États administratifs

Pour une meilleure compréhension de l'état de la demande ou brevet qui figure sur cette page, la rubrique Mise en garde , et les descriptions de Brevet , États administratifs , Taxes périodiques et Historique des paiements devraient être consultées.

États administratifs

Titre Date
Date de délivrance prévu Non disponible
(22) Dépôt 1993-01-29
(41) Mise à la disponibilité du public 1994-07-30
Demande morte 2001-01-29

Historique d'abandonnement

Date d'abandonnement Raison Reinstatement Date
2000-01-31 Absence de requête d'examen
2000-01-31 Taxe périodique sur la demande impayée

Historique des paiements

Type de taxes Anniversaire Échéance Montant payé Date payée
Le dépôt d'une demande de brevet 0,00 $ 1993-01-29
Enregistrement de documents 0,00 $ 1994-02-11
Taxe de maintien en état - Demande - nouvelle loi 2 1995-01-30 100,00 $ 1994-12-05
Taxe de maintien en état - Demande - nouvelle loi 3 1996-01-29 100,00 $ 1995-10-19
Taxe de maintien en état - Demande - nouvelle loi 4 1997-01-29 100,00 $ 1996-12-02
Taxe de maintien en état - Demande - nouvelle loi 5 1998-01-29 75,00 $ 1997-10-23
Taxe de maintien en état - Demande - nouvelle loi 6 1999-01-29 150,00 $ 1998-10-29
Titulaires au dossier

Les titulaires actuels et antérieures au dossier sont affichés en ordre alphabétique.

Titulaires actuels au dossier
UNIVERSITY OF BRITISH COLUMBIA
Titulaires antérieures au dossier
CANDIDO, EDWARD PETER MARIO
JONES, DONALD
STRINGHAM, EVE GABRIELLE
Les propriétaires antérieurs qui ne figurent pas dans la liste des « Propriétaires au dossier » apparaîtront dans d'autres documents au dossier.
Documents

Pour visionner les fichiers sélectionnés, entrer le code reCAPTCHA :



Pour visualiser une image, cliquer sur un lien dans la colonne description du document. Pour télécharger l'image (les images), cliquer l'une ou plusieurs cases à cocher dans la première colonne et ensuite cliquer sur le bouton "Télécharger sélection en format PDF (archive Zip)" ou le bouton "Télécharger sélection (en un fichier PDF fusionné)".

Liste des documents de brevet publiés et non publiés sur la BDBC .

Si vous avez des difficultés à accéder au contenu, veuillez communiquer avec le Centre de services à la clientèle au 1-866-997-1936, ou envoyer un courriel au Centre de service à la clientèle de l'OPIC.


Description du
Document 
Date
(yyyy-mm-dd) 
Nombre de pages   Taille de l'image (Ko) 
Correspondance reliée au PCT 1995-07-24 2 46
Lettre du bureau 1995-08-08 1 15
Page couverture 1994-07-30 1 38
Abrégé 1994-07-30 1 22
Revendications 1994-07-30 3 89
Dessins 1994-07-30 7 245
Description 1994-07-30 10 523
Dessins représentatifs 2001-12-18 1 6
Taxes 1997-10-23 1 36
Taxes 1996-12-02 3 118
Taxes 1995-10-19 1 48
Taxes 1994-12-05 1 37